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1.

MICROSCOPIA Es el conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeez estn fuera del rango de resolucin del ojo normal; por lo general el poder resolutivo del ojo humano es de 0.2mm (200 m). Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopa, el uso del mismo se requiere para producir las imgenes adecuadas, de todo un conjunto de mtodos y tcnicas afines pero extrnsecas al aparato. Algunas de ellas son, tcnicas de preparacin y manejo de los objetos de estudio, tcnicas de salida, procesamiento, interpretacin y registro de imgenes, etc. La microscopa generalmente implica la difraccin, reflexin o refraccin de algn tipo de radiacin incidente en el sujeto de estudio. Existen dos tipos bsicos de microscopios: PTICOS y ELECTRNICOS.

Figura 1: Tipos de microscopios. 1.1. Microscopa ptica Es un microscopio basado en lentes pticos que nos permiten observar objetos de pequeo tamao, los microscopios de este tipo generalmente producen un aumento de 1000 a 2000 veces el tamao original. Las partes que conforman un microscopio ptico se observa en la Fig. 2.

Figura 2: Microscopio ptico. 1.2. Microscopio electrnico En el Microscopio Electrnico la luz se sustituye por un haz de electrones que pasan por un tubo (con vaco para mejorar el paso de los electrones); en un microscopio ptico, la potencia amplificadora est limitada por la longitud de onda de la luz visible, la longitud de onda ms corta

de la luz visible es de alrededor de 4.000 angstroms (400 nm), la longitud de onda de los electrones que se utilizan en los microscopios electrnicos es de alrededor de 0,5 angstroms (50 pm). Existen dos tipos bsicos de microscopio electrnico: Microscopio electrnico de transmisin (TEM) Microscopio electrnico de barrido (SEM)

2. MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (TEM)


El primer microscopio electrnico de transmisin fue desarrollado entre 1931 y 1933 por Ernst Ruska y sus colaboradores. El primer microscopio electrnico de transmisin comercial lo construy la compaa Siemens en 1939. Permite la observacin de muestra en cortes ultrafinos, un TEM dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar, una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra; para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de ngstroms (menor a 150 nm). Se coloca una placa fotogrfica o una pantalla fluorescente detrs del objeto para registrar la imagen aumentada. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. Partes principales: Can de electrones: Emite los electrones que chocan o atraviesan el espcimen creando una imagen aumentada. Lentes magnticas: Crean campos que dirigen y enfocan el haz de electrones. Sistema de vaco: Parte fundamental del microscopio electrnico. Los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, se debe hacer un vaco casi total en el interior del mismo. Placa fotogrfica o pantalla fluorescente: Se coloca detrs del objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada. Sistema de registro: Muestra la imagen que producen los electrones, suele ser una computadora.

2.1. Funcionamiento del Microscopio electrnico de transmisin Las partes antes mencionadas estn ensambladas en una columna vertical la cual se encuentra en alto vaco; como se observa en la Fig. 3. El can de electrones, es la fuente emisora del haz de electrones, se encuentra ubicado en la parte superior de la columna; est constituido por un filamento (ctodo), un cilindro con una apertura central, llamado cilindro de Wehnelt que rodea al filamento y tiene un potencial

ligeramente ms negativo que ste y el nodo que se encuentra por debajo del cilindro de Wehnelt. El filamento es calentado por el pasaje de corriente, los electrones emitidos termoinicamente por el ctodo son acelerados hacia el nodo, pasan por la apertura circular central de ste y un haz de alta energa es emitido hacia la columna del microscopio. El sistema de lentes est formado por lentes condensadores objetivos, intermedios y proyectores. Las lentes condensadoras, en los microscopios, ms modernos son dos; las cuales controlan el dimetro y el ngulo de convergencia en que incide el haz de electrones sobre la muestra. La lente objetivo forma la primera imagen, localizada debajo de la muestra y es considerada el componente ms importante del microscopio electrnico, cualquier defecto en sta, ser magnificado y transmitido al resto del sistema ptico, por lo tanto, de ella dependen, en gran medida, la resolucin final y la correccin de las aberraciones. Las lentes intermedia y proyectora son las encargadas de amplificar la imagen dada por la lente objetivo y proyectarla sobre la pantalla fluorescente.

Figura 3: Microscopio Electrnico de Transmisin. Con el TEM se puede obtener dos tipos de imagen: Imagen de campo claro: Se forma usando el haz central y unos pocos haces difractados; como se observa en la Fig.4. Imagen de campo oscuro: Se forma usando uno de los haces difractados; como se observa en la Fig.5.

Figura 4: Imagen de Campo Claro. Figura 5: Imagen de Campo Oscuro. 2.2. Aplicaciones Determinacin de la morfologa: forma, dimensiones y posicin de microcristales o partculas Determinacin de la cristalografa: posicin de los planos cristalinos, estudio de los defectos, impurezas o elementos minoritarios presentes en materiales puros., etc. Determinacin de la composicin: composicin qumica de fases. Determinacin de la celda unitaria. Medida de tamaos, ngulos y ratios a escalas nanomtricas; permitiendo la caracterizacin de materiales avanzados en el campo de la nanociencia y la nanotecnologa (nanofibras, nanotubos, capas delgadas, materiales nanoestructurados, etc).

