EXTRACCION DE ADN

La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol

Objetivos
1. Realizar la extraccin de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composicin 2. A partir de la longitud enorme de las fibras inferir que el ADN se encuentra replegado en el ncleo

Materiales

1 pltano, manzana, tomate, palta, hgado de pollo, huevo u otro alimento de origen animal o vegetal 100 ml de agua destilada 1 vaso pp de 150 ml 9 g de sal 2 ml de detergente lquido al 20% 1 ml de alcohol al 95% fro Solucin ablandadora de carne o cloroformo 1 tubo de ensayos 1 juguera o un mortero Papel filtro Hielo

PROCEDIMIENTO

1.-En una juguera, mezcla un pltano pelado (o el alimento que vayas a utilizar) con 100 ml de agua destilada. Muele slo por 15-20 segundos, hasta que se produzca una mezcla homognea. No muelas ms ya que puedes romper el ADN. Si no tienes juguera muele bien el pltano con un tenedor junto con el agua. 2.-En un vaso pp, prepara una solucin de detergente o shampoo al 20% y agrega 9 g de sal de mesa. Mzclalos suavemente para no producir espuma. Puedes usar champ o

lavalozas de diferentes marcas para comparar la eficiencia de la extraccin al final del experimento.

3.-Agrega a la solucin preparada en el paso 2, tres cucharas soperas bien llenas de la mezcla de pltano (u otra fruta) del paso1. Mezcla la solucin con la cuchara por 5 a 10 minutos sin producir espuma 4.-Filtra la mezcla y deja pasar la solucin durante varios minutos hasta tener aproximadamente 6 ml de filtrado para la prueba. 5.-Coloca los 6 ml del filtrado en un tubo de ensayos limpio 6.-Agrega 1 ml de alcohol muy fro lentamente dejando escurrir por las paredes del tubo 7.-Deja reposar la mezcla por 2-3 minutos sin perturbarla. Es importante no agitar el tubo de ensayo 8.-Observa el precipitado blanco del ADN en la capa de alcohol. El ADN tiene apariencia de una sustancia mucosa blanca y filamentosa 9.-Compara las preparaciones obtenidas a partir de diferentes frutas o verduras. Tienen todas las mismas cantidades de ADN? 10.-.Que habra pasado si antes de agregar la solucin de ADN al alcohol la hubieras agitado fuertemente? Por qu? Qu ha ocurrido? El detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y protenas. ste acta de la misma manera en el protocolo de extraccin de ADN, separando las grasas (lpidos) y las protenas que constituyen las membranas que rodean la clula y el ncleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la clula El calor suaviza los fosfolpidos (grasas) en las membranas que rodean la clula y el ncleo. Tambin desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleasas (ADNasas) las cuales, si estn presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeos que lo hara imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, ste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60 Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80 Celsius. El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solucin, donde puede ser visto. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.