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Introduo

Quando falo aos meus alunos que a qumica importante, percebo que eles no acreditam muito em mim, ainda mais quando arremato dizendo que esta cincia foi, e ser muito til sociedade e que sua compreenso, portanto, se torna indispensvel e que, por isso, eles tm esta disciplina na escola. Eu at os entendo. Talvez eles me comparem com o vendedor que, no af da consumao da venda, jura de ps-juntos que seu produto simplesmente fantstico. Afinal de contas, sou professor de qumica e se eu no der importncia minha disciplina, quem o far? Ao contrrio do vendedor referido, neste artigo eu pretendo justificar minhas palavras, com argumentos, mostrando que a compreenso desta cincia muito importante para a nossa formao como cidados. Para isto, convido voc leitor(a) a imaginar uma acusao de tentativa de homicdio, sendo que, no julgamento do acusado, voc o jurado. Imagine-se num jri, vendo e ouvindo os advogados da defesa e acusao se digladiarem a fim de lhe convencer a absolver ou condenar uma pessoa contra a acusao de tentativa de homicdio. Um dos deveres como cidado a participao de um jri. O processo parecido com aquelas convocaes eleitorais brasileiras, em que pessoas, num domingo, so solicitadas a trabalhar nas eleies. Dentre uma lista de pessoas, voc sorteado e convocado a comparecer no tribunal de sua cidade. Mediante a um sorteio, voc poder participar do julgamento como jurado. Juntamente com mais seis pessoas, geralmente, voc passar ento a ouvir os relatos do juiz e dos advogados de acusao e defesa a respeito do acontecido. Durante a explanao da defesa, em nossa histria hipottica, ficou claro que havia uma dvida se o tal acusado, de fato, tinha atirado com arma de fogo contra os policiais. Todos os depoimentos confirmavam que o acusado havia feito os disparos e que somente ele poderia t-lo feito. Mas a defesa alegava que havia uma possibilidade, evidenciada em um acho que... no depoimento de uma das testemunhas, de no ter sido o acusado o autor dos disparos. O fato mais importante desta histria fictcia que as autoridades no haviam feito nenhum exame de balstica no acusado para confirmar a autoria dos disparos. Sentando em sua cadeira em pleno jri, voc responsvel em decidir como ser o futuro daquela pessoa. Esta alegao, por parte da defesa, lhe faz pensar. Sua conscincia como jurado precisa de mais informaes para convencer-se de que aquele sujeito, algemado e a poucos metros de distncia, havia cometido tal tentativa de homicdio. Como interessado em cincia, voc sente falta de provas cientficas, como aquelas que a gente v nos filmes e seriados de televiso. Mas a vida bem diferente da fico e os jurados tm que julgar com os fatos que lhes so fornecidos. Voc precisa tomar uma deciso. Optei por faz-lo(a) imaginar esta histria talvez pelo fato de ter assistido alguns seriados sobre este assunto e, mais recentemente, por ouvir uma palestra a respeito. Resolvi ento me interar um pouco mais sobre os aspectos cientficos presentes num julgamento e na investigao de uma maneira geral. O exame de balstica que citei um dos procedimentos realizados pelos estudiosos da Cincia Forense. Esta ser a temtica de uma srie de artigos, sendo que neste primeiro terei como objetivos principais a definio de Cincia Forense (destacando alguns aspectos qumicos nela inseridos) e, para iniciar a srie, comearei versando sobre o assunto impresses digitais. Espero convencer-lhe da importncia da qumica para sua vida. Vamos l!
CHEMELLO, E. Qumica Virtual, Dezembro (2006) p.1

A Cincia Forense
A cincia forense uma rea interdisciplinar que envolve fsica, biologia, qumica, matemtica e vrias outras cincias de fronteira, com o objetivo de dar suporte s investigaes relativas justia civil e criminal. Recentemente o pblico comeou a se dar conta da importncia da cincia no desvendamento de crimes, talvez pelo fato da grande proliferao de programas de televiso, documentrios e fico cientfica. Cito a srie americana CSI (sigla referente a Crime Scene Investigation), a qual foi considerada uma das motivadoras do denominado efeito CSI uma espcie de influncia que alguns estudiosos atribuem a determinadas decises dos jurados perante a insuficincia de provas cientficas, algo que, na fico, no acontece. Cientistas forenses trabalham nas limitaes da prpria cincia, no podendo, por exemplo, serem capazes de concluir, aps uma anlise de evidncias na cena do crime, que a suposta acusada usava "batom da marca Maybelline, cor 42, lote A-439". As concluses, na realidade, so bem menos precisas, apesar dos avanos tecnolgicos das cincias que do suporte aos cientistas forenses. Em investigaes de crimes, na vida real, o foco principal do profissional forense confirmar a autoria ou descartar o envolvimento do(s) suspeito(s). As tcnicas empregadas permitem que seja possvel identificar, com relativa preciso, se uma pessoa, por exemplo, esteve ou no na cena do crime a partir de uma simples impresso digital deixada em algum lugar, ou ento um fio de cabelo encontrado no local do crime. Hoje em dia pode-se realizar a identificao humana atravs de tcnicas de anlise do DNA1 presente na amostra. S que estas anlises so ainda muito onerosas e o nmero de casos faz com que, muitas vezes, no se faa uma investigao mais profunda. Estes programas televisivos, como a srie CSI, no entanto, segundo alguns autores, tm um lado positivo. Eles despertam o interesse pela cincia, principalmente dos jovens. Inclusive muitos peridicos publicam artigos que discutem exerccios forenses, como o famoso Journal Of Chemical Education, ao que pode ser uma forma de catalisar e/ou despertar o interesse pelas cincias exatas, como a qumica. O acusado efetuou os disparos? Como ter mais informaes alm de simples relatos? sabido que uma arma de fogo emite vrios resduos que podem impregnar na pele do atirador. Atravs de tcnicas analticas, possvel determinar se uma pessoa atirou ou no com uma arma de fogo. E no adianta lavar a mo, pois os resduos penetram na pele e a deteco possvel, em mdia, at cinco dias aps o ocorrido. Outra possibilidade a intoxicao comumente vista na forma de envenenamento. possvel analisar os fluidos do corpo a fim de encontrar traos da substncia em questo. A presena de sangue pode ser detectada atravs da quimiluminescncia que resulta da interao com o luminol. Mesmo em concentraes imperceptveis a olho nu, consegue-se encontrar vestgios de sangue na cena do crime. Acidentes de trnsitos provocados por pessoas embriagadas e que resultam em morte so julgados, em certos casos, como tentativa de homicdio. Como saber se a pessoa ingeriu mais lcool que o permitido por lei? Eis que surge o analisador de alcoolemia, mais popularmente conhecido aqui no Brasil como bafmetro. As tcnicas analticas merecem destaque dentre as que os qumicos participam com mais afinco. Espectroscopia de infravermelho, absoro atmica, difratometria de raios-X e outras podem ser essenciais para analisar evidncias, tais como drogas, fibras, resduos de tiro, dentre outras possveis encontradas na cena do crime. Enfim, como voc pode perceber, assunto no o problema. Os exemplos que relacionei acima so apenas alguns da mirade de situaes que os cientistas forenses se deparam todos os dias. At pensei em dar o nome a esta srie de artigos de qumica forense. Contudo, ao observar a interdisciplinaridade inerente, resolvi manter a referncia geral de cincia forense. No obstante, a qumica ter uma visibilidade maior, o que no impede, para a compreenso do todo, que se faa referncias nesta srie de artigos a contedos que pertencem, devido classificao que ns fizemos, a outras disciplinas.

Acrnimo na lngua inglesa para cido desoxirribonuclico. CHEMELLO, E. Qumica Virtual, Dezembro (2006) p.2

Impresses digitais
Os mtodos de identificao humana foram evoluindo ao longo do tempo. Os babilnicos, por exemplo, j em 2000 a.C, usavam os padres de impresses digitais em barro para acompanhar documentos, a fim de prevenir falsificaes. Os mtodos de identificao evoluram em todos os sentidos, visto que, em outras pocas, prticas como a marcao com ferro em brasa e mutilaes, s para citar algumas, eram utilizadas para identificao de indivduos que praticassem crimes ou escravos que haviam fugido. Nos EUA, por exemplo, o cdigo de 1700 previa o emprego do ferrete e da mutilao em crimes de rapto ou roubo. Chegou-se at a fazer uso, posteriormente, do sistema antropomtrico2, introduzido em 1882 por Alfonse Bertillon, Paris, at a consagrao da datiloscopia em meados do sculo XX. A dermatoglifia o nome dado ao estudo dos padres das cristas drmicas, ou seja, dos desenhos existentes nas extremidades distais das faces ventrais dos quirodctilos (ponta dos dedos), na face ventral das mos (palma da mo) e na face plantar das extremidades ventrais dos artelhos (sola e dedos do p). Este artigo se deter no estudo da datiloscopia, que se refere as digitais presentes na ponta dos dedos. Mais especificamente estarei versando sobre datiloscopia criminal, a qual usada para a identificao de pessoas indicadas em inquritos ou acusadas em processos. Vale lembrar que existe a datiloscopia civil, que tem por objetivo a identificao de pessoas, como nas cdulas de identidade em que voc, certamente, j teve que registrar suas impresses digitais. A datiloscopia se baseia em alguns princpios fundamentais, os quais esto relacionados com a identificao humana. O princpio da perenidade, descoberto em 1883 pelo anatomista holands Arthur Kollman, diz que os desenhos datiloscpicos em cada ser humano j esto definitivamente formados ainda dentro da barriga da me, a partir do sexto ms de gestao. O princpio da imutabilidade, por sua vez, diz que este desenho formado no se altera ao longo dos anos, salvo algumas alteraes que podem ocorrer devido a agentes externos, como queimaduras, cortes ou doenas de pele, como a lepra. J o princpio da variabilidade garante que os desenhos das digitais so diferentes, tanto entre pessoas como entre os dedos do mesmo indivduo, sendo que jamais sero encontrados dois dedos com desenhos idnticos. Existem autores que acrescentam mais um princpio, o da classificabilidade, o qual indica o potencial de uso dos desenhos das digitais na identificao humana. Como praticamente impossvel existir duas pessoas com a mesma digital, e tambm pelo fato da existncia de um reduzido nmero de tipos fundamentais de desenhos (veja Figura 1), possvel, via de regra, classificar uma impresso digital. Eu ainda acrescentaria o princpio da praticidade, pois obter impresses digitais um procedimento relativamente simples, rpido e de baixo custo quando comparado aos outros mtodos.

Figura 1 - Os quatro tipos fundamentais de impresses digitais de Vucetich.

A histria do uso ou do reconhecimento das impresses digitais como caracterstica pessoal, como vimos anteriormente com os babilnicos, to antiga quanto a histria da civilizao. Mais adiante na histria tm-se registros de vrios estudos no sculo XVII que descreveram com detalhes os padres de digitais dos dedos, mas nenhum autor da poca fez referncia ao seu potencial identificador. Em 1858, Sir Wiliam Herschel, oficial administrativo britnico e chefe de um distrito em Bengala, na ndia, come-

Processo ou tcnica de mensurao do corpo humano ou de suas vrias partes. CHEMELLO, E. Qumica Virtual, Dezembro (2006) p.3

ou um extensivo uso de impresses digitais, gravando-as em contratos com os nativos. Posteriormente, em 1877, Herschel tentou, sem sucesso, obter autorizao junto aos seus superiores para utilizar as impresses digitais como forma de identificar seus prisioneiros. Mesmo assim, em sua provncia, ele aplicou o mtodo extensivamente. Aps anos de observao, tendo inclusive analisado suas digitais em 1860 e 1890, Herschel concluiu que as formas das estrias que formavam as digitais no mudavam durante a vida. A aplicao em larga escala da anlise das impresses digitais s ocorreu em meados do sculo XX. Mark Twain escreveu sobre a identificao de um homicida pelo seu polegar, em 1883, no livro de fico Life on the Mississipi, o qual contribuiu para a conscincia pblica do potencial identificador das impresses digitais. Em 1880, Henry Faulds, mdico escocs, escreveu artigos que foram publicados na revista inglesa Nature, nos quais descreveu suas observaes a respeito das impresses digitais. Estes artigos contriburam para a atribuio de um potencial para identificao e, conseqentemente, aplicao no esclarecimento de crimes.

Figura 2 Exemplos de mincias identificadas em um datilograma.

Faulds manteve contato com Sir Francis Galton, antroplogo ingls e primo do eminente cientista Charles Darwin. Galton, em seu livro Finger Prints, publicado em 1882, sustentava as idias de Herschel que as impresses digitais nunca eram duplicadas e que elas permaneciam inalteradas durante o tempo de vida de um indivduo, descrevendo o primeiro sistema de classificao para as impresses digitais. Galton tinha um interesse inicial em estudar a hereditariedade e antecedentes raciais, mas quando observou que as impresses digitais no estavam relacionadas com inteligncia ou histria gentica, acabou provando, agora cientificamente, o que Herschel e Faulds j haviam notado: a imutabilidade e perenidade das impresses digitais. Segundo seus clculos, a probabilidade da ocorrncia de duas impresses digitais idnticas era de 1 em 64 bilhes. Hoje, usa-se o sistema de classificao de desenhos digitais elaborado pelo naturalizado argentino Juan Vucetich (veja exemplos das mincias observadas na impresso digital Figura 2). Desde 1903 o Brasil adotou a impresso digital como mtodo de identificao de indivduos.

Tcnicas para revelao de digitais


Os profissionais em datiloscopia so chamados de papiloscopistas, os quais tm a responsabilidade de realizar os trabalhos de pesquisa nos arquivos datiloscpicos e comparar com as impresses digitais em questo. uma tarefa que exige muita calma e pacincia, experincia e, sobre tudo, que o desenho da impresso digital seja o melhor possvel. Existem diversas tcnicas para coleta de fragmentos papilares no local do crime. ai que aparece um pouco mais de qumica no processo. A percia, quando entra na cena de um crime, observa vrios aspectos. No que diz respeito ao assunto do artigo, a observao de objetos deslocados da sua posio original pode revelar vestgios papilares nos objetos que apresentam superfcie lisa ou polida. A estes vestgios se d o nome de Impresses Papilares Latentes, doravante IPL, que podem confirmar ou descartar a dvida de quem estava na cena do crime.