3. MICROSCOPIO INICO DE CAMPO El microscopio de campo inico o por su nombre en ingls, Field ion microscope (FIM), fue inventado en el ao de 1951 en la Universidad Estatal de Pensilvania por Erwin Wilhelm Mller. Gracias al FIM, el inventor pudo observar tomos por primera vez. (FIM) es una tcnica analtica empleada en ciencia de materiales, este microscopio puede ser utilizado para concebir la ordenacin de los tomos que forman la superficie de la punta afilada de una aguja de metal. Fue la primera tcnica con la que se consigui resolver espacialmente tomos individuales. En la FIM, se produce una aguja de metal afilada y se coloca en una cmara de ultra alto vaco, que despus se llena con un gas visualizador tal como el helio o el nen. La aguja se enfra hasta alcanzar temperaturas criognicas (20-100 K). Luego se aplica un voltaje positivo que va de 5.000 a 10.000 voltios sobre la punta. Los tomos de gas absorbidos por la punta se ven ionizados por el

fuerte campo elctrico que existe en las proximidades de ella. La curvatura de la superficie cercana a la punta provoca una magnetizacin natural; los iones son repelidos bruscamente en direccin perpendicular a la superficie (un efecto de "proyeccin de punto"). Se coloca un detector de modo que pueda recoger esos iones repelidos; y la imagen formada por todos los iones repelidos puede tener la resolucin suficiente como para mostrar tomos individuales en la superficie de la punta. Al contrario que los microscopios convencionales, donde la resolucin espacial se ve limitada por la longitud de onda de las partculas empleadas en la visualizacin, el microscopio basado en FIM funciona por proyeccin y alcanza resoluciones atmicas, con una magnificacin aproximada de unos pocos millones de aumentos.

Figura 6: Imgenes obtenidas de un microscopio de iones con un ctodo de tungsteno. El sistema muestra la localizacin de manchas en el borde de tomos individuales. 4. MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO La posibilidad de observar muestras ntegras y en sus tres dimensiones mediante la microscopa electrnica, fue hecha realidad con la aparicin del microscopio electrnico de scanning (SEM) o de barrido, en el ao 1965. El Microscopio electrnico de barrido o SEM (Scanning Electron Microscope), es aquel que utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen. Tiene una gran profundidad de campo, la cual permite que se enfoque a la vez una gran parte de la muestra. Tambin produce imgenes de alta resolucin, que significa que caractersticas espacialmente cercanas en la muestra pueden ser examinadas a una alta magnificacin. La preparacin de las muestras es relativamente fcil pues la mayora de SEMs slo requieren que estas sean conductoras. En el microscopio electrnico de barrido la muestra generalmente es recubierta con una capa de carbn o una capa delgada de un metal como el oro para darle propiedades conductoras a la muestra. Posteriormente es barrida con los electrones acelerados que viajan a travs del can. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV o una imagen digital. Su resolucin est entre 4 y 20 nm, dependiendo del microscopio.

Inventado en 1937 por Manfred von Ardenne, permite una aproximacin profunda al mundo atmico. Permite obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos y orgnicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie. 4.1 Funcionamiento En el microscopio electrnico de barrido es necesario acelerar los electrones en un campo elctrico, para aprovechar de esta manera su comportamiento ondulatorio, lo cual se lleva a cabo en la columna del microscopio, donde se aceleran mediante una diferencia de potencial de 1.000 a 30.000 voltios. Los electrones acelerados por un voltaje pequeo se utilizan para muestras muy sensibles, como podran ser las muestras biolgicas sin preparacin adicional o muestras muy aislantes. Los voltajes elevados se utilizan para muestras metlicas, ya que stas en general no sufren daos como las biolgicas y de esta manera se aprovecha la menor longitud de onda para tener una mejor resolucin. Los electrones acelerados salen del can, y se enfocan mediante las lentes condensadora y objetiva, cuya funcin es reducir la imagen del filamento, de manera que incida en la muestra un haz de electrones lo ms pequeo posible (para as tener una mejor resolucin). Con las bobinas deflectoras se barre este fino haz de electrones sobre la muestra, punto por punto y lnea por lnea. Cuando el haz incide sobre la muestra, se producen muchas interacciones entre los electrones del mismo haz, y los tomos de la muestra; puede haber, por ejemplo, electrones que reboten como las bolas de billar. Por otra parte, la energa que pierden los electrones al "chocar" contra la muestra puede hacer que otros electrones salgan despedidos (electrones secundarios), y producir rayos X, electrones Auger, etc. El ms comn de stos es el que detecta electrones secundarios, y es con l que se hace la mayora de las imgenes de microscopios de barrido. Tambin podemos adquirir la seal de rayos X que se produce cuando se desprenden estos mismos de la muestra, y posteriormente hacer un anlisis espectrogrfico de la composicin de la muestra. 4.2 Utilizacin Se utilizan ampliamente en la biologa celular. Aunque permite una menor capacidad de aumento que el microscopio electrnico de transmisin, ste permite apreciar con mayor facilidad texturas y objetos en tres dimensiones que se hayan pulverizado metlicamente antes de su observacin. Por esta razn solamente pueden observarse organismos muertos, y no se puede ir ms all de la textura externa que se quiera ver. Los microscopios electrnicos slo pueden ofrecer imgenes en blanco y negro puesto que no utilizan la luz visible. Este instrumento permite la observacin y caracterizacin superficial de materiales inorgnicos y orgnicos, entregando informacin morfolgica del material analizado. A partir de l se producen distintos tipos de seal que se generan desde la muestra y se utilizan para examinar muchas de sus caractersticas. Con l se pueden observar los aspectos morfolgicos de zonas microscpicas de diversos materiales, adems del procesamiento y anlisis de las imgenes obtenidas.

