Você está na página 1de 32

TCNICAS HISTOLGICAS EMPREGADAS NO DEPARTAMENTO DE ANATOMIA PATOLGICA FCM - UNICAMP ..

Patologia geral e especial ndice alfabtico geral Casos correlativos Neuropatologia e Neuroimagem Neuroimagem Graduao Banco de Imagens ndice alfabtico Neuro Neuro Adies recentes English Homepage Neuroimagem Casos Neuropatologia Casos Site espelho

....

Hematoxilina Fosfotngstica Hematoxilina de Harris + Eosina Mtodo de Grocott para fungos Mtodos de Ziehl-Nielsen e Fite para bacilos cido-resistentes Melanina (remoo) Azul de Alcian Mtodo de Weigert - Van Gieson para elstico e colgeno Mtodo de Verhoeff para elstico e colgeno Tricrmico de Masson Verde Metil Pironina Vermelho Congo Alcalino Giemsa - mtodo de Wolbach modificado Escarlate R mtodo de Herxheimer PAS - Reao do cido Peridico - Schiff Reticulina - mtodo de Gomori Mtodo de Von Kossa para clcio Gram - mtodo de Macallum-Goodpasture Mucicarmim Cristal Violeta Mtodo de Warthin para Treponema Sudo Negro para gorduras Pigmento de Formol em corte histolgico (remoo) Mtodo de Fontana-Masson para melanina

Soluo sulfocrmica Imunofluorescncia Direta Mtodo de Grimelius para neurosecreo Azul de Toluidina para substncia metacromtica Reao de Perls para Hemossiderina Luxol fast blue - Nissl para mielina e neurnios AGNOR DESCALCIFICADORES FIXADORES e especificao FERRO COLOIDAL DE MOWRY BIPSIAS DE MEDULA OSSEA MICROSCOPIA ELETRNICA

HEMATOXILINA FOSFOTNGSTICA

Hematoxilina 1g gua destilada 500 ml cido Fosfotngstico 20 g gua destilada 500 ml Dissolver a Hematoxilina em 500 ml de gua destilada com o auxlio de calor, sem ferver e agitando sempre. Dissolver o cido Fosfotngstico em 500 ml de gua destilada. Juntar as duas solues e agitar. Guardar e envelhecer durante 6 meses.

IODO ALCOLICO
Iodo 3g Iodeto de Potssio 6g lcool 95% 300ml 1. Desparafinar e hidratar 2. Refixar em Bicloreto de Mercrio, soluo saturada por 24 horas 3. Passar em gua destilada 3 vezes

4. Iodo Alcolico 5% por 5 minutos 5. Passar em gua destilada 3 vezes 6. Tiossulfato de Sdio 5% por 5 minutos 7. Passar em gua destilada 3 vezes 8. Oxidar em Permanganato de Potssio 0,25% por 5 minutos 9. Passar em gua destilada 3 vezes 10. cido Oxlico 5% por 10 a 20 minutos 11. Passar em gua destilada 3 vezes 12. Corar pela HEMATOXILINA FOSFOTNGSTICA 24 horas 13. Salvar o corante e desidratar, diafanizar e montar. RESULTADO: Fibras Colagenas azul escuro

HEMATOXILINA DE HARRIS
Hematoxilina 5g lcool 95% 50ml Sulfato de Alumnio e Potssio 100g gua Destilada 1000ml xido de Mercrio 2,5g Dissolver a Hematoxilina no lcool e o Almen na gua destilada com o auxlio de calor. Misturar as duas solues e ferver o mais rpido possvel. Remover da fonte de calor e juntar o xido de Mercrio aos pouquinhos com cuidado, reaquecer at a fervura e contar um minuto. Afastar da fonte de calor e mergulhar em uma bacia com gua e gelo imediatamente. Adicionar 4 ml de cido Actico, quando o corante estiver resfriado.

EOSINA
Eosina 2,5g gua destilada 50 ml lcool 95% 200 ml lcool 80% 750 ml Dissolver a EOSINA na gua destilada e acrescentar o lcool 95% Juntar os 750 ml de lcool 80% e mais 5 ml de cido Actico.

MTODO DE GROCOTT PARA FUNGOS

Fixao Formalina Solues cido Crmico Nitrato de Prata Metenamina Brax

10% soluo aquosa a 5% soluo aquosa a 5% soluo aquosa a 3% soluo aquosa a 5%

Bissulfito de Sdio soluo aquosa a 1%

SOLUO ESTOQUE DE METENAMINA-NITRATO DE PRATA


Nitrato de Prata soluo aquosa a 5% 5 ml Metenamina soluo aquosa a 3% 100 ml * Ao juntar as solues forma-se uma nuvem branca que se dissolve ao agitar.

SOLUO DE TRABALHO DE METENAMINA-NITRATO DE PRATA


Soluo estoque de Metenamina-Nitrato de Prata 25 ml gua destilada 25 ml Soluo de Brax 5% 2 ml Tiossulfato de Sdio soluo aquosa a 2% 1. Desparafinar, hidratar pelo lcool at a gua corrente por 5 min 2. Oxidar em soluo de cido Crmico a 5% durante uma hora 3. Lavar em gua corrente por poucos segundos 4. Bissulfito de Sdio a 1% durante um minuto 5. Lavar em gua corrente 5 minutos 6. Enxaguar em gua destilada 3 a 4 passagens 7. Impregnar pela soluo de trabalho de METENAMINA-NITRATO DE PRATA em estufa a 60C durante 30 a 60 minutos. 8. Controlar ao microscpio (crtico)* at que os fungos corem-se em marrom dourado. 9. Enxaguar em 6 trocas de gua destilada 10. Remover a prata em excesso com tiossulfato de Sdio 2% por 3 min 11. Lavar em gua corrente por 2 minutos 12. Corar os ncleos pela Hematoxilina de Harris por 5 segundos 13. Lavar em gua corrente por 5 minutos 14. Desidratar, diafanizar e montar com Entellan. Resultado: Fungos em marrom dourado; Ncleos em azul *impregnao em excesso cora outros componentes, principalmente fibras colgenas e ncleos, e atrapalha a visualizao dos fungos.