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H basicamente dois tipos de IPL: as visveis e as ocultas. As visveis podem ser observadas se a mo que as formou estava suja de tinta ou sangue. J as ocultas so resultado dos vestgios de suor que o dedo deixou em um determinado local. Aliado ao fato de que, quando a pessoa est fazendo um ato ilcito, via de regra, a transpirao aumenta, transformar estas IPL ocultas em visveis acaba sendo um processo de grande importncia nas investigaes.
Glndulas Sudorparas Compostos Inorgnicos Cloretos ons metlicos Amnia Sulfatos Fosfatos gua Compostos Orgnicos Aminocidos Uria cido ltico Acares Creatinina Colina cido rico cidos graxos Glicerdeos Hidrocarbonetos lcoois Ferro Protenas Carboidratos Colesterol

Sebceas

Apcrinas

Tabela 1 Relao entre as glndulas e os compostos excretados no suor humano.

Saber escolher a tcnica se torna importante na medida em que, se algo der errado, uma tcnica pode no s ser ineficiente como tambm destruir uma IPL. O perito tem uma centena de tcnicas possveis, aplicveis em situaes genricas e especficas. Neste presente artigo tratarei das tcnicas mais usadas e que possuem um atrativo cientfico mais intenso. Antes de analisar as tcnicas, importante ter uma idia da composio qumica de uma impresso digital. A Tabela 1 relaciona as principais substncias presentes no suor humano e as glndulas que as excretam.

Tcnica do P
Sendo a mais utilizada entre os peritos, a tcnica do p nasceu juntamente com a observao das impresses e sua utilizao remota ao sculo dezenove e continua at hoje. usada quando as IPL localizam-se em superfcies que possibilitam o decalque da impresso, ou seja, superfcies lisas, no rugosas e no adsorventes3 (veja Figura 3). A tcnica do p est baseada nas caractersticas fsicas e qumicas do p, do tipo de instrumento aplicador e, principalmente, no cuidado e habilidade de quem executa a atividade vale lembrar que as cerdas do pincel podem danificar a IPL. Alm dos pincis, a tcnica tambm pode ser realizada com spray de aerossol ou atravs de um aparato eletrosttico.

Figura 3 Ilustrao da utilizao da tcnica do p na revelao de IPL.

3 A adsoro um fenmeno caracterizado pela fixao de molculas de uma substncia (o adsorvato) na superfcie de outra substncia (o adsorvente).

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Quando a impresso digital recente, a gua o principal composto no qual as partculas de p aderem. medida que o tempo passa, os compostos oleosos, gordurosos ou sebceos so os mais importantes. Esta interao entre os compostos da impresso e o p de carter eltrico, tipicamente foras de van der Waals e ligaes de hidrognio. A Tabela 2 relaciona alguns poucos tipos de ps usados na revelao de IPL
Ps Pretos P xido de Ferro xido de Ferro Resina Negro-de-fumo Dixido de mangans xido de Ferro Negro-de-fumo Resina Negro-de-fumo Resina Terra de Fuller Ps Brancos P xido de titnio xido de titnio Talco Caulin Carbonato de chumbo Goma arbica Alumnio em p Negro-de-fumo 60 % 20 % 20 % 80 % 15 % 3% 2% 50 % 25 % 25 % 45 % 25 % 25 % 5% 60 % 25 % 15 %

P dixido de mangans

P negro-de-fumo

P carbonato de chumbo

Tabela 2 Ps utilizados na revelao de IPL.

O uso de um tipo de p em detrimento dos demais ocorre, principalmente, devido superfcie em que se encontra a IPL, s condies climticas principalmente a umidade e a experincia do perito. por isto que existe uma variedade enorme de ps, muito maior que as apresentadas aqui, pois as condies do local em que se encontra a impresso podem ser muito diversificadas. O uso de ps pode ser prejudicial sade do perito. Devido a isto, na dcada de 80 foram desenvolvidos ps orgnicos. Exemplo destes ps encontra-se no trabalho de Kerr, Haque e Westland, no qual so descritos procedimentos para produo. Um deles seria dissolver 1 g de brometo de potssio em vinte e cinco mililitros de gua destilada. Em seguida, lentamente, dissolvesse trinta e cinco gramas de amido de milho na soluo aquosa de brometo de potssio. Esta mistura deixada secar por setes dias e aps reduzida a p. Este, por sua vez, conservado em um recipiente contento sulfato de clcio anidro como dessecante.

Vapor de iodo
O iodo tem como caracterstica a sublimao, ou seja, passagem do estado slido diretamente para o estado vapor. Para esta mudana de estado, o iodo precisa absorver calor. Este calor pode ser, por exemplo, o do ar que expiramos ou at mesmo o calor de nossas mos direcionado sobre os cristais. Seu vapor tem colorao acastanhada e, quando em contato com a IPL, forma um produto de colorao marrom amarelada. O vapor interage com a IPL atravs de uma absoro fsica, no havendo reao qumica. Esta tcnica utilizada geralmente quando a IPL encontra-se em objetos pequenos. Colocando-se o material a ser examinado junto com os cristais em um saco plstico selado, aps agitao gerado calor suficiente para a sublimao dos cristais. Uma vantagem que esta tcnica tem em relao s demais, como a do p, que ela pode ser utilizada antes de outras sem danificar a IPL. A destruio da IPL pode ocorrer aps o uso de um produto fixador que evita os cristais de iodo sublimarem novamente da impresso digital.
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Nitrato de Prata
Utilizada desde 1891, a tcnica baseia-se na reao entre nitrato de prata com os ons cloretos presentes na impresso digital. A superfcie de interesse imersa em uma cuba contendo soluo 5 % de nitrato de prata (AgNO3(aq)) durante aproximadamente trinta segundos. O produto desta reao, cloreto de prata, de considervel insolubilidade em gua temperatura ambiente. A equao genrica que descreve a reao pode ser vista na Figura 4.

XCl(aq) + AgNO3(aq) AgCl(ppt) + XNO3(aq)


Figura 4 Equao que descreve a reao entre o nitrato de prata e os cloretos presentes na digital.

Com exceo dos cloretos de prata, mercrio e chumbo, todos os outros so solveis em gua. exatamente uma destas excees, o cloreto de prata, que permite a visualizao da IPL. Na figura acima, XCl(aq) representa qualquer sal de cloro excetuando os j mencionados , como o cloreto de sdio dissolvido [NaCl(aq)]. Deve-se deixar a superfcie contendo a IPL secar em uma cmara escura. Aps isto, ela exposta luz solar o tempo necessrio para que o on prata seja reduzido prata metlica, revelando a IPL sob um fundo negro. A impresso digital revelada deve ser fotografada rapidamente antes que toda a superfcie escurea. Contudo, a impresso pode ser preservada quando guardada em um local escuro ou quando tratada com soluo de tiossulfato de sdio a 10 %, semelhante com o que ocorre no processo fotogrfico.

A Ninidrina
Em 1913, Ruhemann descobriu, por engano, a ninidrina (veja Figura 5). Ele constatou que os alfa aminocidos, os polipeptdios e as protenas formavam produtos coloridos ao reagirem com ela. Ao longo dos anos, a ninidrina tornou-se um reagente comum em testes clnicos e, com a introduo das tcnicas cromatogrficas nos anos 40, passou a ser usada rotineiramente para localizar aminocidos nos cromatogramas. Contudo, somente nos anos 50 que seu potencial forense foi descoberto.

O OH OH O
Figura 5 Representao no plano da molcula de ninidrina.

Aminocidos fazem parte de um grupo de compostos orgnicos que possuem funo mista. A ninidrina tem uma afinidade muito grande por este tipo de estrutura qumica. Inclusive existem tcnicas em que, juntamente com a ninidrina, so adicionadas enzimas que promovem a quebra de protenas em aminocidos, a fim de aumentar a quantidade de reagentes e, assim, tornar a revelao da IPL mais intensa. O mecanismo genrico que descreve a formao do produto cor prpura pode ser visto na Figura 6.

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O OH OH O ninidrina O NH2 O O
H2O

O
O + H2NCH CO

O N O
O ..:

O CH C R
O .. :

..

+ H2O

R um aminocido O N O CHR HO-

+ H2O

..

N H O

CHR O H

RCH O O O

+ CO2

O H N O

O
OH
-

ON

+
O

H2O

+ H2 O

produto cor prpura


Figura 6 - Mecanismo da reao de um aminocido com a ninidrina para formao de um produto colorido.

Geralmente a proporo da soluo usada de 0,5 g de ninidrina para 30 mL de etanol. Posteriormente esta mistura armazenada em um recipiente que permite a pulverizao sobre a IPL. O lquido deve ser borrifado de longe (cerca de 15 cm). Esperamse alguns instantes at que o solvente evapore e, ento, borrifa-se novamente, quantas vezes for necessrio.

Figura 7 Impresses digitais reveladas com soluo de ninidrina em papel.

O desenho da impresso digital somente aparecer quando a superfcie ficar totalmente seca. Isto pode levar horas na temperatura ambiente, mas pode-se fazer isto em fornos que propiciem temperaturas da ordem de 50-70C. Na Figura 7 podemos ver um exemplo de revelao de IPL em um papel.

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Figura 8 Diferentes resultados de IPL reveladas por solues de ninidrina com diferentes solventes.

O grande segredo da soluo de ninidrina o solvente. Na Figura 8 vemos as diferenas entre IPL reveladas com diferentes solues a base de ninidrina. No lado a, esquerda, temos a revelao com um solvente comercial e a direita com ter de petrleo. No lado b, esquerda, temos novamente um solvente comercial e a direita o CFC-113. Nota-se que o solvente comercial, uma mistura de vrios outros solventes, d resultados bem mais ntidos do que os outros solventes citados.

Os anlogos da ninidrina
Com o desenvolvimento do laser, Menzel e Almog compararam os anlogos da ninidrina com a reao ninidina/cloreto de zinco, que produzia a benzo[f]ninidrina. Aps tratamento com laser de neodmio, o composto revelava uma colorao avermelhada. Posteriormente desenvolveu-se a DFO (diazafluorenona) e a 5-metoxininidrina. Na Figura 9 podemos ver as estruturas dos compostos anlogos ninidrina.

O OH OH O
OMe

O OH OH O N O N

Figura 9 Estruturas da (esq. para dir.): benzo[f]ninidrina; 5-metoxininidrina e diazafluorenona (DFO)

A soluo de DFO feita misturando-se 50 mg do reagente com 4 mL de metanol e 2 mL de cido actico glacial. Aps dissoluo da DFO, dilui-se a soluo em 100 mL de freon. A DFO possui dez vezes mais capacidade de revelao de IPL em papel do que a soluo de ninidrina.

Sobre o seqestro da criana


Em 1993, nos EUA, uma criana foi seqestrada e, de forma bastante feliz, posteriormente acabou escapando dos raptores. Dias depois, a criana foi capaz de identificar o carro no qual tinha sido transportada. Quando os policiais recuperaram o carro, no entanto, os peritos foram incapazes de encontrar qualquer vestgio das impresses digitais da criana. Era como se criana estivesse inventado tudo aquilo e nunca estivesse outrora dentro do automvel. Este fato fez com que os peritos testassem a revelao de digitais de uma criana em comparao s de um adulto. Conseguiram concluir, por exemplo, que as digitais produzidas pelo contato dos dedos de uma criana em um copo plstico desapareciam mais rapidamente do que o mesmo contato feito por um adulto, nas mesmas condies de temperatura. Embora o criminoso estivesse praticamente condenado, uma explicao mais cientfica para este fenmeno estava por vir. Foi quando os peritos resolveram utilizar tcnicas analticas como a cromatografia gasosa e espectrometria de massa (CGMS), as quais revelaram resultados surpreendentes. Os compostos identificados em impresses de adultos possuam, em mdia, cerca de 32 tomos de carbono (Ex: C15H31CO2C16H33), ao passo que os extrados de crianas possuam uma massa molecular menor, com cerca da metade de carboCHEMELLO, E. Qumica Virtual, Dezembro (2006) p.9

nos (Ex: C12H25CO2H). As interaes intermoleculares que explicam a volatilidade destas substncias so as conhecidas disperses de London. Como estas foras intensificamse com o aumento da massa molar e da superfcie molecular, as impresses digitais de crianas tendem a ser mais volteis e podem desaparecer em questes de horas em um ambiente quente. Por este motivo, concluiu-se que as impresses digitais da criana simplesmente desapareceram do carro. Outro aspecto importante o fato de que os leos presentes nas impresses digitais no so provenientes do dedo, mas da oleosidade segregada por glndulas da face. Esta oleosidade ento se deposita na superfcie do dedo toda vez que a pessoa toca a face com as mos. Como a oleosidade muda conforme a fase da vida da pessoa, isto tambm ajudou a esclarecer o caso.

Bibliografia utilizada
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Para saber mais


Autopsy of a Murder, an interactive website on forensic sciences and techniques,

produced by The Montreal Science Centre www.centredessciencesdemontreal.com/autopsy

Ongoing project on History of Forensic Sciences

www.crimezzz.net/forensic_history/index.htm

Agradecimento
Agradeo ao qumico e amigo Leandro Maranghetti Loureno pelas referncias bibliogrficas conseguidas junto s instituies com acesso permitido.

Sobre o autor
Emiliano Chemello licenciado em Qumica pela Universidade de Caxias do Sul e professor do Ensino Mdio na regio da Serra Gacha. website: www.quimica.net/emiliano e-mail: chemelloe@yahoo.com.br MSN: chemelloe@hotmail.com

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Cincia Forense: manchas de sangue

Introduo
Crimes brbaros infelizmente acontecem todos os dias. Muitos se impressionam, tanto no cinema como na vida real, quando vem o sangue da vtima. H quem at desmaie. Cenas de crimes realizados com faca, arma de fogo e outras so muito traumatizantes. Mas o perito, por mais estranho que possa parecer, est acostumado com isto, e um de seus objetivos na anlise da cena do crime achar evidncia de sangue. As tcnicas de investigao com recursos cientficos remontam ao sculo I, quando o romano Quintiliano descobriu que um homem assassinou a prpria me depois de analisar vestgios de sangue nas mos do culpado. De l para c os avanos no conhecimento cientfico deram suporte s investigaes das mais diversas evidncias.