5. ESPECTROSCOPIA INFRARROJA Y RAMAN 5.1. Espectroscopia infrarroja Espectroscopia infrarroja (Espectroscopia IR) es la rama de la espectroscopia que trata con la parte infrarroja del espectro electromagntico. Esta cubre un conjunto de tcnicas, siendo la ms comn una forma de espectroscopia de absorcin. As como otras tcnicas espectroscpicas, puede usarse para identificar un compuesto e investigar la composicin de una muestra. Los primeros equipos comerciales aparecieron a mediados del siglo XX, habindose impulsado su desarrollo durante la Segunda Guerra Mundial, cuando se utiliz para la sntesis de caucho sinttico (empleado en el control de la concentracin y pureza del butadieno empleado en la sntesis del polmero). En la ltima dcada del siglo XX aparecieron en el mercado los espectrmetros de transformada de Fourier, ampliando las posibilidades de esta tcnica. (ver Espectrofotmetro de transformada de Fourier). 5.1.1. Teora La porcin infrarroja del espectro electromagntico se divide en tres regiones; el infrarrojo cercano, medio y lejano, as nombrados por su relacin con el espectro visible. El infrarrojo lejano (aproximadamente 400-10 cm-1) se encuentra adyacente a la regin de microondas, posee una baja energa y puede ser usado en espectroscopia rotacional. El infrarrojo medio (aproximadamente 4000-400 cm-1) puede ser usado para estudiar las vibraciones fundamentales y la estructura rotacional vibracional, mientras que el infrarrojo cercano (14000-4000 cm-1) puede excitar sobretonos o vibraciones armnicas. La espectroscopia infrarroja se basa en el hecho de que las molculas tienen frecuencias a las cuales rotan y vibran, es decir, los movimientos de rotacin y vibracin moleculares tienen niveles de energa discretos (modos normales vibracionales). Las frecuencias resonantes o frecuencias vibracionales son determinados por la forma de las superficies de energa potencial molecular, las masas de los tomos y, eventualmente por el acoplamiento vibrnico asociado. Para que un modo vibracional en una molcula sea activa al IR, debe estar asociada con cambios en el dipolo permanente. En particular, en las aproximaciones de Born-Oppenheimer y armnicas, esto es cuando el Hamiltoniano molecular correspondiente al estado electrnico puede ser aproximado por un oscilador armnico en la vecindad de la geometra molecular de equilibrio, las frecuencias resonantes son determinadas por los modos normales correspondientes a la superficie de energa potencial del estado electrnico de la molcula. Sin embargo, las frecuencias resonantes pueden estar en una primera aproximacin relacionadas con la fuerza del enlace, y la masa de los tomos a cada lado del mismo. As, la frecuencia de las vibraciones pueden ser asociadas con un tipo particular de enlace. Para medir una muestra, un rayo de luz infrarroja atraviesa la muestra. Cuando la frecuencia de excitacin de un enlace (o grupo de enlaces) coincide con alguna de las frecuencias incluidas en las

ondas componentes del rayo, se produce absorcin. Lo que se va a registrar es la cantidad de energa absorbida en cada longitud de onda. Esto puede lograrse escaneando el espectro con un rayo monocromtico, el cual cambia de longitud de onda a travs del tiempo, o usando una transformada de Fourier para medir todas las longitudes de onda a la vez. A partir de esto, se puede trazar un espectro de transmitancia o absorbancia, el cual muestra a cuales longitudes de onda la muestra absorbe el IR, y permite una interpretacin de qu enlaces estn presentes. Esta tcnica funciona exclusivamente con enlaces covalentes, y como tal es de gran utilidad en qumica orgnica. Espectros ntidos se obtienen de muestras con pocos enlaces activos al IR y altos niveles de pureza. Estructuras moleculares ms complejas llevan a ms bandas de absorcin y a un espectro ms complejo. Sin embargo esta tcnica se ha podido utilizar para la caracterizacin de mezclas muy complejas 5.1.2. Usos y Aplicaciones La espectroscopia infrarroja es ampliamente usada en investigacin y en la industria como una simple y confiable prctica para realizar mediciones, control de calidad y mediciones dinmicas. Los instrumentos son en la actualidad pequeos y pueden transportarse fcilmente, incluso en su uso para ensayos en terreno. Con una tecnologa de filtracin y manipulacin de resultados en agua, las muestras en solucin pueden ser medidas con precisin (el agua produce una absorbencia amplia a lo largo del rango de inters, volviendo al espectro ilegible sin este tratamiento computacional). Algunas mquinas indican automticamente cul es la sustancia que est siendo medida a partir de miles de espectros de referencia almacenados. Al medir a una frecuencia especfica a lo largo del tiempo, se pueden medir cambios en el carcter o la cantidad de un enlace particular. Esto es especialmente til para medir el grado de polimerizacin en la manufactura de polmeros. Las mquinas modernas de investigacin pueden tomar mediciones infrarrojas a lo largo de todo el rango de inters con una frecuencia de hasta 32 veces por segundo. Esto puede realizarse mientras se realizan mediciones simultneas usando otras tcnicas. Esto hace que la observacin de reacciones qumicas y procesos sea ms rpida y precisa. 5.2. Espectroscopia Raman La espectroscopia Raman (llamada as por C.V. Raman) es una tcnica espectroscpica usada en qumica y fsica de la materia condensada para estudiar modos de baja frecuencia como los vibratorios, rotatorios, y otros. Se basa en los fenmenos de dispersin inelstica, o dispersin Raman, de la luz monocromtica, generalmente de un lser en el rango de luz visible, el infrarrojo cercano, o el rango ultravioleta cercano. La luz lser interacta con fotones u otras excitaciones en el sistema, provocando que la energa de los fotones del lser experimente un desplazamiento hacia arriba o hacia abajo. El desplazamiento en energa da informacin sobre los modos del fonn en el sistema. La espectroscopia infrarroja proporciona una informacin similar, pero complementaria.