MTODO DE ZIEHL-NIELSEN PARA BACILOS LCOOL-CIDO RESISTENTES (tuberculose, lepra)

Corante de Ziehl-Nielsen Fenol lcool Absoluto Fucsina Bsica (p) gua Destilada Corante de Azul de Metileno gua destilada Azul de Metileno 99 ml 0,5 g 8 ml 20 ml 2g 200 ml

cido Actico Glacial 0,5 ml Diferenciador lcool 70% cido Clordrico puro Mistura para desparafinar Xilol Vaselina Procedimento: 1. Desparafinar na mistura xilol-vaselina por 10 minutos 2 vezes 2. Secar a lmina em papel filtro dobrado 3. Corar pela Fucsina de Ziehl-Nielsen a quente: filtre o corante sobre o corte na lmina em um suporte e aquea com uma chama sob a lmina at ver o vapor comear a subir da lmina. Repetir por 3 vezes com 2 minutos de espao entre os aquecimentos. 4. Lavar em gua corrente para retirar o excesso do corante 5. Diferenciar no lcool-cido cuidadosamente, revelando cor rsea no corte, e mergulhar na gua corrente interrompendo a diferenciao 6. Lavar em gua corrente por 10 minutos 7. Corar pelo Azul de Metileno por 1 minuto 8. Retirar o excesso em gua corrente rapidamente 9. Desidratar, diafanizar e montar. Resultado: Bacilos em vermelho; Ncleos em azul 60 ml 30 ml 99 ml 1 ml

MTODO de FITE PARA BACILOS LCOOL-CIDO RESISTENTES


FRAGMENTOS; fixados em formol 10 % e cortes em parafina de 6 micrmetros REAGENTES: 1-Xilol-leo de Amndoa leo de Amndoa Xilol

1 parte 2 partes

2-Corante de Ziehl-Nielsen Preparo conforme tcnica anterior [4] 3-cido Sulfrico 2% lcool 70% ou gua destilada cido Sulfrico

98 ml 2 ml

NOTA: Usar gua ou lcool 70% conforme o micro organismo para ser evidenciado: se tuberculose use lcool 70%, se lepra use gua PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar em 2 etapas de Xilol - leo de Amndoa por 12 minutos cada 2. Secar por compresso utilizando papel filtro dobrado 3. Secar ao ar 4. Corar em soluo corante de Ziehl-Nielsen [filtrado] por 15 a 30 minutos em temperatura ambiente 5. Lavar em gua corrente por 5 minutos 6. Diferenciar em [3] conforme nota acima 7. Lavar em gua corrente por 5 a 10 minutos 8. Contracorar com Azul de Metileno por 1 minuto 9. Lavar em gua corrente por 10 minutos 10. Secar em papel filtro. Completar a secagem agitando a lmina ao ar e passagens em xilis 11. Montagem em Permount ou Entellan RESULTADO: Bacilos vermelho; Fundo azul

MELANINA (remoo)
SOLUO DE PERMANGANATO DE POTSSIO Permanganato de Potssio 0,25 g gua destilada SOLUO DE CIDO OXLICO 100 ml

cido Oxlico gua destilada PROCEDIMENTO:

5g 100 ml

1. Desparafinar e hidratar at a gua corrente 2. Passar em gua destilada 3. Colocar na soluo de Permanganato de Potssio 0,25%, por 30 minutos a 1 hora, dependendo da quantidade do pigmento 4. Lavar demoradamente em gua corrente e passar em gua destilada 5. Colocar na soluo de cido Oxlico a 5% at que o corte fique descorado 6. Lavar em gua corrente por 10 minutos 7. Passar em gua destilada 8. Corar qualquer colorao a seguir

AZUL DE ALCIAN PH 2,7


SOLUO DE CIDO ACTICO cido Actico Glacial gua destilada SOLUO DE AZUL DE ALCIAN Azul de Alcian Soluo de cido Actico a 3% SOLUO DE SAFRANINA Safranina 3 ml 97 ml

1g 100 ml

0,1 g

Soluo aquosa de cido Actico a 3% 100 ml PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar at a gua corrente e gua destilada 2. Corar pelo Azul de Alcian por 30 minutos 3. Lavar em gua corrente por 10 minutos 4. Contracorar pela Safranina 0,1% por 1 minuto 5. Passar em gua para retirar excesso 6. Desidratar, diafanizar e montar.

MTODO DE WEIGERT - VAN GIESON PARA ELSTICO E COLGENO


Corante de WEIGERT Fucsina Bsica 2g

Resorcina

4g

gua destilada 200 ml Preparo do corante de Weigert: Misturar em uma cpsula de porcelana bem limpa os elementos acima, aquecer at ebulir esta soluo e permanecer ebulindo por 1 minuto, adicionar 25 ml de Cloreto Frrico soluo aquosa a 29%. Esfriar, filtrar em um papel filtro dobrado (sanfonado), desprezar o lquido filtrado e salvar o precipitado com o papel filtro utilizado. Abrir o papel filtro contendo o precipitado na cpsula de porcelana e acomoda-la na estufa para que seque completamente. De posse da cpsula com o papel filtro e o precipitado seco, adicione 200 ml de lcool 95% e com o auxlio do calor, aquea cuidadosamente a soluo at dissolver o precipitado, retire do calor e remova o papel filtro da soluo e deixe a soluo esfriar naturalmente, adicione 4 ml de cido Clordrico e adicione mais lcool 95% perfazendo o volume final de 200 ml.

Corante de VAN GIESON


Fucsina cida 1% soluo aquosa 5 ml Soluo aquosa saturada de cido Pcrico 100 ml

HEMATOXILINA DE WEIGERT
Soluo A Hematoxilina lcool 95% Soluo B Cloreto Frrico 29% gua destilada cido Clordrico concentrado PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar em Xilol, lcool at a gua corrente 2. Corar pela Hematoxilina Frrica de Weigert por 10 minutos. Misturar as solues A e B em volumes iguais no momento do uso. 3. Lavar em gua corrente por 10 minutos 4. Passar em lcool 95% 5. Corar pelo corante de Weigert por 30 minutos a 1 hora. 6. Lavar em gua corrente por 5 minutos 7. Corar pelo corante de Van Gieson por 30 segundos 8. Desidratar diretamente, diafanizar e montar. RESULTADO: 1,0 g 100 ml

4,0 ml 95,0 ml 1,0 ml

Fibras elsticas - azul escuro Ncleos - azul a preto Colgeno - rseo a vermelho Outros elementos - amarelo

MTODO DE VERHOEFF PARA ELSTICO E COLGENO

Solues estoque: Hematoxilina alcolica 10% (10 g de hematoxilina em 100 ml de lcool absoluto) Cloreto frrico 10% Soluo de Iodo de Verhoeff. o o o Iodo 2 g. Iodeto de Potssio 4 g. gua destilada 100 ml.

Soluo corante diria de fibras elsticas. Hematoxilina alcolica 10 % - 25 ml. lcool absoluto - 25 ml. Cloreto frrico 10% - 25 ml.

Misturar bem e adicionar Soluo de iodo de Verhoeff - 25 ml. Soluo diferenciante : Cloreto frrico 2%. Procedimento. 1. Desparafinar e hidratar 2. Corar 15 min. na soluo para fibras elsticas de Verhoeff. 3. Lavar em aguar corrente 20 min. 4. Passar por gua destilada. 5. Diferenciar em cloreto frrico 2%, sob controle microscpico. Fibras elsticas devem salientar-se em negro contra fundo cinza claro. 6. Tiossulfato de sdio 5% - 1 min. 7. Lavar em gua destilada 5 min. 8. Contracorar com soluo de van Gieson 1 min. Tempo maior descora as fibras elsticas. 9 Desidratar rapidamente e montar (tempo de desidratao excessivo em lcool descora a soluo de van Gieson).

