UNIVERSIDADE JOS DO ROSRIO VELLANO

PROPRIEDADE DAS ENZIMAS

BRUNO CARLOS BENTO

Alfenas MG

SUMRIO

1 Introduo.......................................................................................................................3 2 Referencial Terico........................................................................................................4 2.1 Enzimas que atuam no processo digestivo.................................................................4 2.2 Enzimas de diagnstico...............................................................................................5 3 Material e Mtodos.........................................................................................................7 3.1 Especificidade enzimtica...........................................................................................7 3.2 Influncia da concentrao da enzima........................................................................7 3.3 Influncia do pH...........................................................................................................8 4 Resultados e Discusso.................................................................................................9 4.1 Especificidade enzimtica...........................................................................................9 4.2 Influncia da concentrao da enzima......................................................................10 4.3 Influncia do pH.........................................................................................................10 5 Referncias Bibliogrficas............................................................................................12

1 INTRODUO Todas as reaes qumicas que ocorrem no organismo, h a participao das enzimas, protenas catalisadoras que aumentam a velocidade da reao e comandam os eventos metablicos. As enzimas tm grande importncia na formao estrutural, crescimento, defesa e mecanismos de cura do nosso organismo. So fundamentais na regulao das atividades bioqumicas do organismo, como a absoro e digesto de alimentos, sistema imunolgico, equilbrio hormonal, etc. Cada enzima age em seu substrato especfico, sendo esta ao influenciada por vrios fatores, como a temperatura, o pH, concentrao da enzima e do substrato. Este relatrio tem como objetivo, identificar experimentalmente a propriedade de especificidade das enzimas, e manipular reaes catalisadas por enzimas com a finalidade de determinar semiquantitativamente a influncia da concentrao de enzimas, da temperatura e do pH na atividade enzimtica.

2 REFERENCIAL TERICO As enzimas so catalisadores proticos que aumentam a velocidade de uma reao qumica e no so consumidas durante a reao que catalisam (CHAMPE et al. 2009). Ainda segundo Champe et al. (2009) as enzimas so altamente especficas, interagindo com um, ou alguns poucos substratos e catalisando apenas um tipo de reao qumica. 2.1 Enzimas que atuam no processo digestivo Os alimentos crus trazem consigo as enzimas necessrias sua prpria digesto. As enzimas digestivas, presentes na saliva (ptialina), no estmago (proteases), nos intestinos (lpases) e as produzidas pelo pncreas, atuam como reservas ou para complementar o processo digestivo. Assim, o corpo conta com a presena das enzimas digestivas que j vm com os alimentos vegetais e crus (CAMPOS, 2008). No duodeno atua o suco pancretico, produzido pelo pncreas, que contm diversas enzimas digestivas. O suco pancretico, produzido pelo pncreas, contm gua, enzimas e grandes quantidades de bicarbonato de sdio. Sua secreo digestiva responsvel pela hidrlise da maioria das molculas de alimento, como carboidratos, protenas, gorduras e cidos nuclicos (VILELA, [2008]). A amilase pancretica fragmenta o amido em molculas de maltose; a lpase pancretica hidrolisa as molculas de um tipo de gordura os triacilgliceris, originando glicerol e lcool; as nucleases atuam sobre os cidos nuclicos, separando seus nucleotdeos (VILELA, [2008]). Analisando Vilela [2008] o suco pancretico contm ainda o tripsinognio e o quimiotripsinognio, formas inativas em que so secretadas as enzimas proteolticas tripsina e quimiotripsina. A tripsina e a quimiotripsina hidrolisam polipeptdios, transformando-os em oligopeptdeos. A pepsina, a tripsina e a quimiotripsina rompem ligaes peptdicas especficas ao longo das cadeias de aminocidos. A mucosa do intestino delgado secreta o suco entrico, soluo rica em enzimas e de pH aproximadamente neutro. Uma dessas enzimas a enteroquinase. Outras

enzimas so as dissacaridades, que hidrolisam dissacardeos em monossacardeos (sacarase, lactase, maltase). No suco entrico h enzimas que do seqncia hidrlise das protenas: os oligopeptdeos sofrem ao das peptidases, resultando em aminocidos (VILELA, [2008]).

