Informes Ictiopatologia

2011
ICTIOPATOLOGIA Y PARASITOLOGIA
Informe de Prcticas
DOCENTE: Ing. Flix Rodolfo Meza Romualdo PRESENTADO POR: Yeny Ruth Aliaga Huahuala
SEMESTRE: Decimo
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
RESUMEN La prctica se llev a cabo el da 05 del mes de octubre a horas 9:30 am. Se realiz las observaciones de los manantiales que proveen de agua a las instalaciones del CIPP Chucuito, estos manantiales fueron el Manantial de Murinlaya ubicado a pocos metros del CIPP Chucuito (manantial que provee de agua a las ecloserias y estanques) y el Manantial de Umajalson Chico ubicado a en la zona alta de Chucuito. Los objetivos planteados para esta practica fueron: Determinar los factores etiolgicos que causan enfermedad; Observar directamente las instalaciones y semovientes. Los mtodos que se emplearon para la realizacin de la practica fueron la observacin in situ de los manantiales; la importancia de la observacin de las condiciones de estos manantiales en cuanto a sanidad de trata se basa en que stos recursos son los responsables de las posibles enfermedades que se presentan en los ejemplares que se cultivan en el CIPP Chucuito.
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1. INTRODUCCION El agua es uno de los elementos renovables de la naturaleza de gran importancia, la humanidad se ve beneficiada con este recurso en mltiples casos en sus diferentes estados como por ejemplo una de las actividades desarrolladas por el hombre es el cultivo de especies hidrobiolgicas, la cual debe llevarse a cabo siguiendo los criterios adecuados de cmo llevar una racional explotacin del recurso sin afectar el medio natural. El factor ms importante y fundamental para una piscigranja es asegurar el elemento agua, que debe ser de buena calidad durante todo el ao y debe de conservarse este recurso en su pureza natural. La cantidad de agua disponible junto a su calidad en relacin con el cultivo, determina la importancia de la piscicultura. La cantidad de agua requerida para la piscicultura esta en funcin al tamao de la piscigranja, al tipo de suelo, al nivel de evaporacin y la precipitacin fluvial. Es indispensable asegurar una cantidad suficiente de agua disponible, la cual depende sobre todo la orientacin de la piscicultura extensiva o intensiva. Para la ubicacin de una piscigranja se deben de tener en cuenta la cantidad y calidad de agua de los manantiales La calidad del agua est referida al contenido de ciertos gases y sales que la hacen idnea para la crianza de peces, pero principalmente es necesario que sean limpias correntosas y no se enturbien con las lluvias, por esta razn debe preferirse las aguas de manantial previamente oxigenadas. En cuanto a la cantidad de agua, debe asegurarse el abastecimiento de agua permanente durante todo el ao con un caudal apropiado para las renovaciones de las distintas instalaciones de acuerdo a las cantidades mximas de carga de peces por m2 y m3 y estadio biolgico de los mismos. En la seleccin de recurso se debe tener en cuenta el caudal mnimo en pocas de estiaje.
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2. OBJETIVOS Determinar los factores etiolgicos que causan enfermedad Observar directamente las instalaciones y semovientes
3. MATERIALES Cuaderno de campo: para realizar todos los apuntes necesarios durante la observacin in situ de los manantiales Cmaras fotogrficas o digitales: para tomar fotografas de los lugares en observacin. Bolgrafos: utilizados para apuntar los datos resaltantes en el cuaderno de practicas.
4. REVISION BIBLIOGRAFICA (MARTIN, 1976 citado por GODOY (2002)), Indican que las aguas que provienen de manantiales son de tipo reocreno, eucreno y limnocreno, son excelentes para la crianza de peces y dentro de las numerosas ventajas que ofrece al piscicultor, es que son muy limpias, con temperaturas que estn influenciadas en minima parte por las variaciones estacionales del ambiente exterior, es decir casi estable todo el ao y tambin la uniformidad de abastecimiento que permite un mejor control de la produccin. Pero este incoveniente, son normalmente deficientes de oxigeno en su nacimiento, deficiencia que a menudo es acompado de un elevado contenido de CO 2, tambin puede presentar altos tenores de N2 (gas inerte), en el caso de saturacin en el agua puede producir la llamada enfermedad del gas. (PONS, 1979 citado por GODOY (2002)). El agua del manantial hay que llegar a oxigenar durante el trayecto hacia la granja o criadero. El empleo de agua de manantial se adecua a las necesidades de suministros del laboratorio de incubacin de los primeros das de alevinaje. GODOY (2001). Indica que en la acuicultura la calidad y la seguridad de suministro de agua son factores crticos en la seleccin del lugar. Es asi que el agua de alimentacin para una piscigranja debe ser pura y fresca y es imprescindible proceder a su anlisis fsico qumico y biolgico. Siendo las aguas alcalinas mas favorables por ser productivas y ricas en alimento natural; desde el punto de vista qumico, es esencial que el agua este suficientemente oxigenada en todo tiempo y estacin. (GODOY, 2002 citado por CHOQUEHUAYTA (2008)). Para la truchicultura hay que descontar hay que descontar las aguas demasiadas calientes tambin las aguas demasiado frias, debe de tener una temperatura lo mas constante posible.
