CLASIFICACION POR SOLUBILIDAD Y SEPARACION DE COMPONENTES Katherine Currea, John Alarcn, Juan Montealegre.

Revista Cubana de Medicina

Interfern alfa 2b recombinante ms ribavirina en el tratamiento de la hepatitis crnica C

DISCUSIN La importancia de alcanzar la RVS se ha demostrado en diferentes estudios al mejorar la calidad de vida de los pacientes,16 mejorar la actividad histolgica, e incluso el riesgo de desarrollar un hepatocarcinoma.17 Actualmente, continan las investigaciones sobre los factores implicados en la seleccin de pacientes con mayores posibilidades de aclarar el virus, aunque un reciente estudio publicado demuestra la persistencia de pequeas cantidades de ARN viral en macrfagos y linfocitos 9 aos despus de que se alcanzara una RVS.18 Clnicamente, cuando evaluamos las tasas de RVS con el empleo de terapias modernas, es fcil comprender que an falta mucho para llegar al tratamiento ideal que podamos considerar como efectivo sostenido en HCC. Por tal motivo, en nuestra opinin debe considerarse exitoso el haber obtenido un porcentaje no desestimable de pacientes en los que se logr, al menos, frenar la actividad necroinflamatoria y la fibrosis, como es el caso de los pacientes con histologa estable tras cumplir el tratamiento. La categora respuesta global depende directa y proporcionalmente de la RVS a la semana 72.19 A su vez, esta depende de una serie de factores claramente definidos como los relacionados con el propio paciente, los relacionados con el virus o con el tratamiento impuesto.14 De estos tres grupos, mencin especial merecen los factores virolgicos, pues se ha sugerido que una carga viral basal baja permite obtener tasas de RVS mayores que en los pacientes con carga viral pretratamiento ms alta. Por otra parte, los pacientes con genotipos 2 y 3 son los mejores respondedores dentro de los 6 genotipos que se han descrito hasta el presente.15 En nuestro estudio no fue posible incluir estas dos variables (genotipo y carga viral) con vistas a esclarecer las causas del porcentaje menor de RVS obtenido (32,9 %) en comparacin con otras series.9-12 No obstante, en trabajos muy recientes como el de Wright M et al.20 este autor obtiene una tasa de RVS muy similar a la nuestra (33 %) que, incluso, fue menor en los pacientes con genotipo 1. Los escasos estudios cubanos publicados sobre genotipaje de VHC realizados hasta la fecha resaltan la prevalencia del genotipo 1 en Cuba21 y esto, de cierta forma, acenta la desventaja en la obtencin de mayores tasas de RVS. El mecanismo fisiopatolgico que ha intentado explicar la relacin inversa IMC-RVS, se apoya en la relacin que existe entre el sndrome metablico de obesidad-hgado graso y la resistencia a la insulina e hiperinsulinemia. La hiperinsulinemia tiene la capacidad de bloquear el efecto teraputico del IFN, al disminuir su capacidad de producir PKR (protena kinasa dependiente de ARN de doble cadena) e IRF-1 (enzima esencial en la sntesis endgena de IFN) y de potenciar la replicacin viral.22-24 Se ha observado que en pacientes no respondedores a IFN existe un descenso en la expresin de los receptores para IFN alfa y en los niveles de ARNm que induce la sntesis de estos receptores. Las

