La Physique pour la Sant : du diagnostic la thrapie

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diteurs scientifiques : M. Kibler et J.-C. Poizat Institut de Physique Nuclaire de Lyon

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Avant-propos
Les coles d't de physique e2phy sont nes du constat de la dsaffection des jeunes pour la physique. Il s'agit de convaincre les jeunes, travers leurs enseignants, que la physique et la chimie jouent un rle majeur dans le monde du vingt et unime sicle : nouvelles technologies, nergie, environnement, sciences de la vie, sant, etc. Le cycle e2phy, cr linitiative du Groupe de Rflexion sur lEnseignement de la Physique Subatomique (GREPS), constitu de chercheurs et denseignants-chercheurs, principalement de la Direction des Sciences de la Matire (DSM) du Commissariat lnergie Atomique (CEA) et de lInstitut National de Physique Nuclaire et de Physique des Particules (IN2P3) du Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), a pour objectifs de : convaincre les jeunes, travers leurs enseignants du second degr et des CPGE (classes prparatoires aux grandes coles), que la physique est une discipline incontournable dans notre monde, souvent en liaison avec des problmes de socit lis par exemple lnergie, lenvironnement ou la sant rassembler des enseignants de diverses structures permettant des changes fructueux, notamment entre des enseignants des lyces et des CPGE et des chercheurs, enseignants-chercheurs et ingnieurs du suprieur.

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La premire cole d't e2phy a eu lieu Caen fin aot 2001 sur le thme transversal de l'nergie. L'cole d't e2phy 2002 La physique pour la sant : du diagnostic la thrapie sest droule Lyon-Villeurbanne du 26 au 29 aot 2002. Elle a runi plus de 300 participants sur le Domaine Scientifique de la Doua Villeurbanne dans les locaux de lUniversit Claude Bernard Lyon 1 (UCBL). L'cole a t organise conjointement par un groupe d'universitaires et de scientifiques de l'IN2P3 du CNRS, de la DSM du CEA, et par l'UdP (Union des Physiciens), l'UPS (Union des Professeurs de Spciales) et la SFP (Socit Franaise de Physique), en partenariat avec lUCBL, le Rectorat de lAcadmie de Lyon et lInspection Gnrale de lducation Nationale (avec le concours des Inspecteurs Pdagogiques Rgionaux).

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L'dition 2002 de e2phy a t une cole d'envergure nationale de formation continue runissant des futurs enseignants, des enseignants du secondaire et des CPGE, des enseignants-chercheurs du suprieur, des chercheurs du CNRS, du CEA et de l'Inserm (Institut national de la sant et de la recherche mdicale), des ingnieurs, et des mdecins ; sur les 309 participants, on comptait 174 enseignants du second degr et des CPGE, 98 chercheurs, enseignants-chercheurs, ingnieurs et mdecins et, finalement, 37 tudiants, doctorants et divers. Il s'agissait aussi d'une manifestation relevant de la recherche puisque, d'une part, la finalit de l'cole tait la revivification des tudes scientifiques et donc moyen terme une irrigation de la recherche et, d'autre part, l'cole a donn une photographie des progrs, l'instant t, de la physique, de la chimie, de la biologie et de la technologie appliques la mdecine. Lcole sest droule sous forme dexposs (exposs gnraux autour de linteraction des ondes et particules avec la matire vivante, exposs sur diffrentes techniques dimagerie, exposs sur des questions de recherche comme la micromcanique de lADN et un expos sur les dbouchs et mtiers dans le domaine de la physique mdicale) avec une demi-journe consacre aux radiations ionisantes et non ionisantes. Une demi-journe a t rserve des visites de laboratoires et de services hospitaliers de la rgion Rhne-Alpes : le laboratoire RMN lUCBL-ESCPE, le CERMEP Lyon, lunit 556 de lInserm Lyon, lESRF Grenoble, le centre laser de lhpital douard Herriot Lyon et les services de radiothrapie du Centre Lon Brard Lyon et du Centre Hospitalier Lyon-Sud Pierre-Bnite. Ces visites, qui illustraient une bonne partie des exposs, ont t trs apprcies des participants. Une exposition de livres et de matriel scientifique denseignement t organise en parallle avec les exposs lors dune journe complte au milieu de lcole. Ce programme peut-tre un peu dense a t agrment par une rception-cocktail dans les salons de lhtel de ville de Lyon, un dner sur les bords de Sane et une soire musicale anime par lEnsemble Vocal de Lyon. Il semble bien que, au-del de lintrt suscit par les exposs et les visites, les enseignants du second degr et des CPGE aient particulirement apprci les contacts et les changes avec les acteurs de lenseignement suprieur et de la recherche. Sil nest pas prsomptueux de dire que lcole a t un succs, il reste de la place pour amliorer le cycle. Il conviendrait en particulier de rduire le nombre dexposs, de donner la parole aux enseignants du second degr et des CPGE propos du manque dintrt des lycens et des tudiants pour les tudes scientifiques (par exemple loccasion dateliers), de rserver une demijourne aux expositions de livres et de matriel denseignement scientifique, et, enfin pourquoi pas, de rserver une soire une
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dcouverte de la ville daccueil en prolongeant par exemple une rception en mairie par une visite guide. Lvnement a t couvert par de nombreuses annonces et comptes rendus dans diffrents bulletins et sur plusieurs sites internet, par deux articles dans Le Progrs et par un article dans les Petites Affiches Lyonnaises. Lcole sest prolonge par la mise sur le site de e2phy (http://e2phy.in2p3.fr), dune part, des diapositives des confrences et, dautre part, des textes de ces confrences et galement de squences filmes de lcole. Lintrt suscit par cette manifestation auprs des lus et des tutelles nationales et locales apparat clairement au regard des personnalits prsentes la tribune lors de la sance inaugurale : Monsieur M. Thiers, Vice-Prsident du Conseil gnral du Rhne, reprsentant Monsieur M. Mercier, Prsident du Conseil gnral du Rhne, Monsieur R. Fougres, charg des relations ville-campus la mairie de Villeurbanne, reprsentant Monsieur J.-P. Bret, Maire de Villeurbanne, Monsieur A. Morvan, Recteur de lAcadmie de Lyon, Monsieur D. Debouzie, Prsident de lUCBL, Madame J. Gallezot, Prsidente du CEVU de lUCBL, Monsieur J. Remillieux, Prsident du CS de lUCBL, Monsieur F. Gounand, Directeur de la DSM (CEA), Monsieur J.J. Aubert, Directeur de lIN2P3 (CNRS) et Monsieur Y. Dclais, Directeur de lIPNL. noter aussi que les participants de lcole ont t reus lhtel de ville de Lyon par Monsieur P. Laral, adjoint au maire et dlgu aux universits et la recherche. Bien sr une telle manifestation naurait pas t possible sans un partenariat et un soutien financier important du Ministre de la Recherche, du CNRS, du CEA, de lInserm, de la DESCO de lducation Nationale, des rectorats du territoire national, de lUniversit Claude Bernard Lyon 1 et de lIUFM de lAcadmie de Lyon, du Conseil rgional Rhne-Alpes, des Conseils gnraux du Rhne et de lAin, des municipalits de Lyon et Villeurbanne, de socits savantes, dindustriels et de laboratoires privs. Pour terminer, un mot sur lutilisation du livre. La majorit des confrences prsentes lcole font lobjet dun article complet ou dun rsum dtaill dans ce livre. Dans les deux cas, le lecteur pourra complter sa lecture en se reportant soit au site de lcole soit au CD-Rom joint ce livre pour y dcouvrir diffrents lments (transparents des confrences, textes des contributions et des rsums, livre dor, etc.) Maurice Kibler Coordonnateur de e2phy 2002 Jean-Claude Poizat Membre du comit local

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Comit dorganisation national

Membres du GREPS, IN2P3 et CEA (Professeurs des universits ou Directeurs de recherche) : Maurice Kibler (Lyon) : coordonnateur Francis Leccia (Bordeaux) Philippe Moretto (Bordeaux) Bijan Saghai (Saclay) Eric Suraud (Toulouse) Bernard Tamain (Caen) Mdecins ou Physiciens dhpitaux (Professeurs des universits, Matres de confrences des universits, Praticiens hospitaliers ou Physiciens mdicaux) : Jacques Balosso (CHU et Universit de Grenoble, mdecin) Jean Chavaudra (Institut Gustave Roussy Villejuif, physicien mdical) Jean Maublant (Centre Jean Perrin Clermont-Ferrand, mdecin) Alejandro Mazal (Institut Curie Paris, physicien mdical) Bernard Mazoyer (Institut Cyceron Caen, mdecin) Jean-Claude Vandroux (CHU et Universit de Limoges, mdecin) Socit Franaise de Physique (Professeurs des universits ou Directeurs de recherche) : Franois Amblard (Institut Curie, Paris) Dominique Bolmont (UHA, Mulhouse) Bernard Jacquier (UCBL, Lyon) Union des Physiciens (Professeurs du second degr) : Jean-Marie Biau (Lyon) Marie-Franoise Karatchentzeff (Paris) Madeleine Sonneville (Paris) Union des Professeurs de Spciales (Professeurs de CPGE) : Bruno Jeauffroy (Paris) Bernard Meiss (Lyon) Sophie Rmy (Limoges) Institut Universitaire de Formation des Matres (Professeurs des universits ou Matres de confrences des universits) : Claudette Lapersonne (Paris) Jacques Toussaint (Lyon) Inspection Gnrale de lducation Nationale (Inspecteurs gnraux) : Claude Boichot (Paris) Gilbert Pietryk (Paris)
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Comit dorganisation local

Inspecteur pdagogique rgional : Luis Adalid (rectorat de Lyon) Professeurs du second degr : Jean-Marie Biau (UdP) Martine Biau (UdP) Professeurs des universits, Matres de confrences des universits, Praticiens hospitaliers, Directeurs de recherche ou Chargs de recherche : Andr Briguet (UCBL) Albert Demeyer (UCBL) Bernadette Farizon (UCBL) Michel Farizon (UCBL) Jean-Claude Gcon (UCBL) Bernard Jacquier (UCBL) Maurice Kibler (UCBL, GREPS) Franois Mauguire (UCBL) Bernard Meiss (UPS) Jean-Claude Poizat (UCBL) Cdric Ray (UCBL) Joseph Remillieux (UCBL) Didier Revel (UCBL) Dominique Sappey-Marinier (UCBL) Jacques Toussaint (IUFM)

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Secrtariat, logistique et gestion

Secrtariat : Monique Croiz Service de Documentation Institut de Physique Nuclaire de Lyon (UCBL) Logistique et gestion : Philippe Corts, Solange Perrel et lquipe FOCAL Formation continue et alternance (UCBL)

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Soutien et partenariat
La liste des organismes nationaux et locaux, collectivits territoriales, socits savantes et industriels ayant accord un soutien financier et/ou ayant oeuvr dans le cadre dun partenariat stablit comme suit : Organismes nationaux Ministre de la Recherche Physique et Sciences pour l'Ingnieur (DS2) Biologie, Mdecine et Sant (DS5) Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) Institut National de Physique Nuclaire et de Physique des Particules (IN2P3) Dpartement Sciences Chimiques (SC) Dpartement Sciences Physiques et Mathmatiques (SPM) Dpartement Sciences pour l'Ingnieur (SPI) Dpartement Sciences de la Vie (SV) Commissariat l'nergie Atomique (CEA) Direction des Sciences de la Matire (DSM) Ministre de l'ducation Nationale Direction de l'Enseignement Scolaire (DESCO) Rectorats Institut national de la sant et de la recherche mdicale (Inserm) Organismes locaux Rectorat de l'Acadmie de Lyon Universit Claude Bernard Lyon 1 Conseil Scientifique (CS) Conseil des tudes et de la Vie Universitaire (CEVU) Relations Internationales UFR de Physique Institut de Physique Nuclaire de Lyon (IPNL) Projet ETOILE de Centre National d'Hadronthrapie cole Centrale de Lyon Institut Universitaire de Formation des Matres (IUFM) de l'Acadmie de Lyon
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Collectivits territoriales Conseil rgional Rhne-Alpes Conseil gnral du Rhne Conseil gnral de lAin Ville de Lyon Ville de Villeurbanne Socits savantes Socit Franaise dnergie Nuclaire (SFEN) Socit Franaise de Radiologie (SFR) Union des Professeurs de Spciales (UPS) Union des Physiciens (UdP) Socit Franaise de Physique (SFP)

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Industriels lectricit de France (EDF) Siemens SAS Laboratoire Guerbet BRUKER

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Liste des confrences et des confrenciers

De quelle physique la mdecine a-t-elle besoin ? Andr Syrota
Professeur des universits - Praticien hospitalier Chef du Service Hospitalier Frdric Joliot du CEA Orsay Directeur des Sciences du Vivant au CEA, Paris

Interaction des ondes et des particules avec la matire vivante Christophe Champion
Matre de confrences des universits Laboratoire de Physique Molculaire et des Collisions Institut de Physique de Metz Universit de Metz, Technople 2000, Metz

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Les signaux du vivant et leur traitement Jean-Louis Coatrieux

Directeur de recherche lInserm Laboratoire de Traitement du Signal et de lImage Inserm - Universit de Rennes 1, Rennes

De la radiologie au scanner RX Albert Lisbona

Physicien mdical Service de physique mdicale Centre rgional de lutte contre le cancer Nantes Atlantique, Saint Herblain

Mdecine nuclaire : gamma-camra et camra positons Jean Philippe Vuillez

Professeur des universits Praticien hospitalier Service biophysique et mdecine nuclaire Hpital Michallon et LER Inserm 00-08, Grenoble

La physique mdicale : dbouchs et mtiers Suzanne Naudy

Physicienne mdicale Service de radiothrapie Centre G.F. Leclerc, Dijon Ex-Prsidente de la Socit Franaise de Physique Mdicale Secrtaire de la Fdration Europenne des Organisations de Physique Mdicale

lectroneurologie : signaux lectriques (EEG) et magntiques (MEG) Bernard Renault

Directeur de recherche au CNRS, Directeur CNRS UPR 640-LENA Neurosciences cognitives et imagerie crbrale Groupe hospitalier Piti-Salptrire, Paris

Imagerie mdicale : les techniques photoniques Serge Mordon

Directeur de recherche lInserm UPRES EA 2689 Inserm IFR 114 CHU de Lille, Pavillon Vancostenobel, Lille

Lasers, outils diagnostiques : exemple d'application la dtection des caries dentaires Sigrid Avrillier
Laboratoire de physique des lasers Universit Paris XIII, Villetaneuse

Imagerie par Rsonance Magntique (IRM) Chrit Moonen

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Directeur de recherche au CNRS UMR 5536 CNRS Universit Victor Segalen Bordeaux 2, Bordeaux

Les ultrasons : applications mdicales Landre Pourcelot

Professeur des universits Unit Inserm 316 Service de mdecine nuclaire et ultrasons CHRU Bretonneau, Tours

Modles animaux et imagerie Frdric Pain

Matre de confrences des universits Groupe Interface Physique-Biologie Institut de Physique Nuclaire d'Orsay Universit Paris XI, Orsay

Laboratoires sur puces : physique et chimie dans les coulisses de la rvolution gnomique Jean-Louis Viovy
Directeur de recherche au CNRS quipe physico-chimie et sparation de l'ADN Institut Curie, Paris

Les biomatriaux : des matriaux doublement exigeants Charles Baquey

Directeur de recherche lInserm Responsable de lunit Inserm 443 (Biomatriaux et Rparation Tissulaire) Universit Victor Segalen Bordeaux 2, Bordeaux

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Ultrasons : de la physique fondamentale la mdecine Pascal Laugier

Directeur de recherche au CNRS Laboratoire dImagerie Paramtrique UMR 7623 Universit Pierre et Marie Curie Paris 6, Paris

Imagerie par impulsions laser ultracourtes Franois Amblard

Directeur de recherche au CNRS Laboratoire de Physico-Chimie Institut Curie, Paris

Tirer et tordre une molcule dADN ou comment regarder une enzyme travailler Vincent Croquette

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Directeur de recherche au CNRS Laboratoire de Physique Statistique cole Normale suprieure, Paris

Traitement des cancers par les radiations ionisantes Jacques Balosso

Matre de confrences des universits Praticien hospitalier Service de cancrologie - radiothrapie CHU de Grenoble

Hadronthrapie par ions lgers : tat du projet ETOILE Joseph Remillieux

Professeur des universits Prsident du Conseil Scientifique de l'Universit Claude Bernard Lyon 1 Institut de Physique Nuclaire de Lyon, Villeurbanne

Limagerie TEP en hadronthrapie Dominique Sappey-Marinier

Matre de confrences des universits - Praticien hospitalier Centre d'Exploration et de Recherches Mdicales par mission de Positons Universit Claude Bernard Lyon 1 Hpital Neurologique, Lyon

valuation et gestion des risques lis aux mthodes physiques d'investigation Andr Aurengo
Professeur des universits - Praticien hospitalier Chef du Service de Mdecine Nuclaire Groupe hospitalier Piti-Salptrire, Paris

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Liste des contributions

Certains titres des contributions peuvent diffrer quelque peu des titres des confrences correspondantes prsentes lcole.

Christophe CHAMPION Interaction des ondes et des particules avec la matire biologique p. 1 Jean Louis COATRIEUX Les signaux du vivant et leur interprtation ... p. 31 Albert LISBONA et Bernard AUBERT Le scanner : Principe Technologie Applications p. 41 Jean Philippe VUILLEZ Mdecine nuclaire : gamma-camra et camra positons .. p. 57 Suzanne NAUDY La Physique Mdicale : Dbouchs et Mtiers . p. 69 Bernard RENAULT et Line GARNERO L'imagerie fonctionnelle EEG-MEG : principes et applications .. p. 71 Serge MORDON Imagerie mdicale : les techniques photoniques de l'UV aux IR ... p. 87 Sigrid AVRILLIER Lasers, outils diagnostiques : exemple d'application la dtection des caries dentaires p. 105 Chrit MOONEN Imagerie par Rsonance Magntique (IRM) ... p. 107 Landre POURCELOT Les Ultrasons : Applications mdicales p. 109 Frdric PAIN Modles animaux et Imagerie ... p. 117

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Jean-Louis VIOVY Laboratoires sur puces : physique et chimie dans les coulisses de la rvolution gnomique p. 129 Charles BAQUEY Les biomatriaux : des matriaux doublement exigeants . p. 131 Pascal LAUGIER, Michael TANTER, Emmanuel BOSSY et Jean-Franois AUBRY Ultrasons : de la physique fondamentale la mdecine .. p. 133 Franois AMBLARD Imagerie par laser impulsions ultracourtes : Pourquoi deux photons valent mieux quun ? . p. 149

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V. CROQUETTE, G. CHARVIN, J-F. ALLEMAND, G. LIA, T. LIONNET, O. SALEH, H. YOKOTA, N. DEKKER, M-N. DESSINGES et D. BENSIMON Action d'une protine sur une molcule unique d'ADN . p. 163 Jacques BALOSSO Traitement des cancers par les radiations ionisantes p. 181 Joseph REMILLIEUX et Marcel BAJARD Hadronthrapie par faisceaux d'ions lgers : le projet ETOILE ... p. 191 Dominique SAPPEY-MARINIER L'imagerie TEP en hadronthrapie ... p. 217 Andr AURENGO valuation et gestion des risques lis aux mthodes physiques d'investigation ...... p. 225

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Interaction des ondes et des particules avec la matire biologique

Christophe CHAMPION Laboratoire de Physique Molculaire et des Collisions Institut de Physique de Metz Universit de Metz, Technople 2000, Metz
ml : champion@ipc.sciences.univ-metz.fr

Comprendre le comportement de la matire biologique soumise une irradiation demeure encore aujourdhui un souci majeur pour la communaut scientifique, aussi bien pour les physiciens que pour les biologistes. Quil soit de nature lectromagntique, lectronique ou ionique, un rayonnement induit dans la matire des dpts dnergie parfois trs importants et extrmement localiss. De plus, linteraction dun rayonnement avec le milieu tant par nature non dterministe (stochastique), les prvisions thrapeutiques peuvent devenir trs dlicates, et lon comprend ds lors lattente des cliniciens qui, dsireux de lser les cellules malignes sans dtruire les cellules saines situes en amont, cherchent optimiser les dpts dnergie radio-induits. Que ce soit des fins thrapeutiques ou prventives (mesure des risques encourus par les personnes travaillant dans les centrales nuclaires ou encore par les cosmonautes lors de sorties spatiales), les consquences biologiques dune exposition un rayonnement restent encore aujourdhui mal matrises. Et bien que ltape post-irradiation, dite tape physique , ne dure que quelque 10-12 seconde, elle nen constitue pas moins le chanon initiateur dune longue squence dvnements chimiques puis biologiques qui, en dfinitive, peut entraner une modification du patrimoine gntique (on parle alors daberrations chromosomiques) ou encore la mort de la cellule (on parle dinactivation cellulaire). Cependant, entre linteraction proprement dite du rayonnement avec la cellule et lapparition des effets biologiques, il se produit toute une suite dvnements que lon peut rpartir en 5 grandes tapes de dures ingales [1] : -Une premire tape physique trs courte (t < 10-15 s) qui correspond aux tout premiers instants post-irradiation. -Une tape physico-chimique (10-15 s < t < 10-12 s) au cours de laquelle les diffrents produits de linteraction atteignent la temprature du milieu : cest le processus de thermalisation qui conduit la formation de produits radicalaires tels que OH, H ainsi que d'lectrons thermaliss puis hydrats e-aq. -Pour des temps (10-12 s < t < 10-6 s) compris entre la picoseconde et la microseconde le milieu irradi se trouve dans une phase de chimie pure au cours de laquelle les diffrentes espces cres diffusent et ragissent entre elles. la microseconde qui suit linteraction, la distribution des espces prsentes a ainsi atteint un tat stationnaire au sein du milieu : le systme entre dans une tape biologique. -Celle-ci dbute par une phase que lon qualifie de biochimique pendant laquelle les espces radicalaires produites altrent chimiquement les biomolcules prsentes dans le milieu environnant et entranent leur dgradation. -Finalement on atteint ltape biologique : les dgts produits tout au long de cette longue chane dvnements sont pris en charge par le systme de rparation

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interne la cellule. Cette rparation (plus ou moins fidle) peut durer plusieurs heures et se traduit en dfinitive par lapparition ou non de lsions molculaires graves. Dans ce qui suit, nous allons nous intresser l'interaction entre les rayonnements et la matire biologique. Qu'ils soient lectromagntiques ou particulaires, les diffrents types de rayonnements seront tudis afin de comprendre en dtail les processus collisionnels mis en uvre lors de l'exposition de la matire (biologique ou non) une irradiation. Nous aborderons notre tude par la recherche d'une classification adquate des diffrents rayonnements afin de mettre en vidence le plus clairement possible l'impact biologique de chacun. Dans un second temps, l'ensemble du spectre lectromagntique et des rayonnements particulaires sera pass en revue en terme de processus d'interaction, afin de souligner les nombreuses voies possibles dont dispose tout rayonnement pour transfrer de l'nergie la matire. Dans une troisime partie, nous nous intresserons aux consquences biologiques de telles irradiations, qu'elles soient ionisantes ou non. Enfin, une tude des interactions entre ondes et particules avec la matire biologique ne serait pas complte sans aborder le cas des ondes sonores, ce qui sera fait dans une dernire partie largement consacre aux effets biologiques des ultrasons.

I - Classification des rayonnements

Une premire faon de classer les rayonnements serait d'opposer les rayonnements lectromagntiques aux rayonnements particulaires. Alors que les premiers, mis par la matire (essentiellement par des transitions lectroniques dans les atomes), peuvent tre considrs comme de l'nergie cintique l'tat pur, les seconds sont forms de particules matrielles doues de masse au repos. Il en rsulte que les processus physiques mis en jeu lors de l'interaction de chacun avec la matire vont diffrer tant du point de vue de la collision proprement dite que du dpt d'nergie conscutif. Cependant la classification rayonnement lectromagntique/particulaire repose sur des concepts physiques. Il va de soi que pour le biologiste soucieux de connatre les dommages radio-induits, il serait plus intressant d'opposer les rayonnements selon leurs effets sur la matire biologique. On a alors t amen sparer les rayonnements ionisants, dont l'nergie est suffisante pour arracher un lectron la structure molculaire biologique, de ceux qui ne le peuvent pas, appels rayonnements non-ionisants. L'nergie d'ionisation des principaux constituants de la matire biologique tant de l'ordre de 13,6eV (H : 13,54eV, N : 14,24eV, C : 11,24eV et O : 13,57eV), il est apparu judicieux de prendre cette valeur comme valeur seuil, ce qui justifie que l'on dnomme comme radiations non-ionisantes toutes les radiations lectromagntiques d'nergie infrieure 13,6eV, c'est--dire les ondes radiolectriques, la lumire ultraviolette, visible et infrarouge. Cette dnomination pourrait en principe s'appliquer aussi des particules matrielles de trs faible nergie. En fait, de tels rayonnements n'ont aucun intrt pratique. Il en rsulte que cette classification oppose d'une part les rayonnements lectromagntiques UV, visibles et infrarouges, d'autre part

les rayonnements lectromagntiques (X et ) et les rayonnements particulaires qui constituent l'ensemble des rayonnements ionisants. Le plan de l'article propos sera calqu sur cette classification.

II - Interaction des rayonnements ionisants avec la matire

En mdecine et en biologie, les rayonnements ionisants rencontrs sont principalement constitus soit par des particules matrielles charges (lectrons, protons, deutons, ) ou neutres (neutrons), soit par des photons (essentiellement les rayons X et ). Ces rayonnements ionisants ont en commun la proprit de provoquer des ionisations dans les milieux matriels o ils pntrent, c'est--dire l'jection d'un ou plusieurs lectrons de l'difice atomique ou molculaire rencontr. Les ionisations sont l'origine des effets utiliss pour la dtection des rayonnements (compteurs de particules, dosimtres, ), comme l'origine des effets biologiques constats sur les milieux vivants, comme il en sera question dans les sections suivantes. En effet, l'interaction entre un rayonnement et la matire se traduit par un transfert d'nergie, ce dernier reprsentant la premire tape de l'action biologique des rayonnements [2]. De plus, une interaction est ncessaire pour dtecter un rayonnement, d'o l'importance de cette notion en imagerie diagnostique.

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1. Interaction des particules charges lourdes (ions) avec la matire

Une particule charge passant au voisinage d'un atome peut interagir avec un des lectrons ou avec le noyau de l'atome. Le transfert d'nergie s'accompagne d'une perte d'nergie cintique E pour la particule incidente. Cette nergie se retrouve sous la forme d'un ventuel changement d'tat de l'atome cible (ionisation, excitation) et de l'mission ventuelle de rayonnements lectromagntiques assurant un bilan nergtique quilibr. a) Nature de l'interaction Une particule charge pntrant dans un milieu, interagit avec les atomes du milieu et se ralentit. La force dinteraction dominante est la force coulombienne entre la particule incidente, charge positivement, et les lectrons atomiques, chargs ngativement. Les interactions avec les noyaux, que ce soit par lintermdiaire des forces coulombiennes ou des forces nuclaires, sont exceptionnelles (environ 108 fois moins frquentes quavec les lectrons) et peuvent tre ngliges dans le processus de ralentissement. On distingue alors trois processus d'interaction majoritaires: -Si l'interaction est assez intense, le transfert dnergie peut tre suffisant pour arracher un lectron de latome auquel il tait li : cest le phnomne

dionisation. Il y a cration dune paire dions (ion positif et lectron) dans le milieu. -Si linteraction est insuffisante pour crer une ionisation, il y a seulement excitation : llectron change dtat quantique, lexcitation le fait passer dun tat initial, dnergie de liaison E0, un tat final moins li, dnergie E1. -Un troisime type de processus concerne la capture lectronique au cours de laquelle le projectile capture, sur une de ses orbitales externes, un lectron de l'atome cible. Dans le cas o lnergie transfre est notablement suprieure lnergie de liaison de llectron, celui-ci peut tre son tour responsable dautres excitations ou ionisations. Ces lectrons secondaires nergtiques sont appels rayons delta, et reprsentent une faon indirecte pour la particule charge de transfrer son nergie au milieu. Pour les particules charges lourdes, lionisation et lexcitation des atomes ou des molcules sont pratiquement les seules causes du ralentissement. Elles saccompagnent dun changement dtat des atomes concerns : ce sont des collisions inlastiques. Lnergie E transfre llectron lors dune collision peut tre comprise entre zro et une valeur Emax, observe dans un choc frontal et calcule en exprimant la conservation de lnergie et de la quantit de mouvement, dans le cadre de lapproximation dun lectron au repos. Cette nergie est donne par la formule Emax = 4m0M1E1/(m0+M1)2 o m0 est la masse au repos de llectron, E1 lnergie cintique et M1 la masse au repos de la particule incidente. La masse de la particule lourde tant trs suprieure celle de llectron (> 103), on peut crire Emax 4m0E1/M1. En fait, les trs faibles transferts dnergie sont beaucoup plus probables que les transferts dnergie voisins de Emax parce que la probabilit de transfert varie en 1/(E)2. Le ralentissement des particules charges lourdes seffectue donc au cours dun trs grand nombre dinteractions faible transfert dnergie et leurs trajectoires peuvent tre considres comme rectilignes. Le ralentissement est un phnomne de nature statistique. La force coulombienne, dpendant de linverse du carr de la distance, a une porte infinie : il en rsulte que la particule interagit simultanment avec un grand nombre dlectrons et perd ainsi graduellement et continment de lnergie le long de sa trajectoire. Cette proprit permet de traiter le ralentissement des particules charges comme un phnomne continu.

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b) Distribution spatiale des transferts dnergie dans le milieu travers Leffet produit par un rayonnement sur un chantillon irradi (biologique ou non) dpend de la quantit dnergie cde au milieu, et plus prcisment de la densit dnergie absorbe [3]. On constate cependant que, quantit gale dnergie absorbe, leffet produit dpend galement de l'nergie du rayonnement et de sa nature : leffet biologique est par exemple diffrent lorsque lon considre des lectrons et des particules . Une manire de quantifier le transfert dnergie dune particule consiste dfinir son TEL (Transfert dEnergie Linique ou pouvoir darrt lorsqu'il s'agit d'ions) : cette notion reprsente l'nergie moyenne transfre la matire par unit de longueur de la trajectoire de la particule et sexprime par exemple en keV/m. Le TEL se dfinit donc comme : TEL = dE/dx, et dpend dune part des caractristiques de la particule (son nergie, son nombre de masse Aion et son numro atomique Zion si c'est un ion) et dautre part de la nature du milieu travers. La figure 1 reprsente les variations du TEL en fonction de la vitesse de lion (Vion).
dE dx
Domaine de Bethe :

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dE vion dx e

dE dx e

2 Zion 2 vion

2 2m e vion Log I

dE dx
facteur > 10
3

Figure 1 : Variation du TEL = (-dE/dx) en fonction de la vitesse de lion incident. On a reprsent la contribution lastique (pouvoir darrt nuclaire (-dE/dx)) et la contribution inlastique (pouvoir darrt lectronique (-dE/dx)e) [3].

a 1 2 b

3 Vmax 1,5 2V0 Zion

v ion

On constate que, suivant le rgime de vitesse considr, la densit dnergie (ou TEL) sexprime diffremment : -Pour des vitesses grandes devant la vitesse des lectrons (lectrons 2/3 cibles et lectrons de lion), cest--dire pour Vion >> V0. Zion (o V0 est la vitesse de Bohr) : le TEL est donn par la formule de Bethe (figure 1). 2/3 -Pour des vitesses intermdiaires (Vion V0. Zion ) : le TEL passe par un maximum. 2/3 -Pour des vitesses faibles (Vion << V0. Zion ) : la vitesse de lion est trs faible devant la vitesse de tous les lectrons : il y a rarrangement des niveaux lectroniques au cours de linteraction et formation dune quasi-molcule. Des lectrons passent de lion vers latome cible et

rciproquement : il y a change de quantits de mouvement dlectrons proportionnel Vion; il en rsulte un TEL proportionnel Vion. Jusqu maintenant, nous avons considr les pertes dnergie de lion par collisions inlastiques (on parle de pouvoir darrt lectronique) en occultant la partie collision lastique (de type ion-noyau) qui contribue au pouvoir darrt nuclaire. Sur la figure prcdente, nous avons reprsent la contribution de ces pertes lastiques au pouvoir darrt de lion, note (-dE/dx), la contribution des pertes inlastiques tant note (-dE/dx)e. On constate que les pertes dnergie par collisions lastiques dominent le ralentissement de lion uniquement dans le rgime des trs faibles vitesses 2/3 (Vion << V0. Z ion ), et deviennent ngligeables au-del. Elles sont plus prcisment prpondrantes dans la rgion = a/b 1-2, o est une variable rduite sans dimension dfinie partir du rayon dcran du potentiel dinteraction coulombien a et du diamtre de collision b (figure 1). c) Parcours Les particules charges lourdes ont, dans la matire, une trajectoire pratiquement rectiligne. On appelle parcours R la longueur de cette trajectoire. La relation entre le parcours et le pouvoir d'arrt est donne par R=

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Eion

dx =

( dE/dx ) =
0

Eion

dE

Eion 0

dE TEL

Exprimentalement, on trace la courbe de transmission d'un faisceau parallle de particules mononergtiques en fonction de l'paisseur x de l'cran absorbeur. On dtecte un nombre de particules pratiquement constant jusqu' ce que l'paisseur de l'cran atteigne une valeur suffisante pour les arrter compltement. Cependant, on remarque que les particules ne sont pas toutes arrtes par une mme paisseur d'cran : il y a une certaine dispersion des parcours, due au processus alatoire du ralentissement. Cette fluctuation est couramment appele straggling. Le parcours moyen est dfini comme tant l'paisseur de l'absorbeur qui diminue de moiti le nombre de particules incidentes. d) Courbe de Bragg Une autre grandeur extrmement importante au regard du biologiste est la courbe de Bragg qui reprsente l'ionisation spcifique moyenne, c'est--dire le nombre de paires d'ions cres par une particule d'nergie Eion jusqu' son arrt complet dans la matire (grandeur directement proportionnelle au dpt d'nergie) en fonction de la distance la source. Elle est caractrise par l'existence d'un maximum trs prononc prcdant une chute brutale, montrant ainsi que le dpt d'nergie est trs localis (figure 2). Cette caractristique peut tre mise profit lors

d'irradiations de tumeurs extrmement bien localises et peu profondes comme les tumeurs de l'il par exemple, et ce afin de dtruire avec efficacit les cellules tumorales sans pour cela lser les cellules saines situes en amont du parcours de la particule ionisante.
140 120

Perte d'nergie (MeV/cm)

100 80 60 40 20 0

Reprsentation Figure 2 : schmatique d'une courbe de Bragg pour des protons dans l'eau.

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Profondeur (mm)

2. Interaction des particules charges lgres avec la matire

a) lectrons Rappelons tout d'abord que la masse de l'lectron est 1836 fois infrieure celle du proton. Cette caractristique empche de transposer immdiatement les rsultats prcdents aux lectrons. De plus, lors de leur interaction avec les lectrons ou les noyaux du milieu travers, les phnomnes de diffusion sont importants et, de ce fait, la notion de parcours devient extrmement floue. La figure 3 reprsente la trace d'un lectron de 5keV dans l'eau : chaque point reprsente une interaction avec une molcule d'eau.
80

60

Y (nm)

40

Figure 3 : Projection bidimensionnelle de la trace d'un lectron de 5keV dans l'eau [3].

20

0 0 50 100 150 200 250 300 350

X (nm)

- Interaction avec les lectrons de la cible De la mme faon que prcdemment, on peut rpertorier les interactions entre l'lectron incident et les lectrons de la cible en deux

grandes catgories : les interactions inlastiques au cours desquelles une partie de l'nergie initiale est transfre la cible et les interactions lastiques au cours desquelles le transfert est exclusivement angulaire, l'nergie perdue tant dans ce cas extrmement faible (figure 4). Il existe cependant des diffrences importantes avec ce qui a t dit dans les sections prcdentes. En effet, ayant la mme masse que les lectrons atomiques avec lesquels il interagit, l'lectron incident est fortement dflchi. La notion de trajectoire rectiligne n'est plus valable. De plus, une fraction importante de l'nergie de l'lectron peut tre perdue en une seule collision et l'nergie maximale transfrable au cours d'une collision est gale l'nergie de l'lectron incident (Einc). Cependant, aprs la collision, les lectrons diffus et arrach tant indiscernables, il est d'usage de qualifier l'lectron le plus rapide de diffus, et l'lectron le plus lent d'ject. De ce fait, le transfert d'nergie est compris entre 0 et Einc/2.

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cm )

10

sections efficaces (10

10

Figure 4 : Sections efficaces totales des interactions lectron-molcule d'eau: - diffusion lastique (trait discontinu), - excitation lectronique (trait plein) - ionisation (pointill) [3].

-16

10

-1

10

10

10

10

Einc (eV)

- Diffusion lastique sur les noyaux Dans le champ coulombien d'un noyau de charge Ze, l'lectron diffuse lastiquement mais sans perte d'nergie apprciable en raison de la grande diffrence de masses (rebondissement sur un obstacle fixe). La probabilit de diffusion augmente en Z2 et est, pour un angle de diffusion donn, d'autant plus grande que l'nergie de l'lectron est faible. - Diffusion inlastique sur les noyaux : Bremsstrahlung Un lectron se dplaant au voisinage d'un noyau est soumis des forces d'acclration. En mcanique classique, quand une particule de charge lectrique ze subit une acclration, elle rayonne de l'nergie sous forme d'une onde lectromagntique et se ralentit. La mcanique quantique lui fait correspondre l'mission de photons. L'acclration de la particule est = zZe2/Mr2, o M est la masse de la particule de charge Ze et r la distance entre les deux charges. On montre alors que l'nergie rayonne est proportionnelle 2, c'est--dire inversement proportionnelle au carr de la masse. Le phnomne, ngligeable pour les particules lourdes, ne l'est

plus pour les lectrons compte tenu de leur faible masse. La fraction de l'nergie de l'lectron mise sous forme de rayonnement de freinage (Bremsstrahlung qui vient de l'allemand bremsen signifiant freiner et strahlen rayonner) augmente avec l'nergie de l'lectron et est favorise dans les milieux absorbeurs de numro atomique lev (dpendance en Z2). La contribution relative du Bremsstrahlung au ralentissement est ainsi de l'ordre de 0.3% pour des nergies de 1MeV pour atteindre 3% pour des nergies de 10MeV. Le spectre de photons mis est un spectre continu dont l'nergie maximale est gale l'nergie cintique des lectrons. Cependant, l'nergie rayonne par l'lectron est surtout rayonne en photons de faible nergie. De la mme faon que prcdemment, on peut caractriser la perte d'nergie des lectrons dans la matire par le biais d'un pouvoir d'arrt (-dE/dx) qui tient compte d'une part de la contribution due la collision proprement dite et d'autre part de la contribution due au rayonnement. On constate alors que la part du rayonnement ne devient effectivement importante que pour des nergies de l'ordre de ou suprieures la dizaine de MeV. Notons pour finir qu'il existe d'autres types de collisions entre un lectron et la matire, comme par exemple : -la rtrodiffusion, processus par lequel une fraction des lectrons incidents est rflchie dans la direction oppose au faisceau, qui est d'autant plus probable que l'nergie de l'lectron est faible et que le numro atomique des atomes du milieu est lev, -l'effet Cerenkov qui correspond une mission de rayonnements lectromagntiques, dans la bande des longueurs donde visibles, par toute particule charge traversant un dilectrique transparent dindice de rfraction n avec une vitesse suprieure la vitesse de la lumire c/n dans ce milieu. La particule rapide agit sur le milieu travers en crant, au voisinage de la trajectoire, une polarisation lectrique du milieu sous laction du champ lectrique qui se dplace avec la particule. Cest un effet local et temporaire li au passage de la particule. Quand celle-ci sloigne, les atomes se dpolarisent en librant lnergie qui leur avait t fournie pour les polariser. En fait, l'nergie du photon mis se situant dans la gamme d'nergie 1,5-3eV, l'effet Cerenkov contribue peu au ralentissement de la particule. b) Positons Linteraction dun positon dans la matire commence par une phase de ralentissement trs rapide (3 6 picosecondes) au cours de laquelle il perd son nergie par les mmes processus que llectron et se comporte de faon similaire. Une fois thermalis (nergie cintique de quelques 10-2eV), le positon continue sa pntration dans la matire par une phase de diffusion au cours de laquelle il passe la plupart du temps dans les

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rgions interatomiques o il est repouss par le potentiel positif des noyaux. En fin de diffusion, au bout de quelques centaines de picosecondes, il sannihile avec un lectron libre du milieu : la paire lectron-positon disparat. Lnergie correspondante, soit 1,022MeV (2m0c2), apparat sous forme de deux photons, mis dans des directions opposes et emportant chacun une nergie de 511keV. Lors de ce processus, les principes de conservation de lnergie, de limpulsion et de la charge sont satisfaits.

3. Interaction des neutrons avec la matire

a) Gnralits Electriquement neutre, le neutron est un excellent projectile pour pntrer dans les noyaux et provoquer des ractions nuclaires. Il nest pas dvi de sa trajectoire par les lectrons du cortge lectronique et pntre dans les noyaux sans tre repouss par la barrire coulombienne. De plus, compte tenu de la trs faible proportion de volume occup par le noyau par rapport au volume atomique, les chocs entre les neutrons et les noyaux sont peu probables. Aussi, et en cas de collision avec un noyau, le neutron, sauf cas particuliers, perd peu dnergie chaque choc. En consquence, les neutrons comme les rayonnements gamma, sont beaucoup plus pntrants que les particules charges et peuvent traverser des paisseurs importantes sans tre arrts. b) Classification des neutrons Un grand nombre de ractions nuclaires produisent des faisceaux de neutrons. Les neutrons, la diffrence des particules charges, ne peuvent tre acclrs mais peuvent tre ralentis par chocs successifs sur des noyaux choisis pour cet effet. Ce processus de ralentissement est appel modration et les noyaux ralentisseurs constituent le modrateur. On dfinit gnralement trois types de neutrons : -les neutrons rapides dont lnergie cintique En est suprieure 0,8MeV, -les neutrons pithermiques : 1eV En 0,8MeV, -les neutrons thermiques : En < 1eV. c) Diffrents types d'interaction - La diffusion lastique Dans ce type d'interaction, la structure interne du noyau n'est pas altre. Le neutron incident est juste dvi de sa trajectoire initiale, l'interaction se rduisant un simple transfert d'nergie cintique. Ce type d'interaction constitue le principal mcanisme de perte d'nergie du neutron 1 1 A dans les domaines intermdiaire et rapide : 0 n+ A Z X 0 n + Z X .

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- La diffusion inlastique La diffusion inlastique s'effectue avec la formation d'un noyau intermdiaire appel noyau compos . Le neutron incident est absorb par le noyau cible formant ainsi un noyau compos qui se dsintgre environ 10-17s aprs, en mettant un neutron et en laissant le noyau rsiduel dans un tat excit. Le noyau rsiduel revient l'tat fondamental par l'mission d'un ou de plusieurs photons. La raction s'crit donc
1 A A +1 1 A 0 n+ Z X Z X* 0 n' + Z X

* puis

A Z

X* A ZX + .

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Dans une raction de diffusion inlastique, la quantit de mouvement et l'nergie totale sont conserves, mais l'nergie cintique, par contre, ne l'est pas. En effet, une partie de l'nergie cintique du neutron incident est transforme en nergie d'excitation du noyau rsiduel. La diffusion inlastique est donc une raction seuil : le neutron doit possder une nergie cintique suffisante pour exciter le noyau au moins jusqu'au premier niveau. Signalons enfin que la section efficace de diffusion inlastique augmente gnralement avec l'nergie du neutron incident et avec la masse du noyau cible. - La capture radiative La capture radiative s'effectue galement avec la formation d'un noyau compos par l'absorption d'un neutron incident. Le noyau ainsi form possde une nergie d'excitation leve qui est la somme de l'nergie cintique du neutron incident et de son nergie de liaison dans le noyau compos. La dsexcitation de ce noyau s'accomplit par l'mission d'un photon :
1 A A +1 A +1 0 n+ Z X Z X* Z X

+ .

Le retour du noyau compos son tat fondamental peut s'effectuer par l'mission d'un seul photon trs nergtique, ou progressivement par passage par des niveaux d'excitation intermdiaires, avec mission de plusieurs photons (on parle alors de cascade). La capture radiative est de loin la raction la plus importante des ractions d'absorption susceptibles de faire disparatre le neutron. Cette raction sera donc utilise en radioprotection, mais toute capture radiative est accompagne d'mission de photons qui peuvent tre assez nergtiques. Gnralement, les sections efficaces de capture radiative varient, sauf exception aux nergies suffisamment loignes d'une rsonance, en 1/V o V reprsente la vitesse du neutron incident.

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- Les ractions de capture type (n,p) et (n,) Dans ce type d'interaction, le noyau compos form par l'absorption du neutron incident met une particule charge. Ces ractions se produisent plus facilement avec les noyaux lgers qui opposent l'mission d'une particule charge une barrire coulombienne moins leve. Les neutrons qui provoquent ces ractions possdent gnralement des nergie leves, l'exception des ractions (n,) sur le 10 B et le 6Li et des ractions (n,p) sur l'14N et le 32S, provoques par les neutrons thermiques.
1n+ 6 Li3 H+ 4 He+ 4.78MeV Exemple de raction (n,) : 0 3 1 2 1 1 14 Exemple de raction (n,p) : 0 n+ 14 7 N 1 p + 6 C

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- Les ractions de capture type (n,2n) La dsexcitation du noyau compos s'effectue par l'mission de deux neutrons. L'nergie de liaison moyenne des neutrons dans les noyaux est suprieure 7,5MeV pour la plupart des noyaux et ces ractions ncessitent gnralement des seuils d'nergie des neutrons incidents suprieures 10MeV. Ce phnomne de production de neutrons peut devenir important avec certains noyaux. - Les ractions de fission provoques par les neutrons La fission est une raction nuclaire particulire. Elle peut tre provoque, assez facilement, par des neutrons d'nergie cintique trs faible sur certains noyaux lourds, mais l'nergie libre est trs leve, gnralement de l'ordre de 200MeV
A1 A2 1 235 0 n+ 92 U Z1 PF1 + Z 2 1 PF2 + 0 n

o reprsente le nombre moyen de neutrons mis au cours de la fission. Sous certaines conditions, lorsqu'un neutron est absorb par certains noyaux lourds, ces derniers se cassent gnralement en deux parties plus ou moins gales. Ces noyaux sont appels produits de fission (PF). La raction de fission est exonergtique et est accompagne par l'mission de deux ou trois neutrons, ce qui permet d'entretenir la raction. Le tableau ci-dessous donne l'nergie cintique seuil des neutrons ncessaire pour produire une raction de fission. Noyau Eseuil (MeV)
232 91Th 233 92 U 234 92 U 235 92 U 238 92 U 239 94 Pu 241 94 Pu

1,05

0,28

13

On remarque que pour les noyaux d'uranium 233 et 235 et de plutonium 239 et 241, un neutron d'nergie cintique nulle peut provoquer la raction de fission de ces noyaux. Ils constituent donc des matriaux privilgis pour l'obtention d'une raction en chane auto-entretenue. Le nombre moyen de neutrons mis lors de la raction de fission ( ) est variable en fonction de l'nergie cintique du neutron qui provoque la fission et de la nature de l'isotope fissile considr. Le tableau ci-dessous donne les valeurs de pour la fission de diffrents noyaux provoque par des neutrons thermiques; l'nergie moyenne E des neutrons mis y est galement indique. isotope U 2,474 1,97
233

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E (MeV)

U 2,41 2,00

235

Pu 2,862 2,06

239

Pu 2,922 2,02

241

4. Interaction des rayonnements lectromagntiques avec la matire

Notons tout d'abord que les rayonnements lectromagntiques auxquels nous nous intressons ici peuvent tre classs, suivant leur origine, en quatre catgories : -rayonnements X caractristiques mis lors de la dsexcitation de latome, -rayonnements qui accompagnent la dsexcitation du noyau, -photons qui rsultent de lannihilation dun positon avec un lectron, -photons de freinage mis lors du ralentissement des lectrons dans la matire. Le comportement des rayonnements lectromagntiques dans la matire est fondamentalement diffrent de celui des particules charges [4]. En une seule interaction, le photon peut tre compltement absorb et disparatre. Mais, linverse, il est susceptible de traverser des quantits importantes de matire (par exemple un centimtre dpaisseur de plomb) sans interagir du tout, ce qui est exclu pour les particules charges qui, en pntrant dans un milieu, cdent immdiatement de lnergie un grand nombre dlectrons du milieu. Parmi les diffrents processus possibles dinteraction des photons avec les lectrons atomiques ou avec les noyaux, nous en tudierons trois qui jouent un rle majeur. Ce sont : leffet photolectrique, leffet Compton et leffet de production de paires. Il rsulte de ces trois effets la mise en mouvement de particules secondaires (lectrons, positrons) qui vont dissiper lnergie qui leur a t transfre par le photon en ionisant et excitant la matire. nergie gale,

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et compte tenu des valeurs des sections efficaces des processus lmentaires mis en jeu, les photons ont dans la matire un pouvoir de pntration bien suprieur celui des particules charges. a) Les cinq interactions lmentaires Les interactions entre les photons et la matire se font selon cinq mcanismes dont deux ont un intrt mdical important : leffet photolectrique et leffet Compton. - Effet photolectrique Leffet photolectrique rsulte du transfert de la totalit de lnergie du photon incident sur un lectron de lun des atomes de la cible. Cet effet ne se produit que si lnergie E = h du photon est suprieure lnergie de liaison EL de llectron. Ce dernier, appel photolectron, est alors ject du cortge lectronique de latome avec une nergie cintique Ec = E-EL et puise son nergie cintique en ionisations et excitations. Lnergie Ec est donc totalement absorbe dans la cible. Llectron expuls laisse une place vacante qui va tre comble par les lectrons de couches plus externes ou par un lectron extrieur latome. Ce remplacement saccompagne dune libration dnergie ER qui peut tre : -soit mise sous la forme dun photon dit photon de fluorescence, -soit communique un lectron priphrique dnergie de liaison EP < ER. Cet lectron appel lectron Auger est expuls avec une nergie cintique ER-EP. Ce phnomne, appel effet Auger, entre en comptition avec lmission dun photon de fluorescence. Leffet Auger prdomine largement (jusqu 90%) pour les lments lgers des milieux biologiques. On peut dfinir un coefficient d'attnuation linaire li l'effet photolectrique gnralement not . On montre alors que, pour un matriau de masse volumique et de numro atomique Z, le coefficient d'attnuation linaire photolectrique de photons d'nergie E vrifie la relation approche de Bragg et Pierce : / (Z/E)3. En ralit, les variations de / en fonction de E montrent des discontinuits qui correspondent aux nergies de liaison des lectrons de la cible. Comme / dcrot trs vite avec E et augmente rapidement avec Z, l'effet photolectrique est surtout important pour les lments lourds et les photons peu nergtiques. - Effet Compton Leffet Compton rsulte de linteraction entre un photon incident dnergie E = h et un lectron libre ou faiblement li de la cible, dont lnergie de liaison et lnergie cintique sont ngligeables devant E. Au cours de cette interaction qui peut tre dcrite comme une collision,

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llectron, dit lectron Compton, acquiert une nergie cintique Ee et un photon diffus, dit photon de recul, est mis avec lnergie h' dans une direction faisant un angle avec la direction du photon incident. La conservation de lnergie entrane : h = Ee+h'. Les valeurs respectives de Ee et h' sont lies par les formules de Compton, obtenues en crivant la conservation de la quantit de mouvement et de lnergie totale au cours de la collision. Llectron Compton est toujours projet vers lavant par rapport la direction du photon incident, mais les photons de recul peuvent ventuellement tre mis vers larrire . Plus lnergie incidente est grande, plus les lectrons Compton et les photons de recul se regroupent en moyenne autour de la direction du photon incident. Comme pour leffet photolectrique, on peut dfinir un coefficient dattnuation linaire li leffet Compton : . On montre que / est pratiquement indpendant du matriau cible et dcrot lentement quand lnergie du photon incident augmente. Leffet Compton est donc dautant plus important que le matriau cible est plus dense. - Cration de paires ou matrialisation Ce processus se produit pour des photons trs nergtiques passant proximit dun noyau : le photon incident se matrialise sous la forme dun lectron et dun positon, de mme masse m0 et de mme nergie cintique Ee. Si E est lnergie incidente, la conservation de lnergie scrit : E = 2m0c2+2Ee. Llectron et le positon puisent leur nergie cintique en ionisations et excitations. la fin de son parcours, le positon se combine un lectron en une raction dannihilation qui donne naissance deux photons de 511keV mis dans des directions opposes. Le coefficient dattnuation linaire li la cration de paires, not , crot approximativement comme le numro atomique de la cible Z. Il est nul pour les valeurs de E infrieures 2m0c2 et ne devient important que pour des valeurs trs leves de E. b) Importance relative des interactions lmentaires Dans le domaine des nergies utilises en mdecine, les interactions entre les photons et la matire se font essentiellement par effet photolectrique, par effet Compton et accessoirement par cration de paires. Soit N0 le nombre total de photons mononergtiques arrivant sur lcran par unit de surface et N(x) le nombre de photons par unit de surface qui ont travers une paisseur x du matriau de lcran sans tre ni absorbs ni diffuss (on les appelle photons transmis). On a alors : N(x) = N0.e-x = N0.e-x.e-x.e-x, o est appel coefficient linaire dattnuation (avec = + + ) et a les dimensions de linverse dune longueur ( sexprime ordinairement en cm-1). Sa valeur

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dpend de la nature du matriau de lcran et de lnergie des photons considrs, et rsulte des trois effets dcrits prcdemment. Les photons qui traversent un cran sans interaction sont ceux qui nont t lobjet daucun de ces trois effets. La figure 5 montre, en fonction de lnergie du photon incident et du numro atomique Z de la cible, les zones o prdomine tel ou tel effet.

