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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIAPAS CENTRO DE BIOCIENCIAS LICENCIATURA DE INGENIERO BIOTECNLOGO UNIDADES DE HABILITACIN DE TALLER EXPERIMENTAL IV PROFESOR RESPONSABLE: M. en B. Sonia Ruiz Gonzlez

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CONTENIDO
Unidad de Habilitacin Ttulo Pgina

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Contexto: Licenciatura de Ingeniero Biotecnlogo Introduccin al Taller Experimental IV Normas bsicas para trabajar en el laboratorio Normas de seguridad al manejar sustancias Preparacin y esterilizacin de medios de cultivo y materiales usados en microbiologa Aislamiento de bacterias y hongos de muestras de suelo Cuantificacin, purificacin y conservacin de bacterias y hongos Morfologa macroscpica y microscpica de bacterias y hongos Pruebas de diferenciacin bioqumica en microorganismos Observacin de la ruta anablica fotosinttica Cuantificacin de la concentracin de CO2 consumido en la fotosntesis Aislamiento de DNA de bacterias del gnero Azospirillum Electroforesis de DNA de Azospirillum en gel de agarosa Amplificacin de DNA mediante reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) Estimacin de la biodiversidad: simulacin de comunidades para calcular ndices de diversidad Estimacin de la riqueza y abundancia de especies vegetales en un agroecosistema Diseo completamente aleatorizado: Evaluacin de dos fuentes de carbono en el crecimiento de Escherichia coli Diseo factorial: Evaluacin de fuentes de carbono y pH, a distintos niveles, en el crecimiento de Escherichia coli

iv v vi viii 01 05 09 13 18 22 25 28 32 36 41 48 51 56

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Contexto: Licenciatura de Ingeniero Biotecnlogo La Universidad Autnoma de Chiapas cre, en 1993, la Licenciatura de Ingeniero Biotecnlogo, cuyo plan de estudios ha ido evolucionando. La modificacin de dicho plan, en 2002, instal, entre otras innovaciones, la figura de los Talleres Experimentales. La formacin de recursos humanos de alto nivel en reas cientfico tecnolgico, como la biotecnologa, requiere de un espacio para el desarrollo de habilidades prcticas; entendidas estas no como la realizacin de actividades mecnicas basadas en instructivos establecidos, inflexibles y monodisciplinarios, sino como un espacio en el que se promueva la capacidad del alumno de integrar el conocimiento adquirido en las aulas. El Taller Experimental plantea lo anteriormente mencionado buscando que el alumno pueda utilizar el conocimiento en la resolucin de problemas puntuales con pensamiento holstico y aplicando lo aprendido en varias disciplinas. El Taller Experimental plantea al alumno integrar todos los conocimientos adquiridos en el semestre a travs de la elaboracin de un proyecto. Por lo tanto, es el espacio donde, a travs de la experimentacin, el alumno integra el conocimiento que est adquiriendo en el ciclo escolar que le toca cursar. Adems, es una base para generar el trabajo en grupo, tan necesario en nuestra sociedad.

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Introduccin al Taller Experimental IV El Taller Experimental IV plantea al alumno llevar a cabo un proyecto en el que ocupe elementos de Microbiologa, Procesos Bioqumicos Celulares, Diseo Experimental, Biodiversidad y Biologa Molecular. Previamente, el estudiante recibe una serie de Unidades de Habilitacin que le proveen herramientas para la realizacin del proyecto.

OBJETIVO GENERAL. El alumno integrar el conocimiento adquirido / construido en las asignaturas bsicas del cuarto semestre.

PROGRAMA. La asignatura se desarrolla va la realizacin de proyectos integrales por parte de los alumnos. El trabajo se realizar en equipos, guiados por el docente. El contenido de los proyectos ser definido previo a la apertura del curso por los Cuerpos Acadmicos del Centro de Biociencias y otros expertos en las materias; esto permitir que la naturaleza del Taller Experimental IV sea, desde cualquier ngulo, flexible en su contenido, el cual necesariamente deber cambiar curso a curso.

NORMAS BSICAS PARA TRABAJAR EN EL LABORATORIO 1.- Toda persona que requiera trabajar en el laboratorio deber UTILIZAR BATA y, en su caso, GUANTES Y CUBREBOCAS. 2.-Durante la estancia en el laboratorio, la persona deber ABSTENERSE DE INGRESAR E INGERIR ALIMENTOS Y BEBIDAS. 3.-La persona que trabaje en el laboratorio deber AUXILIARSE del PROFESOR y/o LABORATORISTA, para el MANEJO DE EQUIPO. 4.- La persona que trabaje en el laboratorio TIENE la OBLIGACIN de anotarse en la BITCORA DE USO DEL EQUIPO, la fecha, hora y el para qu lo emplearon. 5.-La persona que trabaje en el laboratorio deber MANTENER LIMPIA EL AREA ASIGNADA. 6.-La persona que trabaje en el laboratorio DEBER observar las normas bsicas de seguridad al MANEJAR las SUSTANCIAS QUMICAS. 7.-La persona que trabaje en el laboratorio TIENE la OBLIGACIN de REPORTAR los DESPERFECTOS DE MATERIALES Y EQUIPOS. 8.-Por la naturaleza del trabajo de laboratorio, la persona que trabaje en dicha instalacin deber ABSTENERSE de JUGAR O BROMEAR. 9.-Por ser DISTRACTORES, el uso de la COMPUTADORA y de TELFONO CELULAR dentro del laboratorio, est RESTRINGIDO, a menos que el PROFESOR lo permita. 10.-Las personas que trabajen en el laboratorio DEBERN RESPETAR el horario ASIGNADO.

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11.-La SOLICITUD de material, equipo y reactivos deber realizarse en el formato correspondiente y es RESPONSABILIDAD del solicitante su buen uso. 12.-Es RESPONSABILIDAD de cada persona tener a la mano los implementos individuales que el PROFESOR le solicite para el ptimo desarrollo de su labor y RESPETAR las PERTENENCIAS DE SUS COMPAEROS Y PROFESORES. 13.-Cuando una persona o grupo de personas NECESITE trabajar en el laboratorio en horario DIFERENTE al asignado, el PROFESOR correspondiente deber de ponerse de acuerdo con el LABORATORISTA. En este caso el PROFESOR es el responsable del comportamiento del alumno. LAS REGLAS AQU MENCIONADAS SON DE OBSERVANCIA GENERAL, LO QUE PERMITE EL PTIMO EMPLEO DE LA INFRAESTRUCTURA, DE LOS MATERIALES Y DEL EQUIPO DEL CenBio, PERO SOBRE TODO POR EL BIENESTAR DE LOS USUARIOS.

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Normas de seguridad al manejar sustancias

En las distintas Unidades de Habilitacin que integran el presente Cuadernillo se utilizan sustancias qumicas potencialmente peligrosas para los usuarios o el ambiente. A continuacin se presenta uno de los cdigos de riesgos ms communes; es de suma importancia seguir las recomendaciones para cada caso.

Sustancias explosivas. Peligro. Este smbolo seala sustancias que pueden explotar bajo determinadas condiciones. Ejemplo: dicromato de amonio. Precaucin. Evitar choques, percusin, friccin, formacin de chispas y contacto con el calor. Sustancias oxidantes (comburentes). Peligro. Los compuestos comburentes pueden inflamar sustancias combustibles o favorecer la amplitud de incendios ya declarados, dificultando su extincin. Ejemplo: permanganato de potasio, perxido de sodio. Precaucin. Evitar cualquier contacto con sustancias combustibles.

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Sustancias fcilmente inflamables. a. b. Sustancias autoinflamables. Ejemplo: alquilos de aluminio, fsforo. Precaucin. Evitar contacto con el aire. Gases fcilmente inflamables. Ejemplo: butano, propano. Precaucin. Evitar la formacin de mezclas inflamables gas-aire y aislar de fuentes de ignicin. Sustancias sensibles a la humedad. Productos qumicos que desarrollan emanaciones de gas inflamable al contacto con el agua. Ejemplo: litio, borohidruro de sodio. Precauciones: evitar contacto con agua o con humedad. Lquidos inflamables. Son aquellos lquidos que fcilmente pueden arder. El que un lquido arda con ms o menos facilidad depende de su punto de llama.

c.

d.

Sustancias txicas. Peligro. Tras una inhalacin, ingestin o absorcin a travs de la piel pueden presentarse, en general, trastornos orgnicos de carcter grave o incluso la muerte. Ejemplo: trixido de arsnico, cloruro de mercurio(II). Precaucin. Evitar cualquier contacto con el cuerpo y en caso de malestar acudir inmediatamente al mdico. Sustancias nocivas. Peligro. La incorporacin de estas sustancias por el organismo produce efectos nocivos de poca trascendencia. Ejemplo: tricloroetileno. Precaucin. Evitar el contacto con el cuerpo humano as como la inhalacin de vapores. En caso de malestar acudir al mdico. Sustancias corrosivas. Peligro. Por contacto con estas sustancias se destruye el tejido vivo y tambin otros materiales. Ejemplo: bromo, cido sulfrico. Precaucin. No inhalar los vapores y evitar el contacto con la piel, los ojos y la ropa. Sustancias irritantes. Peligro. Este smbolo destaca en aquellas sustancias que pueden producir accin irritante sobre la piel, los ojos y sobre los rganos respiratorios. Ejemplo: amonaco, cloruro de bencilo. Precaucin. No inhalar los vapores y evitar el contacto con la piel y los ojos. Sustancias peligrosas para el ambiente. En general, todas las sustancias que naturalmente no estn en un ambiente dado son potencialmente dainas para la flora, la fauna o los microorganismos. De las sustancias usadas en el Taller Experimental IV, el bromuro de etidio es un ejemplo de este tipo de sustancias.