Tpicamente, una muestra es iluminada con un rayo lser. La luz del punto iluminado es recogida con un lente y es enviada a un monocromador. Debido a la dispersin elstica de Rayleigh, las longitudes de onda cercanas a la lnea del lser son filtradas, mientras que el resto de la luz recogida es dispersada sobre un detector. La dispersin Raman espontnea es tpicamente muy dbil, y como resultado la principal dificultad de la espectroscopia Raman est en separar la debil inelsticamente dispersada luz, de la intensa luz lser dispersada de Rayleigh. Histricamente, los espectrmetros de Raman usaban rejillas difractoras hologrficas y mltiples etapas de dispersin para alcanzar un alto grado de rechazo del lser. En el pasado, los fotomultiplicadores era los detectores elegidos para las configuraciones de dispersores Raman, lo que resultaba en largos tiempos de adquisicin. Sin embargo, la instrumentacin moderna casi universalmente emplea filtros notch o de deteccin de borde para el rechazo del lser y los espectrgrafos (como Czerny-Turner, echelle o basados en FT) y los detectores de CCD. Hay un nmero de tipos avanzados de espectroscopia Raman, incluyendo la superficie realzada Raman, punta realzada Raman, Raman polarizado, Raman estimulado (anlogo a la emisin estimulada), transmisin Raman, espacial compensado Raman, y la hiper-Raman. El efecto de Raman se produce cuando un fotn incide sobre una molcula e interacciona con la nube de electrones de los enlaces de esa molcula. El fotn incidente excita la molcula a un estado virtual. En el efecto Raman espontneo, la molcula es excitada desde el estado fundamental a un estado de energa virtual y se relaja desde el estado vibracional excitado, lo que genera la llamada dispersin Raman Stokes. Si la molcula ya estaba en un estado vibracional excitado, la dispersin Raman se denomina dispersin Raman anti-Stokes. Para exhibir el efecto Raman, la molcula requiere con respecto a la coordenada vibracional, un cambio en el potencial molecular de polarizacin o cantidad de deformacin de la nube electrnica. En vista de que el desplazamiento Raman es igual al nivel vibratorio que est implicado, la cantidad del cambio de polarizabilidad determinar la intensidad de dispersin Raman. Por lo que el patrn de frecuencias de desplazamiento es determinado por estados vibracionales y rotacionales tpicos de la muestra bajo estudio. 6. ESPECTROSCOPIA DE FOTOEMISIN POR RAYOS X

RAYOS X Son radiaciones electromagnticas muy energticas y penetrantes, cuya longitud de onda () vara entre 10nm y 0,001nm son invisible, capaz de atravesar cuerpos opacos y de imprimir las pelculas fotogrficas. Los actuales sistemas digitales permiten la obtencin y visualizacin de la imagen radiogrfica directamente en una computadora (ordenador) sin necesidad de imprimirla. Segn la magnitud de la de los rayos X se pueden clasificar en: Rayos X duros: rayos de menor y mayor energa (prximos a la zona de rayos gamma del espectro electromagntico)

Rayos X blandos: rayos de mayor y menor energa (cercanos a la banda ultravioleta) Tambin clasificarlos de acuerdo a la cantidad de longitudes de onda: Rayos X blancos: mezcla de muchas longitudes de onda diferentes Rayos X monocromticos: poseen una nica longitud de onda. Aplicaciones rayos x en anlisis qumico. Dentro de los procesos en los que intervienen los rayos x tenemos seis principales que son los siguientes: Absorcin de rayos X.- Los rayos-X, son absorbidos por los materiales que stos penetran, a travs de un proceso conocido como "ionizacin" o creacin de pares de iones. Los rayos-X, crean iones en los materiales que stos atraviesan y su energa es absorbida durante el proceso. Cuando un haz de rayos X se hace pasar a travs de una fina pelcula de materia, su intensidad o potencia generalmente disminuye como consecuencia de la absorcin y la dispersin. El efecto de la dispersin para todos los elementos excepto los ms ligeros es normalmente pequeo, y se puede despreciar en aquellas regiones de longitud de onda donde tiene lugar una absorcin apreciable. El proceso de absorcin. La absorcin de un fotn de rayos X produce la expulsin de uno de los electrones ms internos de un tomo y la consecuente produccin de un ion excitado. En este proceso, la energa total hv de la radiacin se divide entre la energa cintica del electrn (el fotoelectrn) y la energa potencial del ion excitado. La probabilidad ms alta de absorcin tiene lugar cuando la energa del fotn es exactamente igual a la energa necesaria para llevar un electrn justo a la periferia del tomo (es decir, la energa cintica se acerca a cero para el electrn expulsado.