TRICRMICO DE MASSON

SOLUO DE BOUIN

10

Soluo saturada de cido Pcrico Formaldedo puro cido Actico Glacial HEMATOXILINA FRRICA DE WEIGERT
Soluo A

75 ml 25 ml 5 ml

Hematoxilina p lcool 95%


Soluo B

1g 100 ml

Soluo aquosa de Cloreto Frrico a 29% gua destilada cido Clordrico Concentrado

4 ml 95 ml 1 ml

Soluo de trabalho: juntar na hora do uso partes iguais da soluo A e B

SOLUO DE ESCARLATE DE BIEBRICH Soluo aquosa de Escarlate de Biebrich 1% Soluo aquosa de Fucsina cida 1% cido Actico Glacial 90 ml 10 ml 1 ml

SOLUO CIDA FOSFOTNGSTICA-FOSFOMOLBDICA cido Fosfotngstico 2,5 g cido Fosfomolbdico gua destilada SOLUO DE AZUL DE ANILINA Azul de Anilina cido Actico Glacial gua destilada SOLUO DE GUA-CIDO gua destilada cido Actico Glacial PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar 2. Lavar em gua corrente por 5 minutos 3. Mordentar em soluo de Bouin por 1 hora na estufa a 60 graus ou preferencialmente deixar por uma noite em temperatura ambiente 4. Lavar em gua corrente at desaparecer o amarelo deixado pela soluo de Bouin 5. Passe em gua destilada 6. Core pela soluo de Hematoxilina Frrica de Weigert (A e B) por 10 minutos 100 ml 1 ml 2,5 g 2 ml 100 ml 2,5 g 100 ml

11

7. Lavar em gua corrente por 10 minutos 8. Passe em gua destilada 9. Corar pela soluo de Escarlate de Biebrich por 5 minutos 10. Passe por gua destilada 11. Diferencie pela soluo de cido Fosfotngstico-Fosfomolbdico durante 10 a 15 minutos 12. Passe por gua destilada 13. Corar pela soluo de Azul de Anilina durante 5 a 10 minutos 14. Lave em gua destilada 15. Passe pela soluo de cido Actico Glacial 1% por 3 a 5 minutos 16. Passe por gua destilada 17. Desidrate, diafanize e monte em resina. RESULTADO Ncleos - pretos Citoplasma, Queratina, Fibras intercelulares - vermelho Colageno e Muco - azul

VERDE METIL PIRONINA


Fixao: Formalina a 10 % tamponada ou Carnoy Cortes de 4 m SOLUES:

SOLUO ESTOQUE DE VERDE METIL 1% Verde Metil 1g gua destilada 100 ml Extrair e purificar a soluo de Verde Metil Mtodo: 1. Adicionar 100 ml de clorofrmio na soluo estoque de Verde Metil e agitar bem 2. Deixar por vrias horas no extrator ou durante a noite se possvel, acondicionado em um funil de separao 3. Descartar o clorofrmio do separador 4. Repetir a operao at que o clorofrmio saia sem cor, usualmente na terceira vez suficiente para remover as impurezas da soluo

SOLUO ESTOQUE DE PIRONINA A 1% Pironina GS 1g gua destilada 100 ml Aquea delicadamente a soluo at dissolver o corante

12

SOLUO DE TRABALHO VERDE METIL PIRONINA Soluo estoque purificada de Verde Metil 70 ml Soluo estoque de Pironina GS 1% 30 ml Ajustar o pH para 4.8 usando uma soluo de Acetato de Sdio a 1%. Deixar o corante descansar por uma noite antes de usar. No filtrar. PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar at a gua destilada 2. Filtrar sobre a lmina a soluo corante e deixar por 2 minutos 3. Por as lminas entre papel filtro pressionando e secar no ar durante 5 minutos 4. Diferenciar individualmente com uma ou duas gotas de gua destilada. Checar em microscpio e se os cortes esto vermelhos, diferencie rapidamente em lcool etlico a 80% -5 graus 5. Desidratar em acetona duas ou trs mergulhadas rpidas 6. Completar passando em uma mistura de partes iguais de xilol-acetona e em duas passagens de Xilol por 1 ou 2 minutos cada 7. Montar em resina RESULTADOS: cido Ribonucleico (RNA) vermelho cido Desoxiribonucleico (DNA).azul ou azul esverdeado

VERMELHO CONGO ALCALINO


SOLUO ALCALINA.estoque lcool 80% Cloreto de Sdio SOLUO ALCALINA.uso Soluo alcalina estoque Hidrxido de Sdio 1% 500 ml 20 g

50 ml 0,5 ml

SOLUO ALCALINA/VERMELHO CONGO.estoque lcool 80% 500 ml Cloreto de Sdio 20 g Vermelho Congo 1,25 g SOLUO ALCALINA/VERMELHO CONGO.uso Soluo Alcalina/Vermelho Congo.estoque 50 ml Hidrxido de Sdio 1% 0,5 ml HIDRXIDO DE SDIO 1% gua destilada Hidrxido de Sdio

100 ml 1g

As duas solues estoque duram aproximadamente 30 dias Agitar filtrar sempre antes do uso

13

PROCEDIMENTO 1. Desparafinar, hidratar at a gua destilada 2. Hematoxilina durante 2 minutos 3. Lavar em gua corrente por 5 minutos 4. Lavar em gua destilada e passar em lcool 80% 5. Passar na soluo alcalina por 20 minutos 6. Passar para a soluo alcalina/Vermelho Congo por 60 minutos 7. Desidratar rapidamente em 3 banhos de lcool absoluto, Xilol e montar em resina Resultado: Amilide em rseo Ncleos azul

GIEMSA MTODO MODIFICADO DE WOLBACH


GIEMSA SOLUO ESTOQUE Giemsa p 3g Glicerina PA 198 ml Metanol 198 ml Dissolver o p de Giemsa em Glicerina na estufa a 60 C por 2 horas e acrescentar o metanol aps a retirada da estufa. PROCEDIMENTO 1. Desparafinar e hidratar 2. Corar na soluo corante de Giemsa diluda: 10 ml de soluo estoque em 90 ml de gua destilada, corar nesta soluo por 1 hora. Preparar para a diferenciao: uma cubeta plstica com gua destilada e trs gotas de cido Actico Glacial, uma cubeta plstica com lcool absoluto e trs gotas de cido Actico, uma cubeta com lcool absoluto e duas com Xilol. 3. Mergulhar uma vez na cubeta contendo gua acidulada 4. Mergulhar uma vez na cubeta contendo lcool acidulado 5. Controlar no microscpio e se for necessrio repetir os passos 3 e 4 6. Mergulhar na cubeta de lcool absoluto at a lmina esteja limpa 7. Mergulhar na seqncia xilol e montar em resina RESULTADO Ncleos azul Citoplasma rosa Bactrias azul

