UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA SEDE BOGOT FACULTAD DE AGRONOMA GENTICA GENERAL

CONTROL GENTICO DE LA DORMANCIA EN SEMILLAS Andrea Botero Ramrez 716378

Francisco Acevedo Beltrn 716366

INDICE 1. Introduccin 2. Objetivos 3. Dormancia en semillas 3.1. Definicin de Dormancia 3.2. Tipos de Dormancia 3.3. Regulacin de la Dormancia 3.3.1. Regulacin de la dormancia por parte de las hormonas y otras pequeas molculas. 3.3.1.1. cido Absccico (ABA) 3.3.1.2. Giberelinas (GB) 3.3.1.3. Brasinoesteroides (BRs) 3.3.1.4. Etileno 3.3.1.5. Oxido ntrico, nitrato y especies activas de oxgeno. 3.4. Regulacin ambiental de la dormancia 3.4.1. Temperatura 3.4.2. Luz 3.5. Regulacin gentica de la dormancia 4. Conclusiones 5. Bibliografa

1. INTRODUCCIN La agricultura, es una de las actividades que mayor trascendencia ha tenido en el desarrollo de la humanidad, lo que ha requerido, se de paso a procesos tales como la domesticacin de plantas; actividad que implica la seleccin de diversas caractersticas que garantizan la obtencin de materiales vegetales con propiedades deseable a nivel agronmico. Es en ese sentido, que las plantas actualmente cultivadas han adquirido ciertas caractersticas y han perdido otras entre las cuales se observa la dormancia de las semillas (Finkelstein et al., 2008). La dormancia, se define como el fracaso de una semilla viable para completar el proceso de germinacin bajo condiciones ambientales favorables (Kornneef et al., 2002). Esta naturalmente, representa un mecanismo que garantiza la supervivencia de una especie bajo condiciones adversas, dado que gracias a la quiescencia del material vegetal, se asegura que la semilla pueda germinar luego de un tiempo con lo que procura evitar el riesgo de una muerte prematura por catstrofe (Bradford & Nonogaki, 2007). Dada la importancia de este proceso en la agricultura y en el entendimiento fisiolgico de las etapas iniciales del desarrollo de la planta, se ha dado paso al adelanto de mltiples estudios que se han esforzado por dilucidar los aspectos morfo-genticos que este fenmeno implica; no obstante an el discernimiento sobre el tema es muy pobre dada la inexactitud que existe respecto a la diferenciacin entre el inicio de la germinacin y la terminacin de la dormancia. La consecuencia ltima de esta contrariedad, se ha hecho evidente en la baja obtencin de resultados contundentes que relacionen procesos fisiolgicos que permitan hacer hincapi en la forma en que se da la interaccin genotipo-ambiente para que una semilla entre o permanezca dormante (Finkelstein et al.,2008). Por tal razn a continuacin se har un anlisis juicioso respecto a la temtica que se describi, para as, inducir al lector a la comprensin de la regulacin gentica de la dormancia, intentando dar a conocer los ms recientes estudios que procuran indicar no solo los genes que regulan dicho fenmeno sino adems su fuerte interaccin con el ambiente.

2. OBJETIVOS Estudiar del concepto de dormancia en semillas y la importancia de la misma en procesos de supervivencia de la especie. Comprender la importancia del fenmeno de dormancia en semillas, as como la regulacin de la misma. Analizar el control gentico de la dormancia en semillas, as como los factores ambientales que en este fenmeno actan.

Aumentar los conocimientos respecto a mecanismos biolgicos cuyo control est dado por factores genticos. Observar dentro de la revisin bibliogrfica la importancia del uso de organismos modelos tales como Arabidopsis thaliana para la comprensin y generalizacin de procesos fisiolgicos en las plantas.