Para fins de ilustrao, na imagem acima, esquerda, temos uma cena no muito agradvel, confesso, mas, infelizmente, retrata a realidade do mundo em que vivemos. A imagem mostra dois corpos e diversos cartuchos de arma de fogo deflagrados, alm de manchas de sangue na parede. J direita temos o diagrama de um perito que tem por objetivo destacar e relacionar as evidncias da cena do crime, a fim de entender como tudo aconteceu. Existem situaes em que a mancha de sangue evidente. Localiza-se, por exemplo, prximo ao corpo alvejado por um disparo de arma de fogo. Contudo, h casos em que a mancha no explicita. Existe a possibilidade, tambm, de que o criminoso limpe a cena do crime. Como detectar rastros de sangue, se estes no so visveis a olho nu? Este segundo artigo da srie sobre Cincia Forense ir versar sobre algumas tcnicas de identificao de sangue, bem como a cincia envolvida nos procedimentos. A tcnica com luminol ter destaque, sendo explorada em um captulo parte que ir tratar sobre a anlise de um fenmeno muito bonito da qumica: a quimiluminescncia. Boa leitura!
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Cincia Forense: manchas de sangue

O sangue
Sendo responsvel por cerca de 8 % em mdia da massa corporal humana, o sangue pode ser descrito como uma mistura de vrios componentes, dentre eles destacam-se as clulas, protenas, substncias inorgnicas (sais) e gua. Cerca de 55 % (em volume) do sangue o que denominamos de plasma constitudo principalmente por gua e sais dissolvidos. A maioria do material slido so clulas, como os glbulos vermelhos (eritrcitos) e os brancos (leuccitos) com funes especficas em nosso organismo. O sangue tem inmeras funes. Dentre tantas, podemos destacar o transporte dos gases oxignio e dixido de carbono pelo nosso corpo. Ele media a troca de substncias entre rgos e transporta os produtos metablicos. O sangue tambm distribui hormnios ao longo do organismo. A homestase tambm funo do sangue. A manuteno da temperatura corporal realizada com sua ajuda, pois o calor transportado pelo sangue. Alm disto, o balano cido-base regulado por ele em combinao com os pulmes, fgado e rins. H tambm a defesa contra agentes patognicos e autoproteo, fenmeno conhecido como coagulao e que evita a perda excessiva do fluido vital. Como o sangue permeia todo nosso corpo, quando ocorrem avarias, por menor que sejam, ele tende a sair. A forma como este sai depende de como a leso foi produzida. Na Figura 1 temos alguns exemplos de tipos de manchas de sangue. Cada uma est associada, a priori, com um tipo de ferimento. H tambm casos em que o sangue no visvel, seja pelas condies do ambiente ou pela tentativa de encobrir as evidncias.

Figura 1 - Tipos de manchas de sangue. Gotejada (esquerda), Transferida (centro) e Projetada (direita).

O estudo das manchas de sangue para fins forenses faz parte da Serologia. Este o termo usado para descrever a prtica de uma gama de testes de laboratrios que usam reaes de soro de sangue e demais fluidos corporais. Tipo sanguneo, caracterizao de manchas como sendo de sangue, teste de paternidade, identificao do smen em casos de estupro e exames de DNA so apenas alguns exemplos dos casos que a serologia abrange. Neste artigo estaremos analisando apenas algumas tcnicas de uma vasta gama de testes.

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Fenmenos com emisso de luz


Antes de se analisar as tcnicas na deteco e caracterizao de sangue, julgo importante observar com ateno as diferenas que existem entre os fenmenos com emisso de luz. Mais adiante iremos tratar do fenmeno da quimiluminescncia e creio ser fecundo destacar as diferenas existentes entre as vrias formas de emisso. Na Figura 2 temos um esquema de classificao destes fenmenos. No objetivo aqui fazer uma discusso prolongada sobre as manifestaes em questo, contudo, de maneira sinttica, se far alguns comentrios a fim de diferenci-los conceitualmente.

emisso de luz

com aquecimento? sim no

incandescncia

luminescncia
de foras mecnicas

sim

no

triboluminescncia
sim

com excitao atravs de luz? no

imediatamente? sim no

inanimado? sim no

fluorescncia

quimiluminescncia

fosforescncia

bioluminescncia

Figura 2 Possveis comportamentos assumidos por tomos ou molculas aps excitao eletrnica. Adaptado de OHARA, ENGELSON e PETER, 2005.

O fenmeno da incandescncia ocorre nas famosas lmpadas incandescentes. Ele se baseia no aquecimento de um material at que o mesmo comece a emitir luz. Uma corrente eltrica posta em contato com um filamento de tungstnio, por exemplo, pode ser considerado um sistema que emite luz por incandescncia. Este processo emite muito calor e um pouco de luz. Cerca de 90 a 96 % da energia emitida por uma lmpada incandescente est na forma de calor. J os 4 a 10 % restantes esto na forma de luz, a qual se utiliza para iluminar os ambientes. A luminescncia, ou tambm conhecida como luz fria, a classificao mais genrica das formas de emisso de luz que no sejam provenientes de incandescncia. A triboluminescncia um tipo de luminescncia que gerada pelo choque mecnico ou tenso aplicada em certos sistemas cristalinos altamente ordenados. As razes para que certos materiais tenham esta caracterstica e outros no ainda motivo de controvrsia na comunidade cientfica e no objetivo aqui se fazer uma anlise mais aprofundada a respeito deste fenmeno. A fluorescncia o fenmeno que ocorre nos fogos de artifcio. Quando os tomos de um determinado material so excitados, os eltrons so promovidos a nveis de energia mais elevados. Quando a fonte de excitao retirada, os eltrons voltam ao estado de energia original e, ao fazer isto, emitem um fton de energia igual absorvida no processo de promoo.
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Cincia Forense: manchas de sangue A fosforescncia assemelha-se com a fluorescncia. Os eltrons tambm so promovidos para nveis mais energticos. O diferencial est no processo de volta ao estado inicial. Enquanto na fluorescncia o processo ocorre quase que instantaneamente, na fosforescncia a volta ocorre em um tempo maior. Os eltrons no retornam imediatamente para o nvel original, mas fazem escalas nos nveis intermedirios entre os estados inicial e final. Esta demora pode ser de alguns microssegundos ou at muitos minutos. Exemplo de fosforescncia est em alguns interruptores eltricos que possuem sais com tomos que exibem este comportamento. Tambm est presente nas telas de televises e computadores, ajudando no processo de formao da imagem. A quimiluminescncia caracteriza-se pela emisso de luz atravs de uma reao qumica. A tcnica de caracterizao de sangue com luminol um exemplo de processo quimiluminescente. Quando este tipo de reao ocorre em seres vivos, temos a bioluminescncia. Exemplo deste tipo de reao a que ocorre nos fotcitos clulas especializadas em reaes de emisso de luz como produto do vaga-lume (veja Figura 3).
A
O C N N OH H

B
luciferina, ATP, O2, Mg2+
HO N N

O C

OH

OOH

HO

luciferina
H2O O C N O

E
CO2
N N O

C
N

O hv (BL0,9 E.mol-1)
HO S S

HO

oxiluciferina

Figura 3 - Mecanismo de bioluminescncia nos vaga-lumes.

Nesse mecanismo do vaga-lume ocorre a oxidao da luciferina (A) pelo oxignio molecular, reao esta catalisada pela enzima luciferase, gerando a oxiluciferina (E) mais a luz que observada por ns (D). Este mecanismo apresenta um alto rendimento quntico de bioluminescncia (em torno de 0,9 E.mol-1), sendo que esta energia produzida pelo inseto comumente chamada de "luz fria" devido ao seu alto rendimento. interessante destacar que 90 a 96% da energia produzida convertida em luz, e somente 4 a 10% convertida em calor: o inverso de uma lmpada incandescente! Esquematicamente, uma reao quimiluminescente pode ser pensada como o inverso de uma reao fotoqumica. Nesta ltima, uma determinada substncia, ao absorver um fton, atinge um estado eletrnico excitado e, atravs de uma reao qumica, forma-se um produto no estado eletrnico fundamental. J em uma reao quimiluminescente, ocorre uma reao qumica, que leva produo de uma substncia no estado eletrnico excitado, que, pelo decaimento para o estado eletrnico fundamental, emite luz. Para reaes extremamente exotrmicas e nas quais a geometria do estado eletrnico excitado do(s) produto(s) parecida com a geometria do(s) reagente(s), a energia livre de ativao da reao conduz ao estado eletronicamente excitado que pode ser menor do que aquela que leva ao estado eletrnico fundamental.

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Identificao de manchas de sangue


Quando uma mancha de sangue chega ao laboratrio forense, a mesma sujeita a testes muito sensveis, porm pouco especficos, a fim de determinar se ela de sangue ou no. A este tipo de anlise se d o nome de teste de presuno. Exames presuntivos de sangue so geralmente catalticos, envolvem o uso de agente oxidante, como o perxido de hidrognio [H2O2(aq)] e um indicador que muda de cor (ou luminescente) e que sinaliza a oxidao catalisada pela hemoglobina como se fosse uma enzima peroxidase. Este comportamento de peroxidase da hemoglobina foi descoberto em 1863 pelo cientista alemo Schnbein. De l para c inmeros testes de presuno foram elaborados. Do total de reagentes que existem, apenas um pequeno nmero tem interesse prtico no campo da cincia forense. Os reagentes aqui discutidos sero: Reagente de Kastle-Meyer, reagente de benzidina e luminol.

Reagente de Kastle-Meyer
O reagente de Kastle-Meyer constitudo por uma mistura de substncias. Um exemplo de proporo seria 0,1 g de fenolftalena, 2,0 g de hidrxido de sdio (sob a forma de pellet), 2,0 g de p de zinco metlico e 10 mL de gua destilada. Na Figura 4 temos as reaes que ocorrem tanto no processo de produo do reagente como nas que ocorrem quando ele aplicado na suposta mancha de sangue. Para realizar o procedimento de deteco, macera-se a mancha ou a crosta com 1 mL de gua destilada ou hidrxido de amnio concentrado. Aps, seleciona-se duas gotas do macerado e, aps coloc-las em um tubo de ensaio, misturam-se duas gotas do reagente. Enfim, adicionam-se soluo duas gotas de perxido de hidrognio a 5%.
Zn(s) + 2 NaOH(aq) + 2 H2O (l)

Na2[Zn(OH)4](s) + 2 [H] OH OH

[1]

OH

[H] C C O C OH C O O

[2]

forma vermelha

forma incolor

Hb + H2O2(aq) OH OH

Hb + H2O(aq) + [O] OH O

[3]

[O] [4] C O C O C O C OH

forma incolor

forma vermelha

Figura 4 Reaes referentes ao reagente de Kastle-Meyer. CHEMELLO, E. Qumica Virtual, janeiro (2007)

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Cincia Forense: manchas de sangue Na figura anterior [Figura 4], em [1], temos a reao entre o p de zinco e o hidrxido de sdio. O produto de interesse o hidrognio nascente, que garantir a forma incolor da fenolfatelna [2]. Se a amostra for de sangue, esta ter, necessariamente, hemoglobina, a qual possui a caracterstica de decompor o perxido de hidrognio (comportamento de peroxidase) em gua e oxignio nascente [3]. Ento, este oxignio promover a forma colorida da fenolftalena, evidenciando ao perito que a amostra pode conter sangue. A molcula de hemoglobina est presente nos eritrcitos (glbulos vermelhos) e carrega consigo complexos inorgnicos, tendo como tomo central um on de ferro, complexo este denominado "Heme" (veja Figura 5).
CH2 CH3

H3C N Fe N H3C N CH3 N CH2

O OH HO
Figura 5 Representao da (esquerda) hemoglobina e (direita) complexo heme.

Diferentemente da mioglobina, que tambm exerce papel no transporte de oxignio e possui apenas um grupo 'heme', a hemoglobina possui quatro grupos. Este complexo ir ser responsvel pela fixao e transporte do oxignio, uma vez que ele est ligado estrutura protica da hemoglobina e esta, por sua vez, promove a movimentao de toda a estrutura. Cada hemoglobina carrega quatro molculas de gs oxignio por vez, visto que existem quatro complexos hemes ligadas a ela. A ligao do complexo com o oxignio fraca e instvel, dependendo de uma srie de fatores, como pH, temperatura e presso parcial dos gases dissolvidos no sangue. neste stio ativo com on ferro que ocorre e decomposio do perxido de hidrognio. Causas de erro no mtodo incluem a presena de sais de ferro, cobre, suco gstrico ou qualquer outra substncia capaz de decompor a molcula de H2O2 em gua e oxignio. A sensibilidade deste reagente de 1/1.000.000.

Reagente de Benzidina
O reagente de benzidina, tambm conhecido como Adler-Ascarelli, tambm uma mistura de substncias. Uma proporo possvel seria 0,16 g de benzidina cristalizada, 4 mL de cido actico glacial e 4 mL de perxido de hidrognio de 3 a 5 %. O procedimento para produzi-lo consiste em macerar a mancha de sangue em 1 mL de gua destilada ou em cido actico glacial. Aps, separa-se duas gotas do macerado e adicionam-se a estas, em um tubo de ensaio, duas gotas do reagente recentemente preparado. Da mesma forma que o reagente de Kastle-Meyer, o reagente de benzidina baseia-se na catlise da decomposio do perxido de hidrognio em gua e oxignio pela hemoglobina presente no sangue. O oxignio formado ir oxidar a benzidina, alterandolhe sua estrutura, fenmeno que perceptvel, sob o ponto de vista experimental, com o aparecimento da colorao azul da soluo (Figura 6).

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H2N NH2

H2N

NH2 [O]

H2N

NH2 N N

Figura 6 - Reagente de Benzidina e o produto de colorao azul.

Por se tratar de um reagente que se decompe rapidamente em soluo, recomenda-se que a preparao do mesmo seja feita no momento em que ele ser usado. Sugere-se o teste com sangue diludo (ensaio positivo) e gua destilada (ensaio negativo). A sensibilidade deste reagente de 1/2.000.000.

Luminol
Este clssico nos seriados de investigao cientfica e tambm na vida real. O 5-amino-2,3-di-hidro-1,4-ftalazinadiona, mais conhecido por luminol, um composto que, sob determinadas condies, pode fazer parte de uma reao quimiluminescente. Uma das formas de obt-lo a partir do cido 3-nitroftlico, conforme mostra a Figura 7.
NO2 COOH NH2 NH2 NO 2 O Na2S2O4 NH2 O

+
COOH

-H2O O

NH NH

NH NH O luminol

cido 3-nitroftlico

hidrazina

5-nitroftalhidrazina
Figura 7 Sntese do Luminol.

Na cena do crime nem sempre h evidncias visveis de sangue. Algum poderia, por exemplo, limpar o local, a fim de encobrir o acontecido. Porm, para a sorte nossa e dos peritos, o luminol reage com quantidades muito diminutas de sangue. Sua sensibilidade pode chegar aos impressionantes 1/1.000.000.000, mesmo em locais com azulejos, pisos cermicos ou de madeira, os quais tenham sido lavados. A eficcia do produto to grande que possvel a deteco de sangue mesmo que j tenham se passado seis anos da ocorrncia do crime. A reao qumica produzida no afeta a cadeia de DNA, permitindo o reconhecimento dos criminosos ou das vtimas. Por isto, ele recomendado para locais onde h suspeita de homicdio e superfcies que, aparentemente, no exibem traos de sangue (veja Figura 8).

