EL CICLO DEL NITRGENO

El nitrogenados es bien importante para los organismos vivos, ya que es parte de los cidos nucleicos y de las protenas. El ciclo del nitrgeno involucra la conversin enzimtica de compuestos nitrogenosos encontrados en el suelo, y del nitrgeno gaseoso de la atmsfera, en compuestos inorgnicos de nitrgeno que son utilizados por las plantas para la sntesis de estas macromolculas. El ciclo posee 4 fases distintas: Amonificacin: Degradacin secuencial de compuestos orgnicos nitrogenosos como por ejemplo los aminocidos y la liberacin de ammonia. Nitrificacin: Es la oxidacin de ammonia a nitrito (NO ) y luego a Nitrato (NO3 ), una forma nutricional de nitrgeno que puede ser asimilada por las plantas. Denitrificacin: Reduccin de nitratos no utilizados por las plantas a Nitrgeno gaseoso (N2). con
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Fijacin de nitrgeno: Combinacin qumica de nitrgeno libre (N2) otros elementos para formar nitrgeno fijado (compuestos conteniendo nitrgeno). La siguiente figura resume el ciclo del nitrgeno y todos estos procesos.

PARTE A: AMONIFICACIN- DETECCIN DE AMONIA. Esta prueba se basa en la deteccin de ammonia en el medio de cultivo. Se utilizan medio con peptona (sustrato orgnico que contiene nitrgeno). Procedimiento: Coleccin de muestras y cultivo de microorganismos: Preparar tubos que contengan caldo de peptona. Recolectar las muestras. Cultivos de Bacillus cereus, pueden ser utilizados como controles positivos.

Utilizando una aguja de inoculacin estril, inocular cada tubo con la muestra a investigar. Preparar un tubo para cada muestra diferente. Incubar los tubos 7 das a 25 grados centgrados. Prueba para detectar la presencia de ammonia: Hacer la prueba para detectar ammonia a los tres, cinco y siete das de inoculacin. Usando una pipeta Pasteur colocar una gota del reactivo de Nessler en una placa. Aade una muestra del cultivo utilizando un loop de inoculacin. Mezcla mediante rotacin. Determina utilizando la siguiente tabla la presencia de ammonia. COLOR No cambio Amarillo plido Amarillo intenso Precipitado marrn 0 no amonia RESULTADO

1+ poca ammonia presente 2+ moderada cantidad de amonia 3+ gran cantidad de amonia

PARTE B: Nitrificacin - deteccin de nitratos y nitritos. Las bacterias como Nitrosomonas y Nitrobacter presentes en suelo, convierten el ammonia en nitrito y luego este en nitrato. Establecimiento de Cultivos: Tomar las muestras de suelo y aadirlas a envases reduccin caldo con sulfato de ammonia y caldos con nitrito. 0 Incubar por 3 semanas a 25 C. Deteccin de nitritos en caldos con sulfato de ammonia: 1. AMONIA: Determinar la presencia de ammonia utilizando el reactivo de Nessler. (referirse a parte A). Si no hay ammonia puede que sta se haya convertido en nitrito. 2. Mezclar 3 gotas del reactivo de Trommsdorf con una gota de cido sulfrico y una muestra del cultivo de suelo. Observar cambio en color. La presencia de un color azul-negro indica presencia de nitrito. Si no hay cambio en color entonces es un resultado negativo. Produccin de nitrato en cultivos preparados en caldos con nitrito: 1. Repetir el paso 2 para determinar la presencia de nitrito. Cotejar si hay nitrato SOLO si NO hay nitritos, ya que la prueba de nitrato dara positivo en la presencia de ambos nitrito y nitrato. 2. Determinar la presencia o ausencia de nitrato con una gota de difenilamina y dos gotas de H2SO4 concentrado. Aadir una gota del cultivo de suelo. PARTE C: Denitrificacin-deteccin de nitrgeno gaseoso. Esta prueba detecta la produccin de nitrgeno gaseoso. Cultivos: Preparar tubos con caldo con nitrato conteniendo tubos Durham (pequeos tubos que atrapan gas producido en el cultivo). Inocular los tubos con la muestra de suelo. Utilizar tcnicas aspticas. No agitar los tubos. 0 Incubar los cultivos durante 2 semanas a 25 C. La presencia de gas en los tubos Durham indica que hubo denitrificacin.