2011

ICTIOPATOLOGIA Y PARASITOLOGIA

Informe de Prcticas
DOCENTE: Ing. Flix Rodolfo Meza Romualdo PRESENTADO POR: Yeny Ruth Aliaga Huahuala

SEMESTRE: Decimo

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RESUMEN La prctica se llev a cabo el da 07 del mes de octubre a horas 9:30 am. en el laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas en donde se realiz la preparacin de medios de cultivo para posteriormente realizar aislamientos de bacterias y hongos, para tal fin se utilizaron cuatro agares diferentes, teniendo los siguientes agares: Caldo Brain Heart Broth Caldo Cerebro Corazn (BHI) se preparo en 6 tubos de ensayo cada uno de 10ml. el cual nos servir para poder identificar Estreptococos, Meningococos, entre otros. Agar Mc Conkey preparado en 2 placas petri, este medio fue preparado con la finalidad de poder obtener coliformes. Agar Salmonella Shigella (SS) que fue preparado en 2 placas petri, este medio fue preparado para obtener Salmonellas y Shigellas. y finalmente se tubo la preparacin de Agar Saboraud (AS) en 3 placas petri, este medio de cultivo se preparo para obtener el crecimiento de hongos. Todos los medios de cultivo fueron preparados con agua destilada.

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1. INTRODUCCION El reconocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. En general todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro nutrientes, aunque la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, asi como la cantidad relativa de cada nutriente. Un medio de cultivo es una solucin acuosa en las que estn presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento y multiplicacin de los microorganismos en el laboratorio; con el objeto de aislar las diferentes especies bacterianas u hongos, para luego proceder a su identificacin y llevar a cabo una serie de estudios complementarios. En los medios de cultivo empleados para la propagacin de microorganismos deben prevalecer condiciones adecuadas de humedad. Son necesarios un medio hmedo y una atmosfera hmeda para un buen crecimiento de clulas vegetativas. De igual manera el pH o la reaccin del medio de cultivo es extremadamente importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de estos prefieren medios que sean aproximadamente neutros, mientras que otros prefieren un medio que sea ms o menos cidos. La temperatura normalmente adecuada para el crecimiento de microorganismos mesofilos esta entre los 15 y 43 C. En cambio los microorganismos psicrofilos se desarrollan a 0C; y otros como los termfilos pueden crecer a 80 C. Los microorganismos patgenos en general, estn limitados por una escala de temperaturas, comparativamente estrecha, alrededor de los 37 C, mientras que los saprofitos normalmente la tienen mucho mas ancha. Los medios de cultivo deben siempre almacenarse en atmosfera fra y humeda (refrigeracion) para evitar su deterioro y su deshidratacin, preferentemente en tubos con tapon de rosca o en botellas. Los tubos con medios que se han mantenido durante cualquier periodo de tiempo, de deben de calentar un poco antes de su uso. El medio liquido debe calentarse en un bao de agua hirviendo, o por corriente de vapor, durante unos minutos para que desaparezcan los gases disueltos, y despus enfriarse rpidamente en agua fra, sin agitacin, un momento antes de la inoculacin. Los tubos de agar deben derretirse y dejarse solidificar a fin de asegurar una superficie humeda. Es recomendable guardar los medios en placas o en tubos dentro de bolsas de plstico selladas, asi es posible conservarlos entre 2 semanas y hasta 4 meses.

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2. OBJETIVOS Preparar medios de cultivo para la siembra de diversos microorganismos.

3. MATERIALES 3.1. MATERIALES DE BIOSEGURIDAD Mandil blanco: para poder proteger la vestimenta de cualquier reactivo o microorganismos que puedan impregnarse en ellos. Guantes de latex: para proteger la piel y evitar la contaminacin por el contacto directo de las manos con los medios de cultivos. Gorro blanco: utilizado para evitar la contaminacin del ambiente de trabajo por medio del cabello. Barbijo: para protegernos y proteger los medios de cultivo con diversos microorganismos.

3.2. MATERIALES DE LABORATORIO Agua destilada: empleada en la disolucin del agar en el matraz. Matraz: utilizado para contener el agar y su disolucin en l. Tubos de ensayo: con una capacidad de 10ml. los cuales fueron empleados para contener al medio de cultivo BHI. Placas petri: utilizados para contener medios de cultivo despus de su disolucin en el matraz. Balanza analtica: para pesar la cantidad en gramos de los medios de cultivo a preparar. Cocinilla elctrica: empleado en la disolucin del medio de cultivo ene l matraz al ser calentado mediante movimientos suaves. Cajita de papel: para pesar dentro de ste la cantidad de medio de cultivo a utilizarse.

