Ross, 1994 Cuando hablamos de un conjunto organizado de clulas que funcionan en forma colectiva, estamos aludiendo, por definicin

a un Tambin llamada anatoma tejido. microscpica

Ms adelante menciona las uniones intercelulares especializadas (nexo), que facilitan la colaboracin entre clulas.

Definicin Actual Por definicin un tejido es una agrupacin de clulas diferenciadas en forma y funcin, que interaccionan entre s para cumplir una funcin o ms. Todas las clulas de un tejido en particular se definen tambin por la composicin qumica de la matriz extracelular.

Gartner y Hiatt, 1997 Las clulas similares o relacionadas que funcionan de una manera particular o tienen una finalidad en comn, se agrupan para formar tejidos

Finn Geneser, 2005 Los tejidos se forman por la agrupacin de clulas para desarrollar colectivamente una funcin especial
Ms adelante menciona la matriz extracelular como importante para el tejido conectivo.

Hablar de tejidos es til a los fines descriptivos, facilita el estudio de la estructura corporal. Pero debemos estar atentos a sus limitaciones No todos los tejidos forman rganos. Un tejido no es un simple conjunto de clulas. La clasificacin de tejido es conflictiva ya que no se encuentran en forma pura ni aislada: se yuxtaponen, se entremezclan y se combinan para formar rganos. Son interdependientes.

METODOLOGA DE ESTUDIO EN LA HISTOLOGA

TECNICAS HISTOLOGICAS: Es el conjunto de mtodos y tcnicas a las que se somete un material organizado para hacer posible su estudio por medio del microscopio, posibilitando la observacin de las estructuras (caractersticas morfolgicas y moleculares) invisibles al ojo humano.

TECNICAS HISTOLOGICAS:

1-Examen inmediato o in vivo:

En material fresco: animales unicelulares y clulas libres (en cultivos). El material biolgico se mantiene fresco en diferentes sustancias, por ej. plasma sanguneo, albmina, humor acuoso o lquido amnitico, soluciones fisiolgicos o Ringer. Para visualizar y diferenciar se utilizan coloraciones vitales: Soluciones de colorantes no txicos (colorantes vitales): Azul de metileno, Carmin etc La coloracin puede ser intravital o in vivo, o supravital, donde pueden colorearse clulas libres o porciones de rganos.

2- Examen mediato o post-mortem:

Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de pasos, la Tcnica histolgica.
El material de estudio puede provenir de: biopsias quirrgicas, material obtenido de necropsias, autopsias (humanos) utilizando animales de laboratorio, estudios experimentales en animales, material de cultivos de tejidos, frotis o extendidos.

2- Examen mediato o post-mortem:

Toma de muestra: -Inmediata a la muerte del organismo. -Extraccin de los rganos: debemos dirigirnos directamente a los rganos que nos interesan estudiar. Si son varios, es conveniente extraer primero los que ms fcilmente se descomponen, ej. pncreas y la porcin inferior del tubo digestivo. Y algunas caractersticas morfolgicas (contrctil, hueco, macizo) - Reduccin a piezas: teniendo en cuenta las cualidades del fijador.

Pasos de la tcnica histolgica para inclusin en parafina y coloracin con hematoxilina- eosina.

1 Fijacin: Es el proceso Fsico (Histoqumico) que logra una situacin estable de los constituyentes tisulares, interrumpiendo las reacciones enzimticas de autlisis.
Cualidades de un buen fijador: 1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolticos. 2) Buen poder de penetracin. 3) Conservar lo mas fielmente la estructura del tejido. 4) No interferir y facilitar los procesos posteriores. 5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia. 6) Insolubilizar los componentes de los tejidos. 7) No producir estructuras artificiales.

Clasificacin de los fijadores: 1- Fijadores qumicos: Desnaturalizan y estabilizan protenas, son los ms empleados y pueden ser: a) Simples (constituido por una sola sustancia) Formol al 10%: Es muy usado. Aldehdo glutrico o glutaraldehdo al 2.5 % (ME) Acetona en fro. b) Compuestos o mezclas fijadoras: constituidas por varias sustancias. Liquido de Bouin: (cido pcrico-formol-cido actico). El mejor fijador para los trabajos corrientes. Muy penetrante. Liquido de Flemming: (mezcla cido pcrico-osmio-cido actico) 2- Fijadores fsicos: Desecacin (microorganismos) Calor (Coagulan protenas) Fro Congelacin y desecacin

2 Lavado y deshidratacin: serie creciente de OH. 3 Aclaramiento: Es el paso donde se pasa el tejido a una
solucin miscible en OH y medio inclusin (se la llama lquido intermediario) : xilol, alcohol butlico o benceno.