3. DORMANCIA EN SEMILLAS 3.1. DEFINICIN DE DORMANCIA Una semilla, desde el momento en que se forma en la planta se enmarca dentro de un conjunto de factores morfo-fisiolgicos que determinan su desarrollo, es as como luego de su formacin, esta puede ser o no dormante. Dadas tales posibilidades, si la semilla es dormante, ingresar a tal periodo, pero si no lo es, germinar. Por tal primero se definir la dormancia, para luego precisar un poco respecto a la germinacin. Segn Baskins & Baskins (2004) citado por Finch-Savage & Leubner-Metzger (2006) una semilla dormante es aquella que no tiene la capacidad de germinar en un periodo de tiempo especfico bajo una combinacin de factores fsicoambientales que luego se hacen favorables para la germinacin, posterior a lo cual la semilla se hace no dormante. Una vez se ha concluido la etapa de dormancia en la semilla por la accin de un conjunto de factores que la regulan, se da paso al fenmeno que ms asociado a la misma encontramos, es decir, la germinacin la cual se suele relacionar con la dormancia puesto que no existe gran claridad respecto a la lnea que divide el final de una con el inicio de la otra, as pues a continuacin daremos a conocer concisamente el conjunto de pasos que involucra el brote de la semilla. En tal proceso inicialmente se observa la toma de agua por parte de la semilla seca por imbibicin, acto seguido se inicia la expansin del embrin. La toma de agua es un proceso trifsico con una toma rpida del lquido (Fase I. imbibicin) seguida por una fase estacionaria (fase II). Luego, se da un evidente incremento en la toma de agua (fase III.) esto ocurre durante la elongacin del embrin, lo que produce entonces la ruptura de las capas que lo cubren para as completar tal proceso. La elongacin celular es necesaria y generalmente se cree es suficiente cuando hay emergencia de la radcula (Finch-Savage & Leubner-Metzger, 2006). 3.2. TIPOS DE DORMANCIA La dormancia, puede tener lugar gracias a la interaccin de diversos aspectos, por tal, mltiples autores se han esforzado por hacer una clasificacin, que

suele diferir, as pues, observamos como se ha elaborado una categorizacin inicial con base en la distribucin de este fenmeno en el tiempo, dando paso a la descripcin de la dormancia primaria que se refiere a aquella que ocurre previa a la dispersin como parte del programa de desarrollo de la semilla, mientras que la dormancia secundaria se refiere a la adquisicin de este estado en semillas maduras posterior a la imbibicin, como resultado de un conjunto de condiciones que hacen propensa la germinacin (Bradford & Nonogaki, 2007). Por otra parte encontramos la clasificacin que ms utilidad prctica posee dada su relacin con la morfo-fisiologa de la semilla, esta se llevo a cabo por Baskins & Baskins (1998, 2004) citados por Finch-Savage & Leubner-Metzger (2006), quienes propusieron cinco clases de dormancia: la fisiolgica, la morfolgica, la morfo-fisiolgica, la fsica y la que combina la fisiolgica y fsica. El sistema anteriormente mencionado que integra las cinco clases, se divide adems en diversos tipos y niveles. Dormancia Fisiolgica: esta dormancia puede ser de tres clases profunda, intermedia y no profunda. La dormancia profunda, es aquella donde los embriones no crecern u originarn plntulas anormales; en estas los tratamientos con giberelinas (GA) no rompen la dormancia y se requieren reiterados tratamientos de choque trmico para que se de paso a la germinacin. La dormancia no profunda se da en embriones cuya germinacin produce plntulas normales; en este caso las GA rompen la dormancia. Dormancia morfolgica: ocurre en embriones que no se ha desarrollado en trminos de tamao, pero que si estn diferenciados. Esos embriones no son fisiolgicamente dormantes pero necesitan tiempo para crecer y germinar. Dormancia Morfo-fisiolgica: las semillas con este tipo de dormancia requieren algn tratamiento que rompa este estado, por ejemplo la combinacin de choques trmicos o la aplicacin de GA. De esta dormancia se conocen ocho niveles. Dormancia Fsica: se produce por capas impermeables al agua de clulas en empaliza en semillas o coberturas frutales que controlan el flujo de agua. Dormancia Combinada: esta es evidente en semillas con cobertura impermeable al agua (como en semillas con dormancia fsica) que se combina con la dormancia fisiolgica del embrin. Con base en esta clasificacin se han desarrollado diversos estudios que permiten hacer diferenciaciones claves que facilitan ahondar en el fenmeno de la dormancia, donde vemos por ejemplo que la del embrin se caracteriza por un bloqueo que inhibe el crecimiento, y as se limita la germinacin, mientras que la originada por la cobertura del embrin se caracteriza por el bloqueo en la expansin del mismo (Finch-Savage & Leubner-Metzger, 2006), lo que genera una

clave diferenciacin entre los estudios a efectuar en cada caso, conduciendo a diversos tipos de regulacin.