2.2 Enzimas de diagnsticos

Segundo Pivatto (2005) existem mais de 20 enzimas que so tipicamente usadas em laboratrios clnicos para o diagnstico de doena, sendo as principais: fosfatase cida, fosfatase alcalina, TGO, TGP, GGT, amilase, lipase, CK, LDH. Uma vez que essas enzimas so relativamente fceis de medir, inclusive por meio da utilizao de tcnicas automatizadas, elas fazem parte dos exames de sangue de rotina que o mdico pode vir a requisitar. Para que o diagnstico do envolvimento de um rgo especfico seja feito, necessrio conhecer a proporo entre as vrias enzimas, que varia de tecido para tecido, combinado com o estudo da cintica de aparecimento e desaparecimento no plasma. Enzimas no plasma-especficas so depuradas do plasma a velocidades variveis, que dependem da estabilidade da enzima e de sua captao pelo sistema retculo-endotelial (PIVATTO, 2005). As enzimas plasmticas podem ser classificadas em dois grupos principais. Primeiro um grupo relativamente pequeno de enzimas secretado no plasma por certos tipos celulares. Segundo, um grande nmero de enzimas liberado das clulas durante a renovao celular normal. Essas enzimas atuam intracelularmente e no tem funo fisiolgica no plasma. Em indivduos saudveis, o nvel dessas enzimas razoavelmente constante, representa um estado de equilbrio em que a velocidade de liberao dessas enzimas no plasma pelas clulas danificadas equilibrada por uma velocidade igual na remoo dessa protena do plasma. A presena de atividade enzimtica elevada no plasma pode indicar leso tecidual, acompanhada pela liberao aumentada de enzimas intracelulares (CHAMPE, 2009). Muitas doenas que causam leso tecidual resultam no aumento da liberao das enzimas intracelulares no plasma. Assim, a determinao do grau de aumento da

atividade de uma determinada enzima no plasma em geral til para a avaliao do prognstico do paciente, sendo utilizados em diagnsticos de doenas do corao, do fgado, do msculo esqueltico e de outros tecidos(CHAMPE, 2009). Neste contexto, Champe (2009) mostra que a enzima alanina-aminotransferase (ALT) abundante no fgado, sendo que o aparecimento elevado dessa enzima no plasma sinaliza uma possvel leso do tecido heptico. Os nveis plasmticos de creatina-cinase(CK) so comumente determinados para o diagnstico do infarto do miocrdio.

3 MATERIAL E MTODOS 3.1 Especificidade enzimtica As enzimas agem em substrato especfico. Por esta especificidade, podem catalisar um nmero pequeno de reaes ou somente uma reao, o que acontece com a maioria delas. Na determinao da especificidade enzimtica, foram utilizados quatro tubos de ensaio devidamente enumerados de 1 a 4, e uma pipeta volumtrica de 1mL para a aferio das medidas relacionadas, descritos conforme a relao abaixo: No tubo 1, foi colocado utilizando a pipeta, 1mL de invertase e 1mL de sacarose 1%. No tubo 2, foi pipetado 1mL de invertase e 1mL de amido. No tubo 3, foi pipetado 1mL de saliva e 1mL de sacarose 1%. No tubo 4, utilizando novamente a pipeta foi colocado 1mL de saliva e 1mL de amido. Aps o preenchimento dos quatro tubos de ensaio, com as enzimas e seus possveis substratos, ambos os tubos foram deixados em repouso temperatura ambiente por 20 minutos. Passado este tempo, adicionou-se, com o auxlio de uma pipeta graduada de 5mL, 1mL de Reativo de Benedict em cada um dos tubos, e em seguida foram aquecidos em banho-maria. 3.2 Influncia da concentrao da enzima Quando as condies so timas, a velocidade da reao enzimtica diretamente proporcional concentrao da enzima. Na realizao desta tcnica foram utilizados cinco tubos de ensaio devidamente enumerados de 1 a 5, sendo descritos conforme a seguir: No tubo 1, foi pipetado 0,2mL de invertase 1% utilizando uma pipeta graduada de 1mL, acrescentou-se 1Ml de sacarose 1%, utilizando uma pipeta volumtrica de 1mL, e mais 0,8mL de gua destilada, que foi transferida por uma pipeta graduada de 1mL.

