DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE CAFEINA EN UNA BEBIDA ENERGIZANTE (MONSTER ENERGY) POR CROMATOGRAFIA HPLC

RESUMEN Este laboratorio consisti en la determinacin de la concentracin de cafena en una bebidaenergizante (MONSTER ENERGY) mediante el rea de la seal cromatografca. Para ello se realiz una curva decalibracin inyectando en el HPLC muestras de cafena de concentracin conocida, obteniendocomo resultado una ecuacin de la recta de: Area [g/L]= 28662 * (masa inyectada [mg]) + 32303 Luego utilizando los valores obtenidos en la curva de calibracin se realiza la inyeccin en el HPLC de muestra de la bebida energizante existente en el comercio para analizar sucontenido de cafena, obteniendo como resultados: MONSTER ENERGY 3,10 ppm en una botella de 473 ml .

PALABRAS CLAVES: cromatografa HPLC, cafena, rea, concentracin.

ABSTRACT This laboratory was to determine the concentration of caffeine in an energy drink (MONSTER ENERGY) by the area of the chromatographic signal. This was achieved by injecting a calibration curve in the HPLC samples of known concentration of caffeine, resulting in a linear equation of: Area [g/L]= 28662 * (masa inyectada [mg]) + 32303 Then using the values obtained in the calibration curve is injected into the HPLC sample of existing energy drink trade to analyze its caffeine content, obtaining the following results: MONSTER ENERGY 3,10 ppm in a 473 ml bottle. KEYWORDS: HPLC, caffeine, area, concentration.

INTRODUCCION

El HPLC (HIGH PERFORMANCE LIQUID CROMATOGRAPHY) o Cromatografa liquida de altaresolucin, es una tcnica cromatogrfica usada para separar componentes usando una variedad deinteracciones qumicas entre el analito y la columna cromatogrfica. Bsicamente es un sistema compuesto de un reservorio de fase mvil, bomba, inyector, columna deseparacin y detector.El analito se pasa a travs de una columna de la fase estacionaria bombeando la fase mvil liquidacon alta presin. La muestra se introduce en pequeos volmenes a la corriente de la fase mvil y all seretarda por medio de interacciones qumicas con la fase estacionaria mientras atraviesa la columna.El retardo se conoce como tiempo de retencin, nico para analito. Depende de la naturaleza delanalito, de la fase estacionaria y de la composicin de la fase mvil.Los solutos ms comunes usados en la fase mvil son combinaciones de agua purificada con lquidosorgnicos, los ms comunes son Metanol y Acetonitrilo, tambin suelen usarse sales y bufferes paracontribuir a la separacin de componentes. Tambin se usa el cidoTrifluoroacetico para actuar comoformador de pares inicos.Estas combinaciones introducen el concepto de gradiente de elucin. Consiste en la variacin de lacomposicin de la fase mvil, para adaptarse a los diferentes analitos y conseguir mejores resultados. Elgradiente separa la matriz del analito en funcin de la afinidad del analito por la composicin de la fasemvil. Cada analito tiene un gradiente de elucin ptimo para obtener la mxima separacin de picos enel detector.[1] Se consideran dentro del grupo de productos estimulantes o fruitivos principalmente a aquellos tales como el caf, el t, el cacao, sus derivados y la yerba mate, incluyndose tambin a otros como el guaran y la cola, actualmente estn comercializndose las llamadas bebidas energizantes. Estos productos con excepcin del cacao y sus derivados no tienen valor alimenticio y se consumen slo por las propiedades de ser bebidas estimulantes y en algunos casos refrescantes. Poseen ciertas caractersticas en comn, son productos naturales (sin considerar las bebidas energizantes) que han sido tratados por calor para adquirir aromas caractersticos y contienen alcaloides tales como cafena (1,3,7-trimetilxantina) y teobromina (3,7dimetilxantina). El contenido de cafena es utilizado para evaluar la calidad de productos tales como caf, t, cacao.

