Coprocultura

Doenas diarricas uma das mais importantes causas de mortalidade infantil ate 5 anos Consumo de alimentos imprprios e proximidade entre animais Cultura de fezes so largamente utilizadas no diagnstico de gastroenterite inespecficas

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Patgenos

rotina :

pesquisados na

Salmonella sp Shigella sp Escherichia coli enteropatognica clssica ( inf. a 1 ano ) Escherichia coli enteroinvasora

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Indicao: Diagnstico de diarria aguda OMS: diarria aguda = mais de 3 evacuaes lquidas ou pastosas por dia durando at 14 dias. Evoluo: mais de 2 semanas: diarria persistente mais de 2 semanas : diarria crnica

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Etiologia:

Poucos membros da famlia Enterobacteriaceae so capazes de produzir doenas entricas primrias Procedimentos de rotina diagnstica so direcionados para aos gneros
Salmonella sp Shigella sp E. coli clssica (<1 ano) E. coli invasora-EIEC (qualquer idade)

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Salmonella sp

Causa febre tifide e paratifide e febres entricas Muito invasiva So encontradas em animais e algumas espcies adaptadas ao homem (S typhi e S. paratyphi) Contaminao por manipulao de alimentos. Ex 106-8 para infeces sistmicas

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Shilgella sp

Menos freqente que Salmonella sp Causa desinteria bacilar com agresso da mucosa intestinal Alta reao inflamatria e presena de leuccitos So patgenos efetivos :100-200 organismos para causar infeco Shigelose estritametne humana Contaminao oral-fecal

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E. coli
Causam enterites em crianas de faixas etrias baixas (epidemias em berrios) E. coli importante para crianas < 1 ano EIEC;em qualquer idade-teste sorolgico EPEC ETEC EHEC Infeces de origem endgena

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Outras espcies
Yersinia enteroltica Campylobacter jejuni Vibrio choleraea Rotavrus Nem sempre so pesquisados na rotina Outros gneros de Enterobacterias no so considerados patognicos

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Coleta de Fezes As amostras devem ser coletadas no incio da doena e antes de ser iniciada a antibioticoterapia Transporte Enviadas ao laboratrio dentro de 2 horas (temperatura

Ambiente) , em recipientes estreis, onde sero imediatamente processadas Emulsionar quantidade de fezes aproximada de 1-2 g no meio de transporte (equivalente a uma azeitona grande) e enviada ao laboratrio Ou coletar com swab Selecionar a parte mucide/ sanguinolenta

Meio de Transporte

Salina Glicerinada Tamponada Cary & Blair Stuart

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Amostras imprprias para cultura: Fezes obtidas h mais de 3 horas e sem conservante Vrias amostras colhidas no mesmo dia Fezes lquidas colhidas ou enviadas em fraldas Meio de transporte com alterao visvel do pH (Cary & Blair ) OBS: Fase preliminar pode-se realizar exame microscpico
de uma gota de suspenso fecal com azul de metileno de Loefler para observar aumento de leuccitos ( processo inflamatrio) caracterstico de Shigella sp e E. coli invasora

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Exame microscpico direto

Fezes frescas (no coradas):

Fezes coradas (Gram e/ou azul de metileno)

Pesquisa da motilidade caracterstica de Campylobacter spp. E Vibrio spp

germes de aspecto particular

Campylobacter jejuni

Vibrio cholerae

Meio de Transporte

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Semeadura Primeira Fase

Selecionar fragmentos de muco ou secreo, caso estejam presentes Semear a amostra em uma placa contendo meio de cultura pouco seletivo diferencial Agar MacConkey (incubar a 35C 24 horas) Optativo Semear em caldo de enriquecimento seletivo Incubar 36,5 C, por 4 a 6 horas

COPROCULTURA Crescimento em MacCONKEY

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Semeadura Segunda Fase

Do caldo de enriquecimento sub-cultivar em placas de meio seletivo diferencial e incubar 36,5 C Meios de cultura utilizados: gar XLD ( Xilose-lisina-deoxicolato)