14

ESCARLATE R. MTODO DE HERXHEIMER


Soluo corante de ESCARLATE Acetona 50 ml lcool 70% 50 ml Escarlate R 0,3 g Agitar e filtrar antes do uso, recuperar aps o uso. De tempo em tempo, adicionar pequena quantidade de acetona/lcool 70% na soluo de Escarlate R para evitar a formao de precipitado. PROCEDIMENTO: 1. Cortar em congelao cortes com 15 a 20 micra 2. Colher os cortes em gua destilada 3. Passar em lcool 50%, 2 a 5 minutos 4. Passar os cortes diretamente para o corante de Escarlate R 5. Diferenciar em lcool 70% rapidamente 6. Passar em gua destilada 7. Corar os ncleos pela Hematoxilina Harris 8. Passar os cortes novamente para a gua destilada 9. Colher os cortes em lminas, em uma vasilha com gua 10. Montar com Gelatina/Glicerina RESULTADO Ncleos azul Lpides vermelho vivo

PAS--CIDO PERIDICO + REATIVO DE SCHIFF


SOLUO CORANTE: REATIVO DE SCHIFF Aquecer 200 ml de gua destilada em um erlenmeyer de 500 ml at a ebulio. Adicionar 1 g de Fucsina Bsica (MERCK, granulada) cuidadosamente adicionando pouco a pouco, evitando a reao trmica, deixar abaixar a temperatura em 60 C aproximadamente e filtrar AGITANDO SEMPRE at que a temperatura abaixe do ambiente. Adicione 20 ml de cido Clordrico 1N * gua destilada. 92 ml cido Clordrico. 8 ml Adicione tambm 1 g de Metabissulfito de Sdio Continuar agitando por mais 3 horas e deixar em repouso durante a noite. Adicionar 1 g de carvo ativado. Agite por 1 hora, filtre o corante e estoque em geladeira. SOLUO DE CIDO PERIDICO 0,5% Cristais de cido Peridico 0,5 g gua destilada 100 ml

15

PROCEDIMENTO 1. Desparafinar e hidratar 2. Oxidar em cido Peridico 0,5% por 15 minutos 3. Lavar em gua corrente por 5 minutos e enxaguar na gua destilada por 3 vezes 4. Corar em Reativo de Schiff por 30 minutos 5. Lavar em gua corrente por 5 minutos 6. Contra corar pela Hematoxilina de Harris por 5 segundos 7. Lavar em gua corrente por 5 minutos 8. Desidratar, diafanizar e montar em resina RESULTADO Glicognio, mucina, membrana basal, fungos - vermelho Ncleos azul

RETICULINA MTODO DE GOMORI


Fixao: formol a 10% Tcnica: Parafina, cortes em 6-8 m Soluo de Prata Amoniacal: estvel por 2 semanas Diluir em 10 ml de gua destilada 1 g de Nitrato de Prata, Diluir em 10 ml de gua destilada 1g de Hidrxido de Potssio Aos 10 ml de Nitrato de Prata a 10% juntar 2,5 ml de Hidrxido de Potssio a 10% em um erlenmeyer e nesta mistura precipitada adicionar 26 a 28 gotas de hidrxido de Amnio, agitando sempre quando for gotejando o Hidrxido de Amnio at que o precipitado desaparea quase completamente, restando alguns grnulos no fundo do erlenmeyer (se desejar dobre o volume com gua destilada, de acordo com a tcnica original) Trabalhe com a vidraria muito limpa e livre de cido Soluo de Permanganato de Potssio Permanganato de Potssio.........0,5 g gua destilada............................100 ml Soluo de Metabissulfito de Potssio Metabissulfito de Potssio...........2,0 g gua destilada............................100 ml Soluo de Formol Formaldedo...............................20,0 ml gua destilada...........................80,0 ml

16

Soluo de Sulfato de Amnio Frrico (Almen de Ferro) Sulfato de Amnio Frrico...........2,0 g gua destilada............................100 ml Soluo de Cloreto de Ouro Soluo de Cloreto de Ouro a 1%..........20,0 ml gua destilada..........................................80,0 ml Soluo de tiossulfato de Sdio Tiossulfato de Sdio....................2,0 g gua destilada...........................100 ml PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar 2. Oxidar em Permanganato de Potssio 0,5% por 5 minutos 3. Lavar em gua corrente por 2 minutos 4. Diferenciar em Metabissulfito de Potssio 2% por 5 minutos 5. Lavar em gua corrente por 2 minutos 6. Sensibilizar em Sulfato de Amnio Frrico 2% por 5 minutos 7. Lavar em gua corrente por 5 minutos e passar em gua destilada 3 vezes 8. Impregnar na soluo de Prata Amoniacal (filtrando a soluo sobre a lmina) por 30 segundos despreze a soluo utilizada 9. Lavar em gua destilada rapidamente 10. Reduzir em Formol 20% por 3 minutos 11. Lavar em gua corrente por 5 minutos 12. Passar em Cloreto de Ouro 0,2% por 10 minutos 13. Lavar em gua destilada por 3 trocas 14. Passar em Metabissulfito de Potssio por 5 minutos 15. Lavar em gua destilada 3 trocas 16. Passar em tiossulfato de Sdio 2% por 5 minutos 17. Lavar em gua corrente por 2 minutos 18. Corar pela Hematoxilina de Harris por 5 segundos 19. Desidratar, diafanizar e montar RESULTADO: Fibras reticulnicas - preto

MTODO DE VON KOSSA PARA CLCIO


FIXAO: Formol 10% ou preferencialmente em lcool, Cortes 6 m Soluo de NITRATO DE PRATA 5% Nitrato de Prata......................5 g gua destilada.................100 ml Soluo TIOSULFATO DE SDIO 5% tiossulfato de Sdio...............5 g gua destilada.................100 ml

17

Soluo de SAFRANINA Safranina...............................0,1 g cido Actico Glacial............1 ml gua destilada.....................99 ml PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar, hidratar 2. Passar por 3 vezes em gua destilada 3. Gotejar sobre o corte na lmina o Nitrato de Prata e submeta a luz solar por 30 minutos a 1 hora ou luz ultra violeta ou ainda a uma lmpada de 100 watts 4. Enxaguar em gua destilada 5. Passar em tiossulfato de Sdio 5% 6. Lavar em gua destilada por 3 vezes 7. Contra corar os ncleos pela Safranina por 5 minutos 8. Desidratar, diafanizar e montar RESULTADO: Ncleo vermelho Citoplasma rosa Clcio preto

GRAM HISTOLOGICO - MTODO DE MACALLUM GOODPASTURE


Soluo de GOODPASTURE Fucsina Bsica.................0,59 g Anilina...............................1,00 ml lcool 30%...................100,00 ml Fenol.................................1,00 ml Soluo de STIRLING

Violeta de Genciana..........5,00 g Anilina................................2,00 ml lcool absoluto......................10,00 ml gua destilada......................88,00 ml Soluo Saturada de CIDO PCRICO cido Pcrico..............................1,18 g gua destilada......................100,00 ml Soluo de IODO PARA GRAM Iodo..................................1,00 g Iodeto de Potssio.........2,00 g gua destilada.........300,00 ml PREPARAR: Dissolver em 3 ml de gua destilada o IODO e em seguida dissolver na mesma soluo o IODETO DE POTSSIO, sem acrescentar mais gua, aps completar acrescente os 297 ml de gua restantes.