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El agua no debe de ser turbia, mas bien transparentes y especialmente no debe de existir fabricas, minas y ningn foco contaminante del cuerpo de gua. En definitiva el agua debe de ser libre de materiales que le den color y sabor, y tambie debe de ser libre de agentes patgenos que es uno de los factores de mortalidad que han de aquejar en las piscigranjas. El organismo gubernamental FONCODES (2006). Seala que aunque exista conocimiento de la existencia de truchas en el cuerpo de agua (rio, riachuelo), es preciso someter a un anlisis para evitar posteriores fracasos, pues no son idnticas las condiciones en que viven las truchas libres que cuando las concentramos en estanques para su cra industrial y comercializacin. Es importante que aguas arriba de la piscifactora no haya industrias capaces de alterar cualquiera de las condiciones anteriormente anotadas con vertimientos nocivos al cauce del cual se efecta el suministro; de todas formas, lo mejor es que no haya industrias de ninguna clase. 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES RESULTADOS a) Para determinar los factores etiolgicos que causan enfermedad, se realizaron los siguientes mtodos: Se realizo la visita in situ a los manantiales de Murinlaya y Umajalson en donde se observo los componentes que existan alrededor de ambos manantiales, siendo el manantial de Murinlaya el manantial principal que provee de agua a la piscicultura del CIPP-Chucuito, este manantial se encuentra cercado con una pequea valla y no cuenta con ninguna tapa que asegure en mayor proporcin su calidad. Naturalmente por encontrarse en estas condiciones y no tener un cerco seguro por las acciones del medio natural como por ejemplo la accin del viento hacen que lleguen al manantial todo tipo de contaminantes tanto visibles como microscpicos, de esta manera no se asegura la calidad del agua y se tiene un enorme porcentaje de que esta agua provoque daos serios los ejemplares que se cultivan en la piscicultura, siendo los mas propensos a contraer enfermedad las ovas que se han de encontrar en la ecloseria, siendo el primer punto de captacin del agua de manantial. Alrededor del manantial se observo la presencia de material fecal de equino y algunos residuos solidos. Dentro del manantial cercado con material de concreto se observ la presencia de algas de diversas especies, haciendo que los bordes de las paredes del pequeo pozo de material de concreto se torne a un color verde por el pigmento que stas presentan como composicin.
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De igual manera otro de los factores que se observ como agentes etiolgicos fue la presencia de equinos (madre yegua con su potrillo) pastando cerca de la valla que divide al manantial del medio; es asi que estos equinos obviamente fueron uno de los causantes de la presencia de materiales fecales cerca de la toma de manantial de Murinlaya.
Se observa en la primera parte de la figura 1 las heces de ganado equino, vacuno amontonado a unos cuantos metros del manantial principal de Murinlaya. b) Para observar directamente las instalaciones y semovientes se tiene los siguientes mtodos y resultados La piscisultura de Chucuito capta agua del manantial de Murinlaya, donde se tiene como primer punto de toma de agua y recepcin la ecloseria, ste agua captada se dirige directamente sin tener antes un tratado previo hacia las incubadoras contenientes de ovas embrionadas y a las artesas que contienen en ellas alevinos que han de ser sembrados posteriormente en estanques o jaulas. Las instalaciones del CIPP-Chucuito cuentan con escasa infraestructura y en donde un no se puede realizar un manejo de calidad, puesto que en los estanques diversos se observ acumulacin de material fecal de los ejemplares de trucha asentados en el fondo y el alimento proveido a stos de igual manera llegaron a asentarse en el fondo de los estanques, siendo este un foco de infeccin para los ejemplares. El recorrido que sigue el agua del manantial de Murinlaya desde su captacin hasta que salga fuera de la poscicultura es la siguiente:
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DISCUSIONES En un estudio piloto de la truchicultura en Santa Catarina realizadas en los meses de noviembre de 1983 y enero de 1984 a la regin de Lajes, Estado de Santa Catarina. La finca est situada en la terraza de un pequeo valle muy cerrado. El tipo de suelo es adecuado aunque tiene cierta abundancia de roca. El rio tiene frecuentes enturbiamientos aunque no son muy intensos ni duraderos. La zona tiene abundante arbolado. Las instalaciones proyectadas presentan anualmente un caudal del rio y de los 2 manantiales. En las fases de incubacin y primer alevinaje se usaron agua de manantial. Fueron detectados los siguientes procesos patolgicos: Infecciones de origen bacteriano a nivel de branquias promovidas por la turbidez del agua y; la baja calidad de la misma. Al realizar la comparacin de este centro piloto y la piscicultura de Chucuito se ve que en Santa Catarina se tuvo infecciones provocadas por la turbidez del agua a comparacin del manantial de Murinlaya podra nicamente enfermedades provocadas por causa de la contaminacin mayormente por fecas de animales que pastan cerca de la toma de agua. Segn estudios pilotos que se realizaron en pisciculturas por la organizacin gubernamental de (FONCODES, 2006) sealan que Los estanques de concreto deben ser limpiados peridicamente (2 3 veces al mes) parta evitar la acumulacin de residuos alimenticios y desechos en el fondo de stos, evitando la concentracin de amoniaco en el agua que impide al respiracin de los peces. Los estanques seminaturales de ser posible es conveniente exponerlos al sol una vez al ao y los de concreto una vez limpiados es necesario desinfectarlos para evitar el contagio de hongos y bacterias. Se contrasta con las conclusiones que Foncodes realiza, puesto que son los estanques unas de las instalaciones con las cuales se debe de tener el sumo cuidado puesto que si no se les realiza una limpieza continua estas pueden llegar a convertirse y ser un foco de gran contaminacin par la propagacin de enfermedades
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las cuales posteriormente traeran grandes prdidas econmicas al tener como resultado de una enfermedad la muerte de nuestros ejemplares. 6. CONCLUSIONES Existen diversos factores etiolgicos que pueden causar enfermedades en nuestros ejemplares ya que el principal manantial con el que cuenta el CIPPChucuito y de donde capta el recurso hdrico para ser captado en forma directa y llevada a la ecloseria no cuenta con la asepsia necesaria ni con un tratamiento previo antes de ingresar a la ecloseria en donde son las ovas embrionadas ubicadas en las incubadoras las que reciben directamente esta agua. La contaminacin fecal que existe alrededor de la principal toma de captacin de agua del Manantial de Murinlaya esta dada por los siguientes factores etiolgicos: fecas de ganado equino, vacuno, fecas posibles de caninos, materiales y residuos slidos ubicados alrededor del manantial, algas y plantas dentro y fueran del manantial cercado con material de concreto. Se concluye que las instalaciones del CIPP-Chucuito no cuentan con una limpieza continua puesto que durante toda la practica se observ en todos los estanques que existe una gran sedimentacin de material orgnico compuesto por los desechos fecales de los ejemplares, alimento sedimentado, lo cual hace que dentro de los estanques exista una gran productividad de algas por los compuestos amoniacales que existe dentro de cada estanque.