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Unidad de Habilitacin No. 1 Preparacin y esterilizacin de medios de cultivo y materiales usados en microbiologa

Introduccin. La base del estudio de los microorganismos es el medio de cultivo, sobre el cual se hacen crecer de forma individual permitiendo su caracterizacin. El medio de cultivo debe estar completamente libre de otros microorganismos del ambiente, de manera que no haya interferencias con los microorganismos de inters. Se llama esterilizacin a los procedimientos que dejan al objeto o material tratado libre de toda forma de vida. La esterilizacin puede llevarse a cabo con distintos tipos de agentes: fsicos y qumicos. Por otro lado, en microbiologa, todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de modo que se impida cualquier tipo de contaminacin en el rea de trabajo. Los procedimientos utilizados para conseguirlo se conocen con el nombre de tcnica asptica, y se citan a continuacin: - Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y enfriarse sobre el agar o el material de vidrio (en zonas estriles) antes de tomar la muestra de microorganismos, con objeto de no destruirlos por calor. - Despus de utilizarlas, las asas se vuelven a esterilizar. Las bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una vez destapadas, y despus de la inoculacin. - Durante la inoculacin, los tapones se mantienen en la mano sujetndolos por la parte que no entra en contacto con tubos y matraces. - Los tubos abiertos deben mantenerse en posicin inclinada para que el riesgo de contaminacin sea mnimo. - Las tapas de las placas Petri no deben colocarse sobre la mesa de trabajo.

Objetivo. Preparar y esterilizar medios de cultivo y materiales utilizados en microbiologa por medio de calor hmedo.

Material y mtodos. 2 matraces Erlenmeyer de 500 mL 1 matraz Erlenmeyer de 250 mL 1 esptula 1 probeta de 250 mL 1 piceta 1 vaso de precipitados de 400 mL 2 placas de Petri de vidrio 20 placas de Petri desechables 15 puntas para micropipeta de 1000 L (azules) 20 puntas para micropipeta de 200 L (amarillas) 10 tubos de ensayos de 16 x 150 mm Palitas triglsicas 1 frasco de vidrio con tapa de rosca 2 mecheros Fisher 1 potencimetro 1 autoclave 1 parrilla agitadora con magneto Papel aluminio Soluciones buffer pH 7.0 y pH 4.0 agar dextrosa papa agar nutritivo agar bacterilogico

Procedimiento: Preparacin y esterilizacin de medios de cultivo. 1.- Prepare 250 mL de medio de cultivo de agar dextrosa papa (ADP) y agar nutritivo (AN), siguiendo las instrucciones del fabricante (lea la etiqueta del frasco).

2.- Para tener una consistencia de los medios ms firme, agregue 5 g de agar bacteriolgico por cada litro de medio y ajuste el pH. Para bacterias (AN) a un pH 7.0 y para hongos (ADP) a pH de 5.6. 3.- Coloque los medios en matraces Erlenmeyer, agite bien, colqueles tapones de algodn y gasa, y esterilcelos mediante calor hmedo (autoclave). La esterilizacin en autoclave implica el calentamiento de los materiales a 121 C (1 atmsfera de presin) durante al menos 20 minutos. 4.-Mientras se esterilizan los materiales practique el vaciado en placa, utilizando agua con placas de Petri de vidrio. 5.-Despus de esterilizar, enfre los matraces con medios de cultivo a 45 C para vaciarlos en las placas de Petri desechables; cada placa de 10 cm de dimetro deben recibir aproximadamente 20 mL de medio. Este procedimiento deber realizarse en un rea desinfectada, por ejemplo en una campana de flujo laminar; tambin puede utilizar una mesa limpia y libre de corrientes de aire, usando dos mecheros Fisher para mantener la esterilidad del rea. 6.- Espere a que el medio se gelifique, selle las placas con cinta de plstico autoadherible (KleenPack) y djelas en un sitio seco y limpio durante 24 horas a temperatura ambiente para verificar la esterilidad. Despus de este tiempo no deber haber contaminacin por bacterias u hongos en los medios. En caso de esterilidad, estarn listos para usarse en el aislamiento de microorganismos. Preparacin de materiales para aislamiento de microorganismos. 1.- A cada uno de 10 tubos de ensayos de 16 x 150 mm agregue 9 mL de agua destilada o solucin salina, colqueles tapones de algodn/gasa y esterilcelos en autoclave. 2.- Esterilice en autoclave un matraz Erlenmeyer de 250mL que tenga una marca en el volumen de 100 mL; para esto agregue 100 mL de agua con una probeta y marque el nivel alcanzado por el agua con una cinta adhesiva (masking tape). 3.- Coloque un agitador magntico en el interior del matraz, colquele un tapn de algodn/gasa y esterilcelo en autoclave.

4.- Esterilice en autoclave los siguientes materiales: puntas de micropipeta amarillas y azules (colocadas en un frasco con tapa de rosca o en un portapuntillas); cuadros de papel aluminio de 5x5 cm; pipetas de vidrio de 10 mL y esptula (envueltos en papel estraza); 100 mL de agua destilada. 5.- Todo el material ser utilizado en la prctica de aislamiento de bacterias y hongos.

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Cules son los mtodos de esterilizacin fsica que ms se utilizan? Explique en que consiste cada uno de ellos. 2.- Cules son los mtodos de esterilizacin qumica ms utilizados? Explquelos.

BIBLIOGRAFIA:
Campbell, R., (1987). ECOLOGA MICROBIANA, edit. Limusa., pp. 1123. Mxico, D.F. Madigan, M. T., Martnho, J. M., Parker, Jack. . Brock Microbiologa de los microorganismos. 10. Edicin. Person Prentice Hall. Espaa. Aquiahuatl, M. A. y Prez M. L. (2004) Manual de Prcticas de Laboratorio de Microbiologa General. Depto. De Biotecnologa. Universidad Autnoma Metropolitana.

Schlegel, Hans G. (1997). Microbiologa General . 9. Edicin. Barcelona , Espaa. Pp. 654.

Unidad de Habilitacin No. 2 Aislamiento de bacterias y hongos de muestras de suelo Introduccin. En microbiologa se trabaja con cultivos puros de microorganismos. Un cultivo puro es aqul en que todas las clulas provienen de una sola clula inicial. Una colonia de cualquier microorganismo es un cultivo puro, ya que todas sus clulas proceden de una inicial; por lo tanto, cuando se desea aislar un microorganismo de una muestra cualquiera, es preciso ver colonias del mismo, lo que implica que el aislamiento ha de realizarse en medio slido en placa. Los medios de cultivo pueden ser lquidos, semislidos o slidos, aunque para aislamiento se prefieren los dos ltimos, ya sea en placa de Petri o en tubo de ensayos; stos llevan en su composicin agar como agente solidificante, en distintas proporciones, segn se trate de medios slidos o semislidos. Cuando se usan los tubos, el medio puede estar inclinado, en cuyo caso la siembra se realiza en estra sobre la superficie, o sin inclinar, en cuyo caso la siembra se realiza con un asa de platino recta, picando el medio por la zona central. Segn su composicin se pueden dividir en medios mnimos o simples y medios complejos. Los medios definidos contienen los nutrientes necesarios para la especie con la que se trabaja, pero todos y cada uno de ellos se aaden por separado, conocindose exactamente la cantidad de cada uno. Los medios selectivos son los que contienen alguna sustancia que slo permite el crecimiento de una especie o de un grupo de especies relacionadas; por ejemplo, el medio de MacConkey es selectivo para enterobacterias por su contenido de sales biliares. Los medios diferenciales son los que permiten distinguir entre dos microorganismos, segn el resultado del crecimiento en ese medio, por ejemplo el medio de MacConkey es tambin diferencial porque permite distinguir, mediante un cambio de color, los microorganismos que utilizan la lactosa de los que no lo hacen y lo mismo ocurre con el Chapman con respecto al manitol.

Independientemente del tipo de medio utilizado, para el aislamiento de microorganismos se requiere diluir lo suficiente una muestra, sembrarla en medio de cultivo y finalmente purificarla por resiembras consecutivas.

Objetivo. Aislar bacterias y hongos de una muestra de suelo.