3.3. MEDIOS DE CULTIVO Caldo Infusin Cerebro Corazn (BHI): ideal para el crecimiento de Estreptococoa, Neumococos, Meningococos. Medio selectivo para hongos. Agar Mac Conkey: ideal para el crecimiento de organismos coliformes. Agar Salmonella Shigella (SS): para el crecimiento de Salmonellas y Shigellas. Agar Sabouraud (AS): para el cultivo de hongos y levaduras.

4. REVISION BIBLIOGRAFICA Segn MENDO RUBIO, un medio de cultivo adecuado es aquel que contenga los elementos nutricios esenciales en concentraciones adecuadas, la cantidad necesaria de sal y el adecuado volumen de agua, se encuentra exento de sustancias inhibidoras del
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organismo que se va a cultivar, tenga la consistencia deseada, la reaccin (pH) conveniente para el metabolismo del cultivo, y ser estril. Hoy en di se dispone comercialmente de muchos medios de cultivos deshidratados, que son estables y se adaptan perfectamente a su empleo en el laboratorio, las recomendaciones bsicas antes de preparar un medio de cultivo son: Los ingredientes debern ser medidos en cantidad exacta y en un recipiente adecuado. Agregar el volumen de agua necesario, preferentemente en dos partes. Agregar primero aproximadamente la mitad del volumen necesario para disolver los ingredientes, y se aade despus el resto. El agua debe ser destilada o desmineralizada, de reaccion neutra. Si se trata de disolver un medio que contiene agar, ser necesario el calor. No se recomienda el calentamiento sobre la llama, se debe preferir el empleo del bao Mara o de vapor. Una disolucin completa se reconoce por la ausencia de granulos de agar en las paredes del recipiente. Para evitar la formacin de agua de condensacin, no deben verterse demasiado calientes los medios de cultivo a las placas sino despus de enfriarlos a T entre 50 y 45C, en bao de agua. Los medios de cultivo deshidratados se fabrican de tal manera que, si se siguen las normas de preparacin, no necesitan clarificarse por filtracin ni corregir de pH despus de su esterilizacin. Pero es oportuno que despus de su preparacin listos para su uso, se compruebe su pH final. La esterilizacin de los medios de cultivo se pueden efectuar por calor, filtracin o medios qumicos.