Figura 8 - Exemplo de um ambiente sem e com luminol (esquerda) e as marcas de um calado realadas pela quimiluminescncia do luminol [fonte: HowStuffWorks).

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Cincia Forense: manchas de sangue A reao de luminol com perxido de hidrognio em gua necessita de um catalisador redox. Uma grande variedade de metais de transio pode ser usada para este fim. No caso do teste para a presena de sangue, este catalisador o on do elemento ferro que est presente nos grupos heme da hemoglobina. Esse catalisador oxida o luminol [1] (veja Figura 9) em diazoquinona [2], a qual sofre ataque pelo nion de perxido de hidrognio, formando o endo-perxido [3]. Este ltimo perde nitrognio (uma molcula muito estvel) e forma o dinion do cido 3aminoftlico no estado excitado [4], o qual decai para o estado fundamental [5], processo acompanhado pela emisso de radiao por fluorescncia do 3-aminoftalato com comprimento de onda de aproximadamente 431 nm.
H2N O 2 M+n N NH O O H+ + 2 M+(n-1) N N H2N O

[1]
H2N HO2N N O H
+

[2]
O

H2N

O O

N N

[2]
N2 H2N N O N

[3]

H2N

O O O

[3]

[4]

H2N

h 431 nm

H2N

O O O

O O O

[4]

[5]

Figura 9 - Mecanismo esquemtico da oxidao de luminol por perxido de hidrognio em meio aquoso, catalisado por metais de transio (Mn+).

Ns humanos percebemos as cores da radiao eletromagntica pela viso se esta estiver na estrita faixa de comprimento de onda que vai de 400 a 700 nm, aproximadamente (veja Figura 10). Uma rpida olhada no espectro eletromagntico nos mostra que a cor da luz emitida pelo processo de quimiluminescncia do luminol atravs da oxidao com perxido de hidrognio azul. Esta cor pode variar dependendo de qual
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Cincia Forense: manchas de sangue agente oxidante se utiliza. Por exemplo, usando-se dimetilsulfxido ao invs de perxido de hidrognio, o comprimento de onda da luz emitida ser de 502 nm, o qual est associado cor verde.

Figura 10 O Espetro Eletromagntico [fonte: NAIRNE, 2004]

Esto enganados aqueles que acham que todos os peritos brasileiros esto munidos desses materiais. Se na poca do assassinato do jornalista Tim Lopes a polcia brasileira j utilizasse o Luminol, o trabalho dos peritos seria facilitado para descobrir o local do crime e fazer o reconhecimento do corpo da vtima, afirmou Cludio Lopes, coordenador do projeto de sntese do luminol na UFRJ em uma reportagem no site da mesma universidade. Mesmo pases ditos desenvolvidos tambm no possuem a sua disposio toda a tecnologia que vemos na televiso e cinema. E o que mais preocupa que os bandidos, assassinos e demais pedras no sapato da sociedade tambm se especializam e elaboram estratgias para evitar evidncias. Ao revelar a mincia da ao dos peritos nos programas de fico, d-se inspirao e conhecimento aos criminosos reais, que passam a se prevenirem e terem cuidado para no deixarem evidncias que os incriminem. Suzanne, filha do casal Richthofen, morto no dia 30 de outubro de 2002 em So Paulo, por exemplo, instruiu os assassinos de seus pais a usarem meias-calas na cabea, na cena do crime, para evitar a queda de fios de cabelo. Outro caso que marcou a comunidade forense e a populao em geral foi o julgamento do ex-jogador de futebol americano O. J. Simpson (veja Figura 11). Havia uma acusao contra ele de duplo homicdio, aps a descoberta dos corpos de Nicole Simpson e Ron Goldman, sua ex-mulher e amigo, respectivamente. O julgamento durou 372 dias. Segundo algumas fontes, a palavra sangue foi dita quinze mil vezes no julgamento. E foi justamente esta evidncia que acabou decidindo o caso. A polcia encontrou uma cena de crime com muitas provas latentes: muito sangue, peas de vesturio, pegadas e uma trilha de sangue que revelava o caminho seguido pelo criminoso(a). Seguindo estas pistas, os policiais chegaram casa do ex-marido de Nicole, O. J. Simpson, obtendo no local mais evidncias: manchas de sangue em seu carro, nas suas meias e no cho do jardim. Exames de DNA comprovaram que esse sangue era das vtimas. Assim, a promotoria acreditava ter nas mos um caso que no poderia ser contestado. Mas foi surpreendida pela estratgia dos advogados de defesa: o questionamento das provas. As cmeras de televiso flagraram um perito da polcia
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Cincia Forense: manchas de sangue coletando amostras sem luvas, policiais manipulando evidncias sem trocar as luvas e muitas pessoas circulando na cena do crime, a qual no tinha sido bem isolada. Alm disso, as evidncias foram coletadas sem identificao e registro prvios, as amostras foram conservadas e empacotadas sem a devida separao e, o mais grave: a coleta foi feita por apenas uma pessoa, sem testemunhas. Finalmente, os advogados provaram que o laboratrio criminal da polcia de Los Angeles no cumpriu padres mnimos de manuseio, preservao e separao das evidncias.

Figura 11 Em destaque o ex-jogador de futebol americano O. J. Simpson no julgamento vestindo as luvas que supostamente ele havia usado na cena do crime. [ AP www.ap.org]

Com base nesses erros, a defesa alegou negligncia no manuseio das provas e contaminao das mesmas, acusando os policiais de possvel fraude. As provas foram desconsideradas e o ru foi absolvido. Posteriormente, em 1997, Simpson foi submetido a um julgamento cvel no qual foi declarado culpado e condenado a pagar US$ 33,4 milhes aos familiares das vtimas. At onde se sabe a famlia, at hoje, ainda no recebeu o valor referido. O "julgamento do sculo", com ficou conhecido, se tornou um circo sem precedentes, despertou o fantasma do racismo e criou srias dvidas sobre o funcionamento do sistema judicial americano. As enquetes mostraram que a maior parte dos americanos brancos achava que Simpson era culpado, enquanto a maioria dos negros acreditava na sua inocncia. importante salientar s pessoas, portanto, com base no exemplo do caso de O. J. Simpson, que preservar a cena do crime fundamental para a investigao e a soluo do caso. Por isto que existe toda uma preocupao, como o isolamento do local do crime. Alm disto, os procedimentos de coleta e conservao das evidncias devem passar por um rigoroso protocolo, a fim de evitar a contestao de provas, como ocorreu no caso narrado.

Bibliografia utilizada
ALBERTIN, R. et al. Quimiluminescncia orgnica: alguns experimentos de demonstrao para a sala de aula. Qumica Nova, 21(6) (1998). BUDOWLE, B. et al. The Presumptive Reagent Fluorescein for Detection of Dilute Bloodstains and Subsequent STR Typing of Recovered DNA. Journal Of Forensic Sciences 2000; 45(5):1090-1092. CHEMELLO, E. A qumica do vaga-lume! NAEQ Fevereiro, 2004. Disponvel em: www.ucs.br/ccet/defq/naeq/material_didatico/textos_interativos_26.htm CHEMELLO, E. O equilbrio cido-base no sangue. NAEQ Junho, 2004. Disponvel em: www.ucs.br/ccet/defq/naeq/material_didatico/textos_interativos_34.htm DUPR, D. B. Blood or Taco Sauce? Journal Of Chemical Education. Vol. 73, n 1, January 1996. FONSECA, M. R. M. Completamente Qumica: qumica orgnica So Paulo: FTD, 2001.

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Cincia Forense: manchas de sangue Howstuffworks "How Luminol Works" - http://science.howstuffworks.com/luminol.htm - acesso em 19/12/2006. INMAN, K., RUDIN, N. Principles and Practice of Forensic Science: The Profession of Forensic Science Handcover: CRC Press, 2000. Folha Online - Ilustrada - Livro de O.J. Simpson retirado de leilo na internet 23/11/2006. Disponvel em: http://www1.folha.uol.com.br/folha/ilustrada/ult90u66300.shtml KOOLMAN, J., ROEHM, K. H. Color Atlas of Biochemistry. Second Edition New York: Thieme, 2005. Luminol - Wikipedia, the free encyclopedia. http://en.wikipedia.org/wiki/Luminol. Internet: Acesso em 19/12/2006. NAIRNE, J. et al. Psychology: The Adaptive Mind. Second Edition Canada: Thomson Nelson, 2004. OHARA, P. B., ENGELSON, C. PETER, W. S. Turning on the Light: Lessons from Luminescence. Journal Of Chemical Education. Vol. 82, n 1, January 2005. RUMJANEK, F. D., RINZLER, C. M. C. Os exames de DNA nos tribunais. Revista Cincia Hoje. Vol. 29, n 169, maro 2001. SCHIRO, G. Collection and Preservation of Blood Evidence from Crime Scenes Internet: http://www.crime-scene-investigator.net/blood.html - acesso em 19/12/2006. SHEEHAN, F. X., KOBILINSKY, L. Human Blood Identification: A Forensic Science Approach. Journal Of Chemical Education. Vol. 61, n 6, June 1984. STEVANI, C. V., BAADER, W. J. O sistema quimiluminescente perxi-oxalato. Qumica Nova. Vol. 22, n 5, setembro/outubro, 1999. TOCHETTO, D. (organizador) Qumica Legal e Incndios Porto Alegre: Editora Sagra Luzzatto, 1999. UFRJ ON LINE - 09/09/2003 - Pesquisadores da UFRJ desenvolvem Luminol http://www.ufrj.br/detalha_noticia.php?codnoticia=749 acesso em 19/12/2006.

Para saber mais


Serology: It's in the Blood - The Crime library http://www.crimelibrary.com/criminal_mind/forensics/serology/3.html - acesso em 19/12/2006. PONCE, A. C., PASCUAL, F. A. V. Critical Revision of Presumptive Tests for Bloodstains. Forensic Science Communications. Vol. 1, n2, jully 1999. Disponvel em: http://www.fbi.gov/hq/lab/fsc/backissu/july1999/ponce.htm TUMOSA, C. S. A Potential Source of Difficulty in the Initial Testing for Blood. Forensic Science Communications. Vol. 6, n 4, october 2004. Disponvel em: http://www.fbi.gov/hq/lab/fsc/backissu/oct2004/technote/2004_10_note01.htm

Agradecimento
Agradeo ao qumico e amigo Leandro Maranghetti Loureno pelas referncias bibliogrficas conseguidas junto s instituies com acesso permitido e minha namorada, Llian Mors, pelas revises textuais.

Sobre o autor
Emiliano Chemello licenciado em Qumica pela Universidade de Caxias do Sul e professor do Ensino Mdio na regio da Serra Gacha. website: http://www.quimica.net/emiliano e-mail: chemelloe@yahoo.com.br MSN: chemelloe@hotmail.com
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Cincia Forense: balstica

Introduo
Todos os dias, ao ligar a televiso e sintonizar no noticirio, assiste-se algo mais ou menos assim: Joo e Jos tentaram assaltar um banco e, na fuga, ambos atiraram com armas de fogo contra os policiais. Um dos tiros acabou atingindo o policial Antnio, que no resistiu e acabou falecendo logo em seguida. Os assaltantes foram capturados e levados delegacia, mas nenhum deles assumiu a autoria do disparo que ocasionou a morte do policial.Como saber qual dos dois suspeitos realmente o culpado pela morte de Antnio, j que ambos estavam armados? Talvez a cincia forense possa nos auxiliar em uma resposta. Em filmes e sries de televiso sobre investigao criminal, a situao de trabalho ideal: h sempre uma soluo para os casos; os equipamentos so os melhores e sempre esto disponveis; h poucos casos, dentre outros idealismos que a fico propicia. Na prtica, as coisas no funcionam to bem assim. S para citar um aspecto, segundo o levantamento realizado pela Associao Brasileira de Criminalstica, em abril de 2003, o estado que possui mais carncia de peritos o Cear. Na poca da pesquisa, havia 23 peritos, sendo que o nmero mnimo recomendando para que haja uma relao de 1/5.000 perito/habilitantes seria de 1.486. O melhor estado em nmeros de peritos o Distrito Federal, que possui 201, mas o recomendado seria 410. Este artigo tratar de algumas tcnicas balsticas utilizadas pelos peritos, as quais ajudam nas investigaes de crimes cometidos com arma de fogo. Apesar de nem todas serem realmente utilizadas, pelo menos aqui no Brasil ou em alguns estados mais deficitrios, sempre bom saber que elas existem e que fazem parte, a cada dia de forma mais intensa, da rotina dos cientistas forenses de todo o mundo. Boa leitura!

A arma de fogo
O termo arma refere-se a todo objeto que possui a caracterstica de aumentar a capacidade de ataque ou defesa. Determinados objetos so produzidos com este fim, sendo denominados armas prprias. Outros, como foice, machado, por exemplo, podem ser usados como arma. Estas so chamas de armas imprprias. As armas prprias classificam-se em manuais e de arremesso. As manuais funcionam como uma espcie de prolongamento do brao, como a espada, punhal e a maioria das armas brancas (constitudas por lmina metlica). J as de arremesso so as que produzem efeitos distncia de quem as utilizam. aqui que se classifica a arma de fogo. So de interesse da balstica forense as armas perfuro-contundentes, ou seja, as que causam, ao mesmo tempo, perfurao e ruptura de tecido, com ou sem lacerao e esmagamento dos mesmos. Uma pesquisa realizada na dcada de 90 concluiu que, do total de mortes do perodo, no Brasil, cerca de 33 % foram em decorrncia de homicdios. As armas de fogo contriburam em 50 % destes casos j em 1991, e em 70 % no ano 2000. Este crescimento, conforme indicaram os dados da pesquisa, ocorreu em ambos os grupos de sexo e em todas as capitais do pas. Talvez seja por isto que a balstica assume grande importncia dentro da cincia forense. As tcnicas de caracterizao de armas e projteis evoluem junto com a cincia. A seguir iremos ver algumas tcnicas que esto sendo utilizadas pelos peritos forenses. Antes disso, vamos saber mais sobre o fenmeno do tiro.

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Mecanismo de disparo
A arma de fogo , em essncia, uma mquina trmica. Sua utilizao independe da fora fsica (excetuando a fora relacionada com o pressionamento do gatilho) e, como no poderia deixar de ser, baseia-se nos princpios da termodinmica. A arma constituda pelo aparelho arremessador ou arma propriamente dita, a carga de projeo (plvora1) e o projtil2, sendo que estes dois ltimos integram, na maioria dos casos, o cartucho. Na Figura 1 temos um esquema que mostra as principais partes que constituem um cartucho. Aqui no se far uma anlise dos vrios tipos, mas de um esquema padro, no qual as partes esto presentes na maioria dos cartuchos.