120

Numro atomique de l'absorbeur

100

80

Effet photolectrique dominant

Production de paire dominante

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60

Figure 5 : Importance relative des trois effets en fonction de lnergie du photon incident et du numro atomique du milieu

40

Effet Compton dominant

20

0 0.01

0.1

10

100

Energie du photon incident

c) Autres types dinteraction - Diffusion de Thomson-Rayleigh Au cours de ce processus, purement diffusif, le photon incident est absorb par latome cible et rmis dans une direction diffrente, mais sans changement de longueur donde. Trs importante pour les photons peu nergtiques (IR, visible, UV), la diffusion Thomson-Rayleigh est ngligeable pour les photons X ou . - Ractions photonuclaires Ces ractions ne sont pas utilises en mdecine pratique, elles ne se produisent que pour des photons dnergie trs leve (de lordre de 10MeV).

III - Interaction des rayonnements non ionisants avec la matire

Rappelons que l'on entend par radiations non ionisantes les radiations lectromagntiques d'nergie suffisamment petite pour tre incapables de provoquer l'ionisation de molcules d'intrt biologique. En

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pratique, cela suppose que le quantum d'nergie h est infrieur une dizaine d'lectronvolts et leur longueur d'onde dans le vide suprieure 150nm. Elles comprennent donc en principe : -les radiations ultraviolettes : 100nm < < 400nm, c'est--dire 3,1eV < h < 12,4eV, -les radiations visibles : 400nm < < 750nm c'est--dire 1,65eV < h < 3,1eV, -les radiations infrarouges : 750nm < < 1mm c'est--dire 1,2meV < h < 1,65eV, -les ondes radiolectriques ou hertziennes (millimtriques, centimtriques (radar), puis ondes de radiodiffusion).

1. Absorption des radiations non ionisantes par la matire hal-00001383, version 1 - 24 Nov 2006
Les radiations n'agissent sur la matire que dans la mesure o elles sont absorbes par celle-ci. Quand un atome ou une molcule absorbe un quantum, son nergie augmente. L'action des radiations dpend de la faon dont finalement cette nergie absorbe va tre utilise. Il importe donc de comprendre comment peut varier l'nergie d'un atome ou d'une molcule. Abstraction faite de son nergie cintique de translation, l'nergie d'un atome isol ne dpend que de sa configuration lectronique. Un lectron pris un niveau d'nergie donne peut tre transfr sur un niveau d'nergie plus grande. L'atome passe ainsi d'un tat fondamental un tat excit. Son nergie est augmente d'une quantit Ee bien dfinie, correspondant la diffrence d'nergie des deux niveaux. Seul un quantum d'nergie gal Ee pourra raliser cette transition lectronique. Le spectre d'absorption est donc un spectre discontinu ou spectre de raies. Il contient en gnral plusieurs raies car un atome a plusieurs faons d'tre excit, chacune correspondant un Ee diffrent. Il faut galement remarquer que pour le spectre d'absorption des radiations non ionisantes, seuls sont considrer les lectrons les moins lis de l'atome, c'est--dire les lectrons de valence (ou lectrons optiques). Le cas d'une molcule est plus complexe. En effet, son nergie, toujours abstraction faite de son nergie cintique de translation, peut-tre considre comme la somme de trois termes : l'nergie lectronique Ee (de l'ordre de quelques eV) qui ne dpend que de la configuration des lectrons, l'nergie de vibration Ev (de l'ordre de quelques 1/10me d'eV) qui correspond la somme des nergies potentielle et cintique associes aux vibrations des liaisons de la molcule autour d'une distance fixe, et l'nergie cintique de rotation de la molcule autour de son centre de gravit note Er (de l'ordre de quelques 1/100me d'eV). Chacune de ces trois nergies est quantifie et ne peut donc varier que par sauts bien dfinis. Au total E = Ee+Ev+Er. Chacun de ces trois termes ne prenant

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qu'un nombre fini de valeurs distinctes, le nombre total de variations E possibles reste fini : le spectre d'absorption d'une molcule est donc un spectre de raies, en gnral beaucoup plus complexe que celui des atomes. Ainsi, en considrant la gamme des radiations lectromagntiques par ordre d 'nergie croissante partir des ondes hertziennes, on en dduit que : -dans l'infrarouge lointain : E = Er, -dans l'infrarouge proche : E = Ev+Er, -dans le visible ou l'ultraviolet : E = Ee+Ev+Er. Or, pour un mme Ee, plusieurs Ev et Er sont possibles : il en rsulte qu'une transition lectronique peut donner naissance un grand nombre de raies, alors que pour un atome isol une transition lectronique ne donne naissance qu' une seule raie. Notons cependant que tout ce qui vient d'tre dit ne concerne que des atomes ou des molcules isols, sans interaction mutuelle. l'tat condens, les spectres d'absorption sont modifis, l'effet des interactions entre atomes ou molcules tendant largir les raies jusqu' les rendre jointives et transformer peu peu une suite de raies trs proches en une bande continue. L'tude des spectres d'absorption molculaire est d'un immense intrt car on peut en tirer d'importants renseignements sur la structure des molcules : certains groupements atomiques bien dtermins, appels groupes chromophores, absorbent slectivement certaines longueurs d'onde : on peut par exemple montrer que l'absorption de l'ADN est due essentiellement aux bases pyrimidiques, car son spectre est extrmement voisin du leur [5]. Ce caractre slectif de l'absorption des radiations non ionisantes est tout fait fondamental et constitue une diffrence essentielle avec les radiations ionisantes pour lesquelles l'absorption ne varie que lentement avec la frquence.

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2. Devenir de l'nergie absorbe

L'nergie absorbe peut se dissiper dans la matire via deux possibilits : elle peut soit induire des ractions chimiques (on parle alors de photochimie), soit tre dgrade sous forme de chaleur ou rmise sous forme de photons. a) Photochimie Du point de vue du photochimiste - et du photobiologiste - seules sont intressantes les radiations capables d'amorcer une raction chimique. Il importe donc de prciser dans un premier temps quelles sont ces radiations avant de dcrire dans un deuxime temps les divers types de ractions photochimiques.

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Une pure variation de l'nergie de rotation d'une molcule ne modifie pas la structure de celle-ci. L'apport d'nergie correspondant est de plus ngligeable. L'infrarouge n'a donc aucune action chimique. Une augmentation isole de l'nergie de vibration augmente l'amplitude des oscillations atomiques, ce qui pourrait rendre la molcule plus fragile et par suite plus apte ragir. Nanmoins, cette action est ngligeable, la temprature ordinaire du moins. En effet, les molcules occupent les niveaux vibrationnels les plus bas, c'est--dire ceux o la molcule est la plus solide. La probabilit de leur faire gravir un grand nombre d'chelons et de les amener un tat de dissociation est extrmement faible. Ce n'est donc qu'aux tempratures leves, o les molcules sont fragiles, que les rayonnements infrarouges peuvent dclencher des ractions photochimiques.

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Finalement, seules les transitions lectroniques - et les radiations qui les provoquent, visibles et UV - ont un intrt photochimique. Une molcule excite selon le schma :
h M M*

a reu une nergie importante, d'un ordre de grandeur comparable celui d'une liaison chimique : sa ractivit est donc augmente. De plus, trs souvent, cette excitation s'accompagne d'une dissociation par rupture de liaison, selon une raction dite photolytique, du type :
h M R + R ' .

Les deux fragments R et R ' emportent chacun un lectron de la liaison covalente qui les unissait. Ce sont des radicaux libres, auxquels l'lectron clibataire qu'ils portent confre une grande ractivit. Au total, l'acte photochimique essentiel est l'excitation lectronique, accompagne ou non de dissociation. b) Fluorescence ou conversion interne L'nergie absorbe dans une molcule n'est pas forcment utilise pour des ractions photochimiques. Elle peut se trouver dissipe sous forme de chaleur ou encore rmise sous forme de photons : c'est le phnomne de fluorescence, qui dure en gnral de 10-3 10-5 seconde. Un autre destin de l'nergie est sa dissipation par un processus appel conversion interne : la molcule passe par une transition non radiative d'un tat excit un niveau vibrationnel lev de son tat fondamental, de mme nergie. partir de l, son nergie se communique par chocs aux autres molcules, se dgradant ainsi en chaleur.

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IV - Biologie des radiations

Laction du rayonnement sur lADN (qu'il soit ionisant ou non) est habituellement dcrite en terme deffets directs et indirects. Alors que les premiers concernent des dpts dnergie localiss sur un des constituants de lADN, les seconds rsultent de labsorption du rayonnement par lenvironnement de lADN, provoquant la formation despces radicalaires. Ces dernires diffusent et peuvent alors interagir chimiquement avec lADN. Il est aujourd'hui clairement reconnu que la principale entit sensible dun organisme irradi est lacide dsoxyribonuclique (ADN) et que mme si cette macromolcule est un polymre extrmement complexe, tant du point de vue morphologique que physiologique, il est dsormais admis quune lsion sur lun de ses constituants est un phnomne majeur, dterminant, pour le devenir de la cellule irradie. Cependant, selon la gravit des dommages au niveau cellulaire, le devenir de lorganisme irradi va diffrer : le systme de rparation cellulaire peut alors oprer plus ou moins fidlement et ainsi induire (ou non) des erreurs de rplication engendrant des aberrations chromosomiques.

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1. LADN au sein de la cellule

a) LADN, cible privilgie Tout organisme vivant est constitu de cellules plus ou moins complexes qui forment lentit structurale de base de lorganisation cellulaire. Pour les organismes complexes comme les mammifres, les cellules sont dites eucaryotes car elles possdent un noyau cellulaire qui renferme toute linformation gntique, code sous forme de gnes localiss sur une macromolcule : lacide dsoxyribonuclique (ADN). cause de la complexit dun tel systme, comprenant plusieurs centaines de molcules interagissant les unes avec les autres, envisager un processus universel de ractions cellulaires suite une irradiation est inconcevable. Cependant, de nombreuses expriences [6] ont clairement mis en vidence que lADN situ lintrieur du noyau cellulaire reprsentait la cible privilgie lors dune irradiation, et que les dommages subis par cette macromolcule taient corrls au processus de mort cellulaire. Cela ne veut pas dire que seul lADN est ls lors dune irradiation : il y a bien entendu beaucoup dautres molcules prsentes dans lorganisme cellulaire qui vont tre affectes par lirradiation, mais elles sont normalement prsentes en trs grand nombre dans la cellule et remplaces par dautres agents ayant les mmes spcificits ou bien tout simplement resynthtises par codage de lADN. Par contre, lADN, du fait de son unicit, acquiert un rle essentiel dans la survie de la cellule, et un dommage non rpar (ou incorrectement rpar) risque daffecter le fonctionnement de la cellule ainsi que sa reproductibilit. LADN, dont plus

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de 95% se trouve lintrieur du noyau (dans le cas de cellules eucaryotes) renferme lessentiel de linformation gntique. b) LADN, une structure hlicodale L'ADN est une double hlice dont chacune des chanes est forme d'une alternance de sucres et de groupes phosphate. chaque sucre est attache l'une des quatre bases suivantes : adnine, guanine (l'une et l'autre faites de deux cycles : ce sont des purines), thymine, cytosine (l'une et l'autre sont des pyrimidines qui n'ont qu'un cycle). Des liaisons hydrogne assurent la stabilit de l'hlice et maintiennent unies les deux chanes qui la constituent. Ces liaisons hydrogne unissent et relient une purine d'une chane une pyrimidine de l'autre chane. C'est ainsi que l'adnine est relie la thymine, et que la guanine est relie la cytosine [7]. LADN prsente une structure en double hlice dun diamtre de 20, dun pas de 34 comprenant 10 paires de bases azotes. La composition en bases de l'ADN est caractristique de chaque espce, et toutes les cellules somatiques dun organisme ont un ADN de mme composition en bases : la cellule humaine contient par exemple 5,5.109 paires de bases, ou paires de nuclotides, rparties en 2n = 46 chromosomes. LADN ainsi constitue par une double chane peut alors aisment se spiraliser et apparatre sous des phases plus ou moins condenses suivant la phase cellulaire dans laquelle il se trouve. On peut d'ailleurs remarquer que le contenu total en ADN des chromosomes humains reprsente 174cm dADN alors que la longueur totale de ces chromosomes mis bout bout nest que de 220m.

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2. Effets biologiques des rayonnements ionisants

Nous venons de voir que lADN joue un rle primordial dans le devenir de la cellule irradie. Suivant la gravit de la lsion, de son tendue, et de sa position sur le brin dADN, le devenir de la cellule va tre diffrent. Linteraction dun rayonnement avec la matire biologique est en fait linitiateur dune succession complexe de processus physiques, chimiques puis biologiques, qui aboutit une rponse, plus ou moins tardive de la part de la cellule. Et si lon connat de faon assez satisfaisante les deux extrmits de la chane, il est encore aujourdhui quasi impossible de suivre pas pas la srie de ractions qui relie les phnomnes physiques leurs consquences biologiques; une approche consiste cependant comparer les effets biologiques induits par des radiations de qualits diffrentes, notamment linduction de la mort cellulaire (transcrite en terme de relation dose-effet) via les courbes de survie cellulaire.

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a) Les courbes de survie cellulaire Pour chaque type cellulaire tudi, il est possible dvaluer la fraction de cellules survivant une irradiation, en fonction de la dose absorbe par le milieu travers (quantit dnergie absorbe par lunit de masse du milieu travers, qui sexprime en Gray : 1 Gy = 1 J/kg) ou de la fluence du rayonnement utilis (nombre de particules qui traversent lunit de surface de lchantillon irradi, qui sexprime en nombre de particules/cm2) (figure 6).
1 0 ,0

2 .7 2 .9 3 .5 5 .0 Probabilit de survie

M eV M eV M eV M eV

1 ,0

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Figure 6 : Courbes de survie cellulaire correspondant lirradiation de cellules dorigine pithliale (isoles de la trache) de rat par des protons de diffrentes nergies [3].

0 ,1 0 ,0 2 ,0 4 ,0 6 ,0 8 ,0 1 0 ,0 1 2 ,0 1 4 ,0 1 6 ,0

D o s e (G y )

Exprimentalement, il sagit de dterminer la proportion de cellules qui ont continu se diviser aprs lirradiation. Le principe consiste donc suivre sur plusieurs jours les chantillons cellulaires irradis (communment 6 jours) et dnombrer ceux dentre eux qui ont donn naissance des clones, cest--dire gnr des colonies dau moins 26 = 64 cellules. La forme de la courbe de survie dpend tout dabord du spcimen biologique irradi (incluant des paramtres tels que sa morphologie, sa radiosensibilit,), mais surtout de la qualit du rayonnement. La figure 6 reprsente un exemple de courbes de survie (en chelle semi-logarithmique) correspondant des irradiations de cellules de trache de rat par des protons de diffrentes nergies (2,7MeV, 2,9MeV, 3,5MeV et 5,0MeV). b) Quantification de leffet biologique : efficacit biologique relative et section efficace dinactivation cellulaire Pour quantifier les effets biologiques induits par diffrents types de rayonnements, on peut [8] : -soit raisonner en termes de probabilit par particule de produire tel vnement : on parle dans ce cas de section efficace (linactivation cellulaire en est un exemple, mais on parle aussi de section efficace pour linduction daberrations chromosomiques, linduction de cassures simples ou doubles de la molcule dADN,...),

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-soit raisonner en termes defficacit dun rayonnement (par rapport un rayonnement de rfrence) pour induire le mme effet biologique, par unit de dose : on parle alors dEfficacit Biologique Relative (EBR). c) Les dommages dADN radio-induits Suite une irradiation, deux possibilits sont envisageables : -si la lsion est majeure, et donc non rparable, lirradiation va induire une mort cellulaire qui peut tre immdiate pour des irradiations doses leves (plusieurs centaines de Gray) ou bien diffre : on parle de ncrose ou dapoptose (mort programme). -si latteinte est mineure, les enzymes rparatrices de la cellule peuvent agir et rparer la lsion; cependant, si la rparation nest pas fidle, la squence de gnes du brin dADN ls va tre altre et il y aura apparition de lsions gniques crant dans la cellule des mutations gniques. Ces dernires sont lies la partie fonctionnelle du gne : au cours des divisions cellulaires ultrieures la cellule va modifier son patrimoine gntique. Notons que si la lsion est plus grave, et quelle induit une modification morphologique et non gnique du chromosome, on parle daberrations chromosomiques (voir [9] pour une revue dtaille). Un des problmes majeurs de la radiobiologie est de pouvoir identifier les lsions molculaires critiques de lADN, et en particulier de distinguer les lsions gniques (entranant la formation de cellules mutantes) des lsions ltales (qui, elles, induisent la mort cellulaire). Cependant, il est maintenant communment admis que les endommagements essentiels de la molcule dADN peuvent se rpartir en deux groupes : -les lsions qui concernent le squelette proprement dit de la macromolcule : ce sont des ruptures de la colonne sucre-phosphate liant les bases de lADN entre elles. On distingue les cassures simple-brin (CSB) correspondant une unique lsion localise sur un des brins de lADN des cassures double-brin (CDB) correspondant deux cassures simples, chacune delles tant situe en vis--vis sur un brin diffrent de lADN, toutes deux spares dune distance infrieure ou gale une dizaine de paires de bases. -les dgts localiss sur les bases de lADN qui peuvent tre altres ou partiellement dtruites lors de lirradiation. Ces dommages sont de diffrente nature : - la perte ou les altrations des sucres et des bases, - les pontages interbrins, intrabrins, - les pontages avec les protines, les ajouts de diffrentes natures. Toutes ces lsions, de complexit diffrente, et donc dimportance biologique diffrente, vont, suite lirradiation, tre prises en charge par les systmes de rparation de la cellule. Les mcanismes de rparation des

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dommages induits par les radiations sont mal connus : on pense cependant que les lsions nimpliquant quun seul brin dADN sont gnralement correctement rpares par simple rplication du brin oppos via la complmentarit des bases impliques dans la lsion [10-13]. Par contre, en ce qui concerne les cassures double-brin, de nombreux auteurs avaient suggr, ds 1980 [14-16], le rle prpondrant de la CDB, et identifi ce type de dommage comme vnement critique au niveau molculaire. Une rparation incorrecte de ce type de lsion est dterminante pour le devenir cellulaire, aussi bien court terme (mort cellulaire) qu long terme (induction de mutations et/ou daberrations chromosomiques).

3. Effets biologiques des rayonnements non ionisants

Parmi les composants de la matire vivante, seuls les composs organiques non saturs mritent d'tre considrs en pratique. Les autres ont une absorption ngligeable, au moins dans le domaine de longueurs d'onde suprieures 220nm. En particulier, contrairement aux radiations ionisantes, les effets sur l'eau (effets indirects) ne mritent pas considration. Celle-ci n'absorbe pratiquement pas au-dessus de 185nm. Parmi les composs organiques non saturs, les plus importants sont ceux qui ont des doubles liaisons conjugues : cycles benzniques, cycles contenant un ou deux atomes d'azote : ils absorbent dans le domaine de l'U.V. lointain. Nous retiendrons ici l'action des radiations non ionisantes sur les protines d'une part, sur les nuclotides et acides nucliques d'autre part. a) Action sur les protines L'absorption totale d'une protine est trs comparable la somme des absorptions de ses composants (les groupes chromophores tant principalement les liaisons peptidiques et les groupes tryptophane et la tyrosine), ce qui plaide en faveur de la faiblesse des interactions entre aminoacides au sein des protines. Le pic principal se trouve aux alentours de 280nm. Une des actions essentielles des ultraviolets est la dnaturation de celles-ci, en particulier la disparition de leur action enzymatique. On sait que celle-ci est troitement lie la configuration spatiale des molcules protiques, c'est--dire leur structure tertiaire. b) Action sur les acides nucliques Les acides nucliques sont des absorbants trs nergiques de l'U.V. dans la rgion 240-290nm. poids gal, ils absorbent 10 20 fois plus que les protines. Ceci n'a rien de surprenant car toutes les bases sont riches en doubles liaisons conjugues et suffisent expliquer l'absorption de l'ADN.

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c) Photochimie des acides nucliques Toute la photochimie des acides nucliques s'explique par l'action des U.V. sur les bases : sur la thymine et la cytosine pour l'ADN, sur l'uracile et la cytosine pour l'ARN. Un premier effet observ est l'hydratation des pyrimidines. Un deuxime effet, sans doute le plus important, est la formation de dimres, spcialement avec la thymine. Au total, la molcule d'ADN peut tre profondment remanie par une irradiation U.V. : certaines liaisons hydrogne se trouvent rompues par hydratation de la cytosine ou par dimrisation de thymines adjacentes; d'autres liaisons sont remplaces par des liaisons covalentes plus nergtiques (par dimrisation de thymines appartenant des chanes diffrentes); la chane peut se trouver rompue entre un sucre et un groupe phosphorique; enfin, une chane d'ADN peut se trouver fixe d'autres molcules d'ADN ou mme de protines.

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Tout ce qui vient d'tre dit concernant la photobiologie cellulaire, on peut maintenant s'interroger sur l'impact des radiations non ionisantes au niveau cellulaire. En fait, les rayons lumineux et ultraviolets ayant une pntration trs faible dans la matire, leurs effets ne se font sentir que sur les micro-organismes (virus, bactries) ou sur les tissus tout fait superficiels (effets cutans comme l'rythme, la pigmentation, la cancrisation, effets oculaires comme le coup de soleil ). Les doses de rayonnements non ionisants s'expriment en nergie incidente par unit de surface. Cela oppose les radiations non ionisantes aux radiations ionisantes pour lesquelles les doses considres sont les doses absorbes. Malgr cette diffrence, les rsultats d'une tude photobiologique s'expriment de faon analogue ceux d'une exprimentation radiobiologique : au moyen de courbes effet-dose. De faon analogue galement, on doit apprcier le rle de la rpartition dans le temps des doses de rayonnement. Mais ici apparat une nouvelle diffrence essentielle entre radiations ionisantes et radiations non ionisantes, ces dernires montrant en effet une slectivit qui s'exprime au moyen d'une courbe appele spectre d'action qui met en vidence les longueurs d'onde les plus efficaces pour obtenir un effet donn, parfaitement dfini. L'intrt du spectre d'action tant de pouvoir le comparer au spectre d'absorption de certains composants de l'chantillon irradi et de rechercher ainsi le composant responsable de l'effet obtenu. On dispose ainsi d'un moyen de recherche biochimique et physiologique particulirement efficace.

V - Interaction des ultrasons avec la matire biologique

1. Dfinition

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Sur l'chelle des frquences, on distingue les infrasons (de frquence infrieure 20Hz) des sons audibles (de frquence comprise entre 20Hz et 20kHz), les ultrasons tant caractriss par des frquences suprieures 20kHz. Les ultrasons ont de nombreuses applications en physique-chimie, en technologie et en mdecine. Les ondes ultrasonores sont utilises depuis longtemps pour la dtection et la communication sous-marines dans les sonars, trs employs pour la navigation.

2. Principes physiques
En physique, les ultrasons servent dterminer certaines proprits de la matire telles que la compressibilit, les chaleurs spcifiques et les constantes lastiques. Les ultrasons permettent de raliser des mulsions, telles que le lait homognis. On les utilise galement pour dtecter les dfauts de certains matriaux. Les ultrasons dont les frquences sont de lordre du GHz peuvent tre utiliss pour obtenir un microscope acoustique , capable de visualiser des dtails infrieurs 1m.

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3. Principes biologiques
Les effets des ultrasons ne sont pas encore compltement lucids mais il est clair, cependant, quils ont des effets sur les tissus organiques. On remarque que lnergie mcanique est convertie en nergie thermique. a) Effet mcanique Les vibrations provoquent dans les tissus des compressions alternes des expansions selon une priodicit correspondant leur frquence, ce qui cause des variations de pression. Cet effet mcanique provoque de vritables micro-massages qui peuvent aboutir une dilacration des fibres du tissu conjonctif. Cet effet est appel, effet fibrolytique ou scrolytique, mis profit dans le traitement des adhrences et des cicatrices. b) Effet thermique La mesure de la temprature de la peau et du tissu sous-jacent montre quelle augmente au niveau du territoire soumis aux vibrations ultrasonores. Elle saccompagne videmment dune vasodilatation cest--dire d'une augmentation du calibre des vaisseaux sanguins. Simultanment cette augmentation de la temprature, se produit une modification de la permabilit des membranes. Leffet thermique rsulte des frictions molculaires provoques par les vibrations. La modification de permabilit des membranes sexplique par ces mobilisations molculaires.

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Les ractions thermiques se produisent essentiellement aux sites de rflexion (cest--dire aux niveaux des plans de sparation). Du fait des diffrences de coefficient dabsorption, des rflexions et des interfrences, la production de chaleur dans le champ daction des ultrasons nest pas homogne. On compense cette absence dhomognit par un dplacement continu du projecteur. Il y a production de chaleur en particulier dans le tissu osseux, les cartilages, les tendons, le tissu musculaire et la peau. c) Effet antalgique La conductibilit nerveuse peut subir un ralentissement voire une interruption momentane. Ceci sexpliquerait par une dpolarisation des fibres nerveuses affrentes due leffet thermique. Par contre leffet des ultrasons sur le systme nerveux central est assez nfaste. Il apparat que le systme nerveux central est trs sensible aux ultrasons, on peut observer des lsions allant jusqu destruction complte. d) Effet destructeur Lapplication des ultrasons, non plus sur un tissu humain, mais in vitro, fait apparatre, condition daugmenter considrablement la puissance par cm, un effet destructeur important, avec libration de bulles gazeuses dans les tissus : cest le phnomne de cavitation.

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4. Utilisation des ultrasons en mdecine

a) Imagerie mdicale D'un point de vue gnral, on entend par imagerie mdicale l'ensemble des techniques permettant de visualiser une partie du corps humain ou dun organe et den conserver une image, dans lobjectif de raliser un diagnostic, de guider un geste thrapeutique tel quune ponction, ou de suivre moyen terme les rsultats dun traitement. Dans le domaine de limagerie mdicale, deux facteurs ont considrablement contribu dvelopper les procds : la mise en uvre dun grand nombre de traitements divers et ensuite lvolution des techniques de linstrumentation, due aux progrs de la micro-lectronique, ce qui a entran : -lamlioration de limage, -lamlioration du rapport signal/bruit, -des facilits d'extraction de linformation, -une meilleure reconnaissance des formes.

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Lchographie utilise la rflexion des ultrasons par les organes. Lorsque les ondes ultrasonores atteignent un tissu, elles sont rflchies en fonction de la densit et de llasticit du tissu. Le plus souvent, il sagit dchotomographie, fournissant des images en coupe. Avec un scalpel ultrasonique, un chirurgien peut pratiquer une incision plus fine quavec un scalpel conventionnel. De telles techniques sont utilises pour la chirurgie du cerveau et de loreille. b) Thrapie par ultrasons Du point de vue thrapeutique, on peut retenir deux applications principales des ultrasons : -La premire, peu originale, constitue une thermothrapie qui se distingue de celle produite par les infrarouges et mme par les ondes lectromagntiques, par une profondeur daction plus grande. La thermothrapie par ultrasons, galement thermothrapie par conversion, prsente la forme la plus profonde dapplication de chaleur. -La seconde proprit, tout fait spcifique des ultrasons, est reprsente par son action fibrolytique, qui rsulte de ce micro-massage profond exerc dans les milieux biologiques. Laffinit particulire des ultrasons pour les processus inflammatoires ou dgnratifs pri-articulaires, tendineux ou aponvrotiques, relve probablement de cette proprit. La pntration dans les tissus dpend de deux lments : - La frquence des ultrasons Aux frquences leves, la pntration est moins profonde. une frquence de 1GHz, la demi-distance de pntration dans les tissus (distance parcourue par le rayonnement pour perdre la moiti de son intensit) est denviron 5cm contre 1,5cm pour une frquence de 3GHz. - La permabilit ou limpdance acoustique des tissus La permabilit aux ultrasons diffre dun milieu un autre. Les ultrasons traversent mieux les tissus cutans que les muscles, qui les absorbent davantage. Cette permabilit musculaire est lie leur structure et leur contenu protique. Les muscles bnficient donc dun rchauffement privilgi.

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Conclusion
Lorsqu'un rayonnement pntre dans la matire, que celle-ci soit inerte ou vivante, il peut agir avec les atomes rencontrs, et perdre chacune de ces interactions une partie de son nergie : c'est l'affaire d'une

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infime fraction de seconde (de quelques femto-secondes). Cette nergie cde sur place est transfre au milieu travers, ce qui peut se traduire par des ionisations (arrachement d'lectrons) ou encore des excitations transitoires des atomes concerns, les premires induisant des modifications structurales de la matire. Dans un organisme vivant, l'ADN est un constituant important des cellules. Environ cinquante milliards de kilomtres d'ADN se trouvent en effet accumuls dans le noyau des quelques cinquante mille milliards de cellules d'un organisme humain. Cette molcule d'ADN, clbre par sa structure deux brins complmentaires organise en double hlice, constitue le support de l'information gntique, d'o l'importance de son intgrit. Elle est comparable un livre dont les phrases, les gnes, seraient composes de mots comprenant trois lettres choisies dans un alphabet chimique de quatre lettres (les bases).

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D'autres molcules, tout aussi indispensables la vie, sont galement susceptibles d'tre affectes par les rayonnements : ce sont les molcules d'eau. Solvant de toutes les molcules de la cellule, l'eau occupe une place particulire puisqu'elle reprsente prs de 80% du poids du corps humain. Les rayonnements ionisants sont ainsi capables d'agir sur l'ADN de faon directe, par ionisation des atomes de cette molcule, et d'induire des modifications locales de la double hlice. Les mmes dgts peuvent tre causs de faon indirecte, par ionisation d'une molcule d'eau. La dcomposition de l'eau par les rayonnements ionisants gnre en effet des espces chimiques qui sont instables car elles possdent un lectron non appari (radicaux libres). Ce sont des puissants ractifs qui, s'ils sont crs au voisinage de l'ADN, vont l'oxyder. L'action des rayonnements non ionisants (les radiations ultraviolettes, visibles, infrarouges et les ondes radiolectriques ou hertziennes) conduit galement la formation d'espces chimiques actives intervenant en outre dans le vieillissement cellulaire. Aussi, que les rayonnements soient ionisants ou non, qu'ils agissent directement ou indirectement sur l'ADN, il en rsultera des modifications du mme type. Ces lsions, que ce soient des dgradations ou des disparitions de bases, des cassures de l'un ou des deux brins de la chane d'ADN ou encore des pontages entre cette molcule et certaines protines, perturberont la conservation du patrimoine gntique. Tous ces phnomnes molculaires interviennent sur une dure trs brve, entre un millionime et un millime de seconde au total. Pour les tudier sur un plan pratique, au-del du concept global de dose absorbe, qui quantifie l'nergie dpose, la technique de la microdosimtrie permet d'tudier la gomtrie microscopique du dpt d'nergie. Cette approche facilite l'valuation des dgts infligs l'ADN et

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contribue, en complment des recherches sur les mcanismes fondamentaux, mieux expliquer l'action des rayonnements sur la matire biologique.

Bibliographie
[1] [2] [3] [4] [5] Tubiana M., Dutreix J., Dutreix A., and Jockey P., Bases physiques de la radiothrapie et de la radiobiologie (1963), Paris : Masson et Cie. Kraft G., and Langbein K., In 6th Workshop on heavy charged particles in biology and medicine. GSI Report 97-09 (1998). Champion C., Structure des dpts d'nergie des ions rapides dans l'eau : Application l'tude par simulation Monte Carlo de l'inactivation cellulaire, Thse de 3me cycle (1999), Universit Paris VII. De Chteau-Thierry A., Cours Interrgional de Radioprotection, Saclay, CEA (1994). Grmy F., and Perrin J., Elments de Biophysique, Tomes I et II, Flammarion Mdecine-Sciences (1997). Warters R.L., Hofer K.G., Harris C.R., and Smith J.M., Radionucleide toxicity in cultured mammalian cells: elucidation of the primary site of radiation damage. Curr. Top. Radiat. Res. Quart., 12 (1977). Alberts B., Bray D., Lewis J., Raff M., Roberts K., and Watson J.D., La Cellule. Flammarion dition (1989), Paris : Mdecine-Sciences. Barendsen G.W., Walter H.M., Fowler J.F., and Bewley D.K., Effects of different ionizing radiations on human cells in tissue culture, Radiat. Res., 18, (1963). Sachs R.K., Chen A.M., and Brenner D.J., Review: proximity effects in the production of chromosome aberrations by ionizing radiation. Int. J. Radiat. Biol., 71 (1997). Kraft G., Radiobiology of very heavy ions: inactivation, induction of chromosome aberrations and strand breaks, Nucl. Sci. Appl., 3 (1987). Rydberg B., Lbrich M., and Cooper P.K., Repair of clustered DNA damage caused by high LET radiation in human fibroblasts, In 6th Workshop on heavy charged particles in biology and medicine. Physica Medica, 1998. XIV, Supplement 1. Belli M., Ceras F., Cherubini R., Ianzini F., Moschini G., Sapora O., Simone G., Tabocchini M.A., and Tiveron P., DNA double-strand breaks induced by low energy protons in V79 cells. Int. J. Radiat. Biol., 65 (1994). Folkard M., Prise K.M., Vojnovic B., Newman H.C., Roper M.J., and Michael B.D., Inactivation of V79 cells by low-energy protons, deuterons and helium-3 ions. Int. J. Radiat. Biol., 69 (1996). Elkind M.M., Repair processes in radiation biology. In Failla Memorial Lecture, Radiat. Res., 100 (1984). Zdzienicka M.Z., Wessel N.V., and Schaans G.P.V.D., A fourth complementation group among ionization radiation-sensitive chinese hamster mutants defect in DNA double strand break repair. Radiat. Res., 131 (1992). Ward J.F., Mechanisms of DNA repair and their potential modification for radiotherapy. Int. J. of Rad. Onc., Biology and Physics, 12 (1986).

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[6] [7] [8] [9] [10] [11]

[12] [13] [14] [15] [16]

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Les signaux du vivant et leur interprtation

Jean Louis COATRIEUX Laboratoire Traitement du Signal et de lImage Inserm - Universit de Rennes 1, Rennes
ml : jean-louis.coatrieux@univ-rennes1.fr Les signaux du vivant sont sous-tendus par des mcanismes complexes, rarement rductibles des sources lmentaires. Leur nature, les proprits des tissus dans lesquels ces signaux se propagent, la localisation des capteurs et leur arrangement, leur caractre htrogne ou pas vont dterminer linformation quil sera possible dextraire sur la fonctionnalit dune sous-structure, dun organe ou dun systme des fins diagnostiques. Dans ce contexte, les mthodes de traitement du signal vont permettre de dtecter, segmenter, typer et classifier les vnements et les signatures portes par ces observations, estimer les relations quelles entretiennent et, dans certaines situations, prdire, dcider et suivre des processus pathologiques. Les technologies, dans ce mme cadre, ne sont plus seulement une ressource mais un lment devant voluer simultanment avec le traitement de linformation ou le faisant voluer par leur dynamique propre (les microtechnologies en sont un bon exemple aujourdhui).

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Aperu sur les signaux du vivant

Ces observations sont extrmement diverses et nous nen prendrons que quelques exemples. Leur gnration peut tre spontane, volontaire, contrle ou non, ou voque, reprsentant dans ce dernier cas une rponse un ou plusieurs stimuli. Leur nature principalement lectrique a conduit, suivant lorgane considr, dfinir des techniques comme llectromyographie (EMG) pour ltude de la fonctionnalit des muscles ou des jonctions neuromusculaires. Les signaux que dlivrent ces capteurs de surface (simplement poss sur le muscle observ) ou de profondeur (aiguilles disposant de deux capteurs ou plus son extrmit) sont au premier abord parmi les plus simples traiter. Il sont constitus de trains de potentiels dunits motrices (PUM), potentiels prsentant un caractre transitoire se rptant de manire quasi-rgulire dans le temps lors dune contraction musculaire soutenue, et se propageant le long des fibres musculaires [1]. Malgr cette situation privilgie, certaines des questions poses de longue date restent toujours ouvertes. Plusieurs difficults sont en effet prsentes. Pour un train donn, les dates darrive des PUM, leur forme et leur nombre ne sont pas connus. Lhypothse quils se rptent identiques eux-mmes nest pas toujours vrifie, en particulier en prsence de pathologies neuromusculaires comme la myopathie o une dsorganisation des dclenchements des potentiels lmentaires de fibres musculaires, constituant les PUM, peuvent prsenter un caractre alatoire. Ds que la force de contraction volontaire augmente, ces trains vont tre multiplis en nombre et leur frquence de rptition va augmenter : leur sparation sera rendue dlicate du fait quils

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sont en gnral asynchrones, produisant, sur certains segments temporels, des mlanges de potentiels quil faudra dcomposer afin dextraire les frquences de rptition. Formes et frquences sont les deux informations essentielles extraire. La premire constatation tire de cet exemple est donc que nous aurons faire avec des mlanges de signaux. Ils pourront vrifier lhypothse de stationnarit lors dune contraction maintenue constante ou statique, celle-ci ntant plus valide lors dune preuve dynamique. La seconde correspond la notion dapparence : les signaux observs sont troitement dpendants de la localisation du ou des capteurs relativement aux sources. De plus, lorsque des couches tissulaires vont sinterposer (lectrodes de surface), leurs proprits physiques (conductivit, anisotropie) auront une influence importante sur leur propagation et limage rsultante sur les capteurs. Cette question est centrale en Electroencphalographie (EEG) par exemple alors que son effet est mineur en Magntoencphalographie (MEG). La multitude dactivits de populations neuronales, distribues dans lespace crbral, va complexifier encore ces mlanges. Certes, lutilisation de rseaux denses de capteurs, dlectrodes de profondeur (Stroencphalographie ou SEEG) [2], permettra de mieux apprhender les processus dynamiques mis en jeu mais le caractre spontan de ces activits laisse peu de place un vritable contrle et nous loigne donc de lhypothse de stationnarit. Par ailleurs, certaines observations se diffrencient par leurs chelles temporelles. Si pour les prcdents, il est important danalyser les phnomnes avec des rsolutions de lordre de 0,1 ms, elles peuvent tre trs diffrentes pour dautres comme lhystrographie (EHG), cest--dire lobservation des ondes de contraction lors dune grossesse par capteurs de surface. Les signatures de contractions, o seules des composantes trs lentes sont significatives [3], sont ici susceptibles de prdire un accouchement prmatur. Leur distribution trs espace distance du terme introduit des difficults dinvestigation nouvelles. Il en est de mme en pilepsie o les crises ont un caractre largement non prdictible. Mais les signaux lectriques sont loin dtre les seuls moyens dobservation notre disposition. Beaucoup dorganes par exemple produisent des bruits comme les muscles ou le cur, ces bruits pouvant tre exploits des fins diagnostiques. Il en est ainsi de lacoustique cardiaque (le capteur tant un microphone ou un rseau de microphones) qui permet de dceler des anomalies de fermeture de valves, de contraction du myocarde, etc. [4]. Ces sons, supports temporels brefs et dont linterprtation physiologique des composantes fait encore lobjet de dbats, sont malheureusement partiellement superposs temporellement. Leur sparation, leur caractrisation et leur comprhension, malgr les progrs raliss rcemment, restent donc du domaine de la recherche. Il sagit l de techniques qui prsentent lavantage dtre non invasives, cette caractristique tant amene jouer un rle de plus en plus dcisif lavenir. Il en est de mme bien entendu pour lactivit lectrique cardiaque (ECG) dont la banalisation en terme dexamen ne doit pas masquer les

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problmes difficiles encore rsoudre comme la dtection de londe P correspondant lactivit auriculaire. Les problmes de dissociation et de disparition dondes, dapparition de motifs arythmiques anormaux rpartis sur diffrents cycles cardiaques restent des sujets de recherche part entire en terme de traitement du signal lorsque des indices prdictifs danomalies cardiaques potentiellement graves sont recherchs [5]. Ce domaine est un trs bon exemple de plus o une logique diagnostique est intrinsquement lie au volet thrapeutique par le biais de prothses cardiaques implantables, dont la commande doit tre adapte linformation porte par lobservation : nous assistons lmergence du concept de prothse intelligente et communicante o perception (capture de linformation), dcision (ou raisonnement) et action (stimulation) sont intgrs. Ces quelques exemples montrent que nos moyens de mesures sont extrmement diversifis et trs souvent complmentaires. Leur caractre htrogne (nous parlerons de multivariable) va dterminer linformation quil sera possible dextraire sur la fonctionnalit dun mcanisme particulier et, lorsquils seront associs, permettre lanalyse globale dune sousstructure, dun organe ou dun systme.

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Elments de traitement du signal

Contrairement ce quil peut laisser supposer au premier abord, le traitement du signal est loin dtre un domaine compact, unifi qui serait matris en totalit par quelques uns. Sa diversit oblige bien souvent le segmenter en thories, en familles de penses, en mthodes parfois presque trangres les unes aux autres. Il est parcouru et nourri, en amont, de concepts provenant des mathmatiques comme de la physique, en aval, de domaines applicatifs extrmement varis (du radar aux tlcommunications, des systmes embarqus la surveillance de turbines,) et, ce double titre, lui-mme pluridisciplinaire [6]. Il nest donc pas tonnant de trouver des mots cls aussi divers que restauration (le sens premier se retrouve identique en peinture), rduction de bruit (il suffit de se rfrer la suppression du bruit de lenvironnement en communication mains libres en voiture), dtection (les potentiels dunits motrices pour lEMG) et estimation (leurs instants darrive ou leurs formes). La localisation de sources est rcemment devenue plus familire avec lmergence des modles de diples en EEG et MEG alors quelle est classique en traitement dantennes appliqu aux sous-marins. Il en va de mme pour le codage et la compression en communication numrique et pour la classification et la reconnaissance des formes dont lintrt est manifeste en diagnostic et en suivi thrapeutique. Bien entendu la physique du domaine, les contraintes dobservation, lobjectif poursuivi, parmi dautres facteurs, vont amener adapter et spcifier ces mthodes gnrales.

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La diversit qui vient dtre mentionne ne doit pas masquer pour autant les constantes, les invariants ou les unifications possibles. Prenons comme exemple la figure 1 entrant dans le cadre gnral de la thorie de la dcision, largement inspire par le bon sens ou le sens commun. Elle

Espace Signal

Espace Transform

(scalaire, vectoriel)
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(non-paramtrique)

Espace de Description

(rduction)
Espace de Dcision

(binaire, floue,)

Figure 1 : Perception-Dcision dans le traitement de linformation. Ce schma explicite les tapes intermdiaires ventuelles consistant en un changement despace de reprsentation (transformation orthogonale ou non, permettant dans le premier cas de reconstituer lidentique les observations originales, et dans le second, de sparer linformation utile la dcision). Il correspond une procdure classique de reconnaissance des formes.

identifie lespace signal , les observations, qui peuvent tre de dimension 1 (cas scalaire ou monocapteur) ou N (cas vectoriel comme lEEG standard). En vision par ordinateur ou en robotique, elle reprsenterait ce quil est convenu dappeler la phase de perception. Les configurations rencontres (par exemple, signaux indpendants, partiellement corrls ou totalement redondants) vont donner naissance une multitude de traitements distincts (respectivement, fusion de donnes exploitant la complmentarit des informations, cohrence linaire ou non, recouvrement de dfaillance de capteurs). Lespace transform peut correspondre la recherche dune dcomposition orthogonale des signaux, obtenue aussi bien par une analyse en composantes principales que par certaines familles dondelettes. Lespoir est ici de mieux sparer les composantes utiles des perturbations (le bruit, par exemple) ou de rduire

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la dimension de lespace de travail en conservant lessentiel de linformation porte par les signaux. Ce changement despace de reprsentation doit respecter le principe simple que deux formes similaires (resp. diffrentes) resteront proches (resp. loignes). Dans certains cas cette transformation est rversible, ce qui permet de reconstruire exactement les donnes dorigine mais la plupart du temps une troncature est effectue et une perte dinformation sensuit, perte parfois volontairement recherche comme en compression. Lespace de description ralise lquivalent dun codage des donnes directement de lespace signal ou de lespace transform . Les descriptions par des paramtres temporels comme lamplitude, la dure ou les passages par zro ont t largement mis profit pour la classification de signaux biomdicaux de nature transitoire ou impulsionnelle (pointes en EEG, potentiels daction en EMG) mais aussi les coefficients de modles paramtriques (autorgressifs ou AR, par exemple) et les puissances spectrales pour les signaux stationnaires (dont les proprits au second ordre sont invariantes dans le temps). Cet espace de description est sens prserver toute latitude en terme de dcision ou de discrimination [7, 8] et les paramtres retenus peuvent eux-mmes tre soumis une dcomposition orthogonale si celle-ci na pas t opre auparavant. Lespace de dcision produit des rponses prsent-absent (cest le cas en dtection dvnements mais aussi dans les arbres de dcision diagnostique), dappartenance une classe particulire (mthodes de classification, etc. [8]) soit sous une forme catgorique ou binaire, soit en y attachant une probabilit ou un degr de certitude. Ce schma a pour mrite de pouvoir tre parcouru dans le cadre de tches aussi distinctes que la segmentation de signaux, la reconnaissance des formes ou la compression de donnes (la Transforme en Cosinus Discret pour la vido en est un exemple simple). Leur mise en uvre cependant nest pas toujours triviale et amne des questions essentielles quant aux limites de ces mthodes. Lensemble dapprentissage est-il exhaustif ? Comment choisir une transformation ? Quelle garantie objective peut-on avoir du bon choix des descripteurs ? Quelles sont les consquences dune erreur de dcision ? Des critres de qualit et de performances peuvent et doivent tre dfinis mais ils ne permettent pas toujours dy rpondre de manire satisfaisante. Malgr tout, il est clair que nous disposons de thories prouves et doutils performants ds lors que les hypothses de stationnarit sont valides (telles quelles peuvent tre produites lors dune contraction musculaire volontaire force constante en EMG). Cest cette restriction qui a motiv, pour partie tout au moins, les avances rcentes (il serait plus juste de dire que beaucoup ont des bases thoriques connues depuis longtemps mais dont lcho est rcent). Les signaux non-stationnaires (il conviendrait dy ajouter les mlanges ainsi que les comportements nonlinaires) correspondent en effet la majorit des situations relles rencontres et ceci bien au del des signaux neurophysiologiques qui sont

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toutefois trs reprsentatifs de la complexit laquelle faire face (avec de plus, labsence de vrit-terrain quil faut comprendre comme limpossibilit de matriser les entres et dobserver toutes les sorties des systmes mis en jeu mais aussi de connatre, par une voie distincte, les mcanismes concerns et leurs expressions). Or ces situations nonstationnaires sont porteuses dinformation quil sagisse dvnements brefs (qui possdent une localit temporelle), de drives (se traduisant par des changements progressifs) ou de ruptures (changements brutaux de comportements) [9]. Les transformes temps-chelle (connues sous le nom dondelettes) font partie de ces nouvelles approches. Elles partent de lide que lvolution de certains signaux peut tre dcrite relativement une chelle dobservation spcifique. A contrario, dautres signaux nont pas dchelle de temps caractristique mais tout ou partie de leurs proprits statistiques se reproduisent identiques elles-mmes toute chelle dobservation : cest l lorigine du concept de fractalit et de longue dpendance. Les mthodes temps-frquence [10] reposent sur la prise en compte explicite dune volution du contenu frquentiel des signaux et permettent laccs des grandeurs instantanes comme la frquence par exemple. Les proprits formelles de ces mthodes mergentes ont fait lobjet de nombreux travaux [11-15]. Elles ont aussi conduit des dveloppements multiples tant en termes de familles dondelettes, comme les paquets dondelettes, de noyaux temps-frquence minimisant les termes dinterfrence et offrant une meilleure rsolution frquentielle, que dapplications, de la dtection la compression pour les premires, ou dune adaptation au contenu du signal pour les secondes. Comme toutes les nouveauts, leur exploitation intensive, parfois dans des objectifs discutables et sur des observations ne se prtant pas aux hypothses mentionnes plus haut, tend brouiller la valeur ajoute quelles peuvent apporter comparativement des approches traditionnelles. L encore, le choix des transformes, sur la base dune analyse des avantages et des inconvnients intrinsques qui les caractrisent, reste dlicat car la potentialit de biais dans les lectures auxquelles elles conduisent est relle. Ces remarques amnent sinterroger sur la pertinence dune recherche duniversalit (ou de gnricit) des mthodes notre disposition quand les contenus des signaux prsentent une trs grande variabilit. Connatre leurs principes, comprendre les hypothses sous-jacentes, croiser leurs rsultats et leurs performances dans des configurations parfaitement contrles, toutes choses qui peuvent tre apprhendes sans aucun dveloppement mathmatique, est indispensable.