El mtodo normal para la inmediata esterilizacin de los medios de cultivo es utilizando el autoclave, en el cual el vapor de agua a presin es el agente esterilizante. La esterilizacin por autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presin (121C). se recomienda para medio liquido en cantidades superiores a 1 litro. El medio se prepara de acuerdo a su formula, se distribuyen en frascos que se tapan con algodn no absorbente o tapn poco apretado y se colocan estos en autoclave.los tubos deben ponerse en gradillas o canastas. Los frascos nunca deben contener mas de dos tercios de su capacidad total. Segn PANREAC (2002), El AGAR Mac Conkey: Historia Este medio se basa en la frmula original de MacConkey a base de sales biliares, rojo neutro y lactosa para el aislamiento de bacilos entricos Gram-negativos. El medio ha
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sufrido mltiples variaciones en el transcurso del tiempo, ya sea por la adicin de otros ingredientes o por la modificacin de las proporciones entre ellos. Actualmente corresponde a las recomendaciones de la USP y la Ph. Eur. Fundamento Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras. INFUSION CEREBRO CORAZON, AGAR (BHI) Historia Este medio se basa en el caldo de Rosenow. Los primeros estudios demostraron que el medio era ms eficaz que otros como base glucosada en el aislamiento de determinadas bacterias. Si adems se le aada antibitico el medio se haca selectivo para el cultivo de levaduras y hongos, sobre todo en muestras altamente contaminadas por bacterias. Fundamento Por la presencia de peptona, infusin de cerebro de ternera e infusin de corazn de res, se tienen los componentes necesarios para nutrir microorganismos exigentes. La glucosa se emplea para la fermentacin y el fosfato como tampn. Por la adicin de antibitico es un medio adecuado para el estudio de hongos patgenos. Debido a su contenido de glucosa es menos indicado para la caracterizacin de hemlisis, pero puede utilizarse suplementado con sangre. AGAR SALMONELLA SHIGELLA (SS) Historia Hormaeche, Surraco, Hardy y otros han encontrado que la formulacin de este medio es la mejor para el aislamiento de Salmonella y Shigella. Una de las principales aplicaciones es el diagnstico de las enfermedades diarreicas debidas a estos grmenes. La composicin del medio permite detectar tambin la produccin de Hidrgeno Sulfuro. Su formulacin corresponde a las recomendaciones de la APHA para anlisis de alimentos. Fundamento Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citrato se consigue la inhibicin de las bacterias Gram-positivas. Por el mismo citrato conjuntamente con el tiosulfato
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se frena notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus que podran acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias que no fermentan la lactosa dan colonias incoloras, mientras que las que la fermentan hacen virar el rojo neutro por la produccin de cido y quedan claramente diferenciadas. Tambin se diferencian los microorganismos productores de Hidrgeno Sulfuro que da un precipitado negro de Hierro(II) Sulfuro, que se observa en el centro de la colonia. La peptona y el extracto de carne son aportes nutritivos suficientes para estas especies patgenas, aunque algunas Shigellas muy exigentes se desarrollen lentamente. AGAR SABOURAUD (AS) Fundamento En estos medios la peptona es la fuente nitrogenada para el crecimiento de hongos y levaduras, el carbohidrato (glucosa o maltosa) es la fuente energtica. La maltosa, cumple con los requerimientos nutritivos, de forma general, de hongos y levaduras patgenas y no patgenas. El medio Agar Maltosa Sabouraud tambin permite la diferenciacin de Pseudomonas en poblaciones mixtas, ya que potencia la produccin de piocianina. El Agar de Glucosa Sabouraud corresponde a las recomendaciones de la USP y de la Ph. Eur. para recuento de hongos y levaduras, ya que se trata de un medio que suministra todos los requerimiento nutritivos necesarios. El medio lquido de Sabouraud se prepara segn los procedimientos oficiales para realizar pruebas de esterilidad. El crecimiento selectivo que se da en los medios Sabouraud que no contienen antibitico, depende por completo del pH cido de estos medios. Sin embargo, se recomienda la utilizacin de antibiticos de amplio espectro en muestras muy contaminadas. El Cloranfenicol inhibe la mayor parte de contaminantes bacterianos y la Cicloheximida inhibe el desarrollo de hongos saprofitos. Los medios de Sabouraud pueden ser adicionados con otros productos, para mejorar su selectividad: - Potasio telurito al 0,015% concentracin final, inhibe el crecimiento bacteriano. - 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro a 100 mg/l, permite diferenciar Candida albicans de las otras Candidas. - Penicilina a razn de 20.000 UI/l, inhibe la mayor parte de bacterias. Pueden utilizarse otros antimicrobianos, as como indicadores que puedan hacer que el medio sea selectivo y/o diferencial. 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES RESULTADOS Para la preparacin de medios de cultivos primeramente se procede a pesar la cantidad que indica en el rotulo de cara frasco de agar. Naturalmente las indicaciones que se ven estn indicadas en cantidades de gramos para la preparacin en 1L de agua
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destilada, es asi que se realiza un calculo de regla de tres simple de acuerdo a los mililitros a utilizarse de agua destilada. PREPARACION DE MEDIOS: CALDO BRAIN HEART BROTH (CALDO CEREBRO CORAZON - BHI) Para 1L de agua destilada se requieren 36.6 g. del medio BHI, el medio preparado se colocara en 6 tubos de 10ml cada uno haciendo un total de 60ml. entonces slo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usar; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 36.6 g. de BHI ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de BHI ------------- 60 ml. de agua destilada

36.6 x 60 X= ------------------1000

X= 2.2 g. de BHI en 60ml de agua destilada Se debe de pesar 2.2 g. de BHI y en una probeta medir la cantidad de 60ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla elctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfre un poco para luego distribuir en tubos de 10ml. en cada uno. Tapar con pequeos tapones (hechos de algodn, cubiertos con gasa y atados con pabilo), envolver los tubos con papel craft y autoclavar. AGAR MacCONKEY Para 1L de agua destilada se requieren 55.0 g. del medio Agar MacConkey, el medio preparado se colocara en 2 placas petri. entonces slo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usar que ser de 40ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 55.0 g. de Agar MacConkey ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de Agar MacConkey ------------- 40 ml. de agua destilada