Figura 1 Esquema geral de composio interna de um cartucho. [adaptado da Revista Percia Federal, Set/Out 2003]

O cartucho observado de fora parece grande. Contudo, uma pequena parte, o projtil, que ir ser expelido pela arma aps o disparo. A fora com que este projetado para fora do cano depende da combusto da plvora. Esta gera gases, os quais, com a elevao da temperatura interna (podendo chegar aos 2500 C) aumentam o volume e a presso no interior da arma, fazendo com que o projtil seja empurrado, violentamente. Antes que ocorra a combusto da plvora, necessrio uma chama iniciadora, a qual proveniente da espoleta. Ela contm uma pequena quantidade de explosivo3

1 A plvora mais antiga, mas que ainda hoje utilizada em alguns tipos de cartucho, a Plvora Negra. Ela constituda por 75 % de salitre (nitrato de potssio), 13 % de carvo vegetal e 12 % de enxofre. O salitre atua como comburente, fornecendo oxignio, j o carvo e o enxofre como combustvel. A partir de 1845, surgiram as denominadas Plvoras Qumicas, tendo como ingrediente ativo a nitrocelulose. A Companhia Brasileira de Cartuchos CBC , em 1987, comeou a produzir em escala industrial a sua prpria plvora. Para cartuchos calibre 38 SPL, por exemplo, usada a plvora CBC 216, a qual constituda por 97 % de nitrocelulose, 1,5 % de difenilamina, 1,0 % de sulfato de potssio e 0,2 % de grafite. 2 At 1986 a CBC produzia os projteis com chumbo puro. A partir desta data, todos os projeteis CBC foram produzidos com uma liga de chumbo, composta em grande parte por chumbo e um elemento endurecedor, o antimnio, na porcentagem de 1 a 2,5 %. A expresso popular levar chumbo, portanto, deve ser revista. 3

A CBC usa, atualmente, em seus cartuchos, misturas iniciadoras base de estifinato de chumbo [PbO2H(NO2)3], nitrato de brio, trissulfeto de antimnio, tetrazeno e alumnio. Quando o percutor deforma a cpsula de espoletamento, a mistura iniciadora nela contida comprimida contra a bigorna, quebrando os cristais de estifinato de chumbo e tetrazeno. Inicia-se assim uma chama cujo combustvel o nitrato de brio e o oxidante o trissulfeto de antimnio. A presena do alumnio gera uma maior vivacidade na chama. Este pode ou no estar presente na composio da mistura iniciadora, dependendo do tipo de cartucho. A partir de 1998 a CBC lanou os cartuchos denominados de clean range, cuja mistura iniciadora da espoleta no possui chumbo, brio e antinnio. Esta mistura composta por diazol, nitrato de estrncio, plvora e tetrazeno. CHEMELLO, E. Qumica Virtual, fevereiro (2007) Pgina 2

Cincia Forense: balstica sensvel a choque mecnico. O estojo, geralmente constitudo por lato 70:30 (70% de cobre e 30 % de zinco), trata-se da cpsula que contm o projtil na ponta, a plvora dentro e a espoleta na base. Tambm de forma esquemtica, na Figura 2 temos os estgios que existem em um disparo. Lembro novamente ao leitor que no se deseja realizar neste artigo um estudo detalhado do processo, mas uma anlise dos aspectos principais. Por isto, partes da arma bem como alguns mecanismos secundrios no sero mencionados.

Figura 2 Fenmeno do tiro. Em (a) temos a arma em seu estgio pr-tiro. Observe o distanciamento entre o co e o percutor. Em (b) temos o primeiro estgio do disparo, onde o co movimenta-se, geralmente via ao mecnica, empurrando o percutor contra a base do cartucho, ao que d inicio exploso da mistura iniciadora, a qual promove a combusto da plvora. J em (c) temos a representao do aumento da presso interna (representada pelas setas) que fazem com que o projtil seja expelido para fora da arma, atravs do cano. [adaptado da Revista Percia Federal, Set/Out 2003]

Ao ser acionado o mecanismo de disparo, geralmente atravs de fora mecnica pelo pressionamento do gatilho, a ponta do percutor deforma a espoleta, comprimindo a mistura iniciadora. Esta, ao sofrer o impacto, produz chamas de alto poder calorfico que passam por orifcios existentes no fundo do alojamento da espoleta e do incio combusto dos gros de plvora. A combusto da plvora gera, em um curtssimo espao de tempo, um volume de gases considervel. A presso destes impele o projtil atravs do cano da arma, que a nica sada possvel. A expanso dos gases vai tambm atuar sobre a parte interna da arma, projetando-a para trs, fenmeno conhecido como o soco da arma.

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Confronto microbalstico
Conforme vimos anteriormente, ao observamos com mais detalhe o mecanismo de disparo de uma arma de fogo, o projtil expelido pelo cano e sai na direo do alvo. Este projtil, por estar em contato direto com a superfcie interna do cano, passa a incorporar marcas e micro-estriamentos em sua superfcie (veja Figura 3).

Figura 3 esquerda da linha preta, a bala em questo e direita da mesma linha o padro de marcas observado nos testes com a arma de fogo. As setas indicam as marcas que coincidem, o que confirma que os projteis foram expelidos pela mesma arma. [fonte: Revista Percia Federal, Set/Out 2003]

Mesmo que a arma seja do tipo lisa, sem raias, no importa o quanto liso seja o cano, sempre haver minsculas imperfeies, diferenas de densidade e dureza do ao - dentre outros aspectos - que daro um carter nico s marcas existentes nos projteis expelidos por uma arma de fogo. Lembra da histria do policial Antnio, na introduo deste artigo? Pois os testes que veremos a seguir podem ser utilizados para desvendarmos o caso. Como ligar a arma de fogo ao crime? Uma alternativa uma tcnica utilizada pelos peritos chamada de Confronto Microbalstico. Obtm-se, no caso, o projtil alojado internamente na vtima. Aps, faz-se testes com a(s) arma(s) de fogo suspeita(s), disparando-a(s) em tanques de gua, por exemplo, a fim de obter o projtil sem deformaes, a no ser as inerentes ao contato com as raias ou superfcie interna do cano. Aps, com a ajuda de um microscpio ptico, observa-se as micro-estrias dos dois projteis (o retirado da vtima e o produzido no tanque de gua) e, atravs desta observao, pode-se ligar ou no a arma ao crime. O confronto microbalstico no se restringe apenas aos projteis. Se houver cpsulas de cartuchos deflagradas na cena do crime, possvel analisar as marcas do percutor e as ranhuras produzidas na culatra (veja a Figura 4).

Figura 4 Cpsulas de munio percutidas pela mesma arma. Em destaque as marcas promovidas pelo percutor e pela culatra [fonte: Revista Percia Federal, Set/Out 2003]

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Cincia Forense: balstica O Confronto Microbalstico , portanto, a comparao das marcas e microestriamentos deixados pelos canos, percutores e culatras nos projteis e nas cpsulas visando identificar a arma de fogo que os tenha deflagrado. A anlise pode ser genrica ou especfica. A genrica permite que se tenha uma identificao do fabricante da arma, modelo, tipo de munio, etc. J uma anlise especfica pode constatar se um projtil foi ou no expelido pela arma em questo. Seria como uma anlise de impresso digital, onde cada arma produz um conjunto de micro-estrias nico.

Resduos de arma de fogo


No momento do tiro so expelidos, alm do projtil, diversos resduos slidos (provenientes do projtil, da detonao da mistura iniciadora e da plvora) e produtos gasosos (monxido e dixido de carbono, vapor dgua, xidos de nitrognio e outros), conforme ilustra a Figura 5.

Figura 5 - A nuvem de fumaa criada durante a descarga de uma arma de fogo deixa resduos nos objetos prximos. [fonte: JOHLL, 2006]

Tambm integram a parte slida dos resduos partculas constitudas pelos elementos antimnio (Sb), brio (Ba) e chumbo (Pb), provenientes de explosivos como sais de chumbo, brio e antimnio, alm da composio da liga de projteis e cartuchos. Parte desses resduos slidos permanecem dentro do cano, ao redor do tambor e da cmara de percusso da prpria arma. Porm, o restante projetado para fora, atingindo mos, braos, cabelos e roupas do atirador, alm de se espalharem pela cena do crime. Dependendo do tipo de resduo, a constatao pode ser fsica, com o auxlio de uma lupa. Se no for possvel realiz-la, pode-se usar o exame qumico. Os nitritos, que tambm so produzidos em disparos, podem ser detectados com o reativo de Griess (cido parasulfanlico). Contudo, vale lembrar que os nitritos sofrem oxidao pelo oxignio do ar, passando gradualmente a nitratos ou volatilizando-se como cido nitroso. Por isto, o exame deve ser feito o mais breve possvel aps o suposto disparo. Alm disto, o reativo de Griess usado para identificar a presena de nitritos de qualquer origem, no sendo, portanto, reativo especfico para nitritos oriundos de disparo por arma de fogo. Um resultado negativo desse teste no significa que a arma suspeita no tenha produzido tiro, visto a transformao relativamente rpida de nitritos em nitratos. J uma constatao positiva no garante, necessariamente, que tais nitritos sejam oriundos de um disparo. Por isto, a verificao com reativo de Griess no est sendo mais utilizado pelos peritos forenses. Eles alegam pouca confiabilidade como prova pericial, em decorrncia de diversos fatores que interferem em seu resultado. Um exame que gera mais dvidas que as j inerentes investigao, certamente, dificultaria ainda mais os trabalhos dos peritos. Outro teste qumico o que permite a deteco de chumbo pelo rodizonato de sdio como reagente colorimtrico. O complexo azul-violeta, resultante da reao do rodizonato de sdio com o chumbo, pode ser estabilizado pela adio de uma soluo tampo. Contudo, o desvanecimento comum de complexos colorimtricos ocorrer como conseqncia de um contato prolongado com o meio cido, proporcionado pelos 5% de cido clordrico necessrios prpria reao colorimtrica. Isto implicar na decomposio do complexo azul-violeta em compostos incolores, podendo-se perder resultados
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Cincia Forense: balstica positivos. Testes colorimtricos muitas vezes no possuem sensibilidade para detectar antimnio e brio de forma confivel, principalmente devido pequena quantidade de resduos presentes (na ordem de mg) nas mos de um atirador, bem como s suas dimenses (0,1 a 100 m), o que pode limitar a deteco e identificao das partculas. Um mtodo confivel de anlise de partculas residuais de tiros, segundo Sara Lenharo, perita criminal federal, deve ser capaz de determinar a presena de chumbo, brio e antimnio, alm da anlise morfolgica da partcula. A presena de dois dos trs elementos citados no pode ser associada, de forma categrica, aos resduos de arma de fogo, mas apenas ser um indicativo de disparo, no uma prova cabal. Para se ter uma idia de como a vida e os hbitos do suspeito devem ser levados em considerao, o chumbo pode aparecer associado ao bromo em partculas provenientes de automveis e ao antimnio nas placas de baterias e em algumas soldas. Partculas somente de chumbo podem estar vinculadas profisso do suspeito, como mecnico, pintor, laboratorista, soldador, etc. O brio encontrado em produtos de maquiagem, e em alguns tipos de papel, alm de detergentes. O antimnio usado em muitas fibras, como as de polister. Basicamente, os resduos de tiro so formados em condies especficas de temperatura e presso durante o disparo, permitindo vaporizao e rpida condensao de elementos oriundos principalmente da espoleta (Pb, Ba, Sb) em partculas com formato esfrico e dimetro variando entre 1-10 m. Esta variao depende do tipo de arma empregada para efetuar o disparo (revlveres produzem mais partculas esfricas do que pistolas) e do calibre (quanto maior o calibre, maior o tamanho mdio das partculas). A composio tambm pode variar, dependendo dos explosivos da espoleta. A cincia progride no af de promover respostas mais confiveis. Neste sentido, tcnicas como a Microscopia Eletrnica de Varredura acoplada a Espectroscopia por Disperso de Energia vem sendo utilizadas em todos os grandes laboratrios forenses do mundo na identificao de partculas oriundas de resduos de tiro.

Microscopia eletrnica de varredura


Os detetives, ao investigarem se um determinado suspeito efetuou tiros com arma de fogo ou no, geralmente levam vrios pequenos cilindros de metal chamados de stabs (veja Figura 6) que contm um adesivo, o qual esfregado principalmente na pele do suspeito, em pontos especficos como a palma e dorso da mo. Resduos de disparos de arma de fogo (doravante GSR, do ingls gunshot residue), se presentes, iro aderir ao adesivo. O cilindro ento colocado no Microscpio Eletrnico de Varredura (SEM, do ingls Scanning Electron Microscope) e a superfcie do adesivo varrida por um feixe de eltrons.

Figura 6 Kit GSR.

O SEM funciona basicamente como um microscpio ptico (MO). A diferena que um MO depende dos ftons para formar uma imagem. J o SEM depende dos eltrons emitidos pela superfcie dos possveis resduos que constituem amostra analisada. Apesar de muito empregado na cincia, o MO tem seu uso limitado pelo comprimento de onda da luz visvel. Utilizando-se luz com o comprimento de onda de 550 nm, por exemplo, dificilmente ser possvel distinguir entre objetos que estejam afastados por 0,005 mm. A descoberta de que os eltrons tm tambm um comportamento ondulatrio levou ao desenvolvimento do microscpio eletrnico (veja Figura 7), com um grau muito maior de resoluo do que o ptico. Usando eltrons, por exemplo, com compriCHEMELLO, E. Qumica Virtual, fevereiro (2007) Pgina 6

Cincia Forense: balstica mento de onda de 6,06.10-3 nm, os microscpios eletrnicos, dependendo do tipo, podem gerar imagens com resoluo da ordem de 5 nm.