7. RECOMENDACIONES En cuanto a la captacin de agua del manantial de Murinlaya se recomienda que se realice un tratamiento del agua antes de que sta entre a la ecloseria; esto podra darse construyendo una pequea poza o estanque a donde el agua podra ser captada y se le de un previo tratamiento para eliminar coliformes fecales que existan en el agua. Respecto a las instalaciones, stas deberan de recibir una limpieza constante de todos los sedimentos que siempre han de lograr caer, de esta manera se minimiza la contraccin de enfermedades causadas por hongos, bacterias y otros paritos que pueden llegar a ubicarse en los estanques.
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8. BIBLIOGRAFIA CHOQUEHUAYTA H, A. H. 2008. Manual de crianza de truchas en estanques y lombricultura. Proyecto corredor Puno Cusco. Puno Per. 91 pg. FONCODES. Proyecto Piscigranja de truchas Vitis (CONST.). 2006. Manual de truchicultura. Lima Per. 24 pg. GODOY A, M. 2002. Truchicultura. Editorial Gama. Ayacucho Per. 247 pg.
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RESUMEN La prctica se llev a cabo el da 07 del mes de octubre a horas 9:30 am. en el laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas en donde se realiz la preparacin de medios de cultivo para posteriormente realizar aislamientos de bacterias y hongos, para tal fin se utilizaron cuatro agares diferentes, teniendo los siguientes agares: Caldo Brain Heart Broth Caldo Cerebro Corazn (BHI) se preparo en 6 tubos de ensayo cada uno de 10ml. el cual nos servir para poder identificar Estreptococos, Meningococos, entre otros. Agar Mc Conkey preparado en 2 placas petri, este medio fue preparado con la finalidad de poder obtener coliformes. Agar Salmonella Shigella (SS) que fue preparado en 2 placas petri, este medio fue preparado para obtener Salmonellas y Shigellas. y finalmente se tubo la preparacin de Agar Saboraud (AS) en 3 placas petri, este medio de cultivo se preparo para obtener el crecimiento de hongos. Todos los medios de cultivo fueron preparados con agua destilada.
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1. INTRODUCCION El reconocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. En general todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro nutrientes, aunque la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, asi como la cantidad relativa de cada nutriente. Un medio de cultivo es una solucin acuosa en las que estn presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento y multiplicacin de los microorganismos en el laboratorio; con el objeto de aislar las diferentes especies bacterianas u hongos, para luego proceder a su identificacin y llevar a cabo una serie de estudios complementarios. En los medios de cultivo empleados para la propagacin de microorganismos deben prevalecer condiciones adecuadas de humedad. Son necesarios un medio hmedo y una atmosfera hmeda para un buen crecimiento de clulas vegetativas. De igual manera el pH o la reaccin del medio de cultivo es extremadamente importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de estos prefieren medios que sean aproximadamente neutros, mientras que otros prefieren un medio que sea ms o menos cidos. La temperatura normalmente adecuada para el crecimiento de microorganismos mesofilos esta entre los 15 y 43 C. En cambio los microorganismos psicrofilos se desarrollan a 0C; y otros como los termfilos pueden crecer a 80 C. Los microorganismos patgenos en general, estn limitados por una escala de temperaturas, comparativamente estrecha, alrededor de los 37 C, mientras que los saprofitos normalmente la tienen mucho mas ancha. Los medios de cultivo deben siempre almacenarse en atmosfera fra y humeda (refrigeracion) para evitar su deterioro y su deshidratacin, preferentemente en tubos con tapon de rosca o en botellas. Los tubos con medios que se han mantenido durante cualquier periodo de tiempo, de deben de calentar un poco antes de su uso. El medio liquido debe calentarse en un bao de agua hirviendo, o por corriente de vapor, durante unos minutos para que desaparezcan los gases disueltos, y despus enfriarse rpidamente en agua fra, sin agitacin, un momento antes de la inoculacin. Los tubos de agar deben derretirse y dejarse solidificar a fin de asegurar una superficie humeda. Es recomendable guardar los medios en placas o en tubos dentro de bolsas de plstico selladas, asi es posible conservarlos entre 2 semanas y hasta 4 meses.
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2. OBJETIVOS Preparar medios de cultivo para la siembra de diversos microorganismos.
3. MATERIALES 3.1. MATERIALES DE BIOSEGURIDAD Mandil blanco: para poder proteger la vestimenta de cualquier reactivo o microorganismos que puedan impregnarse en ellos. Guantes de latex: para proteger la piel y evitar la contaminacin por el contacto directo de las manos con los medios de cultivos. Gorro blanco: utilizado para evitar la contaminacin del ambiente de trabajo por medio del cabello. Barbijo: para protegernos y proteger los medios de cultivo con diversos microorganismos.