Lactose, xilose e sacarose e lisina-alterao da cor das colnias decorrentes da fermentao de C e descarboxilao da lisina E. coli crescem de cor amarela Shigella crescem transparente

gar Hektoen

Inibe a microbiota intestinal

gar Salmonella Shigella (Agar SS) Colnias vermelhas Lac (+) E. coli Colnias transparente- Lac(-) Shigella sp Colonias transparente com ponto escuro_ Lac (-) e H2S (+) Proteus ou Salmonela sp

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Pesquisa de Salmonella spp
agar Hektoen: No utilizao de lactose, sacarose e salicin: colnias verdes inoculado Produo de H2S: colnias pretas Salmonella Colnias suspeitas: colonias verertes com ou sem o centro preto
No inoculado E.coli

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Pesquisa de Salmonella spp

Agar Hektoen:

Colnia salmo

Colnia salmo com centro negro Citrobacter freundii, Proteus vulgaris,

Colnia azul/verde com centro negro Suspeita de Salmonella, (Proteus mirabilis)

Colnia azul/verde

Hektoen

Escherichia, Levinea, Citrobacter diversus, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Yersinia

Suspeita de Shigella ou Salmonella

Coprocultura
Pesquisa de Salmonella spp
Agar SS

Contm sais biliares, verde brilhante e citrato de sdio (inibe Gram positivoos e Gram negativos Fermentao da lactose (colnias vermelhas) e produo de H2S (centro negro) Colnias suspeitas de salmonela = incolor com centro negro ou no

Agar SS

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Pesquisa de Salmonella spp

Agar XLD: Xilose Lisina Descarboxilase

Colnia vermelha com centro negro ou no

Meio de enriquecimento tetrationato de Kauffmann

Selenito-cistina

sorotipagem Ag O

Ag H

COPROCULTURA Crescimento em HEKTOEN

XLD

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Pesquisa de Campylobacter

Vrios meios seletivos

Campylosel: agar Columbia com 5% de sangue de carneiro, 32 mg/L de cefoperazona, 10 mg/L de vancomicina e 3 mg/L de anfotericina Skirrow: agar 7% sangue de cavalo (lisado), 5 mg/L de trimethoprim, 2500 UI/L de polimixina B e 10 mg/L de vancomicina

Incubao 48h minimum em microaerofilia 42C

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Pesquisa de Yersinia spp

existem diferentes meios seletivos

CIN (Cefsulodina, Irgasan, Novobiocina)

Sais biliares, cristal violeta (inibem Gram+) Fermentao do manitol muda a cor do vermelho neutro

COPROCULTURA

Pesquisa de Yersinia spp

agar CIN

Yersinia: pequenas colnias de 1 mm, centro vermelho e zona translcida ao redor (precipitao de sais biliares). Colnias vermelhas: mannitol + Colnias amarelas: mannitol -

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Vibrio cholerae: Enriquecimento em gua peptonada alcalina por 3h

Isolamento em agar TCBS oxidase + colnia amarela

Clera Aeromonas spp: Agar para Gram negativos Escherichia coli O:157-H:7 agar MacConkey sorbitol (SMAC): Teste de gglutinao

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Identificao Bioqumica Presuntiva

Identificao Sorolgica

Antibiograma

Identificao Bioqumica

Identificao do Sorogrupo e/ou Sorotipo

COPROCULTURA OBSERVAES IMPORTANTES

A utilizao adequada da triagem bioqumica impede a realizao de identificaes bacterianas e antibiogramas desnecessrios. Se for necessrio a realizao da sorologia para o gnero Shigella, testar primeiramente a S. flexneri e posteriormente a S. sonnei , pois estas representam 95% das cepas de Shigella isoladas em nosso meio.

COPROCULTURA OBSERVAES IMPORTANTES

Quando realizada a pesquisa de Salmonella , em um surto, portadores assintomticos ou manipuladores de alimentos, repicar para a triagem bioqumica apenas as colnias com as caractersticas morfolgicas de Salmonella:

MacConkey: lactose negativa Hektoen ou SS: lactose negativa ou H2S positiva XLD: H2S positiva ou transparente ( rosa )