Figura 7 Exemplo de um microscpio eletrnico de varredura [fonte: QuantaTM FEI Company www.fei.com]

O equipamento constitudo basicamente por uma coluna (canho de eltrons, sistema de demagnificao), uma unidade de varredura, uma cmara de amostra, um sistema de detectores e um de visualizao da imagem. O canho de eltrons usado para gerar um feixe de eltrons com energia e quantidade suficiente para ser captado pelos detectores. Este feixe eletrnico ento demagnificado por vrias lentes eletromagnticas, cuja finalidade produzir um feixe de pequeno dimetro e focaliz-lo em uma regio especfica da superfcie analisada. A energia perdida pelos eltrons ao atravessar a amostra liberada de diferentes formas, dependendo do tipo de interao entre o eltron primrio (proveniente do equipamento) e os tomos da mesma. Cada um dos sinais gerados (eltrons secundrios, retroespalhados, ftons, raios-X, eltrons Auger, etc.) requer um detector especfico para sua captao. Para anlises forenses, os trs principais sinais utilizados so os eltrons secundrios, eltrons retroespalhados e os raios-X. A formao de raios-X a partir da incidncia de eltrons na superfcie do adesivo est ilustrada no esquema presente na Figura 8. Vale lembrar que se trata de uma representao simplificada do sistema atmico, mas que serve para melhor compreender o fenmeno.

Figura 8 - Princpio de formao de raios-X a partir da interao dos eltrons primrios com os tomos da amostra. Optou-se pelo modelo planetrio de tomo para a melhor compreenso do fenmeno [fonte:JOHLL, 2006].

Na Figura 8, em (a) temos a representao do eltron proveniente do canho do microscpio incidindo sobre um tomo da amostra. Em (b) temos o fenmeno em que eltrons, com energia suficiente, arrancam outros existentes nas camadas mais internas da eletrosfera dos tomos do resduo. Os eltrons mais afastados do ncleo, ento, passam a ocupar a lacuna gerada pelo eltron do microscpio, a fim de recuperar a esCHEMELLO, E. Qumica Virtual, fevereiro (2007) Pgina 7

Cincia Forense: balstica tabilidade atmica. Esta transio emite radiao com comprimento de onda na faixa dos raios-X. Da mesma forma que os espectros de emisso so como uma impresso digital de um elemento, a radiao de raios-X emitida tambm caracterstica, pois cada transio eletrnica nos elementos diferente. Assim, atravs da observao do espectro, possvel fazer uma anlise tanto qualitativamente como quantitativamente. Para isto, a tcnica de Espectroscopia de Disperso de Energia (EDS, do ingls Energy Dispersive Spectroscopy) acoplada ao SEM. Um espectro de EDS de uma amostra de GSR pode ser visto na Figura 9.

Figura 9 Espectro de EDS de uma partcula encontrada em uma amostra de um barril de uma pistola Pietro Beretta cal. 7.65 mm, depois de atirar com um cartucho Giulio Fiocchi Lecco [fonte: ROMOLO, 1999]

Os eltrons secundrios fornecem imagem de topografia da superfcie das partculas existentes e so os responsveis pela obteno das imagens de alta resoluo (veja Figura 10). J os retroespalhados permitem a anlise de variao de composio ou contraste de nmero atmico.

Figura 10 Imagem de eltrons secundrios de um resduo de arma de fogo [fonte: Turk J. Chem, 1999].

Uma das lacunas da balstica forense, a qual infelizmente no mostrada na fico, a determinao do tempo em que o disparo foi realizado. Segundo Ludwig Niewhner, chefe da Seo de Resduos de Tiro da BKA (Bundeskriminalamt) a polcia Federal Alem ... ns podemos encontrar uma partcula de resduo de disparo de arma de fogo micromtrica, mas ns no podemos dizer se ela estava l h dois anos atrs ou h uma hora atrs. No obstante, Ludwig alerta para alguns estudos recentes que buscam realizar estimativas do tempo que o disparo foi efetuado. Alm disso, os problemas que podem afetar a anlise, como metodologia de coleta dos resduos e tamanho da rea a ser analisada, esto sendo gradativamente resolvidos ou minimizados, utilizando kits de coleta especficos para SEM e programas de computador que permitem a busca e anlise automatizada de partculas, segundo parmetros definidos pelo operador.
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Cincia Forense: balstica

Bibliografia utilizada
GAENSSLEN, R. E. et al. Instrumentation and Analytical Methodology in Forenslc Science. Journal Of Chemical Education. Vol. 62, n 12, December 1985. GAROFANO, L. et al. Gunshot residue Further studies on particles of environmental and occupational origin. Forensic Science International 103 (1999) 121. GKDEMIR, K., SEVEN, E., SARIKAYA, Y. The Application of a Scanning Electron Microscope With an Energy Dispersive X-Ray Analyser (SEM/EDXA) For Gunshot Residue Determination on Hands For Some Cartridges Commonly Used In Turkey. Turk J. Chem. 23 (1999), 83-88. JOHLL, M. E. Investigating chemistry. First Edition, W.H. Freeman, 2006. KOTZ, J. C., TREICHEL, P. J. Qumica e Reaes Qumicas. Quarta edio, volume 1 Rio de Janeiro: Editora LTC, 2002. LEN, F. P. Automated comparison of firearm bullets. Forensic Science International 156 (2006) 40-50. MEJIA, R. Why we cannot rely on firearm forensics. NewScientist. 23 November 2005. Disponvel em: http://www.newscientist.com/article.ns?id=mg18825274.300 MELO, A. J. G. Resduos de tiros: um estudo da cinemtica. PeritoCriminal.com.br Disponvel em: http://www.peritocriminal.net/artigos/tiroscinematica.htm - acesso em 22/01/2007. PERES, M. F. T., SANTOS, P. C. Mortalidade por homicdios no Brasil na dcada de 90: o papel das armas de fogo. Rev. Sade Pblica 2005;39(1):58-66. Quanta
TM

www.fei.com.

REIS, E. L. T. et al, Identificao de resduos de disparos de armas de fogo por meio da tcnica de espectrometria de massas de alta resoluo com fonte de plasma indutivo. Qumica Nova, Vol. 27, No. 3, 409-413, 2004. RENDLE, D. F. Advances in chemistry applied to forensic science. Chemical Society Reviews, 2005, 34, 10211030. Revista Percia Criminal, Nmero 22 setembro/dezembro 2005. Disponvel em: http://www.apcf.org.br. _______________________, http://www.apcf.org.br. Nmero 15 setembro/outubro 2003. Disponvel em:

ROMOLO, F. S., MARGOT, P. Identification of gunshot residue: a critical review. Forensic Science International 119 (2001) 195-211. SIEGEL, J., KNUPFER, G., SAUKKO, P. Encyclopedia of Forensic Sciences. Elsevier, 2000. TOCHETTO, D. (org.) Balstica Forense: aspectos tcnicos e jurdicos Porto Alegre: Editora Sagra Luzzatto, 1999.

Para saber mais


How Machine Guns Work Howstuffworks -Introduction to How Machine Guns Work. Disponvel em: http://science.howstuffworks.com/machine-gun.htm All you wanted to know about Electron Microscopy FEI Company. Disponvel em: http://www.fei.com/Portals/_default/PDFs/content/2006_06_AllYouWanted_pb.pdf

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Cincia Forense: balstica

Agradecimento
Agradeo ao qumico e amigo Leandro Maranghetti Loureno pelas referncias bibliogrficas conseguidas junto s instituies com acesso permitido.

Sobre o autor
Emiliano Chemello licenciado em Qumica pela Universidade de Caxias do Sul e professor do Ensino Mdio na regio da Serra Gacha. website: http://www.quimica.net/emiliano e-mail: chemelloe@yahoo.com.br MSN: chemelloe@hotmail.com

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Cincia Forense: exame de ADN

Introduo
O Teste de ADN para a justia como telescpio para as estrelas. No uma lio de bioqumica, no uma exibio das maravilhas reveladas por uma lente, mas um modo de ver as coisas como elas realmente so. (Barry Scheck e Peter Neufeld, Actual Innocence1) Acho que voc lembra da histria do Rei Salomo. Os registros so bblicos e aconteceu cerca de 3.000 anos. Trata-se da descrio em que o rei de Israel encontrase diante do impasse de duas mulheres que reinvidicavam a maternidade de uma criana. O rei Salomo ameaou cortar o beb ao meio, a fim de dar cada metade a uma mulher, fazendo com que a me verdadeira abrisse mo do filho para salvar sua vida. Uma bela histria. Fico imaginando o que este sbio rei faria se, em sua poca, houvesse toda a tecnologia de identificao humana que temos hoje. Mais adiante na histria, tenho certeza que o criador do personagem Sherlock Holmes lamentaria o fato de ter vivido na poca que antecedeu a era do ADN na investigao criminal. Um dos princpios da justia que as pessoas devem pagar pelos seus atos, e to somente por aquilo que cometeram. Julgar uma pessoa pelos seus antecedentes humanamente justificvel. Isto to verdade que duvido que haja quem no se revolta com o caso do menino Joo Hlio, no Rio de janeiro, que foi arrastado por centenas de metros por ladres que fugiam com o carro roubado. Igualmente no tenho dvidas que muitas pessoas gostariam de fazer o mesmo com os acusados do crime. E por que no citar os assassinatos, muitas vezes por motivos torpes, que acontecem todos os dias e ficamos sabendo por meio do noticirio? E o familiar da vtima de um assassinato, o que tem vontade de fazer? Mas a justia atual no permite que se faa, como a expresso popular diz, justia com as prprias mos, sem ficarmos impunes. Ela cobe este tipo de ao e se atm aos fatos e provas, a fim de aplicar as eventuais punies previstas em lei. Se certo ou no, as coisas funcionam assim. na aquisio e anlise de provas que a cincia forense entra na histria. Um dos princpios bsicos do mtodo cientfico a reprodutibilidade. Tanto aqui no Brasil como em qualquer lugar deste planeta, deve ser possvel realizar-se um experimento e se obter os mesmos resultados. Desta forma, a cincia passa a ser uma importante aliada da justia, pois fornece respostas com aceitveis nveis de preciso. No obstante, mesmo que a cincia possua esta capacidade, ela feita por seres humanos, estes falhos e de carter duvidoso, que podem perfeitamente tendenciar determinados resultados, de forma consciente ou no, prejudicando ou beneficiando outrem. O quarto artigo da srie sobre Cincia Forense ir versar sobre o exame de ADN e sua aplicao na investigao de crimes. Sero evidenciados desde aspectos tcnicos, como a estrutura do ADN, at os mtodos de extrao e anlise do mesmo. Ao final, pretende-se fazer uma reflexo sobre a atual situao destes exames e os aspectos ticos relacionados, tanto na fico como na realidade. Boa leitura.

1 O Projeto Inocncia luta para tornar livre o maior nmero de pessoas injustamente condenadas. Esta organizao legal e no lucrativa, fundada pelos advogados Barry C. Scheck e Peter J. Neufeld, trabalha para trazer a Justia queles a quem a mesma foi negada.

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Cincia Forense: exame de ADN

O que ADN?
O ser humano tem usado materiais para armazenar informao desde o tempo das pinturas rupestres. Hoje podemos pensar na possibilidade de guardar informao em molculas nicas. Um sonho dos projetistas de computadores que um dia arranjos de tais molculas serviro como dispositivos de armazenamento de dados de enorme capacidade. A natureza, no entanto, j tem usado esta tcnica por milhes de anos. Ela usa o ADN para armazenar a informao gentica que permite a perpetuao da espcie. Mas, o que significa ADN? O original ingls DNA um acrnimo para DeoxyriboNucleic Acid (em portugus, ficaria ADN, referente cido DesoxirriboNuclico). Juntamente com do RNA (RiboNucleic Acid cido RiboNuclico ARN) e com ajuda de outras espcies bioqumicas, como enzimas, ele responsvel pela hereditariedade. Nele so guardadas todas a informaes genticas, como caractersticas fsicas e metablicas (h at quem diga que algumas caractersticas psicolgicas), com as instrues para sntese de protenas. Embora haja uma grande semelhana do ADN de dois indivduos quaisquer da populao, no existe uma identidade total salvo no caso de gmeos idnticos e essa pequena diferena (cerca de 0,1 % do ADN) fundamental na Cincia Forense como potencial forma de identificao humana. Veremos mais adiante como isto funciona. Estruturalmente falando, os cidos nuclicos ADN e ARN so enormes polmeros constitudos por nucleotdeos. Estes, por sua vez, possuem uma estrutura comum: um acar, um grupo fosfato e uma base nitrogenada, conforme podemos ver na Figura 1.

Figura 1 Esquema da estrutura de um nucleotdeo [adaptado de FARAH, 1997].

No ADN, o qual para o presente artigo tem maior importncia, os nucleotdeos so formados por um acar (desoxirribose), um grupo fosfato e uma base nitrogenada, que pode ser uma purina (Adenina e Guanina) ou uma pirimidina (Timina e Citosina) (Figura 2).
NH2 N N N N H N
guanina

O H3C NH

NH

N H

N
adenina

NH2

N H
timina

NH2 HO N O

OH O HO P OH
grupo fosfato

N H
citosina

O OH
desoxirribose

Figura 2 Os componentes estruturais dos nucleotdeos do ADN.

A informao gentica do ADN est na forma de um cdigo qumico. Este nada mais que a ordem dos nucleotdeos. Ele guia a juno de aminocidos especficos em uma protena. Estas, por sua vez, tm um papel crtico na constituio, manuteno e catlise nas clulas.
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Cincia Forense: exame de ADN Nosso organismo sem enzimas simplesmente no funcionaria. Um exemplo que podemos utilizar para evidenciar a importncia das protenas o da doena conhecida como Fenilcetonria. Esta uma patologia de origem gentica, na qual o organismo no capaz de produzir uma determinada enzima que catalisa o metabolismo de um determinado aminocido: a fenilalanina. O fenilcetonrico possui uma mutao em um gene2 no cromossomo 12. Este chamado de PAH contm instrues para sintetizar a enzima PAH, conhecida tambm por fenilalanina hidroxilase. Sem ela, h acmulo de fenilalanina no organismo, podendo, em casos extremos, levar o indivduo morte. Por isto, o portador da doena deve ter uma alimentao altamente regrada. Para os conjuntos de genes e protenas de um organismo d-se o nome de genoma e proteoma, respectivamente. Estes termos aparecem com grande freqncia na mdia, pois conhecer os genes e as protenas que compem um organismo permite o desenvolvimento de mtodos novos para o diagnstico de doenas e tambm de novas terapias para seu tratamento. possvel escrever o cdigo presente na molcula estvel de ADN pela combinao de quatro nucleotdeos (A, T, G, C) em uma seqncia particular. Estes, combinados em uma ordem especfica, caracterstica para cada indivduo, promovem a forma helicoidal da molcula de ADN, estrutura conhecida como dupla hlice (veja Figura 3).

Figura 3 Estrutura conhecida como dupla hlice do ADN evidenciando seus componentes estruturais. Na figura, temos os grupos fosfatos representados pela letra P e as bases nitrogenadas Citosina, Adenina, Guanina e Timina pelas letras C, A, G e T, respectivamente. O acar representado pelo pentgono lils. [fonte: ENGER et al, 2005].

