UNIVERSIDADE DE PASSO FUNDO

FACULDADE DE ENGENHARIA E ARQUITETURA

CURSO DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS

Bruna Pazzini Las Manica

Relatrio de aula prtica Espectrofotometria

Disciplina: Anlise Instrumental de Alimentos Professor: Marcelo

Passo Fundo

2 2010

LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Curva Padro de Ferro....................................................................................8 Tabela 2: Dados da transmitncia (%T) das 4 amostras.................................................9 Tabela 3: Dados da absorbncia da amostra Azul..........................................................9 Tabela 4: Dados da absorbncia da amostra Amarela....................................................10 Tabela 5: Dados da absorbncia da amostra Lils...........................................................10 Tabela 6: Dados da absorbncia da amostra Rosa...........................................................10

LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Grfico A x Comprimento de onda da amostra azul.......................................11 Figura 2: Grfico A x Comprimento de onda da amostra amarela .................................11 Figura 3: Grfico A x Comprimento de onda da amostra Lils......................................12 Figura 4: Grfico A x Comprimento de onda da amostra Rosa......................................12 Figura 5: Grfico de curva padro de ferro.....................................................................13

SUMRIO
1 INTRODUO..............................................................................................................4 2 DESENVOLVIMENTO.................................................................................................5 2.1REVISO BIBLIOGRFICA.................................................................................5 2.2.2 Determinao espectrofotomtrica de ferro em gua mineral..........................7 2.3 RESULTADOS E DISCUSSAO.............................................................................9 2.3.1 de mxima absoro......................................................................................9 2.3.2 Determinao espectrofotomtrica de ferro em gua mineral........................14

1 INTRODUO
As aplicaes dos mtodos quantitativos de absoro ultravioleta/visvel so utilizadas em todos os campos nos quais informaes qumicas quantitativas sejam necessrias. No campo da sade, 95% de todas as determinaes quantitativas so feitas por espectrometria de ultravioleta/visvel. A espectrofotometria o mtodo de anlise ptico mais usado nas investigaes biolgicas e fisico-qumicas. O espectrofotmetro um instrumento que permite comparar a radiao absorvida ou transmitida por uma soluo que contm uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substncia. Todas as substncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro visvel. A gua absorve fortemente na regio do infravermelho. A absoro das radiaes ultravioletas, visveis e infravermelhas depende das estruturas das molculas, e caracterstica para cada substncia qumica. Quando a luz atravessa uma substncia, parte da energia absorvida: a energia radiante no pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substncias se deve a absoro de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas no absorvidos. O instrumento usado na espectroscopia UV/VIS chamado de espectrofotmetro. Para se obter informao sobre a absoro de uma amostra, ela inserida no caminho ptico do aparelho. Ento, luz UV e/ou visvel em certo comprimento de onda (ou uma faixa de comprimentos de ondas) passada pela amostra. O espectrofotmetro mede o quanto de luz foi absorvida pela amostra.

2 DESENVOLVIMENTO
2.1REVISO BIBLIOGRFICA
A espectrofotometria um mtodo analtico que baseia-se na interao (absoro e/ou emisso) da matria com a energia radiante, ou seja, radiao eletromagntica quando os eltrons se movimentam entre nveis energticos. A absoro da radiao luminosa acontece nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho no espectro da radiao eletromagntica. Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi absorvida e a luz transmitida por essa soluo. Usando um prisma, o aparelho separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda. O espectrofotmetro permite saber que quantidade de luz absorvida a cada comprimento de onda. As substncias tm diferentes padres de absoro, a espectrofotometria permite identificar substncias com base no espectro da substancia. Permite tambm quantificlas, uma vez que a quantidade de luz absorvida est relacionada com a concentrao da substncia. A medida da luz absorvida permite inferir sobre a concentrao do soluto em determinada soluo. Compostos desconhecidos podem ser identificados por seus espectros caractersticos ao ultravioleta, visvel ou infravermelho. Quando uma radiao eletromagntica, por exemplo, a luz visvel, incide em uma soluo, se os ftons da radiao tm energia adequada, a energia associada a essa radiao pode sofrer trs diferentes tipos de variaes: - ser refletida nas interfaces entre o ar e a parede do frasco contendo a soluo (cubeta); - ser dispersa por partculas presentes na soluo; - ser absorvida pela soluo. Nas aplicaes espectrofotomtricas, quando se usa energia monocromtica em um simples comprimento de onda (), a frao de radiao absorvida pela soluo,