Figura 7: Proceso de Absorcin. Espectroscopia de fluorescencia de rayos X (XFS).- La tcnica de Fluorescencia de Rayos X se basa en el estudio de las emisiones de fluorescencia generadas despus de la excitacin de una muestra mediante una fuente de rayos X. La radiacin incide sobre la muestra excitando los tomos presentes en la misma, que emiten a su vez radiacin caracterstica denominada fluorescencia de rayos X. La absorcin de rayos X produce iones excitados electrnicamente que pueden volver a su estado fundamental mediante transiciones que implican a los electrones de los niveles de energa ms altos. As, cuando el plomo absorbe radiacin de longitudes de onda ms corta se produce un in excitado con una capa vacante K. Despus de un breve perodo, el ion vuelve a su

estado fundamental a travs de una serie de transiciones electrnicas caracterizadas por la emisin de radiacin X (fluorescencia) de longitudes de onda idnticas a las que resultan de la excitacin producida por bombardeo de electrones. Sin embargo, las longitudes de onda de las lneas fluorescentes son siempre algo mayores que la longitud de onda correspondiente a una discontinuidad de absorcin, ya que la absorcin requiere la expulsin completa del electrn (ionizacin), mientras que la emisin implica transiciones de un electrn desde un nivel de energa superior dentro del tomo

Figura 8: XFS. Espectroscopia de emisin de Rayos X (XES).- el haz electrnico primario induce la salida de electrones de los niveles electrnicos internos, emitiendo radiacin X secundaria en la medida que los electrones de niveles ms externos caen en los niveles internos vacantes.

Figura 9: XES. Difraccin de rayos X.- los rayos X sufren difraccin en los diferentes planos de un cristal. La interaccin entre el vector elctrico de la radiacin X y los electrones de la materia por la que pasa da lugar a una dispersin de los rayos. Cuando los rayos X son dispersados por el entorno ordenado de un cristal, tienen lugar interferencias (tanto constructivas como destructivas) entre los rayos dispersados, ya que las distancias entre los centros de dispersin son del mismo orden de magnitud que la longitud de onda de la radiacin. El resultado es la difraccin.

Figura 10: Difraccin de rayos X.

Espectroscopia de Fotoemisin de rayos X (XPS o ESCA).- los rayos X primarios inducen la salida de electrones atmicos desde los niveles electrnicos internos y se determina la energa de los electrones emitidos. Se basa en el efecto fotoelctrico. El origen de la tcnica XPS se debe fundamentalmente a tres cientficos que contribuyeron con sus descubrimientos para la electroscopia,los cuales son: ddescubrimiento del efecto fotoelctrico: Hertz, 1887, y Experimentacin: Siegbahn, 1967. La espectroscopia es el estudio de la interaccin entre la radiacin electromagntica y la materia, con absorcin o emisin de energa radiante, tambin se la conoce como la rama de la ciencia que estudia los espectros de las radiaciones emitidas, absorbidas o difundidas por una sustancia. Tiene aplicaciones en astronoma, fsica y qumica, entre otras disciplinas cientficas. La popularidad de esta tcnica deriva del alto contenido de informacin que suministra y la flexibilidad para ser utilizada en una gran variedad de muestras. El ms bsico anlisis XPS de una superficie puede proporcionar informacin cualitativa y cuantitativa de todos los elementos presentes, excepto H y He. Con aplicaciones ms sofisticadas de la tcnica se obtiene informacin detallada de la qumica, organizacin y morfologa de la superficie. Cuando un fotn se encuentra con un tomo puede ocurrir: i) ii) iii) que pueda atravesarlo sin interaccin alguna. que sea dispersado por un electrn de un orbital atmico con lo que ocurre una prdida de energa. que el fotn interaccione con electrn de un orbital atmico con una transferencia total de la energa del fotn hacia el electrn, ocurriendo la emisin del electrn del tomo.