protenas virales NS5A y E2 bloquean la induccin de ISG (grupo de genes sensibles al IFN) mediante la actuacin sobre PKR y al inhibir la activacin ptima de las protenas STAT.25 Un factor fundamental para conseguir una RVS es la adherencia al tratamiento, y se ha postulado que el haber consumido, al menos, el 80 % de las dosis recomendada de IFN-ribavirina durante, al menos, el 80 % del tiempo recomendado, incrementa las posibilidades de respuesta frente a los menos cumplidores.16 En nuestra serie, demostramos que la adherencia al tratamiento fue una variable asociada significativamente a la RVS y ello pudiera contribuir a la interpretacin de nuestros resultados. Con la obtencin de un valor de OR igual a 7,015 en relacin con la variable evaluacin virolgica a la sem 24 se interpreta que es 7 veces ms probable que un paciente que sea respondedor virolgico a la sem 24, tambin lo sea a la sem 72, y desde el punto de vista prctico, este dato representa una herramienta de incalculable valor, incluso costo-efectivo, en la conducta a asumir frente a estos pacientes. Finalmente, la administracin de esta terapia combinada a pacientes afectos de HCC nos ha permitido obtener tasas de respuesta virolgica y bioqumica sostenidas similares a las observadas en otros estudios. Un nmero no despreciable de pacientes present mejora histolgica dada por un descenso en la fibrosis sin modificacin importante de la inflamacin y, en muchos de ellos se logr, al menos, detener la actividad de la enfermedad. Aunque se identificaron una serie de variables asociadas con las tasas finales de RVS, la evaluacin virolgica y bioqumica a la sem 24 y el tipo de paciente previo a la terapia resultaron ser las ms significativas. Aspectos Relevantes: En primer lugar se puede observar que para el anlisis o discusin de resultados, se hace una pequea exposicin terica de los aspectos que son trascendentales para la elaboracin de los resultados, adems de contextualizar la importancia del tema. Despus comienza el anlisis como tal de los resultados obtenidos en la investigacin, donde se exponen las posibles causas a los que se les atribuyen los resultados obtenidos para cada una de las partes de la prctica. Muchos de estas causas son justificadas con datos numricos, a los que en este caso se le denominan las variables. La mayora de los anlisis son narrados en presente en los casos donde se relacionan los conceptos tericos, y el pasado es utilizado al hablar y nombrar los resultados relevantes obtenidos.

Application ofmushroomwastemediumfrom Pleurotusostreatus for bioremediationofDDT-contaminatedsoil

Aspectos Relevantes: se mencionan las caractersticas del residuo de los hongos P. ostreatus los cuales son utilizados para la biorremediacion del DDT, adems, del porqu se cultivaron inoculos de hongos y la especie escogida para la investigacin, se menciona el lugar de procedencia de los sustratos para el cultivo, se muestran los resultados obtenidos para la degradacin del DDT en porcentajes con su respectiva figura en la que se da a conocer una comparacin entre los residuos de hongos y el sustrato de hongos para la degradacin del DDT, esta trae la leyenda correspondiente que da la explicacin y algunos datos de las condiciones a las cuales se realizo la prctica. Posteriormente se habla de el porcentaje de mineralizacin obtenido para cada uno de los 2 mtodos empleados, mencionando caractersticas de las condiciones para los resultados obtenidos como periodo de incubacin, temperatura y clase de cultivo, igualmente, con su respectiva figura, al final se hace la respectiva conclusin de cul de los dos mtodos es ms conveniente. Por ltimo se da a

conocer la actividad metablica, especficamente de las enzimas que participan en la degradacin del DDT para las cuales se llevo a cabo un estudio para determinar cul es su aporte en este proceso con su respectiva tabla y leyenda. Tambin se presenta a lo largo del escrito varias citas referentes a textos gua o de consulta de los cuales se tomaron descubrimientos cientficos que ayuden a explicar la razn de los resultados obtenidos. CLASIFICACION POR SOLUBILIDAD Y SEPARACION DE COMPONENTES

