EL ANLISIS DE LA VARIANZA (ANOVA) 2.

Estimacin de componentes de varianza

Alicia Maroto, Ricard Boqu
Grupo de Quimiometra y Cualimetra Universitat Rovira i Virgili C/ Marcel.l Domingo, s/n (Campus Sescelades) 43007-Tarragona

En el artculo anterior [Boqu, 2004] introdujimos el anlisis de la varianza (ANOVA) y mostramos un ejemplo de su aplicacin a la comparacin de mltiples columnas de datos. En este captulo nos ocupamos de una segunda aplicacin de gran inters analtico: la estimacin de los componentes de variacin de un procedimiento analtico.

Estimacin de componentes de varianza Supongamos que queremos evaluar la variabilidad debida al muestreo y a los tratamientos previos en un determinado procedimiento analtico, por ejemplo, la determinacin de clembuterol en hgado (puede encontrarse una breve descripcin del mtodo en [Maroto, 2003]). De esta forma, podramos utilizar esta informacin para saber cunto afectan el muestreo y los tratamientos previos a nuestros resultados. A continuacin, y en funcin de su efecto, podramos plantearnos modificar la etapa de muestreo o la de tratamientos previos con el fin de disminuir dicha variabilidad. Ahora bien, cmo podemos calcular esta variabilidad? Un ANOVA de dos factores nos proporciona la herramienta adecuada para calcular dichas fuentes de variabilidad en trminos de varianza. Para llevar a cabo este ANOVA, es necesario realizar el diseo experimental propuesto en la Figura 1. Este diseo experimental es un diseo anidado, donde se toman como factores de variacin el muestreo, los tratamientos previos y la medida instrumental por HPLC. En la prctica, aplicar este diseo es sencillo. En este ejemplo concreto, se tomaron 6 muestras del hgado de un animal al que se le haba suministrado clembuterol. Despus de homogeneizar las muestras, cada

muestra se dividi en dos submuestras. A cada una de estas submuestras se le realizaron los tratamientos previos (centrifugacin y extraccin) de forma independiente. Finalmente, se realiz por duplicado la determinacin cromatogrfica de cada uno de los extractos obtenidos durante los tratamientos previos.

Fuente

x
Muestreo
i

Muestra 1

...

Muestra i

...

...

Muestra I

x1

xi

xI

Tratamientos previos
Tratamiento 1
j

Tratamiento 2

Tratamiento 1

Tratamiento 2

.
Medida instrumetal
k

x11

x12

xi1

xi 2

x111

x112

x121

x122

x i 11

x i 12

x i 21

x i 22

Figura 1. Diseo experimental para calcular las varianzas del muestreo, tratamientos previos y de la medida instrumental a partir de un ANOVA de dos factores.

La Tabla 1 muestra los resultados obtenidos al seguir el diseo experimental de la Figura 1. A partir de estos resultados debe realizarse un ANOVA de dos factores para calcular las varianzas asociadas al muestreo, a los pretratamientos y a la medida instrumental del mtodo. El tipo de precisin asociada a la medida instrumental obtenida a partir del ANOVA depender de cmo se hayan analizado los extractos por duplicado. En nuestro ejemplo, los duplicados se analizaron en condiciones de repetibilidad. Por tanto, a partir del ANOVA obtendremos la varianza asociada a la repetibilidad de la determinacin cromatogrfica. Sin embargo, si hubisemos querido obtener a partir del ANOVA la varianza asociada a la precisin intermedia de la determinacin cromatogrfica, tendramos que haber analizado los duplicados en condiciones intermedias (es decir, en diferentes das, con diferentes analistas, diferentes calibrados, etc.).

Tabla 1. Resultados obtenidos al seguir el diseo de la Figura 1 para la determinacin de clembuterol en hgado (concentraciones expresadas en g/kg).