No tubo2, foi colocado utilizando-se uma pipeta graduada de 1,0mL, 0,5mL de invertase 1%, 1,0mL de sacarose 1%, com uma pipeta volumtrica de 1,0mL e 0,5ml de gua destilada, utilizando uma pipeta graduada de 1,0mL. No tubo 3, foi colocado 1,0mL de invertase 1% utilizando uma pipeta graduada de 1,0mL, 1,0mL de sacarose 1%, medida em pipeta volumtrica de 1,0mL, e no foi acrescentada gua destilada. No tubo 4, colocou-se 1,0mL de sacarose 1% medida em pipeta volumtrica de 1,0mL e 1,0mL de gua destilada utilizando pipeta graduada de 1,0mL. No tubo 5, foi colocado 1,0mL de invertase 1% utilizando uma pipeta graduada de 1,0mL e 1,0mL de gua destilada medida em pipeta graduada de 1,0mL. Aps este procedimento, foi acrescentado em cada um dos cinco tubos de ensaio, 1,0Ml de Reativo de Benedict, que foi transferido utilizando-se uma pipeta graduada de 5,0mL. Feito isto os cinco tubos foram aquecidos em banho-maria. 3.3 Influncia do pH Uma enzima atua mais eficientemente em torno de um pH timo, pois o aumento da acidez ou basicidade, pode provocar modificaes na enzima, levando-a a desnaturao. Sendo assim o pH influencia alteraes na atividade enzimtica. Para a determinao da influncia do pH, foram utilizados trs tubos de ensaio enumerados de 1 a 3. No tubo 1, foi colocado 3,0mL de amido medido em pipeta graduada de 5,0mL, 1 gota de hidrxido de sdio (NaOH 10%) e 0,4mL de saliva utilizando uma pipeta graduada de 1,0mL. No tubo 2, foi colocado 3,0mL de amido medido em pipeta graduada de 5,0mL, 2 gotas de cido actico e 0,4mL de saliva utilizando uma pipeta graduada de 1,0mL. No tubo 3, foi colocado 3,0mL de amido medido em pipeta graduada de 5,0mL e 0,4mL de saliva utilizando pipeta graduada de 1,0mL. Seguindo a tcnica, logo aps, os trs tubos de ensaio foram colocados em banhomaria a 40C por 15 minutos, e posteriormente, adicionou-se 2 gotas de iodo em cada um.

4 RESULTADOS E DISCUSSO 4.1 Especificidade enzimtica No tubo 1, que continha invertase e sacarose, aps ser adicionado o Reativo de Benedict e ser aquecido, houve reao. A invertase a enzima e a sacarose o substrato. Como a invertase especifica da sacarose, houve uma reao de quebra deste acar, resultando nos seus dois monossacardeos constituintes, a glicose e a frutose, que por serem acares redutores, reagiram com o Reativo de Benedict, dando uma cor amarelo-tijolo soluo contida no tubo. invertase + sacarose glicose + frutose + RB Cu+2 Cu+ - CuO amarelo-tijolo No tubo 2, que continha invertase e amido, no houve reao, pois a invertase no especfica do amido, sendo demonstrado com a adio do Reativo de Benedict, e que por no haver reao permaneceu azul pela cor tpica deste reagente. No tubo 3, tambm no houve reao. Nele continha saliva e sacarose. Sendo a saliva um constituinte da enzima amilase, que por sua vez no especfica na quebra da sacarose, a reao no acontece, e aps ter adicionado o Reativo de Benedict, a soluo permaneceu azul. No tubo 4, aconteceu reao. Nele continha saliva, onde est presente a amilase, e amido. A amilase a enzima que degrada o amido, sendo especfica da quebra deste acar. O amido um polmero de glicose, que ao ser quebrado vai sendo reduzido em maltose e glicose, que por serem acares redutores, reagem com o Reativo de Benedict, dando soluo, uma cor amarelo-tijolo. amilase + amido dextrinas maltose + RB Cu +2 Cu+ - CuO amarelo-tijolo A utilizao do Reativo de Benedict se explica atravs de que, na presena de um glicdio redutor, ocorre a reduo do on cprico, em meio fortemente alcalino, com a