Material y Mtodos. Puntas para micropipeta de 1000 L estriles Puntas para micropipeta de 100 L estriles 1 frasco con tapa estril 10 tubos de 16x150 mm con 9 mL de agua estril Palitas triglsicas estriles 1 esptula estril Cuadros de papel aluminio de 5x5 cm estriles 1 pipeta de 10 mL estril 1 matraz Erlenmeyer de 250 mL estril con marca en 100 mL Micropipetas de 1000 L y 200 L Placas con medio ADP y AN estriles Muestra de suelo (50 g) Agua destilada estril (100 mL) Procedimiento: 1.- Pese sobre un cuadro de papel alumnio 10 g de suelo y agrguelo al matraz Erlenmeyer, complete con agua estril hasta la marca de 100 mL y agite vigorosamente por 5 minutos. Considere a esta mezcla como extracto diludo 10-1. 2.- Realice las diluciones siguientes en tubos de 16x150 mm que contienen 9 mL de agua: 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7 y 10-8. Para esto tome 1mL del extracto diludo 10-1 (matraz E.M.), depostelo en el primer tubo y agite en vortex, sta ser la dilucin 10-2. Proceda a hacer

las dems diluciones consecutivamente en los dems tubos. Recuerde que todo debe hacerse en un rea estril. 3.- Tome 100 L de las muestras diludas correspondientes a los tubos 10-6, 10-7 y 10-8, coloque el lquido sobre medio AN en placa de Petri y homogeneizar utilizando una palita triglsica. Estos sern los cultivos de bacterias. 4.- Tome 100 L de las muestras diludas correspondientes a los tubos 10-3, 10-4 y 10-5, coloque el lquido sobre medio ADP en placa de Petri y homogeneizar utilizando una palita triglsica. Estos sern los cultivos de hongos. 5.- No olvide agregar al frasco con tapa un poco de alcohol para esterilizar la palita triglsica al finalizar cada homogenizacin, flameando hasta quemar el alcohol. 6.- Incube las placas en posicin invertida en una estufa a 37 C o al medio ambiente. 7.-Verifique el crecimiento a las 24 h para bacterias y a las 48 h para hongos. 8.- Registre el nmero de colonias de microorganismos y sus caractersticas ms sobresalientes en cada caso.

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Qu mtodo se utiliza preferentemente en el aislamiento de microorganismos? 2.- Qu otros mtodos existen para aislar microorganismos? 3.- Qu factores se toman encuenta para aislar los microorganismos? Explique.

BIBLIOGRAFIA: Campbell, R., (1987). ECOLOGA MICROBIANA, edit. Limusa., pp. 1123. Mxico, D.F. Madigan, M. T., Martnho, J. M., Parker, Jack. . Brock Microbiologa de los microorganismos. 10. Edicin. Person Prentice Hall. Espaa. Aquiahuatl, M. A. y Prez M. L. (2004) Manual de Prcticas de Laboratorio de Microbiologa General. Depto. De Biotecnologa. Universidad Autnoma Metropolitana.

Unidad de Habilitacin No. 3 Cuantificacin, purificacin y conservacin de bacterias y hongos

Introduccin. Existe gran variedad de mtodos que implican el cultivo de microorganismos. Puede ser necesario diluir o concentrar la muestra para que se desarrolle un nmero suficiente de organismos en cada caja (caja de dilucin) o en cada tubo de ensayo. La suposicin bsica es que cada propgulo en el medio d origen a una colonia macroscpica que se pueda contar. Obviamente, la suposicin est abierta a la crtica; las clulas pueden estar en grupos o microcolonias. Esto puede conducir a clculos incompletos y a que los conteos de cultivos representen del 1% al 10% de los conteos directos en el suelo, y todava menos en muestras de agua. Esto puede deberse en parte a que en el mtodo directo se encuentran tanto clulas muertas como vivas. El otro problema con los mtodos de cultivo es que con los hongos, y hasta cierto grado con las algas, el nmero tiene en realidad poco significado. No hay una forma fcil de saber si la colonia macroscpica de hongos se origin a partir de una hifa o de una espora, y en caso de haberse originado de una hifa, que longitud tena sta. Los mtodos de cultivo permiten que se hagan conteos, pero hay tambin mtodos que slo proporcionan una gua aproximada a los nmeros, o incluso slo indican que est presente o ausente, estos son los mtodos de enriquecimento. El mtodo de nmero ms probable (NMP) es una estrategia eficiente de estimacin de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluacin cuantitativa de clulas individuales no es factible. El conteo de unidades formadoras de colonias en placa (UFC) es una tcnica mucho ms precisa que NMP para la cuantificacin de bacterias y hongos.

En ocasiones es necesario mantener, de forma prolongada, cultivos puros. Usualmente cultivos en medios lquidos o slidos pierden viabilidad en un espacio de varias semanas a pocos meses. Por lo tanto, para el almacenaje de cultivos a largo plazo es necesario recurrir a otros mtodos que permitan mantener estos cultivos viables. Esta tarea no es simple debido al hecho de que diferentes poblaciones poseen diferentes adaptaciones, y requerimientos nutricionales y ambientales. El almacenaje en glicerol y en suelo son dos estrategias eficientes para muchas especies de microorganismos.

Objetivo. Practicar los mtodos de conteo por UFC, de purificacin y conservacin de microorganismos.

Material y Mtodos. 4 tubos de ensayos de 16x150 mm 2 botellas de Roux 1 esptula 1 vaso de precipitados de 400 mL 1 potencimetro 1 piceta 1 pipeta de 10 mL 1 probeta de 50 mL 10 placas de Petri desechables 1 matraz Erlenmeyer de 500 mL 4 tubos de 13 x 100 mm NaCl KCl CaCl2 Agar nutritivo Agar dextrosa papa

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Procedimiento: 1.- Cuantifique por el mtodo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) las colonias de microorganismos que se sembraron en la prctica anterior: UFC: nmero de colonias por placa x 100 Dilucin 2.- Prepare 10 placas de Petri con el medio en el que creci su microorganismo y purifique 2 cepas, en el caso de bacterias, sembrar por el mtodo de estra cruzada. 3.- Para la purificacin de hongos sembrar por picadura. 4.- Esperar su crecimiento durante 24 hrs y 48 hrs en el caso de los hongos. Si es necesario (en caso de que las colonias no estn puras) haga una resiembra adicional. 5.- Posteriormente, cuando las bacterias y hongos se hayan purificado proceda a la conservacin. 6.- Las bacterias se conservarn en medios inclinados. En tubos de 16x150 mm agregue 8 mL de Agar Nutritivo (durante la preparacin agregue 8 g de agar bacteriolgico adicionales por cada litro de AN; caliente el medio antes de agregar a los tubos; esterilizar e inclinar los tubos cuando salgan del autoclave). 6.- Los hongos se conservarn en botellas de Roux. Las botellas se preparan con aproximadamente 35 mL de medio Agar Dextrosa papa. Caliente el agar antes de agregar a las botellas, despus de esterilizar dejar en forma horizontal. Conjuntamente esterilizar 2 tubos de 13x100 mm con 1 mL de agua destilada y agregarle 5 perlas de ebullicin. 7.- Conserve las bacterias tomando con un asa estril una muestra de una colonia pura y siembre en los tubos por estra cruzada. Incube a temperatura ambiente. 8.- Tome una muestra de la cepa pura de hongo y colquela en el tubo de 13x100 mm con 1 mL de agua, agite en un vortex y agregue la mezcla a una botella de Roux con medio de ADP. Esperar hasta 5 das a que el hongo esporule.

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9.- A dos tubos de 13x100 mm agregar 2 mL de solucin Ringer y esterilizar. Esta solucin servir para recolectar las esporas de hongos y conservarlas. Preparacin de la solucin ringer NaCl 7g KCl 0.25 g CaCl2 anhidro 0.30 g Agua destilada 500 mL

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Investigue en que consiste el mtodo del NMP y UFC. 2.- Qu mtodos se utilizan para la purificacin de microorganismos? 3.- Cunto tiempo dura la conservacin de bacterias en tubos inclinados? 3.- Por qu se conservan las esporas en solucin Ringer y cunto tiempo tardan? 4.-Conforme a sus resultados realice sus conclusiones, entregar los tubos inclinados con las cepas puras y los tubos con solucin ringer con las esporas extradas.

BIBLIOGRAFIA: Campbell, R., (1987). ECOLOGA MICROBIANA, edit. Limusa., pp. 1123. Mxico, D.F. Madigan, M. T., Martnho, J. M., Parker, Jack. . Brock Microbiologa de los microorganismos. 10. Edicin. Person Prentice Hall. Espaa. Aquiahuatl, M. A. y Prez M. L. (2004) Manual de Prcticas de Laboratorio de Microbiologa General. Depto. De Biotecnologa. Universidad Autnoma Metropolitana.

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Unidad de Habilitacin No. 4 Morfologa macroscpica y microscpica de bacterias y hongos

Introduccin. Las bacterias son microorganismos procariticos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza, habitan en el agua, en el suelo, en la superficie o en el interior de plantas y animales incluyendo al hombre. Pueden vivir en forma libre, en simbiosis o como parsitos. Fisiolgicamente este grupo presenta caractersticas variables, hay bacterias mviles e inmviles, fotosintticas y quimiotrfas: se desarrollan en un amplio rango de temperatura, pH y condiciones gaseosas. En el estudio de cultivos bacterianos algunos de los criterios que se emplean para caracterizarlas incluyen: tamao, morfologa celular, forma de agrupacin, reaccin a la tincin de Gram, formacin de esporas, movilidad, presencia de inclusiones de reserva y comportamiento en medios lquidos y slidos (forma, tamao, elevacin y color de las colonias). Por su parte, los hongos son organismos eucariticos y de mayor tamao que las bacterias, se distinguen de los animales por ser inmviles y de las plantas por carecer de pigmentos fotosintticos. Son de nutricin hetertrofa es decir dependen de nutrientes orgnicos que son solubilizados por sistemas enzimticos especficos y son absorbidos a travs de su pared celular y membrana plasmtica. Estos organismos pueden ser unicelulares (levaduras) o multicelulares (filamentosos), sin embargo, tambin existen hongos dimrficos principalmente patgenos que se presentan en las dos formas alternativamente, dependiendo de las condiciones ambientales, como la temperatura. EL cuerpo o estructura vegetativa caracterstica de los hongos filamentosos (mohos) se denomina talo, generalmente constituido de hifas ramificadas que forman el micelio. Las hifas de algunos hongos presentan tabiques transversales o septos. Aunque en el caso de los Zygomycetos las hifas no presentan estos septos y se les conocen como hifas cenocticas.