El segundo proceso es conocido como Compton scattering y puede ser importante en procesos de alta energa, mientras que el tercer proceso resulta ser bsico para la tcnica XPS. Cuando ningn electrn ha sido emitido por el tomo, se debe a que la frecuencia de excitacin del fotn es demasiado baja. Cuando aumentamos gradualmente la energa del fotn se comienza a observar la fotoemisin de electrones del tomo. Una vez superada la frecuencia umbral, el nmero de electrones emitidos ser proporcional a la intensidad de iluminacin (mayor nmero de fotones de alta frecuencia de excitacin). La espectroscopia de fotoemisin (PES) mide la distribucin de energa de electrones emitidos por tomos y molculas de varias cargas y estados de energa. Un material irradiado con luz ultravioleta (UPS) o rayos x (XPS) puede emitir electrones llamados fotoelectrones desde niveles atmicos de energa con una energa cintica igual a la diferencia entre la energa del fotn hVph y la energa de ionizacin Eion que corresponde a la energa necesaria para desprender completamente un electrn de un nivel atmico de energa. KE= hVph-Eion

La electroscopa consiste bsicamente en la excitacin de fotoelectrones mediante rayos x, al emitir estos fotoelectrones los rayos x proporcionan informacin sobre la energa de cada nivel y por tanto sobre la naturaleza del tomo emisor. Esto se lo puede apreciar en la figura 11.

Figura 11: Esquema del proceso de emisin de un fotoelectrn. Todos aquellos electrones cuyas energas de enlace sean inferiores a la energa contenida en los rayos X de excitacin sern desalojados de la muestra. Las energas de enlace de electrones internos, EB, se pueden calcular con el uso de la siguiente expresin:

Siendo: h: energa de los fotones EK: energa cintica del fotoelectrn producido W: funcin de trabajo del espectrmetro EB: energa de ligadura (parmetro que identifica al electrn de forma especfica, en trminos del elemento y nivel atmico). EB: energa de ligadura (parmetro que identifica al electrn de forma especfica, en trminos del elemento y nivel atmico).

7. RESONANCIA MAGNTICA 7.1. Generalidades El nombre real del fenmeno fsico que da pie a esta tcnica de imagen es el de Resonancia Nuclear Magntica (RNM). No obstante, debido al rechazo que provoca la palabra nuclear, y dado que no se rige por los mismos principios que los procesos fsicos de energa nuclear, nos referimos habitualmente a esta tcnica como Resonancia Magntica (RM).

La espectroscopia de resonancia nuclear magntica (RNM) es una tcnica empleada principalmente en la elucidacin de estructuras moleculares, aunque tambin se puede emplear con fines cuantitativos y en estudios cinticos y termodinmicos. A diferencia de las tcnicas de imagen que utilizan los Rayos X para la generacin de imgenes, en la Resonancia Magntica no se han demostrado efectos adversos para la salud ya que emplea campos magnticos y radiacin no Ionizante de radiofrecuencia del espectro electromagntico. No obstante, la presencia de un imn con un campo magntico intenso, hace peligroso el acercarnos al mismo con objetos metlicos, ya que pueden salir disparados haca el mismo y los pacientes con dispositivos biomecnicos implantados (marcapasos, ciertos implantes, etc.) tampoco deben realizarse este tipo de estudio, al poder interferir el campo magntico con dichos dispositivos. Se basa en la medida de la absorcin de la radiacin electromagntica en la regin de las radiofrecuencias aproximadamente de 4 a 900 MHz. 7.2. Orgenes En 1924 las bases tericas del RNM fueron propuestas por W. Pauli. Mas este fenmeno fsico fue descubierto en fechas relativamente recientes: En el ao 1946, los equipos dirigidos por los profesores Felix Bloch en Stanford y Edward Purcell en Harvard, publicaron los resultados de sus investigaciones de manera independiente y simultnea: Resulta curioso destacar que, en una poca en la que no existan los medios para compartir la informacin actuales, ambos cientficos llegaron a conclusiones similares a miles kilmetros de distancia con solo 3 semanas de diferencia. Dado que los resultados se enviaban a publicar por correo ordinario, las conclusiones de ambos se publicaron en el mismo nmero de la revista Physical Review en Enero de 1946. En esos resultados describen cmo los ncleos de ciertos tomos son capaces de absorber y emitir energa al ser excitados mediante seales de radiofrecuencia cuando se encuentran en el interior de un campo magntico intenso. No ser hasta 30 aos ms tarde cuando se producen sus primeras aplicaciones en el campo de la medicina, siendo Raymond Damadian, en 1976, el primero en disear un dispositivo capaz de detectar un tumor cerebral en una rata de laboratorio, valindose de esta tecnologa. 7.3. Principios de Funcionamiento Magnetismo Nuclear El tomo consta de un ncleo rodeado por una densidad electrnica. Estos electrones tienen dos componentes de momento angular, el orbital (movimiento alrededor del ncleo) y el intrnseco (spin). ste ltimo es el que se entiende como giro sobre s mismo. El ncleo se compone de protones y neutrones, ambos denominados nucleones. Los protones tienen carga positiva, mientras que los neutrones carecen de carga. El movimiento orbital de las cargas dentro del ncleo es equivalente a una pequea corriente elctrica que viaja a travs de un diminuto aro de alambre que genera un pequeo campo magntico que se asemeja a una barrita imanada (dipolo magntico). A este efecto se adiciona el aporte del spin de las partculas constituyentes del ncleo.