Introduccin Clasificacin por solubilidad La solubilidad de una sustancia orgnica en diversos disolventes es un fundamento del mtodo de anlisis cualitativo orgnico desarrollado por Kamm, este mtodo se basa en que una sustancia es ms soluble en un disolvente cuando sus estructuras estn ntimamente relacionadas. 1 Las fuerzas intermoleculares determinan las propiedades de solubilidad de los compuestos orgnicos. Las sustancias polares se disuelven en disolventes polares y las sustancias no polares se disuelven en disolventes no polares. La disolucin de un compuesto orgnico en un disolvente, es un proceso en el que las fuerzas intermoleculares existentes en la sustancia pura, son reemplazadas por fuerzas que actan entre las molculas del soluto y disolvente. Por consiguiente, las fuerzas molcula-molcula en el soluto y las fuerzas molcula-disolvente en la disolucin, est a favor de las ltimas. Algunos compuestos orgnicos se disuelven fcilmente en agua, pero la mayor parte no lo son. La mayora de los compuestos orgnicos son solubles en otros compuestos orgnicos llamados disolventes orgnicos. La solubilidad de un compuesto orgnico puede dar informacin valiosa respecto a su composicin estructural.2 Pero dentro de la solubilidad tambin existen reglas de peso molecular, ubicacin en una serie homloga y los disolventes que causan una reaccin qumica como son los cidos y las bases, tambin se incluyen los cidos orgnicos inertes que forman sales de oxonio y sulfonio. Independientemente de las causas de la disolucin del compuesto que se investiga, se considera que hay disolucin cuando 0,05g de la sustancia slida o 0,1 ml de la sustancia lquida forman una fase homognea a la temperatura ambiente con 3 ml de solvente.3 Metodologa Separacin de componentes Para la separacin de los componentes activos, se pesaron 10 g del frmaco Excedrin los cuales se trituraron en un mortero, hasta obtener un polvo fino y homogneo; dicho polvo fue trasladado un

Universidad Jorge Tadeo Lozano. Laboratorio de qumica orgnica. Gua No. 2 Ensayos preliminares y clasificacin de compuestos por solubilidad 2 UNACHI. Laboratorio de qumica orgnica. Clasificacin por Solubilidad de Compuestos Orgnicos. Cristina De Puy. http://quimicaorganica135lab.blogspot.com/2011/08/clasificacion-por-solubilidad-de_5793.html consultado el 27 de marzo de 2012
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Universidad Jorge Tadeo Lozano. Laboratorio de qumica orgnica. Gua No. 2 Ensayos preliminares y clasificacin de compuestos por solubilidad

Erlenmeyer adicionndole dicloromentano, y para obtener una mayor disolucin se calent a baja temperatura en una plancha de agitacin durante 10 minutos. A continuacin se filtr y se separ la fase liquida del residuo. Teniendo esta fase liquida en un embudo de decantacin fue posible diferenciar la fase orgnica al agregarle NaOH lentamente hasta la formacin de una emulsin gelatinosa blanca, que luego de un corto lapso de tiempo se form una fase emulsionada color azul y una fase acuosa color blanco. Al ser separadas por filtracin; a la fase acuosa obtenida se le adicion HCl (3M) hasta neutralizar el pH, y luego fue calentada y filtrada al vaco done se recogi un slido que fue guardado para un anlisis orgnico; a la fase emulsionada se le realizo el mismo proceso de la fase acuosa, la nica diferencia fue que a esta fase se le agreg Na2SO4 hasta la formacin de un slido blanco. Por otro lado al residuo se le adicion etanol y se calent a ebullicin entre 5 a 10 minutos, filtrndolo en caliente y dejndolo enfriar, para ser raspado con una varilla hasta la formacin de un slido blanco cristalino el cual fue desechado por que no se logr cuantificar. Clasificacin por solubilidad La clasificacin por solubilidad se llevo a cabo para las siguientes sustancias: acido Benzoico, Di fenilamina, Acetanilida, Glucosa, Acetato de Etilo, Acetofenona, Parafina, Resorcina proporcionados por la universidad, para las cuales se realizo ensayos de solubilidad y clasifico teniendo como gua el esquema a continuacin presentado:

Todos los ensayos de solubilidad se llevaron a cabo a la temperatura ambiente del laboratorio, en tubos de ensayo, agitando vigorosamente el solvente y el soluto. Se uso una relacin de 0,1 g 0,5 ml

de la sustancia utilizada como soluto y 2 ml de solvente. Una vez realizados los ensayos se realizo la debida disposicin de las mezclas y soluciones obtenidas. Resultados Separacin de componentes Inicialmente los resultados se relacionan en cuanto la obtencin de los respectivos componentes de los cuales est hecho el medicamento analizado (Excedrin), este se realiz bajo principios de separacin (filtracin y decantacin), en donde se pudo obtener dos fases, una acuosa y otra orgnica (la cual tena una coloracin azul), adems de un residuo derivado de la previa filtracin (Tabla 1). Se debe tener en cuenta que se utilizaron 8 pastillas las cuales pesaron 10 g. Tabla 1. Peso en gramos de cada componente obtenido para una pastilla. Componente Peso (g) 1 0,4 2 1,03 3 ---

