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AVALIAO DO ESTRESSE OXIDATIVO EM FUMANTES: RESULTADOS PARCIAIS Jos Francis de Oliveira (Incluso Social/Fundao Araucria-UEL), Poliana Macedo Guimares

(Incluso Social/Fundao Araucria-UEL), Dcio Sabbatini Barbosa (Orientador) email: sabatini@sercomtel.com.br. Universidade Estadual de Londrina/CCS/PAC Londrina - Paran Palavras-chave: tabagismo, estresse oxidativo. Resumo O hbito de fumar responsvel pelo desenvolvimento de vrias condies patolgicas, constituindo um problema de sade pblica mundial. Este trabalho avaliou o estresse oxidativo em homens e mulheres fumantes e nossos resultados mostraram que mulheres exibiram maior nvel de xido ntrico (NO) e menor nvel de defesas antioxidantes. Em funo de que o NO pode apresentar tanto caractersticas pr como antioxidantes, consideramos que este NO em nvel de endotlio pode ser protetor, mas em nvel sistmico pode ser prejudicial. Introduo O tabagismo atinge cerca de 1,3 bilhes de pessoas no mundo, metade das quais devero morrer por doenas associados ao cigarro. Apesar do grande nmero de evidncias ligando o tabagismo aterosclerose e suas conseqncias, como doenas cardiovasculares e pulmonares, os mecanismos e os componentes qumicos do cigarro responsveis por esta relao ainda no so totalmente conhecidos[1]. O estresse oxidativo (EO) o desequilbrio entre a gerao de compostos oxidantes, que exercem importantes funes de sinalizao celular, e os mecanismos protetores antioxidantes. Este desequilbrio pode resultar da diminuio de antioxidantes (dieta pobre em vitaminas, mutaes enzimticas), ou do aumento da produo de oxidantes (fumo, processos inflamatrios), representados principalmente pelas espcies reativas de oxignio (EROs) e nitrognio (ERNs) [2]. O xido ntrico um conhecido regulador do tnus vascular, alm de exercer outras funes no organismo. Alm de colaborar para a iniciao e a progresso da aterosclerose, o EO relacionado ao tabagismo tambm foi identificado como causador de disfuno endotelial decorrente de seus efeitos negativos sobre a biodisponibilidade de xido ntrico (NO) no endotlio[3].

Materiais e Mtodos Foram convidados indivduos fumantes para participar do estudo, que assinaram o consentimento livre e esclarecido para a participao no estudo, totalizando 31 pessoas (21 homens e 10 mulheres). Este estudo prev a avaliao de indivduos no fumantes como grupo controle, porm, como se trata de resultados parciais, essas anlises ainda no foram realizadas completamente. Para a realizao das anlises biolgicas para avaliao dos marcadores de estresse oxidativo, foram colhidas amostras de sangue venoso (colhido em tubos com o anticoagulante EDTA) dos participantes do estudo, e foi utilizado o plasma. A capacidade antioxidante total plasmtica (TRAP) foi avaliada por quimiluminescncia (QL) em uma adaptao do mtodo da tcnica descrita por Repetto et al. [4]. Esta metodologia detecta antioxidantes hidro e/ou lipossolveis presentes no plasma. Os nveis de xido ntrico foram avaliados indiretamente atravs da determinao da concentrao de nitritos plasmticos, utilizando uma adaptao da tcnica descrita por Navarro-Gonzalez et al [5], onde so utilizados grnulos de cdmio para a reduo dos nitratos a nitritos, sendo estes quantificados pela reao colorimtrica de Griess. Foram determinados tambm produtos proticos de oxidao avanada pela tcnica de AOPP [6], os quais refletem o grau de dano celular causado pelo estresse oxidativo. As anlises estatsticas foram realizadas utilizando-se o software GraphPad InStat, atravs do teste no paramtrico de Mann-Whitney e o nvel de significncia considerado foi o valor de p 0,05. Resultados e Discusso Os Resultados Parciais obtidos so mostrados nos grficos. Valores Plasmticos de NO, TRAP e AOPP
NO
10.0 7.5

TRAP *
mol TROLOX/L
800 700 600 500 400 300 200 100 0 350

AOPP *
mol/L
300 250 200 150 100 50 0

mol/L

5.0 2.5 0.0 Homens Mulheres

Homens

Mulheres

Homens

Mulheres

Concentraes de nitritos (medida indireta do xido ntrico NO), potencial antioxidante total plasmtico TRAP,e produtos proticos de oxidao avanada AOPP. Anlise Estatstica realizada utilizando-se o teste estatstico no-paramtrico de Mann-Whitney. Os valores esto expressos em mediana erro padro. * para p 0,05. Valores de p para os resultados: NO: p = 0,0151; TRAP: p = 0,0348; AOPP: p = 0,0871.

