TCNICAS IMUNOENZIMTICAS As tcnicas imunoenzimticas so baseadas na utilizao de antgenos ou anticorpos marcados com enzimas e permitem a deteco, titulao e quantificao

de substancias de interesse biolgico. Imunoperoxidase As tcnicas para localizao de constituintes celulares seguem o mesmo princpio da imunofluorescncia, com a diferena de que, em vez do fluorocromo, emprega-se a enzima, que tem maior capacidade de amplificao. A enzima converte o componente cromgeno (substrato+doador de hidrognios) em produto insolvel que precipita no stio da reao. Esses precipitados podem ser visveis ao microscpio eletrnico.

Enzimaimunoensaio O enzimaimunoensaio um mtodo quantitativo em que a reao antgenoanticorpo monitorada por medida da atividade enzimtica. Desempenha um papel muito importante no laboratrio clnico, pois, alm da elevada sensibilidade comparvel do radioimunoensaio, apresenta vantagens de utilizar reagentes estveis, estar livre das exigncias de trabalhar com radioistopos e poder ser adaptado tanto a testes simples como automao sofisticada. Uma caracterstica comum entre radioimunoensaio e enzimaimunoensaio que ambos medem, diretamente, a interao entre o antgeno e o anticorpo, no dependendo de um segundo fenmeno como precipitao, aglutinao ou fixao de complemento. O enzimaimunoensaio foi classificado em dois tipos: homogneo e heterogneo. Nos ensaios homogneos no necessria a separao entre os complexos antgenoanticorpo e o antgeno e/ou o anticorpo livres, pois a interao antgeno-anticorpo modula a atividade da enzima. Nos ensaios heterogneos, a separao necessria, pois a atividade da enzima no alterada pela reao antgeno-anticorpo. Os ensaios homogneos so mais utilizados para a deteco de haptenos e os heterogneos para a deteco de molculas maiores. ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) Esse teste foi desenvolvido como uma alternativa ao radioimunoensaio para a deteco de antgenos e anticorpos. O seu princpio bsico a imobilizao de um dos reagentes em uma fase slida, enquanto outro reagente pode ser ligado a uma enzima, com preservao tanto da atividade enzimtica como da imunolgica do anticorpo. O teste detecta quantidades extremamente pequenas de antgenos ou anticorpos, podendo ter elevada preciso se os reagentes e os parmetros do ensaio forem bem padronizados. Especial ateno deve ser dada a fase slida, cujas propriedades podem variar de acordo com a composio. O grau de pureza do antgeno ou do anticorpo da fase slida muito importante, pois qualquer material heterlogo competir pelo espao na placa.

O objetivo do ensaio a quantificao ou verificao da presena de um antgeno ou anticorpo SLFIA (Substrate-Labelled Fluorescent Immunoassay) Pode ser utilizado para detectar reagentes de alto e baixo peso molecular. Foi desenvolvido pela Ames Company of Miles Laboratories. No ensaio, um substrato fluorognico da -galactosidase ligado covalentemente a um antgeno protico ou hapteno. Se o anticorpo especfico reage com antgeno, a enzima -galactosidase no cliva o substrato, por impedimento estrico. Se a amostra tiver antgeno, este se ligar ao anticorpo e o substrato ligado ao antgeno ficar livre e reagir com a enzima para formar o produto fluorescente. O grau de fluorescncia proporcional quantidade de antgeno na amostra.