Preparacin de soluciones buffer usadas en inmunologa

1.
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7.
8.

Buffer de acetato
Buffer de borato cloruro
Buffer de carbonato
Buffer de glicina
Buffer fosfatos
Buffer de tris
Buffer veronal
Buffer para complemento

BUFFER DE ACETATO (0,1 M; pH 3,6-5,6)

Solucin A (cido actico 0,2M): disolver 11,55 ml de cido actico glacial en agua destilada completando
1 litro.
Solucin B (acetato de sodio 0,2 M): disolver 27,2 g de acetato de sodio (3 H2O) en agua destilada
completando 1 litro.
Solucin A (ml)

Solucin B (ml)

Agua destilada (ml)

pH

463

37

500

3.6

440

60

500

3.8

410

90

500

368

132

500

4.2

305

195

500

4.4

255

245

500

4.6

200

300

500

4.8

148

352

500

105

395

500

5.2

88

412

500

5.4

48

452

500

5.6

Si se desea obtener SN buffer de acetato 0,2 M, se elimina el agua destilada de la mezcla.

BUFFER DE BORATO CLORURO (borato 0,1 M; cloruro 0,1 M, pH 8,1-10)
Solucin A (H3BO3 0,2 m, KCl 0,2 M): disolver 12,4 g de H3BO3 en 400 ml de agua destilada,
completando luego a 500 ml. En otro recipiente disolver 14,91 g de KCl en 400 ml de agua destilada,
llevando a un volumen de 500 ml. Mezclar ambas soluciones.

Solucin B (NaOH 0,2 N): disolver 0,8 g de NaOH en 500 ml de agua destilada, completando a un litro.
Controlar la normalidad con solucin valorada de HCl.
Solucin A (ml)

Solucin B (ml)

Agua destilada (ml)

pH

500

49

451

8.1

500

60

440

8.2

500

72

428

8.3

500

86

414

8.4

500

101

399

8.5

500

118

382

8.6

500

137

363

8.7

500

158

342

8.8

500

181

319

8.9

500

208

292

500

236

264

9.1

500

264

236

9.2

500

293

207

9.3

500

321

179

9.4

500

346

154

9.5

500

369

131

9.6

500

389

111

9.7

500

406

94

9.8

500

422

78

9.9

500

437

63

10

BUFFER DE CARBONATO (pH 9-10.8 fuerza inica 0,1)

Solucin A (bicarbonato de sodio 0,1 M): disolver 84 g de NaHCO3 en suficiente cantidad de agua
destilado completando 1 litro.
Solucin B (carbonato de sodio 0,1 M): 106 g de Na2CO3 anhidro se disuelven en agua destilada
completando 1 litro.
Solucin A (ml)

Solucin B (ml)

Agua destilada (ml)

pH

76.8

7.7

915.5

67.6

10.8

921.6

9.2

56.8

14.4

928.4

9.4

45.3

18.2

936.5

9.6

34.3

21.9

943.8

9.8

24.6

25.1

950.3

10

17

27.6

955.4

10.2

11.2

29.5

959.3

10.4

7.1

30.8

962.1

10.6

4.1

31.7

964.2

10.8

BUFFER DE GLICINA
Glicina HCl (glicina 0.1 M, pH 2.2-3.6):
Solucin A (glicina 1M): disolver 75.07 g de glicina en cantidad suficiente de agua destilada, completando
un litro.
Solucin B: HCl 1 N.
Solucin A (ml)

Solucin B (ml)

Agua destilada (ml)

pH

100

88

812

2.2

100

64.8

835.2

2.4

100

48.4

851.6

2.6

100

33.6

866.4

2.8

100

22.8

877.2

100

16.4

883.6

3.2

100

12.8

887.2

3.4

100

10

890

3.6

Glicina NaOH (glicina 0,1 M, pH 8.6-10.4)

Solucin A (glicina 1 M): disolver 75,07 g de glicina en 1 litro de agua.
Solucin B (NaOH 1 N): disolver 40 g de NaOH en agua destilada llevando a 1 litro. Verificar normalidad
con SN valorada de HCl.
Solucin A (ml)

Solucin B (ml)

Agua destilada (ml)

pH

100

892

8.6

100

12

888

8.8

100

17.6

882.4

100

24

876

9.2

100

33.6

866.4

9.4

100

44.8

855.2

9.6

100

54.4

845.6

9.8

100

64

836

10

100

77.2

822.8

10.2

100

91

809

10.4

Para preparar SN buffer de glicina- cloruro a diferentes pH, se incorpora a las SN A indicadas, NaCl a una
molaridad 10 veces superior a la deseada.
BUFFER FOSFATOS (fosfatos 0,1 M, pH 7.5)
Solucin A (NaH2PO4 0,2 M): disolver 27.6 g de NaH2PO4 . H2O en agua destilada, completando un
litro.
Solucin B (Na2HPO4 0,2 M): 53.65 g de Na2HPO4. 7 H2O se disuelven en agua destilada, llevando el
volumen final a 1 litro.
Si se desea molaridad 0,2 se suprime el agua destilada.
Solucin A (ml)