3.3. REGULACIN DE LA DORMANCIA

3.3.1. REGULACIN DE LA DORMANCIA POR HORMONAS Y OTRAS PEQUEAS MOLCULAS.

PARTE DE LAS

La dormancia en las semillas est controlada por un conjunto de sustancias que la inducen, mantienen o concluyen, as pues encontramos un buen nmero de hormonas y enzimas cuya acumulacin y degradacin regulan dicho estado en las semillas. Las principales sustancias que encontramos ejerciendo tal funcin son las giberelinas, el cido absccico, el etileno, los brasinoesteroides, el xido ntrico, los nitratos y especies activas de oxgeno. 3.3.1.1. CIDO ABSCICICO (ABA).

Muchas evidencias basadas en los estudios efectuados con base en los organismos modelo (Arabidopsis thaliana) han establecido, haciendo uso de mutantes, que el cido absccico (ABA) induce la dormancia durante la maduracin del embrin, puesto que los mutantes que producen concentraciones bajas de ABA o que secuestran ABA por medio de anticuerpos, o por la sobre-expresin de anticuerpos, presentan reduccin en la dormancia de sus semillas (Finkelstein et al., 2008). 3.3.1.2. GIBERELINAS (GA). Las giberelinas ejercen la funcin contraria al cido absccico, estimulando la germinacin por medio de la induccin de enzimas hidrolticas que rompen la barrera entre tejidos como el endospermo o la cobertura de semillas, induciendo la movilizacin de reservas nutricionales almacenadas, y estimulando la expansin del embrin (Finkelstein et al., 2008). 3.3.1.3. BRASINOESTEROIDES (BRs)

Los brasinoesteroides (BRs) son hormonas envueltas en la elongacin del tallo y el despliegue de las hojas que adems promueve la germinacin de las semillas (Finkelstein et al., 2008).

3.3.1.4.

ETILENO

El etileno promueve la ruptura de la dormancia a travs de interacciones con las seales que inducen la accin del ABA. As la estimulacin de la germinacin de las semillas puede ocurrir va antagonismo de la sealizacin del ABA (Finkelstein et al., 2008). 3.3.1.5. XIDO NTRICO, NITRATO Y ESPECIES ACTIVAS DE OXGENO. Los nitratos proveen durante el desarrollo de la dormancia una reduccin de la misma. La produccin enzimtica de NO en las plantas ocurre inicialmente gracias a la nitrato reductasa (NR) de nitrito y nitrato y posiblemente la oxido ntrico sintetaza cuya identidad es an muy ambigua (Finkelstein et al., 2008). Por otro lado, vemos como la accin de estos compuestos tiene su accin principal por medio de la modificacin de los niveles hormonales por la induccin de la expresin de enzimas que catalizan la desactivacin del ABA (CYO707A2) y la biosntesis de GA (GA3ox1). (Bradford & Nonogaki, 2007).

La regulacin e interaccin hormonal en las condiciones de dormancia o germinacin se ven ampliamente determinadas por las condiciones ambientales, como observamos en la siguiente grfica, en donde tenemos dos modelos; (a) Brassica en la cual se necesita de la ruptura del endospermo para dar paso a la germinacin, (b) Nicotiana sp donde solo es necesario de la ruptura de la testa y no del endospermo para el proceso germinativo.

Figura 1: Interacciones hormonales durante la regulacin de liberacin de la dormancia y germinacin de dos especies modelos (a) Brassica y (b) Nicotiana Sp.

Tomado de (Finch-Savage y Leubner-Metzger 2006)

3.4. REGULACIN AMBIENTAL DE LA DORMANCIA. La dormancia de las semillas es muy importante en el adelanto o retraso de la germinacin hasta que el ambiente sea favorable para el desarrollo de la misma. Ciertas condiciones deben converger con el fin de dar fin a la dormancia e iniciar la germinacin y viceversa, as pues vemos como actan en el desarrollo de dicho ambiente condiciones medioambientales tales como la humedad de rehidratacin, la temperatura y la luz. Dichas condiciones ambientales son factores determinantes en la accin de hormonas como las giberelinas y el cido absccico, como podemos ver esquematizado en la figura 2.

Figura 2: Modelo para la regulacin de la dormancia y germinacin por accin de cido absccico y giberelinas en respuesta al ambiente.