3.2. MATERIALES DE LABORATORIO Agua destilada: empleada en la disolucin del agar en el matraz. Matraz: utilizado para contener el agar y su disolucin en l. Tubos de ensayo: con una capacidad de 10ml. los cuales fueron empleados para contener al medio de cultivo BHI. Placas petri: utilizados para contener medios de cultivo despus de su disolucin en el matraz. Balanza analtica: para pesar la cantidad en gramos de los medios de cultivo a preparar. Cocinilla elctrica: empleado en la disolucin del medio de cultivo ene l matraz al ser calentado mediante movimientos suaves. Cajita de papel: para pesar dentro de ste la cantidad de medio de cultivo a utilizarse.
3.3. MEDIOS DE CULTIVO Caldo Infusin Cerebro Corazn (BHI): ideal para el crecimiento de Estreptococoa, Neumococos, Meningococos. Medio selectivo para hongos. Agar Mac Conkey: ideal para el crecimiento de organismos coliformes. Agar Salmonella Shigella (SS): para el crecimiento de Salmonellas y Shigellas. Agar Sabouraud (AS): para el cultivo de hongos y levaduras.
4. REVISION BIBLIOGRAFICA Segn MENDO RUBIO, un medio de cultivo adecuado es aquel que contenga los elementos nutricios esenciales en concentraciones adecuadas, la cantidad necesaria de sal y el adecuado volumen de agua, se encuentra exento de sustancias inhibidoras del
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organismo que se va a cultivar, tenga la consistencia deseada, la reaccin (pH) conveniente para el metabolismo del cultivo, y ser estril. Hoy en di se dispone comercialmente de muchos medios de cultivos deshidratados, que son estables y se adaptan perfectamente a su empleo en el laboratorio, las recomendaciones bsicas antes de preparar un medio de cultivo son: Los ingredientes debern ser medidos en cantidad exacta y en un recipiente adecuado. Agregar el volumen de agua necesario, preferentemente en dos partes. Agregar primero aproximadamente la mitad del volumen necesario para disolver los ingredientes, y se aade despus el resto. El agua debe ser destilada o desmineralizada, de reaccion neutra. Si se trata de disolver un medio que contiene agar, ser necesario el calor. No se recomienda el calentamiento sobre la llama, se debe preferir el empleo del bao Mara o de vapor. Una disolucin completa se reconoce por la ausencia de granulos de agar en las paredes del recipiente. Para evitar la formacin de agua de condensacin, no deben verterse demasiado calientes los medios de cultivo a las placas sino despus de enfriarlos a T entre 50 y 45C, en bao de agua. Los medios de cultivo deshidratados se fabrican de tal manera que, si se siguen las normas de preparacin, no necesitan clarificarse por filtracin ni corregir de pH despus de su esterilizacin. Pero es oportuno que despus de su preparacin listos para su uso, se compruebe su pH final. La esterilizacin de los medios de cultivo se pueden efectuar por calor, filtracin o medios qumicos.
El mtodo normal para la inmediata esterilizacin de los medios de cultivo es utilizando el autoclave, en el cual el vapor de agua a presin es el agente esterilizante. La esterilizacin por autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presin (121C). se recomienda para medio liquido en cantidades superiores a 1 litro. El medio se prepara de acuerdo a su formula, se distribuyen en frascos que se tapan con algodn no absorbente o tapn poco apretado y se colocan estos en autoclave.los tubos deben ponerse en gradillas o canastas. Los frascos nunca deben contener mas de dos tercios de su capacidad total. Segn PANREAC (2002), El AGAR Mac Conkey: Historia Este medio se basa en la frmula original de MacConkey a base de sales biliares, rojo neutro y lactosa para el aislamiento de bacilos entricos Gram-negativos. El medio ha
sufrido mltiples variaciones en el transcurso del tiempo, ya sea por la adicin de otros ingredientes o por la modificacin de las proporciones entre ellos. Actualmente corresponde a las recomendaciones de la USP y la Ph. Eur. Fundamento Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras. INFUSION CEREBRO CORAZON, AGAR (BHI) Historia Este medio se basa en el caldo de Rosenow. Los primeros estudios demostraron que el medio era ms eficaz que otros como base glucosada en el aislamiento de determinadas bacterias. Si adems se le aada antibitico el medio se haca selectivo para el cultivo de levaduras y hongos, sobre todo en muestras altamente contaminadas por bacterias. Fundamento Por la presencia de peptona, infusin de cerebro de ternera e infusin de corazn de res, se tienen los componentes necesarios para nutrir microorganismos exigentes. La glucosa se emplea para la fermentacin y el fosfato como tampn. Por la adicin de antibitico es un medio adecuado para el estudio de hongos patgenos. Debido a su contenido de glucosa es menos indicado para la caracterizacin de hemlisis, pero puede utilizarse suplementado con sangre. AGAR SALMONELLA SHIGELLA (SS) Historia Hormaeche, Surraco, Hardy y otros han encontrado que la formulacin de este medio es la mejor para el aislamiento de Salmonella y Shigella. Una de las principales aplicaciones es el diagnstico de las enfermedades diarreicas debidas a estos grmenes. La composicin del medio permite detectar tambin la produccin de Hidrgeno Sulfuro. Su formulacin corresponde a las recomendaciones de la APHA para anlisis de alimentos. Fundamento Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citrato se consigue la inhibicin de las bacterias Gram-positivas. Por el mismo citrato conjuntamente con el tiosulfato