6 ignorando perdas por reflexo, ser funo da concentrao da soluo e da espessura da soluo. Portanto, a quantidade de energia transmitida diminui exponencialmente com o aumento da espessura atravessada Lei de Lambert e o aumento da concentrao ou da intensidade de cor da soluo Lei de Beer. A relao entre energia emergente (I) e energia incidente (I0) indica a transmitncia (T) da soluo. Em espectrofotometria, utiliza-se a absorbncia (A) como a intensidade de radiao absorvida pela soluo, seguindo as leis de Lambert-Beer. A determinao de concentrao de um soluto em uma soluo-problema por espectrofotometria envolve a comparao da absorbncia da soluo-problema com uma soluo de referncia, na qual j se conhece a concentrao do soluto. Em geral, utilizada uma soluo-padro com diferentes concentraes (pontos), que tem sua absorbncia determinada. Esses pontos so preparados diluindo-se a soluo-padro na proporo necessria para a obteno das concentraes desejadas. Com os valores de absorbncia e de concentrao conhecidos, pode-se traar um grfico cujo perfil conhecido como curva-padro. Nesse grfico, a reta, indica a proporcionalidade entre o aumento da concentrao e da absorbncia e a poro linear correspondente ao limite de sensibilidade do mtodo espectrofotomtrico para o soluto em questo.

2.2 MATERIAL E MTODOS

2.2.1 de mxima absoro Material gua destilada 4 cubetas Papel para limpeza de cubetas 4 amostras de solues de cores diferentes Espectrofotmetro. Mtodos Calibrar o aparelho com gua destilada, ajustando 100% de transmitncia, no primeiro comprimento de onda utilizado (400nm). Transferir o indicador na forma cida para um Becker de 50 mL. Transferir parte da soluo para a cubeta, e anotar a transmitncia da soluo. Calibrar o aparelho novamente com gua destilada, ajustando 100% de transmitncia, no comprimento de onda seguinte, 440 nm, e ento ler a transmitncia da mesma soluo e anotar a transmitncia da soluo. Continuar a prtica com a mesma soluo nos Y= 480nm, 520nm, 560nm, 590nm, 620nm, 660nm e 690nm. Apos completada a varredura de y, voltar a soluo que estava na cubeta para o becker. Ento no becker transferir a forma bsica do indicador, e fazer nova varredura do espectro.

2.2.2 Determinao espectrofotomtrica de ferro em gua mineral Preparou-se a soluo me de 1000 ppm de Fe2+, em balo de 250 mL. Antes de completar o menisco do balo com gua destilada, adicionaram-se 5 gotas de cido sulfrico concentrado. A partir da soluo me, preparou-se a soluo estoque de 100 ppm de Fe2+ em balo de 200 mL e com esta soluo estoque foi preparada a curva padro de Fe2+ conforme mostra a Tabela 2.

Tabela 1 Curva padro de Fe2+ preparada a partir da soluo estoque de 100 ppm Concentrao Volumes branco 100 mL 0,2 ppm 100 mL 0,7 ppm 100 mL 1,5 ppm 100 mL 3,0 ppm 100 mL