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Modles pour le vivant

Une algorithmie, aussi novatrice et sduisante soit-elle, ne peut de facto apporter de rponses pertinentes qu des questions physiologiques elles aussi pertinentes. Cette tautologie nest l que pour souligner la ncessit dquilibrer (il ne sagit pas de les remplacer) des vues purement

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externes par des approches fondes sur une connaissance approfondie des mcanismes ou des processus observs, autrement dit la physiopathologie (ce qui dans dautres domaines signifie la physique des milieux). Ainsi une mthode de traitement du signal ne se justifiera pas par une mise lpreuve rapide sur des donnes pr-tablies, pas plus quune hypothse physiologique ou clinique originale mais mal pose ne donnera lieu des dveloppements inconsidrs, quils soient dordre mthodologique ou technologique. Linversion de cette tendance et de cette pratique repose sur un postulat fort, la capacit de poser les bonnes questions et de les traduire en termes dexprimentation, de logique conceptuelle et darticulation des mthodes les mieux mme dapporter une solution, quitte remonter vers lamont en questionnant les thories actuelles. Cet exercice est loin dtre vident et suppose, dune part, la matrise conjointe des quatre composantes reprsentes figure 2, dautre part, la volont de dborder son propre champ de comptence et, pour le moins, de se familiariser avec les autres.

Traitement du Signal

Recherche Clinique

Modlisation Neurophysiologique

Technologies

Figure 2 : Les quatre ples intervenant dans le processus de construction des concepts, des hypothses de travail, des exprimentations et des mthodes dinterprtation, dont les influences sont rciproques (les relations croises ntant pas reprsentes pour simplifier).

La modlisation mathmatique devient alors une composante naturelle de cette dmarche. Elle a des vocations multiples allant de la comprhension de processus et de systmes complexes associant

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plusieurs chelles de description (do la notion de physiologie intgrative ) la simulation raliste, de loptimisation des conditions dobservation (ce qui peut se traduire comme des acquisitions guides par le modle) lidentification des modles (dont la localisation de sources, voque auparavant, nest quun sous-ensemble). Les technologies ne sont plus seulement, dans un tel schma, une ressource mais un lment devant voluer simultanment avec la recherche ou les faisant voluer par leur dynamique propre (les microtechnologies en sont un bon exemple ds aujourdhui). La formulation et la formalisation de ces modles dpendent bien entendu de nombreux critres : les objectifs poursuivis, les connaissances disponibles, le niveau de description, le cadre thorique dans lequel les exprimer, la validation exprimentale qui peut leur tre attache en sont quelques uns.

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Le premier exemple, que le lecteur intress pourra trouver dans [16], concerne un modle macroscopique cardiaque. Il a pour objectif de gnrer un catalogue darythmies (il sagit donc du problme direct) en sappuyant sur une description simplifie du cur tant sur le plan anatomique (nombre limit de compartiments reprsentant les oreillettes, les ventricules, la jonction auriculoventriculaire et le tissu nodal) quau niveau fonctionnel (priode rfractaire relative, priode rfractaire absolue, etc. chaque cellule tant reprsente par des automates cellulaires). Mais il a aussi pour ambition de reconnatre, partir dobservations ECG standard pralablement traites (dtection et tiquetage des ondes), le type darythmie prsent par minimisation de lerreur entre observations et modle, ce dernier tant rendu volutif par algorithme gntique. Il est clair que nous disposons pour le coeur dun ensemble de connaissances lmentaires suffisantes pour, un niveau appropri, dfinir des approximations acceptables. Le fait aussi de se placer un niveau de spcification proche de la clinique (gnration du diagramme de Lewis par exemple) a orient fortement le choix de ce modle. Les modles de populations neuronales couples ne disposent pas de telles connaissances et leur prtention est moindre. Il sagit de traduire, en prenant pour exemple le modle propos dans [17], quelques uns des mcanismes connus (en particulier les boucles dexcitation et dinhibition) au moyen dquations diffrentielles ordinaires afin de savoir si certaines des signatures observables en pilepsie par SEEG peuvent tre reproduites par modle. Au del de ces patterns, la capacit de produire des transitions ou ruptures de comportements, partir de certaines variables et dintervalles de valeurs physiologiquement bien fonds, que ce soit des vnements paroxystiques en priodes interictales (cest--dire entre les crises) ou des dbuts et fins de crises, est aussi significative pour apprcier la pertinence dun tel modle. Seule une comparaison visuelle avec les donnes relles est actuellement possible car la rplication prcise est hors de porte. Il est

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cependant envisageable dtudier la similarit de ces squences de signatures simules avec les signatures relles en leur appliquant des transformations de type temps-frquence : la mise en correspondance nest plus alors ralise dans lespace signal mais dans lespace transform et peut sappuyer sur des mthodes structurelles par exemple [15].

Conclusion
Cet article a eu pour objectif didentifier quelques unes des facettes gnriques des signaux biomdicaux de leur capture, leur analyse leur comprhension. Il a tent de montrer que de nombreux problmes restent ouverts et que des solutions ne pourront leur tre apportes quen tirant le meilleur bnfice de lalgorithmie traitement du signal, des connaissances physiopathologiques notre disposition. Formuler une question pertinente nest pas trivial, saisir dans la littrature les dcouvertes qui permettent de faire progresser les modles, en faire une thorie mathmatiquement consistante o lheuristique de lexprimentation peut simmerger et enfin apporter des solutions diagnostiques et thrapeutiques innovantes, en sont les lments cls.

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Remerciements
Lauteur tient remercier tous les chercheurs du Laboratoire Traitement du Signal et de lImage (LTSI-INSERM) ayant contribu cette rflexion densemble. Il tient remercier les organisateurs de lcole e2phy 2002 pour leur invitation et exprime lespoir de voir leurs tudiants sintresser la physique du vivant.

Bibliographie
[1]

[2]

[3] [4] [5] [6]

Coatrieux J.L., On line electromyographic signal processing system, IEEE Trans. Biomed. Eng, 31(2), 1984, pp. 199-207. Bancaud J., Talairach J., Bonis A., Schaub C., Szikla G., Morel P., BordasFerrer M., La stroelectroencphalographie dans lpilepsie: informations neurophysio-pathologiques apportes par linvestigation fonctionnelle strotaxique, Masson, 1965. Leman H., Marque C., Gondry J., Use of the electrohysterogram signal for characterization of contractions during pregnancy , IEEE Trans. Biomed. Eng, 46(10), 1999 , pp. 1222 1229. Durand L.G., Pibarot P., Digital signal processing of the Phonocardiogram : review of the most recent advancements, Critical Reviews in Biomedical Engineering, 23(3-4), 1995, pp. 163-219. Hernandez A.I., Carrault G., Mora F., Thoraval L., Passariello G., Schleich J.M, Multisensor fusion for atrial and ventricular activity detection in coronary care monitoring, IEEE Trans. Biomed. ng, 46(10), 1999, pp. 1186-1190. Trait "Information, Commande et Communication" (IC2), Editions Herms (il s'agit d'une collection d'ouvrages couvrant le traitement du signal, l'automatique, etc. dont plusieurs volumes sont dj parus).

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[7] [8] [9] [10 [11] [12] [13] [14]

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[15] [16] [17]

Escoffier B., Analyses factorielles simples et multiples: objectifs, mthodes et interprtations, Dunod. Celeux G., Diday E., Govaert G., Lechevallier Y., Ralambondrainy H., Classification automatique des donnes, Dunod, 1989. Basseville M., Nikiforov I., Detection of abrupt changes: theory and application, Prentice Hall, 1993. Flandrin P., Temps-Frquence, Herms, Paris, 1993 Senhadji L., Duchne J., (Eds), Contribution des approches TempsFrquence l'analyse des signaux et des images en gnie biomdical, Innov. Technol. Biol. Med, 19(3), 1998. Zhang X., Durand L.G., Senhadji L., Lee H.C., Coatrieux J.L., Analysissynthesis of the phonocardiogram based on the matching pursuit, IEEE Trans. Biomed. Eng., 45(8), 1998, pp. 962-971. Zhang X., Durand L.G., Senhadji L., Lee C., Coatrieux J.L., Time frequency scaling transformation of the phonocardiogram based on the matching pursuit, IEEE Trans. Biomed. Eng., 45(8), 1998, pp. 972-979. Senhadji L., Bellanger J.J., Carrault G., EEG spike detectors based on different decompositions: A comparative study, In Time Frequency and Wavelets in Biomedical Engineering, M. Akay Ed., IEEE Press, 1998, pp. 407-421. Wendling F., Shamsollahi M.B., Badier J.M., Bellanger J.J., Time-frequency matching of warped depth-EEG seizure observations, IEEE Trans. Biomed. Eng, 46(5), 1999, pp. 601-605. Hernandez A., Carrault G., Mora F., Bardou A., Overview of Carmen: a new dynamic quantitative cardiac model for ECG monitoring and its adaptation to observed signals, Acta Biotheoretica, 48, 2000, pp. 303-322. Wendling F., Bellanger J.J., Bartholomei F., Chauvel P., Relevance of nonlinear lumped-parameter model in the analysis of depth-EEG epileptic signals, Biol. Cybernetics, 83, 2000, pp. 367-378.

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Le scanner : Principe - Technologie - Applications

Albert LISBONA Service de Physique Mdicale CRLCC Ren Gauducheau, Saint-Herblain
ml : a-lisbona@nantes.fnclcc.fr

Bernard AUBERT Service de Physique, Institut Gustave-Roussy, Villejuif

ml : aubert@igr.fr Les principes mathmatiques de la thorie de reconstruction d'un objet partir de la connaissance de ses projections ont t noncs en 1917 par J. Radon. Les applications pratiques sont plus rcentes puisqu'elles furent dveloppes par R.N. Bracewell en 1956 dans le domaine de la radio-astronomie afin d'identifier des rgions solaires mettant des radiations micro-ondes. Les premires applications mdicales furent ralises en 1960 par W.H. Oldendorf en utilisant une source de rayonnements mettant des rayons gamma et en 1963 par D.E. Kuhl et R.Q. Edwards ainsi que par A.M. Cormak. La tomographie par rayons X assiste par ordinateur (encore appel tomodensitomtrie ou scanographie) fut dveloppe par G.M. Hounsfield et la premire machine (scanner) utilisable sur site clinique fut installe en 1971 Londres. Elle ne permettait d'examiner que la tte, et l'exploration du "corps entier" fut possible partir de 1974. La mise au point de la scanographie a t salue comme la dcouverte la plus importante en radiologie depuis celle des rayons X par W.C. Roentgen en 1895. Elle a valu A.M. Cormak et G.M. Hounsfield le prix Nobel de Mdecine en 1979 [1]. La tomographie axiale assiste par ordinateur (C.T.), ou scanographie, est base sur la dtection d'un faisceau de rayons X tournant autour du patient (figures 1 et 2). Cependant, l'oppos de la radiologie classique o le faisceau transmis est dtect et visualis l'aide d'un film ou d'un amplificateur de luminance, il est dtect lectroniquement puis numris. L'image est ensuite reconstruite l'aide d'un calculateur et visualise. L'acquisition de plusieurs coupes adjacentes conduit l'information tridimensionnelle. Depuis son apparition il y a maintenant plus de trente ans, la scanographie a connu un succs croissant, le nombre de scanners ayant par exemple plus que doubl entre 1988 (229 machines) et 1997 (563 machines) [2]. Aussi, compte tenu des niveaux de doses relativement levs dlivrs par ces examens, cette technique d'imagerie reprsente ce jour la principale source d'exposition de la population dans le domaine du radiodiagnostic. Des tudes britanniques [3] menes par le NRPB1 ont montr que, sur la base de 20 h.Sv par an et par machine, la dose efficace collective due la scanographie pouvait tre estime en 1993 7000 h.Sv, contribuant ainsi plus du tiers de la dose totale due l'ensemble des examens par rayons X.

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National Radiological Protection Board

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I - Rappels sur le principe

1. Acquisition des donnes
L'acquisition d'un grand nombre de projections (monodimensionnelles) d'une coupe axiale transverse (bidimensionnelle) permet la reconstruction mathmatique de l'objet examin. L'acquisition de ces projections s'effectue en dplaant, par rotation, un tube rayons X associ un ensemble de dtection, le patient tant plac entre le tube et les dtecteurs (figures 1 et 2).

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Figure 1 : Principe dacquisition des donnes sur un scanner.

Figure 2 : Schma de la coupe reconstruite

Un faisceau de rayons X, lors de la traverse de l'organisme, est attnu par absorption et par diffusion (effets photo-lectrique et Compton). Cette attnuation dpend de la densit du milieu, de sa composition atomique et de l'nergie du faisceau de rayons X. L'attnuation d'un faisceau monochromatique par un objet de densit uniforme rpond la loi bien connue : I = I0 exp (-L) avec I0 I L : : : : flux de rayons X l'entre flux de rayons X la sortie coefficient d'attnuation linique du milieu paisseur du milieu travers.

Pour un objet plus complexe compos de petits lments de volume identiques mais de densits diffrentes on peut crire :

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i = (1/L).ln (I0/I) avec i L : : coefficient d'attnuation linique de l'lment i largeur de chaque lment volumique.

Ainsi la somme des coefficients d'attnuation linique le long de cet objet peut-tre calcule. Ce processus constitue la mesure lmentaire en scanographie. Il ncessite un ensemble compos d'un tube rayons X, d'un dtecteur de rfrence pour la mesure de I0 et d'un dtecteur de mesure pour I. Le dplacement linaire de cet ensemble de mesure de part et d'autre de l'objet examin permet d'obtenir une srie de mesures lmentaires. L'ensemble de ces mesures pour une direction donne (q), constitue une projection p (r,q). Ce processus est rpt plusieurs fois tout autour de l'objet (sur 180 ou 360) de faon disposer des projections ncessaires la dtermination du coefficient d'attnuation linique de chaque lment volumique de l'objet. a) Processus de reconstruction Le processus de reconstruction bas sur des mesures chantillonnes (m mesures lmentaires par projection et p projections par acquisition soit m x p mesures par acquisition) va conduire une matrice image dont le contenu de chaque pixel (contraction de picture element) reprsente le coefficient d'attnuation d'un volume lmentaire (voxel) dont la section est gale au pixel (0,5 2 mm de ct) et la profondeur est gale la largeur du faisceau de rayons X traversant le patient (paisseur de coupe de 1 10 mm). La mthode de reconstruction utilise est celle de la rtroprojection filtre. L'utilisation d'une simple rtroprojection conduisant une image floue, il est ncessaire de filtrer les projections avant de les rtroprojeter (figure 3). Cette filtration est obtenue par convolution de chaque projection mesure avec un filtre rampe (s). La phase de mesure nous donne les projections p (r, q). La rtroprojection simple conduit une fonction approche f'(x,y) telle que :

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f '(x,y)= 1 d(r,)d 0

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La rtroprojection filtre conduit une fonction exacte f(x,y) telle que :

1 f(x, y) = p(r, )d 0

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Figure 3 : Principe de la mthode de reconstruction par rtroprojection filtre.

o p'(r,q) est obtenu par convolution de p (r,q) avec la fonction filtre s

p(r, q) = p(r, q) s
En pratique, une convolution dans le domaine rel est quivalente une multiplication dans le domaine frquentiel. Ce processus conduit en fait une procdure de reconstruction plus rapide. Ce passage est obtenu par utilisation de la transforme de Fourier. Le retour au domaine rel s'effectue par transforme de Fourier inverse. Le filtre rampe s a une fonction de reconstruction et de suppression de flou dans l'image. Cependant on profite de cette phase pour modifier le contenu de l'image en fonction de l'application recherche : renforcement des contours, diminution du bruit, figure 4). Cette modification est obtenue en multipliant le filtre rampe par un des filtres privilgiant par exemple les hautes frquences spatiales ou les basses frquences spatiales (en fonction de l'exploration clinique). Notons qu'en dehors du

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filtre d'autres paramtres dpendant de l'oprateur influencent l'information contenue dans l'image : ce sont soit des paramtres d'acquisition (haute tension, dimensions du champ explor, ...) soit des paramtres de reconstruction (taille de la matrice image, zoom, ...). Ainsi le processus de reconstruction est constitu des 4 tapes suivantes : mesure, prtraitement (conversion logarithmique ln(I0/I)), filtrage et rtroprojection. Une fois le processus de rtroprojection termin, l'image est disponible en mmoire, prte tre visualise avec un contenu des pixels normalis selon une chelle de nombres standardise.

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Figure 4 : A) Filtre rampe intervenant dans le processus de rtroprojection filtre. B) Filtres complmentaires dpendant de lexploration clinique. En pratique le filtre utilis est le produit du filtre rampe avec un de ces filtres.

En scanographie le paramtre physique la base du contraste dans l'image est le coefficient linique d'attnuation . Le contenu NS de chaque pixel de l'image est reli aux valeurs de par la relation :

NS =

tissu eau 1000 eau

Cette relation conduit une chelle standardise (chelle d'HOUNSFIELD) utilise sur tous les scanners. Elle repose sur deux valeurs particulires : -1000 pour l'air et 0 pour l'eau. En pratique elle s'tend au del de +1000 pour l'os dense. En fait, une dynamique de 12 bits (4096 niveaux), dcale de 1024 vers le bas, est disponible. Cette chelle aussi tendue est ncessaire car les scanners actuels permettent de sparer des tissus dont les diffrent de 0,3 %.

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Pour observer en dtail une image sur l'cran vido on ne peut pas visualiser toute la dynamique (4096 niveaux) contenue dans l'image l'aide de l'chelle de gris gnralement disponible (16 niveaux). On est donc conduit slectionner une largeur de fentre dans laquelle vont s'taler les niveaux de gris et choisir un niveau moyen correspondant au milieu de la fentre. Ces paramtres sont respectivement adapts au contraste recherch et aux tissus examins.

II - Technologie du scanner
1. Aspects technologiques
Sur les appareils dits de 3me gnration l'ensemble tube-dtecteur est anim d'un mouvement de rotation avec un temps minimum d'acquisition de 1 seconde pour 360 degrs, autorisant les explorations du thorax et de l'abdomen. Le faisceau est suffisamment ouvert, en forme d'ventail, pour englober entirement l'objet dans un champ suprieur 50 cm de diamtre environ. Le nombre de dtecteurs varie de 250 1000 dans un angle de 45 50 degrs. Un certain nombre de dtecteurs situs la partie extrme de l'ventail, reoivent le flux de rayons X non attnu. Ils donnent chaque instant la mesure de l'intensit incidente (I0) et permettent d'en tenir compte dans le calcul d'ventuelles drives. Le principe dit de 4me gnration utilise des dtecteurs fixes disposs en couronne sur 360 degrs. Le tube dcrit un mouvement circulaire soit l'intrieur soit l'extrieur de cette couronne. Dans ce dernier cas, la couronne est anime d'un mouvement de nutation synchronis avec celui du tube. Le nombre de dtecteurs est relativement grand (de 600 1000). Les temps d'acquisition sont dans ce principe de l'ordre de 1 seconde. Un systme (IMATRON), sans mouvements mcaniques, permet d'obtenir 2 coupes en un temps d'acquisition de 50 ms particulirement adapt aux tudes cardiaques. Son originalit rside dans le mode de balayage du faisceau de rayons X. Celui-ci est ralis grce la dflexion d'un faisceau d'lectrons frappant une anode en arc de cercle de rayon 1 mtre sur 180 degrs. La disposition en parallle de 4 anodes et d'un systme de collimation sur les dtecteurs permet d'enregistrer simultanment les informations relatives la reconstruction de 8 coupes parallles. a) Production des rayons X

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- Gnrateur Les gnrateurs fournissent, en particulier, la tension (de lordre de 130 kV) et le courant ncessaires lacclration des lectrons dans le tube rayons X. Ces lectrons interagissent, ensuite, avec la cible (anode en tungstne) par rayonnement de freinage (Bremsstrahlung) pour produire le spectre continu de rayons X utiles pour la ralisation de lexamen. Les gnrateurs sont du type tension constante, rgule quelques dix millimes prs (soit quelques dizaines de volts) pour assurer un flux nergtique quasi constant. L'invariabilit est essentielle puisqu'elle conditionne la valeur du coefficient d'attnuation mesur. Une stabilit meilleure que 1/1000 permet d'apprcier une diffrence en attnuation de l'ordre de 0,3 %. Pour obtenir une nergie effective suprieure 60 keV, les gnrateurs doivent fournir des tensions comprises entre 90 kV et 140 kV sous un courant de 50 300 mA en mode continu ou de 100 700 mA en mode puls. Pour les rgimes de fonctionnement en mode puls, la dure d'impulsion rglable peut varier de 1 7 ms avec une frquence de 100 200 impulsions par seconde conditionnant l'acquisition des projections. Dans le cas d'un fonctionnement en mode continu la mesure est chantillonne au niveau des dtecteurs pendant une dure variant de 1 7 ms par projection. Avec ce mode de fonctionnement on peut raliser jusqu' 1000 projections par seconde. - Tubes rayons X Pour les appareils actuels, les puissances leves ncessaires exigent l'utilisation de tubes anode tournante. La double exigence de l'ouverture importante du faisceau de rayons X (50 degrs) et de la limitation des effets gyroscopiques ncessitent une orientation de l'axe longitudinal du tube (ou de l'anode tournante) perpendiculaire au plan du mouvement de rotation. Une technique plus rcente gnre deux positions diffrentes du foyer partir du mme filament pour amliorer la rsolution spatiale. Les missions de rayons X issues des deux foyers sont contrles par ordinateur. La chane de dtecteurs capte alternativement les informations provenant des deux faisceaux. Cette technique du double foyer est quivalente au doublement du nombre des dtecteurs. On obtient ainsi des performances en haute rsolution de l'ordre de 20 paires de lignes/cm (0,2 mm) pour des champs de reconstruction de 240 mm. Les tubes rayons X sont soumis des contraintes thermiques et mcaniques svres, ils sont gnralement garantis pour 35 000 coupes. Les filtrations inhrentes de 1 2,5 mm Al et les filtrations additionnelles de 0,5 1 mm de Cu ont pour but d'liminer le plus possible les composantes

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de basses nergies du rayonnement X afin de favoriser le phnomne de durcissement du faisceau et d'avoir une nergie effective suprieure 60 keV, gnralement autour de 70 keV. - Collimateur primaire Le collimateur primaire plac la sortie du tube rayons X a pour but de dfinir l'ouverture du faisceau de rayons X (fan beam : faisceau en ventail), qui peut varier de 40 50 degrs, la largeur du faisceau de rayons X, gnralement de 1 10 mm, est obtenue par motorisation des deux mchoires du collimateur. b) Dtecteurs Les caractristiques essentielles des dtecteurs sont :

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- l'efficacit de dtection quantique qui reprsente le rapport entre le nombre de photons absorbs par le dtecteur et le nombre de photons incidents. En pratique, le paramtre utile est l'efficacit globale de dtection qui est le produit de l'efficacit quantique du dtecteur et de l'efficacit gomtrique. L'efficacit gomtrique dpend de la dimension des cellules et du collimateur secondaire ; elle est fonction de dispositifs utiliss par certains constructeurs (lamelles masquant la moiti de chaque dtecteur par exemple). - la prcision et la stabilit diffrentielle des cellules : l'efficacit quantique de dtection de chaque cellule doit tre constante en fonction de l'nergie et de la fluence nergtique. - la dynamique des mesures : quel que soit le type de dtecteur utilis, la dynamique de mesure est de 1:106 (cela correspond la diffrence d'attnuation qui existe entre le faisceau dans l'air et le faisceau attnu par 70 cm de tissu mou). Par ailleurs, les dtecteurs doivent prsenter les caractristiques gomtriques suivantes : - une largeur suffisante, suprieure ou gale 20 mm afin de dtecter le plus large faisceau de rayons X disponible, - une paisseur suffisamment petite (de l'ordre de 1 2 mm) qui conditionne la largeur du rayon de mesure et donc de la rsolution spatiale, - une profondeur (ou longueur) dans le sens de propagation du rayonnement suffisante pour absorber une forte proportion de rayonnement (de 2 50 mm, en fonction du type de dtecteur). Deux principes sont utiliss: l'effet radioluminescent dans les dtecteurs solides et l'ionisation dans les dtecteurs gaz.

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- Dtecteurs solides Les nouveaux types de dtecteurs utilisant l'association cristal scintillateur photodiode (par exemple, CdWO4) ces semi-conducteurs permettent, de par leur conception, de loger de nombreux dtecteurs dans un espace rduit et de les remplacer individuellement en cas de dfaillance. Ils ne prsentent pas de phnomne de vieillissement aussi rapide que les dtecteurs NaI, BiGeO et CaF2 et leur drive thermique bien que trs faible ncessite cependant une recalibration frquente. L'efficacit de dtection quantique est pratiquement de 100 % (10 % pour les cristaux associs un PM). Les dimensions d'un dtecteur sont d'environ 2 mm d'paisseur, 20 mm de largeur et 2 mm de profondeur. Ils sont espacs de 0,3 0,6 mm. - Dtecteurs gaz

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Il s'agit dune chambre ionisation contenant du xnon sous pression. Le xnon est un gaz lourd (A = 131, Z = 54), sa densit est 4,5 fois suprieure celle de l'air dans les mmes conditions de temprature et de pression. Pour augmenter son efficacit de dtection on utilise le xnon sous pression de l'ordre de 2,5.105 Pa. La chambre comporte des lectrodes de champ et des lectrodes de collection des ions. Chaque srie d'lectrodes forme une cellule et la chambre de dtection peut comporter jusqu' 1000 cellules lmentaires dployes sur un arc de cercle de 45 ou 50 degrs. Les dimensions de ces cellules sont de l'ordre de 1 mm en paisseur, 30 mm en largeur et 50 mm en profondeur et les cellules sont espaces de 0,2 1,2 mm. L'efficacit de dtection quantique de l'ordre de 50 60 % est fonction de la pression du gaz. c) Collimateur secondaire Le collimateur secondaire a pour but de minimiser la quantit de rayonnement diffus responsable de la dgradation du contraste. Sur les appareils de 3me gnration, le collimateur secondaire peut tre constitu de lamelles de plomb focalises sur le foyer du tube et places sur la chane des dtecteurs. La structure des lectrodes des dtecteurs gaz, de par leur profondeur, favorise la collimation.

2. volutions du scanner
Le dveloppement technologique des scanners s'est effectu autour de deux composantes principales :

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- un dispositif d'mission et de dtection des rayons X, capable de tourner autour du patient pour effectuer l'acquisition des donnes de base encore appeles projections et - un ensemble pour la reconstruction des images de coupe axiale partir des projections. ces deux ensembles il convient d'associer les fonctions de visualisation, de traitement, de transfert et d'archivage des images. Bien que complmentaires de la finalit premire d'un scanner, ces fonctions ont connu ces dernires annes un dveloppement considrable, comme par exemple les reconstructions tridimensionnelles ou la reprsentation volumique des donnes anatomiques. Si le principe de base est rest le mme depuis 1971, de nombreux dveloppements ont eu lieu sur les diffrents aspects techniques. Par la suite sont prsentes les volutions concernant la gomtrie, le faisceau de rayons X et sa collimation, les dtecteurs, et l'exploitation des donnes. a) Gomtrie des scanners Dans les deux premires gnrations de scanners, le mouvement de l'ensemble tube-dtecteur tait du type translation-rotation [4]. Ce mouvement relativement compliqu, associant une translation puis une rotation de 1 10 (en fonction du nombre de dtecteurs), se caractrisait par une mauvaise utilisation du faisceau de rayons X et des temps d'acquisition levs. Le passage de un dtecteur (1re gnration) plusieurs ( 30) dtecteurs (2ime gnration) a permis de rduire les temps d'acquisition de quelques minutes une dizaine de secondes et ainsi autoris le passage l'exploration du corps entier. Dans la troisime gnration les scanners utilisent un faisceau de rayons X en ventail suffisamment large (ouverture d'au moins 40) pour supprimer le mouvement de translation d'o l'appellation rotation-rotation. Le nombre de dtecteurs (plusieurs centaines) permet d'obtenir simultanment l'ensemble des mesures relatives une projection. Le temps d'acquisition se trouve ainsi ramen quelques secondes pour une acquisition sur 360. Dans la quatrime gnration, un anneau de dtecteurs entoure le patient, et seul le faisceau de rayons X est anim d'un mouvement de rotation. Ce type de gomtrie a permis de supprimer le risque d'artefacts circulaires dans l'image parfois associ des scanners de troisime gnration. Un pas significatif a t franchi sur les temps d'acquisition en dveloppant un scanner dit de cinquime gnration, o les mouvements mcaniques ont t remplacs par le balayage d'une cible fixe de forme circulaire par un faisceau d'lectrons (scanner Imatron). Ce principe a permis d'atteindre des temps d'acquisition de l'ordre de 0,01s et de raliser des acquisitions cardiaques synchronises. En fait les volutions technologiques se sont surtout concentres sur le type de gomtrie dit de troisime gnration,

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autour duquel sont apparues les plus rcents progrs technologiques tels que le mouvement hlicodal, les dtecteurs multi-barrettes, etc. b) Faisceau de rayons X Nous allons considrer les volutions concernant trois lments conditionnant le faisceau de rayons X, c'est dire le tube, la filtration et la collimation. - Tube rayons X Sur les appareils de premire et deuxime gnration, les tubes rayons X taient du type anode fixe et refroidissement par huile. partir de la troisime gnration des tubes anode tournante et refroidissement par air ont t utiliss, le faisceau tant soit puls soit continu. Les tubes pour scanners sont spcialement conus pour cette application, l'ensemble du processus de gnration du faisceau devant offrir une stabilit meilleure que 99 %, aussi bien en quantit qu'en qualit. La haute tension se situe gnralement entre 80 et 140 kV et les temps d'exposition peuvent atteindre, maintenant, quelques dizaines de secondes en acquisition hlicodale. Aussi les tubes pour scanners ont volu vers des produits offrant une capacit calorifique de plus en plus grande (suprieure 6 MUH - million d'unit chaleur) et des foyers mobiles pour doubler le nombre de projections. Les tubes les plus rcents permettent de raliser au moins 300 000 coupes et des acquisitions infrieures la seconde. - Filtration Par rapport la radiologie conventionnelle les faisceaux utiliss dans les scanners ont une filtration plus leve afin de durcir le faisceau et le rendre aussi monochromatique que possible, d'o une couche de demiattnuation suprieure 7 mm d'aluminium. Sur le premier scanner la tte tait place dans une poche d'eau afin de limiter la dynamique de mesure (pas de mesures avec le faisceau dans l'air) et d'avoir une paisseur de milieu travers constante. Par la suite, afin de compenser les diffrences d'attnuation entre le centre et la priphrie de l'objet, les scanners ont t quips, en plus du filtre plat destin "durcir" le faisceau, d'un filtre en forme de papillon (mince au centre et pais sur les bords) destin compenser pour les parcours plus courts des rayons X en priphrie du champ de vision. Sur certains appareils on dispose mme de 2 filtres de compensation selon la taille du champ (diamtre du champ d'acquisition suprieur ou infrieur 25 cm). Collimation

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Le faisceau de rayons X est collimat la sortie du tube pour fixer la largeur de coupe souhaite, c'est la collimation primaire et, parfois, l'entre de l'ensemble de dtection, c'est la collimation secondaire. La collimation primaire est dfinie soit par des mchoires qui se dplacent soit par des fentes fixes pr-formes dans du plomb. La qualit de cette collimation est essentielle pour que le profil de dose soit aussi proche que possible de celui de la coupe. La collimation secondaire a pour but d'liminer le rayonnement diffus parvenant au dtecteur, responsable de la dgradation du contraste. Elle permet de sparer les lments de dtection selon la direction perpendiculaire au plan de coupe, et d'amliorer la dfinition de la largeur de coupe dans la direction parallle au plan de coupe. Cette dernire collimation peut tre absente sur certains scanners. c) Ensemble de dtection

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Les conditions d'acquisition du faisceau de rayons X pour les scanners ncessitent, de la part des dtecteurs, des caractristiques spcifiques : efficacit de dtection leve, grande dynamique, faible bruit, peu de rmanence du signal, rponse linaire et stable en temprature et dans le temps, et faible cot. Les premiers dtecteurs (premire et deuxime gnrations) taient constitus d'un scintillateur coupl un photomultiplicateur ; cependant leurs caractristiques physiques et leur encombrement n'taient pas idales pour lapplication. Par la suite sur les scanners faisceau en ventail, 2 types de dtecteurs ont t utiliss : le dtecteur gaz et celui semi-conducteur. Le dtecteur gaz est une chambre remplie d'un gaz sous pression (10 20 bar de xnon par exemple) dans laquelle des lectrodes plates permettent de dlimiter des cellules ( 700 1000) de mesure. Ces dtecteurs se caractrisent par un faible espacement entre les cellules mais aussi par une efficacit de dtection limite ( 70 %). Le dtecteur semi conducteur est compos d'un petit cristal scintillant (tungstate de cadmium par exemple) coupl une photodiode. Ces dtecteurs sont groups de faon linaire par plusieurs centaines. Ils se caractrisent par une efficacit de dtection leve (proche de 100 %) et quipent actuellement la majorit des appareils de haut de gamme. Ce type de dtecteurs a permis le passage des dispositifs de dtection multibarrettes. d) Mode hlicodal Les dbuts du mode hlicodal [5] datent de 1989, cette technique ayant t dveloppe l'origine pour les tudes de rgions soumises aux mouvements respiratoires ou cardiaques. Depuis cette date, ce mode a t tendu pratiquement toutes les rgions anatomiques compte tenu de la

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vitesse d'acquisition qu'il procure. Il permet l'acquisition d'un grand volume anatomique (50 60 cm de longueur) en moins d'une minute. Il faut tre conscient de toutes les volutions technologiques qui ont permis le dveloppement de ce mode : rotation continue du tube rayons X et des dtecteurs, alimentation du tube rayons X par contacts glissants, tube anode tournante ayant une capacit calorifique leve, transmission sans fil du signal, flux de donnes lev, capacit de stockage des informations importante et temps de reconstruction des images trs court. e) Exploitation des donnes Paralllement aux volutions technologiques qui ont directement concern les composants de base du scanner, on a assist galement des dveloppements au niveau de l'utilisation des donnes pour permettre de nouvelles applications. En effet, la scanographie fut la premire technique d'imagerie totalement numrique en radiologie. Cette caractristique a rapidement conduit certains utilisateurs essayer d'exploiter les donnes d'un point de vue quantitatif des fins, par exemple, de caractrisation tissulaire [6, 7]. Ces travaux n'ont pas eu les rsultats esprs. Il faut citer nanmoins le dveloppement de l'acquisition en double nergie pour extraire la carte des distributions en densit lectronique et en numro atomique, et surtout les tudes du contenu minral osseux (ostodensitomtrie). Depuis le dbut des annes 90 il est possible d'utiliser l'ensemble des donnes d'un volume pour procder des reconstructions tridimensionnelles afin de visualiser le volume sous n'importe quel angle ou l'image d'une coupe dans n'importe quelle incidence. Cette fonction, associe un outil de segmentation plus ou moins automatique, est utile pour l'enseignement, l'aide la chirurgie dans le cas d'interventions strotaxiques, de mise en place de prothses, de reconstruction plastique, etc. Parmi les volutions les plus rcentes, principalement dues au dveloppement de l'acquisition hlicodale, citons l'angiographie synchronise sur l'injection de produit de contraste [8], la mesure de densit pulmonaire sous contrle spiromtrique [9] et l'endoscopie virtuelle [10]. On terminera ce panorama des volutions associes aux progrs du traitement des donnes par le scanner interventionnel [11]. Cette technique, qui ncessite de disposer d'une reconstruction en temps rel, d'un cran dans la salle d'examen, et de la possibilit de contrler la position de la table, permet de guider en temps rel les gestes d'une procdure interventionnelle.

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3. Perspectives

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Si le principe de base du scanner n'a pas chang depuis son apparition en 1971, on doit noter que les volutions technologiques ont t constantes et particulirement importantes ces dix dernires annes autour de la gomtrie dite de troisime gnration et du mode hlicodal. Ces progrs ont conduit une amlioration des performances comme le montre le tableau I.
Anne 1972 1980 1990 2000

temps d'acquisition (s) taille de la matrice (pixel)

300 80 x 80 2 3 5mm/5UH/ 50mGy

2,5 256 x 256 6 15 3mm/3UH/ 30mGy

1 512 x 512 40 15 3mm/3UH/ 30mGy

0,5 1024 x 1024 60 15 3mm/3UH/ 30mGy

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puissance (kW) rsolution spatiale (pl/cm) rsolution en contraste

Tableau I : volution des performances des scanners au cours du temps. Les valeurs indiques correspondent des conditions d'acquisition standard.

Cependant on peut voir que les caractristiques de l'image (rsolution spatiale et rsolution en contraste) taient dj du niveau des performances actuelles en 1980, c'est--dire sur certains appareils de 2ime gnration et, bien sr, ceux de 3ime gnration. Par contre le temps d'acquisition, la matrice de reconstruction, la puissance des gnrateurs et tous les logiciels d'analyse d'image ont t considrablement amliors. Tous ces progrs ont fait que la place de cette technique a t de plus en grande dans les explorations diagnostiques. Que peut-on attendre des prochaines volutions [11, 12] ? Le prochain pas significatif attendu pour cette technologie est le passage l'acquisition volumique. Ce progrs technologique aura un impact considrable sur les applications cliniques par l'acclration des temps d'acquisition et l'augmentation des volumes explors. Pour cela il faut remplacer le systme de dtection une (ou deux) barrette(s) par un dtecteur plan, par exemple 16000 lments de dtection (16 ranges de 1000 dtecteurs chacune). Il sera alors possible de couvrir tout un organe en une ou deux rotations.

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Bibliographie
Friedland GW and Thurber BD. The birth of CT. AJR 1996 ; 167:1365-1370. Annuaire de la Cancrologie/Radiothrapie et des Imageries Mdicales en France (ACRIM), 17me dition, diteur A. Laugier, Paris (1998). [3] Shrimpton PC, Wall BF. CT - an increasingly important slice of the medical exposure of patients (correspondence). Br J Radiol, 66:1067-1068 (1993). [4] Webb S. A review of physical aspects of X-ray transmission computed tomography. IEEE Proceedings 1987;134:126-135. [5] Zeman RK, Fox SH, Silverman PM, et al. Helical (spiral) CT of the abdomen. AJR 1993 ; 160:719-725. [6] Brooks RA. A quantitative theory of the Hounsfield unit and its application to dual energy scanning. Journal of Computed Assisted Tomography 1977 ; 1:487-493 [7] Crawley EO. In vivo tissue characterization using quantitative computed tomography: a review. Journal of Medical Engineering & Technology 1990 ; 14:233-242. [8] Bautz W, Strotzer M, Lenz M, et al. Preoperative evaluation of the vessels of the upper abdomen with spiral CT: comparison with conventional CT and arterial DSA. Radiology 1991 ; 181:261. [9] Kalender WA, Rienmller R, SeisslerW, et al. Spirometric gating for measuring pulmonary parenchytal density by quantitative computed tomography. Radiology 1990;175:265-268. [10] Rubin GD, Beaulieu CF, Argiro V, et al. Perspective volume rendering of CT and MR images: applications for endoscopic imaging. Radiology 1996 ; 199:321-330. [11] Fox SH, Tanenbaum LN, Ackelsberg S, et al. Future directions in CT technology. Neuroimaging Clinics of North America 1998 ; 8:497-513. [12] Kalender WA. Quo vadis CT? CT in the year 2000. ELECTROMEDICA 1993 ; 61:30-39. [1] [2]

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Rfrences additionnelles
Kalender, W.A., Computed Tomography: Fundamentals, System Technology, Image Quality, Applications. Wiley & Sons: New York (2000) Seeram, E., Computed Tomography : Physical Principles, Clinical Applications and Quality Control, 2nd Edition. Pub. W.B. Saunders (2001). www.impactscan.org

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Mdecine nuclaire : gamma-camra et camra positons

Jean Philippe VUILLEZ Service biophysique et mdecine nuclaire Hpital Michallon et LER Inserm 00-08, Grenoble
ml : JPVuillez@chu-grenoble.fr

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La mdecine nuclaire est une spcialit de la mdecine qui se dfinit par lutilisation de mdicaments radioactifs, administrs des patients des fins diagnostiques ou thrapeutiques. Le devenir biologique de ces radiopharmaceutiques dans lorganisme, cest--dire leur distribution dans les tissus et son volution au cours du temps, procure des informations irremplaables pour tudier in vivo des processus biochimiques et physiopathologiques de faon non invasive. L'analyse de la distribution tridimensionnelle de la molcule marque, et de son volution au cours du temps, apporte les renseignements recherchs. Pour cela, il faut dtecter les molcules radioactives et en prciser la rpartition lintrieur de lorganisme. Les mdecins disposent pour ce faire de camras adaptes, permettant la dtection de molcules ltat de traces (ne perturbant donc pas les phnomnes explors), mais reprables grce au marquage radioactif. Cest le principe de limagerie scintigraphique. Il faut distinguer les gamma-camras, utilises pour dtecter les radionuclides metteurs de simples photons (photons gamma, mis au niveau du noyau par dsexcitation de celui-ci aprs une transformation radioactive) comme le techntium 99m, liode 123, lindium 111, et les camras positons, utilises pour dtecter les photons d'annihilation des metteurs de positons, comme le fluor 18.

I - Les radiopharmaceutiques, mdicaments radioactifs

Un radiopharmaceutique est un mdicament qui lorsqu'il est prt l'emploi contient un ou plusieurs radionuclides (isotopes radioactifs) incorpors des fins mdicales (loi n 92-1279 du 8 dcembre 1992 modifiant le livre V du code de la Sant Publique et relative la pharmacie et au mdicament). Les radiopharmaceutiques sont prescrits, dans le cadre de leur AMM, obligatoirement par un mdecin titulaire du DES de Mdecine Nuclaire, sous forme d'une ordonnance nominative pour chaque patient, prcisant le nom du radiopharmaceutique, la quantit ainsi que l'activit injectes, et les conditions d'administration. Le radiopharmaceutique tant un mdicament, sa prparation doit tre faite par ou sous la responsabilit d'un pharmacien ; s'agissant de mdicament radioactifs, celui-ci doit tre de plus titulaire du DESC de radiopharmacie-radiobiologie. Il est galement responsable du contrle de qualit de la prparation (puret radionuclidique, rendement de marquage, strilit, apyrognicit, etc.), indispensable avant l'administration au patient.

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Le choix du radiopharmaceutique est fait en fonction du phnomne tudier. Il dpend des proprits biologiques de la molcule (biodistribution, mtabolisme, dgradation et limination, fixation prfrentielle dans certains tissus, affinit particulire pour certaines cellules, etc.) : la connaissance de ces proprits permet de relier les rsultats scintigraphiques ou thrapeutiques observs des processus biochimiques et physiopathologiques, ce qui est au dpart de l'interprtation correcte des examens, ou de la prescription d'une dose thrapeutique. Compte tenu des trs faibles quantits de molcules injectes, les radiopharmaceutiques sont dpourvus d'effets secondaires. Le seul risque thoriquement encouru par le patient est li la radioactivit, puisque l'mission de rayonnements et de particules dans les tissus est responsable d'un dpt d'nergie. Celui-ci, par lsions de structures cellulaires, en particulier de l'ADN, peut en thorie entraner l'apparition d'un cancer ou d'anomalies gntiques transmissibles. En fait ce risque est extrmement rduit, et jusqu' prsent aucun effet de ce type n'a pu tre imput la Mdecine Nuclaire, ce qui ne dispense pas du respect des principes de justification et d'optimisation en matire de prescription d'explorations isotopiques.

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II - Les systmes de dtection : les gamma-camras et les camras positons

Le principe des explorations scintigraphiques est donc de dterminer, et le plus souvent de visualiser sous forme d'images, la biodistribution dans l'organisme d'un radiopharmaceutique pralablement inject ou administr par voie orale ou par voie locale. Pour cela, on a besoin dun systme de dtection de la radioactivit, capable de reprer la prsence des molcules marques mais galement de les localiser dans deux directions (images planaires) ou mieux dans l'espace tridimensionnel (tomographie). La possibilit d'obtenir une information significative par cette mthode repose avant tout sur la notion de contraste, qui correspond la diffrence du nombre de coups dtects dans deux rgions de l'image. Cette notion de contraste recouvre celle de rapport signal/bruit qui permet une apprciation quantitative de la qualit de l'image.