Solucin B (ml)

Agua destilada (ml)

pH

467.5

32.5

500

5.7

460

40

500

5.8

450

50

500

5.9

438.5

61.5

500

425

75

500

6.1

407.5

92.5

500

6.2

387.5

112.5

500

6.3

367.5

132.5

500

6.4

342.5

157.5

500

6.5

312.5

187.5

500

6.6

282.5

217.5

500

6.7

255

245

500

6.8

225

275

500

6.9

195

305

500

165

335

500

7.1

140

360

500

7.2

115

385

500

7.3

95

405

500

7.4

80

420

500

7.5

65

435

500

7.6

52.5

447.5

500

7.7

42.5

457.5

500

7.8

35

465.473.5

500

7.9

500

26.5

BUFFER DE TRIS (tris hidroximetil-aminometano) HCl (tris 0,05 M, pH 7.2-9)

Solucin A (tris 0,2 M): se obtiene disolviendo 24.23 g de Tris en agua destilada, llevando a volumen de
un litro.

Solucin B: HCl 1 N
Solucin A (ml)

Solucin B (ml)

Agua destilada (ml)

pH

250

44.2

705.8

7.2

250

41.4

708.6

7.4

250

38.4

711.6

7.6

250

32.5

717.5

7.8

250

26.8

723.2

250

21.9

728.1

8.2

250

16.5

733.5

8.4

250

12.2

737.8

8.6

250

8.1

741.9

8.8

250

745

BUFFER VERONAL
Veronal veronal sdico cloruro sdico (pH 7.4-8.9 fuerza inica 0,1):
Solucin A (veronal 0,025 M): se prepara disolviendo 4,605 g de veronal en agua destilada llevando a un
litro.
Solucin B (veronal sdico 0,05 M): disolver 10,309 g de veronal sdico en agua destilada llevndolo a un
litro.
Solucin C (cloruro de sodio 0,5 M): 29.2 g de NaCl se disuelven en agua destilada hasta 1 litro.
Solucin A (ml) Solucin B (ml) Solucin C (ml) Agua destilada (ml)

pH

639

10

190

161

7.4

403

10

190

397

7.6

636

25

175

164

7.8

401

25

175

399

506

50

150

294

8.2

639

100

100

161

8.4

403

100

100

397

8.6

509

200

291

8.8

321

200

479

8.9

Veronal sdico HCl (pH 6.8-9.6 fuerza inica 0,1):

Solucin A (veronal sdico 0,5 M): 103.09 g de veronal sdico en agua destilada y completar 1 litro.
Solucin B: HCl 1 N
Solucin A (ml)

Solucin B (ml)

Agua destilada (ml)

pH

104.2

47.8

848

6.8

107.2

46.4

846.4

110.8

44.6

844.6

7.2

116.2

41.9

841.9

7.4

123.2

38.5

838.3

7.6

132.4

33.8

833.8

7.8

143.2

28.4

828.4

153.8

23.1

823.1

8.2

164.7

17.8

817.5

8.4

174.2

12.9

812.9

8.6

181.2

9.2

809.6

8.8

187.2

6.4

806.4

190.4

4.8

804.8

9.2

194.8

2.6

802.6

9.4

197

1.5

801.5

9.6

Soluciones Veronal Veronal sdico para electroforesis (fuerza inica 0,1):

Veronal (g)

Veronal sdico (g)

Agua destilada

pH

4.90

17.4

Hasta 1 litro

8.4

3.41

18.95

Hasta 1 litro

8.6

2.34

20.62

Hasta 1 litro

8.8

BUFFER PARA COMPLEMENTO

Debe guardarse en la heladera. En el momento de usar se diluye al 1/5 en agua destilada.
NaCl

42.5 g

c. dietilbarbitrico (veronal cido)

2.875 g

Dietilbarbiturato de sodio (veronal sdico) 1.875 g

CaCl2 anhidro

0.2 g

MgCl2 . H2O

1.0 g

H2O destilada, c.s.p.

1000 ml

Disolver el veronal cido en aproximadamente 500 ml de agua caliente. Disolver el veronal sdico en
agua fra y agregarle en fro, manteniendo el orden, los siguientes componentes: NaCl, CaCl2 y MgCl2.
Mezclar con la solucin de veronal sdico y medir el pH, el que debe oscilar entre 7,3 7,4. Si fuera
necesario ajustar con HCl o NaOH de normalidad adecuada. Completar a un litro con agua destilada.