Revista INDICIOS, Ao 3. Vol. 1. La Rioja (Argentina) 2012. Martha Lidia Vera: Aplicaciones del ADN en medicina legal. pp.

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Recibido 27/03/2012 Aprobado 28/04/2012

APLICACIONES DEL ADN EN MEDICINA LEGAL- ADN MITOCONDRIAL

Martha Lidia Vera

Bioqumica. Comisario Inspector (RE) mvalac@hotmail.com

PALABRAS CLAVES:
ADN, ADN mitocondrial, medicina legal.

KEY WORDS:
DNA, mitochondrial DNA, forensic medicine,

Resumen
Este artculo analiza las aplicaciones del adn en medicina legal, repasa la importancia del adn mitocondrial con sus principales caractersticas y aplicaciones prcticas.

Abstract
This paper analyzes the applications of DNA in forensic medicine, reviews the importance of mitochondrial DNA to their main characteristics and practical applications.

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El ADN o Acido Desoxirribonucleico es el componente ms importante del ser vivo, ya que es la sustancia bioqumica encargada de transmitir y regular la vida de las diferentes especies, es distinto en todos los individuos (excepto en los gemelos univitelinos). Est presente en el ncleo de todas las clulas del cuerpo (cromosomas autosomicos) y esta formado por una sucesin de nucletidos (unidad bsica del ADN), compuesto por un azcar (desoxirribosa), un grupo fosfrico y una base nitrogenada, hay cuatro diferentes tipos de bases en el ADN, dos pirimidicas: TIMINA (T) Y CITOSINA (C) y dos puricas: ADENINA (A) y GUANINA (G). Estos nucletidos estn unidos entre si formando una cadena lineal enfrentada con su complementaria, central. La caracterstica ms importante de esta doble hlice es la COMPLEMENTARIDAD DE LAS BASES, ya que la unin de las bases de una cadena a las de la otra se rige por la exclusividad de la unin: A solo se une a la T y viceversa; la G solo se une a la C y viceversa. Por ello, una vez que se conoce la secuencia de una de las cadenas, se puede saber que nucletidos componen la otra cadena. Este es el principio para el estudio de identificacin de una persona, los fragmentos hipervariables de pares de bases o tndem STRs o Short Tandem Repeats de longitud variable que se repiten un numero determinado de veces tanto en cromosomas autosomicos como en los sexuales; especialmente en regiones no codificantes. por lo que se utiliza la expresin PAR DE BASES, FORMANDO UNA ESTRUCTURA de doble cadena o doble hlice enrolladas alrededor de un eje

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Son susceptibles a automatizacin y estandarizacin, por lo que son muy adecuados para el cotejo de resultados entre laboratorios y para la creacin de Base de datos criminales. Los STRs poseen de 2 a 7 nucleotidos y estn ampliamente distribuidos por todo el genoma en bloques o fragmentos de tamao inferior a 400 pb. Para que el ADN pueda aplicarse con fines forenses, ha de cumplir una serie de requisitos, estas condiciones son: El ADN como portador de la informacin gentica, se transmite de padres a hijos por medio de los cromosomas en el ncleo de todas las clulas, mitad del padre y la otra mitad de la madre. El ADN tiene una gran estabilidad en el medio ambiente, siendo posible aislarlo e identificarlo de clulas con das, semanas, meses e incluso aos de antigedad, se logro identificar momias de miles de aos. Por su presencia en todas las clulas es posible obtener indicios biolgicos en el lugar que ocurrieron los hechos. Las largas cadenas de ADN, compuestas por decenas de miles de pares de bases, presentan ciertas zonas en que los pares de bases se repiten de una forma secuencial y determinada, especificas en longitud y localizacin fingerprint) para cada persona. para cada persona. Por ello el ADN es como una impresin digital gentica (genetic

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Con el descubrimiento

de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), a

fines de la dcada del 80, los STRs se convirtieron en un poderoso instrumento para la identificacin humana como el esclarecimiento de hechos criminales. La PCR es una tcnica que permite la amplificacin IN VITRO de pequeos segmentos de ADN por la extensin simultanea de unos cebadores o primers sobre las hebras complementarias de la cadena de ADN ; as se obtiene un elevado numero de copias del fragmento de inters, con gran rapidez y fiabilidad, a partir de cantidades iniciales de ADN del orden de los ng (nanogramos) La utilidad de la tcnica de PCR es insospechada en el campo de la farmacologa, la medicina, la bioqumica, la virologa, bacteriologa, biomedicina, etc.

ADN mitocondrial- su importancia

Nuestros 23 pares de cromosomas nucleares suman una secuencia con un total de 6.000 millones de pares de bases, cada par de cromosomas homlogos le corresponderan entre 1.500 y 2.000 genes, de este en un pelo. y la deteccin de estos por STRs requiere cierta cantidad de muestra (ng) y condiciones como el bulbo o restos

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Esto se vio solucionado cuando se detecta en las Mitocondrias su ADN. Las Mitocondrias son organelos intracelulares presentes en todas las clulas humanas (excepto los glbulos rojos maduros). Son esenciales para la produccin y almacenamiento de energa en el metabolismo celular, como son la cadena respiratoria y la obtencin del ATP mediante la fosforilacion oxidativa. Estn presentes en el citoplasma de las clulas y lo que es relevante, poseen su propio ADN. El genoma humano mitocondrial posee ciertas caractersticas que lo hacen especialmente til para estudios de identificacin y evolucin molecular, como por ejemplo: . El ADN mt es circular, cerrado y de doble cadena; lo que le confiere mayor estabilidad (con respecto al ADN nuclear) frente a fenmenos degradativos. . Alto numero de copias que posee cada clula. Por termino medio se estima que hay de diez a100 mitocondrias por clula y de diez a 100 copias de ADN mt por mitocondria, lo que supone de 100 10.000 copias de ADN mt por clula. . La presencia de numerosos polimorfismos; de longitud y de secuencia. . La completa caracterizacin de su genoma; el ADN mt mide 16.569 bp y fue completamente secuenciado en 1981 por S. Anderson del laboratorio de Biologa Molecular del Medical Research Council en Cambridge y hoy se utiliza como la secuencia de Anderson. .Su elevada tasa de mutacin promedio; de cinco a diez veces mayor que el ADN nuclear. Su tamao es pequeo, cuenta con un total de 37 genes de los que la

