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VALTER T. MOTTA

Captulo

BIOQUMICA BSICA

Ciclo do cido Ctrico

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Ciclo do cido Ctrico

Objetivos
1. 2. Descrever a obteno de acetil CoA pela descarboxilao oxidativa do piruvato nas mitocndrias. Reconhecer que o ciclo do cido ctrico a via de oxidao do grupo acetila da acetil CoA com formao de trs NADH e de um FADH 2 alm da formao de um ATP (ou GTP) por fosforilao ao nvel do substrato. Identificar a reao catalisada pela citrato sintase como a primeira reao do ciclo do cido ctrico e reconhecer as substncias participantes. Identificar as substncias participantes das reaes do ciclo do cido ctrico catalisadas por: isocitrato desidrogenase, complexo do cetoglutarato, succinil CoA sintetase (succinato tiocinase), succinato desidrogenase e malato desidrogenase. Explicar a reao catalisada succinil CoA sintetase (succinato tiocinase) na formao de ATP ao nvel do substrato. Calcular o nmero de compostos de alta energia (ATP) sintetizados pela oxidao de um mol acetil CoA no ciclo do cido ctrico. Descrever os mecanismos de regulao do ciclo do cido ctrico. Descrever a entrada e sada de intermedirios do ciclo do cido ctrico.

3. 4.

5. 6. 7. 8.

O ciclo do cido ctrico (tambm chamado de ciclo de Krebs ou ciclo dos cidos tricarboxlicos ) o estgio final da oxidao dos combustveis metablicos. Os tomos de carbono entram no ciclo na forma de grupos acetila derivados dos carboidratos, cidos graxos e aminocidos. O grupo acetila ligado a coenzima A (acetil-CoA) oxidado em oito reaes mitocondriais para formar duas molculas de CO 2 com a conservao da energia livre liberada em trs molculas de NADH, uma de FADH 2 e um composto de alta energia (GTP ou ATP). O NADH e o FADH 2 so oxidados e os eltrons so conduzidos pela cadeia mitocondrial transportadora de eltrons com a liberao de energia conservada na forma de ATP sintetizado a partir de ADP e P i por meio de processo denominado fosforilao oxidativa ( ver Captulo 8). A reao lquida para o ciclo do cido ctrico :

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Bioqumica

Quadro 7.1 Descoberta do ciclo do cido ctrico

A operao do ciclo do cido ctrico foi deduzida por Hans Krebs em 1937 a partir de observaes sobre a velocidade de consumo de oxignio durante a oxidao do piruvato por suspenses de msculos peitorais de pombos. Esses msculos ativos no vo, exibem uma velocidade de respirao muito alta e so apropriados para as investigaes metablicas. O consumo de oxignio foi monitorado com o auxlio de um manmetro, um aparelho que permite a medida das alteraes no volume de um sistema fechado a presso e temperatura constantes. Estudos anteriores, principalmente os realizados por Albert Szent Gyrgyi (1935), mostraram que o succinato, o fumarato, o malato e o oxaloacetato estimulavam o consumo de oxignio por esses msculos. Krebs mostrou que o piruvato tambm aumentava o consumo de oxignio.

Alm disso, ele tambm observou que a oxidao do piruvato podia ser grandemente estimulada pelo oxaloacetato, cis -aconitato, isocitrato e -cetoglutarato. Os efeitos dessas substncias eram completamente suprimidos pela adio de malonato, um inibidor competitivo da succinato d esidrogenase. A adio do malonato tambm acumulava citrato, cetoglutarato e succinato. Pelo fato da adio do piruvato e oxaloacetato suspenso ter resultado no acmulo de citrato, Krebs concluiu que a via operava como um ciclo. Somente em 1951 foi demonstrado que a acetil-CoA o intermedirio que condensa com o oxaloacetato para formar citrato. Krebs publicou sua descoberta no peridico Enzimologia j que a revista Nature recusou o artigo original.