1. La dtection des photons gamma : la gamma-camra dAnger (mission monophotonique)

Le problme consiste transformer l'nergie mise (photons ) en une forme mesurable et exploitable, c'est--dire, en pratique, en courant

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lectrique ; envisageons les tapes par lesquelles la technologie parvient rsoudre ce problme : - Pour dtecter les rayonnements , il faut arrter les photons, c'est--dire absorber leur nergie ; ceci est possible par interaction avec la matire en interposant un matriau adquat sur le trajet des photons que l'on veut dtecter. - L'nergie dpose dans ce matriau doit pouvoir tre recueillie ; elle ne doit pas tre convertie de faon quelconque, par exemple en chaleur, car on serait incapable de la mesurer. La solution est de transformer l'nergie des photons en lumire, c'est--dire en nombreux photons de moindre nergie (photons lumineux) ; ceci est possible en utilisant comme matriau d'arrt des photons un matriau scintillant ; on entend par l un matriau dont les atomes, excits par interaction avec les photons , retournent leur tat de repos par mission de lumire : on parle de scintillateur solide. Ceci fait beaucoup de contraintes, mais il se trouve que de tels matriaux existent ; l'un d'eux offre des avantages qui font qu'il est de loin le meilleur candidat actuellement pour la dtection en Mdecine Nuclaire : il s'agit du cristal de iodure de sodium (NaI). Ce cristal est l'lment fondamental de toute la chane de dtection. ce stade, le problme devient relativement plus simple puisque, la diffrence des photons trop nergtiques, il existe une solution technique pour convertir les photons lumineux en courant lectrique, grce un appareil appel photomultiplicateur. Les signaux lectriques qui sortent du photomultiplicateur peuvent alors tre traits par un systme lectronique et l'information devient exploitable. L'lectronique associe est complexe et joue un rle trs important pour les tapes suivantes : en effet une fois rsolu le problme de la dtection proprement dite, il faut envisager la slection de l'information, puis sa localisation uni-, bi- ou tridimensionnelle. a) La chane de dtection La chane de dtection est dcrite dans la figure 1. - Le cristal scintillant Comme nous lavons dj signal, son rle est essentiel : il est de convertir l'nergie des photons en nergie lumineuse (c'est un scintillateur solide). Il doit remplir plusieurs conditions : - avoir un bon pouvoir d'arrt pour les photons , c'est--dire un coefficient d'attnuation lev, ce qui impose un poids atomique lev

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colli mat eur

teurs a c i l tip omul t o h p

Z
Circuit de localisation

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n ci s al t s ri C

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Figure 1 La chane de dtection

- rmettre l'nergie absorbe sous forme de lumire (photons lumineux, d'nergie beaucoup plus faible que les photons ), ce qui dfinit un scintillateur - tre transparent sa propre lumire de rmission, afin que celle-ci puisse s'chapper pour tre exploite - pouvoir tre usin dans des dimensions suffisantes (champ actuel des camras de l'ordre de 50 cm x 40 cm) - tre suffisamment stable dans le temps - avoir un cot compatible avec une production en srie. Le matriau qui, encore actuellement, ralise le meilleur compromis entre toutes ces conditions, est le iodure de sodium (NaI) dop au thallium. Grce au poids atomique de l'iode (A=127), le pouvoir absorbant est satisfaisant jusqu' 300 keV ; la lumire rmise l'est sous forme de photons peu adapts au rendement de la photocathode : c'est ce qui justifie la prsence d'impurets de thallium. En effet, le thallium absorbe les photons mis par le NaI et rmet une fraction constante sous forme de photons ultra-violets de 3 eV (4150 ) auxquels le cristal est transparent. Il faut noter que le cristal ralise une multiplication photonique : pour un photon dpos, il y a mission de trs nombreux photons lumineux, malgr une perte considrable : environ 40 photons par keV dpos dans

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le cristal (rappelons qu'un photon du techntium 99m fait 140 keV). Environ 30 % de cette lumire est transmise la chane de dtection. - Les photomultiplicateurs (PM) Leur rle est de convertir l'nergie lumineuse qui sort du cristal en signal lectrique qui puisse tre exploit dans des circuits lectroniques. Ceci est permis par l'association de plusieurs lments, placs dans le vide pour permettre la circulation des lectrons. Le premier lment, plac au contact du cristal, est la photocathode, mince feuille mtallique laquelle les photons lumineux sont capables d'arracher des lectrons. Ces lectrons sont attirs vers une premire dynode, grce une haute tension qui est applique entre celle-ci (charge positivement) et la photocathode ; l'acclration ainsi imprime aux lectrons font que ceux-ci vont en arracher un bien plus grand nombre la dynode. On trouve ensuite plusieurs dynodes en cascade, sur lesquelles le mme phnomne se rpte, les dynodes successives tant portes des potentiels de plus en plus levs. De dynode en dynode, on obtient donc une cascade d'lectrons de plus en plus intense (phnomne d'amplification), qui aboutit finalement un courant lectrique mesurable. Ce courant est collect par le dernier lment qui est l'anode ; on dispose alors d'un vritable signal lectrique. - Notion de proportionnalit Il est fondamental de noter que le nombre de photons lumineux gnrs dans le cristal est proportionnel l'nergie, que la fraction de photons qui atteignent la photocathode est constante et que la quantit d'lectrons arrachs la photocathode est proportionnelle l'nergie lumineuse qui atteint celle-ci. Cette proportionnalit est maintenue tout au long de la succession des dynodes de sorte que, finalement, l'amplitude de l'impulsion lectrique la sortie du PM est proportionnelle l'nergie dpose par le photon incident. b) La slection de l'information On souhaite cartographier les centres dmission (reprsentatifs de la concentration du radiopharmaceutique en chaque point) en cartant les centres de diffusion (qui ne sont pas informatifs). Ce double objectif recouvre deux notions : la collimation et l'analyse spectromtrique. La ncessit de slectionner l'information peut tre illustre par les schmas de la figure 2. - La collimation et les collimateurs Le collimateur, plac immdiatement devant le cristal, a pour fonction de slectionner les photons dans une seule direction, en pratique

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3 2

1 4
Figure 2

Dtecteur

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1. photon direct arrivant perpendiculairement au dtecteur ( prendre en compte) 2. photon direct arrivant non perpendiculairement au dtecteur ( rejeter : rle du collimateur) 3. photon diffus, arrivant non perpendiculairement au dtecteur (limin par le collimateur) 4. photon diffus, arrivant non perpendiculairement au dtecteur (non arrt par le collimateur mais rejet grce la spectromtrie, car d'nergie infrieure celle du photon primaire).

les photons qui arrivent perpendiculairement au cristal. Il doit donc liminer en totalit les autres photons (ayant une autre direction), c'est pourquoi il est constitu d'un matriau trs absorbant pour les photons gamma, en pratique le plomb. Un collimateur est une plaque de plomb dans laquelle sont mnags des trous orients perpendiculairement au cristal, destins laisser passer les photons utiles ; les trous sont spars par ce qu'on appelle les septa (cloisons). Le collimateur d'un simple dtecteur comporte un seul trou ; les collimateurs destins aux camras grand champ sont plus complexes puisqu'ils comportent de nombreux trous rpartis sur toute la surface de dtection. On doit alors prendre en compte les paramtres suivants qui dfinissent le type de collimateur et conditionnent ses performances : nombre de trous par unit de surface, paisseur des septa, diamtre des trous (ronds ou, maintenant de plus en plus, hexagonaux) et hauteur des trous (qui correspond l'paisseur de collimateur). Il est clair que les trois premiers de ces paramtres ne sont pas indpendants. Les caractristiques d'un collimateur donn jouent sur la sensibilit et la rsolution spatiale de la camra : plus les trous sont larges et nombreux (donc les septa minces) et de faible hauteur, plus la sensibilit est favorise (plus de photons parviennent au cristal), mais au dtriment de la rsolution. On parle de collimateur haute sensibilit-basse rsolution. Un tel collimateur peut tre utilis uniquement avec des photons de basse nergie, c'est pourquoi on parle aussi de collimateur basse nergie.

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linverse, plus les trous ont une hauteur leve et un diamtre rduit et moins ils sont nombreux (on a donc des septa pais), moins on favorise la sensibilit (beaucoup de photons utiles vont rencontrer un septum) mais meilleure est la rsolution. Ce type de collimateur est indispensable avec les photons trs nergtiques. On parle de collimateur basse sensibilithaute rsolution, ou encore haute nergie. Les fabricants peuvent combiner les paramtres pour raliser de nombreux collimateurs diffrents, caractriss par une sensibilit et une rsolution adaptes au type d'examen qu'on veut raliser (a-t-on besoin d'une image trs prcise ou prfre-t-on compter le maximum de photons?) et adapts une gamme d'nergie relativement prcise (basse, moyenne, haute). Il faut retenir qu'il s'agit dans tous les cas d'un compromis qui doit tre le moins pnalisant possible ; en effet, bien qu'indispensable, le collimateur reprsente une limitation majeure des performances d'une gamma-camra puisqu'il revient interposer du plomb entre la source et le cristal de dtection. Notons d'autre part que le collimateur et ses caractristiques imposent la ncessit absolue de placer la camra le plus prs possible du patient. La qualit de l'examen en dpend directement. Aucun traitement informatique ne peut ensuite corriger les dfauts d'une acquisition ralise une trop grande distance du patient. - L'analyse spectromtrique : l'analyseur multicanaux Cette analyse est indispensable pour liminer correctement les rayonnements diffuss : nous avons vu que certains photons diffuss peuvent avoir la direction adquate pour passer travers les trous du collimateur. Il est d'autre part essentiel de comprendre que, en liminant par analyse spectromtrique de tels photons diffuss, on limine ncessairement en mme temps des photons directs (correspondant donc de l'information utile) mais qui interagissent partiellement, par effet Compton, dans le cristal : dans les deux cas en effet, l'nergie dpose dans le cristal est infrieure l'nergie du photon d'origine. Autrement dit on souhaite ne prendre en compte, pour construire le rsultat (l'image scintigraphique), que les phnomnes d'absorption totale des photons parvenus intacts (sans diffusion) au cristal. Il faut rappeler comment est construit le spectre en nergie d'un metteur gamma (figure 3) : - on dispose en abscisse l'nergie dpose dans le cristal et en ordonne le nombre d'vnements dtects par unit de temps - il n'est pas possible, pour des raisons techniques, de tracer la courbe en continu : c'est pourquoi on divise l'axe des abscisses en petits intervalles, chaque intervalle correspondant un canal - pour chaque vnement dtect, l'amplitude de l'impulsion, qui correspond l'nergie dpose, est compare aux bornes des diffrents

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canaux (d'o la dnomination d'analyseur multicanaux donne la partie de l'lectronique qui effectue cette tche) ; elle est alors comptabilise dans le canal appropri - au terme de la priode d'acquisition (c'est--dire le temps pendant lequel sont dtects et compts des vnements), on a obtenu dans chaque canal un certain nombre d'impulsions qui indique la frquence des vnements correspondant un dpt d'nergie dans l'intervalle de valeurs correspondant ce canal. C'est la juxtaposition de ces valeurs qui constitue le spectre d'nergie (voir figure 3). Celui-ci a une forme caractristique, avec notamment un pic au niveau du nombre maximal d'vnements : l'nergie correspondant ce pic est celle des photons incidents intacts, cest pourquoi on l'appelle pic d'absorption totale
Nb d'vnements/unit de temps

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500

400

300

200

100

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36

N des canaux
Figure 3 : spectre de dtection dune mission gamma

- en fait, ce sont les impulsions lectriques la sortie du dtecteur qui sont mesures et classes. Pour tracer le spectre en fonction de l'nergie, il faut procder un talonnage : celui-ci consiste faire correspondre la valeur en mV de l'impulsion la plus frquente (= pic) la valeur d'nergie (en eV) connue de l'mission gamma que l'on dtecte. Ensuite, l'chelle d'nergie est tablie facilement puisque nous avons vu qu'il y a proportionnalit entre l'nergie dpose dans le cristal et l'amplitude de l'impulsion lectrique mesure en fin de chane (autrement dit, l'talonnage consiste fixer le facteur de proportionnalit). c) La localisation de l'information (c'est--dire des points d'o ont t mis les photons dtects) Afin de localiser lorigine des vnements dtects, donc de construire une image scintigraphique, il faut dabord slectionner les

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photons de direction perpendiculaire au dtecteur, comme nous lavons vu, afin dassurer une relation homothtique entre le volume dtect et le plan du cristal dtecteur. Ceci est assur par le collimateur. Puis il faut reprer les coordonnes de linteraction dans le cristal. Ceci est assur par la combinaison de plusieurs PM et un circuit de pondration. Elle est ralise en exploitant le fait qu'il y a plusieurs photomultiplicateurs et que chaque photomultiplicateur reoit une certaine fraction de la lumire mise par le cristal lors de la dtection d'un photon gamma : pour chaque point d'impact dans le cristal, la distribution de la lumire sur les diffrents photomultiplicateurs (c'est--dire la combinaison des parts relatives vues par chacun d'eux) est unique. Si l'on peut connatre cette distribution de la lumire, on peut en dduire les coordonnes de l'interaction dans le cristal.

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Ceci est possible grce un circuit de pondration : chaque photomultiplicateur est connect une rsistance dont la valeur permet son reprage. Les impulsions manant de tous les photomultiplicateurs sont additionnes telles quelles, ce qui donne le signal Z dont l'amplitude mesure l'nergie dpose, puis pondres travers les circuits de pondration (il en existe un pour chacune des deux dimensions de l'image) ; la somme des valeurs pondres X et Y travers les rsistances associes chaque photomultiplicateur renseigne sur les coordonnes x et y de l'impact puisque, les rsistances tant convenablement choisies, il existe pour chaque point d'interaction dans le cristal, un couple unique de valeurs de X et de Y. En ralit ce systme est actuellement remplac par des circuits lectroniques permettant un traitement numrique direct des signaux , mais le principe reste le mme : lanalyse de la distribution de lnergie lumineuse sur plusieurs PM permet de connatre les coordonnes de linteraction dans le cristal, cest--dire du point dmission de la lumire. Ainsi, chaque vnement dtect, aprs avoir t analys selon son nergie (et retenu uniquement sil sinscrit dans la fentre retenue pour le pic ), sera comptabilis dans une mmoire correspondant au pixel (chantillon de limage) o il sest produit. Lensemble de tous les pixels, reprsent en fonction du nombre dimpulsions recueillies dans chacun, selon un code de couleurs, permet donc la construction dune image scintigraphique, qui reprsente la distribution de la radioactivit dans la source. d) Caractristiques et performances d'une gamma-camra Il s'agit de donner une image fidle de la distribution de la radioactivit, qui reflte la biodistribution du radiopharmaceutique dans l'organisme du patient. Un foyer faiblement actif doit tre visible, ce qui correspond la notion de sensibilit ; il faut dtecter les variations

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d'activit, ce qui correspond la notion dj voque de contraste et dpend de la capacit identifier correctement, en tout point du cristal, les vnements qui correspondent une absorption totale. Ceci dpend directement de l'analyse spectromtrique et dfinit la rsolution en nergie. Deux sources distinctes doivent pouvoir tre distingues et individualises : c'est la notion de rsolution spatiale, en partie dpendante du contraste, donc de la rsolution en nergie. Enfin les rapports gomtriques des diffrents centres d'mission doivent tre conservs, ce qui se traduit par la linarit spatiale. La proprit rsultante, qui combine la sensibilit, la rsolution spatiale (donc le contraste et la rsolution en nergie) et la linarit spatiale est l'uniformit de densit. Le comportement de la camra doit rester le mme quelle que soit l'activit de la source ; on est confront au problme de temps mort et de taux de comptage.

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ct des caractristiques donnes par le constructeur, qui s'imposent l'utilisateur et ne peuvent plus tre modifies [ caractristiques du cristal (dimensions, homognit,), caractristiques des PM (gomtrie, nombre, taille, forme, qualit ,), la qualit et les performances de l'lectronique associe,], les performances de la gamma-camra dpendent avant tout du gain des photomultiplicateurs : celui-ci peut varier (selon la stabilit de la haute tension, la temprature,) et surtout tre diffrent d'un PM l'autre. D'o des procdures de rglage indispensables et permanentes. Ceci recouvre la notion de stabilit lectronique de la camra : celle-ci fonctionne correctement si tous les PM ont un rendement opto-lectrique identique et stable dans le temps. Il faut distinguer les proprits intrinsques, c'est--dire obtenues sans collimateur, et les proprits extrinsques, qui sont ralises avec le collimateur. Si les proprits intrinsques sont inhrentes seulement la camra elle-mme, les proprits extrinsques dpendent aussi du collimateur, dont on sait qu'il est l'lment limitant, et varient selon le collimateur utilis.

2. Les camras positons et la tomographie par mission de positons (TEP)

Les noyaux metteurs de positons, en excs de charge positive, se dsintgrent par transformation d'un proton en neutron. Cette transformation s'accompagne de l'mission d'un positon (de la masse d'un lectron et de mme charge en valeur absolue, mais positive) et (ce qui respecte la loi de conservation de l'nergie) d'un neutrino. Le positon mis parcourt quelques millimtres dans la matire en abandonnant par interactions successives son nergie cintique ; lorsqu'il est pratiquement au repos, il se produit avec un lectron du milieu une raction

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d'annihilation dans laquelle la masse des deux particules est transforme en leur quivalent nergtique, soit 1,022 Mev rpartis en deux photons de 511 keV (appels photons d'annihilation) mis simultanment selon des directions opposes. La distribution d'une molcule marque par un metteur de positons est tudie en combinant la dtection en concidence des photons d'annihilation et les principes de la tomographie : cest la technique de Tomographie par mission de Positons ou TEP. Un avantage majeur est quun collimateur nest pas ncessaire, puisque la concidence renseigne sur la direction de l'mission, et quon prend en compte toutes les directions au lieu d'en slectionner une seule. La dtection est assure dans les camras ddies par une couronne de dtecteurs (cristaux scintillants coupls des photomultiplicateurs) indpendants. Sur les appareils les plus rcents et les plus performants, les dtecteurs sont agencs en une srie danneaux complets couvrant une quinzaine de cm dans la direction axiale et produisant simultanment entre 35 et 63 coupes pour ltude du corps entier. Il est ncessaire dliminer les photons diffuss par spectromtrie, et galement dviter le phnomne de concidences fortuites propres la TEP. La dtection monophotonique et la TEP ne sont pas en concurrence, elles permettent lune comme lautre dtudier la biodistribution de molcules marques : le marquage par un metteur gamma ou par un metteur de positons dpend des proprits chimiques et biologiques de la molcule, dont le choix est impose par le processus que lon souhaite tudier. La dtection simultane, dite en concidence (en pratique dans un intervalle de temps ou fentre de concidence de quelques ns), de ces deux photons permet une dtection trs efficace, et simple dans son principe, des metteurs +, malgr la lourdeur et le cot de l'appareillage ncessaire. Ces proprits confrent aux metteurs de positons d'une part des avantages, mais expliquent d'autre part les difficults qua rencontr la diffusion de la mthode, qui se met seulement en place en France. Les avantages sont la possibilit de s'affranchir du collimateur (lment trs pnalisant dans les chanes de dtection monophotonique) et d'avoir une attnuation dans les tissus qui ne dpend pas de la profondeur (permettant, au moins en thorie, une correction d'attnuation exacte). La diffusion est galement trs peu pnalisante, puisque la diffusion d'un des deux photons mis conduit une absence de concidence et l'limination de l'vnement ; ceci est partiellement altr par un autre phnomne, propre la dtection de positons, qui est la survenue de concidences fortuites ; si deux photons de 511 keV issus de deux dsintgrations distinctes sont dtects en mme temps, ceci sera interprt par le circuit

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de concidence comme un vnement virtuel comptabilis avec des coordonnes errones. Les difficults sont tout d'abord la priode physique courte des metteurs +. Elle est cependant de 112 mn pour le fluor 18, ce qui est relativement long par rapport celle d'autres metteurs de positons (20 mn pour le carbone 11 et 2 mn pour l'oxygne 15), et permet d'envisager la distribution industrielle de molcules marques au fluor 18. La seconde difficult est la ncessit d'un appareillage de dtection particulier, dont le parc en France, trs limit jusqu'en 2000, est seulement en train de se dvelopper, avec un retard considrable compte tenu de l'intrt de la mthode. Les camras positons ddies ( camras TEP ) connaissent actuellement une volution trs rapide, qui tient aux cristaux utiliss, la technologie multi-anneaux et au mode d'acquisition 3D, aux mthodes de correction d'attnuation et enfin aux mthodes de reconstruction. Les cristaux de dtection possibles sont actuellement le germanate de bisthmuth (BGO), utilis depuis plusieurs annes, et des cristaux plus performants comme lorthosilicate de gadolinium (GSO) et lorthosilicate de luttium (LSO). Ces derniers, dont lmission lumineuse est plus intense et plus rapide, permettent une qualit accrue des examens, raliss dans des temps plus courts, en permettant notamment de travailler avec une fentre de concidence rduite (6 ns au lieu de 12 ns).

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III - Conclusion
Les principes physiques de dtection des rayonnements gamma sont utiliss pour la ralisation dappareils qui permettent de suivre des molcules radioactives dans lorganisme. Ces appareils, de plus en plus performants, sont essentiels au dveloppement de la Mdecine Nuclaire, discipline mdicale en plein essor grce la mise sur le march de radiopharmaceutiques toujours plus nombreux.

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La Physique Mdicale : Dbouchs et Mtiers

Suzanne NAUDY Service de radiothrapie Centre G.F. Leclerc, Dijon
ml : SNaudy@dijon.fnclcc.fr

Suite aux dcouvertes des rayons X par W. Rntgen, de la radioactivit par H. Becquerel et du radium par P. et M. Curie, les applications mdicales des rayonnements ont rapidement t mises en uvre. Aujourdhui, les applications de la physique mdicale concourent soit au diagnostic soit au traitement dans les services de radiothrapie, de radiologie et de mdecine nuclaire.

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Nanmoins, pour le patient, si le bnfice clinique de leur utilisation est vident, il nen reste pas moins un risque li la dose. Ainsi, le physicien mdical doit matriser la thorie de linteraction des rayonnements avec la matire, la mtrologie des rayonnements, la technologie de leur production et leurs applications cliniques. Scientifique dans les structures de sant, soucieux de la radioprotection, le physicien mdical a un rle de pharmacien des rayonnements : dlivrer la bonne dose (de rayonnement) pour le bon usage.

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Limagerie fonctionnelle EEG-MEG : principes et applications*

Bernard RENAULT et Line GARNERO Unit de Neurosciences Cognitives et Imagerie Crbrale Universit de Paris 6, Hpital Piti-Salptrire, Paris
ml : Bernard.Renault@chups.jussieu.fr

I - Introduction
Lun des enjeux cruciaux du dveloppement des neurosciences cognitives et cliniques est sans aucun doute notre capacit suivre au cours du temps et localiser prcisment in vivo lactivit crbrale humaine. Cette imagerie dynamique du fonctionnement de rseaux neuronaux distribus suppose une ou des techniques parfaitement atraumatiques, possdant la fois une grande prcision temporelle (la milliseconde au moins) et une grande prcision de localisation (quelques mm3 environ). Il existe essentiellement deux grandes classes de mthodes qui permettent ces tudes fonctionnelles du cerveau humain vivant : limagerie mtabolique qui permet en particulier denregistrer les variations locales de dbit sanguin grce lIRM fonctionnelle (IRMf) ou la TEP (Tomographie par Emission de Positons) et limagerie lectromagntique (EEG et MEG). Dans les deux cas, il est possible de reprer les zones du cerveau actives lors dexplorations fonctionnelles spcifiques, dans des tches sensorimotrices et/ou cognitives complexes. Cependant, ces mthodes donnent des images diffrentes et complmentaires du fonctionnement crbral : - Au cours dune tche ralise dans le cadre dun protocole exprimental, lIRMf enregistre les variations locales, in situ, de dbit sanguin induites par la tche ; ces variations de dbit surviennent 2 3 secondes et durent 15 20 secondes aprs la prsentation dun stimulus ; leur enregistrement dpend dun champ magntique impos par lIRM. Au contraire, les mthodes lectromagntiques enregistrent directement, en temps rel, sur le scalp et donc distance des sites actifs, les activits lectriques et magntiques des rseaux de neurones mis en jeu au cours de la tche. - Lactivit hmodynamique ne peut tre mesure sur lensemble du volume crbral quen 500 ms environ alors que l'EEG ou la MEG
* Cet article a dj t publi en partie dans LIMAGERIE CRBRALE FONCTIONNELLE LECTRIQUE ET MAGNTIQUE HERMES, Collection Sciences Cognitives, Paris (2003).

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enregistrent respectivement les variations de potentiel et de champ magntique engendrs par lactivit lectrique crbrale toutes les millisecondes voire plus rapidement si besoin. - La rsolution spatiale est de lordre de quelques mm3 avec lIRMf de dernire gnration ainsi quavec le MEG-EEG ; cependant, en MEGEEG de nombreuses difficults se posent pour localiser exactement les rgions crbrales lorigine des signaux mesurs et une telle prcision ne peut tre obtenue que si une seule rgion de faible tendue contribue aux donnes MEG ou EEG (ce qui est rarement le cas). Il est donc clair que tout plateau dimagerie fonctionnelle crbrale humaine doit au moins comprendre une IRM fonctionnelle et un MEG-EEG puisque ces appareils sont complmentaires et permettent de mesurer respectivement la position (rpondre la question O ?) et les instants dactivation (rpondre la question Quand ?) des diffrents sites crbraux mis en jeux lors des protocoles exprimentaux utiliss par les chercheurs. Au niveau international, ces techniques sont en plein essor, et un grand nombre de systmes MEG-EEG de dernire gnration sont installs dans de nombreux centres, le plus souvent proximit dun systme dIRMf. En France, un seul systme tte entire, ddi la recherche publique fondamentale et clinique, est oprationnel depuis fin 1998 l'Hpital de la Piti-Salptrire Paris o une IRMf de recherche devrait galement tre bientt installe. LEEG, ne en 1929, nutilisait jusqu prsent que peu de capteurs et sintressait surtout linformation temporelle contenue dans les signaux recueillis sur les lectrodes. La MEG nest apparue que vers les annes 1970, car les champs magntiques crbraux sont trs faibles et nont pu tre enregistrs quaprs le dveloppement de capteurs trs sensibles, base de supraconducteurs basse temprature. Alors que lEEG a t dcouverte et essentiellement utilise par des neurophysiologistes, la MEG a t dveloppe par des physiciens qui ont privilgi son utilisation pour limagerie en essayant de localiser lorigine des activits lectriques donnant naissance aux signaux. Cette volont a conduit au dveloppement de systmes possdant des nombres croissants de capteurs, aussi bien en MEG quen EEG, afin de pouvoir disposer de meilleures informations sur la distribution spatiale du potentiel et du champ magntique afin den dduire une image tomographique de lactivit crbrale. Cependant, si linstrumentation a progress, les mthodes de localisation sont encore du domaine de la recherche. En effet, tant donn les nombreuses difficults poses par la reconstruction des sources, il nexiste pas lheure actuelle dalgorithmes de reconstruction des activits MEG-EEG fiables et prcis contrairement la TEP ou lIRMf.

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II - Principes de la MEG et lEEG

Lexcitation dun neurone travers une synapse entrane louverture de canaux ioniques au niveau de sa membrane. La composition ionique tant diffrente lintrieur et lextrieur des cellules, louverture des canaux engendre un mouvement de particules charges dans le milieu intra- et extra-cellulaire. Les courants intracellulaires dits sources ou primaires sont lorigine des champs lectriques et magntiques ; ils engendrent ensuite des courants extracellulaires dits secondaires ou volumiques qui maintiennent la conservation de la charge ; les lignes de courant ainsi formes se ferment aprs circulation dans le volume entier de la tte. Le champ magntique enregistr dans les systmes MEG est d lensemble des courants sources et volumiques. Toutefois, la contribution des courants volumiques est en gnral beaucoup plus faible que celle des courants sources. Au contraire, les diffrences de potentiel mesures entre deux lectrodes en EEG sont dues aux lignes de courant circulant la surface du scalp, et donc aux courants volumiques. De plus, les courants mesurables la surface de la tte doivent rsulter de la mise en synchronie dans le temps et lespace dassembles de cellules comportant au minimum environ 105 neurones dans quelques mm3 de cortex ; ces assembles sont typiquement contenues dans des macrocolonnes fonctionnelles denviron 3mm de rayon sur 3mm de profondeur. Les courants rsultant de lactivit dune macrocolonne sont modliss par un diple de courant dont la direction est donne par lorientation principale des dendrites cest--dire localement perpendiculaire la surface corticale et dont lamplitude reprsente lintgrale des densits de courant dans la colonne considre. Lamplitude moyenne dun diple rsultant de lactivit synchronise de 105 neurones est de lordre de 10 nA.m. En MEG et en EEG, on distingue plusieurs types de diples de courant suivant leur direction : en particulier on dsigne par source radiale un diple de courant ayant une direction perpendiculaire la surface de la tte, ce qui correspond principalement aux activations des gyri du cortex (cest--dire la surface apparente du cortex) ; au contraire, les colonnes de neurones disposes dans les sillons engendrent des diples tangentiels la surface du crne (figure 1). Ces deux types de sources ont des signatures trs diffrentes en MEG et en EEG et toutes les sources dorientations intermdiaires ont des signatures mixtes. Une caractristique importante de ces courants est leur faible vitesse de conduction. Un potentiel postsynaptique qui engendre les courants source dure environ 10 millisecondes. Comme les signaux MEG ou EEG peuvent tre chantillonns des frquences suprieures au kiloHertz, ces deux techniques

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(a)

(b)

Figure 1 : (a) Courants primaires et secondaires au niveau de la macrocolonne de neurones pyramidaux. (b) Dfinition des diples radiaux et tangentiels. Les diples dont la direction est radiale par rapport la surface du crne sont produits dans les gyri du cortex, alors que les diples de direction tangentielle sont mis par les sillons. (daprs Baillet et al., 2001)

sont les seules pouvoir observer la dynamique de lactivit crbrale de manire satisfaisante. Le premier trac EEG a t effectu en 1929 par le neurophysiologiste allemand Hans Berger qui a enregistr le rythme alpha dun patient trpan. Le principe de mesure est rest le mme jusqu nos jours, bien que les moyens techniques aient volu. Il consiste mesurer des diffrences de potentiel entre lectrodes disposes la surface de la tte, le contact lectrique tant assur par un gel conducteur. Le nombre dlectrodes utilises peut tre trs variable, allant de 20 lectrodes dans le montage international 10-20, longtemps utilis pour la clinique, des nombres plus importants (64, 128 voire 256), essentiellement rencontrs en neurosciences cognitives. Dans ce dernier cas, les lectrodes sont disposes dans un bonnet pos sur la tte du patient alors que, pour des enregistrements de plusieurs jours comme cest le cas en pilepsie, les lectrodes sont colles directement sur le scalp. tant donn quon ne peut pas mesurer de potentiel absolu, le choix dune lectrode de rfrence est indispensable. Quand la tension est mesure entre deux lectrodes successives, le montage est dit bipolaire. Le plus souvent, une seule lectrode est utilise comme rfrence pour lensemble des autres. Le choix de cette rfrence constitue lune des limitations de lEEG. En neurosciences cognitives, la technique de moyennage des tracs EEG ou MEG est trs souvent utilise. En effet, en sommant les tracs issus de la rptition dun mme stimulus (ou de la mme rponse motrice) dans la mme tche, il est possible de faire apparatre des

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composantes spcifiques, appeles rponses voques, avec un bon rapport signal sur bruit, fonction du nombre de stimulus prsents. Une rponse voque (appel potentiel voqu en EEG et champ magntique voqu en MEG) comporte souvent des composantes prcoces qui interviennent environ entre 20 et 150 millisecondes aprs le stimulus et qui sont principalement associes la perception sensorielle du stimulus mais aussi des comportements cognitifs tout comme le sont les composantes voques plus tardives. Grce cette technique, il a t possible dtudier de nombreux processus sensoriels, moteurs ou cognitifs. Le moyennage qui seffectue travers tous les essais dune mme exprience, et mme entre les sujets, suppose que les rponses crbrales sont reproductibles dun essai lautre et galement entre les sujets, ce qui est une hypothse forte. Actuellement, se dveloppent des mthodes statistiques qui ne ncessitent plus de moyennage intra- ou inter-individuel et qui analysent les donnes propres chaque sujet, essai par essai, afin dextraire les proprits dynamiques des signaux EEG (analyse temps-frquence, synchronies entre diffrentes aires ou techniques danalyse non linaire). Pendant longtemps, lanalyse de lEEG na concern que les proprits temporelles des signaux, lanalyse spatiale se rduisant ltablissement de cartes de potentiel obtenues partir dinterpolations des mesures. Linformation spatiale de lEEG na t utilise pour tenter de localiser les sources primaires que trs tardivement. Ceci est d au faible nombre dlectrodes utilises et la difficult de relier mathmatiquement les sources au potentiel enregistr (voir section suivante). Cest seulement avec lavnement de la MEG et avec son utilisation comme mthode dimagerie que des algorithmes de localisation sophistiqus ont t dvelopps et que le besoin dun nombre accru de capteurs sest fait sentir. Pour autant, jusqu lapparition de la TEP, lEEG a t la seule mthode qui permettait de mesurer une expression de lactivit crbrale et donc dobtenir des informations fonctionnelles. Cest en 1972 que David Cohen (physicien spcialiste des techniques de blindage au MIT) a effectu des enregistrements de champs magntiques crbraux, donnant ainsi naissance la Magntoencphalographie. Cette dcouverte tardive est due aux trs faibles valeurs des champs magntiques crbraux qui sont de lordre de la centaine de femtoteslas (10-15 T), cest--dire 1 milliard de fois plus faible que le champ magntique terrestre. La MEG sest dveloppe grce lapparition de capteurs de champ magntique trs sensibles, base de supraconducteurs basse temprature. Ces capteurs utilisent des bobines rceptrices de flux couples des anneaux supraconducteurs appels SQUIDS (Superconducting Quantum Interference Device) qui transforment le flux magntique en tension lectrique et qui ont t invents par Jacques Zimmerman en 1970. Lensemble des capteurs est plong dans de lhlium liquide pour assurer le refroidissement des composants supraconducteurs et est confin lintrieur dun cryostat.

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Les champs magntiques du cerveau tant extrmement faibles, ils doivent tre isols des champs magntiques externes. cet effet, un blindage peut se faire de diffrentes faons. Au niveau du capteur, la bobine rceptrice de flux est souvent un gradiomtre form de deux ou plusieurs bobines couples en opposition de phase, qui permet de mesurer le gradient du premier ou du second ordre du champ magntique dans la direction radiale par rapport la surface de la tte ou dans des directions tangentielles. Lopration de gradient limine les champs magntiques qui varient lentement dans lespace, ce qui est le cas en gnral des champs externes parasites, alors quil perturbe peu les champs magntiques crbraux qui dcroissent vite en fonction de la distance de la source. Des systmes de correction supplmentaires sont apports en mesurant le champ externe sur des capteurs loigns de la tte et lannulation de ces champs au niveau des capteurs MEG est ralise grce un filtrage spcifique. La protection la plus efficace est cependant de placer le systme de mesure dans une chambre blinde forme de parois en mtal qui attnue dun facteur 103 104 les champs magntiques extrieurs. cause de la chambre blinde et de la technologie des supraconducteurs basse temprature, la MEG est une technologie dimagerie relativement coteuse, du mme ordre de grandeur que lIRMf. Nanmoins, ces dernires annes ont t les tmoins davances spectaculaires dans linstrumentation. Alors que les premiers systmes commercialiss ne comportaient que peu de capteurs de lordre de 1 30 et ne couvraient quune partie du cerveau, trois compagnies (CTF, Vancouver ; BTI, San Diego fusionne avec Neuromag, Helsinki) commercialisent lheure actuelle des systmes comportant un casque de plus dune centaine de capteurs SQUIDS, qui couvre la tte entire. De plus, ces nouveaux systmes permettent des enregistrements simultans MEG-EEG dont nous verrons ci-aprs les avantages. La figure 2 montre le systme MEG-EEG de la compagnie CTF install la Piti-Salptrire. Ce systme comporte 151 capteurs MEG et offre la possibilit denregistrer simultanment 64 canaux EEG avec des frquences dchantillonnage pouvant atteindre 2,5 kHz. La MEG et lEEG nont pas la mme sensibilit selon lorientation des sources. Ainsi les sources radiales donnent un champ magntique trs faible, voire nul, alors quelles produisent des potentiels trs levs. De plus, le champ magntique dcrot plus rapidement avec la distance entre le capteur et le diple que le potentiel (respectivement en 1/R2 et 1/R) et de ce fait, les contributions des sources profondes aux enregistrements effectus sur le scalp sont plus importantes en EEG quen MEG. La MEG et lEEG ont donc des proprits complmentaires qui justifient la ncessit deffectuer des enregistrements MEG et EEG coupls afin de pouvoir

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dtecter avec la meilleure prcision lensemble des gnrateurs quelles que soient leurs orientations et leurs profondeurs.

(b)

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(a)

(c)

Figure 2 : (a) Le systme MEG/EEG install lHpital La Salptrire comportant 151 capteurs MEG et 64 canaux EEG. (b) Une photographie du casque portant les bobines rceptrices. (daprs CTF, Vancouver) (c) Un schma du dispositif des capteurs avec lemplacement des gradiomtres et le rservoir hlium liquide.

III - La localisation des sources

Il est frquent de dtecter en TEP ou en IRMf les mmes zones dactivation pour deux tches cognitives diffrentes. Le seul moyen de mettre alors en vidence des modes de fonctionnements diffrents du cerveau si ils existent est dtudier la dynamique dactivation spatiotemporelle des rseaux impliqus. La localisation des sources en MEGEEG soulve de nombreuses difficults et suscite actuellement dintenses recherches. Une premire difficult rside dans le problme direct, savoir la modlisation de la production des champs magntiques et des potentiels recueillis sur le scalp et engendrs par une configuration de sources connues. Ce problme ncessite la prise en compte de la gomtrie et des proprits de conduction de tous les tissus crbraux. Or, les constituants du cerveau ont une gomtrie complexe et dautre part leurs conductivits

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sont mal connues et difficiles mesurer. De plus, le problme inverse, cest--dire lestimation des sources de courant en accord avec les modles du problme direct et les donnes nadmet pas de solution unique en vertu de lois fondamentales de la physique (Helmholtz, 1853). En effet, des configurations de sources diffrentes peuvent donner lextrieur dun volume conducteur les mmes grandeurs lectromagntiques. Une autre difficult est le faible nombre de mesures recueillies un instant donn car mme dans les systmes les plus modernes il natteint gure plus de 300 mesures. En comparaison, le nombre de mesures utilises en TEP ou en IRMf pour reconstruire les images tomographiques est de lordre de 100 000 1 000 000. Il faut donc dune part, dvelopper des modles ralistes pour le problme direct et, dautre part, introduire des contraintes sur la recherche des sources ou introduire des informations a priori dans le problme inverse.

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1. Le problme direct
Les courants secondaires, de conduction, sont proportionnels la conductivit du tissu et au champ lectrique qui rgne en chaque point. Or le potentiel et le champ magntique recueilli sur le scalp dpendent la fois des courants primaires et des courants volumiques. Il est donc ncessaire de modliser lensemble des structures crbrales ainsi que leurs enveloppes et de connatre les valeurs locales de conductivit de chacun des milieux. Il existe dans la littrature une grande diversit des valeurs de ces conductivits qui, le plus souvent, ont t mesures in vitro ou in vivo sur des animaux anesthsis. Malgr lhtrognit de ces valeurs, deux proprits essentielles se dgagent : los du crne a une conductivit beaucoup plus faible que lensemble des autres tissus (approximativement un rapport de 1/80) et sa conductivit est anisotrope cest--dire que sa valeur dpend de la direction du courant. En effet, le crne a une conductivit dans les directions tangentielles sa surface environ 3 fois plus leve que dans la direction radiale. On peut montrer que ces diffrences sont responsables de la grande diffusion des lignes de potentiel la surface du scalp. Par contre, le champ magntique nest que trs peu perturb par les diffrences de conductivit entre les milieux et il est donc trs peu dform par la prsence de los. Cest ce qui explique que la MEG a une meilleure dfinition spatiale que lEEG ce qui se traduit sur le scalp par des rponses plus focales en MEG quen EEG. Pour calculer de faon exacte les potentiels et les champs magntiques produits par les activits neuronales, il est ncessaire de construire des modles dits ralistes des diffrents tissus de la tte. Ces modles se construisent pour chaque sujet individuellement partir de leur IRM anatomique. Des mthodes de traitement dimages permettent alors dextraire les diffrentes structures crbrales. Pour le problme

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direct en EEG et en MEG, les structures dintrt sont la peau, los du crne et la moelle osseuse, le liquide cphalo-rachidien, la matire blanche et la matire grise. Cependant des modles simplifis supposent trois milieux de conductivit homogne : la peau, los et lespace intracrnien. Les calculs de champ et de potentiel ncessitent la construction de maillages des interfaces entre les diffrents milieux. La figure 3(a) montre un exemple de ces maillages des surfaces de la peau et des surfaces externes et internes de los obtenues partir dune image anatomique dun sujet. Les figures 3(b,c,d) montrent le champ magntique, produit par une source situe dans le cortex auditif, sur les trois interfaces calcules partir de ce modle ; les figures 3(e,f,g) montrent le potentiel produit par la mme source. Il est clair que le champ magntique nest que trs peu dform par les diffrents milieux alors que le potentiel est trs diffus par la mauvaise conductivit osseuse.

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Figure 3 : (a) modle raliste, (b,c,d) champ magntique et (e,f,g) diffusion du potentiel.

2. Le problme inverse
Le problme inverse en MEG ou EEG a donn lieu dintenses recherches ; les diffrentes approches utilises varient en fonction des caractristiques du modle de sources considr. Le problme inverse, appel reconstruction dans les autres mthodes dimagerie tomographique, consiste estimer la distribution des sources de courant ayant produit les champs magntiques et/ou les potentiels lectriques mesurs la surface du scalp, chaque source est reprsente par un diple de courant caractris par six paramtres (trois pour la position, deux pour lorientation et un pour lamplitude).

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tant donns le faible nombre de donnes et la non-unicit de la solution, il est ncessaire de restreindre lespace de recherche des solutions, en faisant des hypothses a priori sur la rpartition des sources. Les mthodes dipolaires, qui ont t les premires utilises et qui sont les plus employes encore lheure actuelle, considrent que lactivit lectrique crbrale est concentre dans un petit nombre daires dont la dimension est petite compare leur distance aux capteurs. Lactivit dans chacune des aires peut donc tre assimile celle dun seul diple, le diple de courant quivalent, dont on cherche les paramtres qui minimisent lerreur de moindre carr (encore appele variance rsiduelle) entre les champs mesurs et ceux qui seraient produits par la configuration de sources estimes. Ces champs sont calculs par le problme direct. Le cas le plus simple est celui o lon considre un seul diple ou quivalent dipolaire ; mais en fait il est le plus souvent ncessaire de considrer lexistence de plusieurs diples et plus ce nombre est important, plus le problme devient ambigu. En gnral, pour avoir une solution, le nombre de paramtres estimer (soit 6 par diple) ne doit pas excder celui du nombre des donnes. Par exemple, des donnes EEG recueillies dans le montage international utilisant 20 lectrodes ne pourront pas tre expliques avec plus de 3 diples. Dans le cas de la MEG, comme les sources radiales sont silencieuses dans un modle de tte sphrique, on ne recherche que des diples dorientation tangentielle, ce qui rduit cinq le nombre de paramtres estimer par source. Bien que lactivit crbrale ait une structure souvent complexe qui ne peut pas toujours tre explique par des modles dipolaires de source, il a t montr que ces modles sappliquaient bien aux composantes prcoces des rponses voques et que les solutions trouves taient en gnral compatibles avec les connaissances neurophysiologiques des fonctions sensorielles ou motrices. Dans ces conditions, la prcision de localisation peut tre de quelques millimtres en MEG et un deux centimtres en EEG. Une avance significative dans les mthodes dipolaires a t introduite en traitant plusieurs chantillons temporels successifs dans le problme inverse [SCH86]. En effet, tant donn les temps dvolution des potentiels post-synaptiques, il est peu vraisemblable que la distribution des sources varient fortement dun chantillon du signal au suivant. Ainsi, les mthodes spatio-temporelles dveloppes par Scherg et von Cramon considrent que la position des sources reste fixe dans une fentre temporelle donne, leurs paramtres de position tant ajusts en fonction de lensemble des donnes dans lintervalle de temps considr. Actuellement, tous les systmes MEG sont accompagns de logiciel utilisant galement des algorithmes spatio-temporels. Cependant, les mthodes dipolaires ne peuvent pas expliquer des donnes qui traduisent lactivit de rseaux tendus de neurones. Cest pourquoi des mthodes utilisant des modles de sources distribues ont t dveloppes pour saffranchir des limitations des mthodes dipolaires. Ces approches sinspirent des mthodes de reconstruction tomographique : elles considrent un grand nombre de diples rpartis rgulirement dans une partie ou dans la

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totalit du volume crbral. Des contraintes anatomiques peuvent alors tre introduites en restreignant le volume de recherche la surface corticale. Celle-ci peut tre extraite partir de lIRM anatomique et pave dun grand nombre de diples. De plus, comme les courants sont mis par les dendrites de neurones disposs perpendiculairement au cortex, lorientation de chaque diple peut tre contrainte tre perpendiculaire cette surface et seule lamplitude des diples reste dterminer [BAI 97]. La difficult rside dans le fait que le nombre de diples est trs grand et que la reconstruction de lamplitude est alors un problme inverse sous-dtermin quil convient de rgulariser en ajoutant des contraintes sur la forme des solutions. Une faon de rduire en partie cette indtermination est de combiner des signaux MEG et EEG dans un mme problme inverse qui permet de mieux exploiter la complmentarit entre les deux jeux de donnes et de restreindre les ambiguts sur les solutions. La figure 4 prsente un exemple de reconstruction de rseaux

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Figure 4 : La complmentarit de lEEG et de la MEG est illustre par ces reconstructions raliss partir des deux techniques denregistrement. Sur la reconstruction MEG (en haut), les zones actives sont plus restreintes que sur la reconstruction EEG (au milieu).Ceci est d au fait que les assembles de neurones situes dans la profondeur du cerveau contribuent trs peu aux signaux MEG, tandis que la mauvaise rsolution spatiale de lEEG lisse lexcs les zones rellement actives. La combinaison des deux types de donnes (en bas) rvle des zones difficilement dtectables par chacune des mthodes utilise sparment.

pileptognes partir de lapparition de pointes intercritiques dans les signaux MEG et EEG. La ligne du haut reprsente les rgions actives sur une vue de ct et de dessous du cortex, estimes partir de signaux MEG, celle du milieu reprsente les zones reconstruites partir de signaux

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EEG enregistrs simultanment ceux de la MEG, enfin, la ligne du bas, les zones reconstruites en utilisant les deux jeux de donnes. Le rseau activ reconstruit en MEG est plus restreint que celui reconstruit en EEG. Ceci est d au fait que les sources profondes et radiales ne contribuent que trs peu aux signaux MEG et que la mauvaise rsolution spatiale de lEEG entrane des reconstructions trs lisses des zones rellement actives. La fusion entre les deux jeux de donnes permet la fois destimer des zones qui sont difficilement dtectables en MEG et dobtenir des distributions plus focales des activations.

IV - Les applications en neurosciences cognitives

LEEG et la MEG permettent de localiser les aires de projection sensorielle primaire (visuelles, auditives et somesthsiques) et de mettre en vidence leur organisation rtinotopique, tonotopique et somatotopique, ainsi que la plasticit de ces organisations. Ils permettent galement d'tudier la transmission de messages sensoriels vers le systme moteur ainsi que la synchronisation de lactivit de rseaux neuronaux distribus dans diffrentes rgions crbrales fonctionnellement interdpendantes. Leur utilisation en neurosciences cognitives permet dtudier la perception et laction, le langage, la mmoire, l'apprentissage, l'attention, etc. Enfin, le caractre totalement non invasif de ces techniques permet deffectuer des recherches chez l'homme normal, au cours du dveloppement et du vieillissement, ainsi que chez des patients psychiatriques ou neurologiques. Le champ des applications de la MEG-EEG est donc trs tendu. Dans cette dernire section nous prsentons plus spcialement des rsultats rcents portant sur le codage des reprsentations du corps et plus particulirement sur la plasticit de ces reprsentations. Il est en effet tout fait extraordinaire de constater combien le vcu conscient de certaines pathologies saccompagne de modifications non conscientes des reprsentations du corps qui peuvent nouveau se modifier en fonction du processus thrapeutique. Les premiers travaux raliss en MEG sur ltonnante plasticit des reprsentations corticales du corps datent seulement de 10 ans [MOL 93]. Ces chercheurs ont travaill sur des adolescents atteint de syndactylie, malformation congnitale des mains dont seules les premires phalanges des doigts sont prsentes mais soudes les unes aux autres ce qui ne permet pas dexcuter lopposition du pouce et de lauriculaire et donc les rend incapables de se servir des objets usuels. Ces patients sont oprs ladolescence et les phalanges sont spares par chirurgie de sorte que lopposition pouce/petit doigt puisse seffectuer. En fait, chez des adolescents normaux, le MEG permet de tracer trs prcisment la position des reprsentations des doigts dans le cortex sensoriel primaire et dobserver, sur une distance denviron 2cm, un ordonnancement des reprsentations distinctes de chacun des 5 doigts, du pouce jusqu

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lauriculaire. Chez les adolescents atteints de syndactylie, les reprsentations de leurs doigts sont indiffrentiables les unes des autres. Cependant, en moyenne 24 jours aprs lopration, aprs avoir appris raliser lopposition pouce/auriculaire et prendre des objets dans leur main, les positions des reprsentations de leur pouce et de leur auriculaire deviennent clairement distinctes et se situent dans le cortex aux mmes emplacements que chez des sujets contrles. Cette plasticit tonnante des reprsentations fines du corps existe aussi chez ladulte en particulier chez les patients amputs des membres qui se plaignent trs souvent de douleurs associes la sensation de membre fantme . Celle-ci, parfois extrmement dsagrable, est souvent provoque par le toucher du visage, lors du maquillage chez la femme ou du rasage chez lhomme. Jusqu une poque rcente, on conseillait ces patients daccepter la perte de leur membre et den faire le deuil sans que ce soutien psychologique modifie rellement leurs douleurs. En fait, les travaux de [FLO 95] en MEG et ceux de Ramachandran ont clairement montr que, bien au contraire, les thrapies qui pouvaient tre efficaces devaient permettre au patient de conserver une reprsentation mentale consciente et active du membre amput. En effet, Flor et al. ont montr que le territoire cortical qui tait occup par le bras amput tait en fait littralement colonis, aprs lamputation, par les reprsentations du visage du patient [FLO 95] ; de plus, ils ont galement montr que la douleur du membre fantme tait dautant plus forte que ce degr de colonisation tait fort. Comme on sait par ailleurs que toute reprsentation mentale du corps en mouvement voque des activits neuronales identiques en grande partie aux activits enregistres pendant lacte moteur lui-mme, cet ensemble de rsultats a permis de suggrer des thrapies nouvelles o la colonisation des territoires corticaux par des reprsentations inadquates est rendue impossible en gardant une reprsentation mentale vivace du membre absent. De fait, cette rducation est efficace dans un grand nombre de cas. Dailleurs, trs rcemment, il a t montr [GIR 01], en utilisant cette fois-ci lIRMf, chez un patient amput des deux mains et dont les reprsentations corticales des mains avaient disparu au profit dextensions des reprsentations du visage, quaprs la greffe de deux nouvelles mains, les reprsentations corticales des mains reprenaient leurs places initiales en roccupant les territoires corticaux qui leur appartenaient. Les travaux rcents effectus dans ce domaine de la plasticit des reprsentations corticales du corps au centre MEG-EEG de la PitiSalptrire [MEU 01] sont galement exemplaires des progrs raliss dans la comprhension des mcanismes de la dystonie et en particulier de la crampe de lcrivain, maladie parfois trs handicapante et trs difficile rduquer. La dystonie a un large spectre clinique, de la forme prcoce et gnralise, dont lorigine gntique est tablie, aux formes tardives, dont lorigine gntique est inconnue. Pour ces dernires, le rle important de la

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rptition des tches a souvent t mis en avant dans lapparition de la maladie bien quaucun trait de vulnrabilit nait pu tre mis en vidence ce jour. Nous avons rcemment tudi 23 patients atteints de dystonie occupationnelle unilatrale (ne touchant strictement quune seule main) et compar les reprsentations des doigts de leurs mains avec celles de 20 sujets normaux. Lhypothse principale de ce travail tait que la maladie devait modifier la reprsentation corticale des doigts de la main dominante : dfaut dordonnancement des doigts et/ou superposition des reprsentations de plusieurs doigts. Contrairement cette hypothse de travail, une faible dsorganisation des reprsentations des doigts de la main dominante et dystonique a t en gnral observe sauf pour quelques patients trs atteints. En revanche, une dsorganisation drastique des reprsentations corticales de la main non dominante et non dystonique a t mise en vidence, cette dsorganisation tant dautant plus forte que lexpression de la maladie dans la main dominante tait forte. Linterprtation que nous avons faite de ces rsultats surprenants est que, dans lhmisphre non dominant, linn, cest--dire lexpression gnique quasi pure de la maladie, est observ alors que les reprsentations quasi normales dans lhmisphre dominant traduiraient des rorganisations bnfiques acquises en raction contre lexpression des gnes, sauf pour les quelques patients trs atteints pour lesquels en quelque sorte les gnes lemportent. Lensemble de ces tudes montre donc des variations plastiques des reprsentations corticales du corps qui sont produites par des interactions entre le comportement, lexpression des gnes et les effets correcteurs des thrapeutiques et de la rducation. La puissance dexploration du fonctionnement crbral chez lhomme que nous donnent ces instruments commence donc littralement rvolutionner notre conception dun fonctionnement crbral rigide et non plastique. Ces nouveaux instruments devraient aussi contribuer mieux dcrire et connatre, dans le futur, la part de linn et de lacquis dans certains comportements.

