SCIENTIA PLENA

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VOL. 4, NUM. 7

2008

Microextrao em fase slida: aspectos termodinmicos e cinticos

H. S. Drea1, A. Gaujac2, S. Navickiene1
1

Laboratrio de Anlise de Compostos Orgnicos Poluentes (LCP), Departamento de Qumica, Universidade Federal de Sergipe, 49100-000, So Cristvo-SE, Brasil
2

Escola Agrotcnica Federal de So Cristvo, 49100-000, So Cristvo Sergipe, Brasil hdorea@ufs.br

(Recebido em 9 de maio de 2008; aceito em 14 de julho de 2008)

As tcnicas tradicionais de preparao de amostras empregam quantidades de solventes orgnicos que so prejudiciais ao meio ambiente e sade humana. Estes procedimentos envolvem grande nmero de etapas, o que aumenta a possibilidade de erros alm de maior tempo envolvido nas anlises. Assim, tem sido dada especial ateno ao desenvolvimento de mtodos mais rpidos, mais simples e que faam pouco ou nenhum uso de solventes orgnicos. A microextrao em fase slida consolida-se como uma opo com excelentes resultados nas aplicaes cromatogrficas, para a determinao de diversas classes de analitos. Estes so adsorvidos em um filme micromtrico de um polmero que atua de modo altamente seletivo, sendo dessorvidos, diretamente, no injetor do sistema cromatogrfico. A SPME uma tcnica extremamente simples, verstil, com um alto fator de enriquecimento e que envolve, num tempo muito reduzido e em apenas duas etapas, a extrao, pr-concentrao, clean-up e introduo dos analitos no sistema de separao e quantificao. Alm de ser facilmente portvel, tem tambm como caracterstica o fato de dispensar completamente o uso de solventes orgnicos. Os fundamentos tericos so indispensveis para a compreenso dos princpios da nova tcnica e esse artigo, com este objetivo, enfatiza os aspectos termodinmico e cintico da SPME.
Palavras-chave: SPME, preparao de amostras, matrizes ambientais.

Traditional sample preparation techniques use large quantities of organic solvents, which are prejudicial to the environment and to public health. These are usually multiple-step procedures, involving several clean-up phases, which can increase the likelihood of errors and extend analysis time. Hence, special attention has been given to the development of faster, simpler methods that do not use organic solvent. Solid-Phase Microextraction (SPME) has been shown to give excellent results for volatile and semivolatile compounds, which are adsorbed onto a highly selective polymeric film. SPME is a versatile, simple, fast, inexpensive and solvent free procedure, with a high enrichment factor. Only two steps are required to complete extraction, preconcentration, clean-up, and introduction of compounds into a chromatographic separation and quantitation system. A knowledge of theoretical fundamentals is essential for the development of a new technique, hence this paper considers the thermodynamic and kinetic aspects of SPME, and the different parameters affecting extraction efficiency.
Keywords: SPME, sample preparation, environmental matrices.

