MICROSCOPIO

DEFINICION
Es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. Aunque la existencia de criaturas demasiado pequeas para ser vistas con el ojo haba sido sospecha desde tiempo atrs, su descubrimiento real est ligado a la invencin del microscopio. Un microscopio simple (de un lente o varios lentes), es un instrumento que amplifica una imagen y permite la observacin de mayores detalles de los posibles a simple vista. El poder de resolucin del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mnimo a esa distancia. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la informacin. La resolucin depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del espcimen, la calidad de la fijacin y la intensidad de la coloracin. Tericamente la mxima resolucin que se puede alcanzar es de 0,2 um dad por una luz con longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano)y con objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen producida por el objeto, pero no puede aumentar la resolucin.

PARTES DE UN MICROSCOPIO

LENTE OCULAR: es donde coloca el ojo el observador. Esta lente aumenta entre 10 a
15 veces el tamao de la imagen.

CAON: tuvo largo e metal hueco cuyo interior es negro. Proporciona sostn al lente
ocular y lentes objetivos.

LENTES OBJETIVOS: grupo de lentes de 2 o 3 ubicados en el revlver. REVOLVER: sistema que contiene los lentes objetivos y que pueden girar, permitiendo
el intercambio de estos lentes.

TORNILLO MACROMETRICO: permite afinar la imagen, enfocada y hacindola

ms clara.

PLATINA: plataforma provista de pinzas, donde se coloca el objeto o preparacin. DIAFRAGMA: regula la cantidad de luz que pasa a travs del objeto en observacin. CONDENSADOR: concentra el haz luminoso en la preparacin u objeto. FUENTE LUMINOSA: refleja la luz hacia la platina.

OCULAR REVOLVER OBJETO MECANISMO DE ENFOQUE PLATINA ESPEJO CONDENSADOR

TIPOS DE MICROSCOPIOS
Existen dos tipos de microscopios: OPTICOS y ELECTRONICOS.

MICROSCOPIO OPTICOS:
El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de 2.000 veces.

Se utiliz un microscopio ptico normal CELULAS DE PISUM

MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO:

El microscopio compuesto consiste en 2 sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Cuando se mira a atreves del ocular se una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

Los especmenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con una luz que los traviesa, y se suelen colocar sobre un rectngulo fino de vidrio. El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que atraviese el especien. El microscopio puede contar con una fuente de luz elctrica que dirige la luz a travs de la muestra. La resolucin de los microscopios pticos est restringida por un fenmeno llamado difraccin que, dependiendo de la apertura numrica (AN o AN) del sistema ptico y la longitud de onda der la luz utilizada, establece un lmite definido, a la resolucin ptica. Suponiendo que las aberraciones pticas fueran despreciables, la resolucin seria: Normalmente, se supone una de 550 nm, correspondiente a la luz es el aire, la AN prctica mxima es de 0,95, y en el caso de aceite de hasta 1,5. Ello implica que, incluso el mejor microscopio ptico est limitado a una resolucin de unos 0,2 micrmetros.

MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO

MIROCOPIO DE CONTRASTE DE FASE:

Permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor ndice de refraccin experimenta una deflexin y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otra longitud de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos pticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la porcin fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste til sobre la imagen. Las parte oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espcimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo

tanto estos microscopios se utilizan para observar clulas vivas, tejidos vivos y cortes semi finos no coloreados.

Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el microscopio de interferencia diferencial.

MIROCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
Una molcula que florece emite luz de longitud de onda que se encuentra Ntro. del espectro visible, cuando es expuesta a una fuente de luz ultravioleta. Se usa para revelar molculas fluorescentes naturales, como la vitamina A y algunos neurotransmisores. Al ser escasas las molculas autoflorecentes su aplicacin ms difundida es para revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de antgenos o anticuerpos en procedimientos de coloracin inmunocitoquimica.

Tambin se puede inyectar molculas fluorescentes especificas en un animal o directamente en clulas y usarlas como marcadores. Estos mtodos sirvieron para estudiar uniones intercelulares, trayectorias de las fibras nerviosas en neurobiologa y en deteccin de marcadores del crecimiento fluorescentes en tejidos mineralizados.

Se insertan distintos filtros entre la fuente de luz ultravioleta y la muestra para producir luz monocromtica o casi monocromtica, o entre el espcimen y el objeto permitiendo que la estrecha banda de longitudes de onda de fluorescencia llegue hasta el ojo o incida en una emulacin fotogrfica u otro procedimiento analtico.

NUCLEO (rosado), micro tbulos.

MICROSCOPIO ELECTRONICO
Microscopio diseado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1930. Se basaron en los estudios de Lois-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de los electrones Es el nico instrumento que permite conocer directamente la ultra estructura biolgica, puesto que posee que posee un poder resolutivo mucho mayor que el del microscopio ptico. Utiliza la propiedad que tienen los haces de electrones de ser desviados por un campo electrosttico o electromagntico, de la misma forma que un rayo de luz es refractado al atravesar una lente. En el microscopio electrnico, el lmite de resolucin es ta bajo que la imagen final puede ampliarse mucho ms que en el microscopio ptico. En el M.E. la imagen inicial del objeto, que puede ser de 100 X, se puede ampliar en forma til 200veces con la bobina proyectora lo que equivale a un aumento total de 20.000X o ms, egn la resolucin alcanzada. Las partes principales de un microscopio electrnico son:

CAON DE ELETRONES, que emite los electrones que chocan contra el espcimen, creando una imagen aumentada.

LENTES MAGNTICAS, para crear campos que dirigen y enfocan al haz de electrones, ya que l lentes convencionales utilizadas en los microscopios pticos no funcionan con los electrones.

SISTEMA DE VACIO, es una parte muy importante del microscopio electrnico. Debido a que los electrones puedan ser desviados por las molculas del aire se debe hacer un vaco casi total en el interior d u microcopia de estas caractersticas.

PLACA FOTOGRAFICA O PANTALLA FLUORESCENTE, que se coloca detrs del objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada.

SISTEMA DE REGISTRO, que muestra la imagen que produce los electrones, que suele ser una computadora.

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION

El microscopio electrnico de transmisin emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra. Para realizar un microscopio electrnico de transmisin debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de angstrom. los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces.

Imagen coloreada de partculas virales de la gripe tomada con un microscopio electrnico de transmisin, de cielo y tierra (phaidon).

MICROSCOPIO ELECTRONICO BARRIDO

un microscopio electrnico de barrido crea una imagen amplia de la superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para observar con un SEM, si no que puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos. El SEM, explora la superficie de la imagen punto por punto, al contrario que el TEM, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz de electrones por pantalla de una televisin. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la aparicin de electrones secundario. Los electrones perdidos, y los secundarios son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los laos del espcimen. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pixel en un monitor de televisin. Cuando mayor sea el nmero de electrones contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del pixel en la pantalla. A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en el monitor. Los microscopios electrnicos de barrido pueden ampliar los objetos 200.00 vece ms. Este tipo de microscopio es muy til porque, al contrario que los TEM o lo microscopios pticos, produce imgenes tridimensionales realistas de la superficie del objeto.

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