55.0 x 40 X= ------------------1000

X= 2.2 g. de Agar MacConkey en 40ml de agua destilada

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Se debe de pesar 2.2 g. de Agar MacConkey y en una probeta medir la cantidad de 40ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla elctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfre un poco para luego distribuir en 2 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar. AGAR SALMONELLA SHIGELLA (SS) Para 1L de agua destilada se requieren 62.5 g. del medio SS, el medio preparado se colocara en 2 placas petri. entonces slo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usar que ser de 40ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 62.5 g. de Medio SS ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de Medio SS ------------- 40 ml. de agua destilada

62.5 x 40 X= ------------------1000

X= 2.5 g. de Medio SS en 40ml de agua destilada Se debe de pesar 2.5 g. de Medio SS y en una probeta medir la cantidad de 40ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla elctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfre un poco para luego distribuir en 2 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar. AGAR SABOURAUD (AS) Para 1L de agua destilada se requieren 3.3 g. de glucosa (maltosa), 10.0g. de peptona y 16.6 g de agar; el medio preparado se colocara en 3 placas petri. entonces slo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usar que ser de 60ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 3.3 g. de Glucosa (maltosa) --------- 1000 ml. de agua destilada 0.2 g./60 ml. 10.0 g. de peptona --------- 1000 ml. de agua destilada 0.6 g./60 ml. 16.6 g. de agar --------- 1000 ml. de agua destilada 1.0 g./60 ml. En total se deben de pesar 1.8 g. de Medio AS en 60ml de agua destilada Se debe de pesar 1.8 g. de Medio AS y en una probeta medir la cantidad de 60ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver
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en una cocinilla elctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfre un poco para luego distribuir en 3 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar.

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DISCUSION PANREAC, (2003) indica que el pH de los medios de cultivo se ajusta durante su fabricacin a los valores descritos en cada uno de ellos. Sin embargo, la calidad del agua que se utiliza en su hidratacin, la utilizacin de medios no recientes etc., pueden modificar este parmetro por lo que es aconsejable verificarlo y reajustarlo si fuera necesario. En algunos casos se puede ajustar el pH despus de la esterilizacin de forma asptica y utilizando soluciones cidas (Acido Clorhdrico) o bsicas (Sodio Hidrxido) estriles. En los medios slidos la medida se hace a 45-50C (el agar todava no ha gelificado) mientras que en los lquidos se hace a temperatura ambiente. Los medios cidos (pH<5) pueden presentar malas gelificaciones debido a la posible hidrlisis del Agar con la temperatura. Son medios que no es aconsejable refundirlos, y si es imprescindible, es aconsejable aadirles agar. El mtodo ms comnmente utilizado para la esterilizacin es el Autoclavado. Sin embargo, hay ingredientes en algunos medios que no mantienen sus propiedades si se someten a altas temperaturas. Para ellos existen diferentes procesos de esterilizacin. BAILON, et al., (2003) Un medio de cultivo es cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos, puede ser llamado un medio o dicho con mayor precisin un medio de cultivo. Los medios sirven para dos propsitos principales: Para fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprobarse las caractersticas de cultivo y. Facilitar algunas reacciones bioqumicas que luego pueden ser demostrables por observacin directa, o bien, indirectamente por la reaccin en presencia de algunos reactivos adicionales. Todas las reacciones de cultivo asi como las bioqumicas, dependen dela composicin del medio y de la naturaleza de cultivo que se estudie. Los medios de cultivo pueden clasificarse en: medios de cultivo bsicos; medios enriquecidos; medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento y los medios especiales. 6. CONCLUSIONES Para la preparacin de medios de cultivo se deben de tener en cuenta las indicaciones del rotulo que se encuentra en el frasco contenedor del medio de cultivo. Es asi que de acuerdo a las indicaciones y la cantidad de agua destilada que menciona en todos los rotulos que ha de ser 1L. por los gramos indicados, se proceder a preparar el medio de cultivo de acuerdo a la cantidad de agua destilada con la que se quiere trabajar realizando previamente un calculo de regla de tres simple para poder saber la cantidad de medio de cultivo que se ha de preparar.

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7. RECOMENDACIONES Es recomendable trabajar con medios de cultivo que aun no hayan caducado en la fecha de vencimiento, como tambin es muy importante tener en cuenta que en el momento de preparar los medios de cultivo se debe de trabajar con todas las normas de bioseguridad tanto para no contaminarnos ni contaminar los medios a prepararse con alguna sustancia o microorganismo que no se desee.

8. BIBLIOGRAFIA BAILN L, L., GONZALES M, R. C. y CERVANTES S, A. 2003. Atlas de pruebas bioqumicas para identificar bacterias. Universidad Autnoma de Mxico. Facultad de Estudios Superiores de Zaragoza. 175 pg. PANREAC. 2003. Manual bsico de microbiologa. Editorial Panreac Quimica S.A. Cultimed. Madrid Espaa. 267 pg.