Puesto que un ncleo posee carga, su espn origina un campo magntico anlogo al campo que se produce cuando una corriente elctrica fluye a travs de una bobina. La direccin del campo magntico producido por los nucleones se expresa en trminos de momento magntico resultante y se orienta a lo largo del eje del espn y es proporcional al momento angular p, dado por:. Donde es la relacin giro magntica y p es el momento angular. El nmero mximo de componente de espn o valores de p para un ncleo en particular, depende del nmero cuntico de espn l". Se encuentra entonces que un ncleo tendr 2l + 1 estados discretos. La componente del momento angular de estos estados en cualquier direccin elegida tendr los valores de: l, l 1, l 2,, -l. La interrelacin entre el espn nuclear y el momento magntico conduce a una serie de estados cunticos magnticos observables m, dados por: m = l, l 1, l 2,, -l En ausencia de un campo externo, los distintos estados tienen energas idnticas. En la siguiente tabla se observan algunos nmeros cunticos.

Tabla 1. Nmeros cunticos de algunos elementos. Los istopos con I=0 son inactivos a la RNM, los istopos con l=1/2 tienen una distribucin esfrica de carga en el ncleo mientras que los istopos con l >= 1 no tienen una distribucin de carga esfrica en el ncleo, son cuadripolares. Los materiales con propiedades magnticas tienden a alinear sus momentos magnticos en la direccin de las lneas de campo magntico externo aplicado. La tcnica es til slo para aquellos ncleos que no posean momento magntico nulo, por ejemplo el del tomo de hidrgeno. ste posee la estructura atmica ms simple, estando constituido por un ncleo que contiene un protn y por una corteza en la que hay un electrn. Adems, los tomos de hidrgeno son muy abundantes en el organismo humano (constituido por 70% de agua), siendo por lo tanto su ncleo una eleccin natural para aplicar las tcnicas de resonancia magntica en el cuerpo humano. Dentro del cuerpo, los tomos de hidrgeno se orientan de forma aleatoria, de modo que no existe un campo magntico resultante. Sin embargo, si se aplica un campo magntico B0, la interaccin de ste con los ncleos mviles con carga positiva har que cada protn empiece a rotar con un movimiento precesional (movimiento que describe un cono de giro).

Figura 12: Movimiento precesional del protn. Los protones se inclinarn suavemente respecto de la lnea de accin de B0, pero el eje de rotacin ser paralelo a B0. La frecuencia de precesin est dada por la ecuacin de Larmor: w0 = . B0 / (2.), Donde w0 es la frecuencia de Larmor en MHz, Bo es la magnitud del campo magntico que acta sobre el protn en Tesla y se denomina "relacin giromagntica", que para el hidrgeno toma el valor de 2.675x108 S-1T-1. Los protones, por poseer un momento angular intrseco, siempre precesan ante la aplicacin de un campo magntico externo. Adems, al aplicar el campo, se obtienen dos estados de energa, paralelo y antiparalelo segn los dipolos estn alineados con el campo o formando un ngulo de 180. Como la orientacin paralela a B0 es la de menor energa, habr ms ncleos en esta orientacin que en la antiparalela. La desigualdad de ncleos entre las posiciones paralela y antiparalela se traduce en una magnetizacin neta (M) en el tejido, con un valor M. La direccin y el sentido de este vector de magnetizacin son los mismos que los de B0 y sern constantes con respecto al tiempo (siempre que B0 permanezca tambin constante).

Figura 13: Protones de Hidrogeno ante la presencia de un campo externo. Esta configuracin con M alineado paralelo al campo magntico es la configuracin de equilibrio de los ncleos. Es la configuracin de mnima energa, a la que los ncleos retornarn naturalmente despus de cualquier perturbacin (como una absorcin de energa).

Figura 14: Magnetizacin Neta Resultante. Si se aplica un impulso de RF que tenga la misma frecuencia que la frecuencia de precesin de los protones (w0), se provoca una energtica entre los dos estados permisibles de energa del sistema. Cuando un ncleo es irradiado con energa de la frecuencia correcta (w0), cambiar desde la orientacin de baja energa hacia la de alta energa. Al mismo tiempo, un ncleo del nivel de alta energa, cambiar su orientacin para ubicarse en la direccin de baja energa. Este proceso se denomina resonancia. Es importante notar que slo la energa suministrada a la frecuencia w0 estimular las transiciones entre los estados de alta y baja energa. Esta frecuencia se conoce como "frecuencia de resonancia". Durante este proceso de resonancia, los protones del cuerpo absorben energa y pasan a un estado de excitacin. Al cesar el pulso de radiofrecuencia, los protones previamente excitados tienden a regresar a su situacin original, liberando la energa previamente absorbida. 7.4. Tipos de RNM 7.4.1. Espectroscopia de RNM con onda continua (cw) Desde sus comienzos hasta finales de los 60, la espectroscopa de RMN utiliz una tcnica conocida como espectroscopa de onda continua (CW). La manera de registrar un espectro de RMN en el modo de CW era, bien mantener constante el campo magntico e ir haciendo un barrido de frecuencias con un campo oscilante, o bien, lo que era usado ms a menudo, se mantena constante la frecuencia del campo oscilante, y se iba variando la intensidad del campo magntico para encontrar las transiciones (picos del espectro). La espectroscopia CW est limitada por su baja sensibilidad, ya que cada seal se registra una sola vez por cada barrido y la tcnica de resonancia magntica nuclear ya es de por s poco sensible; esto quiere decir que la tcnica sufre de una baja relacin seal-ruido. Afortunadamente, en RMN es posible mejorar la relacin seal-ruido mediante el promediado de seal. El promediado de seal consiste en repetir la adquisicin del experimento e ir sumando los espectros que se obtienen. De esta manera, las zonas del espectro en que existen seales se suman de manera constructiva, mientras que, por su parte, las zonas en que hay ruido, por su carcter aleatorio, se acumula ms lentamente que la seal.