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El principal mecanismo de reproduccin de los hongos es asexual, por fragmentacin de las hifas vegetativas o por la produccin de abundantes esporas en conidiforos o esporangiforos formados en hifas areas llamadas hifas reproductivas. La descripcin de las estructuras de reproduccin sexual es el principal criterio de clasificacin.

Objetivo: Observar diferentes formas macroscpicas y microscpicas de bacterias y hongos.

Material y Mtodos: Cepas puras de bacterias y hongos portaobjetos cubreobjetos asa bacteriolgica 1 microscopio 1 transiluminador de luz visible, con lupa 1 aceite de inmersin Cinta adhesiva transparente azul de lactofenol Reactivos para tincin de gram (Cristal violeta, Yodo lugol, Alcohol cetona y Safranina)

Procedimiento: Morfologa colonial y microscpica de bacterias. 1.- Observe las colonias de bacterias utilizando un transiluminador visible (con lupa), para esto coloque las cajas de Petri donde estn creciendo las colonias en distintos ngulos, de manera que pueda observar su forma, elevacin, bordes o mrgenes, superficie, textura y color. Auxliese de la figura de abajo. 2.- Esquematice lo observado y describa macroscpicamente las cepas bacterianas.

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3.- Prepare un frotis de las bacterias tomando una porcin de la colonia con un asa, colquela sobre un portaobjetos, distribyala homogneamente y seque con calor. 4.- Proceda a realizar la tincin de Gram: Agregar al frotis una solucinn de Azul Violeta hasta cubrirlo completamente, espere 1 minuto; lave abundantemente con agua, pero sin daar el frotis; aada solucin de Yodo-Lugol y espere 1 minuto; vuelva a lavar con agua suficiente; agregue solucin de Alcohol-Cetona y espere exactamente 10 segundos; lave nuevamente; coloque solucin de Safranina durante 1 minuto, lave y deje secar. 5.- Observe al microscopio de campo claro a distintos aumentos y describa la forma, agrupacin y tipo de reaccin a la tincin Gram. Si las clulas se tien de color azul son Gram negativa, mientras que si se tien de color rojo se trata de una bacteria Gram positiva.

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Morfologa colonial y microscpica de hongos. 1.- Observe las colonias puras de hongos filamentosos utilizando un transiluminador visible (con lupa), para esto coloque las cajas de Petri en distintos ngulos. Registre la forma, tamao y tipo de colonia, as como las caractersticas del micelio (algodonoso, aterciopelado, velloso, areo o pegado al medio) el color del micelio, el color de las esporas y cambios en el medio de cultivo. 2.-Realizar un frotis tomando una muestra del borde de una colonia con una cinta adhesiva transparente. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentracin de esporas. Colocar una gota de azul de lactofenol sobre un portaobjetos, colocar cuidadosamente la cinta adhesiva con el hongo sobre la gota de colorante y secar a la flama de un cerillo. Limpie la parte inferior del portaobjetos con algodn y observe al microscopio de campo claro a distintos aumentos. 3.- Esquematice y registre lo observado: micelio con o sin septos (tamao, estructuras de reproduccin), tipo de esporas (tamao), etc.

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Investigue la clasificacin de los hongos de acuerdo a su tipo de reproduccin. 2.- Porqu algunas bacterias son gram positivas y otras gram negativas? Explique

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BIBLIOGRAFIA: Campbell, R., (1987). ECOLOGA MICROBIANA, edit. Limusa., pp. 1123. Mxico, D.F. Madigan, M. T., Martnho, J. M., Parker, Jack. . Brock Microbiologa de los microorganismos. 10. Edicin. Person Prentice Hall. Espaa. Aquiahuatl, M. A. y Prez M. L. (2004) Manual de Prcticas de Laboratorio de Microbiologa General. Depto. De Biotecnologa. Universidad Autnoma Metropolitana.

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Unidad de Habilitacin No. 5 Pruebas de diferenciacin bioqumica en microorganismos

Introduccin. El metabolismo es toda la serie de reacciones que ocurren en los seres vivos. Estas reacciones incluyen procesos de obtencin de energa como son: la descomposicin de molculas orgnicas en los quimitrofos (catabolismo) o la captacin de luz para el caso de los fottrofos, as como tambin de sntesis de material celular a partir de nutrientes esenciales (anabolismo). Todas las reacciones metablicas son sintetizadas por enzimas, que en su mayora funcionan dentro de las clulas por lo que se conocen como endoenzimas, hay tambin exoenzimas principalmente hidrolticas que son liberadas por la clula para catalizar reacciones fuera de sta. En el laboratorio, es posible conocer las caractersticas metablicas de los microorganismos, inoculndolos en diferentes medios de cultivo, con sustratos que pueden utilizar como fuentes de energa, fuentes de carbono y otros nutrientes esenciales para su crecimiento. La mayora de microorganismos, utilizan como fuente de carbono y energa la glucosa. Al entrar a la clula, esta es oxidada en su forma incompleta (fermentacin) o completa (respiracin) dependiendo de la presencia de oxgeno y de las actividades enzimticas celulares. Se han propuesto numerosas pruebas bioqumicas en medios de cultivo con indicadores de pH para detectar la produccin de cido o lcali; con inhibidores selectivos con bilis, cianuro, colorantes, sulfuros, etc., que facilitan la determinacin de diferentes actividades metablicas como son: la capacidad para fermentar carbohidratos (glucosa, lactosa, sacarosa) catabolizar aminocidos y urea, la produccin de enzimas especficas de tipo endo o exo como oxidasas, reductasas, amilasas, lipasas, etc.

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Objetivo. Realizar cultivos en medios con sustratos especficos que permitan demostrar actividades metablicas de bacterias, hongos y actinomicetos.

Material y mtodos. 2 placas con medio de cultivo Czapeck Dox con celulosa 2 placas de Agar nutritivo con almidn 2 placas de Agar con fosfato triclcico Asa bacteriolgica Cepas puras de bacterias y hongos Capacidad para hidrolizar celulosa 1.- Se determinar la capacidad de hidrolizar celulosa a las cepas de microorganismos aislados en la Prctica No. 2. Cada una de las cepas de bacterias, hongos y actinomicetos se sembrarn por duplicado. 2.- Prepare el medio Agar Czapeck Dox para cajas de Petri (20 mL de medio por placa), adicionalmente agregar 2% de celulosa, ajustar el pH a 7.3 y esterilizar. 3.- Siembre los microorganismos utilizando el asa bacteriolgica e incube durante 7 das a 28C. 4.- Adicione a la superficie del medio con los microorganismos crecidos 10 mL de una solucin acuosa (1:400) de Rojo Congo. 5.- La mezcla se deja reaccionar por espacio de 10 minutos al trmino del cual el colorante se retira por decantacin. 6.- La superficie de hidrlisis alrededor de la colonia, incolora con respecto al resto del medio que permanece rojo intenso, ser el indicador de una prueba positiva. Capacidad para hidrolizar almidn 1.- Se determinar la capacidad de hidrolizar almidn a las cepas de microorganismos aislados en la prctica 2.

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2.- Prepare agar nutritivo para cajas de Petri (20 mL de medio por placa), adicionalmente agregue 1% de almidn, ajuste el pH a 7.0 y esterilice en autoclave. 3.- Cada uno de los microorganismos sembrarn por duplicado. Despus de 48 horas de cultivo a 28C, se adicionar a la superficie del medio de crecimiento unas gotas de lugol hasta cubir la colonia y el medio. 4.- La mezcla se deja reaccionar por espacio de 10 minutos al trmino del cual el colorante se retira por decantacin. 5.- Las colonias que no muestren reaccin con el yodo, es decir, donde el medio permanezca color caf claro, deben ser consideradas positivas para hidrlisis de almidn. Capacidad para solubilizar fosfato 1.- Prepare un medio selectivo a base de fosfato triclcico. 2.- En un litro agregar: Ca2(PO4)3 2g Glucosa 20 g Extracto de levadura 2g Agar 15 g Agua c.b.p. 1 L 3.- El medio deber observarse color turbio-opaco en la placa de Petri. 4.- Siembre las cepas de microorganismos y permita su crecimiento durante 48 h. 5.- Las cepas que presenten un halo transparente deben ser consideradas positivas.

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BIBLIOGRAFIA:

Daz Zagoya Juan C. y Jurez Oropeza Marco Antonio. (2007). BIOQUIMICA. Edit. Mc Graw Hill. India, Delhi. Aquiahuatl, M. A. y Prez M. L. (2004) Manual de Prcticas de Laboratorio de Microbiologa General. Depto. De Biotecnologa. Universidad Autnoma Metropolitana.