Tomado de (Finch-Savage y Leubner-Metzger 2006)

3.4.1. TEMPERATURA En procesos de germinacin, son importantes unos rangos que incluyen un mximo y un mnimo de temperatura. Por tal se observa que muchas especies vegetales detienen su proceso germinativo ante incrementos y disminuciones de temperatura (Toole et al., 1956). 3.4.2. LUZ La percepcin de la luz a travs del fitocromo en el comienzo de la germinacin ha sido relativamente muy bien estudiada. Con el uso de diversos mutantes se ha demostrado que los fitocromos B, D y E son necesarios para la regulacin foto reversible de la germinacin por el

espectro del rojo. La luz a travs del fitocromo incremente los contenidos de GA activa (Bradford & Nonogaki, 2007). Por otro lado, la accin regulatoria de este factor ambiental, se puede evidenciar gracias a que promueve la sntesis de GA, y la degradacin de ABA en semillas que han iniciado la germinacin, lo que finalmente afirma la fuerte influencia de este factor en procesos que regulan la dormancia (Finkelstein et al., 2008).

3.5. REGULACIN GENTICA DE LA DORMANCIA La dormancia al igual que la mayora de eventos fisiolgicos de los seres vivos se rige por modelos moleculares tpicos, donde se da la regulacin tanto positiva como negativa de procesos tanto transcripcionales como traduccionales y post-traduccionales que originan diferentes molculas que controlan la accin de otras y as se detienen o activan procesos que para este caso permiten el paso de una semilla dormante a la germinacin y viceversa. Es importante observar cmo, cada uno de los estudios que procuran efectuar el claro discernimiento de los procesos que involucra la dormancia de semillas, emplea una serie de herramientas importantes, entre las que encontramos principalmente el uso de organismos modelo tales como Arabidopsis thaliana, planta para la cual se han desarrollado varios mutantes que expresan alelos recesivos, los cuales producen protenas no funcionales, que son de utilidad para determinar si las protenas cumplen o no funcin alguna para la induccin o mantenimiento de la dormancia. Adems de esta estrategia, se han implementado otras un tanto ms especficas a nivel molecular, como lo son los QTL (mapeo de loci de caracteres cuantitativos) (Finkelstein et al., 2008). Tambin se debe hacer nfasis puede observar a nivel tanto traduccional, de forma tal que, a los ms relevantes aspectos en gentica. en que, la regulacin de este proceso, se transcripcional y traduccional como postcontinuacin se har una breve mencin de cada uno de estos mtodos de regulacin

Entre los mecanismos reguladores transcripcionales encontramos la accin de las giberelinas que estimulan la germinacin por medio de la transicin del desarrollo embrionario al vegetativo en parte mediado por el factor remodelante de la cromatina PICKLE (PKL) (Finkelstein et al., 2008). Entre tanto vemos como anlisis de microarreglos muestra que tanto brasinoesteroides como giberelinas inducen la expresin de genes que codifican para le elongacin de clulas; no obstante esas hormonas inducen la expresin de diferentes genes de expansin. (Bradford & Nonogaki, 2007).

Otro mecanismo de regulacin transcripcional se vislumbra en las modificaciones de la estructura de la cromatina controlado por el gen MONOUBICUITINACIN DE LA HISTONA (HUB1) o GEN REDUCTOR DE LA DORMANCIA (RDO) locus que codifica una protena con homologa a las enzimas modificantes de histonas para otras especies, y que adems participa en la monoubicuitinacin de la histona H2B, de forma que estos dos procesos dan por resultado una drstica reduccin en la dormancia. Cabe aclarar que este proceso regulatorio de tipo transcripcional, an es un fenmeno de poca claridad (Finkelstein et al., 2008). Para regulacin traduccional existen numerosos genes que codifican para diferentes protenas cuyo fin es la accin directa sobre sustratos que controlan la dormancia, all se observan por ejemplo algunos de los genes ms importantes como lo son los de la familia AtNCED que codifican para enzimas claves en el metabolismo de ABA. Esta familia de genes en particular, codifica para la 9-cis-epoxicarotenoide dioxigenasa, de forma que es esencial para la sntesis de ABA tanto en el embrin como en el endospermo durante la induccin de la dormancia. Adems otros estudios han revelado genes especficos que se relacionan con el mantenimiento de la dormancia ( NCED6, NECED9 y ZEP) y la liberacin de este estado mediante el catabolismo del cido absccico (CYP707A2) (Finkelstein et al., 2008). Por otra parte vemos como genes que codifican para la resistencia y sensibilidad para el etileno juegan un papel importante en el incremento de la dormancia, puesto que existe gran correlacin entre la baja sensibilidad al etileno por parte de la semilla y el aumento en la sensibilidad al ABA y la produccin del mismo, de lo que se concluye que, la estimulacin de la germinacin por parte del etileno, es alcanzada gracias al antagonismo de esta sustancia con la sealizacin molecular del ABA (Finkelstein et al., 2008). La sobreexpresin del loci ABI, el DOF, el DAG, son genes que codifican para factores de transcripcin muy similares que se expresan exclusivamente en tejidos vasculares maternos y que tienen efectos opuestos en el potencial germinativo de la semilla (Finkelstein et al., 2008). Es de recalcar la presencia de las protenas DELLA en el proceso regulativo de la dormancia, puesto que estas ejercen regulacin de diferentes respuestas de las GA, las cuales promueven la germinacin mediante la aparente desaparicin de las protenas DELLA. Recientes investigaciones, sugieren entonces, que estas protenas promueven la dormancia en semillas mediante la inhibicin de la expansin de los cotiledones en el proceso previo a la germinacin, posiblemente mediante la represin de la expresin de enzimas tanto hidrolticas como modificantes de la membrana (Finkelstein et al., 2008). Por ltimo debemos insistir que, entre las enzimas que mayor relevancia presentan en el proceso regulatorio encontramos las quinasas y fosfatasas, dado que asumen un papel muy importante en la degradacin y sntesis de