Fase Orgnica Fase Acuosa Residuo (cristales)

Con respecto al peso de cada uno, se puede comparar este con los de cada compuesto que trae el Excedrin, determinando as cual corresponde al componente obtenido teniendo en cuenta cual fue su proceso de separacin. Para ello la Tabla 2 muestra la composicin del Excedrin con sus pertinentes pesos. Cabe resaltar que para el residuo no se logr determinar ningn valor por lo que haba una concentracin muy baja lo cual impeda obtener el peso. Tabla 2. Composicin de una pastilla de Excedrin. Componente Peso (g) cido Acetilsaliclico 0,25 (Aspirina) Paracetamol (Acetaminofn) 0,25 Cafena 0,0025 Teniendo en cuenta los anteriores datos le puede deducir que experimentalmente el componente 3 correspondera a la cafena, puesto que se present de forma cristalina caracterstica de la misma, as no se hubiera obtenido ningn valor. En cuanto al componente 2, se observa que fue el que mayor peso obtuvo, sin embargo esto no podra ser cierto por lo que la composicin msica dice que es de 0,25 representando as un error del 3,12%; lo mismo ocurre con el componente 1 con un porcentaje de error del 0,6%. Clasificacin por solubilidad La clasificacin de las sustancias empleadas despus de los ensayos de solubilidad con los diferentes solventes propuestos por el esquema gua se presentan en la tabla 1.

Tabla1. Clasificacin por solubilidad de las sustancias empleadas en la prctica

Anlisis de Resultados Separacin de componentes Las sustancias qumicas tienen una serie de caractersticas fsicas tales como el punto de ebullicin o la densidad, que nos permiten muchas veces evaluar la pureza de una sustancia. Los compuestos slidos pueden recuperarse muchas veces a parir de la solucin saturada y caliente de dichos compuestos, en un disolvente en el que a temperatura ambiente es poco o medianamente soluble. Esta tcnica se basa en el hecho de que el exceso de soluto forma partes cristalinas las cuales crecen al enfriarse en este caso nuestra disolucin, dejando la mayor parte de impurezas de la sustancia en el disolvente. Al realizar la separacin de componentes activos, por medio del mtodo basado en el calentamiento y la filtracin para la separacin de fases, donde se obtuvieron los resultados mostrados en la Tabla 1. Al comparar estos resultados con la cantidad de Excedrin utilizada para la prctica expresada en la Tabla 2, se puede observar que los resultados obtenidos tienen unos errores considerables tanto para el componente 1 como para el componente 2 en los cuales posiblemente la temperatura y la cantidad de disolvente utilizada no fueron las ms correctas por lo cual una gran parte de la sustancia pura se pudo perder a la hora de la filtracin. Clasificacin por solubilidad Glucosa (S2): mostro solubilidad en agua pero no en ter, en general tenemos que los compuestos solubles en agua son los electrolitos, los cidos, las bases y los compuestos polares. Mientras que los compuestos solubles en ter son sustancias no polares o ligeramente polares. Por lo tanto es de esperar que la glucosa se un compuesto polar, tambin es posible encontrar la presencias de grupos funcionales capaces de formar puentes de hidrogeno y encontrar ms de uno, ya que si hubiera solo una existira la posibilidad que fuera soluble en ter por su baja polaridad. A medida que la cadena del compuesto se hace ms larga, se hace menos soluble en agua. El agua es un solvente anfiprtico y por lo tanto puede por ejemplo ionizar una amina dndole un protn o un cido aceptando un protn del mismo. Estas reacciones se ilustran as:

Resorcina (S1): tomando como gua el anlisis realizado para la glucosa es posible decir que la resorcina es un compuesto no polar o con baja polaridad, con presencia seguramente de bases que le permitan la formacin de puentes de hidrogeno Acido benzoico (A1): la solubilidad en agua y HCl diluido de los compuestos se debe principalmente a la presencia de un atomo de nitrgeno bsico. El ejemplo ms comn de compuestos que pueden aceptar protones con facilidad y formar sales solubles en agua lo constituyen las aminas. Las aminas pertenecen a tres clases: primarias, secundarias y terciarias. En todas ellas encontramos un tomo de nitrgeno con un par de electrones no compartido que puede aceptar un protn procedente del medio acido. Esta transferencia protnica conduce a una sal de amonio soluble en agua. En la ecuacin siguiente se ilustra el proceso:

Los compuestos solubles en NaOH son aquellos que son capaces de donar un protn a la base dando lugar a la formacin de una molecula de agua y una sal, que como la gran mayora son solubles en agua

El concepto de acidez es relativo, y un compuesto es cido o bsico en comparacin con otro. Los cidos orgnicos se consideran cidos dbiles, pero dentro de ellos se pueden comparar entre menos o ms dbiles en comparacin con el cido carbnico. La solubilidad en bicarbonato dice que la sustancia es un cido relativamente fuerte.

Difenilamina y acetanilida (M): son compuestos que son insolubles en HCl y NaOH y que contienen nitrgeno o azufre hacindolos soubles en H2SO4 Parafina (I): es un compuesto que es insoluble en todos los solventes utilizados y no contiene nitrgeno o azufre. Acetato de etilo y acetofenona ( N): Este cido es un donador de protones muy efectivo, y es capaz de protonar hasta la base ms dbil. Tres tipos de compuestos son solubles en este cido, los que contienen oxgeno excepto los diarilteres y los perfluoro compuestos que contienen oxgeno, los alquenos y los alquinos, los hidrocarburos aromticos que son fcilmente sulfonados, tales como los ismeros meta di sustituidos, los trialcohil-sustituidos y los que tienen tres o ms anillos aromticos.

Considerando el comportamiento de solubilidad en ensayos sistemticos con agua, ter etlico, solucin diluida de NaOH, solucin diluida de HCl, solucin diluida de NaHCO3 y H2SO4 concentrado, ha sido posible sistematizar con fines analticos la siguiente clasificacin de compuestos orgnicos en grupos Tabla 2. A partir de la cual es posible determinar algunos compuestos presentes en las sustancias estudiadas Tabla 2. Compuestos orgnicos agrupados en funcin de la clasificacin por solubilidad

Fuente: elaborada por los autores Conclusiones Para llegar a hacer una adecuada separacin de los principios activos de un frmaco se requiere una masa inicial considerable del mismo con el fin de obtener buenos resultados en cuanto a cuantificacin se refiere para cada uno de los componentes esperados. Es posible concluir que los procesos fsicos de separacin (filtracin al vaco y decantacin) son un buen mtodo para separar los compuestos activos, dado que se determina visiblemente los slidos resultantes los cuales representa la composicin en masa del frmaco, en este caso del Excedrin. Se determino la clasificacin por solubilidad de las diferentes sustancias propuestas y reviso diversos compuesto pertenecientes a la clasificacin asignada que nos hacen a la idea de que grupos podran estar presentes en las sustancias, los mtodos aqu utilizados estas directamente relacionados con las

propiedades qumicas de los solventes utilizados durante el proceso, quienes nos permiten la llevar a cabo la clasificacin conforme a la semejanza de este con el soluto. Referencias
UNACHI. Laboratorio de qumica orgnica. Clasificacin por Solubilidad de Compuestos Orgnicos. Cristina De Puy. http://quimicaorganica135lab.blogspot.com/2011/08/clasificacion-por-solubilidad-de_5793.html consultado el 27 de marzo de 2012 Universidad Jorge Tadeo Lozano. Laboratorio de qumica orgnica. Gua No. 2 Ensayos preliminares y clasificacin de compuestos por solubilidad Universidad tecnolgica metropolitana. Laboratorio de orgnica 3. Calsificacion de compuestos organicos por solubilidad. Zamora, Paulina