mayor parte se usan para la sntesis de protenas que intervienen en los procesos bioqumicos de sntesis de energa (enzimas como citocromo oxidasa, ATPasa, NADH deshidrogenasa, etc.). Existen dos regiones principales en el genoma mitocondrial:

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. Una regin codificante (90%). Contiene 37 genes: 28 codificados por la cadena pesada (H rica en purinas) y nueve por la ligera (L, rica en pirimidinas). Una regin pequea (10%), no codificante; conocida como regin control (D loop) de aproximadamente 1,2 Kb. Por un lado , las mas ampliamente estudiadas y conocidas por su alto grado de variabilidad son la REGION HIPERVARIABLE 1 (HVI), que abarca las posiciones 16.024-16.365 y la REGION HIPERVARIABLE 2 (HVII) , que va desde la posicin 73 a la 340.

Cuando ocurre el proceso de fecundacin del ovulo por el espermatozoide, solo el ncleo de este ultimo logra penetrar el ovulo. Las Mitocondrias del espermatozoide no ingresan, como consecuencia las mitocondrias y su ADN del nuevo ser, provienen exclusivamente del ovulo, es decir de la madre. En otras palabras, todos los seres humanos reciben ADN mitocondrial exclusivamente de su madre biolgica, por lo que todas las personas que tengan el mismo linaje materno poseen el mismo ADN Mitocondrial, el ADN Mitocondrial del padre no pasa a la descendencia.

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El anlisis de ADN Mitocondrial se hace secuenciando especficamente una regin de este, es mucho ms elaborado que el anlisis de ADN por STR por que lleva ms tiempo y costo su realizacin.

Principales aplicaciones del ADN mitocondrial

La importancia del ADN mitocondrial es la escasa cantidad de muestra que se necesita, debido a su mayor numero de copias por clula, se puede realizar en un solo pelo cortado o sin bulbo. Un pelo con bulbo caduco o un fragmento de pelo contendr una cantidad de ADN Nuclear tan escasa que en principio resultara negativo. Tambin cuando exista una gran degradacin de las muestras por las malas condiciones de conservacin en que permanecieron hasta que fueron encontradas en el lugar del crimen o por la antigedad que tienen, tal el caso de restos seos y dientes antiguos o sometidos a condiciones extremas, el ADN mt se encontrara en mejor estado. Tambin en la Antropologa molecular para el estudio de la evolucin humana, los flujos migratorios, determinar linajes completos, en catstrofes, etc. El descubrimiento de la estructura del ADN por WATSON Y CRICK, revoluciono la criminalstica forense por la incapacidad en que se vean sumidos los laboratorios en determinados casos, en que pese a existir indicios, estos no eran suficientes para resolver el problema planteado, se aplicaba la falta de prueba equivale a la inocencia , hoy los indicios levantados del lugar del hecho son elevados a la categora de prueba irrefutable con una coincidencia del 99,99999% con el ADN testigo. De esa manera la gota de sangre levantada , el pelo que dejo el asesino, la colilla de cigarrillo del sospechoso, el chicle levantado , el doble ADN en una violacin, identifican categricamente recin nacido robado o al vinculo filiopaterno negado, etc. Cito dos casos donde el ADNmt sirvi para la resolucin de ellos y donde el CIGA (CENTRO INTEGRAL DE GENETICA APLICADA) segundo al FBI. de la ciudad de Crdoba actu asesorando, en el primer caso en Madrid, al centro Toxicolgico y el al sospechoso o al

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1)

Homicidio de Natalia Milan,

a esta joven le deban plata y fue a

cobrar cuando estaba Francisco Flamon, luego desapareci. La encontraron a los das en un baldo adyacente semidesnuda y atada. Los mdicos forenses levantaron de la zona de bajo vientre, varios pelos. El fracaso del ADN nuclear conllevo a que se realice el ADN mitocondrial, algunos pelos dieron compatible con la vctima y otros con el imputado. 2) En el caso Nora Dalmasso se encontr un pelo en regin vaginal. El

ADN mitocondrial era distinto a la vctima y por ende distinto a su hijo Facundo Macarron. Aun no se sabe a quin pertenece. En el primer caso se inculpa a un sospechoso y en el segundo se exime de culpa a un inocente.

Metodologa empleada- interpretacin de las diferentes bandas.

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Caso prctico de una paternidad en geles de poliacrilamida, donde las variantes alelicas se observan como bandas, con la coincidencia del SP (supuesto padre) con las del H (hijo).

BIBLIOGRAFIA Informe pericial del CIGA, Dr Ruben Simonetta y Dr Juan Carlos Jaime, bioqumicos. Cordoba- Argentina. Juan Carlos Jaime, Manuel Fondevila, Antonio Salas, Maria Victoria Lareu, Angel Carracedo. NINE AUTOSOMAL STRs genotype profiles in a sample from Cordoba

VERA, M. L. (2012) Aplicaciones del ADN en medicina legal. Revista INDICIOS [en lnea] 25 de Mayo de 2012, Ao 3, Vol. 1. pp.46-54. Recuperado (Fecha de acceso), de http://www.indicios.org

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