2 Unidade funcional do cido desoxirribonuclico de carter hereditrio ou gentico, situada no cromossomo, e que determina as caractersticas de um indivduo.

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Cincia Forense: exame de ADN O modelo estrutural aceito atualmente o da hlice dupla, proposto por James Watson, Francis Crick e colaboradores, em 19533. Neste modelo, conforme evidencia a Figura 3, as duas hlices so mantidas unidas por meio de ligaes de hidrognio4, que se estabelecem entre as molculas das bases nitrogenadas. Elas so detalhadas na Figura 4 com suas respectivas combinaes e distncias intermoleculares.

Figura 4 Representao das ligaes de hidrognio formadas entre os tomos das bases nitrogenadas presentes nos nucleotdeos do ADN. As ligaes de hidrognio so representadas pelos pontilhados em rosa [fonte: ENGER et al, 2005].

Para compreender a conformao de hlice dupla consideremos a Figura 5 que consta num artigo do Journal Of Chemical Education [BRUIST, SMITH e MELL, 1998]. Esta revista considerada por muitos uma das melhores publicaes sobre ensino de qumica do mundo. Uma busca sobre o tema, nos volumes j publicados, revelar mais textos como este citado, que contm modelos explicativos da estrutura do ADN humano.

3 O livro Descobertas Acidentais em Cincia, de Royston M. Roberts, traz o seguinte relato: A estrutura de dupla hlice do ADN, segundo seus autores, James Watson, Francis Crick e Maurice Wilkins, foi descoberta praticamente por acaso, quando Watson, trabalhando com modelos, comeou a encaixar as bases nas mais variadas combinaes e, de repente, se deu conta de que a combinao adenina-timina [A-T] unida por duas pontes de hidrognio era idntica na forma a uma combinao guanina-citosina [G-C] unida da mesma maneira. 4 Ligaes de hidrognio o nome dado interao existente quando um tomo de hidrognio interage com tomos de Flor, Oxignio ou Nitrognio. Se estes ltimos estiverem na mesma molcula que o Hidrognio, ento dizemos que a ligao intramolecular, caso contrrio, ou seja, se estiverem em outra molcula, dizemos que a ligao intermolecular. Na Figura 4 temos representadas as ligaes de hidrognio intermoleculares pelas linhas pontilhadas de cor rosa.

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Figura 5 Em (a) temos a estrutura completa das bases nitrogenadas, desoxirribose e grupos fosfatos dos nucleotdeos. Em (b) temos um esquema onde cada par de bases representado por uma caixa e as estruturas de acar e fosfato pelas linhas.[fonte: BRUIST, SMITH e MELL, 1998].

Os nucleotdeos, como mencionado anteriormente, mantm a estrutura do ADN coesa por meio das ligaes de hidrognio formadas entre eles. Mas por que a estrutura assume uma forma helicoidal? Os mesmos autores apresentam uma representao simples com caixas empilhadas, as quais esto representadas na Figura 6.

Figura 6 Modelo que ilustra como as foras intermoleculares favorecem a estrutural helicoidal do ADN. [fonte: BRUIST, SMITH e MELL, 1998].

Os autores propem seis caixas unidas por dois fios. Cada caixa representa um par de nucleotdeos. O fio representa a coluna de acares e de grupos fosfato. Em (a) temos a situao em que as caixas so empilhadas uma encima das outra. Nesta configurao, as interaes de repulso so maximizadas, pois os grupos fosfato esto prximos e, como possuem carga negativa, tendem a se repelir, desestabilizando a estrutuCHEMELLO, E. Qumica Virtual, maro (2007) Pgina 5

Cincia Forense: exame de ADN ra. Em (b) temos uma tentativa de diminuir a repulso, com as caixas (no caso, representando os pares de bases nitrogenadas) afastadas, o que no ocorre com a molcula de ADN. J em (c), por fim, temos a conformao helicoidal, onde os grupos fosfato esto afastados numa distncia mxima que permite que as bases tenham contato entre si. Outros modelos para a molcula de ADN so discutidos em detalhe em outro artigo da mesma revista [Cady, 2005]. A compreenso da constituio da molcula de ADN fundamental para a entender como a vida se perpetua pelo tempo.

Onde se encontra o ADN?


Estudiosos acreditam que caso uma molcula de ADN humano pudesse ser extrada de onde se encontra e desenrolada da sua forma natural, altamente enovelada, ela teria aproximadamente dois metros de comprimento. Considerando que existam algo prximo de 10 clulas em nosso corpo, isto significa que temos cerca de 2 x10 metros de ADN, o que representa 50.000 vezes a distncia entre a Terra e a Lua. Onde ser que est tudo isto? O ADN pode ser encontrado em sua maioria no ncleo celular, organizado na forma de cromossomos (normalmente 22 pares autossmicos e um par de cromossomos do sexo (X e Y) - veja Figura 7).

Figura 7 Cromossomos humanos arranjados aos pares segundo uma classificao convencional.[fonte: CHEMELLO, 2005].

O nmero e a forma dos cromossomos so geralmente caractersticos para cada espcie, e todas as clulas do nosso organismo, com exceo das hemcias, apresentam a mesma quantidade deles5. As hemcias fogem a regra, pois so anucleadas, o que facilita seu papel no transporte de oxignio. Cada cromossomo formado por uma nica molcula de dupla hlice de ADN condensada com protenas bsicas, chamadas histonas. A este conjunto dado o nome de nucleossomo (veja Figura 8).

5 Alguns indivduos apresentam um certo nmero de cromossomos, outros um nmero diferente. Esta variao pode ser normal e no fruto de defeito gentico. Outra possibilidade de espcies distintas possurem o mesmo nmero de cromossomos.

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Figura 8 Localizao do ADN no ncleo das clulas dos Eucariontes6 [adaptado de ENGER et al, 2005].

O ADN humano tambm est presente nas mitocndrias. Tanto o ADN nuclear como mitocondrial so de interesse para a cincia forense. O nuclear possui mais informaes sobre o individuo, tendo preferncia em relao ao mitocontrial. Este ltimo tambm pode ser utilizado e merecer um breve captulo parte mais adiante neste artigo.

Exame de ADN
Estava escuro. Mesmo assim, a vtima no teve dvidas em identificar Larry Fuller, ento com 32 anos, como o homem que a estuprou e agrediu naquela madrugada de 1981. Apesar de jurar a sua inocncia, Fuller foi julgado e condenado a cinqenta anos de priso apenas com base no testemunho da vtima. Depois de vinte e cinco anos na cadeia, em Outubro de 2005, sua inocncia foi finalmente reconhecida por um Tribunal de Dallas (EUA), graas a um teste de ADN que provou, sem margem para dvidas, que no fora ele o estuprador. A primeira vez que um exame de ADN serviu como prova foi no caso das duas jovens inglesas, Lynda Mann e Dawn Ashworth, que foram assaltadas, violentadas sexualmente e assassinadas na dcada de 1980. Como as caractersticas dos crimes eram as mesmas, a polcia suspeitou que teria sido o mesmo homem a cometer os crimes. Com objetivo de solucionar o caso, mais de 3.600 homens na vila de Narborough, em Leicestershire, Inglaterra, foram convocados a fazerem exames de ADN e comparar os resultados com os da amostra smen coletada das vtimas. Um ano mais tarde um empregado de uma padaria pediu a um colega que doasse sangue em seu lugar. Sabendo disso, por intermdio de um informante que trabalhava no mesmo estabelecimento, a polcia procurou e prendeu o homem que no queria doar sangue. Este, posteriormente, confessou a autoria dos crimes e sua ligao com as evidncias coletadas das vtimas foi confirmada pelos exames de ADN. A tcnica, a partir de ento se disseminou por todo o mundo, chegando ao Brasil rapidamente no final da dcada de 1980.

6 Eucarionte todo o organismo composto por uma ou mais clulas que possuem ncleo distinto, envolvido por membrana nuclear. Ns, Homo sapiens, somos Eucariontes.

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Cincia Forense: exame de ADN A adoo por Alec Jeffreys (JEFFREYS, 1985) da expresso DNA fingerprint (impresso digital de ADN) para denominar a tecnologia por ele desenvolvida foi criticada pelos especialistas em medicina legal e pelos criminologistas, que no viam nela o significado preciso daquilo a que se propunha, alegando tambm a confuso com a tcnica j estabelecida de impresso digital (fingerprint). Segundo autores brasileiros (ARRUDA e PARREIRA, 2000), a expresso mais adequada para indicar o procedimento de anlise do ADN exame de ADN, a qual utilizada neste artigo. No obstante, conforme apontam estes autores, terminologias como PCR, RFLP e outras so mantidas na lngua inglesa, pois no se relacionam com a questo da legislao. Como o exame de ADN funciona? No se tem como objetivo realizar uma anlise aprofundada dos mtodos, mas dar uma breve noo dos princpios fundamentais de algumas tcnicas e suas caractersticas relacionadas Cincia Forense. A molcula de ADN, formada por milhes de nucleotdeos em cadeia, como foi visto anteriormente, sofre algumas vezes alteraes, chamadas de mutaes, que consistem na substituio de certos nucleotdeos por outros em determinadas regies, as quais Alec Jeffreys, em seu artigo publicado na Nature, em 1985, chamou de minissatlites. As mutaes so melhor toleradas pelo organismo quando ocorrem em locais sem informao til, os quais constituem aproximadamente 90% do genoma humano. Muitas vezes, as substituies tornam-se estveis, sendo transmitidas aos descendentes. Como muito grande a variao no nmero e no tipo destas alteraes no ADN fenmeno conhecido como polimorfismo gentico -, possvel identificar uma pessoa com base no seu padro de polimorfismo.

Mtodo de extrao
O ADN est presente nas clulas e especialmente no ncleo delas. Como fazer para retirar este ADN a fim de analis-lo posteriormente? Os mtodos de extrao variam de acordo com o tipo de evidncia coletada. Relembrando que, em princpio, qualquer tipo de tecido ou fluido biolgico pode ser utilizado como fonte de ADN, uma vez que so formados ou possuem clulas. Isso torna possvel realizar o exame de ADN em pequenas manchas de sangue ou smen, clulas da mucosa bucal (presas a cigarros, por exemplo), fios de cabelo (com bulbo), fragmentos de pele, etc. Na Tabela 1 temos a relao da quantidade de ADN que pode ser extrado em funo do tipo de amostra.
Amostras (tecidos e fluidos corporais) 1 mL de sangue Manchas de sangue seco em 1 cm 1 mL de Smen 1 fio de cabelo (contendo bulbo capilar) 1 mL de saliva Quantidade recuperada 20 a 40 g 200 ng 150 a 300 g 1 a 750 ng 1 a 10 g

Tabela 1 Quantidade aproximada de ADN coletado de amostras.[adaptado de RUMJANEK e RINZLER, 2001].

De maneira geral, as tcnicas de extrao consistem em desnaturar as protenas que envolvem o ADN. Para isto, utiliza-se uma gama de espcies qumicas. Por exemplo, a mistura de clorofrmio, lcool isoamlico e fenol. Outra forma utilizando uma soluo de cloreto de sdio, que separa os sistemas em uma fase slida e uma fase lquida, onde nesta ltima se encontra o ADN.

Mtodo RFLP
A fim de reconhecer os locos (stios) onde ocorreram mutaes foi desenvolvida a tcnica conhecida pela sigla RFLP, do ingls Restriction Fragment Length Polymorphism, ou Poliformismo de Comprimento de Fragmento de Restrio. Este mtodo se baseia no corte que as enzimas de restrio so capazes de fazer onde existem apenas certas seqncias especficas de nucleotdeos. Estas enzimas so uma espcie de tesoura biolgica que vo cortar o ADN em locais especficos, chamados de posies de restrio, gerando fragmentos de ADN de tamanhos diferentes e seqncias especficas. Para separar os fragmentos de ADN cortados pelas enzimas de restrio, utilizase a tcnica de eletroforese, que consiste na separao das espcies de uma soluo coloidal pela influncia de um campo eltrico. De forma geral, na Figura 9 temos um esCHEMELLO, E. Qumica Virtual, maro (2007) Pgina 8

Cincia Forense: exame de ADN quema que engloba as principais fases de um teste de ADN.

Figura 9 Esquema geral para o teste de ADN para fins forenses. [adaptado de ENGER et al, 2005].

Devido ao fato das pessoas terem uma seqncia de nucleotdeos diferentes entre si, pode-se identificar uma pessoa pela evidncia deixada no local do crime a partir da comparao dos resultados obtidos pelos exames de ADN. No esquema acima, temos um suspeito que supostamente teria estuprado a vtima. Em (a) temos a coleta de smen na vtima e posterior exame. Tambm feita a anlise do ADN a partir de uma amostra de sangue do suspeito. Em (b) so representadas as enzimas de restrio que tm a capacidade de cortar o ADN em lugares onde uma determinada seqncia de nucleotdeos ocorre. A tesoura simboliza as enzimas necessrias para a seleo de seqncias especficas. Em (c) ilustra-se os pedaos de ADN separados pela eletroforese. Em (d) mostrado um padro conhecido como DNA fingerprint. Observe que os padres oriundos do smen coletado e do sangue do suspeito coincidem, indicando que o smen do suspeito e que este est ligado ao crime. A separao dos fragmentos de ADN ocorre atravs de eletroforese, conforme visto anteriormente. Analisaremos mais detalhes deste processo a partir da observao da Figura 10.

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NH2

N Br H2N

CH3

Figura 10 Na esquerda temos a ilustrao da tcnica de separao por eletroforese. J na direita temos a representao da molcula de brometo de etdio.[fonte: Koolman e Rhm, 1996].