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Bibliographie
[BAI 97] BAILLET S., GARNERO L. A Bayesian framework to introducing anatomo-functional priors in the EEG/MEG inverse problem , IEEE Trans. Biomed. Eng., 44, 374-385. [GIR 01] GIRAUD P., SIRIGU A., SCHEINDER F., DUBERNARD J.M. Cortical reorganization in motor cortex after graft of both hands , Nature Neuroscience, 4, 691-692. [MEU 01] MEUNIER S., GARNERO L., DUCORPS A., MAZIRES L., LEHRICY S., TEZENAS DU MONTCEL S., RENAULT B., VIDAILHET M. Human brain mapping in dystonia reveals both endophenotype traits and adaptative reorganization , Annals of Neurology, 50, 521-527. [MOL 93] MOLGINER A, GROSSMAN J.A.I., RIBARY U. et al. Somatosensory cortical plasticity in adult humans revealed by magnetoencephalography , PNAS, 90, 3593-3597. [SCH 86] SCHERG M., VON CRAMON D. Evoked dipole source potentials of the human auditory cortex , Electroenceph. Clin. Neurophysiol. 65, 344-360. [FLO 95] FLOR H., ELBERT T., KNECHT S., WIENBRUCH C., PANTEV C., BIRBAUMER N., LARBIG W., TAUB E. Phantom-limb pain as a perceptual correlate of cortical reorganization following arm amputation , Nature, 375, 482484.

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Imagerie mdicale : les techniques photoniques de l'UV aux IR

Serge MORDON Pavillon Vancostenobel, CH&U de Lille EA 2689 - Inserm IFR 114, Lille
ml : mordon@lille.inserm.fr Les techniques photoniques offrent aujourd'hui une approche performante en imagerie mdicale. La lumire peut schmatiquement sutiliser de trois manires : i) mission de photons et recueil de ceux qui traversent les tissus, ii) envoi de lumire sur un tissu et recueil des photons qui sont t r-mis par un mcanisme de rflexion ou iii) ceux mis par un mcanisme de fluorescence. L'imagerie par transillumination est principalement utilise pour la mammographie optique. L'imagerie de fluorescence est bien adapte pour la dtection prcoce de tumeurs. La tomographie par cohrence optique (OCT) offre des performances uniques en terme de rsolution spatiale. Mots clefs : lumire, photon, image mdicale, transillumination, fluorescence, tomographie

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Introduction
Longtemps, laccs lintrieur du corps humain a ncessit un acte chirurgical. Pour quun regard exerc puisse observer un organe, cest--dire que la lumire rflchie par lorgane puisse tre analyse par un il humain, il fallait faire usage du bistouri. Grce au dveloppement des fibres optiques, nombre dactes invasifs ont t limins. Par lintermdiaire de lendoscope, tout se passe comme si lil du mdecin tait transport au sein des organes. Le moyen est spectaculairement efficace et a boulevers nombre de pratiques mdicales. Mais il ne donne pas accs des caractristiques des tissus qui, du point de vue de la lumire, soient diffrentes de celles qui sont simplement analysables par lil. En revanche, des objets qui, lil nu, demeureraient invisibles, sont rvls par plusieurs mthodes non invasives qui, selon les cas, font appel des principes physiques forts diffrents : rayons X, rsonance magntique nuclaire, ultrasons ou mission de positons. Dans cette palette d'outils d'imagerie, la lumire sest jusqu prsent signale par son absence : les photons de longueurs donde du visible ou du proche visible taient inutilisables cet effet. Mais, sous limpulsion de progrs dans la technologie des sources de lumire et des dtecteurs, la situation volue rapidement. La lumire offre un avantage considrable sur les rayons X : son innocuit. Cette proprit physique entrane des consquences potentielles

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videntes : simplicit de mise en uvre des appareils, possibilit de renouveler lexamen sans risque, etc. Mais ne rvons pas : cause de sa forte absorption par les tissus biologiques, la lumire ne peut prtendre supplanter toutes les techniques existantes. Aujourdhui, elle est considre comme un complment utile, et seulement dans certains cas, un concurrent srieux. Il est dailleurs difficile de parier sur le succs des diverses filires. Dans les laboratoires de recherche, lheure est encore au foisonnement des principes techniques. Plusieurs applications ont suscit llaboration de prototypes, quelques-uns ont atteint le stade de lvaluation clinique ; enfin certains ont conduit de vritables appareils mdicaux qui sont progressivement mis en uvre dans les hpitaux. Pour obtenir des informations sur la prsence de tumeurs dans des tissus biologiques, la lumire peut schmatiquement sutiliser de trois manires. La premire consiste mettre des photons et recueillir ceux qui traversent les tissus. Au bout de leur parcours, lanalyse des diverses modifications quils ont subies dessine une image de la structure interne traverse : lensemble des techniques fondes sur ce principe trs gnral est regroup sous le nom dimagerie optique dorganes par transillumination. Mais on peut aussi, aprs lenvoi de lumire sur un tissu, recueillir les photons qui auront t r-mis par un mcanisme de rflexion ou ceux mis par un mcanisme de fluorescence. Dans ces deux cas, source de lumire et dtecteur sont placs du mme ct du tissu.

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Imagerie par transillumination

Avant dentrer dans le dtail de limagerie par transillumination, introduisons quelques notions fondamentales sur la propagation de la lumire dans les tissus. Le sort dun photon incident peut tre triple. Premire possibilit (sans aucun intrt du point de vue de la transillumination), le photon est rflchi par la surface du tissu. Deuxime possibilit : il est absorb lintrieur du tissu, cest--dire quen cdant son nergie au milieu, il disparat en tant que photon. Enfin, troisime possibilit, il est diffus lors de son parcours au sein du tissu : en effet, la probabilit quil ne rentre pas en collision avec les molcules du milieu et quil poursuive une trajectoire rectiligne est trs faible ; plus nombreuses sont les modifications de trajectoire, plus grande est la diffusion. Enfin, mentionnons que limportance des trois phnomnes dpend fortement, dun part, de la nature du tissu et, dautre part, de la longueur donde du photon. Pour faire de limagerie dorganes, il faut videmment pntrer en profondeur les tissus, donc choisir une longueur donde peu absorbe. Cest le cas des longueurs donde situes dans le rouge et le proche infrarouge : une fentre optique souvre ainsi entre 600 nm et 1 300 nm (figure 1). Pour sen convaincre, il suffit de regarder sa main place devant

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une ampoule lectrique allume : seul, le rouge passe , les autres couleurs sont absorbes. Le phnomne de diffusion, quant lui, entrane rapidement une perte de cohrence de la lumire mise par la source. Autrement dit, le dtecteur ne sait plus d'o viennent les photons qui lui parviennent : l'image est floue et inutilisable. La diffusion augmentant naturellement avec lpaisseur, la transillumination sest trouve longtemps limite des structures tissulaires ne dpassant pas quelques millimtres. Ce nest plus le cas aujourdhui : plusieurs techniques, reposant sur des principes diffrents, autorisent la constitution dimages correctes sur quelques centimtres dpaisseur [1].

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Figure 1 : Spectres d'absorption de diffrents chromophores prsents dans les tissus biologiques. (illustration de l'auteur)

La premire consiste diviser la surface explorer, celle dun sein pour une mammographie par exemple, en petits carrs de 1mm par 1mm. Un faisceau laser de petit diamtre (un faisceau collimat ) balaie cette surface, pendant quun dtecteur plac de lautre ct du sein effectue le mme dplacement. En chacun des petits carrs, une mesure est ralise. Une autre technique dveloppe par Philips consiste utiliser un illuminateur constitu de multiple fibres d'excitation et de recueil. Le balayage mcanique du faisceau est remplac par larrangement de multiples fibres optiques, utilises alternativement la fois pour lillumination et, en face oppose, pour le recueil des photons (figures 2a, 2b) [2].

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Figure 2a : Illuminateur pour mammographie optique dvelopp par la Socit Philips.

Figure 2b : Systme de mammographie dvelopp par la Socit Philips.

Lavantage dune telle mthode, par ailleurs coteuse en temps de mesure, sapprcie sur la diffusion : en effet, on conoit que celle-ci soit proportionnelle au nombre de molcules que peuvent rencontrer les photons dans leur parcours, cest--dire au volume de tissu illumin. En illuminant chaque fois un petit volume, on rduit dautant leffet de la diffusion. Il suffit ensuite, pour constituer une image globale, dassembler les mesures individuelles la fin du balayage. Si le contraste obtenu nest

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pas suffisant, il est encore possible de raliser une mesure supplmentaire, laide dune source lumineuse dune autre longueur donde. Lattnuation du faisceau tant variable en fonction de la longueur donde, on augmente ainsi les chances dobtenir assez dinformations pour dtecter la prsence dune tumeur et en tracer des contours prcis (figure 3). C'est la solution retenue par les socits dveloppant aujourd'hui de tels systmes. Ainsi, Hamamatsu, qui a dvelopp le premier appareil de mammographie optique sur ce principe, utilise deux longueurs d'onde (830nm et 630 nm) [3]. Siemens a recours 4 longueurs d'onde (690nm, 750nm, 788nm et 856nm). Chez Mediphotonics Laboratory, on met en uvre un principe totalement diffrent qui, pour limiter la diffusion, ne rduit pas la taille du faisceau [4]. Ici, lide consiste jouer sur le temps de vol des photons illuminant une surface relativement large. En effet, les photons, pntrant au mme instant sur une face dun organe, ne se propagent pas dans le tissu selon des trajectoires parallles et identiques. Par consquent, ils natteignent pas le dtecteur sur la face oppose en mme temps. Schmatiquement, on peut distinguer trois types de photons. Les premiers, les photons dits balistiques , se propagent en ligne droite et parviennent donc les premiers sur le dtecteur. On sait quils sont rares, mais on peut

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Figure 3 : Cette technique consiste mettre des photons laide dun laser et recueillir puis analyser ceux qui ont travers les tissus. Limage (a) prise en rayons X montre une tumeur bnigne visible sur limage de transillumination (b). Celle-ci est obtenue partir de deux clairages deux longueurs donde qui rvlent mieux les contrastes (c et d). Limage (e) en rayons X fait apparatre une tumeur maligne quon voit nettement en transillumination (f ). (document Socit Hamamatsu Photonics).

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calculer leur temps de vol thorique : la vitesse de la lumire, 170 picosecondes sont ncessaires pour traverser en ligne directe 5 cm de tissu biologique. La deuxime espce de photon est appele quasibalistique . Plus imag, ladjectif anglais qui leur est appliqu, snake-like, (serpentine en franais) indique que leur trajectoire reproduit le dessin dun serpent (figure 4). Ces photons subissent des modifications de trajectoires limites et sont donc peu retards : pour les mmes 5 cm dpaisseur, ils sont dtects entre 240 et 290ps. Si lon sait fabriquer lquivalent dun obturateur ne souvrant que pendant ce court instant, on imagine que limage recueillie sera contraste : une ombre se dessinera l o ne seront pas parvenus les photons absorbs par une tumeur.

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Figure 4 : Les photons ne se propagent pas tous de la mme manire dans un tissu. Certains ont un trajet dit balistique (en ligne droite), dautres, un trajet sinueux (les quasibalistiques) et dautres, les plus nombreux, diffusent dans le tissu et mettent plus de temps pour parvenir au dtecteur. Pour recueillir les photons quasi balistiques qui seuls permettent dobtenir une image nette, il suffit douvrir lobturateur pendant un trs court instant. (document Mordon - Science & Vie [5]).

En revanche, si le dtecteur est maintenu en rception aprs ces 290ps, le contraste disparat au fur et mesure quarrivent de toutes les directions la troisime espce : les photons diffuss. Trs rapidement, en cas dune mauvaise synchronisation ou dun lger retard dans louverture de lobturateur, limage se dgrade. Or, matriser des impulsions

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lumineuses de trs courtes dures (de lordre de la femto- ou picoseconde) requiert encore des prouesses technologiques. Lquipe de Mediphotonics a russi obtenir dexcellentes images laide de son prototype fonctionnant 527nm de longueur donde, avec des impulsions de 8ps. Le recueil des photons quasi balistiques seffectue par lintermdiaire dune camra CCD refroidie, quipe dun obturateur dont le temps de rponse est de quelques picosecondes. Lavenir de ce type dappareil dpend grandement des progrs de la technologie des trs courtes impulsions : si elle devient facile d'accs, la rapidit dobtention dune mesure devrait lui procurer un avantage certain sur les techniques balayage dcrites plus haut. Un troisime type dimagerie optique par transillumination a t trs rcemment mis en uvre par un laboratoire de luniversit de lIllinois. Pour exposer son principe, plus complexe que les prcdents, nous passerons par une analogie. Elle concerne le sol terrestre : Angstrm a montr au milieu du XIXe sicle que le sol nenregistre pas les mmes variations de temprature selon la profondeur. A moins dun mtre, on nobserve que les variations journalires (cycle nocturne et diurne), cest--dire des hautes frquences par comparaison avec les basses frquences des variations saisonnires : celles-ci sont enregistres jusqu une dizaine de mtres de profondeur. Bien videmment, tout ceci dpend de la composition des sols. Tirons-en cette simple leon : dans un milieu, la propagation dondes de diffusion seffectue diffremment selon leur frquence. Lide des chercheurs de lIllinois consiste tirer avantage de cette proprit pour des ondes diffusant dans un tissu biologique. Ils utilisent un faisceau laser mettant 690nm, dont ils font varier lintensit avec une frquence variable : ils modulent lamplitude du faisceau (de plusieurs mgahertz plusieurs gigahertz). Les informations recueillies sur le dtecteur renseignent sur les perturbations de propagation rencontres en fonction de la frquence. Celles-ci dpendant de la nature des tissus, il est envisageable de dtecter la prsence dun tissu anormal , cest-dire dune tumeur [6].

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Imagerie de fluorescence
Si la transillumination sort progressivement des laboratoires, lutilisation de la fluorescence est relativement dveloppe en biologie : cytomtrie, microscopie, etc. Schmatiquement, le principe consiste clairer ( exciter ) une molcule dans une longueur donde adapte, celle de labsorption maximale. Spontanment, la molcule revient ensuite de son tat excit son niveau dnergie fondamental : cette transition se traduit par lmission dun ou plusieurs photons. En mdecine, lophtalmologie fait dj couramment appel la fluorescence pour visualiser, dans le cas dangiographies rtiniennes, certaines structures vasculaires de lil. Depuis peu, dautres disciplines mdicales bnficient

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de cette technique, tout particulirement la cancrologie pour laide au diagnostic prcoce. Pour faire de limagerie de fluorescence, il faut que des tissus diffrents (tumoraux et sains) mettent une fluorescence spcifique. Elle peut tre naturelle : la plupart des tissus reclent en effet des molcules fluorescentes (des fluorophores endognes). Dans le principe, il est donc possible, aprs une excitation lumineuse unique, de discriminer les frquences de la lumire mise par tel ou tel tissu. Mais on peut aussi forcer le phnomne, en administrant des substances artificielles : des fluorophores exognes ayant une affinit spcifique pour le type de tissu que lon cherche identifier. On peut aussi avoir recours des marqueurs fluorescents qui traduisent un tat physico-chimique de leur environnement ou qui tmoignent de certaines activits mtaboliques : ces marqueurs du mtabolisme sont bien connus en microscopie de fluorescence pour la mesure du pH, du calcium ou du potassium dune cellule. Cette caractristique est singulirement utile quand on sait que le pH dune tumeur est plus faible que celui du tissu sain environnant [7,8]. Ltat doxygnation du tissu et lactivit lectrique dune cellule sont dautres facteurs spcifiques accessibles par cette technique. Toutefois, pour l'instant, la plupart de ces marqueurs nont t valus qu'in vivo chez l'animal. Il reste les mettre en uvre chez l'homme Diffrents paramtres permettent de caractriser un fluorophore : son spectre dexcitation (constitu gnralement de plusieurs longueurs donde dexcitation), son spectre dmission (avec plusieurs pics), et le temps mis par le fluorophore pour mettre aprs larrt de lexcitation (temps de relaxation ou constante de temps). La connaissance du spectre dexcitation du fluorophore permet de dterminer la (ou les) longueur(s) donde correspondant au meilleur rendement de fluorescence. La plupart des fluorophores biologiques prsentent un pic dexcitation dans lUV ou le bleu : malheureusement, ces longueurs donde, la pntration de la lumire dans les tissus est extrmement limite, elle ne dpasse pas quelques centaines de m. On est donc amen faire appel des fluorophores (endognes ou exognes) dont le pic dexcitation est situ plus loin dans le visible. Plus les longueurs donde sont dcales vers le rouge, plus le phnomne de diffusion devient prpondrant et dtriore la cohrence de la lumire. Pour chaque application, il sagira de trouver un compromis entre ces diverses contraintes. Lexcitation lumineuse choisie pour dclencher la raction dun fluorophore spcifique conduit toujours une fluorescence parasite des autres fluorophores du tissu. Dans la plupart des cas, on tente dliminer cet effet parasite par une discrimination spectrale (figure 5). Encore faut-il avoir pralablement identifi, dans les spectres dautofluorescence, les diffrences dues un tissu sain ou un tissu tumoral. Pour lestomac, par

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exemple, on sait dj reconnatre des variations significatives entre le tissu sain, lulcre gastrique et le tissu cancreux [9-11].

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Figure 5 : Limage endoscopique classique de ce tissu bronchique ne montre que ce qui pourrait tre visible lil nu. La superposition dune image de fluorescence rvle une tumeur (la tache en haut) qui navait pu tre dcele par la lumire classique. Cette technique utilise un fluorophore artificiel, lhmatoporphyrine dont on connat laffinit pour la tumeur. (document H. Kato- Socit Hamamatsu Photonics).

Des chercheurs de la British Columbia Cancer Agency de Vancouver ont mis en vidence un phnomne identique au niveau des bronches [12-14]. Pour effectuer une discrimination spectrale, une premire technique consiste faire des mesures d'intensit de la fluorescence mise, vue travers diffrents filtres : on slectionne ainsi les bandes spectrales caractristiques et limage rsultante est forme par soustraction ou division de deux ou plusieurs bandes. Ce faisant, le contraste entre la zone saine et la zone tumorale est renforc. Certains marqueurs, telles les fluorescines, ne prsentent pas un seul mais plusieurs pics dexcitation ; en revanche, le spectre dmission ne subit aucun dcalage de longueurs donde. Ici, la technique consiste donc exciter la molcule au moyen de plusieurs longueurs donde, et le recueil, via un filtre, se limite une seule frquence. C'est aujourd'hui la technique la plus utilise en clinique. On a essentiellement recours deux fluorophores exognes qui sont autoriss pour une utilisation en clinique humaine. Il s'agit de l'Hmatoporphyrine (ou Photofrin II) [15] [16] et surtout de l'ALA (Acide Amino Lvulinique) qui est un prcurseur de la protoporphyrine IX [17].

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En oncologie clinique, ces techniques de fluorescence peuvent tre utilement mises profit pour le dpistage de lsions cancreuses dbutantes, indtectables par lendoscopie classique. Prenons le cas des cancers bronchiques, cause majeure et croissante de la mortalit (73 pour 100 000 chez lhomme). Ils ne sont gnralement dcouverts qu un stade volu. Seulement 25% des malades diagnostiqus avec un cancer non petites cellules peuvent bnficier dune ablation chirurgicale, et le taux de survie 5 ans ne dpasse pas 20%. Ce sombre pronostic est susceptible dtre considrablement amlior avec une technique de fluorescence. Aujourd'hui plusieurs appareils ont atteint le stade de la commercialisation : ils sont bass sur la mesure de l'autofluorescence : le meilleur exemple est le LIFE (Lung Imaging Fluorescence Endoscope), mis au point par le British Columbia Cancer Research Center de Vancouver, Canada, et fabriqu par la socit Xillix. Ce systme sadapte un bronchoscope conventionnel, dans lequel le faisceau classique est remplac par une lumire laser bleue (442nm). Le recueil de la fluorescence est ralis au moyen dune camra CCD intensifie, connecte au faisceau image de lendoscope. La sensibilit de cette technique est environ deux fois meilleure celle de que la bronchoscopie classique (figures 6a, 6b, 6c). Sa parfaite innocuit et sa simplicit de mise en uvre en font un outil efficace pour le dpistage rgulier des populations risque. La socit Karl Storz commercialise elle aussi aujourd'hui un appareil d'imagerie de fluorescence. Cet appareil utilisable par voie endoscopique permet la mesure de la fluorescence de la protoporphyrine IX (Figure 7). Cet appareil est principalement utilis en Urologie, en Gyncologie et en ORL [18-23]. Outre la discrimination spectrale, on peut traiter linformation lumineuse par une discrimination temporelle. En effet, ds que lexcitation lumineuse cesse, la fluorescence steint progressivement, selon une constante de temps variable en fonction des molcules. Or, la plupart des fluorophores exognes ont un temps de relaxation plus long que les fluorophores endognes (figure 8). Certaines porphyrines mettent 3 5 fois plus de temps pour finir dmettre que les autres fluorophores (quelques nanosecondes, en moyenne). Lhmatoporphyrine, actuellement trs utilise en mdecine, fluoresce par exemple encore aprs 15ns. Il suffit donc dattendre ce laps de temps avant douvrir lobturateur de la camra : les fluorescences endognes seront teintes, et seule lhmatoporphyrine mettra le signal utile. Mais on retrouve ici un problme identique celui de la transillumination par impulsions : la technologie mettre en uvre est complexe. Une quipe du Politecnico de Milan a rcemment mis au point un appareil fonctionnant sur ce principe pour limagerie de tumeurs greffes

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chez lanimal. Douze heures aprs avoir inject de lHpD, un driv de

Figure 6a : Appareil LIFE commercialis par la Socit XILLIX.

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Figure 6b : Les images ci-dessus sont obtenues par une bronchoscopie classique. La lumire blanche conventionnellement utilise ne rvle aucune diffrence quant la nature de ces tissus bronchiques. (documentation Xillix)

Figure 6c : Dans les images ci-dessus, la lumire blanche a t remplace par la lumire bleue (442nm) du laser. La technique de fluorescence mise au point par LIFE permet de discriminer le tissu sain du tissu cancreux : limage de gauche, qui est saine, est homogne. Celle de droite montre une tche sombre lemplacement de la tumeur. (documentation Xillix)

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Figure 7 : Rsultats obtenus avec l'Appareil de la Socit Karl Storz.

Figure 8 : Deux manires de traiter linformation lumineuse : lexcitation lumineuse dun tissu une longueur donde donne (ici 470nm) dclenche la fluorescence de plusieurs molcules qui mettent diffrentes longueurs donde. Connaissant le spectre spcifique du fluorophore recherch, il est possible de lidentifier en pratiquant une discrimination spectrale (A). On peut aussi pratiquer une discrimination temporelle (B). Les fluorophores exognes (artificiels) ont un temps dmission plus long (t2). On peut ainsi attendre pour dtecter le signal utile que tous les autres signaux se soient teints (aprs 6ns). (document Mordon - Science et Vie [5])

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lhmatoporphyrine, on obtient une image parce que le tissu sain a limin le produit tandis que le tissu tumoral la retenu. Le recueil de la fluorescence a lieu 15ns aprs lmission, par un laser azote, dune impulsion de 1ns ayant une puissance moyenne de 10mW [24].

La tomographie par cohrence optique (OCT)

Enfin, il n'est pas possible d'voquer les diffrentes techniques d'imagerie optique sans parler de celle qui est aujourd'hui la plus aboutie : la tomographie par cohrence optique. Cette technique est analogue l'imagerie ultrasonore qui est base sur l'utilisation d'ondes ultrasonores. La tomographie par cohrence optique est base elle sur l'utilisation d'ondes lumineuses. Trs schmatiquement, cette technique reprend le principe de l'interfromtre de Michelson afin de crer des franges d'interfrence. La lumire produite par une source laser infrarouge (soit une diode laser 830nm ou 1270nm, soit un laser titane-saphir) est divise en deux faisceaux, un faisceau rfrence et un faisceau envoy sur le tissu biologique (figure 9).

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Figure 9 : Schma de principe d'un tomographe cohrence optique. D'aprs "In Vivo Tissue Measurements with Optical low Coherence Tomography" par E. Lankenau, J. Welzel, R. Birngruber, R. Engelhardt, Medical Laser Center Lbeck, Allemagne.

Ce faisceau illumine le tissu, directement ou via une fibre optique. La lumire rtro-diffuse par tissu est dtecte. Le signal provenant du faisceau rfrence et le signal provenant du tissu produisent un signal d'interfrence. Grce au dplacement latral vitesse constante de ce faisceau, la mesure est reproduite diffrents points de l'chantillon sur une distance de plusieurs millimtres. La mesure en profondeur est obtenue grce la modification du trajet optique du bras rfrence. Le traitement informatique de ces signaux permet de construire des images en noir et blanc ou bien en fausses couleurs. La rsolution est telle qu'il est possible d'obtenir de vritables biopsies tissulaires en quasi-temps rel. Aujourd'hui plusieurs systmes sont commercialiss avec des rsolutions latrale et axiale pouvant atteindre de 4 20m jusqu' des profondeurs de

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l'ordre de 2mm. L'utilisation d'une fibre optique permet d'utiliser ce systme par voie endoscopique. Un tomographe cohrence optique diode laser (puissance 0,6mW, frquence de balayage 150Hz) permet d'obtenir une image 200x200 pixels, en moins d'une seconde avec une rsolution latrale de 4m (figure 10).

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Figure 10a Mesure ralise in vivo par un OCT dun nevus baso-cellulaire de lavant bras. (dimensions de limage 4mm*1,5mm.). D'aprs "In Vivo Tissue Measurements with Optical low Coherence Tomography" par E. Lankenau, J. Welzel, R. Birngruber, R. Engelhardt, Medical Laser Center Lbeck, Allemagne.

Figure 10b Histologie conventionnelle (H&E) de la mme zone obtenue aprs prlvement. D'aprs "In Vivo Tissue Measurements with Optical low Coherence Tomography" par E. Lankenau, J. Welzel, R. Birngruber, R. Engelhardt, Medical Laser Center Lbeck, Allemagne.

Le recours un laser femtoseconde permet d'augmenter encore les rsolutions (de l'ordre de 1m) et d'imager des structures sub-cellulaires tels que les noyaux des cellules comme l'illustre la figure 11. Aujourd'hui les applications cliniques de cette technique sont nombreuses [25-31]. La principale est l'ophtalmologie pour laquelle une instrumentation a t dveloppe par la socit Humphrey (figure 12).

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Figure 11 Image dun ttard (xenopus laevis) obtenue par lOCT dveloppe par le MIT. Les flches montrent sur cette image deux cellules en mitose. (document biophotonics International, octobre 1999).

Figure 12 OCT commercialis par la Socit Humphrey pour l'ophtalmologie.

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Conclusion
En conclusion, les techniques photoniques offrent aujourd'hui une approche performante en imagerie mdicale. En ce qui concerne l'imagerie par transillumination, des appareils mdicaux existent, principalement pour la mammographie optique. Ces appareils doivent maintenant dmontrer que leurs performances, en termes de rsolution et de sensibilit, sont au moins gales celles des scanners ou tomographes rayons X. En ce qui concerne l'imagerie de fluorescence, il faut se rappeler que cette technique est utilise quotidiennement par les ophtalmologistes. D'autres disciplines mdicales devraient bnficier court terme du complment essentiel que reprsente l'information fluorescence . Plusieurs appareils mdicaux rcemment adapts l'endoscopie sont utiliss pour la dtection prcoce de tumeurs. Enfin, la tomographie par cohrence optique (OCT) offre des performances uniques en terme de rsolution spatiale. L'ophtalmologie en bnficie dj. Des appareils fibre optique, particulirement adapts l'imagerie par voie endoscopique, sont maintenant commercialiss.

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Bibliographie
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Quaresima, V., S.J. Matcher, and M. Ferrari, Identification and quantification of intrinsic optical contrast for near-infrared mammography. Photochem Photobiol, 1998. 67(1): p. 4-14. Hoogenraad, J.H., et al., First Results from the Philips Optical Mammoscope,, BiOS-97, Editor. 1997, SPIE: Bellingham, USA. Fantini, S., et al., Frequency-domain optical mammography: edge effect corrections. Med Phys, 1996. 23(1): p. 149-57. Alfano, R.R., et al., Time-resolved and nonlinear optical imaging for medical applications. Ann N Y Acad Sci, 1998. 838: p. 14-28. Mordon, S., Imagerie Mdicale: les voies de la lumires. Science et Vie, 1994. 186: p. 104-113. Franceschini, M.A., et al., Frequency-domain techniques enhance optical mammography: initial clinical results. Proc Natl Acad Sci U S A, 1997. 94(12): p. 6468-73. Mordon, S., J.M. Devoisselle, and V. Maunoury, In vivo pH measurement and imaging of tumor tissue using a pH-sensitive fluorescent probe (5,6carboxyfluorescein): instrumental and experimental studies. Photochem Photobiol, 1994. 60(3): p. 274-9. Helmlinger, G., et al., Interstitial pH and pO2 gradients in solid tumors in vivo: high- resolution measurements reveal a lack of correlation. Nat Med, 1997. 3(2): p. 177-82. Gillenwater, A., R. Jacob, and R. Richards-Kortum, Fluorescence spectroscopy: a technique with potential to improve the early detection of aerodigestive tract neoplasia. Head Neck, 1998. 20(6): p. 556-62. Brookner, C.K., et al., Cervical fluorescence of normal women. Lasers Surg Med, 1999. 24(1): p. 29-37.

8. 9. 10.

103

11. 12. 13. 14. 15. 16.

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17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29.

Richards-Kortum, R. and E. Sevick-Muraca, Quantitative optical spectroscopy for tissue diagnosis. Annu Rev Phys Chem, 1996. 47: p. 555606. Lam, S., C. MacAulay, and B. Palcic, Detection and localization of early lung cancer by imaging techniques. Chest, 1993. 103(1 Suppl): p. 12S14S. Harries, M.L., et al., Diagnostic imaging of the larynx: autofluorescence of laryngeal tumours using the helium-cadmium laser. J Laryngol Otol, 1995. 109(2): p. 108-10. Lam, S., et al., Detection of dysplasia and carcinoma in situ with a lung imaging fluorescence endoscope device. J Thorac Cardiovasc Surg, 1993. 105(6): p. 1035-40. Svanberg, K., et al., Clinical multi-colour fluorescence imaging of malignant tumours-- initial experience. Acta Radiol, 1998. 39(1): p. 2-9. Lam, S., et al., Detection of early lung cancer using low dose Photofrin II. Chest, 1990. 97(2): p. 333-7. Webber, J., D. Kessel, and D. Fromm, Plasma levels of protoporphyrin IX in humans after oral administration of 5-aminolevulinic acid. J Photochem Photobiol B, 1997. 37(1-2): p. 151-3. Leunig, A., et al., Detection of squamous cell carcinoma of the oral cavity by imaging 5- aminolevulinic acid-induced protoporphyrin IX fluorescence. Laryngoscope, 2000. 110(1): p. 78-83. Hillemanns, P., et al., Photodetection of cervical intraepithelial neoplasia using 5- aminolevulinic acid-induced porphyrin fluorescence. Cancer, 2000. 88(10): p. 2275-82. Riedl, C.R., E. Plas, and H. Pfluger, Fluorescence detection of bladder tumors with 5-amino-levulinic acid. J Endourol, 1999. 13(10): p. 755-9. Lange, N., et al., Photodetection of early human bladder cancer based on the fluorescence of 5-aminolaevulinic acid hexylester-induced protoporphyrin IX: a pilot study. Br J Cancer, 1999. 80(1-2): p. 185-93. Wang, I., et al., Fluorescence diagnostics and kinetic studies in the head and neck region utilizing low-dose delta-aminolevulinic acid sensitization. Cancer Lett, 1999. 135(1): p. 11-9. Eker, C., et al., Clinical spectral characterisation of colonic mucosal lesions using autofluorescence and delta aminolevulinic acid sensitisation. Gut, 1999. 44(4): p. 511-8. Cubeddu, R., et al., Fluorescence lifetime imaging of experimental tumors in hematoporphyrin derivative-sensitized mice. Photochem Photobiol, 1997. 66(2): p. 229-36. Hee, M.R., et al., Optical coherence tomography of the human retina. Arch Ophthalmol, 1995. 113(3): p. 325-32. Fujimoto, J.G., et al., Optical biopsy and imaging using optical coherence tomography. Nat Med, 1995. 1(9): p. 970-2. Tearney, G.J., et al., Optical biopsy in human urologic tissue using optical coherence tomography. J Urol, 1997. 157(5): p. 1915-9. Pitris, C., et al., High-resolution imaging of gynecologic neoplasms using optical coherence tomography. Obstet Gynecol, 1999. 93(1): p. 135-9. Fujimoto, J.G., et al., High resolution in vivo intra-arterial imaging with optical coherence tomography. Heart, 1999. 82(2): p. 128-33.

104

30. 31.

Jesser, C.A., et al., High resolution imaging of transitional cell carcinoma with optical coherence tomography: feasibility for the evaluation of bladder pathology. Br J Radiol, 1999. 72(864): p. 1170-6. Boppart, S.A., M.E. Brezinski, and J.G. Fujimoto, Optical coherence tomography imaging in developmental biology. Methods Mol Biol, 2000. 135: p. 217-33.

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Lasers, outils diagnostiques : exemple dapplication la dtection des caries dentaires

Sigrid AVRILLIER Laboratoire de physique des lasers Universit Paris XIII, Villetaneuse
ml : avrillie@galilee.univ-paris13.fr

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Lusage du fluor dans les pays dvelopps a considrablement transform lvolution des caries dentaires. On observe en effet un dclin important du nombre de caries, une volution plus lente des lsions ainsi quune possibilit de stabilisation et mme de rgression des caries prcoces. Lexistence de nouveaux traitements conduisant une reminralisation lente de la dent soulve la ncessit de mesures prcises permettant de dterminer si une lsion doit tre restaure ou si une thrapie plus conservative est approprie. Les mthodes conventionnelles de dtection des caries (exploration visuelle, exploration tactile avec des instruments durs, radiographie) ne peuvent pas rendre compte de la dynamique du processus de dminralisation ou de reminralisation des caries. La dtection prcoce reste galement trs difficile. Une mthode diagnostique idale devrait permettre une dtection suffisamment prcoce pour que des actions de prvention spcifiques puissent tre appliques temps. Ceci implique par ailleurs quelle serait capable de mesurer les degrs les plus subtils entre la dminralisation et la cavitation. Nous verrons dans cet expos que lutilisation des lasers permet datteindre ces objectifs. Les mthodes optiques correspondantes prsentent en plus lavantage de ncessiter de trs basses intensits lumineuses (10 20 mW/cm2) et dtre inoffensives (contrairement au rayons X). A terme les lasers semi-conducteur, petits, lgers et dun prix trs abordable seront intgrs dans les appareils cliniques. Nous prsenterons deux types de diagnostic laser des caries : La fluorescence induite par laser et la tomographie optique cohrente ou OCT. Concernant la fluorescence nous dgagerons deux mthodes principales. La premire utilisant une excitation lumineuse dans le bleu permet deffectuer des images de la surface lisse des dents. Les images ainsi obtenues sont traites par linformatique et fournissent des mesures quantitatives prcises de la surface des lsions et de leur gravit. Ces donnes peuvent ensuite tre utilises pour un suivi long terme de lvolution de lsions prcoces (tches blanches par exemple). La seconde mthode, fonde sur la fluorescence, utilise quant elle une excitation dans le rouge qui pntre plus profondment dans la dent. Du fait de la forte diffusion de la lumire dans lmail et la dentine, il nest

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pas possible dans ce cas dobtenir une image de fluorescence. Cependant la mesure des variations de lintensit totale de la fluorescence en fonction de la pathologie du tissu irradi permet un diagnostic point par point beaucoup plus prcoce que les mthodes traditionnelles voques prcdemment. Enfin nous terminerons notre expos en relatant les performances dun systme de diagnostic optique exprimental fond sur un principe diffrent de celui de la fluorescence. Il sagit dune mthode interfromtrique utilisant une source de cohrence relativement faible : le signal utile est obtenu sur le dtecteur dun interfromtre de Michelson dont lun des miroirs est remplac par la dent examiner. Un balayage du miroir de rfrence suivi dun balayage latral de la dent permet dobtenir une vritable coupe histologique de cette dernire. Il est ainsi possible de dtecter, aussi bien dans lmail que dans la dentine, des lsions de lordre de 200 microns de diamtre et cela mme derrire une restauration base de rsines. Ce procd peut aussi tre utilis par le dentiste pour suivre prcisment lefficacit du fraisage de la dent et la qualit de la restauration. Ces techniques de diagnostic par laser, dont certaines sont dj commercialises, devraient, brve chance, complter ou mme remplacer les mthodes conventionnelles utilises dans la majorit des cabinets dentaires.

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Imagerie par Rsonance Magntique (IRM)

Chrit MOONEN Rsonance Magntique des Systmes Biologiques, Universit Victor Segalen, Bordeaux
ml : Chrit.Moonen@rmsb.u-bordeaux2.fr

Malgr sa jeunesse (linvention de lIRM a t faite en 1973) et son cot (une IRM haut de gamme vaut plus de 1 million ), lIRM a dj acquis un rle trs important dans limagerie mdicale. Par exemple, lIRM est devenue la mthode dimagerie de choix pour toutes les maladies neurologiques. La croissance du nombre dappareils IRM reste trs leve. Plusieurs atouts sont la base de ce succs :

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1) nature non-invasive de la mthode,

2) contraste excellent pour les tissus mous grce aux temps de

relaxation T1 et T2 et la densit des spins, 3) versatilit dans la modification du signal avec des agents de contraste, 4) bonne rsolution spatiale (de lordre de 1 mm) et temporelle (de lordre de 50 ms pour une seule coupe quelques minutes pour les images 3D). Bases physiques de lIRM Les spins nuclaires prcessent autour de laxe principal du champ magntique extrieur B0 avec la frquence de Larmor ( = B0). La Rsonance Magntique Nuclaire est produite quand la position des spins est perturbe par une irradiation avec la frquence de Larmor. Le codage de lespace est bas sur lutilisation des gradients du champ magntique dans trois directions orthogonales. Pour limagerie mdicale on utilise le plus souvent les signaux des spins des atomes dhydrogne dans leau tissulaire. De lanatomie la physiologie et la thrapie : dveloppements rcents et rle de la physique La poursuite de lvolution de lIRM est illustre par les applications mdicales rcentes (ou potentielles) qui ncessitent souvent une approche interdisciplinaire et une adaptation spcifique des appareils IRM, des mthodes dacquisition des donnes et du traitement des donnes. Dans le domaine de limagerie physiologique, on peut souligner quelques exemples de ces nouveaux dveloppements : Imagerie de ventilation pour la fonction pulmonaire

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Imagerie de perfusion et diffusion pour le diagnostic des accidents vasculaires Imagerie cardiaque (fonction du muscle cardiaque, imagerie des artres coronaires) Imagerie de lactivation crbrale

Concernant les aspects thrapeutiques, deux thmatiques majeures sont actuellement en plein essor : 1) Thrapie Guide par Imagerie et 2) Imagerie Molculaire. Ils rpondent des questions de la socit : i) comment amliorer la performance des mthodes thrapeutiques tout en limitant les cots et ii) comment traduire les progrs dans la comprhension du gnome par des amliorations thrapeutiques. Le rle central de la physique dans quelques projets multidisciplinaires sera illustr :

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Guidage des cathters par IRM Les thermothrapies guides par IRM IRM de temprature Les outils de chauffage contrls par IRM de temprature Thermo-ablation des tumeurs Thrapie gnique : contrle de lexpression transgnique Dpt local des mdicaments.

LIRM sest dveloppe du diagnostic classique (lanatomie) vers le diagnostic avanc (les processus dynamiques) et vers la thrapie guide par limagerie. Les progrs les plus importants se trouvent dans les projets interdisciplinaires avec un rle majeur de la physique, illustrs par les exemples ci-dessus. La multidisciplinarit ncessite une interaction forte avec les mdecins et le dveloppement dun langage commun.

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Les Ultrasons : Applications mdicales

Landre POURCELOT Universit F. Rabelais et CHRU Bretonneau, Tours
ml : pourcelot@med.univ-tours.fr

I - Introduction
Les techniques ultrasonores appliques la mdecine ont t dveloppes dans les annes 1950 et ont commenc tre utilises en routine vers le dbut des annes 1970. Ces techniques drivent de celles qui ont t mises au point pour le radar, le sonar sous-marin et le contrle non destructif des matriaux. Cependant en raison de leur application particulire en milieu mdical, certaines dentre elles ont t considrablement modifies pour rendre leur utilisation simple et efficace. Les techniques ultrasonores ont de nombreux avantages par rapport aux autres mthodes dexploration du corps humain : elles sont non ionisantes, non dangereuses, et faciles mettre en uvre. Dautre part, elles autorisent une visualisation en temps rel des organes comme le cur et le sang circulant. Leur prix de revient est trs comptitif, de sorte que le rythme dexamens par ultrasons dans un Centre HospitaloUniversitaire franais de taille moyenne devrait osciller entre 200 et 300 par jour.

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II - Gnralits
Les frquences ultrasonores les plus utilises en mdecine sont situes dans la gamme allant de 3 15 MHz, ce qui correspond des longueurs donde dune fraction de millimtre, la vitesse des ultrasons dans les tissus mous tant de 1540 m s-1 5% prs. Les ultrasons se propagent assez bien dans les tissus du corps humain, le coefficient dattnuation, sensiblement proportionnel la frquence ultrasonore utilise, variant de 0,5 3,5 dB cm-1 MHz-1. Limpdance acoustique des tissus est le produit de leur masse spcifique par la vitesse de propagation des ultrasons. Cette impdance est voisine de celle de leau avec des valeurs comprises en 1,3 et 1,7 Mra (106 kg m-2 s- 1). La diffrence d'impdance acoustique entre deux milieux est l'origine des chos renvoys par les tissus traverss. Des chos dits spculaires (un peu comme la rflexion sur un miroir pour la lumire) sont obtenus sur les capsules dorganes, les fibres tendineuses ou musculaires

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et les parois vasculaires, mais ils nont pas un intrt majeur en diagnostic. En effet, ce sont les chos de diffusion (speckle en anglais) qui contribuent crer limage de la texture ultrasonore dun organe (le verre dpoli pour la lumire), et permettent donc de diffrencier un tissu sain dun tissu malade.

III - Les capteurs

Les capteurs dimagerie et de dtection Doppler applications mdicales sont essentiellement raliss base de cramiques ferrolectriques de type PZT (zirconate-titanate de plomb). Ces cramiques fort coefficient de couplage lectro-acoustique kt ont des impdances acoustiques 15 20 fois suprieures celles des tissus biologiques, ce qui pose des problmes d'adaptation d'impdance entre ces deux milieux. Les polymres pizo-lectriques ont une impdance acoustique plus faible que les cramiques, mais, malgr de nombreux travaux de mise au point, ils prsentent des coefficients de couplage lectro-acoustiques encore insuffisants. Pour maintenir une bonne sensibilit et une large bande passante, tout en abaissant limpdance acoustique du matriau pizolectrique, il a donc t ncessaire dvoluer vers des matriaux composites. On associe une phase rsine inerte et lgre la phase pizolectrique. Le matriau obtenu a plusieurs caractristiques intressantes : impdance 2 3 fois plus faible que celle de la cramique initiale, coefficient de couplage kt meilleur que celui de la cramique, souplesse du matriau (ventuellement thermo-moulable), ce qui permet de raliser aisment des coupelles ou des cylindres, couplage latral faible, intressant pour la ralisation d'une focalisation lectronique de qualit partir de barrettes de transducteurs. Pour rpondre aux nombreuses applications diagnostiques des ultrasons, il a t ncessaire de dvelopper une grande varit de capteurs, les appareils dchographie-Doppler rcents possdant de 20 30 sondes diffrentes en taille, frquence ultrasonore et mode de balayage.

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IV - Limagerie chographique
Limagerie chographique des structures peut tre obtenue grce plusieurs types de balayage : le balayage sectoriel mcanique : le capteur est dplac grce un moteur et produit 10 30 images par seconde. Le mouvement mcanique est obtenu essentiellement de deux manires : oscillation dun transducteur autour dun point fixe ou dplacement linaire de vaet-vient si l'amplitude du dplacement est faible. Le balayage mcanique est actuellement rserv aux sondes de frquences ultrasonores

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suprieures 15 MHz, pour lesquelles le balayage lectronique n'est pas encore utilisable. Le balayage sectoriel lectronique par dphasage (phased array) : une petite barrette de transducteur (par exemple 64 lments de 0,25 mm de ct) est utilise pour gnrer et recevoir les ultrasons. Les impulsions dmission transmises chaque transducteur lmentaire sont dphases entre elles linairement, de manire exciter avec un lger dcalage de temps les lments adjacents de la barrette. Le front d'onde constitu par la somme des fronts lmentaires mis se propage alors dans une direction qui fait un angle (qui dpend de la valeurs des retards) avec la normale au capteur. Le mme dphasage est appliqu ensuite sur les signaux reus par les diffrents transducteurs. La variation des retards chaque nouvelle squence d'mission-rception permet de raliser un balayage sectoriel dont louverture maximale est de 90 environ. L'image obtenue a la forme d'un secteur dont le sommet correspond au point de contact de la sonde avec la peau du patient. Dans les appareils rcents, on superpose des retards supplmentaires aux retards de dflexion, afin de raliser une focalisation lectronique. Le balayage lectronique linaire sur sonde plane : cette technique repose sur lutilisation dun barreau dtecteur de 3 12 cm de long, constitu dun nombre important de capteurs de petite dimension (de lordre dune fraction de millimtre), placs cte cte. La surface dmission-rception est obtenue en associant un certain nombre dlments de ce barreau (24 128 par exemple), excits simultanment. Aprs chaque sance dmission-rception correspondant lexploration dune ligne, la surface de travail est translate dun lment, de sorte que lespace entre chaque ligne dexploration est gale la largeur de chaque transducteur lmentaire. La commutation rapide dune ligne lautre permet, comme en balayage sectoriel lectronique, dobtenir des cadences dimages de 30 100 par seconde, sans aucune pice en mouvement, et de gnrer des frquences ultrasonores jusqu 15 MHz environ. Ces capteurs fournissent des images rectangulaires avec des lignes dacquisition parallles, trs apprcies en exploration abdominale et en obsttrique. Le balayage lectronique linaire sur sonde convexe : en utilisant un balayage linaire le long dun barreau convexe de transducteurs, on peut orienter les faisceaux dultrasons mis, dans un secteur de lordre de 60 ; cette technique rcente associe les avantages du balayage lectronique linaire (simplicit de llectronique et frquence ultrasonore leve) et du balayage lectronique sectoriel (surface de contact rduite, utilisation travers des fentres acoustiques de faible dimension). Cette technique simpose progressivement dans la majorit des applications de lchographie transcutane.

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Limagerie chographique endocavitaire utilise des capteurs miniatures dont les diamtres vont de 10 20 mm pour les sondes endooesophagiennes, endorectales ou endovaginales, moins de 1 mm pour les sondes endovasculaires. Ces dernires utilisent un balayage mcanique, alors que les prcdentes sont pilotes lectroniquement. Ces capteurs ultrasonores sont utiliss de plus en plus en salle dopration pour guider des interventions classiques et prochainement pour tre intgrs dans des systmes de robotique chirurgicale. Limagerie tridimensionnelle par ultrasons na pas encore atteint le stade de lutilisation de routine pour plusieurs raisons lies la fois au prix des capteurs et de linformatique associe, aux problmes lis la reprsentation dun corps opaque en 3 dimensions et la comptition avec la vue en 3D naturelle des chographistes entrans. Cependant plusieurs appareils commerciaux possdent dj cette possibilit. La mise au point de capteurs ultra rapides (rtine ultrasons), et intelligents, semble tre une clef dans lvolution de lchographie 3D.