Acetil CoA + 3 NAD + + FAD + GDP + P i + 2 H 2 O 2 CO 2 + 3 NADH + FADH 2 + CoASH + GTP + 3 H + Alm do papel na gerao de energia, o ciclo do cido ctrico tambm fonte de unidades monomricas para a biossntese de carboidratos, lipdeos e aminocidos no-essenciais. Nesse contexto ser examinado como o piruvato, derivado da glicose e outros acares atravs da via glicoltica, oxidado acetil CoA e CO 2 para entrar no ciclo do cido ctrico (Figura 7.1). O piruvato atravessa a membrana externa da mitocndria via canais aquosos de protenas transmembranas chamados porinas ( ver Seo 9.4). A piruvato translocase, uma protena da membrana mitocondrial interna, transporta especificamente o piruvato do espao intermembrana para a matriz mitocondrial em simporte com o H + ( ver Seo 9.4.B).
Piruvato CO2 2e Acetil-CoA

GTP

Ciclo do cido ctrico

2CO2

8e
Figura 7.1 Associao da gliclise e o ciclo do cido ctrico. O piruvato produzido na gliclise convertido em acetil CoA, o combustvel do ciclo do cido ctrico. Os eltrons removidos so transportados pelo NADH e FADH 2 para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons no interior das mitocndrias

7 Ciclo do cido ctrico que fornece energia para a sntese de ATP.

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7.1 Oxidao do piruvato a acetil CoA e CO2


Sob condies aerbicas, o piruvato presente na matriz mitocondrial convertido em CO 2 e um fragmento de dois carbonos, a acetil CoA em reao de descarboxilao oxidativa. A reao catalisada pelo complexo da piruvato desidrogenase constitudo por trs enzimas distintas: a piruvato desidrogenase (E1) , a diidrolipoil transacetilase (E2) e a diidrolipoi desidrogenase (E3) associadas de modo no-covalente e cinco diferentes coenzimas . O complexo est localizado exclusivamente na mitocndria das clulas eucariticas. Devido a grande energia livre padro negativa dessa reao sob condies fisiolgicas, o processo irreversvel o que impede a reao inversa de formao do piruvato a partir do acetil CoA.
Citosol Matriz mitocondrial

Piruvato translocase

HS-CoA COO C O

CO2

Piruvato H+

Complexo piruvato desidrogenase

S-CoA C CH3 Acetil-CoA O

CH3 Piruvato

NAD+

NADH,H +

A operao do complexo da piruvato desidrogenase requer cinco coenzimas cujos papis funcionais so descritos a seguir. 1. Descarboxilao oxidativa do piruvato. A reao requer o co-fator pirofosfato de tiamina (TPP) ligado enzima piruvato desidrogenase (E1). O TPP ataca o carbono da carbonila do piruvato e libera o CO 2 deixando o grupo hidroxietil ligado ao TPP para formar o hidroxietil TPP (HETTP).
CH3
+

N C +

CH3 S O C C CH3 O H
+ +

CH3
+

N C C OH

S CH3

CO2 H O

N C C

S CH3

C O

Hidroxietil-TPP

Piruvato

2. Transferncia do grupo hidroxietil do HETTP para a diidrolipoil transacetilase (E2). O aceptor do hidroxietil o

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Bioqumica

grupo prosttico lipoamida . A reao de transferncia regenera o TPP da E1 e oxida o grupo hidroetil a um grupo acetila.
CH3
+

CH3
+

CH3
+

N C C

S CH3

N C C S

S CH3

C S CH3 C S

S S Lipoamina

HS HS

cido lipico S S CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 O C NH

Lis

NH (CH2)4 CH C O

Lipoamina

3. Transferncia do grupo acetila para a coenzima A, em reao catalisada pela diidrolipoil transacetilase .
Coenzima A CoA SH Acetil CoA O O C S HS HS HS CH3 CoA S + C CH3

4. Regenerao do complexo da piruvato desidrogenase original. O grupo diidrolipoato da E2 reduzido pela flavina adenina dinuclotdeo (FAD) em presena de diidrolipoil desidrogenase com a regenerao do lipoato.