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RESUMEN La prctica se llev a cabo el da 12 del mes de octubre a horas 9:30 am. en el CIPPChucuito en donde se realizo el aislamiento de bacterias por el mtodo de frotis en la superficie corporal de trucha arco iris mediante un isopo, el cual fue posteriormente introducido en tubos de ensayo con medio de cultivo BHI, luego estas muestras fueron llevadas al laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas en donde se realiz la siembra en medios de cultivo selectivo Agar MacConkey para posteriormente realizar aislamientos de bacterias, se seleccionaron las colonias despus de haber sembrado en Agar Mc Conkey por el mtodo de estrias despus de 48 horas de incubacin para ser llevadas a incubar en medios bioqumicos diferenciales: TSI, LIA, CS e INDOL, pasadas las 48 horas de incubacin se harn las lecturas correspondientes para identificar las especies de bacterias que se lograron obtener.

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1. INTRODUCCION Desde su produccin hasta su consumo, los pescados y mariscos transitan por una serie de etapas en las cuales existe la posibilidad de que accedan diferentes microorganismos a la matriz alimenticia. La calidad y cantidad de los mismos definen las modificaciones que tienen lugar en el producto y sobre todo las consecuencias de su consumo por parte del hombre. Estas modificaciones pueden ir desde cambios inofensivos en las caractersticas organolpticas del alimento, hasta consecuencias graves causadas por las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA). La carga microbiana de los peces vivos es un reflejo de la microflora de su entorno en el momento de su pesca o captura pero se modifica de acuerdo con la capacidad de los distintos microorganismos de multiplicarse en los subambientes que constituyen las superficies de la piel, las agallas y el tracto digestivo. El tejido muscular y los rganos internos de los peces sanos recin capturados son normalmente estriles, pero suelen encontrarse bacterias en la piel, caparazn quitinoso y agallas, as como en el tracto intestinal. El sistema circulatorio de algunos crustceos no es cerrado, como la hemolinfa de los cangrejos, y puede albergar concentraciones elevadas de bacterias, especialmente del gnero Vibrio. La microflora del pescado de agua dulce en aguas sin contaminacin aparente se compone principalmente de bacterias Gram negativas como Moraxella, Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, Micrococcus, Staphylococcus, Bacillus y Corynebacterium. Poseen una mayor proporcin de bacterias Gram positivas que los pescados de mar. Aeromonas spp. constituye la especie predominante de la microflora. El pescado procedente de aguas dulces ms contaminadas presenta mayores recuentos de esta especie y de enterobacterias. Los patgenos varan con la especie del pescado y la condicin del agua. Se ha visto que Cl. botulinum se encuentra en truchas y salmones criados en balsas, de los cuales tambin se aislaron Salmonella, Listeria, Shigella y otros patgenos potenciales. Campylobacter jejuni se aisl de la superficie del pescado de agua dulce.

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2. OBJETIVOS Aislar bacterias patgenas en trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) del CIPPChucuito

3. MATERIALES 3.1. MATERIALES DE BIOSEGURIDAD Mandil blanco: para poder proteger la vestimenta de cualquier reactivo o microorganismos que puedan impregnarse en ellos. Guantes de latex: para proteger la piel y evitar la contaminacin por el contacto directo de las manos con los medios de cultivos. Gorro blanco: utilizado para evitar la contaminacin del ambiente de trabajo por medio del cabello. Barbijo: para protegernos y proteger los medios de cultivo con diversos microorganismos.

3.2. MATERIALES DE LABORATORIO Mechero Isopos Gradillas o canastillas Bistur Asas de siembra Lapicero indelebre

3.2. MEDIOS DE CULTIVO Caldo Infusin Cerebro Corazn (BHI): ideal para el crecimiento de Estreptococoa, Neumococos, Meningococos. Medio selectivo para hongos. Agar Mac Conkey: ideal para el crecimiento de organismos coliformes. Pruebas diferenciales: TSI, LIA, CS, INDOL.