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Unidad de Habilitacin No.6 Observacin de la ruta anablica fotosinttica

Introduccin. La fotosntesis es probablemente la ruta anablica (de fabricacin de biomasa y almacenamiento de energa) ms importante para la mayora de los seres vivos del planeta, incluyendo desde luego al ser humano. Mediante este proceso las plantas y otras clulas fotosintticas aprovechan la energa luminosa para catalizar la conversin del carbono inorgnico del aire en enlaces carbono-carbono (orgnicos), es decir, energa qumica almacenable. Entre los factores que ms influyen en la fotosntesis se pueden citar a los del ambiente, tales como el pH, la luz, la concentracin de CO2 y la temperatura. La fotosntesis puede ser fcilmente observada de manera indirecta, por ejemplo, cuando se estudian plantas acuticas, a travs de cambios en el pH del agua circundante. Cuando el contenido de CO2 en el agua es alto el pH es bajo por la formacin de cido carbnico disuelto, cuando las plantas fotosintetizando consumen el CO2 el pH se eleva. Estos cambios se pueden observar aadiendo indicadores coloridos de pH como el azul de bromotimol que adquiere un color amarillo a pH entre 4 y 6, y un color azul a pH arriba de 7.

Objetivo. Observar la influencia de la luz el proceso fotosinttico a travs de cambios en el pH del medio.

Material y Mtodos. Tubos de ensayos de 16x150 mm Ramitas de Elodea canadensis Lmpara de 75 W de luz blanca fluorescente Gradilla para tubos de 16x150 mm

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Pipeta Pasteur Papel de aluminio o caja negra Papel indicador de pH de 0-14 Solucin de azul de bromotimol al 0.1% con gotero Lpiz de cera o etiquetas Procedimiento: 1.- Llene tres tubos de ensayos con agua potable (en la que estn las plantas) hasta un tercio del borde. 2.- Agregue gotas de azul de bromotimol, agitar hasta que adquiera color azul homogneo. 3.- A dos de los tubos burbujee con la boca aire expirado por medio de una pipeta Pasteur limpia hasta que el color pase de azul a amarillo; determine el pH con papel indicador. 4.- Introduzca en cada uno de los tubos con la solucin amarilla una ramita de Elodea canadensis que presente su extremo apical intacto. Envuelva uno de los tubos con papel aluminio o djelo en la oscuridad (por ejemplo, dentro de una caja negra). Deje el otro tubo con planta y aquel sin planta (solucin color azul) a la luz del sol o de una lmpara de 75 W. 5.- Espere algunos minutos hasta que note algn cambio en el tubo con la planta expuesta a la luz. Observe el tubo que qued en oscuridad y compare los tres tubos. 6.- Determine nuevamente el pH en cada tubo con papel indicador. 7.- Anote sus resultados en un cuadro como el siguiente:
Determinacin indirecta de la ocurrencia de fotosntesis en Elodea canadensis Tratamiento Color de la solucin pH de la solucin inicial final inicial final Planta en luz Planta en oscuridad Control sin planta

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Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Por qu la solucin cambi de color en el tubo con planta expuesta a la luz? 2.- Qu est ocurriendo en el tubo con planta en oscuridad? 3.-Explique los cambios de pH detectados. Recuerde que el azul de bromotimol es un indicador de pH que va de 6.0 a 7.6 (azul y amarillo respectivamente).

BIBLIOGRAFIA: Daz Zagoya Juan C. y Jurez Oropeza Marco Antonio. (2007). BIOQUIMICA. Edit. Mc Graw Hill. India, Delhi. Aquiahuatl, M. A. y Prez M. L. (2004) Manual de Prcticas de Laboratorio de Microbiologa General. Depto. De Biotecnologa. Universidad Autnoma Metropolitana.

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Unidad de Habilitacin No. 7 Cuantificacin de la concentracin de CO2 consumido en la fotosntesis

Introduccin. El incremento de gases de efecto invernadero en la atmsfera, especficamente de CO2, derivado del consumo excesivo de combustibles fsiles est teniendo un impacto negativo sobre el clima global. Entre las distintas alternativas de solucin que se han propuesto estn la reduccin del consumo energtico y la promocin del proceso fotosinttico mediante la reforestacin de grandes reas. La gran ventaja de la fotosntesis radica en que forma parte esencial del ciclo del carbono al fijarlo del aire en forma de CO2. Resulta de vital importancia la comprensin de este proceso, as como la estimacin de la tasa de fijacin del gas. Cuando se estudian plantas acuticas es relativamente fcil estimar la cantidad de carbono fijado; puesto que el CO 2 forma reversiblemente cido carbnico acidificando el agua, es posible medir mediante alcalimetra la cantidad de cido y por lo tanto de CO2 en el agua antes y despus del cultivo de una planta acutica. La disminucin de la acidez al final es un indicador del carbono fijado. Objetivo. Cuantificar el CO2 fijado por tejidos vegetales durante el proceso de la fotosntesis.

Material y mtodos. Ramas de Elodea canadensis colocadas en un recipiente con agua. Tubos de ensaye grandes o frascos de 50 mL Vasos de precipitados de 50 mL Bureta con soporte o jeringa hipodrmica Pipetas

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Embudos pequeos Solucin de NaOH al 0.04% Solucin de fenolftalena al 0.5% con gotero Lmpara de 75W Papel aluminio o caja negra.

Procedimiento: 1.- Saque una alcuota de 10 mL de agua del recipiente donde se encuentran las plantas y colquela en un vaso de precipitados de 50 mL, agregue unas gotas de fenolftalena al 0.5% y titule gota a gota con el NaOH contenido en una bureta, agite bien el vaso despus de cada gota. 2.-Contine as hasta la aparicin de un color rosa, agregue otra gota ms para permitir que el color rosa permanezca. 3.-Anote el nmero de mL de lcali usados para llegar a este punto; sta medicin corresponde al control. 4.- Llene dos tubos de ensayo con agua del recipiente de las plantas e incorpore en cada uno una ramita de Elodea de tamao lo ms parecido posible, deje uno en la luz y el otro en la oscuridad. 5.- A las dos horas titule del mismo modo una alcuota del tubo en oscuridad y otra del tubo a la luz. Anote el nmero de mililitros gastados en cada caso. 6.- Calcule el nmero de micromoles de CO2 de cada muestra multiplicando por 10 el nmero de mililitros de NaOH gastados en la titulacin, ya que cada mililitro de la solucin de NaOH al 0.04% recin preparada puede combinarse con 10 micromoles de CO2. 7.-Anote los valores de sus mediciones de titulacin en el cuadro de abajo, teniendo en cuenta que el nmero de micromoles de CO2 en el control equivale a la cantidad inicial de este gas en el agua al comenzar el experimento; la disminucin equivale entonces a la cantidad usada en el proceso de la fotosntesis.

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Consumo de CO2 durante la fotosntesis en Elodea

Condicin Cantidad de CO2 inicial (M) Cantidad de CO2 usada en la fotosntesis (M)

Luz Oscuridad

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Cmo se comport la concentracin de CO2 en el tubo con planta, pero en oscuridad? 2.- Porqu?

BIBLIOGRAFIA: Daz Zagoya Juan C. y Jurez Oropeza Marco Antonio. (2007). BIOQUIMICA. Edit. Mc Graw Hill. India, Delhi.

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Unidad de Habilitacin No. 8 Aislamiento de DNA de bacterias del gnero Azospirillum

Introduccin. El DNA es el material gentico donde estn codificadas todas las caractersticas fenotpicas de los seres vivos. La estructura bsica del DNA es idntica en todos los organismos: est compuesta por dos cadenas de nucletidos unidas por la complementariedad de las bases a travs de puentes de hidrgeno, entre A y T o C y G en forma de doble hlice. El aislamiento y purificacin del DNA es el primer paso en cualquier anlisis gentico. La seleccin del mtodo de extraccin est determinada por la estructura celular de cada organismo y la aplicacin que se requiere. El gnero Azospirillum fue descubierto por Beijerinck, quien lo nombr como Spirillum lipoferum, en 1925, y fue caracterizado por Dbereiner y Day en la dcada de 1970. En 1978 fue reclasificado por Tarrand, Krieg y Dbereiner, quienes basados en estudios de homologa del ADN describieron el nuevo gnero Azospirillum, con dos especies: A. lipoferum y A.brasilense. El gnero Azospirillum comprende bacilos gruesos, ligeramente curveados o rectos, y a menudo con extremos puntiagudos; Gram negativos en cultivos jvenes, pudiendo ser Gram variables en cultivos envejecidos. En cuanto a caractersticas fisiolgicas, Azospirillum posee la capacidad de fijar nitrgeno, pero solo bajo condiciones microaeroflicas, debido a que carece de mecanismos para proteger a la enzima nitrogenasa de la accin del oxgeno. Las bacterias del gnero Azospirillum son de gran importancia en la agricultura, ya que actualmente estn siendo usados como biofertilizantes de nitrgeno.

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Objetivo. Practicar el mtodo de aislamiento de DNA utilizando una cepa de Azospirillum.

Materiales y Mtodos. Cepa de Azospirillum Acetato de Amonio 3M Isopropanol Etanol al 80% 10mM Tris-HCl 100mM NaCl 1mM EDTA SDS al 10% 2 tubos de 13x100 1 vaso de precipitado de 400 mL 1 microcentrifuga 1 termoblock (bao mara para tubos de microcentrifuga) 1 termmetro 1 micropipeta de 1000 L 1 micropipeta de 200 L 1 agitador de tubos Hielo Tubos de microcentrifuga de 2 mL

Procedimiento: Agregue 1 mL de un cultivo en crecimiento a un tubo de microcentrifuga. Centrifugue a 11 000 r.p.m. durante 5 minutos, remover el sobrenadante Agregue 700L de solucin TES y SDS al 10% suavemente pipetear hasta que las clulas estn resuspendidas.