7 Ciclo do cido ctrico

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HS HS

FAD

FADH 2

S S

5. A FADH 2 reoxidada pela transferncia dos eltrons para o NAD + para formar NADH. O NADH transfere os eltrons para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons que est acoplada sntese de 2,5 molculas de ATP por meio da fosforilao oxidativa. A reao total de converso de piruvato a acetil CoA altamente exergnica G = 33,5 kJmol 1 . Como para cada molcula de glicose, 2 piruvato so formados pela gliclise, so sintetizadas 5 molculas de ATP.
NAD+ FADH2 NADH + H + FAD

A representao esquemtica da operao do complexo da piruvato desidrogenase est resumida na Figura 7.2. A atividade do complexo da piruvato desidrogenase regulada por mecanismos alostricos e covalentes. O complexo ativado e inibido alostericamente pelos efetores mostrados no Quadro 7.1.
Quadro 7.1 Principais efetores alostricos do complexo da piruvato desidrogenase.

Efetores positivos (ativadores)


Coenzima A NAD + AMP Ca
2+

Efetores negativos (inibidores)


ATP NADH Acetil CoA cidos graxos de cadeia longa

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Bioqumica

NAD+ FAD SH SH OH CO2 CH3 C TPP S S Lipoamida


1 Piruvato desidrogenase 2 4 Diidrolipoil desidrogenase 5

NADH + H + FAD S

Hidroxietil-TPP

HS HS
3

O CH3 C C

Diidrolipoil transacetilase

O O TPP O CH3 C S HS Acetil-diidrolipoamida

O CH3 C S CoA

Piruvato

Acetil-CoA CoA

Figura 7.2 Operao do complexo da piruvato-desidrogenase. TTP = pirofosfato de tiamina. O lipoato tem dois grupos tis ( SH) que formam uma ligao dissulfeto ( S S ) por oxidao.

Os mecanismos de regulao alostrica do complexo so complementados por modificaes covalentes de protenas. O complexo inibido por fosforilao pela ao de protena-cinase (altos teores de piruvato, CoASH e NAD + inibem a cinase) e ativado por desfosforilao pela ao de fosfatases quando os nveis de [ATP] mitocondrial declinam. A seguir a frmula d coenzima A (CoA):

7 Ciclo do cido ctrico

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Grupo acetil O S Resduo de -mercaptoetilamida CH2 CH2 NH C CH2 CH2 Resduo de cido pantotnico HO H3 C NH C C C CH2 O H CH3 O O P O O O P O H O CH2 H O O P O Acetil-coenzima A (acetil-CoA) O O H OH N N O Adenosina-3-fosfato NH2 N N C CH3

A. Destinos metablicos do acetil-CoA Os principais destinos metablicos do acetil CoA produzido na mitocndria incluem: (1) completa oxidao do grupo acetila no ciclo do cido ctrico para a gerao de energia; (2) converso do excesso de acetil CoA em corpos cetnicos (acetoacetato, hidroxibutirato e acetona) no fgado; (3) transferncia de unidades acetila para o citosol com a subseqente biossntese de molculas complexas como os esteris e cidos graxos de cadeia longa.

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Bioqumica

Piruvato

Aminocidos

cidos graxos

Acetil-CoA

Ciclo do cido ctrico


Figura 7.3 Destinos do acetil-CoA

Corpos cetnicos

Esteris-cidos graxos

7.2 Reaes do ciclo do cido ctrico


A oxidao de acetil CoA realizada pelo ciclo do cido ctrico em oito reaes sucessivas onde entra o grupo acetila (dois carbonos) e saem duas molculas de CO 2 . (Figura 7.4).

7 Ciclo do cido ctrico

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O CH3 C S CoA Acetil-CoA COO NADH NAD+


8. Malatodesidrogenase

H2 O CoASH HO
1. Citratosintase

COO CH2 C CH2 COO Citrato


2. Aconitase

C CH2

COO

COO Oxaloacetato

COO HO C CH2 COO


L-Malato

COO CH2 HO HO C C COO H

COO Isocitrato

7. Fumarase

H2 O COO CH HC COO Fumarato


6. Succinatodesidrogenase

NAD+ Ciclo do cido ctrico


3. Isocitratodesidrogenase

NADH

CO2 COO CH2 CH2


4. -Cetoglutaratodesidrogenase

FADH2 FAD

COO CH2 CH2 COO Succionato GTP GDP + Pi CoASH


5. SuccinilCoA-sintetase

CO2 COO CH2 CH2 C S O Coa

CoASH

COO -Cetoglutarato NAD+

NADH

Succinil-CoA
Figura 7.4 Reaes do ciclo do cido ctrico. O ciclo oxida duas unidades de carbono com a produo de duas molculas de CO 2 , uma molcula de GTP, trs molculas de NADH e uma molcula de FADH 2 .