A mobilidade de molculas em um campo eltrico de determinada intensidade depende do tamanho e da forma destas, alm de suas cargas eltricas. Um meio, formado por gel do polissacardeo agarose7, conhecido como gar-gar, permite a passagem dos pedaos de ADN cortados. Ao colocar a amostra no plo negativo, esta migra para o plo positivo. Os pedaos menores migram mais longe que os maiores, criando-se assim um padro, o qual pode ser revelado utilizando-se substncias intercaladoras, tais como o brometo de etdio (veja novamente a Figura 10). Este composto interage com o ADN e o torna visvel devido fluorescncia do ADN quando exposto luz UV. Alguns detalhes do mtodo foram omitidos, bem como certas tcnicas de anlise dos resultados da eletroforese no sero tratadas aqui, pois so demasiadamente tcnicas e fogem do escopo do artigo. Quem no se lembra do caso de assdio sexual envolvendo a funcionria da Casa Branca, Mnica Lewinsky, em 1998, com o ento presidente do EUA, Bill Clinton? aquela velha histria. No se tinha provas que confirmassem ou acusassem o presidente, mas todos comearam a olh-lo de maneira diferente, imaginando: ser? O presidente realmente havia tido relaes sexuais com Mnica ou seria uma tentativa de exposio da imagem dela na mdia? O FBI coletou uma amostra de smen (Q3243) do vestido de Mnica e fez uma anlise pelo mtodo RFLP. Foi tambm coletada uma amostra de sangue (K39) do suspeito, no caso, do presidente Clinton. Aps anlises, foi reportado o seguinte: baseado nos resultados de sete locais genticos, o espcime K39 fonte do ADN obtido do espcime Q3243, com um grau razovel de certeza cientfica.A probabilidade de erro foi calculada e ficou na ordem de 1 em 7,8 trilhes. Bem razovel, eu diria. Diante da irrefutvel evidncia, o presidente Clinton quase sofreu um impeachment8.

Mtodo PCR
Inventado por Kary Mullis9 em 1984, o mtodo conhecido pela sigla PCR, do ingls Polymerase Chain Reaction ou reao em cadeia da polimerase, consiste na utilizao de uma enzima semelhante a ADN-polimerase, que no ncleo celular promove a

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A agarose muito semelhante ao p utilizado para produzir a gelatina caseira.

No regime presidencialista, trata-se do ato pelo qual se destitui, mediante deliberao do legislativo, o ocupante de cargo governamental que pratica crime de responsabilidade.
9 A metodologia PCR foi considerada to poderosa para o estudo do ADN que seu inventor foi agraciado com o Prmio Nobel.

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Cincia Forense: exame de ADN replicao10 do material gentico, aumentando a quantidade de ADN para anlise e, conseqentemente, fazendo com que a quantidade de amostra necessria para o teste possa ser bem menor. Este mtodo pode ser utilizado junto ao RFLP. Desta forma, o ADN primeiramente seria amplificado pela tcnica PCR e depois se analisaria com a metodologia do RFLP, conforme vimos anteriormente. Para realizar o PCR pode-se utilizar uma enzima isolada da bactria Thermus aquaticus, encontrada em giseres e em fontes quentes, chamada de Taq DNA Polimerase. Esta altamente adaptada a ambientes quentes e mantm-se com sua forma normal por longo tempo temperatura de 95 C, que necessria para abrir os duplos filamentos de ADN. Todo o exame de ADN, ao seu final, acompanhado por um clculo que determina a raridade da combinao entre perfis encontrado nas amostras. este aspecto que vai determinar qual a probabilidade de o suspeito ser a nica fonte de ADN da amostra. O clculo baseia-se na comparao do padro de poliformismo com bancos de dados de ADN de uma populao. O perito necessita saber com que freqncia esta combinao ocorre na no grupo em que se classifica o suspeito para estimar a confiabilidade do exame. O FBI norte americano, por exemplo, utiliza um mtodo parecido com e analogia do nmero de sapato, chamado binning. Imagine que se tenha um instrumento para medir o tamanho dos ps de uma dada populao. Observa-se que as pessoas tm ps diferentes, mas que podem se ajustar a um padro de numerao. Cria-se ento um indicativo da freqncia destes nmeros numa dada populao. Este revelaria, por exemplo, que 5 % da populao cala tamanho 40, j 10 % cala 36, e assim por diante. Aqueles casos divulgados na mdia onde h uma probabilidade de 99,999 % podem ter este valor gerado a partir de uma anlise bayesiana. Esta leva em considerao a sensibilidade, especificidade e probabilidade do resultado. Como este mtodo aplica-se mais a casos de paternidade, no prosseguiremos com o detalhamento do mesmo.

ADN mitocondrial
Como foi visto, o ADN est presente principalmente no ncleo das clulas. Contudo, um determinado tipo de ADN est nas mitocndrias, organelas existentes no citoplasma celular. O interesse forense no ADN mitocondrial est no fato dele ser mais resistente degradao que o nuclear. Assim, em grandes desastres (incndios, exploses, queda de avio, etc), quando mais difcil identificar os corpos, pode-se optar pela anlise deste, que constitudo apenas herana gentica materna.

Confiabilidade do Mtodo
Qualquer falha entre a coleta de amostras e a divulgao dos resultados pode levar a concluses equivocadas em exames de ADN. Em condies ideais, sua probabilidade de acerto aproxima-se de 100 %, claro, dentro das margens de erro que o conhecimento cientfico prev. Em cincia, diz-se que no h certezas, mas sim apenas certezas provisrias11. Tambm importante salientar que desde a sua elaborao por Alec Jeffreys, descrita em um artigo publicado na Nature em 1985, at hoje, muito se discutiu sobre a confiabilidade do mtodo, principalmente nos EUA. Uma srie de artigos publicados nesta revista de impacto cientfico e em outras de mesma importncia demonstrou, na dcada de 90, que os fatores que influenciam os resultados so a padronizao da coleta, anlise das amostras e a expresso da probabilidade de acerto em funo da averiguao dos bancos de dados com estatsticas sobre o ADN de uma dada populao.

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Nome dado ao processo de duplicao da molcula de cido desoxirribonuclico atravs da cpia de um molde j existente.

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A palavra scire significa, em latim, saber. Tradicionalmente, associava-se ao significado de saber verdadeiro, correto e inquestionvel. O conceito de scientia, portanto, apenas podia ser atribuvel a um determinado tipo de conhecimento: ao que possua o saber correto. Esta foi a tnica da cincia at que, no incio do sculo XX, as quebras de paradigma que a Fsica promoveu fizeram com que a cincia como um todo passasse por uma transformao, considerando no verdades absolutas, mas passageiras, provisrias e falseveis. CHEMELLO, E. Qumica Virtual, maro (2007) Pgina 11

Cincia Forense: exame de ADN A padronizao da coleta de evidncias pode ser ilustrada no caso clssico da literatura forense em que o do ex-jogador de futebol americano O. J. Simpson acusado de assassinato. Este fato j foi citado em outro artigo, desta mesma srie, sobre manchas de sangue, mas interessante relembrarmos, pois a partir dele as autoridades americanas passaram a rever as regras de coleta e armazenagem de evidncias. Havia uma acusao contra ele de duplo homicdio, aps a descoberta dos corpos de Nicole Simpson e Ron Goldman, sua ex-mulher e amigo, respectivamente. A polcia encontrou uma cena de crime com diversas provas latentes: peas de vesturio, pegadas e uma trilha de sangue que revelava o caminho percorrido pelo criminoso(a). Seguindo estas pistas, os policiais chegaram casa de O. J. Simpson, obtendo, no local, mais evidncias: manchas de sangue em seu carro, nas suas meias e no cho do jardim. Exames de ADN comprovaram que esse sangue era das vtimas. Assim, a promotoria acreditava ter nas mos um caso que no poderia ser contestado. Mas foi surpreendida pela estratgia dos advogados de defesa: o questionamento das provas. As cmeras de televiso flagraram um perito coletando amostras sem a utilizao de luvas, enquanto outros no as trocavam entre cada coleta, sem falar no nmero de pessoas circulando na cena do crime, a qual no tinha sido isolada adequadamente. Alm disto, as evidncias no foram identificadas e registradas previamente, as amostras foram conservadas e empacotadas sem a devida separao e, o mais grave: a coleta foi feita por apenas uma pessoa, sem testemunhas. Finalmente, os advogados provaram que o laboratrio criminal da polcia de Los Angeles no cumpriu padres mnimos de manuseio, preservao e separao das evidncias e O. J. Simpson foi inocentado. aquela velha histria. H bons e maus profissionais em todo lugar. Existem os srios, comprometidos com a importncia de suas aes e, principalmente, com os reflexos de possveis equvocos cometidos. Porm, outros que no possuem tica e preocupao com os resultados de seus atos. Considerando a idealidade na coleta e anlise, um aspecto de erro que se sobressai o estatstico. O fato de duas amostras possurem o mesmo perfil para um grupo de marcadores genticos em especial no significa, necessariamente, que elas tenham uma origem comum. A interpretao dos testes depende das freqncias populacionais para cada marcador gentico utilizado, conforme comentado anteriormente. Portanto, quando o resultado do exame de ADN de duas amostras igual, torna-se necessrio expressar numericamente a sua significncia. Realizar o exame de ADN com qualidade a fim de servir a um teste de paternidade ou, no caso da cincia forense, para acusar ou inocentar um determinado suspeito de um crime, no uma tarefa fcil. Fica aqui a esperana que os rgos competentes cumpram com sua misso de orientar e fiscalizar os laboratrios e que estes ltimos invistam em pesquisa e tecnologia de ponta objetivando garantir que os inocentes sejam liberados e que os culpados sejam punidos.

Banco de dados de ADN


Hoje todo exame de ADN comparativo. Os institutos de percia trabalham comparando o ADN do suspeito com o das evidncias. A tecnologia disponvel na atualidade, no entanto, no permite traar caractersticas genricas, a partir do ADN coletado, que possibilitem uma seleo de pessoas para posterior investigao. Devido a isto, nos casos negativos, ou seja, quando o suspeito no a fonte do ADN encontrado, no h possibilidade de descobrir potenciais agressores. Um sonho para os estudiosos na rea chegar num nvel em que o exame de ADN permita, por exemplo, a reproduo de uma imagem do rosto da pessoa que deixou a evidncia no local do crime. Sries e filmes de investigao criminal, de fico ou realidade, s vezes, aproximam-se desta aspirao, fazendo com que certos resultados possam ser obtidos. Encontrar apenas um fio de cabelo e dizer que pertenceu a uma menina loira de 9 anos, que foi agarrada pela perna esquerda, sacudida trs vezes, e assim por diante, bobagem. diz Valter Stefani, professor e pesquisador da UFRGS, em entrevista ao website da FAPESP. Mas, se o teste apenas comparativo, ento o que pode ser feito quando no h suspeitos? Neste caso, uma ferramenta til um banco de ADN criminal. Trata-se de um conjunto de tipos diferentes de ADN que permite comparar os seus
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Cincia Forense: exame de ADN dados com os coletados na cena do crime. Um banco de ADN pode esclarecer crimes sem suspeitos de forma rpida e objetiva, conforme ocorre em outros pases que dispe deste recurso. Porm, no Brasil, por lei, uma pessoa acusada de um crime no obrigada a fornecer provas contra si mesma. O suspeito no precisa disponibilizar uma amostra de sangue, por exemplo, para que seu ADN seja analisado e comparado com o obtido na cena de crime. Stefani, na mesma entrevista, afirma: O problema quando isso [banco de ADN] ocorrer, pois no Brasil ainda estamos digitalizando impresses digitais. Depois, teremos que ter o sistema para ler esses bancos. E ainda h uma questo adicional: hoje, no podemos fazer bancos de DNA, pois a lei no permite. Tentamos fazer isso em Porto Alegre com a populao prisional e no foi possvel, pois, juridicamente, a pessoa estaria dando prova contra ela prpria. Vrios pases possuem bancos de dados de ADN criminal: EUA, Inglaterra, Canad, Alemanha, Frana, Austrlia e Nova Zelndia. Enquanto o Brasil no adere a este recurso, pases com a Gr-Bretanha ampliam seus bancos, alm de arquivar outros tipos de evidncias, tais como marcas de sapato12. Recentemente, a justia norte americana divulgou que comear a coletar amostras de ADN de suspeitos presos ou detidos pelas autoridades federais, inclusive dos imigrantes ilegais. As novas regras, que sero implantadas pelo Departamento de Justia, visam tornar rotina a prtica de coleta de ADN como identificao para qualquer pessoa detida. At o momento, as autoridades coletavam estas amostras apenas de indivduos condenados. Isto causou furor de alguns defensores da privacidade, alm da possibilidade destes dados serem utilizados para outros fins13. Em meio a possibilidade de um banco de ADN aqui no Brasil, devemos ponderar sobre a seguinte questo: quem pode garantir que esta ferramenta no ser utilizada de uma maneira diferente do propsito da justia? A recente divulgao do seqenciamento do genoma humano trouxe um importante questionamento com relao s conseqncias disto. Os debates sobre este tema, em outros pases, so um forte indicativo de que no h consenso. Ao mesmo tempo em que o sequenciamento gera a esperana de cura de muitas doenas de origem gentica e uma forma de associar evidncias deixadas na cena do crime a suspeitos em potencial, ele tambm provoca muitas especulaes sobre a possibilidade do uso indesejvel destes dados. Sabe-se que informaes genticas que indiquem a pr-disposio de um indivduo a uma doena, como o cncer, seriam valiosas a companhias de seguros e planos de sade, podendo causar discriminaes. Na fico, o filme Gattaca14 ilustra esta possibilidade. Dentro dessa perspectiva, o filme de Andrew Niccol uma interessante reflexo sobre os caminhos que o sequenciamento do genoma pode levar e os impactos que esta tecnologia - e a cincia de um modo geral - pode ter na sociedade. Em Gattaca, as pessoas esto divididas em duas classes sociais, os Vlidos, os filhos da Cincia, produtos da engenharia gentica e da eugenia social, e os Invlidos, os filhos de Deus, submetidos ao acaso da Natureza e s impurezas genticas. Este filme retrata uma sociedade cuja tcnica de manipulao do ADN tornou-se prtica cotidiana de controle social. Ser apenas fico ou prenncio de um futuro no muito distante?

Veja a notcia EI4801,00.html


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completa

no

portal

Terra:

http://tecnologia.terra.com.br/interna/0,,OI1377498-

Governo americano criar banco de DNA como ferramenta das foras da lei - 05/02/2007 - UOL ltimas Notcias. Disponvel em: http://noticias.uol.com.br/ultnot/afp/2007/02/05/ult1806u5465.jhtm Este nome deve-se s letras primeiras letras dos nomes das bases nitrogenadas dos nucleotdeos que constituem o ADN, Adenina, Guanina, Timina e Citosina. CHEMELLO, E. Qumica Virtual, maro (2007) Pgina 13

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Cincia Forense: exame de ADN

Bibliografia utilizada
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Agradecimento
Agradeo ao qumico Leandro Maranghetti Loureno pelas referncias bibliogrficas e ao bilogo Roberto Takata pelas revises tcnicas e textuais.

Sobre o autor
Emiliano Chemello licenciado em Qumica pela Universidade de Caxias do Sul e professor do Ensino Mdio na regio da Serra Gacha. website: http://www.quimica.net/emiliano e-mail: chemelloe@yahoo.com.br MSN: chemelloe@hotmail.com

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