se frena notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus que podran acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias que no fermentan la lactosa dan colonias incoloras, mientras que las que la fermentan hacen virar el rojo neutro por la produccin de cido y quedan claramente diferenciadas. Tambin se diferencian los microorganismos productores de Hidrgeno Sulfuro que da un precipitado negro de Hierro(II) Sulfuro, que se observa en el centro de la colonia. La peptona y el extracto de carne son aportes nutritivos suficientes para estas especies patgenas, aunque algunas Shigellas muy exigentes se desarrollen lentamente. AGAR SABOURAUD (AS) Fundamento En estos medios la peptona es la fuente nitrogenada para el crecimiento de hongos y levaduras, el carbohidrato (glucosa o maltosa) es la fuente energtica. La maltosa, cumple con los requerimientos nutritivos, de forma general, de hongos y levaduras patgenas y no patgenas. El medio Agar Maltosa Sabouraud tambin permite la diferenciacin de Pseudomonas en poblaciones mixtas, ya que potencia la produccin de piocianina. El Agar de Glucosa Sabouraud corresponde a las recomendaciones de la USP y de la Ph. Eur. para recuento de hongos y levaduras, ya que se trata de un medio que suministra todos los requerimiento nutritivos necesarios. El medio lquido de Sabouraud se prepara segn los procedimientos oficiales para realizar pruebas de esterilidad. El crecimiento selectivo que se da en los medios Sabouraud que no contienen antibitico, depende por completo del pH cido de estos medios. Sin embargo, se recomienda la utilizacin de antibiticos de amplio espectro en muestras muy contaminadas. El Cloranfenicol inhibe la mayor parte de contaminantes bacterianos y la Cicloheximida inhibe el desarrollo de hongos saprofitos. Los medios de Sabouraud pueden ser adicionados con otros productos, para mejorar su selectividad: - Potasio telurito al 0,015% concentracin final, inhibe el crecimiento bacteriano. - 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro a 100 mg/l, permite diferenciar Candida albicans de las otras Candidas. - Penicilina a razn de 20.000 UI/l, inhibe la mayor parte de bacterias. Pueden utilizarse otros antimicrobianos, as como indicadores que puedan hacer que el medio sea selectivo y/o diferencial. 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES RESULTADOS Para la preparacin de medios de cultivos primeramente se procede a pesar la cantidad que indica en el rotulo de cara frasco de agar. Naturalmente las indicaciones que se ven estn indicadas en cantidades de gramos para la preparacin en 1L de agua
destilada, es asi que se realiza un calculo de regla de tres simple de acuerdo a los mililitros a utilizarse de agua destilada. PREPARACION DE MEDIOS: CALDO BRAIN HEART BROTH (CALDO CEREBRO CORAZON - BHI) Para 1L de agua destilada se requieren 36.6 g. del medio BHI, el medio preparado se colocara en 6 tubos de 10ml cada uno haciendo un total de 60ml. entonces slo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usar; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 36.6 g. de BHI ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de BHI ------------- 60 ml. de agua destilada
36.6 x 60 X= ------------------1000
X= 2.2 g. de BHI en 60ml de agua destilada Se debe de pesar 2.2 g. de BHI y en una probeta medir la cantidad de 60ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla elctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfre un poco para luego distribuir en tubos de 10ml. en cada uno. Tapar con pequeos tapones (hechos de algodn, cubiertos con gasa y atados con pabilo), envolver los tubos con papel craft y autoclavar. AGAR MacCONKEY Para 1L de agua destilada se requieren 55.0 g. del medio Agar MacConkey, el medio preparado se colocara en 2 placas petri. entonces slo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usar que ser de 40ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 55.0 g. de Agar MacConkey ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de Agar MacConkey ------------- 40 ml. de agua destilada
55.0 x 40 X= ------------------1000
X= 2.2 g. de Agar MacConkey en 40ml de agua destilada

Se debe de pesar 2.2 g. de Agar MacConkey y en una probeta medir la cantidad de 40ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla elctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfre un poco para luego distribuir en 2 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar. AGAR SALMONELLA SHIGELLA (SS) Para 1L de agua destilada se requieren 62.5 g. del medio SS, el medio preparado se colocara en 2 placas petri. entonces slo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usar que ser de 40ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 62.5 g. de Medio SS ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de Medio SS ------------- 40 ml. de agua destilada
62.5 x 40 X= ------------------1000
X= 2.5 g. de Medio SS en 40ml de agua destilada Se debe de pesar 2.5 g. de Medio SS y en una probeta medir la cantidad de 40ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla elctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfre un poco para luego distribuir en 2 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar. AGAR SABOURAUD (AS) Para 1L de agua destilada se requieren 3.3 g. de glucosa (maltosa), 10.0g. de peptona y 16.6 g de agar; el medio preparado se colocara en 3 placas petri. entonces slo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usar que ser de 60ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 3.3 g. de Glucosa (maltosa) --------- 1000 ml. de agua destilada 0.2 g./60 ml. 10.0 g. de peptona --------- 1000 ml. de agua destilada 0.6 g./60 ml. 16.6 g. de agar --------- 1000 ml. de agua destilada 1.0 g./60 ml. En total se deben de pesar 1.8 g. de Medio AS en 60ml de agua destilada Se debe de pesar 1.8 g. de Medio AS y en una probeta medir la cantidad de 60ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver
en una cocinilla elctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfre un poco para luego distribuir en 3 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar.