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Incube a 80 C por 5 minutos para lisar las clulas. Entonces enfriar a temperatura ambiente durante 15 minutos Agregue 200 L de solucin de acetato de amonio. Agitar vigorosamente a velocidades altas por 20 segundos Incube la muestra en hielo por 5 minutos Centrifugue a 11 000 r.p.m. por 3 minutos Transfiera el sobrenadante a un tubo limpio de 1.5 mL que contenga 800L de isopropanol Centrifugue a 11 000 r.p.m. durante 5 minutos Deseche el sobrenadante y seque el tubo con papel absorbente. El DNA queda en el fondo del tubo. Agregue 300 L de etanol al 70% a temperatura ambiente y suavemente invierta el tubo varias veces al lavar el pellet de DNA. Centrifugue a 11 000 r.p.m. por 2 minutos, despus cuidadosamente aspire el etanol. Drene el tubo sobre un papel absorbente y permita que el pellet se seque al aire por 10-15 minutos Agregue 100 L de TE e incubar a 65 C por 1 hora. Peridicamente mezclar la solucin suavemente tapando el tubo. Guarde el tubo en refrigeracin para posteriores anlisis. Solucin TES 10mM Tris-HCl 100mM NaCl 1mM EDTA pH 9 Solucin de TE Tris 10 mM EDTA 1 mM pH 8.0, ajustar con HCl esterilizar en autoclave

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Para qu sirven las soluciones TES, SDS y acetato de amonio? 2.- Al agregar isopropanol al sobrenadante qu sucede? 3.- Cmo podra probar que lo aislado es efectivamente DNA?

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BIBLIOGRAFIA: Junqueira, L. C. y Carneiro Jos (1997). BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR. Edit. Mc. Graw-Hill. 6.Edicin. Chile, Lewin, Benjamin. (2000). GENES VII. Edit. Oxford University. Estados Unidos de Amrica, Washinton. Jimnez Cardoso, Enedina (2004). MANUAL DE TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR BSICA. Edit. Prado. Mxico, D.F. PROMEGA Technical Bulletin. (2005). Wizard SV Genomic DNA Purification System. E.U.A. 16 pp.

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Unidad de Habilitacin No. 9 Electroforesis de DNA de Azospirillum en gel de agarosa

Introduccin. La electroforesis se basa en la capacidad de las macromolculas cargadas para desplazarse en un campo elctrico, con velocidad directamente proporcional a su carga e inversamente proporcional a su tamao. A pH alcalino las molculas de DNA poseen una carga negativa uniforme por unidad de masa, lo que hace que su movilidad sea hacia el polo positivo y qu est determinada por el tamao de las molculas (nmero de pares de bases). La electroforesis es una herramienta de vital importancia en el anlisis del DNA, por ejemplo, para separar fragmentos de distinto tamao obtenidos por restriccin o por PCR. Dependiendo de la concentracin del polmero con que se fabrica el gel (agarosa, poliacrilamida o almidn) se puede tener una red de malla grande (para molculas grandes) o pequea (para fragmentos pequeos). En particular la electroforesis en agarosa es de gran utilidad para verificar la integridad de una muestra de DNA extrado, es decir, que el DNA genmico no est fragmentado. En ese caso, se debe observar una sola banda (no un barrido) con poca migracin en el gel.

Objetivos. Realizar una electroforesis en gel de agarosa para el corrimiento del DNA extrado de Azospirillum.

Material y Mtodos. Muestra de DNA de Azospirillum Agarosa para electroforesis Buffer TAE 1x

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Buffer de carga 10X Bromuro de etidio 10mg/mL Agua destilada Micropipeta de 200 L con puntas estriles Micropipeta de 10 L con puntas estriles Matraz Erlenmeyer de 500 mL Probeta 500 mL Probeta de 250 mL Papel encerado Esptula Guantes de ltex Cubrebocas Balanza analtica Cmara de electroforesis horizontal, con peine de 10 dientes Fuente de poder Transiluminador UV Anteojos con proteccin para luz UV Procedimiento: 1.- Prepare una solucin de agarosa al 1% en buffer TAE 1X; para esto primero mida con agua el volumen que se requiere para formar un gel de 0.8 cm de grosor. Por ejemplo: si el volumen es 100 mL, pese 1 g de agarosa en balanza analtica, coloque en un matraz E. M. de 500 mL y aada 100 mL de buffer TAE 1X con una probeta, disuelva la agarosa calentando hasta ebullicin (opcionalmente puede utilizar un horno de microondas), deje enfriar a 50 C y agregue 3 L de bromuro etidio (la concentracin final ser de 0.3 mg/L). 2.- Cuando la agarosa est a una temperatura de 40 C, vace en el molde para geles de la cmara, con el peine en su lugar. 3.- Despus de polimerizar, retire el peine y coloque el gel en la cmara de electroforesis que contenga 450 mL de buffer TAE 1X o un volumen tal que cubra completamente el gel. Vea al final la receta para preparar el buffer TAE.

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4.- Sobre un papel encerado mezcle 10 L de la muestra de DNA ms 3 L de buffer de carga 10X, homogenice pipeteando varias veces y deposite en uno de los pozos del gel. 5.- Siguiendo el mismo procedimiento, otros equipos de personas debern colocar sus muestras en los otros pozos o carriles del gel, procurando dejar un espacio libre entre muestras. 6.- Corra la electroforesis a 100 voltios, durante 45 minutos o hasta que el colorante del buffer de carga est a 1 cm de la orilla del gel. 7.- Revele el DNA en un transiluminador con lmpara de luz UV. 8.- Para observar los resultados utilice anteojos con filtro para UV.

Preparacin del buffer TAE Tris 20 mM Acetato de sodio 6mM cido tetractico etilendiamino disdica (EDTA NA) 1mM pH 7.8

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- De qu depende la concentracin de agarosa a utilizar en una electroforesis? 2.- Qu otros mtodos se utilizan para revelar el DNA? 3.- Qu carga elctrica tiene el DNA y cmo se aprovecha esta propiedad en la electroforesis? Esquematice los resultados observados y redacte sus conclusiones con base en estos. Compare con otros equipos.

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BIBLIOGRAFIA:

Junqueira, L. C. y Carneiro Jos (1997). BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR. Edit. Mc. Graw-Hill. 6.Edicin. Chile, Lewin, Benjamin. (2000). GENES VII. Edit. Oxford University. Estados Unidos de Amrica, Washinton. Jimnez Cardoso, Enedina (2004). MANUAL DE TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR BSICA. Edit. Prado. Mxico, D.F. PROMEGA Technical Bulletin. (2005). Wizard SV Genomic DNA Purification System. E.U.A. 16 pp.

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Unidad de Habilitacin No. 11 Amplificacin de DNA mediante reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) Introduccin. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es un proceso bioqumico in vitro mediante el cual las cadenas individuales de DNA blanco o molde (el DNA que se desea amplificar) son duplicadas por la enzima DNA polimerasa a partir de molculas de DNA de cadena sencilla denominados primers o iniciadores. La reaccin de amplificacin se lleva a cabo en ciclos (generalmente entre 20-30). Los iniciadores son DNA cortos de 10 a 22 pb, de cadena sencilla capaces de unirse a una regin del DNA adyacente a la secuencia blanco deseada. Al final del ciclo, las cadenas nuevas vuelven a ser duplicadas por la misma enzima, logrndose una produccin exponencial de millones de copias del gen o segmento de DNA especfico sometido al proceso. El procedimiento consta de tres etapas que se repiten en cada ciclo (ver Esquema): 1.- Desnaturalizacin. Se lleva a cabo por calentamiento a 94 C del DNA blanco favoreciendo el rompimiento de puentes de hidrgeno entre las bases del DNA y separando las cadenas. 2.- Alineamiento. Los iniciadores se unen al DNA molde a temperatura de 50 a 70 C, dependiendo de los iniciadores usados. 3.- La amplificacin con la enzima DNA Taq polimerasa a la temperatura ptima de accin de la enzima (72 C). Una de las grandes ventajas que proporcion la PCR a los estudios de biologa molecular es que permite obtener grandes cantidades de DNA a partir de muestras muy pequeas. Se puede amplificar regiones de DNA puntuales utilizando primers especficos o bien hacer muestreos del genoma utilizando primers aleatorios, como los que fabrica la empresa Operon Technologies.

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Objetivo. Amplificar una muestra de DNA a diferentes ciclos mediante la reaccin en cadena de la polimerasa.

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Material y mtodos. DNA de Azospirillum aislado previamente y estandarizado a 50 ng/L Primer OPA-01 (de la compaa Operon Technologies, E.U.A.) diludo a 0.2 nM en buffer TE Mezcla de nucletidos dNTPs (10 mM) Taq DNA polimerasa Buffer Taq 10X MgCl2 25 mM Agua mili-Q Tubos para PCR de 200 L Micropipeta de 1 L con puntas estriles Micropipeta de 10 L con puntas estriles Termociclador con calentamiento en tapa Equipo y materiales para electroforesis de DNA en agarosa (ver Unidad de Habilitacin No. 8 de este Cuadernillo) Procedimiento: 1.- El volumen de la mezcla de reaccin ser de 25 L. Para esto, en un tubo para PCR coloque 4 L de buffer Taq10X, 2 L de MgCl2, 0.5 L de dNTPs, 1 L de Taq DNA Polimerasa.