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V - Focalisation
La focalisation lectronique dynamique (ou en poursuite dchos) est utilise de manire quasi-systmatique sur tous les capteurs dimagerie, quils soient balayage lectronique ou mcanique. La position de la zone focale dmission nest dplaable que dun tir lautre, alors que la zone focale de rception peut tre commute pour poursuivre le front donde au cours de sa propagation. Les rseaux annulaires permettent dadapter cette focalisation lectronique sur les capteurs balayage mcanique.

VI - Les techniques effet Doppler

La variation de frquence F, par effet Doppler entre les ultrasons incidents (frquence F) et les ultrasons rflchis (frquence F') par les globules rouges du sang en mouvement, permet de dtecter la vitesse de ces derniers en appliquant la formule : F = F-F' = 2F cos / c, dans laquelle c est la vitesse des ultrasons et cos langle moyen entre laxe dmission-rception dultrasons et laxe du vecteur vitesse. Les vitesses normales dcoulement du sang tant comprises entre 0 et 150 cm s-1, et la frquence des ultrasons F variant de 2 10 MHz selon le domaine d'application, la variation de frquence F est comprise entre 0 et 10 kHz, cest--dire qu'elle se situe dans la gamme des frquences audibles. Lors de la rflexion des ultrasons sur un ensemble de particules en mouvement, le signal d leffet Doppler est compos de signaux de

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diffrentes frquences Fi, correspondant aux diffrentes vitesses vi des rflecteurs prsents dans le volume de mesure. Le signal Doppler F prsente donc un certain spectre de frquences qui pourra tre dtect par un analyseur de spectre. Chaque signal Doppler correspondant une vitesse dtermine est alors dtect avec une amplitude qui dpend du nombre de particules ayant cette vitesse, un instant donn, dans l'artre. On dmontre aisment quen cas dcoulement parabolique chaque frquence (ou vitesse) est dtecte avec le mme niveau nergtique, car il y a le mme nombre de particules dans chaque tranche de vitesse. Par contre, si lcoulement prsente un profil non parabolique, cette relation nest plus vraie : en particulier, en cas dcoulement turbulent, linstabilit du spectre est caractristique et permet de graduer le degr de turbulence, et indirectement de connatre le pourcentage de rduction du calibre du vaisseau.

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Le traitement lectronique du signal Doppler se fait essentiellement de deux manires diffrentes : On peut rechercher la frquence moyenne du spectre, ce qui fournit directement une information sur la moyenne des vitesses le long de la section, cest--dire une donne proportionnelle au dbit instantan. On enregistre lvolution du spectre au cours du temps, afin de conserver toutes les informations contenues dans le signal dorigine et caractriser ainsi les coulements non paraboliques.

VII - Les appareils effet Doppler

Il existe deux types dappareil Doppler disponibles : Les appareils mission continue, dans lesquels le capteur est constitu dune cramique mettrice, qui transmet en permanence un signal ultrasonore dans le milieu, et dune cramique rceptrice qui dtecte les signaux rflchis. Ces appareils ont t largement utiliss pour lexploration de vaisseaux superficiels, faciles identifier (vaisseaux du cou et des membres en particulier). Ils sont relis soit un enregistreur graphique pour lenregistrement des courbes de vitesse, soit un systme danalyse spectrale, suivant le mode de traitement du signal Doppler utilis. Les appareils mission continue sont peu onreux et faciles mettre en uvre ; ils sont cependant limits lorsque les vaisseaux explorer sont profonds ou lorsque plusieurs vaisseaux peuvent se superposer dans laxe du capteur. Les appareils mission pulse mettent une brve impulsion, comme en chographie, puis le transducteur devient rcepteur et dtecte le signal rflchi en fonction de la profondeur. Une porte lectronique permet de slectionner le signal correspondant la rgion explorer et

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vite la superposition dinformations provenant de cibles places en avant ou en arrire. Il existe des systmes Doppler multiportes, qui explorent la circulation plusieurs profondeurs simultanment. Les appareils Doppler puls sont trs utiliss dans lexploration de la circulation abdominale et intracrbrale, ainsi que pour tudier les flux intracardiaques. Ils sont la base des systmes dimagerie du sang circulant par Doppler couleur.

1. Association chotomographie et Doppler (systme Duplex)

Lexploration du flux dans les vaisseaux profonds ou dans les cavits cardiaques est difficile sans un reprage anatomique prcis. Cette investigation devient alors possible grce lutilisation dun systme Doppler puls, coupl un chographe balayage mcanique ou lectronique. Certains lments du capteur sont alors utiliss en alternance, pour limagerie et lexploration Doppler. Aprs avoir repr les structures cardiaques ou vasculaires sur limage chographique, on positionne dans cette image la ligne de vise et la fentre dexploration Doppler. Ce systme combin permet de connatre simultanment le calibre des vaisseaux ou de lorifice cardiaque tudi et la vitesse du sang, et donc de calculer le dbit sanguin travers la peau ou deffectuer une corrlation entre les perturbations hmodynamiques et les anomalies morphologiques.

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2. Imagerie Doppler couleur

En utilisant un systme Doppler puls multiporte, il est possible dtudier la circulation plusieurs profondeurs simultanment. Si on translate rapidement la ligne de vise Doppler, on peut effectuer une cartographie des flux sanguins. Un code de couleurs permet de prsenter par exemple en rouge le sang qui se dplace vers le capteur (effet Doppler positif) et en bleu le sang qui sloigne du capteur (effet Doppler ngatif). Lintensit de la couleur est fonction de lamplitude du vecteur vitesse. On peut ainsi superposer sur une mme coupe, en chelle de gris, les structures cardiaques ou vasculaires, et en chelle colore les vitesses dcoulement sanguin. Une variante consiste moduler lchelle de couleur par lnergie du signal Doppler et non pas par la valeur de la variation de frquence Doppler. Cette angiographie ultrasons est extrmement importante pour les diagnostics de malformations cardiaques chez le nouveau-n, ltude des valvulopathies acquises en cardiologie adulte, lexploration des maladies vasculaires et la recherche danomalies de la circulation chez le ftus ou dans les tumeurs. Ces appareils se gnralisent de plus en plus en raison de leur intrt diagnostic majeur.

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VIII - Applications diagnostiques

On distingue schmatiquement quatre grands dapplication de routine des ultrasons en diagnostic mdical : domaines

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limagerie des tissus peu mobiles et directement accessibles travers la peau : cest le cas par exemple de lutrus, du foie et des voies biliaires, des reins, de la rate, des seins, de la thyrode, lexploration des structures en mouvement, comme le cur et le sang circulant, qui repose sur lutilisation de techniques combinant chographie rapide, techniques Doppler et enregistrement du mouvement des structures en mode temps-mouvement (ou T.M.). lchographie par voie endocavitaire lorsquil est ncessaire de rapprocher le capteur de la rgion explorer pour gagner en rsolution, ou pour viter de traverser des structures osseuses ou gazeuses. On utilise pour cela des capteurs miniaturiss et de frquence ultrasonore relativement leve. les applications nouvelles qui relvent dquipes spcialises, comme l'chographie-Doppler crbrale, l'chographie avec produits de contraste, l'chographie 3D, l'chographie interventionnelle avec guidage de ponctions ou de gestes thrapeutiques, l'imagerie ultrasonore paramtrique,

IX - Caractrisation tissulaire par ultrasons

De nombreux travaux ont t raliss depuis une vingtaine dannes pour caractriser les tissus par ultrasons. Jusqu prsent limagerie chographique na que peu bnfici de ces recherches, car il est souvent ncessaire de mettre en uvre un traitement de signal relativement long et complexe. Les premires applications de routine reposent sur deux grandes techniques : la caractrisation de los par mesure de la vitesse et de lattnuation dune onde acoustique se propageant dans le calcanum par exemple, ltude de la rponse non linaire des tissus aux variations de pression instantanes lies au passage de londe acoustique (imagerie harmonique). Dautres projets sont en cours comme la mesure de llasticit tissulaire en appliquant une onde trs basse frquence pour stimuler les tissus et en utilisant londe ultrasonore pour tudier la dformation en profondeur.

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X - Produits de contraste ultrasonore

Plusieurs compagnies pharmaceutiques dveloppent des microbulles de gaz encapsul, dun diamtre de quelques microns, qui peuvent tre injectes par voie intraveineuse. Ces microbulles constituent un moyen de contraste, car le gaz est un puissant rflecteur des ultrasons. Les applications majeures envisages sont nombreuses : l'tude de la vascularisation des tissus, la caractrisation de certaines tumeurs, l'exploration de la fonction cardiaque et du flux coronaire,

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ltude des shunts entre le cur droit et le cur gauche, etc. Dans lavenir on envisage dutiliser ces microbulles pour transporter des molcules vise thrapeutique. Celles-ci pourraient tre dlivres localement par rupture des microbulles dans un champ ultrasonore de moyenne puissance.

XI - Conclusion
Les techniques ultrasonores ont t considrablement dveloppes pour limagerie mdicale. Les performances atteintes par les appareils modernes sont tout fait spectaculaires. Les recherches en cours sur limagerie 3D, la miniaturisation des capteurs et la caractrisation tissulaire ouvrent des voies nouvelles au dveloppement des applications mdicales et industrielles.

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Modles animaux et Imagerie

Frdric PAIN Institut de Physique Nuclaire dOrsay Groupe Interfaces Physique Biologie Universit Paris XI, Orsay
ml : pain@ipno.in2p3.fr

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Au cours des quinze dernires annes de nombreux modles animaux mimant les pathologies humaines ont t mis au point, grce auxquels de nouvelles approches fondamentales et thrapeutiques de ces maladies ont t dveloppes. Bien que, par soucis dthique, dimportants efforts soient faits pour remplacer les tudes animales par des cultures cellulaires ou encore par des modles informatiques, rongeurs et primates restent des acteurs incontournables de la mise au point de nouveaux traitements. En particulier, la prsence chez la souris de gnes quivalents ceux de lhomme et la possibilit de manipuler simplement le gnome de la souris ont conduit une multiplication du nombre de modles murins. La caractrisation et la ralisation dtudes in vivo sur ces modles requirent la mise en uvre de techniques adaptes. Dveloppes initialement pour des tudes cliniques, ces techniques ont t adaptes au cours de la dcennie passe aux tudes sur modles animaux. Aprs avoir prsent la notion de modle animal et le cadre tant scientifique quthique de leur utilisation en recherche biomdicale, nous prsenterons les contraintes propres ltude de ces modles par les diffrentes modalits dimagerie, puis nous examinerons les dveloppements instrumentaux en cours en nous appuyant sur les premiers rsultats biologiques obtenus.

I - Modles animaux en recherche biomdicale

Quest ce quun bon modle ?
Dans la dmarche scientifique biomdicale, le modle exprimental intervient diffrents niveaux dexprimentation, du microscopique, (molcules, organites, cellules) au macroscopique (organe, organisme dans son ensemble, voire population dorganismes). Il s agit dobtenir une reprsentation simplifie dun systme biologique quil nest pas possible dtudier directement pour des raisons thiques, techniques ou conomiques. En pathologie, le modle animal joue un rle cl puisqu il va permettre partir dune reproduction dune pathologie humaine de tester des hypothses sur les causes, les mcanismes et la thrapie de ces maladies. Cependant pour garder une dmarche rigoureuse, le modle doit tre valid prcautionneusement et doit rpondre un certain nombre de critres. En premier lieu, il doit satisfaire au critre disomorphisme, c est-dire que les symptmes observs chez lanimal doivent tre semblables ceux observs chez lhumain. Le modle doit galement prsenter des mcanismes et des causes identiques eux observs chez lhomme, dans la mesure ou ceux-ci sont connus. Enfin, le modle doit rpondre de la

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mme manire que lhomme aux diffrents traitements, aussi bien positivement que ngativement. Par exemple, ladministration de L-dopa doit rduire les symptmes Parkinsoniens chez un modle animal qui a pour finalit de mimer cette pathologie. La limite de lanalogie dpend alors de la posologie qui doit tre adapte lanimal en tenant compte des diffrences physiologiques (masse, dbit sanguin) avec lhomme. Evidemment il nexiste pas de modle parfait et il faut se garder dextrapoler trop directement lhomme des rsultats obtenus chez le rongeur En tout tat de cause, ltude des modles aboutit mieux connatre les mcanismes et les causes dune pathologie et conduit donc souvent affiner le modle initial [1].

Obtention dun modle animal

On peut distinguer deux catgories de modles animaux : les modles spontans et les modles construits [2]. Il existe par exemple des lignes de poulets ou de rats qui prsentent spontanment des tats pileptiques trs semblables aux crises observes chez lhomme. Ces crises pileptiques sont dclenches simplement par un stimulus visuel ou auditif. Cette ligne de poulets pileptiques constitue un trs bon outil dtude puisquelle reproduit les symptmes et les mcanismes de la crise pileptique et ce de manire tout fait contrle. Toutefois les modles spontans sont rares et il est souvent ncessaire de construire son modle. On peut alors selon les cas faire appel une mthode lsionnelle ou des mthodes chimiques comme linjection localise dun produit neurotoxique pour reproduire la dgnrescence neuronale progressive de la maladie de Parkinson. Enfin, les modles gntiques sappuient sur des modifications du patrimoine gntique en liminant ou en surexprimant un ou plusieurs gnes (on parle de souris knock-out ou knock-in ). Ces modles gntiques ont connu un essor trs important au cours des annes passes du fait des progrs techniques importants dans la manipulation du gnome et de la connaissance relativement bonne du gnome de la souris qui prsente de nombreuses homologies avec le gnome humain [3, 4].

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Exprimentation animale et thique

Lexprimentation animale ne peut pas faire lconomie dune rflexion thique approfondie. De fait, ds 1959, deux chercheurs britanniques (William Russel et Rex Burch) ont propos une base thique aux expriences biomdicales mettant en jeu des animaux [5]. Ces rgles connues sous le nom des 3 R pour Remplacement, Rduction et Raffinement sont dsormais inscrites dans les textes de lois europennes [6]. Il faut : - Remplacer lexprimentation animale aussi souvent que possible par la modlisation, les cultures cellulaires ou les modles informatiques

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(dans le cadre de lenseignement de la physiologie il existe notamment un kit virtuel de la dissection de la grenouille [7]). - Rduire le nombre des animaux mis en jeu dans la mesure du possible (bibliographie pour viter les expriences redondantes, mesure simultane dun maximum de paramtres, minimum de statistique significative). - Raffiner les expriences en choisissant des protocoles qui minimisent le stress et la douleur et en amliorant les conditions dlevage. Au-del de ces rgles thiques, on a assist au cours des dernires dcennies une prise de conscience morale des chercheurs paralllement une monte en puissance des mouvements dopinions pro-animaux. On ne peut que se fliciter du dveloppement de solutions alternatives, notamment via la mise au point de nouvelles techniques molculaires in vitro, qui ont conduit une diminution trs nette du nombre danimaux utiliss. En France on est pass de 7 Millions en 1980 2,6 Millions en 1997, dont 85% sont des rongeurs ou des lapins [6]. Cependant, pour certaines tudes, et notamment pour lvaluation pr-clinique des nouvelles thrapeutiques, il nest pas possible de s affranchir des tudes sur modles animaux.

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II - Imagerie des modles animaux : contraintes, techniques perspectives

Intrt des techniques dimagerie
Pour caractriser et tudier les modles, il est indispensable de disposer doutils adapts. De nombreuses techniques, allant de lobservation du comportement la mesure de paramtres physiologiques prcis, ont t dveloppes par le pass. Les techniques histologiques, impliquant le sacrifice de lanimal, puis lexamen au microscope ou par imagerie planaire de fines coupes de tissus, restent couramment employes. Ces techniques ex vivo prsentent linconvnient majeur du sacrifice de lanimal, qui implique lutilisation de nombreux animaux dans des procdures longues et coteuses. Afin de rpondre cette difficult les techniques dimagerie in vivo se sont progressivement imposes au cours de la dcennie passe. En effet, limagerie tomographique permet dobtenir sur un mme et unique animal des images 2D ou 3D et ce, sans porter atteinte son intgrit physique (hormis lanesthsie et, pour certaines modalits, linjection dun traceur ou dun agent de contraste). Cet aspect non invasif de limagerie autorise un suivi dans le temps dun mme animal (on parle dtudes longitudinales ) et donc ltude du dcours temporel dune maladie ou dun traitement sur un individu, et permet de s affranchir des diffrences interindividuelles qui ncessitent habituellement une normalisation.

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Contraintes propres limagerie animale

Limagerie du petit animal (rat et souris) connat donc un dveloppement rapide qui est rendu possible par des avances technologiques importantes. En effet, limagerie animale prsente des contraintes spcifiques qui autorisent rarement la transposition immdiate des techniques dimagerie clinique. La contrainte la plus vidente est lie aux dimensions rduites des structures tudies. A titre dexemple, la diffrence dchelle entre les structures crbrales de lhomme (quelques cm) et du rat (quelques 100m voire quelques 10m) impose une amlioration drastique de la rsolution spatiale. Lobtention dinformations anatomiques chez le rongeur impose datteindre des rsolutions spatiales de quelques centaines de m quelques dizaines de m et la mesure de paramtres fonctionnels est possible pour des rsolutions spatiales de lordre du mm. Ce gain en rsolution saccompagne dune diminution dramatique de la quantit dinformation mesurable. En effet, si lon gagne un facteur 10 en rsolution spatiale sur les 3 dimensions, on aura un volume analys lmentaire (ou voxel ) qui sera 1000 fois plus petit et donc, concentration gale, un nombre de molcules dtectables 1000 fois plus petit. Il est donc ncessaire de mettre au point des systmes de trs haute sensibilit, ce facteur demeurant encore souvent le facteur limitant [8]. Enfin, il faut considrer une troisime contrainte qui dcoule de la ncessit danesthsier lanimal. En effet, s il est possible de demander un patient (de bonne volont) de demeurer immobile dans un scanner ou un IRM, il est indispensable dimmobiliser un animal durant lacquisition de limage. Or lanesthsie prsente diffrents inconvnients : dorigine chimique, elle peut perturber les phnomnes tudis et elle ne permet pas de raliser des tudes qui ncessitent la conscience de lanimal pour raliser une tche (manger, boire, parcourir un labyrinthe).

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Diffrentes modalits pour mesurer diffrents paramtres complmentaires

Les diffrentes techniques dimagerie pour ltude des rongeurs et primates ont pris une importance considrable au cours de la dernire dcennie. Ces techniques donnent en effet accs de nombreux paramtres anatomiques, physiologiques (le fonctionnement biologique dun organisme ou dun organe), pharmacologiques (le suivi cintique de la fixation dune molcule). Rcemment le terme d imagerie molculaire a t propos pour dcrire limagerie des phnomnes une chelle molculaire comme, par exemple, lexpression dun gne ou laction dune enzyme.

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Parmi les diffrentes modalits dimagerie, on peut distinguer deux grandes familles : la premire regroupe limagerie X, lchographie ultrasons et limagerie par rsonance magntique (IRM) et sappuie sur la dtection de signaux intrinsques lorganisme tudi : attnuation du rayonnement X par les diffrents tissus, chos ultrasonores ou vlocimtrie Doppler, proprits magntiques locales. La seconde concerne les techniques qui se fondent sur la dtection aprs injection ou inhalation dun traceur spcifique dune cible biologique. Il sagit principalement de limagerie nuclaire qui repose sur la dtection de molcules radiomarques et des techniques optiques qui sappuient sur la dtection de molcules mettrices de photons optiques. Certaines modalits dIRM en cours de dveloppement ont galement recours linjection de traceurs.

Imagerie X : imagerie anatomique pour le criblage phnotypique

Limagerie X pour le petit animal a t dveloppe rcemment pour rpondre un besoin de rapidit dans lanalyse des trs nombreux modles gntiques. Les chercheurs veulent en effet savoir comment les mutations gntiques introduites affectent les caractristiques anatomiques, fonctionnelles et mtaboliques du modle. Les contraintes en rsolution spatiale lies aux faibles dimensions des structures dintrt ont conduit au dveloppement d imageurs spcifiques (source X basse nergie et dtecteur CCD/cran de phosphore) qui prsentent une rsolution spatiale infrieure 50m. Le dveloppement du premier microtomographe X [9] est le fruit dune collaboration troite entre biologistes et physiciens de lUniversit de Duke (Oak Ridge, USA) qui possde une trs importante collection de souris transgniques. Lanalyse rapide (il faut environ 15 minutes pour obtenir une image 3D avec une rsolution de 50) du phnotype des ces souris permet un gain de temps trs important en comparaisons des techniques histologiques car il nest plus ncessaire de dissquer une souris pour caractriser ses organes internes et une rationalisation du dveloppement des modles et de leur analyse [10]. Cette technique rapide et relativement peu coteuse prsente cependant linconvnient de prsenter un contraste peu marqu pour les tissus mous. Dans ce cas lutilisation des ultrasons constitue une alternative intressante.

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Ultrasons : criblage phnotypique, imagerie Doppler et interventionnelle

Lutilisation de frquences ultrasonores significativement plus leves que celles utilises en imagerie humaine (20 100MHz contre 2 12MHz chez lhomme) permet lobservation anatomique de la plupart des organes lexception du cerveau, des poumons et du squelette. Ce nest que rcemment grce au dveloppement de nouveaux capteurs polymres pizo-lectriques que de telles frquences ont pu tre mises en uvre.

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Lanalyse des chos ultrasonores rflchis par les tissus permet la visualisation de la morphologie des souris avec une rsolution spatiale de lordre de quelques dizaines de m. Elle permet galement en utilisant les techniques de mesure Doppler de dterminer des paramtres fonctionnels concernant la micro-circulation sanguine (vitesse et sens de circulation) [11]. Enfin, la possibilit de visualiser en temps rel la souris ds le stade embryonnaire et avec une trs bonne rsolution spatiale permet ltude du dveloppement de lembryon et la dtermination prcise du stade dapparition danomalies gntiques [12, 13]. Malgr la lgret de son instrumentation et son faible cot, limagerie ultrasonore reste encore marginale. Le principal inconvnient de la technique est li la diminution de la pntration des ultrasons avec laugmentation de leur frquence. Ainsi au-del de 80MHz, la technique est limite ltude de structures superficielles comme lil par exemple.

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LIRM fournit des donnes anatomiques, fonctionnelles et pharmacologiques

Une dernire technique permet dobtenir des informations anatomiques de trs haute rsolution spatiale : limagerie IRM. Concernant limagerie du petit animal on parle souvent de Microscopie par Rsonance Magntique. En effet, le dfi pour transposer cette technique limagerie animale est un gain en rsolution considrable : les volumes lmentaires imags sont de lordre de 50m 50m 500m soit 10000 fois moins importants que chez lhomme. Les solutions techniques reposent sur le dveloppement de gradient de champs magntiques adapts et lutilisation de champs magntiques intenses. Par ailleurs, afin de conserver une sensibilit de dtection raisonnable il est ncessaire de faire un compromis entre la dure de lacquisition (on intgre le signal disponible sur des dures allant de quelques minutes quelques heures) et la rsolution temporelle. Selon le mode danalyse des signaux IRM, on obtient une information anatomique de trs haute rsolution spatiale ou des informations dites fonctionnelles caractrisant le mtabolisme nergtique ou la perfusion sanguine locale. Limagerie anatomique ou morphologique permet de caractriser la forme, le volume dorganes ou encore la structure des tissus [14]. LIRM prsente pour les tissus mous un contraste largement suprieur celui observ pour limagerie X. Lune des applications majeures est le criblage phnotypique haut dbit des nombreux modles murins [15]. Par ailleurs, lIRM permet galement de mesurer des paramtres fonctionnels, en s appuyant sur la modification de proprits magntiques locales lies au taux doxygnation de lhmoglobine. On ralise alors des cartes dactivation crbrale suite un stimulus. De manire simpliste, lobjectif

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est de mieux comprendre le cheminement de linformation et lorganisation crbrale. Dautre part, limagerie IRM a galement t mise en uvre pour tester de leffet nouvelles molcules thrapeutiques sur le mtabolisme nergtique ou le dbit sanguin (par exemple sur des modles daccidents crbraux vasculaires). Enfin, dans le cadre de limagerie molculaire lIRM peut galement s appuyer sur linjection dagent de contraste Gd ou de marqueurs magntiques (anticorps associ une nanoparticule) [16]. LIRM est donc une technique extrmement riche qui, outre une information anatomique de trs haute rsolution, permet la mesure de nombreux paramtres physiologiques ou pharmacologiques. Cette technique prsente cependant une rsolution temporelle limite par sa sensibilit relativement faible ainsi quun cot lev. Il est nanmoins possible dadapter les IRM cliniques sans toutefois galer les performances des systmes ddis limagerie du petit animal. La seconde grande famille de techniques regroupe limagerie nuclaire et limagerie optique dont le point commun est de sappuyer sur la dtection, aprs injection par voie sanguine, de molcules marques qui vont interagir de faon spcifique avec une cible biologique.

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Radiotomographie : latout de la sensibilit et de la quantification

En imagerie nuclaire, on mesure au cours du temps la fixation spcifique dun traceur radiomarqu, par un isotope + en Tomographie par Emission de Positron (TEP) ou un metteur en Tomographie par Emission MonoPhotonique (TEMP). On a ainsi accs une information spatiale (o sest fix le traceur ?) et une information temporelle (quelle est la cintique de fixation du traceur ?). La construction de la molcule spcifique dune cible biologique et son marquage, gnralement ralis par substitution ou ajout dun atome radioactif la molcule initiale, requirent lintervention de chimistes et de radiochimistes. Les camras TEP et TEMP cliniques prsentant une rsolution spatiale de plusieurs millimtres, un important travail instrumental a t initi au milieu des annes 90 pour le dveloppement dimageurs ddis, de rsolution spatiale millimtrique, grce une architecture adapte, plus compacte [17-20]. Sans rentrer dans les dtails, cela a t rendu possible par les progrs instrumentaux des dtecteurs de radioactivit au cours de la dernire dcennie (cristaux scintillants et photodtecteurs). Limagerie nuclaire possde latout essentiel dune excellente sensibilit puisquelle permet de quantifier des concentrations molculaires jusqu 10-12 mole/l. De plus limagerie TEP animale bnficie dune trs grande varit de molcules radiomarques dj dveloppe pour limagerie clinique. Parmi ces diffrentes molcules, on peut distinguer le

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F-Fluorodeoxyglucose (FDG) qui est un analogue du glucose (substrat nergtique des cellules) marqu au fluor 18 (isotope + de priode radioactive ~ 2 heures). Aprs injection intraveineuse, cette molcule radiomarque suit le mme chemin mtabolique quune molcule de glucose puis s accumule dans les cellules, la diffrence du glucose qui va, lui, subir une cascade de ractions enzymatiques aboutissant la production dnergie utilisable par la cellule. Cette accumulation du traceur au cours du temps traduit le mtabolisme nergtique local. Le FDG est galement la molcule de rfrence pour ltude des modles du cancer puisque les cellules cancreuses prsentent un mtabolisme nergtique plus lev que celui des cellules saines. Il est donc possible de suivre et de caractriser le dveloppement tumoral et dvaluer diffrentes approches thrapeutiques. Cette technique a galement t valide pour les tudes cardiaques. On voit sur la figure 1 une image TEP cardiaque 18F-FDG obtenue chez un rat normal (en haut) et chez un rat souffrant dune insuffisance myocardique chronique, induite par ligature permanente de lartre descendante antrieure gauche (en bas). Linterruption de la perfusion sanguine est responsable du svre dfaut de captation dans la rgion myocardique antro-latrale du ventricule gauche, indiquant labsence dactivit mtabolique dans cette rgion ncrose. Ce modle a t utilis pour lvaluation de nouvelles thrapies angiogniques et cellulaires de linsuffisance cardiaque chronique. Limagerie nuclaire possde par ailleurs un intrt unique pour les tudes pharmacologiques, pour laquelle elle devrait tendre remplacer les tudes ex vivo qui ncessitent le sacrifice de nombreux animaux. En effet, pour obtenir la biodistribution et la cintique de fixation dune molcule, ces tudes ncessitent le sacrifice de nombreux animaux. La figure 2 montre la caractrisation dune mort neuronale progressive et slective chez un rat modle de la maladie de Huntington. Cette tude dmontre lintrt de limagerie qui permet la reproduction dune mesure chez un mme animal intervalles de temps choisis. La caractrisation in vivo de tels modles permet alors dexplorer de nouvelles voies thrapeutiques, comme par exemple, dans le cas des maladies neurodgnratives, la greffe de neurones embryonnaires. Enfin, on peut mesurer lexpression gnique chez lanimal vivant grce la mise au point rcente de systmes de gnes rapporteurs ddis limagerie TEP. Ces gnes, introduits par transgnse, sont placs sous le contrle du mme promoteur que le gne dintrt et sexpriment donc de la mme faon que lui. La protine code par le gne rapporteur interagit avec un traceur radiomarqu judicieusement choisi et le pige localement, de sorte que la concentration du traceur est directement proportionnelle lexpression du gne dintrt [21]. Cette technique est un premier pas vers limagerie de lexpression gnique chez lhomme, et pourrait faciliter la mise au point de thrapies gniques ou ltude de lexpression des gnes au cours du dveloppement.

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Axe horizontal

Axe court
1 cm

Axe vertical

3 jours post injection

Normal

Infarctus

5 jours post injection

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Figure 1 : Imagerie cardiaque TEP 18 F-FDG : caractrisation de linsuffisance cardiaque dun rat modle dinfarctus (en bas) compar un rat normal (en haut). (Avec la permission de Roger Lecomte, Centre d'imagerie mtabolique et fonctionnelle, Universit de Sherbrooke, Canada)

Figure 2 : Caractrisation de la neurodgnrescence striatale pro-gressive chez un rat modle de la maladie de Huntington (coupes frontales 3 et 5 jours aprs injection unilatrale dun neurotoxique). (Collaboration Institut de Physique Nuclaire Orsay et Service Hospitalier Frdric Joliot, Orsay, CNRS CEA)

En rsum, limagerie nuclaire prsente des atouts certains, en particulier son excellente sensibilit et la grande varit de traceurs disponibles qui permettent limagerie du mtabolisme nergtique, de la pharmacocintique de molcules dintrt et de lexpression gnique. Cependant ces techniques demeurent coteuses et ncessitent, en particulier pour la TEP, la mise en place dune infrastructure lourde (Cyclotron, Service de radiochimie, imageur ddi, radioprotection).

Imagerie optique : lmergence de nouvelles techniques in vivo

Limagerie optique in vivo chez le petit animal sest dveloppe trs rcemment. On distingue les techniques de fluorescence qui sappuient sur la dtection de fluorochromes aprs excitation transcutane par un laser et les techniques de bioluminescence qui reposent sur lutilisation de molcules qui mettent naturellement des photons aprs injection dun substrat donn. Dans les deux cas ces techniques sont particulirement bien adaptes au suivi de cellules. On sait en effet construire des cellules qui vont synthtiser une molcule fluorescente (la plus connue est la Green Fluorescent Protein ou GFP) ou une enzyme bioluminescente comme la Lucifrase. Il est alors possible dans les deux cas dtudier une population de cellules en particulier de cellules tumorales humaines implantes chez la souris et qui produisent de la GFP ou de la Lucifrase [22]. On peut alors caractriser au cours du temps le dveloppement ou la rgression du cancer, la prsence de mtastases, leffet dagents pharmaceutiques [23]. Ces techniques permettent galement le suivi de lexpression gnique sur le mme principe que celui dtaill plus haut, le

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gne rapporteur pouvant tre par exemple le gne codant pour la Lucifrase [24]. Outre leur simplicit de mise en uvre (la dtection se fait gnralement par une simple camra CCD refroidie) et leur cot modr, ces techniques prsentent galement lavantage dune rsolution temporelle leve bien adapt ltude des phnomnes cintiques rapides. Nanmoins ces techniques dimagerie 2D fournissent une information gnralement qualitative et souffrent pour la bioluminescence ou lutilisation de la GFP dtre limites aux tudes des couches superficielles des tissus, du fait de la pntration limite de la lumire. Des rsultats rcents proposent la mise en uvre dune imagerie tomographique optique qui permettrait en partie de saffranchir de ces contraintes.

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Conclusion
Aprs une dizaine danne de dveloppements instrumentaux, limagerie du petit animal entre dans une seconde phase. Une premire gnration dimageurs performants ont t mis en uvre et franchissent les uns aprs les autres le stade de lindustrialisation (MicroTEP en 1997, Microtomographe X en 2000, systmes optiques pour la bioluminescence en 2001). Au niveau international, les grands laboratoires privs et public sont en train de squiper et en France on assiste aux balbutiements de la mise en uvre de plates-formes dimagerie animale regroupant diffrentes modalits. Limagerie du petit animal est un domaine dynamique laspect interdisciplinaire trs marqu regroupant chimistes biologistes, mdecins, physiciens, industriels. Cependant, si les techniques ont dores et dj dpass le stade de la validation, limagerie doit encore faire ses preuves en termes de rsultats biologiques. Lun des rsultats attendu est une diminution significative du dlai entre la dcouverte dun agent pharmaceutique et sa mise sur le march. De nombreux dfis techniques demeurent et de nouvelles techniques notamment optiques vont trs probablement merger au cours des annes venir.

Bibliographie
1. 2. 3. 4. 5. Cenci MA et al., Animal models of neurological deficits: how relevant is the rat? Nat Rev Neurosci, 2002. 3(7): p. 574-9. Meunier JM and Shvaloff A, eds. Techniques en neurosciences. Abrgs. 1996, Masson: Paris. 267. Arbeit JM and Hirose R, Murine mentors: transgenic and knockout models of surgical disease. Ann Surg, 1999. 229(1): p. 21-40. Bader M, Transgenic animal models for neuropharmacology. Rev Neurosci, 2000. 11(1): p. 27-36. Russel W and Burch R, The Principles of Humane Experimental Technique. 1959, London: Methuen.

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6. 7. 8. 9 10. 11.

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12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24.

RDT info N24 - Le magazine de la recherche europenne, Une science sans cobaye ? Novembre 1999: p. 26-27. http://europa.eu.int/comm/research/rtdinfo_fr.html University of California Lawrence Berkeley Laboratory, Berkeley, CA, The Whole Frog Project. 1994. http://george.lbl.gov/ITG.hm.pg.docs/Whole.Frog/Whole.Frog.html Hume SP et al., Pharmacological constraints associated with positron emission tomographic scanning of small laboratory animals. Eur J Nucl Med, 1998. 25(2): p. 173-6. 9 Paulus MJ, A new X-Ray computed tomography system for laboratory mouse imaging. IEEE Trans Nucl Sci, 1999. 46: p. 558-564. Paulus MJ et al., A review of high-resolution X-ray computed tomography and other imaging modalities for small animal research. Lab Anim (NY), 2001. 30(3): p. 36-45. Foster FS et al., Ultrasound for the visualization and quantification of tumor microcirculation. Cancer Metastasis Rev, 2000. 19(1-2): p. 131-8. Turnbull DH et al., Ultrasound backscatter microscope analysis of early mouse embryonic brain development. Proc Natl Acad Sci U S A, 1995. 92(6): p. 2239-43. Srinivasan S et al., Noninvasive, in utero imaging of mouse embryonic heart development with 40-MHz echocardiography. Circulation, 1998. 98(9): p. 912-8. Ruff J et al., Magnetic resonance microimaging for noninvasive quantification of myocardial function and mass in the mouse. Magn Reson Med, 1998. 40(1): p. 43-8. Scotland P et al., Nervous system defects of AnkyrinB (-/-) mice suggest functional overlap between the cell adhesion molecule L1 and 440-kD AnkyrinB in premyelinated axons. J Cell Biol, 1998. 143(5): p. 1305-15. Weissleder R et al., In vivo magnetic resonance imaging of transgene expression. Nat Med, 2000. 6(3): p. 351-5. Lecomte R et al., Initial results from the Sherbrooke avalanche photodiode positron tomograph. IEEE Trans Nucl Sci, 1996. 43(3): p. 1952-1957. Jeavons AP et al., A 3D HIDAC-PET Camera with Sub-millimetre Resolution for imaging small animals. IEEE Trans Nucl Sci, 1999. 46(3): p. 468-473. Chatziionannou AF et al., Performance evaluation of microPET: a highresolution lutetium oxyorthosilicate PET scanner for animal imaging. J Nucl Med, 1999. 40(7): p. 1164-1175. Valda-Ochoa A et al., An original emission tomograph for in vivo brain imaging of small animals. IEEE Trans Nucl Sci, 1997. 44(4): p. 1533-1537. Chatziioannou AF, Molecular imaging of small animals with dedicated PET tomographs. Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2002. 29(1): p. 98-114. Weissleder R, Scaling down imaging : molecular mapping of cancer in mice. Nature Reviews, 2002. 2: p. 1-8. Rehemtulla A et al., Rapid and quantitative assessment of cancer treatment response using in vivo bioluminescence imaging. Neoplasia, 2000. 2(6): p. 491-5. Zhang W et al., Rapid in vivo functional analysis of transgenes in mice using whole body imaging of luciferase expression. Transgenic Res, 2001. 10(5): p. 423-34.

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Laboratoires sur puces : physique et chimie dans les coulisses de la rvolution gnomique
Jean-Louis VIOVY quipe physico-chimie et sparation de l'ADN Institut Curie, Paris
ml : Jean-Louis.Viovy@curie.fr

La plupart des mthodes de diagnostic, ainsi que de nombreux problmes poss par la recherche biomdicale, impliquent danalyser les constituants dun fluide biologique. La biochimie analytique est ainsi au coeur des progrs en diagnostic, et elle doit voluer de pair avec la connaissance de plus en plus prcise et de plus en plus complte que nous avons de la biologie molculaire, en particulier suite la somme considrable dinformations nouvelles apporte par la gnomique. Pour s'adapter ces nouveaux dfis, les mthodes analytiques doivent faire preuve d'imagination et puiser dans les progrs effectus dans les domaines connexes. On est l'aube d'une rvolution lie aux microlaboratoires ou lab-on-a-chip qui empruntent largement aux techniques dveloppes pour la microlectronique pour construire des systmes intgrant sur une puce lensemble des processus ncessaires lanalyse dun produit. La physicochimie fournit aussi aux mthodes analytiques une large source d'inspiration et une bote outils fconde. Dans cette confrence, on tentera de montrer comment de nouvelles voies pour la sparation de molcules ou de particules peuvent tre ouvertes en puisant dans la trs riche panoplie de matriaux et de mcanismes dcouverts et dvelopps dans le domaine dit de la matire molle ou des fluides complexes (polymres, collodes, cristaux liquides) et par des progrs en instrumentation physique. On donnera quelques exemples dans lesquels des phnomnes ou des matriaux, dvelopps pour des finalits tout fait diffrentes, peuvent tre utiliss pour donner lieu des fonctionnalits nouvelles pour l'analyse ou la sparation de biomolcules (liste non exhaustive) : -des polymres associatifs , porteurs de greffons latraux qui deviennent hydrophobes haute temprature, permettent de faire des milieux qui glifient rversiblement par augmentation de temprature, pour le squenage de l'ADN dans des microcapillaires, -dautres polymres combinant des parties hydrophiles et des parties hydrophobes, sont utiliss pour diagnostiquer des mutations laide de mthodes dlectrochromatographie ultra-miniaturises, -des particules magntiques, qui forment sous l'action d'un champ magntique un cristal collodal quasi-bidimensionnel, sont utilises pour trier des chromosomes ou des cellules dans des laboratoires sur puces .

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Les biomatriaux : des matriaux doublement exigeants

Charles BAQUEY Inserm, Universit Victor Segalen, Bordeaux
ml : charles.baquey@bordeaux.inserm.fr

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L'inluctable outrage du temps sur le corps humain ainsi que les nombreuses maladies lies au passage des annes justifient des besoins croissants en organes de remplacement. Les russites remarquables obtenues par les transplantations classiques (russites techniques associes la multiplication des mdicaments antirejet et la matrise de leur administration) sont aussi accompagnes de diffrents inconvnients au premier rang desquels on trouve la pnurie du nombre de greffons : la liste des demandeurs s'allonge, l'opposition aux prlvements d'organes progresse, le nombre de transplantation d'organes plafonne. De plus, il s'est avr au cours des dernires annes que les transplantations d'organes prsentaient un risque significatif de transmission d'agents pathognes. Enfin, l'inconvnient majeur rside dans l'obligation du suivi d'un traitement immunosuppresseur. Scientifiques et mdecins ont depuis longtemps cherch des solutions alternatives la transplantation d'organes humains. Selon la dfinition labore Chester en 1986 par la Confrence de Consensus organise sous l'gide de la Socit Europenne des Biomatriaux, les biomatriaux sont des matriaux non vivants, utiliss dans un appareil mdical et conus pour interagir avec des systmes biologiques, qu'ils participent la constitution d'un dispositif vise diagnostique ou celle d'un substitut de tissu ou d'organe ou encore celle d'un dispositif de supplance (ou d'assistance) fonctionnelle. Depuis les dispositifs mdicaux usage unique jusqu'aux prothses implantes demeure, une grande varit de produits impliquent l'utilisation de biomatriaux. Leur caractristique commune est la biocompatibilit, proprit dont le caractre multiparamtrique en fait une fonction difficile mesurer ou valuer objectivement. La biocompatibilit d'un implant implique qu'il soit bien accept par les tissus d'accueil, voire bien intgr au sein de ces derniers, d'o le terme de biointgration couramment utilis pour dsigner le rsultat idal que peu (sinon aucun) des biomatriaux synthtiques permettent d'observer. A l'vidence le rsultat observable est conditionn par l'volution de la raction inflammatoire aigu conscutive l'implantation et par le comportement des cellules des tissus priimplantaires. Selon la nature du

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matriau, la structure de sa surface, ses caractristiques physicochimiques superficielles et la micromorphologie, ces cellules vont tre capables d'adhrer au matriau, de s'taler, de migrer, de prolifrer, de synthtiser et de scrter les composants d'une nouvelle matrice extracellulaire et de contribuer ainsi l'dification d'un notissu au sein duquel l'implant est parfaitement intgr. Cette intgration peut s'accompagner ou non d'une rsorption de l'implant. Dans les domaines mettant en jeu des biomatriaux et des matriels implantables, le degr d'exigence en matire de biocompatibilit est plus ou moins lev selon les dispositifs considrs, les paramtres prendre en compte tant la dure globale de la confrontation avec l'organisme du patient concern, le site anatomique impliqu, l'aire des surfaces de contact avec les tissus. Les matriaux constitutifs des matriels doivent possder la fois des proprits structurales adaptes la fonction attendue et des proprits superficielles garantissant l'instauration de relations positives l'interface matriau-tissus. C'est ainsi que dans le domaine de la substitution vasculaire artrielle de petit calibre, la double exigence passe par la mise au point de matriaux combinant des proprits structurales garantissant un comportement mcanique satisfaisant et des proprits superficielles vitant la survenue de phnomnes de thrombose. Cependant, pour de nombreuses applications, il est souvent difficile, voire impossible, de trouver des matriaux rpondant aux deux conditions la fois et la stratgie la plus judicieuse consiste choisir un matriau satisfaisant la premire condition puis modifier sa surface pour lui confrer les proprits permettant de satisfaire la deuxime condition. Les produits de telles recherches marquent la transition vers les matriaux hybrides et vers le dveloppement du gnie tissulaire dont l'un des axes moteurs concerne la conception de substituts bioartificiels (ou artificiels hybrides) de tissus. Ce domaine reprsente certainement la nouvelle gnration de biomatriaux et matriels implantables qui permettra la mdecine du XXIme sicle de glisser du statut de mdecine rparatrice celui de mdecine rgnratrice.

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Ultrasons : de la physique fondamentale la mdecine

Pascal LAUGIER1, Michael TANTER2, Emmanuel BOSSY1 et Jean-Franois AUBRY2 1 LIP UMR CNRS 7623 Universit Pierre et Marie Curie Paris 6, Paris 2 LOA UMR CNRS, ESCPCI, Universit Diderot Paris 7, Paris
ml : laugier@lip.bhdc.jussieu.fr

Les ultrasons en mdecine sont utiliss des fins diagnostiques ou thrapeutiques. Nous ne parlerons ici uniquement que des applications diagnostiques, mais il convient de rappeler que les effets mcaniques des ondes sonores (onde de choc, cavitation) sont exploits pour la destruction des calculs, tandis que les effets thermiques (absorption) le sont pour lablation des tumeurs.

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La pntration relativement aise des ultrasons dans les tissus mous permet lexploration de la plupart des organes lexception du squelette et des poumons. Des images chographiques morphologiques sont obtenues en analysant les chos rflchis par les tissus. Lanalyse des tissus en mouvement en mode Doppler , quant elle, permet de raliser une imagerie fonctionnelle de lappareil cardiovasculaire et une valuation des coulements du sang dans larbre vasculaire. La rsolution des images est plus fine lorsque la frquence des ondes ultrasonores augmente. Toutefois, la transparence aux ultrasons des tissus biologiques dcrot trs rapidement lorsque la frquence des ondes augmente. Des frquences ultrasonores comprises entre 2 et 15 MHz sont habituellement utilises chez lhomme, pour des rsolutions au mieux de lordre de quelques centaines de microns.

Figure 1 : Imagerie chographique de lil haute frquence. Image de la partie superficielle du globe oculaire (en haut droite), et reprsentation de 3D de la courbure de la corne (en bas droite).

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Dans les 20 dernires annes, des progrs importants ont t raliss dans la conception et la fabrication de capteurs en matriaux pizo-composites ou polymres. Les capteurs ont ainsi gagn en sensibilit, en largeur de bande et en densit dlments. Certains sont miniatures, dautres rsonnent haute frquence, entre 20 et 100 MHz. De nouvelles applications se sont dveloppes comme lexploration des organes par voie endocavitaire ou limagerie de lil (figure 1) et de la peau (figure 2) avec des rsolutions spatiales pouvant atteindre quelques dizaines de microns. Le progrs des calculateurs et des squences dacquisition volumique a permis lobtention dimages 3D spectaculaires, principalement dans le domaine de lobsttrique.

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Figure 2 : Empreinte digitale. Image obtenue avec un capteur de 20 MHz.

Laugmentation de la bande passante des capteurs actuels est telle quil est possible dsormais dmettre les ultrasons autour dune certaine frquence et de recevoir les chos rflchis dans dautres gammes de frquences. Ceci permet dexploiter leffet non-linaire des interactions ultrasonores avec les tissus pour produire de nouvelles images dites harmoniques . Les tissus biologiques sont des matriaux non-linaires, de telle sorte que des harmoniques de la frquence dmission apparaissent graduellement au cours de la propagation dans les tissus. Limagerie harmonique consiste sonder un tissu avec une frquence fondamentale et recueillir le signal rflchi une frquence harmonique (en principe lharmonique double) de la frquence dmission. Ce nouveau mode dimagerie permet lobtention dimages de meilleure qualit. Leffet non linaire est galement mis profit avec les produits de contraste ultrasonore. Les agents de contraste sont des microbulles de gaz encapsules, dont le diamtre est de lordre de quelques microns, que lon injecte dans la circulation par voie intraveineuse. En raison de leur trs grande compressibilit, ces microbulles se comportent comme des diffuseurs trs rflchissants (elles sont beaucoup plus rflchissantes que les globules rouges dans le sang). Elles permettent de rehausser le contraste des images de faon considrable dans tout le compartiment vasculaire et dans les rgions richement vascularises. De plus, ces microbulles ont la particularit de se comporter comme des rsonateurs non linaires avec des frquences de rsonance situes entre 1 et 9 MHz

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dans la gamme des frquences utilises en chographie. En combinant imagerie harmonique et produits de contraste, on se contente dcouter la rception la rponse spcifique des oscillations non linaires des microbulles lharmonique double de la frquence dmission pour obtenir un gain supplmentaire de rapport signal sur bruit. Cette technique permet une excellente caractrisation des coulements et de la perfusion des organes. Nous venons de donner quelques exemples de dveloppements rcents qui ont contribu lexpansion du champ d applications des mthodes diagnostiques ultrasonores et leur utilisation par un nombre sans cesse croissant de spcialits mdicales. Ces avances sont lies en grande partie lintroduction de capteurs plus performants. Linnovation vient galement du dveloppement de nouveaux modes dacquisition ou de traitement des signaux. Ce sont ces dveloppements que nous voquerons dans la suite. Tous ces dveloppements tentent dapporter des solutions aux questions suivantes : comment voir mieux, comment voir plus, comment voir des organes considrs inaccessibles jusqu maintenant (par exemple le cerveau et le squelette) ? Confronts la multiplicit des recherches, nous avons choisi de nous concentrer sur trois domaines rcents qui seront lorigine de nouvelles gnrations dappareils dans un futur proche : la focalisation dans les milieux htrognes, llastographie et la densitomtrie osseuse ultrasonore.