Estructura qumica de la cafena (1,3,7-trimetilxantina)

La cafena estimula el sistema nervioso central y el msculo cardaco y relaja el msculo liso, especialmente la fibra muscular bronquial, y acta sobre el rin causando diuresis. La cafena tambin provoca un ligero aumento de la tasa del metabolismo basal e incrementa la capacidad para el esfuerzo muscular. Ejerce un efecto fortalecedor y estimulante sobre diversas funciones como la resistencia fsica, el trabajo individual o el manejo de equipos cuando estas funciones se ven disminuidas por efecto de la fatiga. La dosis considerada como teraputica de cafena para un adulto es de aproximadamente 180 mg. La cafena se ha asociado con la hiperactividad en nios causada por el consumo de bebidas que la contienen. Para determinar el contenido de cafena existen procedimientos clsicos que por lo general se basan en una extraccin seguida de la determinacin de nitrgeno por Kjeldahl; tambin es posible realizar la medida espectrofotomtrica UV. Los mtodos modernos se basan en separaciones cromatogrficas entre los que tiene especial relevancia la cromatografa lquida de alta performance (HPLC).[2]

. METODOLOGIA En la parte experimental se utiliz distintas soluciones a diferentes concentraciones (0, 10, 20, 30, 40,50 y 100 ppm) de cafena y luego se inyectaron en el HPLC para obtener la curva de calibracin absoluta. Se toman aproximadamente 20 ml de muestra se agita constantemente con una agitador de vidrio hasta desaparecer las burbujas producidas por el gas de la bebida. Luego se lleva al equipo de ultra sonido durante 15 minutos para eliminar por completo el gas de la bebida, seguidamente se toma una alcuota de 3 ml se lleva a u baln de 25 ml y se afora con una solucin de 80:20 Agua HPLC y Etanol la fase mvil antes de inyectar en el cromatgrafo se realiza una filtracin al vacoutilizando un filtro de membrana de poro de 4,5m; posteriormente se toma una alcuota de 2 mlcon una jeringa que tiene un filtro de GD/X, 13 mm se deposita en un vaso de precipitado, posteriormente se

toma una alcuota de 15 L con una micro jeringa para cromatografa, y finalmente se inyectan en la columna estacionaria del cromatgrafo HPLC.

RESULTADOS Y ANALISIS Tabla N01: Datos curva de calibracin patrn cafena Conc.(ppm) 0 10 20 30 40 50 100 rea 0 591990 641765 930582 1135890 1405082 2927006

CONCENTRACION (ppm) Vs AREA

3500000 3000000 2500000 AREA 2000000 1500000 1000000 500000 0 0 20 40 60 80 100 120 CONCENTRACION CAFEINA (ppm) y = 28662x + 32303 R = 0.9972

Grafica N01: Curva de calibracin patrn cafeina

Clculos: Teniendo en cuenta la curva de calibracin y la lectura de la dilucion correspondiente de la muestra, el resultado final se expresa en g de cafena por 100 g de producto, segn la legislacin vigente. A=axc+b Ecuacin de la curva de calibracin A = rea c = concentracin de cafena de la solucin inyectada (mg/l) a = pendiente de la curva de calibracin b = ordenada al origen de la curva de calibracin

Despejando tenemos que:

Por lo tanto:

25,84 ppm

=3,10 ppm cafena

Por ende:

V = volumen final de la solucin

f = factor correccin de volumen de acuerdo a las diluciones realizadas m = masa o volumen inicial del producto analizado (segn Tabla

Este estudio describe la cuantificacin de cafena presente en la bebida energizante MONSTER ENERGY de 473 ml de contenido;analizado por HPLC. La longitud de UV-Vis se fij a 254 nm para cafena. Bajo las condiciones de HPLC utilizadas obtuvo un tiempo de retencin para la cafena de 0,5341 min. La identificacin de los picos de cafena se logr por comparacin de tiempos de retencin con patrones cafena. El anlisis por HPLC es muy usado y ampliamente respaldado, de modo que entrega valores slidos y confiables, por lo cual los errores estn directamente relacionados con la manipulacin, preparacin e inyeccin de las muestras, debido a esto es que para entregar un anlisis optimo es que se deben realizar varias inyecciones de las muestras y obtener valores de un mismo rango para asegurar un resultado reproducible. La concentracin decafena en la bebida energizante fue determinada con base a las diluciones realizadas para preparar patrones y utilizando la curva de calibracin estndar de cafena (r2= 0.9972, grafica 1).

CONCLUSIONES: La cuantificacin de cafena en la bebida energizantefue posible determinarla en las condiciones probadas, en tiempos cortos, con una buena resolucin, precisin y exactitud. El HPLC es uno de los mtodos analticos ms usados en la industria farmacutica por lo que eluso y manejo de los estudiantes les abre

BIBLIOGRAFIA [1]GMEZ-ULLATE; SERRANO LVAREZ. Cromatografa principios y aplicaciones [En lnea]: http://es.scribd.com/doc/11642417/Cromatografia-Fundamentosy-Aplicaciones

[2]Departamento de Qumica Orgnica-Area Bromatologa Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de BuenosAaires Trabajos prcticos-laboratorio [En linea]: http://www.qo.fcen.uba.ar/Cursos/TecnoIII/guia.pdf

[3]