1. INTRODUO Todas as etapas de um trabalho analtico so fundamentais para o sucesso da determinao das espcies qumicas presentes em uma matriz ambiental: a coleta e manipulao da amostra, a separao e quantificao, a anlise estatstica e a interpretao dos dados. Dentre elas, as mais susceptveis a erros so aquelas nas quais a interveno humana mais direta. Normalmente, envolvem a coleta do material e seu armazenamento, a extrao dos analitos da matriz, a eliminao de interferentes (clean-up) e a pr-concentrao. Costumam ser mais lentas e, freqentemente, envolvem perdas considerveis do analito devido ao grande nmero de subetapas envolvidas [1]. A preparao de amostras ambientais procura extrair o analito da matriz e concentr-lo num pequeno volume de solvente apropriado. As extraes clssicas trazem consigo alguns
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inconvenientes como o uso de grandes quantidades de solventes orgnicos txicos e extremamente dispendiosos. So realizadas em vrias sub-etapas, o que faz aumentar a probabilidade de erros e consumir a maior parte do tempo da anlise. A utilizao de tais solventes orgnicos, por si s, gera graves problemas ambientais e, freqentemente, envolve baixa seletividade, fato que dificulta bastante a anlise das matrizes ambientais, altamente complexas [2]. No sentido de diminuir o uso de solventes orgnicos, em concordncia com o documento assinado por vrios pases no final da dcada de 80, The Montreal Protocol on Substances that Deplete the Ozone Layer (www.unep.org), mtodos como a extrao lquido-lquido e extrao Soxhlet vm sendo progressivamente substitudos por outros menos dependentes do emprego de solventes [3]. O desenvolvimento de novas metodologias analticas, ocorrido em meados do sculo passado, acarretou na automatizao das metodologias de quantificao e anlise de dados, e trouxe a necessidade latente de aprimorar tambm o modo de preparo das amostras. Por outro lado, com o crescente interesse mundial na conservao dos meios naturais, aumentou-se na mesma proporo a demanda por mtodos que se adequassem as exigncias das anlises ao nvel de traos em matrizes ambientais: alta seletividade. baixos nveis de quantificao, alta preciso e exatido. Buscou-se ento por procedimentos mais rpidos e que diminussem o consumo de solventes orgnicos, caros e nocivos [4]. Desta forma, as pesquisas voltaram-se manipulao das propriedades fsicas do solvente utilizado na extrao, no caso das matrizes slidas, e na aplicao de adsorventes seletivos, para as matrizes lquidas. A partir disto, surgiram tcnicas importantes como a extrao por fluido supercrtico (SFE, supercritical fluid extraction), extrao com lquido pressurizado (PLE, pressurized liquid extraction) ou um lquido aquecido por meio de micro-ondas (MAE microwave-assisted extraction) e extrao em fase slida (SPE, solid phase extraction), a extrao sortiva em barras de agitao (SBSE, stir-bar sortive extraction) (RAYNIE, 2004) e a disperso da matriz em fase slida (MSPD, matrix solid phase dispersion) [5-6]. A SPME, sigla para solid-phase microextraction (microextrao em fase slida), foi criada com o intuito de simplificar a etapa de preparao de amostras, diminuindo o tempo envolvido nas anlises. Os testes iniciais foram publicados no final dos anos 80, nos quais foram utilizadas pequenas sees de fibra tica de slica fundida, algumas recobertas com lquido polimrico ou com um material slido adsorvente e outras sem qualquer recobrimento. O desenvolvimento da tcnica se intensificou a partir da introduo da fibra no interior de uma agulha adaptada numa micro-seringa, o que facilitou bastante a coleta dos analitos e a introduo da amostra no injetor do cromatgrafo [7]. O mtodo consiste na captura dos analitos em uma fibra capilar de slica fundida quimicamente modificada, recoberta com uma pelcula de material apropriado, com posterior dessoro trmica no injetor de um cromatgrafo. Uma vez introduzida no septo do recipiente contendo a amostra, a fibra de slica exposta ao meio onde ocorrer a extrao dos analitos [8]. A fase extrativa pode ser posicionada diretamente na fase lquida ou, no caso de amostras gasosas, em contato com o gs, ou ainda, em contato com o vapor em equilbrio com a amostra lquida ou slida. Aps um certo perodo de tempo, necessrio para que se estabelea o equilbrio entre as fases envolvidas, a fibra reposicionada no interior da agulha (figura 1). Em seguida, a seringa levada a um cromatgrafo a gs, onde a fibra introduzida no seu injetor, ficando exposta a ao do calor - os analitos so dessorvidos e o processo de separao / quantificao ento tem incio [9].

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Figura 1. Etapas da microextrao em fase slida. (a) extrao no modo headspace (b) extrao no modo direto (c) dessoro dos analitos no cromatgrafo. Adaptado de Kataoka et al. (2000).

Na sua configurao mais comumente utilizada, o dispositivo comercial consiste de uma fibra de slica fundida com 1 cm de comprimento e poucos micrometros de dimetro, inserida na agulha da seringa (figura 2). A fibra encontra-se posicionada dentro da agulha que tem a finalidade de proteg-la quando no est em uso, bem como de perfurar o septo de borracha, momentos antes da exposio da fibra amostra, ou na dessoro dos analitos no injetor do cromatgrafo [10]. Atualmente, a microextrao em fase slida encontra aplicaes em diversos segmentos da anlise qumica, envolvendo matrizes slidas, lquidas e gasosas [11-24].

Figura 2. Configurao do dispositivo proposto nos primeiros trabalhos em SPME, atravs de adaptaes feitas em seringas para cromatografia gasosa. Adaptado de Lord & Pawliszyn (2000).