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Focalisation dans les milieux htrognes

La rflexion et la diffusion des ultrasons par des cibles sont lorigine de la formation de limage chographique. Alors que limage des frontires des structures macroscopiques (organe, tumeur) est lie la rflexion de londe incidente par les interfaces, l'chostructure1 (ou signal diffus) des parenchymes est due aux chos diffuss par les multiples htrognits diffusantes de petites tailles (compares la longueur donde) telles que capillaires, tissus conjonctifs, lots cellulaires, etc. La technique chographique a bnfici dans les annes 1970 des premiers rseaux de transducteurs pour la focalisation dynamique par formation de voie acoustique. Une focalisation uniforme en fonction de la profondeur peut tre obtenue grce aux procds de focalisation lectronique ou numrique associs aux barrettes de transducteurs. Une barrette multi-lments est constitue d'une range d'lments pizolectrique de petite taille (typiquement 64 128 lments de largeur 100 500 m). Le principe de la focalisation lectronique l'mission par une
Lchostructure ou signal diffus par les tissus biologiques porte galement le nom de speckle ultrasonore, par analogie avec le phnomne de speckle laser, car cest le rsultat de linterfrence dun grand nombre dondes diffuses par les diffuseurs microscopiques des tissus.
1

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barrette linaire est illustre sur la figure 3. Plusieurs lments pizolectriques de la barrette fonctionnent ensemble pour produire un front d'onde convergent. Les lments sont excits avec des dcalages temporels qui correspondent la courbure de l'onde que l'on dsire mettre. Les lments latraux les plus loigns du centre de courbure de l'onde convergente mettent les premiers, l'lment central met le dernier. Les dcalages temporels peuvent tre produits par des circuits lectroniques (lignes retard analogiques) on parle alors de focalisation lectronique ou numriquement on parle alors de synthse de faisceau numrique (Digital Beam Forming). La focalisation l'mission peut tre modifie chaque tir, en changeant la loi de retards applique aux lments de l'ouverture. La combinaison de plusieurs distances focales l'mission amliore la qualit de l'image. En contrepartie, la cadence d'images est diminue par un facteur gal au nombre de distances focales slectionnes.

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Le mme principe est utilis pour la focalisation la rception. Une correction de retard est applique derrire chaque lment. Cette loi de retard compense exactement les diffrences de temps de vol lies la courbure de londe reue et permet de remettre en phase tous les signaux issus dune cible la profondeur z : elle ralise ainsi une ouverture focalisante synthtique qui slectionne les chos provenant de la zone visualiser. Le grand avantage des rseaux de transducteurs est la possibilit de raliser une focalisation dynamique (ou focalisation poursuite) en rception. Il est possible d'ajuster chaque instant la loi de retard lectronique la profondeur d'o proviennent les chos reus cet instant. On ralise ainsi l'analogue d'une lentille convergente focale variable (ou l'analogue de la fonction d'accommodation de l'il). Le systme en rception garde ainsi un pouvoir de rsolution optimum chaque profondeur. Ces techniques de focalisation reposent sur lhypothse que la vitesse du son dans le corps est constante et une correction simple des retards gomtrique due aux diffrences de trajets de propagation peut tre obtenue en appliquant une loi de retard cylindrique. Cependant, les fluctuations de vitesse du son observes quand on passe dun tissu lautre (graisse : 1450 m/s ; muscle : 1570 m/s) ou lintrieur dun mme organe sont responsables de distorsions du faisceau ultrasonore, appeles aberrations de phase et damplitude, qui dgradent la qualit de la focalisation. Les images obtenues chez certains patients sont tellement dgrades que leur interprtation est rendue difficile. Une correction peut tre apporte la rception des signaux par simple dcalage temporel lorsque les aberrations sont de pures aberrations de phase.

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Signaux lectriques
Lignes retard

Transducteurs

Ondes mises par chaque lment

Distance focale

(a)

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Lignes retard

Transducteurs

cible

Focalisation dynamique en rception cible

(b) Figure 3 : Principe de la focalisation lectronique par ligne retard laide dune barrette de transducteurs. (a) Focalisation lectronique lmission : un ensemble de retards (lectroniques ou numriques) permet dmettre une onde focalise. (b) Focalisation lectronique variable en rception : un ensemble de retards permet de remettre en phase tous les signaux issus dune cible la profondeur z. La loi de retard est ajuste chaque instant pour focaliser la profondeur d'o proviennent les chos reus cet instant.

Linter-corrlation des signaux issus de deux lments voisins de la barrette permet de dterminer le dcalage temporel appliquer pour corriger les aberrations introduites par le milieu et remettre les signaux en phase. Cependant, les aberrations pour des ondes qui se sont propages dans le corps humain comportent des modifications de la phase et de lamplitude, car chaque composante spectrale des signaux subit un

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dphasage qui lui est propre. Les fluctuations dabsorption dans le milieu de propagation contribuent galement au phnomne daberration donde. De simples dcalages temporels des signaux sont insuffisants dans le cas le plus gnral pour corriger totalement les dfauts de la focalisation. Ces dfauts sont plus importants dans le cas de los, milieu fortement rfractant et trs absorbant (vitesse des ondes de compression dans los cortical: 3500 m/s), et il est impossible dobtenir une image de bonne qualit du cerveau travers la bote crnienne avec les procds classiques de focalisation. Des techniques dautofocalisation ont t proposes pour pallier cette difficult. Le principe de ces nouvelles mthodes de focalisation dans les milieux htrognes repose sur lide quil faut, non pas transformer les signaux au moment de leur rception en les remettant en phase -comme on le fait pour la focalisation traditionnelle-, mais quil faut mettre des signaux diffrents sur chaque lment de louverture. La forme des signaux mettre dpend de lhtrognit du milieu quils vont traverser. Pour cela, une connaissance a priori sur lhtrognit du milieu est ncessaire. La premire des techniques dautofocalisation propose par Mathias Fink, le retournement temporel, est base sur linvariance de lquation de propagation par renversement du temps. Cette proprit implique que si le champ de pression p(r,t) est une solution de lquation de propagation, alors p(r,-t) en est galement une solution2. Le processus de focalisation par retournement temporel se fait en deux tapes (figure 4). Une premire tape sert de phase dapprentissage du milieu et permet de dterminer la forme des signaux quil faudra mettre pour obtenir une focalisation optimale travers le milieu htrogne. Pour cela, on effectue un premier tir ultrasonore travers le milieu aberrateur. Le champ p(r,t) rflchi par une cible plonge dans le milieu se propage et se dforme la traverse du milieu aberrateur. Il est enregistr et numris laide dun rseau de capteurs, puis les signaux retourns dans le temps sont r-mis en direction de la cible. Londe r-mise, p(r, -t), va suivre le chemin inverse en vertu de linvariance de lquation de propagation par renversement du temps et re-focalisera alors sur la cible. Le retournement temporel agit comme un filtre spatio-temporel adapt pour la propagation en optimisant lnergie reue au point focal. Dans le cas dun milieu non dissipatif, et seulement dans ce cas, le retournement temporel est quivalent un filtre spatio-temporel inverse exact de la propagation et permet une focalisation travers le milieu aberrateur identique la focalisation que lon obtiendrait dans un milieu homogne non dissipatif. Lexistence de processus dissipatifs dans le milieu brise linvariance de lquation de propagation par retournement temporel (l'absorption se traduisant dans l'quation par une drive temporelle d'ordre un) et met en

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Lquation de propagation reliant p et t est invariante par renversement du temps.

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Barrette

Milieu htrogne Cible

Transmission

(a)
Rception

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(b)

Retournement temporel

(c)

Figure 4 : Principe de la focalisation par retournement temporel. (a) et (b) : phase dapprentissage du milieu. (c) phase de retournement temporel au cours de laquelle les signaux numriss lors de la phase dapprentissage sont r-mis aprs retournement temporel. Si S(t) est le signal reu la phase (b), le signal r-mis la phase (c) est S(T-t).

chec la focalisation par retournement temporel. Une nouvelle technique, le filtre inverse spatio-temporel, permet dobtenir une focalisation optimale dans tout milieu linaire, quil soit dissipatif ou non. Cette technique repose sur la connaissance complte de loprateur de propagation entre la

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barrette mettrice et un rseau de points de contrle situs dans le plan focal. Il est alors possible de focaliser sur lun des points de contrle tout en minimisant lnergie reue sur tous les autres points de contrle en choisissant les formes dondes appropries mettre par les lments de la barrette. Cette phase de focalisation passe par linversion de loprateur de propagation que lon a au pralable mesur au cours de la premire phase dapprentissage du milieu.

lastographie
Llastographie ultrasonore est une nouvelle technique permettant de raliser une imagerie quantitative des paramtres lastiques des tissus. Cette technique consiste dtecter la dformation des tissus lorsquils sont soumis une contrainte externe ou des vibrations internes dorigine physiologique comme les contractions cardiaques. Elle vise ainsi complter par une mesure quantitative la palpation effectue par le mdecin pour dpister la prsence dun nodule dur. Ce geste mdical simple est souvent le premier geste pratiqu dans le dpistage dun certain nombre de cancers, par exemple les cancers du sein ou de la prostate. En ralit, la palpation est un geste qui permet une valuation subjective de la rigidit des tissus, c'est--dire de leur module dYoung. Llastographie met en uvre des techniques dinter-corrlation entre images chographiques successives pour suivre la dformation des tissus et former une cartographie du module de rigidit (module dYoung) tissulaire. Rappelons que deux types de dformations lmentaires suffisent expliquer une dformation gnrale dun solide lastique: le changement de forme sans changement de volume (glissement ou cisaillement) et le changement de volume sans changement de forme (compression uniforme). Dans le cas d un glissement pur ou d une compression uniforme pure d'un solide lastique isotrope, le lien entre la contrainte et la dformation est dtermin respectivement par le module de cisaillement ou de compression uniforme K (loi de Hooke). Dans les tissus biologiques mous, le module de compression K (de lordre du GPa) est beaucoup plus lev que le module de cisaillement (103-107 Pa). Par consquent, le module dYoung qui sexprime en fonction de K et

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E=

9 K 3 3K +

est pour les tissus mous le reflet essentiellement du module de cisaillement. Le module dYoung est le seul qui varie dans des proportions importantes en prsence dun nodule dur. Dans les tissus mous, les ondes de compression qui se propagent aux frquences ultrasonores avec la clrit

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cl =

3 + 4 3

ne portent pas en elles d'information sur le module de cisaillement et ne permettent donc pas daccder la mesure du module dYoung. Seules les ondes lastiques de cisaillement qui se propagent avec la clrit

ct =

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peuvent nous renseigner sur la rigidit (le module dYoung) des tissus mous. Or, dans les tissus mous biologiques, aux frquences ultrasonores, les ondes de cisaillement sont extrmement rapidement attnues et notre corps se comporte alors comme un fluide. Les ondes de cisaillement ne se propagent dans les tissus mous quaux trs basses frquences. ces frquences (typiquement quelques dizaines de Hz), le corps se comporte comme un solide lastique et les deux types d'ondes peuvent se propager. Afin de remplacer la palpation manuelle par une technique de palpation quantitative , plusieurs techniques ont vu le jour associant une sollicitation mcanique basse frquence un systme ultrasonore de dplacement des tissus. Nous dcrirons ici lune de ces techniques connues sous le terme dlastographie impulsionnelle. Llastographie impulsionnelle est un procd dimagerie utilisant les ondes de cisaillement basses frquences pour caractriser un milieu viscolastique diffusant qui contient des particules rflchissant les ondes ultrasonores de compression. On gnre une onde de cisaillement en appliquant au milieu viscolastique une excitation ayant la forme dune impulsion basse frquence (quelques dizaines ou centaines de Hz) et on observe au moyen dune onde ultrasonore de compression (quelques MHz) le dplacement du milieu viscolastique sous leffet de londe de cisaillement. Les ondes de cisaillement dans les tissus se propageant la vitesse de quelques m/s, une cadence de plusieurs milliers dimages par seconde est ncessaire pour suivre lvolution des dplacements induits par londe de cisaillement lchelle du mm. On observe la propagation de londe de cisaillement simultanment en une multitude de points dans le milieu en mettant une succession de tirs ultrasonores de compression une cadence leve (typiquement 5000 tirs par seconde). On dtecte en temps rel les chos gnrs par les particules rflchissantes du milieu chaque tir ultrasonore, lensemble de ces chos correspondant des images chographiques instantanes successives du milieu observ (cest-dire des images successives du milieu au cours de la propagation de londe de cisaillement). Comme le milieu est branl au passage de londe

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de cisaillement, les diffuseurs du milieu sont eux-mmes branls et le temps de vol des chos varie dune image lautre. Le signal chographique ultrasonore est chantillonn haute frquence en temps rel puis mmoris. Il y a ensuite une tape de traitement dimage (ou de signal) en diffr au cours de laquelle on traite les images obtenues par inter-corrlation entre images successives, pour dterminer en chaque point du milieu (ou du champ dobservation) la variation du temps de vol des chos, reflet du mouvement du milieu (sous leffet du passage de londe de cisaillement). Au cours du processus dinter-corrlation, le maximum de la fonction dinter-corrlation est recherch afin de dterminer le dplacement subi par chaque diffuseur donnant lieu un cho ultrasonore. On obtient la suite du traitement une succession dimages montrant lvolution de la dformation du milieu sous leffet de la propagation de londe de cisaillement. On peut visualiser cette succession dimages sous forme dun film ralenti o la valeur instantane de la dformation en chaque point du milieu est code sous forme de niveau de gris, qui peut permettre, dans les applications mdicales, de reprer directement des zones cancreuses dures: la propagation de l'onde de cisaillement sy droule en effet trs diffremment des zones voisines. Les dplacements engendrs dans une zone dure sont en effet beaucoup plus faibles que ceux engendrs dans les tissus sains environnants. De plus, l'onde de cisaillement est fortement diffracte lorsqu'elle atteint une zone dure. Ce reprage seffectue donc beaucoup plus facilement que par simple observation chographique ultrasonore, puisque la propagation des ondes de cisaillement est fonction du module de cisaillement du milieu, luimme trs variable entre tissus sains et tissu cancreux : le module de cisaillement varie typiquement dans un rapport de 1 30 entre une zone saine et une zone cancreuse, alors que le module de compression qui rgit la propagation des ondes ultrasonores de compression utilises par lchographie ultrasonore varie seulement de lordre de 5% entre un tissu sain et un tissu cancreux. partir de lvolution de la dformation du milieu au cours du temps dans le champ dobservation, on peut, par un processus classique dinversion, remonter la valeur locale de la vitesse de londe de cisaillement et donc au module dYoung. Llastographie pourrait ainsi complter lexamen chographique classique en amliorant la prcision du dpistage ou du diagnostic des tumeurs du sein ou de la prostate (figure 5).

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Densitomtrie osseuse ultrasonore

Los rflchit et absorbe fortement les ultrasons. Pour ces raisons, aucune des mthodes chographiques dveloppes pour les tissus mous nest adapte lexamen du squelette. Pourtant, en adaptant les techniques de mesures, il est possible de mesurer les proprits acoustiques de los, telles que la vitesse et lattnuation des ultrasons.

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Barrette ultrasonore

Vibreur basse frquence

Figure 5 : Exemple de prototype de sonde ralise au LOA, utilise pour le dpistage du cancer du sein par lastographie. La sonde chographique conventionnelle est monte sur un systme vibrant basse frquence pour gnrer une onde de cisaillement dans les tissus. L'imagerie d'lasticit des tissus peut tre ralis en mme temps qu'un examen chographique classique.

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Ces proprits peuvent se rvler trs intressantes car elles sont relies la densit et la rsistance osseuses. En particulier, les ondes se propagent moins vite, mais elles sont aussi moins attnues lorsque los est peu dense. Cest ce que lon observe chez des sujets atteints dostoporose, pour lesquels les os sont devenus si poreux quils finissent par se fracturer spontanment. Les paramtres acoustiques tels que lattnuation ou la vitesse des ultrasons sont utiliss pour la prdiction du risque de fracture. La densitomtrie osseuse ultrasonore regroupe lensemble des techniques ultrasonores utilises pour valuer la rsistance du squelette et prdire le risque de fracture. Le principe de mesure des proprits acoustiques de los repose sur la transmission d'une onde ultrasonore de basse frquence (de 250 kHz 1,25 MHz selon la technique et le site de mesure) travers l'os ou le long de sa surface corticale. Il suffit pour cela de disposer au moins deux capteurs (un metteur et un rcepteur) soit de part et d'autre du site squelettique mesur (transmission transverse), soit le long de sa surface (transmission axiale). Il s'agit donc d'une mesure en transmission, ce qui diffrencie la densitomtrie ultrasonore osseuse des autres applications diagnostiques ultrasonores qui fonctionnent en rflexion selon le principe de l'chographie. Rsumons le principe de la mesure par transmission transverse. On parle de transmission transverse, car le signal traverse l'os de part en part. Les mesures sont effectues au niveau de sites squelettiques priphriques facilement accessibles tels que le talon ou les phalanges. L'attnuation en fonction de la frquence est obtenue par une mthode de substitution qui procde en deux tapes et consiste comparer le spectre du signal transmis dans l'os au spectre d'un signal de rfrence acquis travers un milieu de rfrence d'attnuation connue. Le milieu de rfrence est en gnral de leau dont lattnuation aux frquences utiles (< 1 MHz)

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peut tre considre comme nulle. Les signaux sont large bande et leur spectre est calcul par transforme de Fourier. L'attnuation en fonction de la frquence s'exprime simplement comme le rapport des spectres d'amplitude. L'attnuation de l'os varie quasi linairement en fonction de la frquence. Il suffit donc de mesurer la pente de la droite de rgression de l'attnuation en fonction de la frquence partir de la droite de rgression obtenue par la mthode des moindres carrs. La vitesse de propagation dans l'os s'exprime simplement partir de la diffrence des temps de vol entre les signaux de rfrence et les signaux transmis dans l'os. Une autre approche consiste estimer la vitesse de phase en fonction de la frquence partir de la phase du rapport des spectres et utiliser la valeur moyenne de la vitesse dans la bande passante utile. Une image des paramtres ultrasonores de la structure examine est obtenue en mesurant localement les paramtres lors du balayage de la structure par le faisceau ultrasonore (figure 6).

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La technique de transmission axiale exploite le phnomne de rfraction langle critique qui se produit lorsquune onde incidente passe dun milieu de vitesse de propagation c1 un milieu o la vitesse de propagation est c2, avec c2>c1. Cest le cas lorsquune onde est transmise dans los (c2~4000 m/s) partir dun metteur plac la surface de la peau

Radiographie

Pente de lattnuation en fonction de la frquence

Figure 6 : Illustration de limagerie osseuse par transmission transverse. Limage du talon obtenue partir de la mesure de la pente de la droite dattnuation en fonction de la frquence est ici compare la radiographie standard rayons X.

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(c1~1500 m/s). Une srie de rcepteurs est dispose la surface de la peau et enregistre le passage de londe de tte (galement appele onde latrale) qui est rayonne par londe rfracte excite l'angle critique longitudinal

sin c =

c1 c2

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se propageant dans los le long de la surface de celui-ci la vitesse c2. La technique repose sur lestimation de la vitesse de londe de tte qui est l'origine du premier signal dtect au niveau des rcepteurs (figure 7). Tant que lpaisseur de los est plus grande que la longueur donde des ondes de compression dans los, londe latrale reste bien le premier signal dtect. Sa vitesse de propagation c2 permet de caractriser ltat osseux, notamment la valeur de la vitesse diminue lorsque la densit de los diminue (ou lorsque la porosit de los augmente). Dans le cas o lpaisseur de los est voisine de la longueur donde, des phnomnes lis lexistence dondes guides peuvent apparatre, de telles ondes pouvant alors interfrer avec londe de tte. Dans ce cas, la vitesse du premier signal dpend non seulement de c2 mais aussi de lpaisseur de los. L'atout d'un tel dispositif est de permettre une valuation multi-sites et en particulier l'examen de sites squelettiques difficile d'accs pour les mesures par transmission transverse.

(a)

source eau os

Onde de tte rcepteurs

(b)
Figure 7 : (a) Prototype de sonde pour la mesure de la vitesse de propagation des ultrasons le long de los cortical (radius) par transmission axiale. (b) Simulation numrique par diffrences finies du phnomne de propagation de londe de tte dans le cas dune source ponctuelle mettrice place dans leau au-dessus dun chantillon dos cortical.

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Lostoporose est une maladie diffuse du squelette caractrise par une masse osseuse basse et des altrations de la micro-architecture du tissu osseux conduisant une augmentation de la fragilit osseuse et de la susceptibilit aux fractures. Les mthodes de rfrence reposent sur labsorption de rayons X par le tissu osseux. Dintroduction rcente, les mthodes ultrasonores voient leur place au sein de larsenal des techniques dvaluation osseuse crotre rgulirement, et ce pour plusieurs raisons : dune part parce quil sagit dune technique au cot modr, sans irradiation et aux rsultats cliniques indiscutablement prometteurs, dautre part parce que les ultrasons, en tant qu'ondes lastiques, ont le potentiel dapporter une information prcieuse sur des facteurs osseux, tels que sa densit, sa micro-architecture ou llasticit du tissu, qui dterminent sa rsistance. Lexamen quantitatif ultrasonore, linstar de la densitomtrie rayons X, se prte bien au dpistage lchelle dune population des sujets risque de fracture comme aux mesures rptes pour le suivi des sujets au cours du temps.

Conclusion
Le domaine des applications biomdicales des ultrasons est bien tabli. La technique est largement utilise dans de nombreuses spcialits et ne cessent de senrichir grce aux progrs technologiques rapides, en particulier du ct des rseaux de capteurs multi-lments compltement programmables. Les nouvelles mthodes de focalisation travers les milieux htrognes ouvrent des perspectives pour limagerie et la thrapie du cerveau travers la paroi crnienne. Les nouvelles techniques diagnostiques dlastographie et de densitomtrie ultrasonore en sont encore leurs balbutiements. Des expriences rcentes ont dmontr la possibilit de gnrer des ondes de cisaillement en profondeur partir de la pression de radiation. Llucidation des mcanismes dinteraction des ondes ultrasonores avec la structure osseuse devrait permettre une valuation plus complte de la microarchitecture osseuse et une meilleure valuation du risque fracturaire.

Bibliographie
1. F.S.Foster, C.J. Pavlin, K.A. Harasiewicz D.A. Christopher and D.H. Turnbull," Advances in ultrasound biomicroscopy," Ultrasound Med Biol, vol. 26, pp. 1-27, 2000. 2. M. Berson, J. M. Grgoire, F. Gens, J. Rateau, F. Jamet, L. Vaillant, F. Tranquart and L. Pourcelot, High frequency (20 MHz) ultrasonic devices: advantages and applications, European Journal of Ultrasound, vol. 10, pp. 53-63, 1999. 3. C. J. Pavlin and F. S. Foster, Ultrasound biomicroscopy of the eye. New York: Springer-Verlag, 1995. 4. M. Fink," Time reversal of utrasonics fields-Part I : basic principles," IEEE Ultrason Ferroelec Freq Contr, vol. 39, pp. 555-566, 1992.

147

5. F. Wu, J.-L. Thomas, M. Fink," Time reversal of utrasonics fields-Part II : experimental results," IEEE Ultrason Ferroelec Freq Contr, vol. 39, pp. 566-578, 1992. 6. D. Cassereau, M. Fink," Time reversal of utrasonics fields-Part III : theory of the closed time-reversal cavity," IEEE Ultrason Ferroelec Freq Contr, vol. 39, pp. 555-566, 1992. 7. M. Fink Time-reversed acoustics Scientific American, p.67-73 Novembre 1999. 8. M. Tanter, J.-L. Thomas, M. Fink," Time reversal and the inverse filter, " J Acoust Soc Am, vol. 108, pp. 223-234, 2000. 9. J.-F. Aubry, M. Tanter, J. Gerber, J.-L. Thomas, M. Fink," Optimal focusing by spatio-temporal inverse filter. I, " J Acoust Soc Am, vol. 110, pp. 37-47, 2001. 10. J.-F. Aubry, M. Tanter, J. Gerber, J.-L. Thomas, M. Fink," Optimal focusing by spatio-temporal inverse filter. II, " J Acoust Soc Am, vol. 110, pp. 48-58, 2001. 11. A.P. Sarvazyan, A.R. Skovoroda, S.Y. Emelianov, J.B. Fowlkes, J.G. Pipe, R.S. Adler, R.B. Buxton, P.L. Carson, " Biophysical bases of elasticity imaging, " in Acoustical Imaging, vol 21, Edited by J.P. Jones, Plenum Press, New York, pp. 223-240, 1995. 12. L. Sandrin, S. Cathelin, M. Tanter, X. Hennequin, M. Fink, " Time-resolved pulsed elastography with ultrasfast ultrasonic imaging, " Ultrasonic Imaging, vol. 21, pp. 259-272, 1999. 13. L. Sandrin, M. Tanter, S. Catheline, M. Fink, " Shear modulus imaging with 2D transient elastography, " IEEE Ultrason Ferroelec Freq Contr, vol. 49, pp. 426-435, 2002. 14. L. Sandrin, M. Tanter, J.-L. Gennisson, S. Catheline, M. Fink, " Shear elasticity probe for soft tissues with 1-D transient elastography, " IEEE Ultrason Ferroelec Freq Contr, vol. 49, pp. 436-446, 2002. 15. Quantitative ultrasound : assessment of osteoporosis and bone status. Edited by C.F. Njeh, D. Hans, T. Fuerst, C.C. Gler, H.K. Genant, Martin Dunitz, London, 1999. 16. C. Roux, B. Fournier, P. Laugier, C. Chappard, S. Kolta, M. Dougados, G. Berger, "Broadband ultrasonic attenuation imaging: a new imaging method in osteoporosis, " J Bone Miner Res, vol. 11, pp. 1112-1118, 1996. 17. S. Chaffa, F. Peyrin, S. Nuzzo, R. Porcher, G. Berger, P. Laugier, "Ultrasonic Characterization of human cancellous bone using transmission and backscatter measurements : relationships to density and microstructure, " Bone, vol. 30, pp.229-237, 2002. 18. E. Camus, M. Talmant, G. Berger and P. Laugier, Analysis of the axial transmission technique for the assessment of skeletal status, J Acoust Soc Am, vol. 108, pp. 3058-3065, 2000. 19. E. Bossy, M. Talmant and P. Laugier, 2D simulation of the axial transmission technique on a cortical bone plate, J Acoust Soc Am, vol. 112, pp. 297-307, 2002.

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Imagerie par laser impulsions ultracourtes : Pourquoi deux photons valent mieux quun ?
Franois AMBLARD Laboratoire de Physico-Chimie, Institut Curie, Paris
ml : francois.amblard@curie.fr

Introduction
Limagerie optique est utilise pour le diagnostic et la recherche en biologie, comme outil privilgi daccs la structure intime des tissus et des cellules avec la rsolution micromtrique. Quelles que soient les modalits employes, les informations fournies par ces images proviennent des proprits physiques des tissus vis--vis de la lumire, touchant sa propagation absorption, polarisation, birfringence ou des proprits de photo-mission induite fluorescence, phosphorescence. Dans ce champ mthodologique, les lasers ont apport de nouvelles possibilits dimagerie comme limagerie confocale, et les applications destines initialement la recherche en biologie sont progressivement mises au service de la pratique mdicale. En particulier, loptique non-linaire et les lasers impulsions ultracourtes durant typiquement 10-13 s ont t introduits en microscopie en 1978 [Sheppard 1978, Denk 1990], et ont apport des innovations radicalement nouvelles : lintensit considrable des impulsions produit des effets non-linaires dont les consquences sont particulirement utiles en biologie [Diaspro 2002]. Limagerie que ces effets permettent est dite non-linaire ou, de faon quivalente, imagerie multiphotonique . Il devient possible de voir dans la profondeur dun tissu, et de pratiquer des biopsies optiques la faon dune tomographie, ce qui est impossible en optique linaire. Cet article vise principalement prsenter les bases physiques essentielles de limagerie non-linaire et les ordres de grandeur importants. Nous mentionnerons de faon succincte les conditions de mise en uvre, les applications actuelles en biologie et les dveloppements en direction de la mdecine.

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I - Le paradoxe de limagerie en profondeur et le bnfice de la non-linarit optique

1. Voir dans un objet pais : conjugaison et exigences paradoxales
La formation dune image, illustre sur la figure 1, ncessite un dispositif (L) qui conjugue chaque point du plan objet (o) un point du plan

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image (i). Par dfinition de la conjugaison optique, tout rayon lumineux issu dun point objet donn passera par son point image, dans la limite des diverses aberrations du systme optique employ. Linformation transporte par cette conjugaison, contenu mme de limage, repose soit sur lmission de lumire produite directement par les points du plan (o) comme cest le cas pour la luminescence, soit sur la modification de la couleur, de lintensit, de la phase, ou de la direction de propagation de la lumire dune source servant exciter lobjet. Dans le second cas, qui recouvre lessentiel des applications de limagerie optique et de la microscopie, on trouve les techniques bases sur la fluorescence, le contraste de phase ou dabsorption, le contraste de rflectivit, etc. autant de mthodes pour lesquelles une source de lumire (s) est ncessaire pour clairer lchantillon. Dans le cas simple dun objet plan, le seul problme pos par la source est quelle doit tre assez intense pour que limage soit bien visible par le dtecteur situ dans le plan (i) ou dans un autre plan conjugu celui-ci.

Figure 1 : Illustration de la notion de conjugaison optique la base des dispositifs dimagerie. Une source (s) claire un plan objet (o) conjugu point par point avec un plan image (i) via un systme optique (L). La rsolution latrale de ce dispositif est gale 0,6./ON, o est la longueur donde de la lumire employe et ON louverture numrique du systme optique. Louverture ON est donne par n.sin(), o est le demi-angle au sommet des rayons issus de lobjet, et n lindice de rfraction du milieu de propagation. La profondeur de champ vaut n/ON2.

Cependant, le cas le plus gnral et surtout le plus intressant en biologie est celui dchantillons pais. La notion dpaisseur intervient pour deux raisons au moins : la conjugaison dune part, et la propagation des rayons lumineux dans lobjet. Si lon considre en effet un objet tendu, dans la direction perpendiculaire aux plans (o) et (i), cette extension affectera la conjugaison si elle dpasse la profondeur de champ du dispositif (L). Dans les applications de microscopie qui nous concernent, la profondeur de champ est relativement faible, de lordre de quelques microns, et nombre dchantillons intressants sont donc pais dans ce sens-l. Considrons donc un objet pais, et cherchons obtenir limage dun plan de mise au point (o) plus mince que cet chantillon et enfoui dans son paisseur [figure 2]. Moyennant les corrections lies aux sauts dindice suivant les rgles de loptique gomtrique, il est possible de construire nouveau un plan image (i) conjugu du plan (o) enfoui. Les

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rayons noirs illustrent cette conjugaison. Cependant, si lchantillon est constitu dune matire homogne, alors les processus qui transforment la lumire de la source (s) en rponse lumineuse utile pour la construction de limage nont aucune raison dtre localiss dans le plan de mise au point (o), et ont galement lieu la surface de lobjet par exemple. On a donc, outre les rayons provenant de points du plan (o) enfoui, des rayons provenant de points de la surface (rayons gris), et plus gnralement de tous les plans excits. Limage nette forme dans le plan (i) par conjugaison avec le plan (o) sera donc brouille par une composante floue apporte par les rayons lumineux provenant de points hors du plan de mise au point.

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Figure 2 : Illustrations du paradoxe de limagerie des objets pais. Limage dun plan enfoui dans un objet pais est forme par les rayons lumineux (noirs) produits par ce plan en rponse lexcitation lumineuse apporte par une source (s). Une image nette sera forme dans le plan (i) si celui-ci est optiquement conjugu au plan (o) via le systme optique (L). Si le milieu de lchantillon rpond de faon homogne lexcitation de la source, alors limage dans le plan (i) sera brouille par les rayons lumineux (gris) correspondant la rponse de points ne se trouvant pas dans le plan (o) de mise au point.

Imager un plan objet (o) enfoui dans un chantillon pais requiert donc idalement deux proprits contradictoires : la lumire de la source (s) doit interagir avec ce plan, et les plans autres que ce plan objet doivent tre transparents cette lumire. Si lchantillon est de constitution homogne, ces deux exigences sont naturellement incompatibles. Ces exigences paradoxales de limagerie des objets pais ont conduit plusieurs solutions classiques : a) La premire solution est celle sur laquelle repose la microscopie confocale [Pawley 1995]. Lide centrale est de slectionner la lumire provenant du plan de mise en point en plaant un trou daiguille dans le plan conjugu. On imagine laide de la figure 2, quun tel trou, plac au point de convergence des rayons noirs, liminera lessentiel des rayons indsirables (rayons gris). Ceci ne fonctionne cependant que point par point. Do le principe de la microscopie confocale : la lumire dexcitation produite par un laser est focalise en un point qui balaye lchantillon au cours du temps, et lon cre par conjugaison optique un foyer confocal fixe

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o est plac un trou daiguille qui ne laissera passer chaque instant que la rponse provenant du point focal. b) La seconde solution est la microscopie par dconvolution [Carrington 2002]. On exploite ici lide que, si le systme optique (L) est connu, alors on peut calculer la distribution, dans le plan image, de lintensit lumineuse provenant dune source ponctuelle, o quelle soit dans lchantillon. Inversement, il est possible par le calcul de remonter de la distribution de cette intensit dans le plan (i) la distribution des sources ponctuelles qui en sont la cause. Cette approche est dite de dconvolution, car il sagit dinverser la relation mathmatique fondamentale de limagerie : limage par un systme optique est le produit convolution de la distribution des sources par la fonction rponse ponctuelle du systme. Grce la puissance de calcul accrue des ordinateurs courants, cette approche par dconvolution est de plus en plus pratique en biologie.

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Notons que ces solutions classiques rpondent chacune leur manire au paradoxe, soit en bloquant la lumire produite hors du plan de mise au point, soit en calculant do elle provient. La solution offerte par limagerie non-linaire dcrite ci-dessous est de ce point de vue radicalement diffrente.

2. Lexcitation non-linaire est localise

Pour les besoins de la dmonstration (figure 3) nous considrons un faisceau lumineux collimat issu dun laser, de puissance P0 dispense sur une surface circulaire S0, qui se rduit dans la direction z par focalisation travers une lentille (L); la surface S(z) atteint au foyer z = 0 son minimum limit par la diffraction. En amont de la lentille, lintensit I0 et la surface S0 sont relies par lquation P0 = I0.S0. On suppose que le milieu excitable est suffisamment dilu pour rendre ngligeable la perte dnergie du faisceau rsultant de linteraction avec le milieu ; la conservation de la puissance scrit donc I(z).S(z) = P0 = I0.S0. Lintensit I est le produit du flux de photon () par lnergie individuelle des photons considrs. On suppose que lintensit I(z) est distribue uniformment sur ltendue de la section S(z). Cette hypothse nest pas raliste, mais elle est commode et ninvalide pas le rsultat par rapport ce quon obtiendrait avec une distribution dintensit plus raisonnable. Suivant une hypothse trs naturelle de rponse linaire, on peut considrer localement que la densit F de la rponse du milieu nombre de photons par unit de volume et par unit de temps est proportionnelle au flux dexcitation : F(z) = .I(z). Alors la rponse R(z), intgre sur la surface S(z), vaut R(z) = .P0. Autrement dit le nombre de photons S(z).dz produits par unit de temps est le mme pour chaque tranche perpendiculaire

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laxe. La rponse nest pas localise, mais seulement plus concentre autour du point focal. En revanche, lhypothse dune rponse non-linaire, par exemple quadratique avec F(z) = .I2(z), conduit R(z) = .P02 / S(z). La rponse est donc maintenant localise, au sens o elle est plus leve dans les sections voisines du point focal. Plus prcisment, dans une gomtrie trs courante, on peut voir le faisceau lumineux comme une enveloppe conique, o S(z) est proportionnel z2, sauf au voisinage de la singularit au point focal z = 0. Au-del de ce voisinage, la rponse R(z) est donc proportionnelle 1/z2, et lintgrale de cette rponse sur des volumes embots de taille croissante autour du volume focal est convergente. Cest dans ce sens de convergence que nous entendons la notion de localisation. Le rsultat gnral est le suivant : si un matriau rpond nonlinairement une excitation lumineuse de flux I par une rponse localement donne par F = .I1+, avec > 0, alors la rponse un faisceau lumineux convergent est intrinsquement localise au voisinage du point focal. Cette consquence de la non-linarit est trs gnrale, car aucune hypothse particulire na t faite sur la nature de la rponse. Le volume caractristique de localisation est de lordre de (/ON)3. Quand louverture numrique est grande (voisine de 1), le volume de localisation est typiquement 1 m3.

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Figure 3 : Gomtrie dun faisceau convergent et localisation des interactions non-linaires. Un faisceau laser de puissance P0 et de section S0 est focalis suivant laxe z par une lentille (L) dans un milieu homogne jusqu un point focal z = 0. On suppose que la puissance nest pas attnue par le milieu et que lintensit I crot donc suivant I.S = P0. La rponse non-linaire du milieu est localise autour du point focal dans un volume de lordre de (/ON)3.

3. Rponse non-linaire dune molcule : modle simple doscillateur

La proprit de localisation dcrite plus haut sexprime simplement en termes mathmatiques. Quelle est sa signification physique ? Nous voulons illustrer qualitativement comment peut apparatre une rponse optique non-linaire. Pour cela, rappelons que la lumire transporte un champ lectrique perpendiculaire sa direction de propagation et quune

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lumire monochromatique correspond donc un champ sinusodal de la forme E0.eit. Une molcule place dans un tel champ va acqurir un diple induit habituellement crit p* = E, avec la polarisabilit et la permittivit . Une reprsentation courante de la polarisation est celle de deux charges opposes que le champ lectrique spare, en opposition une force de rappel lectrostatique. Cette force de rappel molculaire ne drive dun potentiel harmonique quen premire approximation. Une forme plus gnrale unidimensionnelle du potentiel est V(x)=a.x2+b.x3+c.x4, qui permet de rendre compte simplement dune dissymtrie ou deffets de saturation par exemple. Nous illustrons cela par une analogie mcanique. La figure 4 montre un champ lectrique optique de pulsation , et un diple induit p* non sinusodal dont la rponse manifeste un dfaut de saturation, la faon dun ressort dont la raideur augmenterait avec la dformation. La dcomposition de la rponse p* montre quelle est proportionnelle lexpression eit + 0,1.ei3t. Ceci revient crire le diple induit sous la forme dune srie de puissances du champ lectrique.

Figure 4 : Dcomposition harmonique de la rponse non-linaire dun oscillateur simple (diple lectrostatique induit). Le comportement saturant de la rponse correspond une i dcomposition e t + 0,1 ei3t qui met en lumire lapparition dun harmonique 3 correspondant la 3me puissance du champ excitant.

Lapparition de rponses optiques non-linaires est donc directement lie des notions simples connues dans le domaine des ressorts mcaniques. Lapparition de non-linarits exige une excitation suffisamment forte. En revenant lexpression de la rponse optique suivant la notation employe plus haut, si lon connat les coefficients , , tels que F = .I + .I2 + .I3 +, on peut dduire lintensit minimale pour que les termes non-linaires dominent celui du premier ordre. La gnralit du formalisme de loscillateur harmonique dans les domaines mcanique, optique, acoustique, ou lectrique stend ici celui de la production dharmoniques, bien connue en acoustique, mais aussi en optique par la notion dharmoniques optiques.

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II - Interactions et microscopie non-linaires : deux photons valent mieux quun

1. Au-del de la limite familire de loptique linaire : notions de section efficace
Nous venons de voir que la production dinteractions non-linaires en optique est lie au fait que la rponse linaire nest quune approximation, valable quand la lumire porte un champ lectrique suffisamment faible. Pratiquement cette limite de champ faible est trs leve, au point quelle na pu tre explore quavec lavnement des sources laser. Loptique courante est donc loptique linaire. Comment estimer les intensits lumineuses typiques ncessaires pour lobtention deffets non-linaires ? Pour prciser les ides nous allons raisonner dabord sur lexcitation dune transition lectronique dune molcule de fluorophore de son niveau fondamental vers son premier tat lectronique excit. La description de lexcitation optique en termes doscillateurs nexprime pas la vision quantique du processus de transition lectronique (figure 5). Rappelons que cette transition, daprs la mcanique quantique, peut avoir lieu par absorption dun photon dnergie h0 = h0/2, la condition que cette nergie gale lnergie qui spare les deux tats : h0 = E0 ; 0 est la pulsation du champ lectrique, la frquence et h la constante de Planck. Une des ides fondatrices dans ce domaine revient Maria Gppert-Mayer, qui avait propos que lnergie de cette transition puisse tre apporte sous forme de deux photons, pour autant que la somme de leurs nergies gale E0 = h0/2 + h0/2 [Gppert-Mayer 1931]. Cette ide stend au cas de plusieurs photons.

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Figure 5 : Reprsentation schmatique dune molcule avec son niveau lectronique fondamental S0 et son premier tat lectronique excit S1, tous deux assortis de quelques niveaux vibrationnels. Lexcitation dune transition lectronique suppose labsorption dun photon dnergie h gale la diffrence dnergie E entre les deux systmes lectroniques. La transition produite par un effet non-linaire proportionnel au carr du champ lectrique correspond un processus dabsorption deux photons dnergie moiti, prdit par Maria Gppert-Mayer [Gppert-Mayer 1931].

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Quel est le rapport entre cette possibilit de transition induite par plusieurs photons et le fait que la rponse optique dune molcule soit la somme de rponses des puissances de lintensit ? De faon schmatique, si un champ lectrique E de pulsation fournit des effets proportionnels E2, la pulsation associe sera 2, et les changes entre le champ et la molcule seront quantifis par lnergie h.2. Tout se passe donc comme si le champ lectrique E changeait de lnergie par paquets de deux photons. Pour optimiser la transition E0 considre, on prendra donc un champ E de pulsation 2E0/2h. Le passage du langage des champs lectriques que lon multiplie entre eux celui des photons que lon additionne nous permet de construire maintenant la notion de section efficace. Cette notion est dabord rappele dans la figure 6 suivante pour un processus dinteraction lumiremolcule un photon. La section efficace un photon 1pe est dfinie pour une molcule comme le rapport entre W1pe, le nombre de transitions S0 S1 quelle subit par seconde et le flux de photons qui cause cette transition : 1pe =W1pe/. La quantit W1pe, est construite comme une probabilit : la probabilit de transition pendant une dure dt est donne par dt.W1pe. La section 1pe ne dpend que de la molcule considre, et la courbe donnant 1pe en fonction de la longueur donde nest autre que le spectre dabsorption de la molcule.

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Figure 6 : Notions de section efficace un ou deux photons. Construction dimensionnelle et estimation des ordres de grandeur pertinents.

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De la mme faon, la section efficace dabsorption deux photons 2pe est dfinie comme le rapport entre la probabilit de transition W2pe et le carr 2 du flux de photons : 2pe =W2pe/2. Lanalyse dimensionnelle montre ici que cette section efficace nest plus homogne une surface comme 1pe, mais au produit dune surface au carr par un temps. Cette unit particulire de section dabsorption deux photons porte le nom de Gppert-Mayer : 1 GM = 10-50 cm4.s. Cette unit est trs petite, mais adapte des transitions biphotoniques en gnral trs improbables. Linterprtation de cette section efficace 2pe peut se construire en considrant un calcul de probabilit imit du calcul de la pression dans un problme de gaz parfait. Les ingrdients de la transition sont dabord une section efficace de diffusion S, une section dabsorption dun second photon a, et un temps caractristique t qui correspond la dure de vie de ltat virtuel atteint avant absorption. Ce temps caractristique peut sestimer partir de la relation dincertitude de Heisenberg et fournit la dure typique pendant laquelle il est possible de construire deux vnements concidents de probabilits s. et a.. Do lidentit 2pe = s.a.t. Lestimation de la probabilit typique de transition par absorption biphotonique du flux de rayonnement solaire sur la terre donne un ordre de grandeur qui laisse entrevoir pourquoi loptique non-linaire nappartient pas la vie quotidienne, mme supposer une focalisation colossale de ce flux.

2. Comment favoriser des interactions improbables

Lestimation des sections efficaces des transitions deux photons montre que ces effets non-linaires sont hautement improbables : le flux ncessaire pour obtenir environ 103-104 photons de fluorescence par seconde est de lordre de 100 kW.cm-2. De telles puissances sont totalement incompatibles avec la prservation dun chantillon aqueux : il serait vaporis instantanment. On a donc recours des lasers fournissant des impulsions ultrabrves, de lordre de 60 200 femtosecondes. Ces lasers sont commerciaux et ceux utiliss pour limagerie rptent les impulsions une frquence de lordre de 80 MHz avec une puissance moyenne de lordre de 1 Watt. La dure qui spare deux impulsions est donc 105 fois suprieure la dure dune impulsion. La puissance crte est donc environ 105 fois suprieure la puissance moyenne, soit 100 kW. Focalise travers lobjectif dun microscope, cette puissance crte permet datteindre sur des surfaces de lordre de 1 m2 des flux de lordre de 1013 Watt.cm-2. Une attnuation simpose donc, mais lexcs de puissance sera utilis pour imager des objets pais dans lesquels la lumire est fortement diffuse ou absorbe sur son chemin vers le point focal. Du point de vue thermique, il suffit pour limagerie denviron 10 picoJoule par impulsion.

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3. Obtention des images par excitation deux photons

La combinaison des ides de localisation par effets non-linaires et de focalisation spatiale et temporelle, pour augmenter la probabilit de ces effets, permet de rsoudre le paradoxe relev au dbut de ce chapitre au sujet de limagerie dans des chantillons pais. La figure 7 illustre ce propos. Une solution de fluorophore est soumise soit une excitation linaire classique visible non-localise, soit une excitation non-linaire localise, par des photons infrarouges. Notons que, pour les fluorophores dusage courant, la longueur donde dexcitation 1-photon est dans la plage 350-550 nm. La rgion spectrale utile en mode 2-photons sera donc linfrarouge entre 700 et 1100 nm, plage dans laquelle les tissus sont trs peu absorbants.

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Figure 7 : Effet de localisation de lexcitation de la fluorescence par deux photons. Une solution homogne fluorescente est excite par un laser puls femtoseconde infrarouge ( gauche) ou par un laser continu de longueur donde visible ( droite). Lintensit des impulsions suffit exciter une fluorescence localise par une interaction deux photons. Le rayonnement infrarouge pntre mieux dans lchantillon que la lumire visible. La localisation permet plus aisment de construire une image (voir figures 2 et 8).

Le principe qui prcde rpond aux exigences paradoxales que nous avons releves pour limagerie des objets pais. Il est la base des microscopes dits multiphoton dont les organes principaux sont reprsents sur le schma de la figure 8. Le balayage permis par ce dispositif est trs semblable celui pratiqu en microscopie confocale. Il permet dimager typiquement une ligne par milliseconde. Les dtecteurs sont en gnral des photomultiplicateurs, et les images sont discrtises sous forme de pixels qui correspondent aux signaux intgrs sur des rgions en gnral plus petites que la rsolution du microscope, et des dures de 1 100 s [Pawley, Diaspro].

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Figure 8 : Schma de principe dun microscope multiphoton : le faisceau (rayons fins) produit par un laser femtoseconde (oscillateur Titane-saphir) est inject dans un scanner qui a pour fonction de balayer le faisceau dans lchantillon grce deux miroirs perpendiculaires (X). Pour cela, deux lentilles (L1 et L2) places entre la sortie du scanner et lentre de lobjectif assurent la conjugaison optique entre le plan des miroirs du scanner (miroirs non-visibles) et le plan focal arrire de lobjectif (pfa, plan dentre). Cette conjugaison garantit que la lumire rentre en totalit dans lobjectif, quel que soit langle impos par les miroirs. Au retour, la fluorescence (rayons pais) spectralement distincte peut soit aller directement sur le dtecteur travers un premier filtre qui spare spectralement lmission de lexcitation, soit, en remplaant ce premier filtre par un miroir total, suivre le chemin en sens inverse dans le scanner pour aboutir dans une dtection confocale. Un second filtre spectral spare la fluorescence (rayons pais) du faisceau dexcitation (rayons fins).

III - Applications en biologie et intrt potentiel pour le diagnostic par biopsie optique
1. Les acquis rcents de la microscopie en fluorescence
La microscopie de fluorescence est un domaine trs riche de limagerie, qui offre de trs nombreux outils au biologiste, quil sagisse de la grande varit des chromophores [Haughland 2002], ou de la diversit des approches spectroscopiques possibles. Une des avances majeures des annes 1990 est la combinaison des outils trs puissants de la biologie molculaire avec ceux de limagerie de fluorescence, grce lexploitation dune protine devenue indispensable, la GFP (Green Fluorescent Protein) [Patterson 1997]. Il sagit dune protine, produite par certains organismes mduses-, qui fluoresce naturellement en vert si elle est excite par une longueur donde voisine de 490 nm. Il suffit donc dinduire sa production dans les cellules dun organisme hte pour que celles-ci deviennent fluorescentes. Il est possible de lier le gne de cette GFP au gne codant pour une protine cible donne. Il en rsulte une protine dite de fusion, la fois fluorescente et dote des proprits biologiques de la protine cible. Par ailleurs, la biologie molculaire a t mise contribution pour crer artificiellement des mutants de la GFP, et lon dispose aujourdhui dune

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palette multicolore de telles protines fluorescentes permettant de suivre la localisation de diverses protines cibles, dvaluer lexpression du promoteur dun gne donn, Limmense progrs que reprsente cette protine, par rapport des techniques qui souvent ncessitaient de fixer et donc de tuer lchantillon, a ouvert un large champ dinvestigations bases sur la possibilit de filmer les processus vivants au cours des tapes de la vie dune cellule : migration, division, transports internes, etc. Limagerie de fluorescence non-linaire bnficie du fait que la plupart des mthodes de fluorescence linaire sont transposables en mode non-linaire, avec de surcrot les avantages spcifiques lis la localisation de lexcitation et la pntration en profondeur dans les tissus [Centonze 1998]. Il est par exemple maintenant possible de suivre lvolution de processus cellulaires chez lanimal anesthsi : transmission dun influx nerveux ou volution de la forme des neurones [Dunaevsky 1999], migration dun lymphocyte dans un ganglion [Miller 2002], ou, pour ce qui nous concerne au laboratoire, la migration dun parasite dans un modle animal de la pathologie humaine tudie [Coudrier et al. communication personnelle], ou lattaque dune tumeur par un lymphocyte cytotoxique.