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DISCUSION PANREAC, (2003) indica que el pH de los medios de cultivo se ajusta durante su fabricacin a los valores descritos en cada uno de ellos. Sin embargo, la calidad del agua que se utiliza en su hidratacin, la utilizacin de medios no recientes etc., pueden modificar este parmetro por lo que es aconsejable verificarlo y reajustarlo si fuera necesario. En algunos casos se puede ajustar el pH despus de la esterilizacin de forma asptica y utilizando soluciones cidas (Acido Clorhdrico) o bsicas (Sodio Hidrxido) estriles. En los medios slidos la medida se hace a 45-50C (el agar todava no ha gelificado) mientras que en los lquidos se hace a temperatura ambiente. Los medios cidos (pH<5) pueden presentar malas gelificaciones debido a la posible hidrlisis del Agar con la temperatura. Son medios que no es aconsejable refundirlos, y si es imprescindible, es aconsejable aadirles agar. El mtodo ms comnmente utilizado para la esterilizacin es el Autoclavado. Sin embargo, hay ingredientes en algunos medios que no mantienen sus propiedades si se someten a altas temperaturas. Para ellos existen diferentes procesos de esterilizacin. BAILON, et al., (2003) Un medio de cultivo es cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos, puede ser llamado un medio o dicho con mayor precisin un medio de cultivo. Los medios sirven para dos propsitos principales: Para fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprobarse las caractersticas de cultivo y. Facilitar algunas reacciones bioqumicas que luego pueden ser demostrables por observacin directa, o bien, indirectamente por la reaccin en presencia de algunos reactivos adicionales. Todas las reacciones de cultivo asi como las bioqumicas, dependen dela composicin del medio y de la naturaleza de cultivo que se estudie. Los medios de cultivo pueden clasificarse en: medios de cultivo bsicos; medios enriquecidos; medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento y los medios especiales. 6. CONCLUSIONES Para la preparacin de medios de cultivo se deben de tener en cuenta las indicaciones del rotulo que se encuentra en el frasco contenedor del medio de cultivo. Es asi que de acuerdo a las indicaciones y la cantidad de agua destilada que menciona en todos los rotulos que ha de ser 1L. por los gramos indicados, se proceder a preparar el medio de cultivo de acuerdo a la cantidad de agua destilada con la que se quiere trabajar realizando previamente un calculo de regla de tres simple para poder saber la cantidad de medio de cultivo que se ha de preparar.
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7. RECOMENDACIONES Es recomendable trabajar con medios de cultivo que aun no hayan caducado en la fecha de vencimiento, como tambin es muy importante tener en cuenta que en el momento de preparar los medios de cultivo se debe de trabajar con todas las normas de bioseguridad tanto para no contaminarnos ni contaminar los medios a prepararse con alguna sustancia o microorganismo que no se desee.
8. BIBLIOGRAFIA BAILN L, L., GONZALES M, R. C. y CERVANTES S, A. 2003. Atlas de pruebas bioqumicas para identificar bacterias. Universidad Autnoma de Mxico. Facultad de Estudios Superiores de Zaragoza. 175 pg. PANREAC. 2003. Manual bsico de microbiologa. Editorial Panreac Quimica S.A. Cultimed. Madrid Espaa. 267 pg.
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RESUMEN La prctica se llev a cabo el da 12 del mes de octubre a horas 9:30 am. en el CIPPChucuito en donde se realizo el aislamiento de bacterias por el mtodo de frotis en la superficie corporal de trucha arco iris mediante un isopo, el cual fue posteriormente introducido en tubos de ensayo con medio de cultivo BHI, luego estas muestras fueron llevadas al laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas en donde se realiz la siembra en medios de cultivo selectivo Agar MacConkey para posteriormente realizar aislamientos de bacterias, se seleccionaron las colonias despus de haber sembrado en Agar Mc Conkey por el mtodo de estrias despus de 48 horas de incubacin para ser llevadas a incubar en medios bioqumicos diferenciales: TSI, LIA, CS e INDOL, pasadas las 48 horas de incubacin se harn las lecturas correspondientes para identificar las especies de bacterias que se lograron obtener.
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1. INTRODUCCION Desde su produccin hasta su consumo, los pescados y mariscos transitan por una serie de etapas en las cuales existe la posibilidad de que accedan diferentes microorganismos a la matriz alimenticia. La calidad y cantidad de los mismos definen las modificaciones que tienen lugar en el producto y sobre todo las consecuencias de su consumo por parte del hombre. Estas modificaciones pueden ir desde cambios inofensivos en las caractersticas organolpticas del alimento, hasta consecuencias graves causadas por las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA). La carga microbiana de los peces vivos es un reflejo de la microflora de su entorno en el momento de su pesca o captura pero se modifica de acuerdo con la capacidad de los distintos microorganismos de multiplicarse en los subambientes que constituyen las superficies de la piel, las agallas y el tracto digestivo. El tejido muscular y los rganos internos de los peces sanos recin capturados son normalmente estriles, pero suelen encontrarse bacterias en la piel, caparazn quitinoso y agallas, as como en el tracto intestinal. El sistema circulatorio de algunos crustceos no es cerrado, como la hemolinfa de los cangrejos, y puede albergar concentraciones elevadas de bacterias, especialmente del gnero Vibrio. La microflora del pescado de agua dulce en aguas sin contaminacin aparente se compone principalmente de bacterias Gram negativas como Moraxella, Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, Micrococcus, Staphylococcus, Bacillus y Corynebacterium. Poseen una mayor proporcin de bacterias Gram positivas que los pescados de mar. Aeromonas spp. constituye la especie predominante de la microflora. El pescado procedente de aguas dulces ms contaminadas presenta mayores recuentos de esta especie y de enterobacterias. Los patgenos varan con la especie del pescado y la condicin del agua. Se ha visto que Cl. botulinum se encuentra en truchas y salmones criados en balsas, de los cuales tambin se aislaron Salmonella, Listeria, Shigella y otros patgenos potenciales. Campylobacter jejuni se aisl de la superficie del pescado de agua dulce.