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produo de um precipitado amarelo ou vermelho de xido cuproso, que pode ser observado nos tubos em que houve reao devido a especificidade enzima-substrato. 4.2 Influncia da concentrao da enzima Com base no princpio de que a velocidade da reao enzimtica diretamente proporcional a concentrao da enzima, foram colocados nos trs tubos de ensaio deste experimento, concentraes diferentes de enzima, no caso a amilase, em contato com o mesmo teor de sacarose em ambos os tubos, e gua destilada tambm em quantidade diferentes. Em ordem decrescente de concentrao enzimtica, ficou assim: o tubo 3 com 1,0mL de invertase, o tubo 2 com 0,5mL de invertase e o tubo 1 com 0,2mL de invertase. Esperava-se que as reaes ocorressem nesta ordem: primeiro no tubo 1, segundo no tubo 2 e terceiro no tubo 3, conforme nos mostra o princpio da influncia da concentrao enzimtica. Porem, ao ser realizado este experimento notou-se que os resultados esperados se inverteram, acontecendo primeiro a reao no tubo 1, o tubo 3 reagiu em segundo lugar e por ltimo o tubo 2. Verificou-se um possvel erro na correta medio das concentraes propostas que foram transferidas para os tubos de ensaio. Os tubos 4 e 5 deste experimento eram para a verificao de uma suposta contaminao presente em qualquer um dos reagentes. Se aps a adio do Reativo de Benedict, acontecesse uma reao no tubo, indicaria que algum componente do experimento estava contaminado. Verificou-se que no houve nenhuma reao nestes tubos, permanecendo de cor azul devido ao Reativo de Benedict, revelando que no havia contaminao dos reagentes. 4.3 Influncia do pH Na realizao desta tcnica, foi colocado 3,0mL de amido e 0,4mL de saliva em trs meios diferentes, sendo um bsico , o outro cido e por ltimo um meio neutro.

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No tubo 1, onde o meio era bsico, presente o xido de sdio 10%, no aconteceu reao qumica, pois a basicidade daquele meio no favoreceu a atividade enzimtica, continuando a soluo incolor. No tubo 2, permanecia o meio cido, devido a adio de cido actico neste tubo. Verificou-se que houve reao, a acidez do meio ainda foi favorvel no acabado com a atividade enzimtica, ficando azul o contedo deste tubo. No tubo 3, continha apenas o amido e a saliva, e a reao neste caso iria depender do pH salivar. Se a saliva for bsica, ao adicionar o iodo ficaria incolor o contedo do tubo, e se a saliva for cida, ao colocar o iodo ficaria azul. Neste experimento, o resultado obtido foi uma colorao azul preto do contedo do tubo, indicando dois resultados ao mesmo tempo, um, que aconteceu reao qumica, pois o meio era favorvel atividade enzimtica, e dois, que a saliva presente no tubo apresentava um carter cido.

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5 REFERNCIAS CAMPOS, Dra. Shirley de, A boa digesto depende das enzimas, disponvel em: http://www.drashirleydecampos.com.br/noticias/23770 acesso em: 27/09/2009. CHAMPE, Pamela C. et al., Bioqumica ilustrada. Traduo Carla Dalmaz et al. 4. ed. Porto Alegre: Artmed, 2009. 528p. PIVATTO, Fernando, Enzimas de diagnstico. Disponvel em: http://bioquimica.ufcspa.edu.br/pg2/pgs/medicina/links/seminarios20052/ENZIMAS.ppt, acesso em: 27/09/2009. VILELA, Profa Ana Luisa Miranda, Sistema digestrio: componentes, disponvel em: http://www.afh.bio.br/digest/digest1.asp, acesso em: 27/09/2009.