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O conhecimento da termodinmica do mtodo SPME e a identificao de fatores que, diretamente, afetam sua cintica, so de grande utilidade para se alcanar o objetivo da anlise, no menor tempo possvel. Para isso, parmetros que so fundamentais na otimizao so revelados pelos conhecimentos termodinmicos e cinticos, fundamentos da tcnica. So tambm essenciais no desenvolvimento de novos recobrimentos, atravs dos quais se processam as extraes. Nesta reviso abordaremos os aspectos termodinmicos e cinticos da microextrao em fase slida, uma recente metodologia de preparao de amostras, que agrega preciso, exatido, sensibilidade e seletividade em uma simples fibra tica recoberta por uma micromtrica camada extratora polimrica, normalmente, um tipo de silicone. 2. ASPECTOS TERMODINMICOS DA SPME A microextrao em fase slida baseia-se no equilbrio da concentrao do analito na amostra e na fase extrativa. Logo aps a introduo da fibra, os analitos comeam a migrar da matriz para o meio extrativo. Considera-se o final do processo, na maioria das vezes, o momento a partir do qual o analito alcana a concentrao de equilbrio nas fases - aps esse instante, a quantidade de analito retido permanece constante com o passar do tempo. Em uma anlise em particular, deve-se encontrar o intervalo de tempo requerido para que o sistema atinja este equilbrio [25]. A SPME no modo direto envolve o equilbrio do analito em duas fases distintas, e no modo headspace, entre trs fases a amostra lquida (ou gasosa), a fase de vapor sobre a amostra lquida (headspace) e a fase extrativa (lquido polimrico ou slido adsorvente) [9]. Idealmente, a matriz deve ser completamente homognea e os analitos estveis nas fases envolvidas. O tratamento termodinmico abaixo se refere ao processo de partio, caracterstico dos recobrimentos da fibra com filme lquido polimrico. Nos casos em que se utiliza como fase extrativa um slido adsorvente, como slica fundida, as equaes so similares na anlise ao nvel de traos, salvo algumas restries [26]. A quantidade total do analito nas trs fases pode ser dada pelo balano de massa:
C0V A = C F VF + C H VH + C A VA

(1) CF,

CH , CA so as concentraes onde, C0 a concentrao inicial do analito na amostra; no equilbrio do analito, na fibra extrativa, no headspace e na amostra, respectivamente, e VF, VH e VA so, nessa ordem, os volumes da pelcula de recobrimento da fibra, do headspace e da amostra. A constante de distribuio do analito entre as fases fibra / headspace, KFH, e headspace / amostra, KHA, so definidas como:

K FH
e

CF = CH
CH = CA

(2)

K HA

(3)

A quantidade do analito recolhido na fibra extrativa, n, calculada pela expresso:

n = CF VF K FH K HAVF C 0V A n= K FH K HAVF + K HAVH + V A

(4) (5)

Como a constante de distribuio do analito nas fases fibra/amostra, KFA, igual ao produto KFHKHA, temos que:

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n=

K FAVF C0V A K FAVF + K HAVH + V A

(6)

Considerando a extrao da amostra no modo direto, a parcela KHAVH pode ser desprezada. Deste modo, a equao (6) assume a forma:

n=

K FAVF C0V A K FAVF + V A

(7)

Como KFA apresenta, geralmente, uma ordem de grandeza muito pequena, aliada ao fato de que, normalmente, o volume da amostra, VA, muito superior ao volume do recobrimento da fibra, VF, podemos aplicar a aproximao de que KFAVF << VA. Logo, pode ser abreviada para:

n = K FAVF C0
n = KC0

(8)

Podemos perceber uma relao linear entre a quantidade de analito extrado da amostra e a concentrao inicial deste na matriz, ou seja: (9) No modo headspace, partindo-se da equao (7), podemos inicialmente considerar que as fases amostra / headspace apresentam o mesmo volume (VA = VH)

n=

K FAVF C0V A K FAVF + (1 + K HA )V A

logo:

(10)

Usando o mesmo raciocnio empregado para o modo direto, temos:

KFAVF << (1 + KHA)VA ,

n=

K FAVF C0 (11) (1 + K HA )

Conclui-se ento que a quantidade do analito coletado pela fibra, no modo headspace, segue tambm uma dependncia linear com a concentrao inicial do analito na amostra:

(12) Uma outra constatao interessante o fato de que a quantidade extrada do analito independe do volume da amostra em anlise. Assim, a coleta dos analitos pode ser feita diretamente no ambiente natural, expondo a fibra extrativa ao sistema em estudo, como a atmosfera, a gua de um rio ou efluentes industriais [26]. 3. ASPECTOS CINTICOS DA SPME O tempo requerido para o equilbrio, te, no modo direto, depende apenas da espessura do filme lquido da fibra, Lf, e do coeficiente de difuso do analito na fibra extrativa, Df :

n = k 'C 0

L2 te = F 2 DF

(13)

Aumentos na espessura do recobrimento, apesar de propiciar uma maior quantidade de analito retido pela fibra, gera maiores tempos de extrao. Por outro lado, alguns parmetros de operao devem ser cuidadosamente avaliados, como a temperatura de extrao e o nvel de agitao da amostra, a fim de otimizar o coeficiente de difuso do analito na fibra coletora [26]. No modo headspace sem agitao da amostra, o tempo de equilbrio pode ser expresso por:

LH LS t e = 1,8 + K D K FA LF 1 , 6 D A HA H

(14)

onde LH, LA e LF so as espessuras do headspace, da amostra e do filme lquido, respectivamente; DH e DA, os coeficientes de difuso do analito no headspace e na amostra,