Aps o preparo das solues da curva padro, com cada uma delas, preparou-se a soluo para realizar a leitura. Para isso, pipetou-se 25 mL de cada amostra para um frasco plstico. Pipetou-se 25 mL de cada padro da curva e do branco em frasco plstico. Foram adicionadas 10 gotas de soluo a 10% de cloridrato de hidroxilamina em cada frasco plstico. Agitou-se o frasco por alguns segundos e adicionou-se 20 gotas da soluo de acetato de sdio 1,5 mol/L em cada frasco plstico. Ento foram adicionadas 20 gotas de soluo 0,1% de orto-fenantrolina em cada frasco plstico e esperou-se 10 minutos para realizar as leituras. A varredura da absorbncia da soluo de 1,5 ppm de Fe 2+ foi realizada nos seguintes comprimentos de onda: 490nm, 495nm, 500nm, 505nm, 510nm, 515nm. No comprimento de onda de maior absoro, leu-se a absorbncia das amostras e dos padres da curva. Foram preparadas trs solues a partir da soluo me descrita anteriormente, sendo que apenas uma delas estava em uma concentrao que permitia leitura espectrofotomtrica. Foi seguido o mesmo procedimento de preparo da amostra para a leitura. Realizou-se leitura no comprimento de onda de 495 nm e as duas solues que apresentaram-se fora do limite de leitura foram diludas. A menos concentrada foi diluda de 5 mL em 100 mL (20 vezes) e a mais concentrada de 1 mL em 100 mL (100 vezes) e procurou-se saber qual a concentrao de ferro nestas solues.

2.3 RESULTADOS E DISCUSSAO

2.3.1 de mxima absoro A leitura da transmitncia foi realizada em vrios comprimentos de ondas e em quatro amostras: azul, rosa, lils e amarelo. Tabela 2: Dados da transmitncia (%T) das 4 amostras Compriment o de Onda 400 440 480 520 560 590 620 660 Azul 51,6 94,7 100 99,5 100 80,2 65,6 99 Amarel o 6,7 5,7 48,3 100 100 100 100 100 Lils 76,4 77,8 77,7 70,7 78,9 81,5 71 93,9 Rosa 76,4 75,7 32,6 2,9 100 100 100 100

A absorbncia inversamente proporcional a Transmitncia, por exemplo, se a luz passa atravs de uma soluo sem absoro nenhuma, a absorbncia zero, e a transmitncia percentual 100%. No caso em que toda a luz absorvida, a transmitncia percentual zero e a absorbncia infinita. Transformou-se a transmitncia percentual em absorbncia atravs da formula: A = 2 log (%T) Tabela 3: Dados da absorbncia da amostra Azul

10 Comprimento de Onda (nm) 400 440 480 520 560 590 620 660 Amostra Azul 0,2873 0,0236 0 0,00217 0 0,0958 0,183 0,00436

Tabela 4: Dados da absorbncia da amostra Amarela Comprimento de Onda (nm) 400 440 480 520 560 590 620 660 Amostra Amarela 1,1739 1,2441 0,316 0 0 0 0 0

Tabela 5: Dados da absorbncia da amostra Lils Comprimento de Onda (nm) 400 440 480 520 560 590 620 660 Amostra Lils 0,1169 0,109 0,1095 0,1505 0,1029 0,0888 0,1487 0,02733

11

T Tabela 6: Dados da absorbncia da amostra Rosa Comprimento de Onda (nm) 400 440 480 520 560 590 620 660 Amostra Rosa 0,1169 0,1209 0,4867 1,5376 0 0 0 0

Os grficos de cada amostra de cor relacionam o comprimento de onda (nm) X Abs Grfico 1: A x Comprimento de onda da amostra Azul

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Amostra Azul
0,35 0,3 Absorbncia 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 -0,05 400 440 480 520 560 590 620 660 Com prim ento de Onda (nm ) Srie1

Grfico 2: A x Comprimento de onda amostra Amarela

Amostra Amarela
1,4 1,2 Absorbncia 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 -0,2 400 440 480 520 560 590 620 660 Com prim ento de Onda (nm ) Srie1

Grfico 3: A x Comprimento de onda amostra Lils

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Amostra Lils
0,16 0,14 0,12 Absorbncia 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 400 440 480 520 560 590 620 660 Com prim ento de Onda (nm ) Srie1

Grfico 4: A x Comprimento de onda amostra Rosa

Amostra Rosa
1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 -0,2

Absorbncia

Srie1

400

440

480

520

560

590

620

660

Comprim ento de Onda (nm )

Determinar o comprimento de onda de mxima absoro Amostra rosa- 2,9% T 520nm Amostra Azul 51,6%T 400nm Amostra Amarelo 5,7% T 440nm Amostra Lils 70,7%T 520 nm