18

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar hidratar 2. Corar com GOODPARTURE por 10 minutos (agitar e filtrar sobre a lmina) 3. Lavar em gua destilada 4. Diferenciar em FORMALINA PA pura por 3 minutos 5. Lavar em gua destilada 6. Corar o fundo com soluo de CIDO PCRICO por 3 a 5 minutos 7. Lavar em gua destilada 8. Diferenciar em lcool 95% por 30 segundos 9. Lavar em gua destilada 10. Corar no STIRLING por 3 minutos (filtrar sobre a lmina no instante do uso) 11. Lavar em gua destilada 12. Corar na soluo de IODO/IODETO DE POTSSIO por 1 minuto 13. Enxugar as lminas em papel filtro por compresso, mas deixando um pouco mida 14. Mergulhar as lminas em uma mistura de partes iguais de XILOL E ANILINA com vrias trocas 15. Xilol com 2 trocas 16. Montar em resina NO REUTILIZE O XILOL DESTA EM OUTRA COLORAO A MISTURA DO XILOL/ANILINA MUITO TXICA RESULTADO: Bactrias Gram-positivas azul Bactrias Gram-negativas vermelho Outros elementos vermelho para prpura

MUCICARMIM
Soluo Corante de MUCICARMIM Carmim........................................1,0 g Cloreto de Alumnio Anidro........0,5 g gua destilada..........................2,0 ml Misturar em um pequeno frasco de vidro os componentes listados e aquecer em uma fonte eltrica por 2 minutos. O lquido vai ficando vermelho escuro e consistncia de xarope. Diluir o contedo do frasco em 100 ml de lcool 50% e repousar por 24 horas. Para o uso filtre em uma proveta um volume e acrescente 5 volumes de gua destilada. PROCEDIMENTO 1. Desparafinar e hidratar 2. Core pela Hematoxilina de Harris por 30 segundos 3. Lavar em gua corrente por 5 minutos 4. Corar pelo corante MUCICARMIM por 30 minutos 5. Desidratar diretamente, diafanizar e montar

19

RESULTADO:

Ncleos - azul Mucinas - rseo para vermelho Outros elementos - amarelo

CRISTAL VIOLETA
Fixao: Formalina a 10% Cortes em parafina: 4 a 6 m SOLUES: Cristal Violeta soluo estoque Cristal Violeta.................................14,0 g lcool etlico a 95%....................100,0 ml Cristal Violeta soluo funcionante Soluo estoque de Cristal Violeta.......10,0 ml gua destilada.......................................300,0 ml cido Clordrico concentrado...................1,0 ml Meio de Montagem Gelatina.................................10,0 g gua destilada...........................60,0 ml Aquecer at a gelatina dissolver e adicionar: Fenol.............................................1,0 ml PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar at a gua destilada 2. Corar na soluo funcionante de Cristal Violeta 5 horas 3. Lavar em gua corrente por 15 minutos 4. Montar as lminas com o meio de montagem ou se preferir deve secar as lminas no ar 5. Quando desejar examinar coloque uma gota de gua destilada e recubra com uma laminula RESULTADO: Amilide - violeta prpura Outros elementos - azul

MTODO DE WARTHIN PARA ESPIROQUETAS


Fixao: Formalina 10% tamponada Cortes em parafina de 6 m SOLUES TAMPO 1-gua Tamponada pH 3,6 Acetato de Sdio..............16,4 g gua destilada...............1000,0 ml

20

2-cido Actico Glacial 11,8% gua destilada..................100,0 ml cido Actico Glacial.........11,8 ml

Preparar a soluo tamponada pH 3,6 misture: Soluo-1..............3,0 ml Soluo-2............37,0 ml gua destilada.960,0 ml 3-Nitrato de Prata 1% Nitrato de Prata...............1,0 g gua destilada...........100,0 ml A- Hidroquinona 3% Hidroquinona....................0,3 g gua Tamponada.........10,0 ml B- Gelatina 5% Gelatina neutra.............5,0 g gua destilada........100,0 ml C- Nitrato de Prata 2% Nitrato de Prata...........0,5 g gua destilada.........25,0 ml *Preparar todas as solues, manter somente a soluo de Nitrato de Prata na estufa 60-65 C e misturar as solues na ordem: Soluo Hidroquinona (A).............4 ml Soluo Gelatina (B)....................60 ml Soluo de Nitrato de Prata (C)..12 ml PROCEDIMENTO 1. Desparafinar hidratar at a gua destilada 2. Impregnar na soluo de Nitrato de Prata a 1% (preparada em gua tamponada) na estufa a 60 C por uma hora 3. Lavar rapidamente em gua bi-destilada ou deionizada 4. Revelar na soluo Hidroquinona/Gelatina/Nitrato de Prata (ABC) at ficar castanho dourado, de 3 a 4 minutos 5. Lavar em gua tamponada por 3 minutos 6. Desidratar, diafanizar e montar RESULTADO: Espiroquetas - negras Fundo - castanho amarelado

SUDO NEGRO PARA GORDURAS


Cortes de congelao ou em parafina

21

Preparar em uma cubeta com lcool 70% soluo saturada de SUDO NEGRO A tcnica prpria para cortes de congelao, se preferir fazer em lminas com cortes de parafina no ter o mesmo resultado. PROCEDIMENTO 1. Cortes de congelao em gua destilada 2. Colocar em lcool 50% por 2 minutos 3. Corar pelo SUDO NEGRO por 30 minutos (filtrar no uso) 4. Passar em lcool 50% por 2 minutos para diferenciar 5. Colocar em gua destilada 6. Pescar em lminas 7. Montar em glicerina/gelatina = TCNICA 18 RESULTADO: Lpides em preto

PIGMENTO DE FORMOL EM CORTES HISTOLGICOS (REMOO)


SOLUO DE LCOOL AMONIACAL Amnia PA...........................1,0 ml lcool 75%.......................200,0 ml PROCEDIMENTO 1. Desparafinar e lavar em gua corrente 2. Submeter a soluo de LCOOL AMONIACAL durante 30 minutos 3. Lavar por 10 minutos 4. Seguir a colorao ou reao...