Tratamiento 1 Muestra 1 2 3 4 5 6 Rplica 1 1.22 1.28 1.16 1.35 1.22 1.18 Rplica 2 1.27 1.25 1.14 1.38 1.19 1.15

Tratamiento 2 Rplica 1 1.28 1.32 1.10 1.30 1.26 1.05 Rplica 2 1.31 1.36 1.08 1.32 1.24 1.09

La Tabla 2 muestra las expresiones que deben utilizarse para calcular el cuadrado de las medias asociado a cada una de las fuentes de variabilidad. Una vez calculados, las varianzas asociadas al muestreo, a los tratamientos previos y a la medida instrumental pueden calcularse fcilmente utilizando las expresiones de la Tabla 3. Existen numerosos paquetes estadsticos que realizan el clculo del ANOVA y proporcionan el cuadrado de las medias. Por tanto, en la prctica nicamente es necesario aplicar las expresiones de la Tabla 3 para obtener las varianzas.

Tabla 2. Expresiones para calcular los cuadrados de las medias asociados al ANOVA de dos factores. I, J y K son el nmero de muestras, de tratamientos y de replicados, respectivamente. En nuestro ejemplo, I = 6, J = 2 y K = 2.

Fuente

Cuadrado de las medias

Grados de libertad

Muestreo

MSmuestreo =

J K ( x i x )2
i =1

I 1
I J

I-1

Tratamientos previos

MS trat =

K ( x ij x i ) 2
i =1 j =1

I (J 1)
2 ( xijk xij ) I J K

l(J-1)

Medida instrumental

MSmed =

i =1 j =1k =1

I J (K 1)
2 ( xijk x ) I J K

lJ(K-1)

TOTAL

MSTOTAL =

i =1 j =1k =1

I J K 1

IJK-1

Tabla 3. Expresiones para calcular las varianzas asociadas a cada una de las fuentes de variabilidad de un ANOVA de dos factores.

Fuente Muestreo Tratamientos previos Medida instrumental

2 smuestreo =

Varianza

Grados de libertad I-1

MSmuestreo MStrat J K
MStrat MSmed K

2 strat =

l(J-1) IJ(K-1)

2 smed = MSmed

La Tabla 4 muestra la suma de las medias y las varianzas asociadas al muestreo, a los pretratamientos y a la repetibilidad de la medida instrumental cromatogrfica. A partir de los valores obtenidos, podemos observar que el muestreo es la fuente de variabilidad que ms afecta a la determinacin de clembuterol en hgado. Por otro lado, la repetibilidad casi no afecta a los resultados analticos.

Tabla 4. Cuadrado de las medias y varianzas obtenidas para los resultados de la Tabla 1.

Fuente Muestreo Tratamientos previos Medida instrumental

Cuadrado de las medias, MS 3.4510-2 4.3010-3 4.9210-4

Varianza 7.5610-3 1.9010-3 4.9210-4

Desviacin estndar 8.6910-2 4.3610-2 2.2210-2

Grados de libertad 6-1=5 6(2-1)=6 62(2-1)=12

Conclusiones

En este artculo hemos visto una de las principales aplicaciones del ANOVA en qumica analtica: la descomposicin de la variabilidad total de un procedimiento analtico en las fuentes de variabilidad parciales ms importantes, como son el muestreo, los tratamientos previos y la medida instrumental. Estas varianzas nos permiten determinar qu etapa del procedimiento introduce ms incertidumbre en los resultados finales y, adems, pueden resultar muy tiles para determinar cules son los factores que afectan ms a nuestro procedimiento analtico.

Referencias bibliogrficas

Ricard Boqu, Alicia Maroto, El anlisis de la varianza (ANOVA). 1. Comparacin de mltiples poblaciones, Tcnicas de Laboratorio, 2004, en prensa. Alicia Maroto, Ricard Boqu, Jordi Riu, F. Xavier Rius, Clculo de incertidumbre en medidas qumicas: anlisis cromatogrfico, Tcnicas de Laboratorio, 279 (2003) 122-127.

Los autores agradecen todos los comentarios relacionados con los contenidos de este artculo. Pueden dirigirse, mediante mensaje electrnico, a la direccin: quimio@quimica.urv.es. Una versin en soporte electrnico de este artculo e informacin suplementaria puede encontrarse en: http://www.quimica.urv.es/quimio