1. Condensao da acetil-CoA com o oxaloacetato. A etapa inicial do ciclo do cido ctrico a condensao do acetil CoA com o

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Bioqumica

oxalacetato para formar citrato e CoA livre, em reao irreversvel catalisada pela citrato sintase. A condensao aldlica ocorre entre o grupo metlico da acetil CoA e o grupo carboxlico do oxaloacetato, com hidrlise da ligao tioster e a produo de coenzima A livre. A reao altamente exergnica ( G = 31,5 kJmol 1 ).
COO COO
-

O C CH2 COO

CH2 CH3

CoA

H2O

HO

C CH2

COO
-

CoA SH

COO

A citrato-sintase inibida pelo ATP, NADH, succinil CoA e steres acil CoA graxos. A velocidade de reao determinada pela disponibilidade de acetil CoA e do oxaloacetato. O citrato tambm est envolvido na regulao de outras vias metablicas (inibe a fosfofrutocinase na gliclise e ativa a acetil CoA carboxilase na sntese dos cidos graxos) e como fonte de carbono e equivalentes redutores para vrios processos de sntese. Alm da condensao com o acetil CoA para formar citrato, o oxaloacetato pode ser transformado em piruvato, glicose (gliconeognese) e aspartato. 2. Isomerizao do citrato em isocitrato via cis aconitato. A aconitase catalisa a isomerizao reversvel do citrato e do isocitrato, por meio do intermedirio cis aconitato. A mistura em equilbrio contm 90% de citrato, 4% de cis aconitato e 6% de isocitrato. No meio celular, a reao deslocada para a direita, porque o isocitrato rapidamente removido na etapa seguinte do ciclo. A aconitase contm um centro ferro enxfre que atua tanto na ligao do substrato como na catlise da reao.

7 Ciclo do cido ctrico

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COO CH2 HO C CH 2 COO Citrato COO H2 O

COO CH2 C CH COO Aconitase COO H2 O H HO

COO CH2 C C COO H

COO Isocitrato

3. Descarboxilao oxidativa do isocitrato para formar -cetoglutarato, o primeiro NADH e CO 2 . Na etapa seguinte, o isocitrato oxidado a cetoglutarato pela enzima alostrica isocitrato desidrogenase NAD + dependente . Junto oxidao ocorre a perda simultnea de CO 2 (remoo do grupo -carboxlico). A enzima necessita Mg 2+ ou Mn 2+ e ativada pelo ADP e inibida pelo ATP e NADH.
COO CH2 H HO O C C C O O C H O O NAD
+

COO H + NADH H
+

COO O CO2 H O CH2 C C C O O O O H+ H

COO CH2 C C C O H O

CH2 C C C O C O

Isocitrato

-Cetoglutarato

4. Oxidao e descarboxilao do cetoglutarato para formar succinil CoA, o segundo NADH e CO 2 . A converso do cetoglutarato em um composto de alta energia, a succinil CoA, catalisada pelo complexo enzimtico cetoglutarato desidrogenase . A reao semelhante reao do complexo da piruvatodesidrogenase utilizada na transformao do piruvato em acetil CoA. Participam da reao a tiamina pirofosfato, lipoato, coenzima A, FAD e NAD + . O complexo multienzimtico consiste da cetoglutarato desidrogenase, diidrolipoil transuccinilase e diidrolipoil desidrogenase como trs unidades catalticas. A reao produz a segunda molcula de CO 2 e o segundo NADH do ciclo. O complexo inibido pelo ATP, GTP, NADH, succinil CoA e Ca 2+ .