TCNICA DE FONTANA-MASSON PARA MELANINA


SOLUO DE PRATA AMONIACAL Dissolver 10 g de Nitrato de Prata em 100 ml de gua destilada Separar 95 ml desta soluo e nesta adicionar o Hidrxido de amnio em gotas, tornando a princpio a soluo precipitada. Com a adio do Hidrxido de Amnio o precipitado dissolve-se Se a soluo ficou clara utilize os 5 ml de Nitrato de Prata 10% para torna-la opalescente Deixe em repouso por uma noite Da soluo pronta para o uso, utilize 25 ml e acrescente 75 ml de gua destilada e filtre SOLUO CORANTE DE SAFRANINA Safranina...................................0,1 g gua destilada....................100,0 ml cido Actico Glacial.............1,0 ml SOLUO DE CLORETO DE OURO 0,2% Soluo estoque de Cloreto de Ouro 1%...10,0 ml gua destilada...............................................40,0 ml

22

SOLUO DE TIOSSULFATO DE SDIO 5% Tiossulfato de Sdio..................5,0 g gua destilada.....................100,0 ml PROCEDIMENTO 1. Desparafinar e hidratar at a gua destilada 2. Impregnar na soluo de Nitrato de Prata/Amoniacal filtrada para o uso, e por na estufa a 56 C por uma hora. Os cortes tornam-se marrom claro 3. Enxaguar em gua destilada 4. Submeter em Cloreto de Ouro 0,2% por 10 minutos 5. Enxaguar em gua destilada 3 vezes 6. Reduzir em Tiossulfato de Sdio 5% por 5 minutos 7. Enxaguar em gua destilada 3 vezes 8. Corar os ncleos pela soluo Corante de Safranina por 5 minutos 9. Enxaguar em gua destilada por 2 vezes 10. Desidratar, diafanizar e montar RESULTADO: Ncleos rosa Grnulos argentafins - preto

SOLUO SULFOCRMICA
Bicromato de Potssio....................60,0 g gua destilada..............................200,0 ml cido Sulfrico..............................200,0 ml Dissolver o Bicromato de Potssio em gua destilada e acrescentar aos poucos o cido Sulfrico, utilize o frasco prprio para suportar o calor da reao do cido com a gua, a soluo deve precipitar e nesta fase acrescente um pouco de gua destilada para que o precipitado desaparea mas fique no limite UTILIZAR ERLENMEYER COM NO MNIMO O TRIPLO DO VOLUME A SER PREPARADO Vidrarias devem ser submetidas a soluo Sulfocromica por no mnimo 20 minutos

IMUNOFLUORESCNCIA DIRETA

Os conjugados de Fluorescncia so obtidos comercialmente de diversas marcas e nossa experincia: Behring e Dako. As reaes desenvolvidas neste servio so: IgA, IgG, IgM, C3c, C1q, Kappa, Lambda e Fibrinognio. 1. Aps a reconstituio com gua destilada, dividir em alquotas de 50 ml e conserva-las em freezer a -20 C. 2. Preparar a soluo de PBS Cloreto de Sdio.......................8,0 g Cloreto de Potssio................0,81 g Fosfato de Sdio(Na2HPO4)..........1,15 g se Na2HPO4 12H2O: 2,42 g Fosfato de Potssio(KH2PO4).......0,20 g Dissolver em 1000 ml de gua destilada e medir o pH 3. Preparar a soluo Azul de Evans / PBS Azul de Evans......................0,01 g

23

Soluo de PBS.................100 ml 4. Rediluir a soluo de Azul de Evans/PBS Soluo Azul de Evans/PBS...........10 ml Soluo PBS.....................................90 ml Filtrar esta soluo 5. Separar das alquotas uma amostra de cada para uso e acrescentar aos 50 l mais 1 ml de soluo de Azul de Evans/PBS rediluido(4) e conserv-las em geladeira a +4 C 6. As bipsias so includas em Tissue- TeK, congeladas em Nitrognio Lquido e cortadas em criostato a -24 C. 7. Os cortes colhidos em lminas silanizadas e secos ao ar so acomodadas em uma cuba e imersas em PBS por 15 minutos. 8. Colocar o conjugado rediluido: IgA-IgM-IgG-C3c-C1q-Kappa-LambdaFibrinognio em centrfuga e centrifugar por 15 minutos com 9000 RPM (na hora do uso). 9. Incubar em cmara mida por 30 minutos a temperatura ambiente 10. Lavar cuidadosamente os cortes, escorrendo sobre eles a soluo de PBS . 11. Mergulhar na soluo de PBS por 10 minutos e repetir mais 10 minutos com nova soluo. 12. Montar com lamnula sob soluo PBS/glicerina na proporo 1/2

TCNICA DE GRIMELIUS PARA GRNULOS DE NEUROSECREO


Soluo A (impregnadora) 150 ml de gua destilada 2 ml de Nitrato de Prata a 2% A gua deve ser aquecida at a ebulio e separando 50 ml desta gua adicionar 2 ml da soluo de Nitrato de Prata a 2% e aguardar a temperatura abaixar a 60 C Soluo B (reveladora) 100 ml de gua destilada 5 g de Sulfito de Sdio 1 g de Hidroquinona Aquecer os 100 ml de gua destilada at a ebulio e adicionar os sais (Sulfito de Sdio e Hidroquinona) e aguardar a temperatura abaixar at 60 C Corante Nuclear: SAFRANINA Safranina....................0,1 g gua destilada...........99 ml cido Actico...............1 ml PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar 2. Lavar em gua destilada exaustivamente 3. Submeter na soluo A por 3 minutos a 65 C 4. Lavar em gua destilada a 65 C 5. Submeter na soluo B por 1 minuto 6. Lavar em gua destilada a 65 C

24

7. Repetir na soluo A por 1 minuto a 65 C 8. Lavar em gua destilada a 65 C 9. Repetir na soluo B por 1 minuto 10. Lavar em gua destilada a 65 C 11. Lavar em gua destilada em temperatura ambiente 12. Corar os ncleos pela Safranina por 1 minuto 13. Desidratar, diafanizar e montar com resina RESULTADO: grnulos argentafins impregnados (amarelo/marrom/negro) ncleos em vermelho

AZUL DE TOLUIDINA
Fixao: Formalina a 10% Cortes em parafina de 6 m AZUL DE TOLUIDINA Azul de Toluidina.....................0,1 g gua destilada......................100 ml PROCEDIMENTO: 1. Desparainar e hidratar, aps gua destilada 2. Corar pelo Azul de Toluidina por 30 minutos 3. Enxaguar em gua destilada 4. Cubra o corte com laminula sobre uma gota de gua destilada 5. Moldure a laminula com cera aquecida Recomendamos usar uma lmina controle com um corte de cordo umbilical RESULTADO: Substncia metacromtica em rseo