1. Agrega 5 volmenes de agua otra vez y mezcla hasta que la pasta se pueda absorver a travs de la pipeta. 2. Agrega 50 L del macerado al tubo marcado (siempre utilice 3. puntas limpias) 4. Cierre el tubo y agite bien. 5. Colocar el tubo marcado a un bao mara a 95 C durante 5 minutos 6. Colocar el tubo en la microcentrifuga por 5 minutos a velocidad mxima. 1. Guarde el tubo en hielo para los pasos siguientes. 2. Usando una punta nueva, agregue 20 L del master mix y tape el tubo. 3. Usando una punta nueva, agregue 20 L de DNA al tubo.

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4. 5. 6. 7.

Colocar el tubo en el termociclador. Preparar un gel de agarosa al 3%. Colocar el buffer TAE 1X hasta cubrir el gel. Agregar 20 L del marcador molecular para PCR y 20 L de la muestra en el gel. 8. Correr el gel a 100V durante 30 minutos. No dejar que el colorante naranja migre fuera del gel de agarosa. 9. Posteriormente, saque el gel y colquelo en una charola, teir con 1X fast Blast durante toda la noche o usar 100X fast blue durante 5 minutos. 10. Desteir con agua caliente (40-55C) durante 10 segundos o hasta que el agua este clara.

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Qu sucede con las muestras de los diferentes ciclos? 2.- Para qu se utiliza un marcador? BIBLIOGRAFIA:

Junqueira, L. C. y Carneiro Jos (1997). BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR. Edit. Mc. Graw-Hill. 6.Edicin. Chile, Lewin, Benjamin. (2000). GENES VII. Edit. Oxford University. Estados Unidos de Amrica, Washinton. Jimnez Cardoso, Enedina (2004). MANUAL DE TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR BSICA. Edit. Prado. Mxico, D.F. PROMEGA Technical Bulletin. (2005). Wizard SV Genomic DNA Purification System. E.U.A. 16 pp.

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Manual de Biotechnology Explorer RESTRICTION DIGESTION AND ANALYSIS OF LAMBDA DNA. Catalog #166-0002-EDU. BIO-RAD.

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Unidad de Habilitacin No. 12 Estimacin de la biodiversidad: simulacin de comunidades para calcular ndices de diversidad Introduccin. La biodiversidad es la variabilidad de organismos vivos de cualquier fuente, incluidos, entre otras cosas, los ecosistemas terrestres y marinos y otros ecosistemas acuticos y los complejos ecolgicos de los que forman parte; comprende la diversidad dentro de cada especie, entre las especies y de los ecosistemas. Otra definicin es: la totalidad de los genes, las especies y los ecosistemas de una regin. Medir o estimar la biodiversidad de un sitio representa una tarea compleja para los investigadores; para ello existen varias herramientas estadsticas. Sin embargo, un primer acercamiento a conocer la biodiversidad consiste en la comparacin de la diversidad de un sitio con respecto a otro u otros. Para esto se utilizan medidas estadsticas conocidas como ndices de diversidad, de los que se han publicado ms de 50, aunque se pueden citar a los ms conocidos: ndice de Shannon, ndice de Simpson, ndice Alfa, ndice Caswell, ndice de Hill, entre otros. Adems de calcularlos manualmente, es posible hacerlo a travs de programas de computadora, como el software Biodiversity Pro, el cual es un freeware o programa gratuito.

Objetivo. Calcular ndices de diversidad utilizando un simulador.

Material y mtodos. - Canicas de distintos colores, diseos y tamaos. - Libreta - Calculadora - Computadora Personal - Software BioDiversity Pro

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Procedimiento: Simulacin de comunidades. Una comunidad est constituda por un conjunto de especies en un espacio determinado; la diversidad de una comunidad est determinada por la riqueza (nmero de especies) y la abundancia (nmero de individuos de cada especie). En trabajos de campo se realizan conteos de individuos por especie, utilizando alguna tcnica de muestreo, por ejemplo, parcelas y transectos. Seguido de esto se estima el tamao poblacional por rea, es decir, el nmero de individuos por especie por hectrea o por kilmetro cuadrado. En el caso de la presente prctica, se har uso de un simulador en el que las especies estarn representadas por canicas; as, todas las canicas verdes, transparentes y de 1 cm de dimetro pertenecern a una especie, nombrada, por ejemplo: especie 1. C anicas con otras caractersticas pertenecern a otra especie. Su profesor le entregar cuatro grupos de canicas con distinta composicin; cada grupo representa una comunidad muestreada al azar. Clasifique por especies y llene la siguiente tabla anotando el nmero de individuos.

Especie 1 2 3 4 5 ...n

Comunidad 1

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Clculo manual del ndice de Shannon. Este ndice se representa con el smbolo H y se calcula con la frmula: H = - pi Ln pi2 (es un ndice estructural de equidad). pi es la proporcin del nmero de individuos de la especie i (ni) con respecto al nmero total de individuos de la comunidad (N) es decir: pi= ni/N Clculo manual del ndice de Simpson. ste ndice se representa con la letra D o con el smbolo y se calcula con la frmula: = pi 2 (es un ndice estructural de dominancia). Debido a que da valores ms bajos conforme aumenta la diversidad de especies, se prefiere usar el inverso (1/D) o el complemento (1-D) de Simpson. Calcule pi como en el primer caso. Para ambos casos deber llenar una tabla como la siguiente: Comunidad 1 Especie

Nmero de individuos (ni)

pi= (ni/N)

pi2

Ln pi2

1 2 3 4 n Nmero total de individuos (N):

Con los datos calcule los ndices de Simpson, Shannon, Alfa.

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Clculo usando el software Biodiversity Pro. El primer paso consiste en crear la base de datos, para esto siga los pasos: 1: En el men File elija New Data, lo cual tambin puede hacer con el comando Control+N

2: Aparecer una ventana que le indicar el nmero de comunidades a comparar (Number of Samples) y el nmero de especies totales encontradas en todas las comunidades (Number of Species). Llene las casillas segn sus datos.

3: Aparecer una hoja de clculo. Dando doble click sobre los ttulos podr cambiar los nombres, por ejemplo, podr poner Comunidad Sel-

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va Tropical en lugar de Sample 1. Llene la tabla; por ejemplo: si en la comunidad 1 encontr 4 individuos de la especie 1, 7 individuos de la especie 2, ninguno de la especie 3 y 9 individuos de la especie 4, entonces deber llenar la tabla como en el ejemplo de abajo. Nota: Los valores de cero no se mostrarn. Guarde los cambios en un archivo con extensin *.bdp en la carpeta Mis Documentos. Sample 1 5 Species 1 4 Species 2 7 Species 3 Species 4 9 Sample 2 0 0 0 0 0 0 0 0 Sample 3 0 0 0 0 0 0 0 0 Sample 4 Sample

4: En el men Alpha seleccione Diversity Indices y a continuacin el ndice que quiere calcular.

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5: Los resultados mostrarn una grfica como la de abajo, puede copiarla en el men Edit o puede ir al men Window y seleccionar 2 Shannon Index Results para ver los resultados en nmeros.
Shannon Index Results
0.6

Sam ple 1 0.5

0.4

Sam ple 2

Value

0.3 Sam ple 3

0.2 Sam ple 4

0.1

Sam ple 5

0.0 0 1 2 Sam ple 3 4 5

Resultados finales. Llene la siguiente tabla de resultados. Comunidad 1 2 3 4 5 H Manual Manual

Software

Software

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Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1. Explique las posibles diferencias entre el clculo manual y con el software. 2. Qu comunidades son ms diversas y cules menos diversas? Coinciden los resultados con ambos ndices? 3. Qu ndice preferira Usted utilizar para un estudio de campo? Porqu? 4. Qu significa que un ndice sea de dominancia y otro de equidad?

BIBLIOGRAFIA: Ondarza, Ral N., (2008). ECOLOGA El hombre y su ambiente. Edit. Trillas. 2. Edicin. Mxico, D. F. McAleece, N., Lambshead, P.J.D., Paterson, G.L.J. y J.D. Gage. (1997). Biodiversity Pro; Free Statistics Software for Ecology. The Natural History Museum (Londres)/Scottish Association for Marine Science (Escocia). En Lnea: http://www.sams.ac.uk/research/software.

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Unidad de Habilitacin No.13 Estimacin de la riqueza y abundancia de especies vegetales en un agroecosistema

Introduccin. En los ltimos 10 000 aos, la diversidad biolgica ha sufrido, por la actividad del ser humano, un efecto devastador que acelera el ndice de extincin de especies, sobre todo en islas y en ambientes altamente cerrados. Estos efectos se concentran sobre todo en los bosques tropicales hmedos donde se practica la tala y la quema. La magnitud del dao se acenta si se toma en cuenta que cuando un bosque reduce 10% su rea, se puede perder la mitad de su nmero de especies. Puesto que resulta insuficiente la conservacin de la biodiversidad en reas naturales protegidas, cada vez se estudian ms los agroecosistemas como reservorios de la diversidad animal, vegetal y microbiana. En particular, los agroecosistemas de caf bajo sombra y de cacao tradicional se han descrito como sitios de alta biodiversidad en Centroamrica.

Objetivo. Estimar la riqueza y abundancia de una especie vegetal en un agroecosistema de caf bajo sombra y correlacionarlas con la diversidad biolgica general.