7.4.2. Transformada de Fourier La tcnica de RMN con transformada de Fourier (FT-NMR) es la que se utiliza en los espectrmetros actuales. Uno de los pioneros en este campo es Richard R. Ernest, que la desarroll a partir del ao 1966 y por la que fue galardonado con el Premio Nobel de Qumica en 1991. Es una operacin matemtica que tambin realiza digitalmente el ordenador, proporciona un espectro con el mismo formato y la misma informacin que si se hubiera obtenido por onda continua, pero en mucho menos tiempo. Un ordenador recoge la intensidad respecto al tiempo y convierte dichos datos en intensidad respecto a frecuencia, esto es lo que se conoce con el nombre de transformada de Fourier (FT-RMN). Un espectro FT-RMN puede registrarse en 2 segundos utilizando menos de 5 mg de muestra. 7.4.3. Polarizacin Cruzada La deteccin directa de ncleos diluidos como el 13C, el 29Si o el 15N conduce normalmente a una baja polarizacin de espn por su escasa abundancia isotpica y su baja , y por lo tanto, a una relacin seal/ruido baja. Adems, los tiempos de relajacin son largos debido a la ausencia de interacciones dipolares homonucleares asociados a ncleos poco abundantes. Para aumentar la intensidad de la seal de ncleos escasos como el 13C y el 15N, muchos experimentos de RMN de estado slido incluyen la transferencia de polarizacin de ncleos abundantes (normalmente 1H) utilizando una tcnica que se denomina polarizacin cruzada (CP) que someramente consiste en una secuencia de pulsos desacoplando el protn del ncleo que se quiere estudiar. La tcnica CP se basa en la tendencia de la magnetizacin para fluir de ncleos muy polarizados a ncleos menos polarizados cuando los dos se ponen en contacto. En el caso de ncleos diferentes se requiere la aplicacin de dos campos de radiofrecuencia (RF), uno sintonizado para los espines I, y el otro para los espines S. 7.4.4. RNM Multifuncional con Transformada de Fourier La posibilidad de excitar la muestra con uno o ms pulsos de radiofrecuencia (RF), cada uno de ellos aplicado con una potencia, duracin, frecuencia, forma y fase particulares, e introducirlos en momentos especficos de tiempo durante el experimento de RMN, generalmente antes de que el sistema haya regresado al equilibrio por relajacin, permite disear toda una gama de secuencias de pulsos de las que se puede extraer informacin molecular muy variada. En un experimento de RMN multidimensional la secuencia de pulsos debe constar de al menos dos pulsos y stos deben separados por un periodo de espera incrementable. La secuencia de pulsos se repite un nmero de veces adquirindose una FID en cada ocasin. La fase de alguno de los pulsos puede alterarse en cada repeticin as como incrementarse la duracin de uno o ms tiempos de espera variables. Si la secuencia de pulsos tiene un tiempo de espera incrementable el experimento tendr dos dimensiones, si tiene dos ser de tres dimensiones, si tiene tres el experimento ser de cuatro dimensiones.

7.5. Partes de un Equipo de RNM Un equipo de Resonancia Magntica se compone de distintas partes, bsicamente:

Un imn de grandes dimensiones. Lo suficientemente grande para que pueda introducirse una persona o una parte de ella dentro del mismo. Un sistema emisor de radiofrecuencia, similar a una emisora de radio. Un sistema para hacer cambiar el campo magntico rpidamente, conocido como gradientes. Una bobina o antena, que se dispone alrededor del paciente y sirve para recoger la seal de radiofrecuencia emitida por nuestro cuerpo. Existen diferentes tipos en funcin del estudio a realizar (rodilla, crneo, etc). Una camilla, donde colocar al paciente para que pueda entrar en el imn. Un ordenador donde poder procesar las seales recibidas del cuerpo humano y poder generar imgenes.

Figura 15: Partes de Equipo de RNM. 7.6. Aplicaciones Entre sus aplicaciones tenemos: Neurolgicas. Proporciona imgenes de mayor resolucin que la tomografa computada (TC) para las estructuras nerviosas. Permite detectar edemas cerebrales, tumores, trombosis venosas, placas de desmielinizacin (esclerosis mltiple) e in fartos cerebrales. Cardiovasculares. A veces, en colaboracin con la radiografa, la TC o el ecocardiograma. Se puede estudiar el corazn as como las arterias y las venas. Otorrinolaringologa. Alteraciones de odos, senos, para-nasales, boca y garganta. Oftalmologa.

Tumorales. Permite detectar a iteraciones tumorales de cualquier tipo y en cualquier rgano. Aparato locomotor. Permite localizar lesiones seas o musculares de todo tipo y en cualquier regin del organismo. Es el nico procedimiento que permite ver los ligamentos. En general, puede ser utilizada para visualizar estructuras como corazn, pulmones, glndulas mamarias, hgado, vas biliares, bazo, pncreas, riones, tero, ovarios, prstata, etc.

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