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Bioqumica

COO CH2 CH2 C O NAD+ NADH CoASH CO2

COO CH2 CH2 C S O CoA

COO -Cetoglutarato

Succinil-CoA

5. Clivagem da succinil CoA com formao de GTP. A succinil CoA sintetase (succinato tiocinase) hidrolisa a ligao tioster de alta energia da succinil CoA ( G = 32,6 kJmol 1 )para formar succinato. A energia liberada conservada como trifosfato de guanosina (GTP) produzida a partir de GDP + P i ( G = 30,5 kJmol 1 ), em uma fosforilao ao nvel do substrato. O teor energtico do GTP equivalente ao do ATP.
COO CH2 CH2 C S O CoA
-

COO

GTP

Pi

CH2 CH2 COO


-

GTP

CoA

SH

Em presena da nucleosdio difosfato cinase e Mg 2+ , o GTP convertido reversivelmente em ATP: GTP + ADP ' GDP + ATP 6. Oxidao do succinato para formar fumarato e FADH 2 . O succinato oxidado a fumarato pela succinato desidrogenase . Essa enzima necessita de flavina adenina dinucleotdio (FAD) ligada covalentemente. Nas clulas dos mamferos, a enzima est firmemente ligada membrana mitocondrial interna sendo um componente da succinato ubiquinona, um complexo multiprotico que participa da cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A succinato desidrogenase fortemente inibida competitivamente pelo malonato e ativada pelo ATP, fsforo inorgnico e succinato.
COO H H C C O H
Succinato-desidrogenase

Enz-FAD

Enz-FADH2

H C C OOC

COO

COO Succinato

Fumarato

7 Ciclo do cido ctrico

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Os co-fatores participam da transferncia de eltrons do succinato para a ubiquinona.


Q Enzima-FADH2 QH2 Enzima-FAD

7. Hidratao da liga dupla do fumarato para formar malato e o terceiro NADH. O fumarato hidratado a L malato pela enzima fumarase . A enzima estereoespecfica e catalisa a hidratao da dupla ligao trans do fumarato.
COO CH HC COO Fumarato H2 O
Fumarase

COO H H C C OH H

COO Malato

8. Oxidao do malato a oxaloacetato. A reao final do ciclo catalisada pela malato-desidrogenase com a formao de oxaloacetato e NADH. A posio de equilbrio dessa reao est deslocada quase totalmente para a sntese do L malato ( G = +29,7 kJmol 1 ). Entretanto, a rpida remoo do oxaloacetato pela citrato sintase para a formao de citrato, possibilita a oxidao do malato.
COO H C CH2 COO Malato OH
Malato-desidrogenase

NAD+ NAD + H +

COO C CH2 COO Oxaloacetato O

Alm da condensao com a acetil CoA para formar citrato, o oxaloacetado pode ser transformado em piruvato, glicose (neoglicognese) e aspartato ( ver Metabolismo dos aminocidos). A. Energia no ciclo do cido ctrico O ciclo do cido ctrico a via oxidativa terminal para a maioria dos combustveis metablicos (piruvato, aminocidos e cidos graxos). Os dois carbonos do grupo acetila que participam do ciclo so oxidados completamente a CO 2 e H 2 O. A energia liberada por essas oxidaes conservada na forma de trs NADH, um FADH 2 e uma molcula de GTP (ou ATP). Para cada NADH que transfere seus eltrons para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons ( ver Captulo 8: Fosforilao oxidativa), aproximadamente 2,5 ATP so produzidos a partir de ADP + P i . Para cada FADH 2 , cerca de 1,5 ATP so produzidos. Assim, a completa oxidao do grupo acetila da acetil CoA no ciclo do cido ctrico produz 10 ATP.

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Bioqumica

B. Regulao do ciclo do cido ctrico O ciclo do cido ctrico possui vrios nveis de controle para que as necessidades energticas e biossintticas das clulas sejam constantemente atingidas. A disponibilidade de substratos (acetilCoA, NAD + , FAD e ADP), a demanda por precursores biossintticos provenientes do ciclo do cido ctrico e a necessidade de ATP determinam a velocidade de operao do ciclo. O suprimento de grupos acetil derivados do piruvato (carboidratos) ou de cidos graxos (lipdios) fundamental na para a velocidade do ciclo. A velocidade influenciada por controles exercidos sobre o complexo da piruvato desidrogenase (inibido por acetil CoA, ATP e NADH e ativado por CoA, ADP e NAD + ) e pela regulao dos processos de transporte e oxidao dos cidos graxos. Relao [NADH]/[NAD + ]. Elevadas concentraes de NADH inibem alostericamente as trs enzimas controladoras do ciclo: a citrato sintase, a isocitrato desidrogenase e a cetoglutarato desidrogenase. A isocitrato desidrogenase pode tambm ser inibida pelo ATP. Os intermedirios do ciclo podem afetar a atividade de algumas enzimas. A succinil CoA inibe o complexo cetoglutarato desidrogenase e a citrato sintase. O oxaloacetato inibe a succinato desidrogenase. Teores de Ca 2+ intramitocondrial tambm so importantes na regulao do ciclo do cido ctrico. A piruvato desidrogenase ativada pelo clcio atravs da ao do ction sobre a fosfatase regulatria. A isocitrato desidrogenase e a cetoglutarato desidrogenase so estimuladas mais diretamente pelos ons Ca 2+ . Alguns intermedirios do ciclo do cido ctrico podem influenciar o fluxo em outras vias, por exemplo, as enzimas glicolticas fosfofrutocinase e piruvato cinase, so inibidas pelo citrato e succinil CoA, respectivamente. A Figura 7.5 mostra a regulao do fluxo metablico no ciclo do cido ctrico.