4. REVISION BIBLIOGRAFICA Segn CAMACHO, et al. (2009) indica que la definicin generalmente aceptada para el trmino coliformes describe a estos microorganismos como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas, aunque algunos pueden ser fermentadores tardos o no fermentadores, como Citrobacter y Serratia, respectivamente. La mayora de los coliformes pueden encontrarse en la flora normal del tracto digestivo del hombre o animales, por lo cual son expulsados especialmente en las heces, por ejemplo Escherichia coli. Por esta razn, su presencia constante en la
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materia fecal, los coliformes son el grupo ms ampliamente utilizado en la microbiologa de alimentos como indicador de prcticas higinicas inadecuadas. Como los coliformes tambin pueden vivir en otros ambientes, se distingue entre coliformes totales y coliformes fecales. Esta prctica se refiere a coliformes totales. Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales. Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades. 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES Para el aislamiento de bacterias primeramente se selecciono de un estanque un ejemplar un pez que presente heridas, se coloc al ejemplar en una tina las zonas muestreadas fueron la aleta caudal y aleta dorsal, se realizo un frotis con isopos y estos fueron colocados en los tubos de ensayo contenidos con el medio de cultivo agar MacConkey.

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Posteriormente el isopo con la muestra obtenida se introdujo al tubo de ensayo, conteniendo 10ml. de Caldo BHI (caldo cerebro corazon), stas fueron trasladadas al laboratorio.

Los tubos con el contenido; se llevan a la estufa d incubacin a una temperatura de 20C x 24 a 48 horas. Terminado el tiempo de incubacin se procede a la siembre en agares o medios selectivos: agar MacConkey; agar Salmonella Shigella. En condiciones de esterilidad (cerca del mechero) se realiza el isopado y se procede a realizar la siembre en placas en superficie por agotamiento o estrias en los agares.

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Las placas sembradas se incuban a un temperatura de 25C x 48 horas

Se seleccionan las colonias trancurrido el tiempo de incubacin y se incuban en medios bioqumicos y/o diferenciales: TSI, LIA, CS, INDOL y se incuban a 25C x 48 horas.

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Transcurridas las 48 horas se procedi a identificar en generos y/o especies de bacterias

Muestra de aleta dorsal TSI: muestra una coloracin amarilla en toda la estructura del tubo de ensayo por lo tanto hubo produccin de acido: A/A LIA: ocurri la descarboxilacion de la lisina (LIA (+)): K/K CS: presenta una coloracin verde hubo utilizacin del citrato CS(-) INDOL: presenta un halo rojo en la parte superior despus de la adicion del reactivo de kovacs, esto indica que es INDOL (+). Viendo las tablas para identificacin de bacterias de determino que la bacteria aislada fue E. coli, teniendo las siguientes lecturas TSI LIA CS INDOL A/A K/K (-) (+)

Muestra de aleta dorsal TSI: hubo produccin alcalina y acida K/A

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LIA: coloracin roja y en la parte inferior produccin de acido: R/A CS: hubo produccin de gas (+) e hidrogeno sulfurado (+) por la coloracin oscura en la parte inferior de tubo. INDOL: presenta un halo rojo en la parte superior por lo tanto se considera Indol (+). Recurriendo con los resultados a las tablas de identificacin para poder determinar la bacteria encontrad se tuvo es: Proteus vulgaris Teniendo: TSI K/A LIA R/K CS (+) INDOL (+)

Muestra de aleta caudal TSI: hubo produccin alcalina y acida K/A LIA: K/A con hidrogeno sulfurado (-) CS: (+) INDOL: no presenta un halo rojo en la parte superior por lo tanto se considera Indol (-) Recurriendo con los resultados a las tablas de identificacin para poder determinar la bacteria encontrad se tuvo es: Enterobacter sakasakii Teniendo: TSI K/A LIA K/A CS (+) INDOL (-)

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6. CONCLUSIONES Las bacterias encontradas al realizar el muestreo por el mtodo de frotis en los peces de la piscicultura del CIPP-Chucuito presentan contaminacin fecal puesto que se encontr aparte de E.coli, bacteria del genero Enterobacter, especie Enterobacter sakasakii, el cual es un indicador de gran contaminacin fecal que usualmente no debera encontrarse en un piscicultura que cuenta con la sanidad necesaria.

7. BIBLIOGRAFIA AGURTO S, T. 2009. Microbiologa. Bioqumica bacteriana. Enterobacteriaceae. Primera edicin. Editorial Imprenta Union. Lima Per. 314 pg. CAMACHO A., GILES M., PALAO M., SERRANO B., y VELAZQUEZ O. 2009. Tcnicas para el anlisis microbiolgico de alimentos. Segunda edicin. Facultad de Quimica, UNAM. Mexico. Microbiologa de pescados y mariscos. 2009. Microbiologa de los alimentos. 31 pg.

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