PERLS PARA HEMOSSIDERINA


Fixao: Formalina a 10 % Cortes em parafina de 5 m Solues: A- Soluo FERROCIANETO DE POTSSIO Ferrocianeto de Potssio......................2,5 g gua destilada........................................25 ml B- Soluo CIDO CLORDRICO cido clordrico..................................5 ml gua destilada.................................20 ml Misturar a soluo A e B em partes iguais (25 + 25) sempre no instante do uso Soluo corante de SAFRANINA Safranina.............................0,1 g gua destilada...................99 ml cido Actico Glacial..........1 ml

25

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar 2. Passar em gua destilada 3. Submeter a soluo Cloridrco-Ferrocianeto por 1 hora 4. Enxaguar em gua destilada por 3 vezes 5. Contracorar pela Safranina por 2 minutos 6. Passar em gua para diferenciar (controle ao microscpio) 7. Desidratar, diafanizar e montar RESULTADO: Pigmento Frrico azul Ncleos vermelho

Luxol-fast-blue Nissl (Klver-Barrera) para mielina e neurnios.


Fixao Formol 10%. Solues : Luxol-fast-blue 0,1% Luxol-fast-blue MBS 0,1 g. Etanol 95% 100 ml. Dissolver o corante no lcool. Acrescentar 0,5 ml de cido actico 10% por 100 ml de soluo. A soluo estvel por meses. Cresil violeta 0,1%. Cresil violeta 0,1 g. gua destilada 100 ml. Imediatamente antes do uso, adicionar 15 gotas de cido actico a 10%. Filtrar antes do uso. Carbonato de ltio 0,05 %. Carbonato de ltio 0,05 g. gua destilada 100 ml. Procedimento. Cortes de parafina, preferivelmente entre 15 a 20 micrmetros. Desparafinar, chegar ao lcool 95 %. Corar pela soluo de luxol fast blue durante a noite em estufa a 56%. (Usar recipiente bem vedado para no evaporar; exemplo - tubete para lminas com rosca). Retirar excesso de corante com lcool 95 %. Enxaguar em gua destilada.

26

Diferenciar lminas uma a uma na soluo de carbonato de ltio, cerca de 30 segundos o excesso de corante comea a sair. Continuar a diferenciao em lcool 70% e ir agitando gentilmente at que a diferena entre substncia branca e cinzenta fique ntida. Repetir a seqncia do carbonato de ltio e lcool 70% (se necessrio) at que a substncia cinzenta esteja bem clara (aconselha-se acompanhamento ao microscpio). Terminada a diferenciao coletar todas lminas em gua destilada. Corar por soluo de cresil violeta 6 min. Pode-se tambm usar HE, s hematoxilina ou PAS como contracoloraes. Desidratar rapidamente em etanol 95 e absoluto. Obs. Desidratao prolongada pode prejudicar a colorao dos neurnios por cresil violeta. Xilol. Montagem em Entellan. Resultados : mielina azul turquesa; neurnios azul violeta.

AgNOR

TCNICA de PLOTON et al, 1986, modificada por Trevisan, M, comun. pessoal 1996). SOLUO A: 2g de gelatina dissolvida em 100 ml de gua destilada pr aquecida. Adicionar 1g de cido frmico. SOLUO B: nitrato de prata a 50% MODO DE PREPARO 1. Misturar na hora do uso 1 volume de soluo A com 2 volumes de soluo B. Colocar diretamente sobre o esfregao. Deixar por trinta minutos, no escuro e temperatura ambiente. 2. Lavar em gua destilada. 3. Colocar em metabissulfito de sdio a 1% por 1 a 3 minutos. 4. Lavar em gua destilada. 5. Colocar tiossulfato de sdio a 2% por 1 a 3 minutos. 6. Lavar com gua destilada. 7. Seguir o procedimento habitual de montagem com resina sinttica. RESULTADOS: nuclolos em negro

DESCALCIFICADORES

ANTES DE DESCALCIFICAR QUALQUER TECIDO SSEO SO NECESSRIOS DOIS PASSOS - ESTAR FIXADO ADEQUADAMENTE E SERRADO NA ESPESSURA DE NO MXIMO 5 mm. APS DESCALCIFICADO REDUZIR A 3 mm CIDO NTRICO 7% gua destilada.................930 ml cido Ntrico.......................70 ml IMPORTANTE: deitar o cido sobre o volume total de gua e nunca o contrrio CIDO FRMICO - CITRATO DE SDIO Soluo A

27

gua destilada...................250 ml Citrato de Sdio....................50 g Soluo B gua destilada.........................125 ml cido Frmico puro.................125 ml No instante do uso juntar partes iguais da soluo A e B Este descalcificador preserva bem a morfologia do tecido embora seja muito lento. recomendado para fragmentos pequenos DESCALCIFICADOR USADO NO DEP. DE ANATOMIA PATOLGICA DO HOSPITAL GERAL DE MASSACHUSETTS E NO L.A.P. UNICAMP EDTA, Tetrasdio.............................7 g Tartarato de Sdio e Potssio......80 g Tartarato de Sdio.................1,4 g cido Clordrico.................1200 ml gua destilada...................9000 ml 1. A escolha das marcas das drogas deste descalcificador tem que ser criteriosa na qualificao 2. Todo tecido tem que estar fixado e recortado no tamanho correto, preferencialmente fixado durante a noite. 3. Submeter o tecido ao descalcificador no mximo 8 horas. Conforme o tamanho e concentrao de clcio no fragmento o tempo pode variar de 2 a 8 horas. Se necessrio mais tempo, nunca deixe o fragmento no descalcificador durante a noite. Repita a operao durante o dia. 4. Teste os fragmentos com um alfinete ou uma lmina de bisturi, se ao penetrar no tecido ranger revelando textura vtrea continue o processo 5. Concludo o processo de descalcificao lave em gua corrente por uma hora, no deixe lavando durante a noite, conserve em lcool 70%

FIXADORES E ESPECIFICAES
1-FORMALINA TAMPONADA (bipsia de todos rgos) Formol gua destilada Fosfato de Sdio Monobsico Fosfato de Sdio Dibsico
Este fixador de uso geral

100 ml 900 ml 4g 6,5 g

2-BOUIN (bipsia de testculo e rim) Soluo saturada de cido Pcrico aquoso Formol cido Actico Glacial
Fixar de 4 a 6 horas, conservar em lcool 70 % at o processo seguinte.