7 Ciclo do cido ctrico

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Acetil-CoA H2O
Citrato sintase

CoA-SH NADH, ATP, Citrato

Oxaloacetato

Malato desidrogenase

Citrato

Malato

Aconitase

Fumarase

Cis-aconitato

Fumarato
Succinato desidrogenase

Aconitase

Isocitrato
Isocitrato desidrogenase Succinil-CoA sintetase

Succinato
Complexo da -cetoglutarato desidrogenase

NAD+,ADP, Ca2+ NADH, ATP CO2

Succinil-CoA CO2

-Cetoglutarato Ca2+ NADH

Figura 7.5 Regulao do fluxo metablico do ciclo do cido ctrico

7.3 Entrada e sada de intermedirios do ciclo do cido ctrico


O ciclo do cido ctrico tem papel central no catabolismo de carboidratos, cidos graxos e aminocidos, com liberao e conservao de energia. Entretanto, o ciclo tambm est envolvido no fornecimento de precursores para muitas vias biossintticas. O ciclo do cido ctrico , portanto, anfiblico (anablico e catablico). Os intermedirios do ciclo (exceto o isocitrato e o succinato) so precursores ou produtos de vrias molculas biolgicas. Por exemplo, a succinil CoA precursora da maioria dos tomos de carbono das porfirinas. Os aminocidos aspartato e glutamato podem ser provenientes do oxaloacetato e cetoglutarato, respectivamente, via reaes de transaminao. A sntese de cidos graxos e colesterol no citosol necessita de acetil CoA gerada a partir do citrato que

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atravessa a membrana mitocondrial ( ver Captulo 10: Metabolismo dos lipdeos). Quadro 7.2 Ciclo do glioxilato

Nos vegetais, em certos microrganismos e em levedura possvel sintetizar carboidratos a partir de substratos de dois carbonos como o acetato e etanol, por meio de uma via alternativa chamada ciclo do glioxilato. A via emprega as enzimas do ciclo do cido ctrico, alm de duas enzimas ausentes nos tecidos animais: a isocitrato iase e a malato sintase . Pela ao da isocitrato liase, o isocitrato clivado em succinato e glioxilato. O glioxilato condensa com uma segunda molcula de acetil-CoA sob a ao da malato-sintase (em reao anloga quela catalisada pela citrato-sintase no ciclo do cido ctrico) para formar malato.

O malato passa para o citosol, onde oxidado a oxaloacetato, que pode ser transformado em glicose pelas reaes da gliconeognese ou se condensar com outra molcula de acetil CoA e iniciar outra volta do ciclo. Nas plantas, o ciclo do glioxalato est localizado em organelas chamadas glioxissomos . Os animais vertebrados no apresentam o ciclo do glioxilato e no podem sintetizar glicose a partir de acetil CoA. Nas sementes em germinao, as enzimas do ciclo do glioxilato degradam os cidos graxos que so convertidos em glicose, precursor da celulose.