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2. OBJETIVOS Aislar bacterias patgenas en trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) del CIPPChucuito
3.2. MATERIALES DE LABORATORIO Mechero Isopos Gradillas o canastillas Bistur Asas de siembra Lapicero indelebre
3.2. MEDIOS DE CULTIVO Caldo Infusin Cerebro Corazn (BHI): ideal para el crecimiento de Estreptococoa, Neumococos, Meningococos. Medio selectivo para hongos. Agar Mac Conkey: ideal para el crecimiento de organismos coliformes. Pruebas diferenciales: TSI, LIA, CS, INDOL.
4. REVISION BIBLIOGRAFICA Segn CAMACHO, et al. (2009) indica que la definicin generalmente aceptada para el trmino coliformes describe a estos microorganismos como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas, aunque algunos pueden ser fermentadores tardos o no fermentadores, como Citrobacter y Serratia, respectivamente. La mayora de los coliformes pueden encontrarse en la flora normal del tracto digestivo del hombre o animales, por lo cual son expulsados especialmente en las heces, por ejemplo Escherichia coli. Por esta razn, su presencia constante en la
materia fecal, los coliformes son el grupo ms ampliamente utilizado en la microbiologa de alimentos como indicador de prcticas higinicas inadecuadas. Como los coliformes tambin pueden vivir en otros ambientes, se distingue entre coliformes totales y coliformes fecales. Esta prctica se refiere a coliformes totales. Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales. Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades. 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES Para el aislamiento de bacterias primeramente se selecciono de un estanque un ejemplar un pez que presente heridas, se coloc al ejemplar en una tina las zonas muestreadas fueron la aleta caudal y aleta dorsal, se realizo un frotis con isopos y estos fueron colocados en los tubos de ensayo contenidos con el medio de cultivo agar MacConkey.
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Posteriormente el isopo con la muestra obtenida se introdujo al tubo de ensayo, conteniendo 10ml. de Caldo BHI (caldo cerebro corazon), stas fueron trasladadas al laboratorio.
Los tubos con el contenido; se llevan a la estufa d incubacin a una temperatura de 20C x 24 a 48 horas. Terminado el tiempo de incubacin se procede a la siembre en agares o medios selectivos: agar MacConkey; agar Salmonella Shigella. En condiciones de esterilidad (cerca del mechero) se realiza el isopado y se procede a realizar la siembre en placas en superficie por agotamiento o estrias en los agares.
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Las placas sembradas se incuban a un temperatura de 25C x 48 horas
Se seleccionan las colonias trancurrido el tiempo de incubacin y se incuban en medios bioqumicos y/o diferenciales: TSI, LIA, CS, INDOL y se incuban a 25C x 48 horas.
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Transcurridas las 48 horas se procedi a identificar en generos y/o especies de bacterias
Muestra de aleta dorsal TSI: muestra una coloracin amarilla en toda la estructura del tubo de ensayo por lo tanto hubo produccin de acido: A/A LIA: ocurri la descarboxilacion de la lisina (LIA (+)): K/K CS: presenta una coloracin verde hubo utilizacin del citrato CS(-) INDOL: presenta un halo rojo en la parte superior despus de la adicion del reactivo de kovacs, esto indica que es INDOL (+). Viendo las tablas para identificacin de bacterias de determino que la bacteria aislada fue E. coli, teniendo las siguientes lecturas TSI LIA CS INDOL A/A K/K (-) (+)
Muestra de aleta dorsal TSI: hubo produccin alcalina y acida K/A

LIA: coloracin roja y en la parte inferior produccin de acido: R/A CS: hubo produccin de gas (+) e hidrogeno sulfurado (+) por la coloracin oscura en la parte inferior de tubo. INDOL: presenta un halo rojo en la parte superior por lo tanto se considera Indol (+). Recurriendo con los resultados a las tablas de identificacin para poder determinar la bacteria encontrad se tuvo es: Proteus vulgaris Teniendo: TSI K/A LIA R/K CS (+) INDOL (+)
Muestra de aleta caudal TSI: hubo produccin alcalina y acida K/A LIA: K/A con hidrogeno sulfurado (-) CS: (+) INDOL: no presenta un halo rojo en la parte superior por lo tanto se considera Indol (-) Recurriendo con los resultados a las tablas de identificacin para poder determinar la bacteria encontrad se tuvo es: Enterobacter sakasakii Teniendo: TSI K/A LIA K/A CS (+) INDOL (-)
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6. CONCLUSIONES Las bacterias encontradas al realizar el muestreo por el mtodo de frotis en los peces de la piscicultura del CIPP-Chucuito presentan contaminacin fecal puesto que se encontr aparte de E.coli, bacteria del genero Enterobacter, especie Enterobacter sakasakii, el cual es un indicador de gran contaminacin fecal que usualmente no debera encontrarse en un piscicultura que cuenta con la sanidad necesaria.
7. BIBLIOGRAFIA AGURTO S, T. 2009. Microbiologa. Bioqumica bacteriana. Enterobacteriaceae. Primera edicin. Editorial Imprenta Union. Lima Per. 314 pg. CAMACHO A., GILES M., PALAO M., SERRANO B., y VELAZQUEZ O. 2009. Tcnicas para el anlisis microbiolgico de alimentos. Segunda edicin. Facultad de Quimica, UNAM. Mexico. Microbiologa de pescados y mariscos. 2009. Microbiologa de los alimentos. 31 pg.
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RESUMEN La prctica se llev a cabo el da 12 del mes de octubre a horas 9:30 am. en el CIPPChucuito en donde se realizo el aislamiento de bacterias por el mtodo de raspado con bisturi en la superficie corporal de trucha arco iris, el cual fue posteriormente introducido en medio de cultivo AS dentro de placas petri, realizando un pequeo corte en forma de triangulo, luego estas muestras fueron llevadas al laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas en donde se realiz la siembra en medios de cultivo selectivo Agar AS para posteriormente realizar la identificacin despus de 12 dias de incubacin.