Tabela 3: Tabela bibliogrfica

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Comparar a cor observada com a tabela de cores e os respectivos comprimentos de onda. Intervalo de (nm) 400 435 435 500 500 580 580 595 595 610 610 750 Cor Violeta Azul Verde Amarelo Laranja Vermelho Cor Complementar Verde-amarelo Amarelo Vermelho Azul Azul esverdeado Verde

2.3.2 Determinao espectrofotomtrica de ferro em gua mineral Figura 2 apresenta a curva preparada com concentraes conhecidas de ferro e a respectiva equao da reta. O ltimo ponto de leitura, concentrao 3,0 ppm, foi desconsiderado, pois no estava respeitando a Lei de Beer.

Grfico 5: Curva padro de Fe2+ no comprimento de onda de 495 nm Aps a construo da curva foram realizadas mais trs leituras para as solues nomeadas A, B e C que apresentaram os seguintes valores de absorbncia: 0,615 para A, 1,822 para B e C no obteve leitura. Com esses resultados foi realizada uma nova diluio das solues B ( 20 vezes) e C ( 100 vezes), obtendo-se assim um novo resultado de leitura de absorbncia: 0,084 para B e 0,151 para C.

15 Os valores foram substitudos na equao da reta construda e com isso se obteve a concentrao de ferro em cada soluo. A quantidade de ferro encontrada na soluo A foi cerca de 4,02 ppm, a soluo B apresentou na primeira leitura cerca de 12,2 ppm e aps a diluio 11,2 ppm. A alta concentrao de ferro aumenta o desvio da absorbncia e esta diferena deve estar relacionada a um possvel erro de leitura, principalmente na soluo sem diluio. A soluo C apresentou cerca de 15,1 ppm de concentrao de ferro, o que impossibilita a leitura.

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3 CONCLUSO
A espectrofotometria um mtodo de anlise baseado em medidas de absoro de radiao eletromagntica. Os mtodos espectrofotomtricos so utilizados na aplicao a sistemas orgnicos e inorgnicos, seletividade moderada a alta, boa exatido, facilidade e convenincia de aquisio de dados. Conclui-se que a absoro UV oferece menos possibilidades para identificao de grupos funcionais, mas muito utilizada na identificao dos constituintes das diversas partes das plantas e na determinao em amostras inorgnicas. de mxima absoro: de maior absorbncia Cor 51,6 % T 400nm Azul 5,7 % T 440nm Amarelo 70,7% T 520nm Lils 2,9% T 520nm Rosa Tabela 4: Valores de maior absorbncia Comparando com a tabela bibliogrfica nota-se que o amarelo a unica cor que coincide e o grfico mostra que quanto maior o comprimento de onda menor a absorbncia e vice- versa. Tambm levando em considerao a concentrao de cada corante, e a calibrao em cada toca de comprimento de onda. Esta pratica tambm ajudou no entendimento do espectrofotometro bem como o seu funcionamento, Determinao espectrofotomtrica de ferro em gua mineral: O trabalho tornou possvel um maior aprendizado do funcionamento do espectrofotmetro, alm da preparao de solues para leitura a partir de uma soluo padro, como tambm a diluio em menores concentraes para se tornar possvel a leitura no aparelho. Os resultados obtidos permitiram a anlise e comparao da absorbncia em diferentes de onda e tambm a anlise das concentraes, se estavam ou no de acordo com a Lei de Beer.

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4 REFERNCIAS

CIENFUEGOS, Freddy; VAITSMAN, Delmo. Analise Instrumental. Rio de Janeiro: Editora Interferncia, 2000. EWING, Galen Wood. Mtodos Instrumentais de anlise qumica. So Paulo: Editora Edgard Blucher, v.1, 1972.
VINAD, Maria Elisabeth do Canto; VINAD, Elsa Regina do Canto, Mtodos espectroscpicos de analise quantitativa, editora UFSM. SECA, Ana. Espectrofotometria. Disponvel em: <http://www.uac.pt>. Acesso em: 25 Abril. 2010.