Os intermedirios do ciclo do cido ctrico desviados para a biossntese de novos compostos devem ser repostos por reaes que permitam restabelecer seus nveis apropriados. Alm disso, as flutuaes nas condies celulares podem necessitar de aumento na atividade do ciclo, o que requer a suplementao de intermedirios. O processo de reposio de intermedirios do ciclo chamado anaplerose (do grego, preencher completamente). A produo de oxaloacetato permite a entrada do grupo acetila no ciclo do cido ctrico (oxaloacetato + acetil CoA citrato) e a mais importante reao anaplertica. Em deficincias de qualquer dos intermedirios do ciclo, o oxaloacetato formado pela carboxilao reversvel do piruvato por CO 2 , em reao catalisada pela piruvato carboxilase que contm biotina como coenzima. O excesso de acetil-CoA ativa alostericamente a enzima. Piruvato + CO 2 + ATP + H 2 O ' oxaloacetato + ADP + P i As reaes do ciclo convertem o oxaloacetato nos intermedirios deficientes para que se restabelea sua concentrao apropriada. A sntese do oxaloacetato ocorre tambm a partir do fosfoenolpiruvato e catalisada pela fosfoenolpiruvato carboxicinase presente tanto no citosol como na matriz mitocondrial. A enzima ativada pelo intermedirio glicoltico frutose 1,6 bifosfato, cuja concentrao aumenta quando o ciclo do cido ctrico atua lentamente. Fosfoenolpiruvato + CO 2 + GDP ' oxaloacetato + GTP Pela ao conjunta das duas enzimas malato desidrogenase (enzima mlica), o malato (e o oxaloacetato) pode ser produzido a partir do piruvato: Piruvato + CO 2 + NAD(P)H ' malato + NAD(P) + Outras reaes que abastecem o ciclo do cido ctrico incluem a succinil-CoA, um produto do catabolismo de cidos graxos de cadeia mpar, e os cetocidos a partir do cetoglutarato e oxaloacetato

7 Ciclo do cido ctrico

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provenientes dos aminocidos glutamato e aspartato, respectivamente, via reaes de transaminao. Por reverso de reaes anaplerticas, os intermedirios do ciclo do cido ctrico servem como precursores de glicose. Essa funo demonstrada em certas espcies de microrganismos e plantas que utilizam o ciclo do glioxilato na sntese de carboidratos a partir da acetil CoA.

Piruvato Acetil-CoA

Outros aminocidos, purinas, pirimidinas Asparato

Oxaloacetato

Citrato

cidos graxos, esteris

Ciclo do cido ctrico

Succinil-CoA Porfirinas, heme, clorofila

-Cetoglutarato

Purinas Pirimidinas Glutamina Argina Prolina

Glutamato

Figura 7.6 Papel biossinttico do ciclo do cido ctrico. Os intermedirios do ciclo do cido ctrico so precursores biossintticos de vrios compostos.

Resumo
1. Os organismos aerbicos empregam o oxignio para gerar energia a partir de combustveis metablicos por vias bioqumicas: ciclo do cido ctrico, cadeia mitocondrial transportadora de eltrons e fosforilao oxidativa. 2. O ciclo do cido ctrico uma srie de oito reaes sucessivas que oxidam completamente substratos orgnicos, como carboidratos, cidos graxos e aminocidos para formar CO 2 , H 2 O e coenzimas reduzidas NADH e FADH 2 . O piruvato, o produto da via glicoltica, convertido a acetil CoA, o substrato para o ciclo do cido ctrico. 3. Os grupos acetila entram no ciclo do cido ctrico como acetil CoA produzidos a partir do piruvato por meio do complexo multienzimtico da piruvato desidrogenase que contm trs enzimas e cinco coenzimas. 4. Alm do papel gerador de energia, o ciclo do cido ctrico tambm exerce importantes papis, biossntese de glicose (gliconeognese), de aminocidos, de bases nucleotdicas e de grupos heme. 5. O ciclo do glioxilato, encontrado em alguns vegetais e em alguns fungos, uma verso modificada do cido ctrico no qual as molculas de dois carbonos, como o acetato, so convertidos em precursores da glicose.

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Bioqumica

Referncias
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 47-75. CAMPBELL, M. K. Bioqumica. 3 ed. Porto Alegre: ArtMed, 2000. p. 492-519. NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So Paulo: Sarvier, 2002. p. 441-64. MOTTA, V. T. Bioqumica clnica para o laboratrio: princpios e interpretaes. 4 ed. Porto Alegre: Editora Mdica Missau, 2003. p. 75-103.