750 ml 250 ml 50 ml

3-DUBOSQUE-BRASIL (bipsia de rim) Formol cido Actico

120 ml 30 ml

28

cido Pcrico
Fragmento filiforme de rim neste fixador por 1 hora no mximo, a durao do fixador de 15 dias

2g

4-CARNOY (bipsia pequena) lcool absoluto Clorofrmio cido Actico Glacial

60 ml 30 ml 10 ml

Fixador rpido, deixar no mximo por 1 hora e iniciar o processo em lcool absoluto por 30 minutos, dois Xilois com 15 minutos cada e duas passagens de parafina com 15 minutos cada em seguida a incuso.

5-ZENKER (bipsia de medula) gua destilada Cloreto de Mercrio Dicromato de Potssio Sulfato de Sdio

1000 ml 50 g 25 g 10 g

Adicionar 5 ml de cido Actico Glacial para 95 ml da soluo de Zenker na hora do uso, nele permanece por 24 horas e lavar por 3 a 6 horas em gua corrente

FERRO COLOIDAL DE MOWRY


Fixao; formol neutro a 10% Cortes em parafina; 6 m 1-Soluo Cloreto Frrico a 29% 2-Soluo FERRO COLOIDAL DE MULLER estoque gua destilada Levar at a ebulio e adicionar a Soluo de Cloreto Frrico 29% 3-Soluo de trabalho FERRO COLOIDAL DE MULLER Soluo estoque de FERRO COLOIDAL DE MULLER gua destilada cido Actico Glacial 4-Soluo aquosa de cido Actico Glacial 12% 5-Soluo aquosa de cido Clordrico 5% 6-Soluo aquosa de Ferrocianeto de Potssio 5% 7-Soluo de trabalho Ferrocianeto de Potssio 5%/cido Clordrico 5% Ferrocianeto de Potssio a 5% 40 ml cido Clordrico a 5% 8-Corante de Van Gieson ou Fast Red PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar at a gua destilada 2. Por durante 3 minutos em soluo de cido Actico Glacial 12% 3. Submeter em soluo trabalho de Muller por 1 hora (3) 4. Enxaguar em soluo aquosa de cido Actico Glacial 12% em 4 etapas, durante 3 minutos cada. 5. Submeter as lminas pela soluo de trabalho de Ferrocianeto de Potssio/cido Clordrico por 20 minutos 40 ml 4,4 ml 20 ml 15 ml 5 ml 250 ml

29

6. Lavar em gua corrente por 5 minutos 7. Enxaguar em gua destilada 8. OPCIONAL - Contracorar com soluo corante de Van Gieson por 5 a 7 minutos ou soluo corante de Vermelho Rpido por 5 minutos 9. Desidratar e diafanizar 10. Montar com resina RESULTADOS: Mucopolisacardeo cido - Azul

BIPSIAS DE MEDULA OSSEA


Para bipsias de medula ossea de agulha em adulto utilizar o fixador de ZENKER, e para bisia de medula ossea de agulha em criana utilizar o formol 10% e aps a fixao do fragmento descalcifique em cido Frmico 30% por 18 a 24 horas. PROCESSO Medula ossea (bipsia de agulha) em ZENKER por 18 a 24 horas Lavar em gua corrente por 4 a 6 horas Se houver impedimento para prosseguir com o processo, coloque a medula ossea em cpsula e mergulhe em Alcool 80% Segue:

1-Alcool 90% 2-Alcool absoluto 3-Alcool absoluto 4-Alcool absoluto 5-Xilol 6-Xilol 7-Parafina a 62C 8-Parafina a 62C 9-INCLUSO

15 30 30 30 30 30 30 30

minutos minutos minutos minutos minutos minutos minutos minutos

MICROSCOPIA ELETRNICA Soluo de Karnovsky


Paraformaldedo 2 g. gua distilada 20 ml. Aquecer a 60 C e juntar gotas de NaOH 1 N at dissolver. Esfriar. Glutaraldedo a 50% - 12 ml Cacodilato de sdio 8,56 g. gua distilada 200 ml. Acertar pH para 7.2. Usar 70 ml. Resultado final: Paraformaldedo a 1 % Glutaraldedo a 3% em Tampo Cacodilato 0,07 M

30

Tetrxido de smio (OsO4)


Dissolver 1 g em 50 ml de gua distilada. Quebrar ampola de OsO4 em um vidro mbar, com a gua e deixar durante a noite (dissoluo muito lenta) Ampolar alquotas de 1 ml (para evitar inalao de vapores, substncia txica) Para usar misturar 1 : 1 com tampo cacodilato 0,07 M, pH 7,2. Fragmentos ficam 2 hs. no fixador.

Acetato de Uranila (Corante em bloco)


Acetato de Uranila - 0,5 g. Sacarose - 9,9 g. gua distilada 100 ml. Aps o smio, deixar uma noite na geladeira nesta soluo. Da passa desidratao e incluso.

Desidratao
Em sries crescentes de acetona ou etanol xido de propileno (As resinas so solveis em acetona mas no em etanol. xido de propileno faz a transio para permitir infiltrao pela resina). Acetona 30% - 30 min. Acetona 50% - 15 min. Acetona 70% - 15 min. Acetona 90% - 15 min. Acetona 100% - 15 min. Acetona 100% - 15 min. Acetona / resina (1:1) no rotor - 2 hs. Resina na estufa a 37 C - 1 h. Incluso em resina Araldite.

Corante para cortes grossos (1 )


Azul de toluidina 1 g. Brax - 1 g. gua distilada - 100 ml. Filtrar. Corar em chapa quente. Aquecer at levantar vapor, sem deixar secar. Lavar em gua corrente. Observar sem lamnula (gota de leo de imerso opcional) Secar e guardar.

Contrastante para cortes ultrafinos (0,1 ) - Citrato de chumbo de Reynolds (1963)

31

Nitrato de chumbo 2,66 g Citrato de sdio 3,52 g gua distilada 60 ml. Dissolver em balo de vidro agitando forte por 1 min, lentamente por 30 min, at desaparecerem os grnulos finos. Adicionar 16 ml de NaOH 1 N (1 g de NaOH em 25 ml de gua distilada e previamente fervida para eliminar todo CO2). Soluo torna-se transparente Completar para 100 ml. Filtrar com filtro millipore antes do uso.

Shorr para esfregaos ( CITOLOGIA)


Mordente cido fosfotngstico: 25g cido fosfomolbdico: 25g. guar destilada: 1500ml

Verde-luz Verde-luz: 1g. gua destilada acetificada: 1000ml (gua + 2ml cido actico) Vermelho shorr Ponceau de xilidina: 1g Orange G: 1g. Fucsina cida: 0,5 g. gua destilada acetificada: 1500ml (gua + 3ml cido actico) Hematoxilina usar hematoxilina de Harris sem cido actico. Tcnica: HE 1 lavar 2 Hematoxilina: 5 minutos 3 lavar 4 Vermelho: 2 minutos 5 lavar 6 Mordente: 6 minutos. 7 lavar 8 Verd-luz: 1 minuto. 9 - lcool (3) 10 xilou : montar.

32