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1. INTRODUCCION
Los peces dulceacucolas frecuentemente sufren infecciones por hongos como Phoma sp., Trichoderma sp. y Aspergillus sp. y oomycetos como Aphanomyces invadens, Achlya sp. y Saprolegnia sp., tanto en vida libre como en granjas de produccin acucola siendo, en estas ltimas, factores importantes de prdidas econmicas. Estas enfermedades se presentan al coincidir parsitos viables, en nmero suficiente y con sobrevida larga con un hospedador susceptible. Para generarse la oportunidad de infeccin tambin debe darse una ruta de infeccin adecuada, como en la ruptura de las barreras mucosas y epiteliales, acompaado de cambios en los parmetros fsicoqumicos de la calidad del agua. Algunos problemas causados por micosis en peces son controlables por la aplicacin de Verde Malaquita, un colorante que puede ser aplicado solo o en combinacin con otros fungicidas. Sin embargo, en los ltimos aos el uso de este compuesto ha sido prohibido en muchos pases ya que se le han atribuido propiedades teratognicas, de modo que este tipo de patologas han vuelto a ser un problema de importancia en la acuicultura herramientas moleculares para la deteccin de Saprolegnia sp. como la creacin de una base de datos genmica de oomycetos OGD en la busca de posibles mtodos de deteccin y/o tratamiento de infecciones; sin embargo, an no se han generado soluciones prcticas para su aplicacin en la acuicultura. 2. OBJETIVOS Aislar e identificar hongos y de muestras de peces con infeccin evidente.
3.2. MATERIALES DE LABORATORIO Mechero Gradillas o canastillas Bistur Asas de siembra

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Lapicero indelebre
4. METODOS Para obtener muestras de los peces infectados (Carassius auratus) se realiz un raspado superficial de la epidermis con asa de siembra, tomando el material a partir de la parte media lateral del cuerpo. Utilizar el medio AS en placas petri rotuladas en la tapa. Con el trazado en la base de la placa, trazar pequeos triangulos y en la punta del bistur esteril, extraer una pequea capa de agar y colocar el raspado que se hizo al pez. Tapar la placa del agar sembrado y llevar a laboratorio. Cubrir las placas con papel craft e incubar al medio ambiente por una semana o 12 dias. Transcurrido el tiempo observas e identificar los hongos encontrados. 5. DISCUSION PARRA, et al. 2006 en el Aislamiento e identificacin de hongos presentes en muestras de estanques dulceacucolas. A partir de las muestras de estanques y raspado de epidermis de peces infectados se aislaron cultivos puros de ocho diferentes especies de hongos y oomycetos, de los cuales se identificaron tres gneros de hongos: Phoma sp., Trichoderma sp. y Aspergillus sp., y un genero de oomyceto: Saprolegnia sp. Los organismos A (Phoma sp.), B (Trichoderma sp.), D (Saprolegnia sp.) y H fueron obtenidos de muestras de estanques dulceacucolas, por otro lado, los organismos C (Aspergillus sp.), E, F, y G fueron obtenidos del raspado de epidermis de la parte media lateral de peces infectados. De los organismos aislados se hizo su identificacin con claves taxonmicas y reacciones con el kit BIAADETECT obtenido a partir de D. coccus. Al analizar las muestras de agua obtenidas de estanques dulceacucolas se determin la presencia de tres hongos, de los cuales, se cuenta con la identificacin de los gneros Phoma sp. y Trichoderma sp. as como la presencia e identificacin del oomyceto Saprolegnia sp. En los raspados de epidermis realizados a peces visiblemente infectados se obtuvo el crecimiento de cuatro especies de hongos de los cuales se identific el genero Aspergillus sp. Los hongos y oomycetos cultivados a partir de las muestras son organismos comnmente patgenos en cultivos dulceacucolas siendo el oomyceto Saprolegnia sp. el agente infeccioso con mayor patogenicidad para los peces dulceacucolas cultivados. La identificacin de Saprolegnia sp. en los cultivos es un avance importante para as poder prevenir la infeccin de este oomyceto en peces dulceacucolas, ya que al contar con este agente patgeno en el agua, aunado a factores como el estrs provocado por densidad de siembra y cambio en la temperatura del cultivo, se favorecera en los peces la invasin
al ocurrir ruptura de la barrera mucosa epitelial dndose la enfermedad conocida como saprolegniosis; disminuyendo as la calidad y nmero de animales. 6. CONCLUSION La deteccin de oomycetos y hongos patgenos en el cultivo complementados con una supervisin constante de los parmetros temperatura, nitritos y oxigeno, entre otros, da la posibilidad de implementar tratamientos profilcticos, dando como resultado la disminucin en el desarrollo de parsitos y la reduccin de infecciones en los organismos acuticos. 7. BIBLIOGRAFIA PARRA L, R., GARCIA F., BORREGO L., LANZ H., DEL RIO I. y DE LA CRUZ F., 2006. Deteccin de hongos y oomycetos en cultivos de peces dulceacucolas empleando el kit BIAADETECT. Facultad de Ciencia y Tecnologia. Oaxaca Mexico. 7 pg.
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2. OBJETIVOS Preparar medios de cultivo para la siembra de diversos microorganismos.

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X= 2.2 g. de Agar MacConkey en 40ml de agua destilada

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Las placas sembradas se incuban a un temperatura de 25C x 48 horas

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Transcurridas las 48 horas se procedi a identificar en generos y/o especies de bacterias

Muestra de aleta dorsal TSI: hubo produccin alcalina y acida K/A

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3.2. MATERIALES DE LABORATORIO Mechero Gradillas o canastillas Bistur Asas de siembra

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