Material y mtodos. Cuaderno Bolgrafo Cintas mtricas de 25 m Prensa para muestras de herbario Computadora personal

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Procedimiento: 1.- Se har un viaje de campo a un agroecosistema de caf bajo sombra diversificada del Soconusco, Chiapas. 2.- Se trazarn aleatoriamente 5 cuadros de 25 m x 25 m (725 m2). 3.- En cada cuadro se observarn y registrarn las bromelias epfitas creciendo sobre plantas de caf o sobre las dems plantas del agrosistema. Cuente las bromelias por especie. 4.- Para identificar a nivel de especie prense ejemplares para herbario, los cuales sern enviados a diagnstico. 5.- La riqueza ser determinada por el nmero de especies encontradas. 6.- La abundancia ser estimada considerando cada cuadro como una repeticin (previamente multiplique el dato de cada cuadro por 16 para tener el nmero de plantas por hectrea). 7.- Utilice la media muestral como estimador y el valor de t al 90% como coeficiente de confiabilidad, como se muestra en la frmula siguiente: ( Donde: : Media del nmero de individuos de bromelias de una especie. t : t de Student a un de 0.10 SD: Desviacin estndar de la muestra n: nmero de repeticiones (parcelas) )( )

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1. Elabore un cuadro que sintetice los resultados de abundancia por especie. 2. Redacte un comentario de media cuartilla sobre la posible biodiversidad que contiene el agroecosistema que Ud. Estudi.

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BIBLIOGRAFIA: Ondarza, Ral N., (2008). ECOLOGA El hombre y su ambiente. Edit. Trillas. 2. Edicin. Mxico, D. F.

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Unidad de Habilitacin No.14 Diseo completamente aleatorizado: Evaluacin de dos fuentes de carbono en el crecimiento de Escherichia coli

Introduccin. Se llama diseo de experimentacin completamente aleatorizado cuando los tratamientos de inters se asignan de manera totalmente aleatoria a los individuos u objetos en los que se han de realizar las determinaciones para medir la eficacia de los tratamientos. Es posible asignar aleatoriamente individuos para el tratamiento como sigue. Suponga que tenemos 12 plantas en un experimento, en el que se pretende comparar tres diferentes tipos de hormonas (3 tratamientos). Se enumeran a los individuos del 1 al 12; despus a partir de la tabla de los nmeros aleatorios se seleccionan consecutivamente, sin repetir, los nmeros del 1 al 12. En este ejemplo, cada tratamiento tendr cuatro repeticiones, aunque es importante decir que la cantidad de individuos en cada grupo no tiene que ser el mismo. La figura de abajo muestra el esquema de asignacin aleatoria. Plantas disponibles 01 02 03 Nmeros aleatorios 12 08 03 04 Hormona 1 (T1) 01 10 05 11 Hormona 2 (T2) 07 02 06 09 Hormona 3 (T3)

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Objetivo. Practicar el diseo experimental completamente aleatorio utilizando como modelo de estudio a la bacteria Escherichia coli.

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Material y mtodos: Cepa de E. coli 15 Tubos de 13 x 100 mm 1 matraz erlenmeyer de 125 mL Caldo nutritivo a distintos pH Esptula Micropipeta de 1000 L con puntas Micropipeta de 100 L con puntas Celdas para espectrofotmetro Asa bacteriolgica

Procedimiento: 1.- Se evaluarn 2 tratamientos (2 diferentes pH del medio para el crecimiento de E. coli: 4.0 y 6.8). 2.- Prepare los dos medios de cultivo en tubos de ensayos de 13 x 100 mm. 5 tubos de cada pH. Un tubo ser una repeticin. 3.- Inocule la cepa de E. coli con un asa y cultive la bacteria a temperatura ambiente con agitacin orbital a 200 rpm. 4.-Despus de 24 horas, mida el crecimiento de la bacteria por turbidimetra (transfiera 1 mL del cultivo a una celda de espectrofotmetro y lea la absorbacia a 540nm; calibre con caldo nutritivo sin bacteria). 5.- Recuerde lavar bien la celda al cambiar de repeticin. Su variable de respuesta es la absorbancia. 6.- Determine si el pH tiene un efecto significativo sobre el crecimiento de E. coli, realizando un anlisis de varianza y en caso de encontrar diferencias significativas realice una comparacin de medias por el mtodo de Tukey al 95% de confianza. 7.- Utilice el software MENU (FAUANL), el cual es un freeware. El primer paso consiste en seleccionar el diseo estadstico a usar: coloque el No. 1 para seleccionar el diseo completamente al azar.

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Seleccione el No. 1 para ingresar los datos

El programa le pedir que ingrese el nmero de tratamientos y las repeticiones. En su caso son 2 tratamientos y 5 repeticiones.

En la siguiente pantalla se muestran los datos para ver si estn correctos.

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Despus aparecer la pantalla de abajo, si hubiera un error en alguno de los datos al momento de ingresarlos, entonces seleccione el No.1 para corregirlo; si lo desea, grabe o simplemente contine.

Posteriormente, el programa arroja el anlisis de varianza

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En el cono C/ elija seleccionar todo, luego copiar para tranferir el cuadro de ANOVA a un procesador de textos. Si hay diferencias significativas entre sus tratamientos, aparecer lo siguiente:

Haga la comparacin de medias.

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Anexe el cuadro de ANOVA y la comparacin de medias. 2.- Redacte un comentario de 15 lneas sobre el efecto del pH en el crecimiento de microorganismos en general: in vitro y en la naturaleza. 3.- Describa ventajas y desventajas del Diseo Completamente al Azar.

BIBLIOGRAFIA: Walpole Ronald E. y Myers, Raymond H., (1992). PROBABILIDAD Y ESTADSTICA. Edit. Mc Graw Hill. 3. Edicin. Mxico, D.F. Daniel, Wayne W. (2002). BIOESTADISTICA. Edit. Limusa Wiley. 4.edicin. Mxico, D. F.

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Unidad de Habilitacin No. 15 Diseo factorial: Evaluacin de fuentes de carbono y pH, a distintos niveles, en el crecimiento de Escherichia coli

Introduccin. Con frecuencia es necesario estudiar simultneamente los efectos de dos o ms variables en una investigacin. Las variables de inters reciben el nombre de factores. El experimento en que se investigan dos o ms factores en forma simultnea se llama experimento factorial. Las diferentes categoras designadas de los factores se conocen como niveles. Por ejemplo, suponga que se analizan los efectos de tres diferentes sustratos en el crecimiento de un microorganismo. Se dice que el factor sustrato ocurre en tres niveles. Suponga que el segundo factor de inters es temperatura y se piensa que deben incluirse dos diferentes temperaturas. Por lo tanto, se dice que se tienen dos niveles para el factor temperatura. En general, se dice que el factor A ocurre en los niveles a y el factor B en los niveles b. En un experimento factorial no slo es posible estudiar los efectos de factores individuales, si no tambin, la interaccin entre los factores.

Objetivo. Practicar el diseo factorial utilizando como modelo de estudio a la bacteria Escherichia coli.

Material y mtodos. Cepa de E. coli Tubos de 13 x 100 mm 1 matraz erlenmeyer de 125 mL Medio mineral

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Esptula Micropipeta de 1000 L con puntas Micropipeta de 100 L con puntas Celdas para espectrofotmetro Asa bacteriolgica

Procedimiento: 1.- Disee el arreglo factorial: se probarn 2 fuentes de carbono (glucosa y sacarosa) y 2 pH (4.0 y 6.8), solos y en combinacin. USTED DEBER REALIZAR UN CUADRO MOSTRANDO TODAS LAS POSIBLES COMBINACIONES Y POR LO TANTO LOS TRATAMIENTOS. 2.- Utilice medio mineral, cuya receta ser proporcionada por su instructor. 3.- Trabaje con 5 repeticiones. Una repeticin ser un tubo de ensayos. Revise la metodologa de la Unidad de Habilitacin No. 14 de este Cuadernillo. 4.- Evale el crecimiento por turbidimetra. 5.- Para analizar los datos utilice el paquete estadstico MENU (Arreglo Factorial) que ser proporcionado por el profesor.

Cuestionario que deber responder y anexar al reporte: 1.- Elabore un comentario de media cuartilla sobre el efecto de la fuente de carbono, del pH y de la interaccin de ambos en el crecimiento microbiano en general: in vitro y en la naturaleza. 2.- Mencione las ventajas del diseo factorial. 3.- Imprima los datos que resulten del programa y adhiera en su libreta.

Bibliografa:

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Walpole Ronald E. y Myers, Raymond H., (1992). PROBABILIDAD Y ESTADSTICA. Edit. Mc Graw Hill. 3. Edicin. Mxico, D.F. Daniel, Wayne W. (2002). BIOESTADISTICA. Edit. Limusa Wiley. 4.edicin. Mxico, D. F.

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DIRECTORIO Dr. ngel Ren Estrada Arvalo RECTOR Mtro. Hugo Armando Aguilar Aguilar SECRETARIO GENERAL Dr. Pedro Urbano SECRETARIO ACADMICO C.P. Juan Guillermo Gutirrez SECRETARIO ADMINISTRATIVO Dr. Roberto Villers Aispuro DIRECTOR GENERAL DE PLANEACIN Dr. Fernando lvarez Simn DIRECTOR GENERAL DE EXTENSIN UNIVERSITARIA Mtro. Lorenzo Franco Escamirosa Montalvo DIRECTOR GENERAL DE INVESTIGACIN Y POSGRADO CENTRO DE BIOCIENCIAS Dr. Miguel Salvador Figueroa DIRECTOR