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nesta ordem; e KHA e KFA as constantes de distribuio do analito nas fases headspace / amostra e fibra / amostra, respectivamente. Uma anlise da equao (14) nos revela que redues na espessura das fases diminuem o tempo de equilbrio, porm tais redues so limitadas a alguns aspectos: uma diminuio na espessura do filme lquido, LF, diminui tambm a capacidade da fibra em extrair os analitos as pelculas mais finas retm uma menor quantidade de analitos, o que pode comprometer a anlise de matrizes ao nvel de traos. Alm disso, redues significativas da espessura da amostra, LA, podem tambm comprometer a sensibilidade do mtodo e, quando aliada diminuio da espessura do headspace, LH, pode tambm produzir efeitos indesejveis termodinmica do processo, principalmente, quando a concentrao do analito difere bastante nas duas fases amostra e headspace [27]. Um aumento nos coeficientes de difuso, DH e DA, tambm diminui o tempo de extrao. Isto pode ser conseguido com agitao eficiente da amostra e/ou aquecimento. Quanto s constantes de distribuio, KHA e KFA, o tempo de extrao otimizado para analitos com pequenas constantes de distribuio entre as fases fibra / amostra, KFA, e com grandes constantes de distribuio nas fases headspace / amostra, KHA [27]. Por fim, importante salientar que se pode trabalhar fora da condio de equilbrio, principalmente nos casos em que o tempo de extrao excessivamente longo. No entanto, as condies de extrao devem ser extremamente bem controladas para assegurar a preciso do mtodo, tais como o grau de agitao da amostra e a temperatura. Nestes casos, fundamental uma boa reprodutibilidade dos tempos de extrao em cada amostra, pois variaes deste comprometeriam facilmente as determinaes. Sistemas automatizados so mais indicados nestas situaes [28]. 4. APLICAES COM SPME Os compostos volteis benzeno, tolueno, etilbenzeno e os ismeros do xileno so muito usados para monitoramento ambiental em rea de explorao e produo de petrleo. Gaujac et al [24] estabeleceram um mtodo por SPME para analisar esses compostos fazendo uso da otimizao multivariada. Em seguida o mtodo analtica foi validado e anlises de amostras de guas de mar e de produo foram realizadas. Os valores encontrados variaram de 145,8 a 1891 g L-1, bem acima do estabelecido pela legislao brasileira. Wang et al. [29] estudaram a padronizao interna do mtodo SPME por meio da adio de um padro fibra antes da exposio da mesma amostra. Foram investigados modos possveis de carregar a fibra com quantidades reprodutveis do padro. Foi encontrado que, ao se adicionar alguns miligramas de padres, como naftaleno, em poucos gramas de leo para bombas, tem-se um excelente gerador de padres. Uma nica soluo pode conduzir a pelo menos a cem padronizaes da fibra, com reprodutibilidade de RSD < 4%. Quando a fibra carregada com o padro inserida no vial contendo os analitos ocorre, simultaneamente, a dessoro do padro na amostra e a captao das molculas de interesse. A quantificao baseada no equilbrio de distribuio das molculas dos padres e dos analitos, entre a fibra e a amostra dentro do vial. Uma comparao foi feita entre os perfis de equilbrio obtidos no modo tradicional de padronizao interna e no modo proposto. Em trabalho desenvolvido por Ji et al [30] foi proposta uma metodologia de quantificao de BTEX em matrizes aquosas no campo. Um equipamento porttil de cromatografia gasosa com um micro-detector por ionizao de chama foi empregado. As melhores respostas foram obtidas com fibra PDMS-DVB com 65 m de espessura, nvel de agitao de 900 rpm, volume do headspace em 3,0 mL (em vial de 4 mL) e concentrao de NaCl em peso/volume igual a 35%. Um tempo e extrao de 1,0 min foi suficiente para os analitos alcanarem o equilbrio entre as fases. O RSD para o mtodo variou entre 5,4% a 8,3%. O limite de deteco do mtodo ficou em 1,5 g.L-1, o qual suficientemente sensvel para detectar BTEX em amostras naturais de gua. O mtodo otimizado foi empregado para anlise em campo de BTEX em gua de descarte.

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5. CONCLUSO A microextrao em fase slida uma das mais modernas e simples opes de trabalho em qumica analtica, para o preparo de amostras ambientais a serem analisadas por tcnicas cromatogrficas. Utilizada para uma ampla variedade de matrizes nos mais diferentes tipos de anlises, facilmente adaptvel a analitos polares, apolares, volteis ou semi-volteis. Alm disso, altamente sensvel e seletiva, apresenta baixo custo e grande portabilidade, permitindo extraes diretamente no meio natural, facilitando bastante as anlises de matrizes ambientais. Por fim, uma tcnica que no utiliza solvente orgnico, trazendo benefcios para a sade humana e contribui para a reduo de resduos txicos no laboratrio e no meio ambiente.

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