Fluorescencia

Estados singulete y triplete

* * *

Singulete fundamental Singulete excitado

Triplete excitado

Niveles de energa moleculares

Fluoreno y bifenilo

fluoreno

bifenilo

Fluorescena y fenolftalena
O

COO

COO

fluorescena

fenolftalena

Quelatos
H2O
OH HO

H2 O Al
3+

O SO3Na

HO N=N SO3Na

N=N

Pontacromo BBR

Pontacromo BBRAl3+

Ion anilinio y anilina

H H H N(+) H H N:
.

H + H N

ion anilinio

anilina

Fluorescencia y concentracin
Ley de Beer: T=P/P0=10-bC (Fraccin de radiacin transmitida) 1 P/P0 = 1 10-bC (Fraccin de radiacin absorbida) CANTIDAD de radiacin absorbida = P0 P = P0(1 10-bC) Intensidad de radiacin fluorescente: If=k(P0 P) =rend. cuntico 1-10-bC=2.3bC-(2.3bC)2/2! + (2.3bC)3/3! - ....
kPo

If Si bC<0.05, If=kP02.3ebC

fluorescencia no uniforme

fluorescencia uniforme

Instrumentacin

Espectros de excitacin y emisin

Aplicaciones
SUSTANCIAS INORGANICAS Anlisis directo Formacin de quelatos fluorecentes Determinaciones indirectas SUSTANCIAS ORGANICAS Vitaminas Qumica clnica Anlisis forense Frmacos y drogas, etc.

Quelatos fluorescentes
Especie Ag+ Al3+ Al3+ Cu2+ Li+ Sn4+ Reactivo Butilrodamina S Morina Rojo de alizarina R Luminocupferrn 8-hidroxiquinolena Flavonol
Sensibilidad (g/mL)

0.01 0.05 0.007 0.1 0.2 0.1

Determinaciones indirectas
Especie Cl F PO43 Reactivo Nitrato de uranilo Almorina Almorina
SO 3 K

Sensibilidad (g/mL)

1.0 0.2 0.05

SO 3 K

2
N

+ 4 CN
O

2
O
N

+ Pd(CN) 4

Pd/2
SO 3 K

Mg

2+

Mg/2

fluorescente

Vitaminas
Vitamina
A B1 B2 B6 B12 C D2 D3 E K

Reactivo
fluorescencia nativa + ferricianuro fluorescencia nativa +KMnO4 fluorescencia nativa ac. dehidroascrbico + o-fenilendiamina + ac. tricloroactico fluorescencia nativa

ex
340 365 370 350 275 350 390 270

em
480 445 440 450 305 430 480 370

Huellas digitales latentes

agua: 98-99 % Huella digital: 0.1 mg
(latente) sust. inorg.: NaCl, etc.

Residuo: 1 g
Aminocidos, lpidos, etc.
O
O
OH OH O
[I]

N=
O
[II]

O
N
O
Zn

H2 O Cl [III]

H2 O

Frmacos y drogas
Sustancia
Adrenalina Ac. saliclico Ampicilina Aspirina Atropina Codeina Digital Estreptomicin a LSD Morfina Pentotal Quinina

Condiciones
pH 1 pH 11 hidrlisis HAcCHCl3 eosina pH 1 HCl-glicerina pH 13 pH 7 pH 1 pH 13 pH 1

(nm)
295 310 346 280 365 245,28 5 350 366 325 285 315 350

ex

(nm)
335 435 422 335 556 350 465 445 365 350 530 450

em

Sensibilidad (g/mL) 0.1 0.1 0.05 0.01 1.0 0.1 0.1 0.1 0.002 0.1 0.1 0.002

Quimioluminiscencia

Es el fenmeno que ocurre en las lucirnagas: una reaccin qumica con un muy alto rendimiento energtico produce una molcula potencialmente fluorescente. (No hay excitacin luminosa como en la fluorescencia) Usualmente son reacciones redox catalizadas por enzimas que involucran O2 o H2O2 y un sustrato orgnico oxidable. La energa se libera como luz visible.

Quimioluminiscencia

Equipo: luminmetro. Componentes : Compartimiento de muestra aislado de la luz Fotomultiplicador de alta sensibilidad Tambin puede haber un sistema para hacer llegar la muestra a la cmara. Soluciones de concentracin conocida curva stndard de luz emitida luz del problema concentracin Las medidas deben hacerse en unos pocos segundos ya que la luz se emite a menudo como una rfaga corta inmediatamente despus de la mezcla de los reactivos.

ANLISIS DE LOS CONTAMINANTES DEL AIRE

DETERMINACIN DE CONTAMINANTES EN AIRE POR MTODOS QUIMIOLUMINISCENTES : NO, O3, H2S y SO2
La quimioluminiscencia se produce cuando una reaccin qumica genera una especie electrnicamente excitada, que emite luz cuando vuelve al estado fundamental o que transfiere su energa a otra especie que, posteriormente, da lugar a una emisin DETERMINACIN QUIMIOLUMINISCENTE DE NO El ozono procedente de un electrogenerador y las muestras de la atmsfera son arrastradas de forma continua al recipiente de reaccin, donde se sigue el curso de la reaccin luminiscente mediante un tubo fotomultiplicador. NO + O 3 NO 2 + O 2
NO
2

NO

+ h

Tambin se determinan xidos de nitrgeno de estados de oxidacin superiores. El contenido de dixido de nitrgeno, NO2, en los gases de escape de los automviles se determina por descomposicin trmica del gas a 700 oC en un tubo de acero. NO 2 NO + O 2 DETERMINACIN QUIMIOLUMINISCENTE DE O3 - Una determinacin se basa en la luminiscencia producida cuando el analito (O3) reacciona con el colorante rodamina B, adsorbido sobre una superficie de gel de slice activada. Respuesta lineal para [O3] = < 1 ppb 400 ppb. - Otra determinacin de O3 en fase gaseosa se basa en la quimioluminiscencia que produce cuando el O3 reacciona con etileno. DETERMINACIN DE H2S Y SO2 La muestra se quema en una llama de hidrgeno para dar un dmero de azufre, que 4 H 2 + 2SO 2 S posteriormente se descompone emitiendo luz. 2 + H 2O
S 2 S2 + h