4 Inclusin:
Es impregnar la pieza con una sustancia que le confiere dureza y permite obtener cortes uniformes y delgados. Puede ser un medio acuoso (gelatina o agar-agar) o anhidro (parafina, celoidina, paraplast o resinas sintticas). Este medio disuelve el lquido intermediario y penetra en el tejido (por ejemplo la parafina a 60 C). El objetivo de esto es brindar posteriormente un soporte slido que permita el corte del tejido en delgadas capas. En la tcnica corriente, se utiliza la parafina; que es insoluble en agua (deshidratacin previa, paso 2).

5 Tallado:
Para eliminar exceso de parafina . Se elimina la parafina con un cuchillo, en forma de pirmide truncada, con el objeto de que no ofrezca resistencia al ser cortado en el micrtomo.

6 Corte:
Para obtener cortes finos (lminas de 3-8 micrones)se utilizan aparatos denominados micrtomos. Existen diferentes tipos de micrtomos (deslizamiento y rotacin), segn el medio de inclusin y microscopia.

7 Montaje:
Se coloca el corte en un bao de agua caliente, para que se estire. Se extienden sobre el portaobjetos una pelcula de albmina o gelatina. Se levantan los cortes con un pincel y se colocan sobre el portaobjetos. El portaobjetos se lleva a la estufa para terminar de estirar.
Bao histolgico para extendido del corte.

c: Secado

8, 9 Desparafinizacin e hidratacin:

Dado que la parafina ha cumplido su funcin de soporte en el corte, es necesario sacarla, ya que dada su naturaleza anhidra, no permitira la accin de los colorantes (generalmente acuosos o polares) en los tejidos. Para ello debe desparafinarse previo a la coloracion por medio de un tratamiento con xilol.

Luego se rehidrata el corte mediante pasajes por concentraciones decrecientes de alcohol.

10 Coloracin:
Los colorantes se pueden clasificar como: a) cidos: Tienen cargas negativas. Se unen a grupos catinicos como los grupos aminos de las protnas. Actan a pH bajo. Eosina, azul de anilina, fucsina cida orange G. Son colorantes citoplasmticos.

b) Bsicos: Presentan cargas positivas. Se unen a los grupos fosfato de los cidos nuclecos , grupos sulfato de los glucosaminoglicanos (Gags) y grupos carboxilo de protenas. Acta a pH alto ya que los grupos se ionizan y se unen al colorante. Hematoxilina, azul de metileno, azul de toluidina. Son colorantes nucleares.

c) Neutros: Colorean citoplasma y ncleo de diferente color. Eosinato de azul de metileno. Sustancias basfilas se colorean con colorantes bsicos Sustancias acidfilas se colorean con colorantes cidos Sustancias neutrfilas se colorean con colorantes neutros

Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloracin

La Eosina es un colorante cido (predomina densidad de carga negativa), se asocia y colorea a estructuras catinicas del citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmticos (como los de clulas musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminocidos bsicos ionizados).
La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante bsico, por lo cual se asocia y colorea estructuras aninicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados): Heterocromatina y nuclolos RNA ribosomal Matriz extracelular
(por los sulfato de los GAG)

Hematoxilina-eosina Ncleo: violeta. Citoplasma: rojizo.

Diferentes coloraciones

11 Deshidratacin:
mediante la accin de alcoholes de gradacin creciente: 70 , 80 , 90y 100 , sucesivamente hasta eliminar el agua.

12 Montaje final:
El montaje consiste en Homogenizacin o aclaracin: se emplea el benzol o xilol a los que se le puede agregar cido carbnico o fnico para aumentar su eficacia, estos son muy vidos de agua. Colocacin del cubreobjeto: con la finalidad de proteger el preparado, se lo recubre con un cubreobjeto. Para adherir el cubreobjeto al portaobjeto se emplean resinas, por ejemplo: el Blsamo de Canad.

Microscopia electrnica
Transmisin Barrido

PROBLEMAS DE INTERPRETACION al visualizar los cortes con el Microscopio

Artefactos de tcnica: Cambios estructurales inducidos
por la tcnica histolgica aplicada. Algunos de los ms comunes son: Melladuras: defectos en la cuchilla de corte del tejido al tomar la muestra o al cortar en el micrtomo. Encogimientos, Retraccin Pliegues (mal extendido) Precipitados (mala coloracin) Manejo poco cuidadoso Degeneracin post mortem (mal fijado)

Conceptuales
Debidos a una interpretacin inadecuada, a que las clulas pueden presentar tamaos diferentes, a que se ven imgenes en 2D en lugar de 3D, etc.

CL

CT