Os nveis plasmticos de xido ntrico foram mais altos em mulheres, comparados aos homens. Usurios de tabaco apresentam inflamao crnica, e processos inflamatrios geram NO tanto em clulas do sistema imune como no endotlio vascular [7]. O estrgeno exerce mltiplos efeitos sobre a biodisponibilidade e produo de NO, no sentido de aumentar a produo deste [8,9]. Estes resultados podem refletir uma aparente proteo por parte das mulheres do grupo estudado, que ainda esto em idade frtil ( X =489,8 anos), em funo da ao deste hormnio em aumentar a vasodilatao dependente do endotlio atravs do aumento de NO[10]. Outro possvel mecanismo envolvido a liberao qumica de NO por xenobiticos presentes no cigarro, que agem como doadores exgenos de NO quando em contato com fludos biolgicos[11]. Contudo, nossos resultados mostraram que o status antioxidante das mulheres mais baixo que o dos homens, como mostrado no grfico dos resultados da atividade antioxidante total plasmtica (TRAP). Isto provavelmente devido a uma reao qumica que ocorre entre NO e o nion superxido (O 2 .-), gerando peroxinitrito (ONOO-)[1, 2], uma ERO altamente reativa e deletria. A demanda por compostos antioxidantes para a detoxificao de EROs aumenta devido gerao de ONOO-, diminuindo, portanto, o TRAP. Os produtos proticos de oxidao avanada no mostraram diferenas significativas entre homens e mulheres fumantes, porm apresentaram valores maiores nas fumantes. Tal fato pode ser correlacionado com os valores de TRAP reduzido nestas, uma vez que o estresse oxidativo danifica estruturas proticas celulares e, portanto, defesas antioxidantes so consumidas neste processo. Concluses Mulheres fumantes apresentaram nveis de xido ntrico maiores do que homens fumantes. Em nvel de defesas antioxidantes, as tabagistas mostraram-se menos protegidas. Para um entendimento maior dos efeitos benficos ou no do NO em fumantes, ser necessrio a conduo de novos estudos. Agradecimentos A toda a equipe do Laboratrio de Ps-Graduao em Anlises Clnicas, que zelou pela manuteno e limpeza do nosso local de trabalho, e agradecimentos especiais tcnica Denise pela coleta das amostras de sangue, organizao das fichas dos voluntrios e preparo dos reagentes.

Referncias Bibliogrficas 1. 2. 3. Yang, Z., et al., The role of tobacco smoke induced mitochondrial damage in vascular dysfunction and atherosclerosis. Mutat Res, 2007. 621(1-2): p. 61-74. Halliwell, B., ed. Free Radicals in Biology and Medicine. 3 ed. 1999. Barua, R.S., et al., Reactive oxygen species are involved in smokinginduced dysfunction of nitric oxide biosynthesis and upregulation of endothelial nitric oxide synthase: an in vitro demonstration in human coronary artery endothelial cells. Circulation, 2003. 107(18): p. 2342-7. Repetto, M., et al., Oxidative stress in blood of HIV infected patients. Clin Chim Acta, 1996. 255(2): p. 107-17. Navarro-Gonzalvez, J.A., C. Garcia-Benayas, and J. Arenas, Semiautomated measurement of nitrate in biological fluids. Clin Chem, 1998. 44(3): p. 679-81. Witko-Sarsat, V., et al., Advanced oxidation protein products: oxidative stress markers and mediators of inflammation in uremia. Adv Nephrol Necker Hosp, 1998. 28: p. 321-41. Zapolska-Downar, D., et al., Ibuprofen inhibits adhesiveness of monocytes to endothelium and reduces cellular oxidative stress in smokers and non-smokers. Eur J Clin Invest, 2000. 30(11): p. 100210. Chikani, G., W. Zhu, and E.J. Smart, Lipids: potential regulators of nitric oxide generation. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2004. 287(3): p. E386-9. Kan, W.H., et al., p38 MAPK-dependent eNOS upregulation is critical for 17beta-estradiol-mediated cardioprotection following traumahemorrhage. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2008. 294(6): p. H262736. Tostes, R.C., et al., Effects of estrogen on the vascular system. Braz J Med Biol Res, 2003. 36(9): p. 1143-58. Lam, E.W.N., et al., Tobacco Xenobiotics Release Nitric Oxide. Tobacco Induced Diseases, 2003. 1(3): p. 207-211.

4. 5. 6. 7.

8. 9.

10. 11.