compuestos que cumplen una funcin clave en el control de las semillas dormantes, puesto que a nivel molecular se da paso a regulacin de estas enzimas por medio de genes como los ABI1 y ABI2, los cuales codifican para un grupo de protenas fosfatasas 2C (PP2C) (Finkelstein et al., 2008). Enzimas que modifican estructuralmente a otras que intervienen en procesos de regulacin, razn por la cual decimos que se encargan del control posttraduccional de este evento fisiolgico de las semillas. Para resumir el proceso de regulacin gentica de la dormancia, es importante hacer un breve recuento de las generalidades sobre este fenmeno, para as ver que este tipo de regulacin acta principalmente en la dormancia de tipo fisiolgica. As pues es clave vislumbrar como existen controles a nivel transcripcional con fenmenos como la modificacin de la estructura de la cromatina; el control traduccional, se lleva a cabo entonces por medio de los diferentes inductores y represores que se codifican por varios loci y finalmente el control post-traduccional se identifica con la accin de mltiples protenas que requieren de diferentes modificaciones en su estructura para actuar, lo que se muestra por ejemplo con la presencia tanto de quinasas como de fosfatasas (Finkelstein et al., 2008). Finalmente, para este caso se debe resaltar que el funcionamiento gentico de la clula se enfoca en el desarrollo de un conjunto de cascadas moleculares que orientan el metabolismo celular hacia el mantenimiento de la quiescencia en la semilla. Por otro lado, es fundamental hacer hincapi en la sustancia que segn los autores revisados es la ms importante en la regulacin de la dormancia, esta es el cido absccico, dado que segn la bibliografa consultada se encarga de la regulacin de la dormancia por medio de la interaccin con la mayora de productos metablico presentes en este estado de la semilla (Finkelstein et al., 2008) .

Figura 3: Evolucin temporal de la induccin y liberacin de la dormancia, incluido un resumen parcial de los factores reguladores.

Tomado de (Finkelstein, et. al., 2008). 4. CONCLUSIONES. Para la comprensin de los procesos que regulan la dormancia, no se deben abordar como fenmenos aislados, sino que la comprensin de uno conduce a la de otro, puesto que como bien vemos es clave por ejemplo ver como la influencia de la luz en la germinacin ejerce control en los procesos de sntesis de GA y degradacin de ABA. La hormona que principalmente acta para el mantenimiento de la dormancia es el ABA, y su regulacin gentica se lleva a cabo mediante la induccin de diferentes genes que favorecen la produccin de reguladores transcripcionales y traduccionales que conducen a la produccin de esta hormona. La regulacin gentica de la dormancia, se observa adscrita a procesos transcripcionales, traduccionales y post-traduccionales, lo que asegura una completa regulacin del fenmeno. Para la comprensin de la dormancia en la amplitud de lo que representa, es fundamental revisar y comprender aspectos bsicos que permitan conocer como acta y su influencia sobre aspectos importantes dentro de la

evolucin como lo es la supervivencia de la especie bajo condiciones adversas.

5. BIBLIOGRAFA

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