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2. Imagerie intrinsque et diagnostic par biopsie optique

Les tissus biologiques sont optiquement excitables dans le domaine des rayonnements visibles. Ceci est d entre autres phnomnes la fluorescence intrinsque des tissus qui se manifeste, par dfinition, en labsence de toute coloration externe. Nous avons montr que cette rponse intrinsque fournit des signaux suffisamment intenses pour donner des images fort contraste et haute rsolution. La figure 9 montre deux exemples : le poumon et le foie. Le tissu peut tre visualis grande chelle (poumon) ou lchelle du micron pour rvler les structures subcellulaires. Les images intrinsques obtenues sur des tissus humains ou murins pathologiques suggrent que limagerie non-linaire intrinsque pourrait tre la base dun nouveau type de diagnostic par biopsie optique. En effet, les pathologies se manifestent souvent par un dsordre tissulaire que le praticien anatomopathologiste dtecte lors dune analyse microscopique pousse dun grand nombre dchantillons. Les rsultats de ce type danalyse sont disponibles avec un dlai de plusieurs jours, aprs que le fragment de tissu extrait ait t sectionn, color, mont. Lide que des images semblables soient accessibles en quelques minutes, et peuttre mme in situ, motive actuellement un effort important de dveloppement de limagerie non-linaire lInstitut Curie entre physiciens, biologistes et mdecins.

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Figure 9 : Images dun poumon et dun foie de souris, frachement dissqus, et observs directement sans coloration par microscopie de fluorescence deux photons. Le poumon gauche et le foie droite sont dposs entiers sur le microscope, et le plan de mise au point est plac dans la profondeur du tissu -ici environ 150 microns. Les alvoles pulmonaires sont visibles. Dans le foie, les cellules apparaissent sous forme de traves, et les noyaux correspondent aux rgions circulaires sombres. La taille des images est de 300 microns pour le poumon et de 150 microns pour le foie.

Bibliographie
- Carrington W. 2002. Imaging live cells using wide-field microscopy with image restoration. In Confocal and two-photon microscopy. A. Diaspro, editeur (Wiley, New York) 333-346. - Centonze, V. E., et J. G. White. 1998. Multiphoton excitation provides optical sections from deeper within scattering specimens than confocal imaging. Biophys. J. 75:20152024. - Denk W. et K. Svoboda. 1997. Photon upmanship: why multiphoton imaging is more than a gimmick. Neuron. 18:351357. - Denk W., D. W. Piston et W. W. Webb. 1995. Two-photon molecular excitation in laser-scanning microscopy. In Handbook of Biological Confocal Microscopy. J. B. Pawley, editeur. Plenum Press, New York. 445458. - Denk, W., J. H. Strickler et W. W. Webb. 1990. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248:7376. - Diaspro W. et Sheppard C.J.R. 2002. Two-photon excitation fluorescence microscopy. In Confocal and two-photon microscopy. A. Diaspro, editeur. Wiley, New York. 39-73. - Dunaevsky A. et al. 1999. Developmental regulation of spine motility in the mammalian central nervous system. PNAS, 96:1343813443. - Gppert-Mayer M. 1931. ber elementarakte mit zwei Quantensprungen. Annalen der Physik. 9:273-295. - Haughland R.P. 2002. Handbook of fluorescent probes. Molecular Probes, Inc. - Miller M.J. et al. 2002. Two-Photon Imaging of Lymphocyte Motility and Antigen Response in Intact Lymph Node. Science. 296:1869-1873.

162

- Patterson, G. H., S. M. Knobel, W. D. Sharif, S. R. Kain et D. W. Piston. 1997. Use of the green-fluorescent protein (GFP) and its mutants in quantitative fluorescence microscopy. Biophys. J. 73:27822790. - Pawley J.B. 1995. Handbook of Biological Confocal Microscopy, Plenum Press, New York. - Sheppard C.J.R. et Kompfer R. 1978. Resonnant scanning optical microscope. Applied optics, 17:2879-2882. - Ronot X. et Schovart D. 1999. Dynamique de la cellule vivante, INSERM ditions, Paris.

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Action dune protine sur une molcule unique dADN

V. CROQUETTE, G. CHARVIN, J-F. ALLEMAND, G. LIA, T. LIONNET, O. SALEH, H. YOKOTA, N. DEKKER, M-N. DESSINGES et D. BENSIMON Laboratoire de Physique Statistique de l'cole Normale Suprieure, Paris et Dpartement de Biologie de l'cole Normale Suprieure, Paris
ml : Vincent.Croquette@lps.ens.fr Nous dcrivons des expriences faites sur une molcule dADN qui nous permettent de mieux comprendre le fonctionnement des enzymes agissant sur ce biopolymre au sein de nos cellules. Le principe de ces expriences est d'attacher une molcule dADN par une extrmit une microbille magntique tandis que l'autre est fixe une lamelle de verre. En utilisant de simples aimants nous pouvons tirer et tordre cette molcule. A laide dun microscope optique nous mesurons la position de la bille en temps rel. Nous dterminons ainsi la force de traction exerce sur cette molcule et son extension. Les variations de celle-ci refltent laction des enzymes qui changent la forme ou la topologie de l'ADN. En utilisant de faibles concentrations denzyme nous sommes sensibles laction dune seule enzyme et mme, dans certains cas, nous observons les cycles enzymatiques un un. Nous nous intressons aux enzymes impliques dans la rplication de l'ADN et nous suivons laction dune polymrase recopiant le message gntique. Nous montrons aussi comment la topoisomrase II enlve deux par deux les torsades qui peuvent se former lors du processus de rplication tandis que la topoisomrase I opre tour par tour.

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I - Introduction
Depuis quelques annes, plusieurs quipes se sont lances dans des expriences de micromanipulation de molcules uniques, destines largir le champ dinvestigation en biologie molculaire. Pour mieux comprendre le fonctionnement de nos muscles, il fallait pouvoir observer lactivit dune seule protine et montrer quen changeant de conformation dynamiquement celle-ci provoquait un mouvement : en utilisant des pinces optiques plusieurs groupes ont mesur la force et le dplacement lmentaire dune protine musculaire [1,2]. De mme, quelle ne fut pas notre surprise de dcouvrir lexistence dun moteur molculaire rotatif de 10 nanomtres de diamtre, tournant un rythme effrn (8000tr/min) au sein de nos cellules, comportant un stator et un rotor en forme d'arbre cames auquel les chercheurs japonais ont russi accrocher un marqueur visible au microscope optique [3]. Grce un microscope force atomique (AFM), une quipe allemande a pu mesurer la cintique de dnaturation dune protine soumise une force de traction [4], et la force de rupture du couple rcepteur-ligand biotine/streptavidine est maintenant connue [5,6]. En utilisant la trs grande souplesse dune micro-pipette en verre, des chercheurs franais ont dtermin lnergie dappariement des bases de

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lADN [7]. Ces magnifiques expriences illustrent une nouvelle approche des problmes biologiques dans laquelle les physiciens et les chimistes ont mis leur savoir-faire pour mieux rpondre aux questions de la biologie molculaire. Nous prsentons ici une technique de micromanipulation des molcules d'ADN qui nous permet d'observer l'activit des enzymes agissant sur cette molcule. Cet article est en fait le complment dun article prcdent ralis en 2000 [8] auquel le lecteur a accs libre; nous avons choisi de faire un rappel succinct de notre dispositif exprimental permettant de comprendre les mesures faites sur les enzymes sur lesquels nous nous attarderons un peu plus. Nous suggrons au lecteur dsireux de connatre les dtails qui ne sont pas prsents ici de consulter la rfrence [8].

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Figure 1: Principe de la micromanipulation dune molcule dADN. Les molcules dADN sont introduites dans un capillaire dispos sur un microscope invers. Des aimants rglables en hauteur et pouvant tourner sur eux-mmes permettent dappliquer une contrainte de traction et de torsion sur la molcule par lintermdiaire dune microbille magntique. Une camra CCD relie un ordinateur enregistre les dplacements de la bille (agrandissement). LADN est fix la bille recouverte de streptavidine par son extrmit biotinile et la surface recouverte dantidigoxignine par son autre extrmit traite a la digoxignine. (Photo issue de Biofutur [9])

La molcule dADN est un polymre extraordinaire plus dun titre. Cest bien videmment le support de notre information gntique et pour mieux protger celle-ci, deux copies complmentaires sont conserves chacune sous la forme d'un polymre : lADN simple-brin. Les bases qui constituent lalphabet de ce code sont accroches latralement le long dun polymre et shybrident par des liaisons hydrogne aux bases du second brin. On reprsente souvent lADN double-brin comme une chelle dont les montants sont constitus des squelettes phosphodiesters et les chelons sont des paires de bases complmentaires (AT), (GC). Cest la fameuse double hlice de Watson et Crick, encore appele ADN-B [10].

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La structure de la molcule est lie la trs forte interaction qui existe entre les bases : celles-ci sont hydrophobes et comme elles sont plates, elles prfrent sempiler les unes sur les autres comme des assiettes afin de minimiser leur surface de contact avec leau. Lpaisseur d'une base est de 3,4 , la distance qui spare deux points dattache successifs sur le squelette phosphodiester est denviron de 7 . Dans la double hlice, les squelettes phosphodiesters sont donc fortement inclins, les 7 se projettent ainsi en 3,4 au prix dune rotation denviron 36 entre paires de bases successives. Pour raliser des expriences dlasticit sur une molcule dADN, nous attachons une extrmit de la molcule sur une surface de verre tandis que lautre est accroche une microbille. Nous ralisons ainsi un Jokari molculaire. Lutilisation dune bille magntique permet dexercer une force sur la molcule grce des aimants placs au-dessus qui produisent un gradient de champ magntique. La figure 1 donne le schma de principe de lexprience. Les chelles des diffrents composants ne sont pas respectes ; en effet, le diamtre de la bille est de lordre de 3m tandis que les aimants font quelques millimtres. Afin daccrocher chacune des extrmits de la molcule un substrat diffrent, nous utilisons le processus biochimique de type clefserrure. La biotine (plus connue sous le nom de vitamine H) est une petite molcule (une clef) qui peut se loger dans une poche (serrure) dune protine nomme streptavidine. Lorsque cette clef est place dans cette serrure, elle y est maintenue par un trs grand nombre de liaisons hydrogne dont lassociation produit une liaison presque aussi solide quune liaison covalente. Nous utilisons le code gntique pour greffer une extrmit des molcules de biotine et de la digoxygnine la seconde extrmit. Laccrochage de chaque extrmit se fait en plusieurs points, ce qui le rend plus solide mais surtout interdit toute rotation autour des points dattache, nous permettant ainsi de tordre la molcule. Pour prparer un chantillon, nous absorbons de lantidigoxignine sur les parois dun capillaire, nous y injectons alors une solution de molcules dADN attaches des billes magntiques et nous laissons incuber. Le Jokari molculaire se fabrique spontanment. Nous avons choisi des concentrations dADN et de billes telles quen moyenne il y ait une molcule dADN par bille ; cependant, nous navons aucun moyen dempcher que plusieurs molcules saccrochent la mme bille. Nous devons donc vrifier a posteriori qu'une seule molcule est attache la bille tudie. Pour cela, nous mesurons la force quil faut dvelopper pour l'carter de la surface du capillaire, celle-ci est minimum quand une seule molcule est implique dans la liaison. Nous allons maintenant dcrire la mthode de mesure de force que nous utilisons.

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II - Mesurer la force dtirement dune molcule dADN

Rappelons dabord lordre de grandeur des forces mises en jeu lchelle dune molcule. L'nergie typique des phnomnes biologiques est donne par lagitation thermique, kBT = 4,21 10-21J, tandis que la distance d'action est le nanomtre. Le rapport de ces deux quantits est une force de quelques picoNewtons, c'est typiquement cette force quil faut dvelopper pour tirer une molcule dADN. Cette valeur est extrmement petite et il nest pas facile de la dtecter avec les dispositifs de mesure classiques. Nous avons mis au point une technique de mesure de force qui sinspire de la mthode propose par Einstein [11] pour dterminer la raideur dun ressort. En effet, lorsque nous appliquons une force sur la bille magntique grce un gradient de champ, la molcule tire et la bille forment un minuscule pendule. Celui-ci est anim dun mouvement brownien, qui rsulte de lagitation des molcules deau qui lentourent. On peut modliser ce phnomne par une force alatoire qui carte le pendule de sa position dquilibre vers laquelle il est ramen par la force de traction exerce sur lADN. La raideur de ce pendule k, scrit simplement k = F/l (o F est la force de traction et l lextension de la molcule). Lquipartition de lnergie nous permet dcrire que (1/2)kx2 = (1/2)kBT, o x est lcart de la bille par rapport sa position lquilibre dans une direction perpendiculaire la force (Fig. 2). En explicitant lexpression de la raideur, nous pouvons crire que F = kBTl/x2. Pour mesurer la force de traction sur la molcule dADN, il suffit de dterminer lallongement l de la molcule et x2, les fluctuations quadratiques moyennes. La dtermination de x2 se fait en suivant les dplacements de la bille par un programme informatique qui analyse en temps rel son image vido avec une prcision de 10nm. La dtermination de l'extension de la molcule requiert la mesure de sa position dans la direction de propagation de la lumire. Nous y parvenons en observant la forme des anneaux de diffraction qui dcorent l'image de la bille en clairage parallle.

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III Mesure dlasticit dune molcule dADN

Nous enregistrons la courbe dlasticit d'une molcule en analysant ses fluctuations et son extension pour diffrentes distances sparant les aimants de la bille (Fig. 3). La force varie ainsi depuis quelques dizaines de femtoNewtons jusqu quelques picoNewtons, lextension de la molcule volue sur une large gamme qui nous permet de comparer la courbe exprimentale au modle thorique du ver (worm-like chain en anglais) [12-14].

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Figure 2: Enregistrement du mouvement brownien dune bille de 2,8 m de diamtre pour diffrentes forces appliques. En un point, lintensit de gris est proportionnelle au logarithme de la probabilit de visite de la bille. En rapprochant les aimants de la bille on augmente la force de traction sur la bille ; plus celle-ci est grande, plus la molcule sallonge, et plus le mouvement brownien est restreint.

Cette comparaison nous permet de garantir que nous tirons une molcule unique. Cette courbe dpend trs fortement de la structure molculaire de l'ADN : ainsi si nous accrochons la bille son substrat par une molcule d'ADN simple-brin, la courbe force/extension est compltement diffrente. Nous utiliserons cette proprit pour tudier la polymrase.

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Figure 3 : Courbe de force obtenue grce aux fluctuations browniennes (avec les barres derreur). En trait plein, courbe thorique du modle du ver ajustant au mieux les points exprimentaux.

IV - Llasticit dune molcule dADN soumise une torsion

Le champ magntique de nos aimants est perpendiculaire la direction dextension de la molcule dADN. En faisant tourner les aimants, nous imprimons une rotation la direction du champ, en gardant constante la force applique. La bille magntique suit le champ, comme le ferait une boussole. Comme la molcule dADN est attache ses extrmits en plusieurs points, la rotation de la bille contrle la torsion de la molcule dADN. videmment, cette contrainte de torsion n'existe que si la molcule est fixe en plusieurs points la surface mais surtout quelle ne prsente aucun nick, cest--dire aucune coupure simple-brin. Ce type de dfaut permet de relaxer toute contrainte de torsion puisque la molcule peut tourner librement autour du brin intact. Dans notre exprience, ces nicks sont assez frquents et il ny a que peu de molcules qui prsentent une chane sans coupure sensible la contrainte de torsion.

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Figure 4: Courbes de lextension relative en fonction du degr de sur-enroulement force constante. Elles ont t baptises courbes en chapeau du fait de leur forme basse force.

La contrainte de torsion est un paramtre biologique important. Pour le caractriser, on compare le nombre de tours n ajouts ou enlevs la molcule au nombre de tours Lk0 que prsente celle-ci en labsence de contrainte, savoir un tour toutes les 10,5 paires de bases. Le rapport de ces deux nombres = n/Lk0 permet de comparer des molcules de tailles diffrentes. Leffet de la torsion sur une molcule dADN a t tudi avec soin par White [15]. Il se comprend facilement si nous le transposons au cas d'un tube de caoutchouc. Si nous tordons ce tube rgulirement en maintenant une force de traction constante, celui-ci oppose un couple proportionnel langle de torsion. Si maintenant nous relchons la force de traction en maintenant langle de torsion constant, une instabilit ne tarde pas apparatre sous forme de tortillons, bien connus sur les fils des combins tlphoniques. Lors de leur formation, le couple de torsion diminue de faon notable. Les tortillons absorbent une part importante de la contrainte. En fait, cette instabilit est le rsultat dune comptition entre deux mcanismes dont les contributions nergtiques sont la torsion pure et la courbure. Pour les faibles contraintes, le tube reste droit afin de minimiser son nergie de courbure. Aux fortes contraintes, l'nergie de torsion est trop grande et il devient rentable de courber la molcule afin de former des boucles qui rduise la torsion. A lchelle de la molcule dADN, les mcanismes sont presque quivalents, il faut seulement ajouter des fluctuations thermiques importantes qui adoucissent lapparition de

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linstabilit dentortillements (encore appels plectonmes). Ces tortillons produisent un raccourcissement de la molcule. Ainsi, si nous appliquons une faible force sur une molcule dADN et si nous portons son allongement en fonction du nombre de tours n qui lui est appliqu, nous observons une courbe en cloche. Lextension est maximale pour une contrainte nulle, elle diminue lorsque n augmente et ce, quel que soit son signe. Ce comportement correspond la courbe symtrique de la figure 4, qui est en excellent accord avec les prdictions thoriques [16-18]. Lorsque nous rptons cette mesure avec une force de traction plus importante (de 1pN) nous observons un comportement dissymtrique en fonction de . Pour > 0, la molcule se raccourcit comme prcdemment. En revanche, pour < 0, cette longueur ne semble plus dpendre de . Cette dissymtrie relative au signe du degr de torsion est prvisible puisque la molcule dADN est chirale. La transition que nous dcrivons correspond lapparition dune bulle de dnaturation. En sous-enroulant la double hlice, nous provoquons lapparition dune petite rgion o les liaisons hydrogne qui maintiennent les bases complmentaires des deux brins cdent sous la contrainte (voir fig. 4) [19-22]. Le mme phnomne est observ sur une corde deux torons que l'on droule.

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IV - La rplication de lADN ncessite des oprations mcaniques

Dans leur article relatant la dcouverte de la double hlice, Crick et Watson ont propos au dtour d'une phrase anodine que cette structure permettait facilement de recopier le message gntique : il suffit simplement de sparer les deux brins et de les recopier en se servant de chacun comme modle pour associer les bases complmentaires. Ce mcanisme, sduisant dans son principe, ncessite cependant la coopration de plusieurs enzymes dont la dcouverte ne tarda pas. Il faut d'abord ouvrir une bulle de dnaturation en brisant les liaisons hydrogne entre les bases. Cette opration, qui consomme de l'nergie, est assure par les hlicases (qui cassent la double hlice). Les ADN simple-brin qui apparaissent ainsi sont pris en charge par des ADN polymrases qui recopient la molcule dADN transformant le simple-brin en une molcule double-brin en associant chacune des bases de la molcule simple-brin les bases complmentaires. Ces enzymes sont videmment fondamentales. Elles sont toutes les deux des moteurs molculaires qui se dplacent la jonction sparant une molcule double-brin d'une simplebrin, l'hlicase convertissant le double-brin en simple-brin et la polymrase faisant l'inverse. Finalement, la sparation des deux brins provoque le droulement le l'ADN qui s'entortille fortement. Pour dmler cet cheveau, la cellule utilise les enzymes de la famille des topoisomrases qui sont capables de changer la topologie de l'ADN que nous discuterons galement.

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Aussi importante que puisse tre le fonctionnement de ces enzymes, personne ne sait actuellement prcisment comment ces moteurs molculaires agissent sur l'ADN. Leurs proprits dynamiques sont values l'aide d'expriences en tube essai qui ne donnent accs qu' des moyennes d'ensemble. Les expriences faites sur des molcules uniques tentent d'apporter des rponses plus pertinentes ces questions. Exprimentalement, nous utilisons le jokari molculaire pour mieux comprendre ces enzymes.

VI - Rplication dune molcule dADN par une ADN polymrase

Dans le cas des polymrases nous plaons cette fois une molcule dADN simple-brin entre la bille et la plaque de verre. La polymrase reste cependant inactive sur une molcule purement simple-brin. Elle a besoin d'un point damorage de la raction constitu par une jonction entre le simple-brin et le double-brin. Pour obtenir cette jonction, nous ajoutons la solution un petit morceau dADN simple-brin complmentaire en un seul endroit de la molcule reliant la bille au substrat. En shybridant ce morceau dADN forme la petite rgion dADN double-brin qui va servir de point de dmarrage pour la polymrase. Il suffit alors dajouter dans le milieu la polymrase et les bases de lADN pour que la synthse puisse dmarrer. Dans cette exprience, la longueur de la molcule va nous permettre de suivre lavancement de la raction : ceci est possible parce que lADN simple-brin possde une courbe allongement/force trs diffrente de celle de lADN double-brin. En effet, basse force lADN simple-brin tendance raliser des appariements fortuits entres bases conduisant une molcule courte. Par contre haute force, lADN simplebrin peut sallonger beaucoup plus que lADN double-brin qui senroule en double hlice. haute force la molcule simple-brin est donc plus longue que la molcule double-brin tandis que le comportement est invers basse force. Comme on peut le constater sur la figure 5, les deux courbes de force sont en quelque sorte perpendiculaires se croisant une force de 5 pN. Ds lors que nous appliquons une force constante sur une molcule diffrente de ces 5 pN, la longueur de la molcule va dpendre de la proportion dADN simple-brin et double-brin. basse force une molcule se transformant de simple-brin double-brin sous laction dune polymrase sallonge tandis quelle se raccourcit haute force. La mesure de la longueur de la molcule en temps rel nous permet ainsi de suivre la progression de lADN-polymrase. Par construction il n'existe que deux jonctions simple-brin double-brin sur notre molcule et une seule possde la polarit requise pour le fonctionnement de la polymrase ; nous sommes ainsi sensibles l'activit d'une seule enzyme la fois.

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Nous observons que la synthse du second brin se fait par -coups avec de longues pauses. La vitesse de polymrisation dpend de la squence rplique et galement de la polymrase employe. Par ailleurs, en exerant une force de traction sur lADN simple-brin, dans un premier temps nous aidons la polymrase probablement en linarisant lADN simple-brin, puis lorsque la force de traction devient plus importante nous ralentissons la progression de lenzyme pour finalement larrter une force traction denviron 20,pN (Fig. 6) [23]. Des expriences analogues ont t ralises par le groupe de C. Bustamante [24].

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Figure 5: Courbes de forces dADN simple-brin (ADNsb), dADN double-brin (ADNdb) et dune molcule partiellement rplique (hybride ADNsb et ADNdb) . Dans ce dernier cas, la courbe force extension correspond la combinaison linaire des courbes de force de lADN simple-brin et double-brin. Imagettes en haut, comparaison dun segment de 18 bases [AT]9 en simple-brin et double-brin. Le simple-brin est compltement tendu, sa longueur est 2,1 fois plus grande que la molcule double-brin. (Image R. Lavery IBPC)

L'hlicase fait en quelque sorte le travail inverse de la polymrase : pour dtecter son activit nous utilisons une molcule double-brin possdant une seule coupure simple-brin : un nick. L'hlicase trouve ainsi un point d'entre dans la double hlice, elle peut sparer les deux brins partir de cette brche. Comme pour la polymrase, l'hlicase opre avec une polarit bien dfinie ce qui ne permet qu' une seule enzyme de travailler la fois. Cependant l'hlicase ne fait que sparer les deux brins de la double hlice, a priori rien n'empche ceux-ci de reformer la molcule double-brin aprs le passage de l'enzyme [25]. Pour viter cette situation,

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nous appliquons une force de traction importante (F > 30 pN), ce qui conduit l'ADN simple-brin prsenter un allongement notable par rapport sa forme double-brin. Dans ces conditions, l'hybridation des deux parties simple-brin est rendue impossible tant que l'hlicase est prsente la jonction. Par ailleurs, au fur et mesure que l'hlicase progresse, l'extension de la molcule augmente, permettant ainsi une mesure en temps rel de l'activit enzymatique. L'hlicase finit par se dtacher de la molcule, permettant alors au deux brins de reformer la double hlice comme on ferme une fermeture clair. Cette tape trs rapide correspond un raccourcissement de la molcule qui retrouve sa longueur originale. L'observation des bouffes d'activits en temps rel est riche d'information biologique : la monte rgulire de la bille permet d'accder la vitesse de l'hlicase, leur dure dfinit le temps d'activit typique et l'amplitude de ces bouffes nous donne la processivit de cette enzyme. Nous obtenons des vitesses d'enzyme nettement suprieures ce qui est mesur dans les expriences faites en tube essai. Ceci n'est gure tonnant car ces mesures font la moyenne entre les phases d'activit et de rhybridation qu'elles ne peuvent distinguer.

VIII - Les topoisomrases enlvent les nuds dune molcule dADN

Dans la cellule, la molcule dADN dun chromosome mesure une dizaine de centimtres de long tandis quelle est empaquete dans le noyau qui fait au plus dix microns de diamtre. Pour dupliquer cette molcule, un ensemble denzymes en attrape les deux brins et les carte afin douvrir des bulles dADN dnatur, chaque brin tant alors recopi. Si vous essayez de faire une opration quivalente sur une longue corde possdant deux torons, vous obtenez rapidement un paquet de nuds inextricables. Au sein de nos cellules, le mme phnomne se produit transitoirement, mais les enchevtrements et les nuds sont rapidement dmls par dtonnantes enzymes appartenant la famille des topoisomrases qui, comme leur nom lindique, peuvent modifier la topologie de la molcule dADN. Cette famille est divise en deux groupes, les topos de type I qui sont capables de couper temporairement un seul des brins de lADN et celles de type II qui coupent les deux brins. En ouvrant une brche dans la double hlice, les topos de type I permettent la molcule de tourner autour du brin intact et relchent ainsi la contrainte de torsion existant sur une molcule, elles nont pas besoin dnergie (ATP) pour faire cette opration. En revanche, les topoisomrases de type II se fixent au point de jonction de deux molcules dADN, coupent les deux brins de lune delles et passent la molcule intacte travers cette coupure tout en tenant les deux extrmits quelles recollent parfaitement aprs le passage de la molcule. Cette opration peu banale permet denlever les nuds et de dconcatner des molcules

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enchevtres. Elle ncessite la prsence dun cofacteur nergtique : lATP. La topoisomrase II est trs importante au cours du cycle cellulaire [26], ses inhibiteurs sont frquemment utiliss comme agents anticancreux puisquils conduisent limpossibilit de dmler les chromosomes filles lors de la rplication entranant le suicide de la cellule. Ces inhibiteurs provoquent ainsi la mort des cellules qui se reproduisent beaucoup.

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Figure 6: a) 3 pN la polymrase progresse rgulirement. En tirant lADNss 24 pN on arrte compltement la rplication. b) 16 pN la polymrase progresse plus lentement mais plus rgulirement qu 1 pN.

Les mcanismes molculaires mis en jeu lors du cycle catalytique des topoisomrases sont loin dtre compltement compris. Les expriences permettant de les caractriser sont dlicates. En effet il est difficile de changer la torsion dune molcule dans un tube essai. En tordant une molcule dADN grce une bille magntique manipule par des aimants, nous avons la possibilit de raliser trs rapidement et de faon contrle des torsades comme celle des cordons tlphoniques. Leur apparition sobserve par le raccourcissement de la molcule. Cest prcisment sur ces molcules quagissent ces enzymes. En les ajoutant dans la solution aqueuse o baigne la molcule dADN torsade, nous pouvons observer leur action. Les deux types denzymes vont relcher la contrainte de torsion provoquant un allongement sensible de la molcule. Cependant, les modes daction des deux types denzymes sont diffrents ce qui se met facilement en vidence avec les pinces magntiques. Pour des raisons qui vont apparatre par la suite, les topos II savrent plus simples prsenter. Nous commencerons donc par elles.

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Nous ne dtectons leur activit que pour des molcules dont lextension est rduite par la rotation des aimants. Par contre, elles nagissent pas tant que le nombre de tours est infrieur au seuil dapparition des tortillons sur lADN. Ceci signifie que la topo II agit sur les entortillements de lADN et pas directement sur la torsion de la molcule. La topo II est active aussi bien sur des molcules sur-enroules que sous-enroules. Sa vitesse daction V augmente linairement avec la concentration dATP jusqu une certaine concentration au-del de laquelle cette vitesse ne change plus. Cette dynamique est dite Michaelis-Menten dordre 1, typique dune raction enzymatique. Laction de lenzyme conduit un relchement des torsades que nous observons par lallongement de la molcule. Chaque fois que lenzyme ralise un passage de brins, elle enlve en fait deux tours de torsion la molcule. trs faible concentration denzyme et dATP, nous avons russi observer un un le passage de brins dune seule topoisomrase II sur une molcule dADN. Dans ces conditions, lallongement de la molcule se fait par pas discrets de 90 nm (voir fig. 7) correspondant au relchement de deux supertours (ou torsades) [27]. Notre dispositif offre des possibilits dinvestigations nouvelles : nous avons mis en vidence la diminution de vitesse de relaxation des supertours avec la force de traction. Cest une indication sur ltape limitante du cycle enzymatique : elle correspond probablement au recollage des deux morceaux dADN coups qui doit se faire lorsquune fluctuation dorigine thermique les rapproche suffisamment. En omettant dajouter de lATP dans le milieu exprimental, nous contrarions le fonctionnement de la topoisomrase II. En fait, le cycle catalytique commence, lenzyme saccroche un croisement dADN mais elle est alors incapable de continuer et se dtache aprs quelque temps. Cette association entre lenzyme et lADN est observable avec notre mthode de mesure. Si la torsion de la molcule est ajuste juste au seuil dapparition de la premire torsade, nous observons une succession dassociations et de dissociations enzyme/ADN, conduisant des sauts de longueur de la molcule de 45 nm. Nous pouvons ainsi mesurer les temps dassociation de la topoisomrase avec son substrat. Nous nous sommes intresss la topo Ia qui est lenzyme de type I que lon trouve dans le monde bactrien. LADN des bactries prsente un lger sous-enroulement tabli par les gyrases, qui font aussi partie de la famille des topoisomrases. Le contrle de ce sous-enroulement qui rsulte de l'quilibre entre les gyrases et les topos Ia, permet la bactrie de sparer plus facilement les deux brins de lADN. Comme les eucaryotes que nous sommes ne possdent pas de gyrases, ses inhibiteurs neutralisent les bactries et constituent des antibiotiques. La topo Ia des bactries ne relche la torsion que lorsque le sous-enroulement devient trop fort et provoque lapparition de bulles de dnaturation dans lADN.

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Figure 7: Relaxation de la longueur dune molcule dADN torsade. a) lorsque lATP est basse concentration on observe une relaxation par pas de 90 nm correspondant chaque cycle catalytique dune seule enzyme qui enlve deux tours. b) avec une concentration normale dATP, la relaxation se fait par bouffes rapides (Trelax), spares par de longues phases d'attente (TA), ce qui montre que nous avons bien l'action d'une seule enzyme la fois. Pour observer nouveau l'activit de l'enzyme il nous suffit de faire tourner les aimants (Trot.) ce qui raccourcit l'extension de la molcule.

La caractrisation de la topo Ia est de ce fait un peu moins facile que celle de la topo II. Dabord cette enzyme na pas besoin dATP, nous ne pouvons donc pas l'en priver pour ralentir son activit. Dautre part, elle agit ds que des bulles de dnaturation apparaissent. Or nous avons vu que celles-ci empchent la formation des tortillons dtectables par le raccourcissement de la molcule. Lorsque nous droulons une molcule dADN basse force, aprs quelques tours son extension dcrot fortement lors de la formation des tortillons. Si nous ajoutons la topo Ia, rien ne se passe dans ces conditions. Si nous augmentons la force de traction, nous tirons les tortillons, lextension de la molcule augmente et des bulles de dnaturation se forment. Dans ces conditions la topo Ia peut travailler, mais lextension de la molcule reste maximale puisquil ny a plus de tortillons. Pour observer le relchement effectu par lenzyme, il suffit de ramener la force applique sa valeur initiale avant tirement. Lorsque lenzyme a agi

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le nombre de tortillons a baiss et lextension de la molcule a augment par rapport sa valeur initiale. Ces observations confirment que la topo Ia agit bien sur les bulles de dnaturation et quelle est inactive sur lADN surenroul. Pour pouvoir observer directement lactivit de lenzyme en temps rel, nous avons d prparer une molcule dADN spciale qui contient juste en un seul endroit une bulle de dnaturation artificielle : nous avons insr deux simples brins qui ne sont pas complmentaires sur 12 bases, cette bulle est donc toujours ouverte. Elle le reste lorsque nous surenroulons la molcule sur laquelle se forme alors des tortillons qui provoquent la diminution de lextension de la molcule. Nous obtenons ainsi une molcule o la topo Ia peut agir sur une seule petite bulle et qui forme des tortillons qui nous permettent de suivre le degr de torsion de lADN. La petite taille de la bulle garantit par ailleurs quune seule enzyme peut travailler la fois. En tirant sur la molcule, nous refermons la bulle et nous gnons lentre dune topo Ia. Cest en utilisant cette molcule et en ajustant la traction que nous avons pu ralentir lactivit de la topo Ia et observer le relchement des super-tours un un. Cette observation permet de confirmer que le mcanisme molculaire impliqu par la topo Ia contrle le passage des brins et ne correspond pas une libre rotation de la molcule autour dun brin [28]. La famille des topoisomrases est riche et il reste encore beaucoup faire : comment la gyrase droule-t-elle la double hlice ? Comment la topoisomrase IV reconnat-elle le sur-enroulement du sous-enroulement ? Ce sont l des questions qui mritent des expriences prcises.

VIII - Conclusions
Nous venons de montrer que de simples aimants placs au-dessus dun microscope permettent de manipuler des molcules uniques dADN, pourvu quelles soient attaches une microbille magntique et un substrat. L'observation de l'image de cette bille fournit le moyen de suivre son mouvement brownien et de dterminer la force de traction exerce tandis qu'il est possible de mesurer l'extension de la molcule sans quaucun contact mcanique ne soit ncessaire. Nous avons pu tudier le comportement lastique dune molcule dADN soumise une contrainte de torsion qui provoque la formation de structures torsades rduisant l'extension de la molcule. Lorsque nous droulons la double hlice, nous observons l'apparition de bulles de dnaturation dans lesquelles les deux brins dADN sont spars. En utilisant ces proprits lastiques, nous pouvons dtecter l'action des enzymes ADN polymrases et hlicases qui se dplacent le long de la molcule. Par ailleurs, nous observons l'action enzymatique dune seule topoisomrase dont nous dtectons les cycles individuels. Ces expriences illustrent quel point les protines sont des objets dynamiques

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dont les changements de forme sont impliqus dans leur mode de fonctionnement.

Remerciements
Nous remercions l'ARC, le CNRS, l'ENS, les universits de Paris VI et de Paris VII et la communaut europenne (par son contrat MolSwitch IST-2001-38036) pour leur support financier.

Bibliographie
[1] [2] K. Svoboda, C.F. Schmidt, B.J.Schnapp, and S.M. Block. Direct observation of kinesin stepping by optical trapping interferometry. Nature, 365: 721727, 1993. J.T. Finer, R.M. Simmons, and J. A. Spudich. Single myosin molecule mechanics: piconewton forces and nanometer steps. Nature, 368: 113 119, 1994. H. Noji, R. Yasuda, M. Yoshida, and K. Kinosita. Direct observation of the rotation of F1-ATPase. Nature, 386: 299302, 1997. M.S.Z. Kellermayer, S.B. Smith, H.L. Granzier, and C. Bustamante. Folding-unfolding transition in single titin molecules characterized with laser tweezers. Science, 276: 11121116, 1997. E.L. Florin, V.T. Moy, and H.E. Gaub. Adhesion force between individual ligand-receptor pairs. Science, 264: 415417, 1994. M. Rief, M. Gautel, F.Oesterhelt, J.M. Fernandez, and H.E. Gaub. Reversible unfolding of individual titin immunoglobulin domains by afm. Science, 276: 11091112, 1997. B. Essevaz-Roulet, U. Bockelmann, and F. Heslot. Mechanical separation of the complementary strands of DNA. Proc. Nat. Acad. Sci, 1994: 11935 11940, 97. B. Maier, T. Strick, J-F. Allemand, C. Gosse, D. Bensimon et V. Croquette, Micromanipulation de molcules uniques d'ADN et de protines. Dans Energie et interface Physique Biologie . Comptes rendus des Journes X-ENS/UPS de physique du 4 et 5 mai 2000. Dpartement de Physique de lcole Polytechnique 91 128 Palaiseau. J.-F. Allemand, D.Bensimon, V. Croquette, R. Lavery, B. Maier, and T. Strick. Le jokari molculaire. Biofutur, 190: 2630, 1999. J.D. Watson and F.H.C. Crick. Molecular structure of nucleic acids. Nature, 171: 737738, 1953. A. Einstein. Investigation of the Brownian theory of mouvement. Dover Publication, 1956. C. Bustamante, J.F. Marko, E.D. Siggia, and S. Smith. Entropic elasticity of -phage DNA. Science, 265: 15991600, 1994. J.F. Marko and E.D. Siggia. Fluctuations and supercoiling of DNA. Science, 265: 506508, 1994. C. Bouchiat, M.D. Wang, S. M. Block, J.-F. Allemand, and V.Croquette;. Estimating the persitence length of a worm-like chain molecule from forceextension measrements. Biophysical Journal, 76: 409413, 1999. J.H. White. Self linking and the gauss integral in higher dimensions. Am. J. Math., 91: 693728, 1969.

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[3] [4] [5] [6] [7] [8]

[9] [10] [11] [12] [13] [14] [15]

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[16] J.F. Marko and E. Siggia. Statistical mechanics of supercoiled DNA. Phys. Rev. E, 52(3): 29122938, 1995. [17] C. Bouchiat and M. Mzard. Elasticity theory of a supercoiled DNA molecules. Phys. Rev. Lett., 80: 15561559, 1998. [18] J.D. Moroz and P. Nelson. Torsional directed walks, entropic elasticity and DNA twist stiffness. Proc. Nat. Acad. Sci., 94: 1441814422, 1997. [19] T. Strick, J.F. Allemand, D. Bensimon, A. Bensimon, and V. Croquette. The elasticity of a single supercoiled DNA molecule. Science, 271: 1835 1837, 1996. [20] T. Strick, J.-F. Allemand, D. Bensimon, and V. Croquette. The behavior of supercoiled DNA. Biophysical Journal, 74: 20162028, 1998. [21] T. Strick, V. Croquette, and D. Bensimon. Homologous pairing in streched supercoiled DNA. Proc. Nat. Acad. Sci. (USA), 95: 1057910583, 1998. [22] T. Strick, D. Bensimon, and V. Croquette. Micro-mechanical measurement of the torsional modulus of DNA. Genetica, proceedings of NATO ARW on "Structural Biology and Functional Genomics", (1998), 106: 5762, 1999. [23] B. Maier, D. Bensimon, and V. Croquette. Replication by a single DNA polymerase of a stretched single strand DNA. PNAS (submitted, 2000). [24] Single-molecule studies of the effect of template tension on T7 DNA polymerase activity Wuite, G. J.L. ; Smith, S. B. ; Young, M.; Keller, D.; Bustamante, C. Nature 404, (2000) pp 103-106. [25] T.M. Lhoman and K.P. Bjornson, Ann. Rev. Biochem. 65, 169-214 (1996). [26] J.C. Wang, Interaction between DNA and an escherichia coli protein , J. Mol. Biol. 55 (1971) 523533. [27] "Single-molecule analysis of Topoisomerase II-DNA interactions", T.R. Strick, V. Croquette and D. Bensimon, Nature 404, 901-904 (2000), "Preferential relaxation of positively supercoiled DNA by Escherichia coli topoisomerase IV in single molecule and ensemble measurements" N.J. Crisona, T.R. Strick, D.Bensimon, V.Croquette and N.R.Cozzarelli, Genes and Development vol. 14 : 2881-2892 (2000). [28] N.H. Dekker, V.V. Rybenkov, M. Duguet, N.J. Crisona, N.R. Cozzarelli, D. Bensimon, V. Croquette. "The mechanism of type IA topoisomerases." Proc Natl Acad Sci USA. (2002).

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Traitement des cancers par les radiations ionisantes

Jacques BALOSSO CHU Michallon Universit Joseph Fourier Grenoble-1, Grenoble
ml : JBalosso@chu-grenoble.fr

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Les radiations ionisantes perturbent ltat de lADN cellulaire et entranent une srie de ractions cellulaires qui peuvent aboutir soit la rparation des radiolsions, soit la mort cellulaire, soit, trs rarement, la persistance de mutations dans une cellules survivante. Les cellules cancreuses sont moins efficaces pour rparer ces radiolsions et lorganisation dun tissu cancreux est moins apte compenser les pertes cellulaires quun tissu sain. Ainsi laction rpte des sances de radiothrapie peut faire disparatre une tumeur en prservant suffisamment le tissu sain qui en est infiltr.

I - Introduction
La radiothrapie reprsente une des thrapeutiques curatrices majeures en cancrologie. Son mode daction est maintenant bien compris. Cependant, sa mise en uvre trs technique reste mal connue du public et des dcideurs qui ne lui ont pas toujours accord la place quelle mrite en termes dinvestissement et de formation, do le retard manifeste dont souffre cette discipline dans notre pays et ses besoins importants en comptences mdicales et physiques pour les annes venir. Lapplication actuelle de la radiothrapie est presque exclusivement dvolue au traitement des tumeurs cancreuses. En effet, une tumeur cancreuse est curable par radiothrapie un certain nombre de conditions : - elle doit tre irradie de manire homogne dans sa totalit, il faut donc quelle soit peu tendue, - la dose ncessaire pour la dtruire doit tre tolrable par les tissus sains qui lentourent. Une approche exclusivement ablative nest pas adapte au traitement dun cancer tendu. En effet, une tumeur est souvent infiltrante, dune manire gomtriquement trs complexe et lexrse de lensemble des prolongements dune tumeur conduirait souvent la destruction trs importante dun organe vital ou bien lexrse limite la partie visible de la tumeur laisserait en place de trs nombreuses infiltrations, sources dune rechute inluctable. Il faut pouvoir liminer les cellules cancreuses infiltres parmi les cellules saines, sans dtruire ces dernires. Il est donc ncessaire dobtenir un effet diffrentiel entre les cellules tumorales dtruire et les cellules

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saines prserver. Une mthode purement ablative nest donc pas capable de raliser cet effet diffrentiel mais les radiations ionisantes peuvent le produire. Nous allons voir comment cela est possible.

II - Mcanisme daction des radiations ionisantes au niveau cellulaire

Les mcanismes daction des radiations ionisantes dans la cellule passent progressivement des phnomnes physiques des phnomnes biochimiques puis des phnomnes biologiques. Les phnomnes physiques initiaux correspondent larrachement dlectrons des atomes et des molcules rencontrs dans la matire vivante par les particules du rayonnement ionisant. Lessentiel de la matire vivante tant constitu deau, le phnomne dominant est reprsent par la radiolyse de leau (figure 1). Il sagit de cascades de ractions conduisant la dgradation de la molcule deau pour conduire un certain nombre de radicaux libres qui sont en ralit des espces chimiques puissamment oxydantes. eeffet indirect

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OH.

Photon incident

H2O e-

effet direct

Figure 1 : Action indirecte par la cration de radicaux OH par radiolyse de leau et action directe des rayonnements ionisants sur lADN dans les cellules.

Ces espces chimiques, pour celles qui ont une certaine dure de vie comme lion hydroxyle (OH-), vont pouvoir diffuser et attaquer les macro-molcules prsentes dans la cellule. Ces radicaux libres sont sensibles la prsence de composs chimiques capables de les piger,

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chlateurs de radicaux libres, ou sont sensibles loxygne qui, prsent dans le milieu irradi, est capable daugmenter la quantit de radicaux libres produits et de modifier, dans le sens dune aggravation, les ractions doxydation des macro-molcules biologiques. Par laction de ces radicaux libres sur les macro-molcules, lirradiation agit de manire indirecte. Cet effet indirect est dominant pour les radiations produisant des ionisations diffuses lintrieur de la cellule et donc agissant essentiellement sur leau. Il peut exister une action directe sur les macro-molcules par ionisation directe de ces cibles molculaires telles que lADN. Cet effet direct, pour les radiations habituellement utilises en radiothrapie (photons X et gamma, lectrons), est minoritaire. Dune manire gnrale, les modifications molculaires produites dans lADN par les radicaux oxydants vont aboutir, selon leur complexit, des coupures simple-brin ou des coupures double-brin de la double hlice dADN. Les coupures simple-brin sont trs largement majoritaires (plus de 99 % des lsions) et correspondent laboutissement de trs nombreuses varits de modifications molculaires provoques par lattaque radicalaire de lADN qui est la cible principale dans la cellule. Ces lsions simple-brin sont rpares rapidement, de manire exacte et complte, par la cellule qui est trs bien quipe pour leur gestion. En effet, la cellule est soumise du fait de notre vie arobie une attaque radicalaire constante et mnage laquelle elle rpond avec des moyens qui sont bien adapts la gestion des lsions similaires provoques par une irradiation. En revanche, lorsquil existe une attaque radicalaire concentre, comme il peut sen produire dans la toute dernire partie de la trajectoire des particules ionisantes, des lsions complexes de lADN peuvent se produire, conduisant une coupure des deux brins dADN. Ces coupures double-brin peuvent tre mal ou incompltement rpares et lorsquil en subsiste une deux dans une cellule aprs la ralisation des processus de rparation biologique, ces coupures double-brin rsiduelles sont mortelles pour la cellule. Les coupures double-brin sont effectivement les lsions ltales que provoque lirradiation ionisante dans les cellules vivantes. Les modifications que peuvent apporter les agents modificateurs de leffet indirect cits prcdemment, savoir les chlateurs de radicaux libres et loxygne, sont trs importantes sur la sensibilit cellulaire. Pour prendre lexemple de loxygne, des cellules hypoxiques vont avoir une radio-rsistance pratiquement double de celle des cellules normoxiques. En dautres termes, pour obtenir le mme effet biologique, il faudra doubler la dose face des cellules hypoxiques en comparaison avec des cellules normales. Lhypoxie cellulaire est un phnomne qui dans un organisme

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humain nexiste pratiquement que dans les tumeurs. Et cette hypoxie est considre depuis longtemps comme un des moyens principaux quont les tissus tumoraux de rsister la radiothrapie. Lefficacit biologique du rayonnement dpend aussi, de manire trs importante, de sa distribution spatiale microscopique. En effet, nous avons vu que si les lsions taient essentiellement disperses, loignes les unes des autres, peu importantes, elles allaient crer des coupures simple-brin que la cellule tait capable de bien rparer. En revanche, si les ionisations, phnomnes primaires de lirradiation, sont concentres le long dune trajectoire enveloppe dune trs forte densit dionisation, comme c'est le cas sur le passage d'ions (protons, mais surtout ions lgers), la complexit des lsions dans la matire vivante sera plus importante et le nombre de coupures double-brin complexes augmentera.

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Ainsi, pour la mme dose dpose, un rayonnement provoquant des ionisations disperses sera moins efficace quun rayonnement provoquant des ionisations trs regroupes le long de trajectoires moins nombreuses. On explique de cette faon la trs forte diffrence defficacit biologique des particules lourdes en comparaison avec les photons ou les lectrons. Les particules lourdes provoquant une forte densit d'ionisations autour de leur trajectoire sont appeles particules haut transfert dnergie linique (TEL). Lapplication de radiations de haut TEL sur des populations cellulaires de radiosensibilits diffrentes met en vidence un phnomne tout fait caractristique qui est la disparition progressive des diffrences de radio-sensibilit au fur et mesure que le TEL augmente. On observe une efficacit plus grande de ces rayonnements mais aussi progressivement la disparition de la diffrence de radiosensibilit des cellules hypoxiques par rapport aux cellules normoxiques lorsquelles sont soumises ce type de radiation. Cela reprsente donc un norme avantage pour le traitement de tumeurs humaines qui renferment dans prs de 60 % des cas des sites ou des foyers d'hypoxie.

III - Obtention dun effet diffrentiel lchelle tissulaire

Finalement, tous les phnomnes que nous venons dvoquer ne sont pas tellement diffrents, quils sexercent sur des cellules normales ou sur des cellules tumorales. Aussi voit-on trs peu deffet diffrentiel lchelon cellulaire. Comment lobtient-on lchelle de lorganisme puisque cest ce niveau-l quon observe lefficacit de la radiothrapie ? Les principes qui permettent dobtenir cet effet diffrentiel sont au nombre de trois :

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- la restriction anatomique de lirradiation au seul volume tumoral, - le fractionnement et ltalement, - la pharmaco-modulation de la rponse tumorale lirradiation. 1) Examinons tout dabord la restriction anatomique de lirradiation au seul volume tumoral. Cette restriction anatomique permet de protger tous les autres tissus sains environnants et permet, bien videmment, davoir plus defficacit sur la tumeur que sur les tissus sains. Plus cette restriction anatomique sera parfaite et plus on pourra protger les tissus sains et augmenter la dose dlivre la tumeur. Cette restriction anatomique a suivi les progrs technologiques qui ont accompagn la radiothrapie depuis son avnement. Cest le vaste problme de la balistique : cest lui qui a entran la course vers les hautes nergies des annes 50 aux annes 80 o lon a multipli par 100 lnergie moyenne des faisceaux utiliss ; cest lui qui a entran le dveloppement de la radiothrapie de conformation qui devient aujourdhui le standard des traitements de qualit en radiothrapie et, enfin, cest lui qui continue proposer des amliorations pour lavenir immdiat, par exemple avec la radiothrapie de conformation par modulation dintensit (RCMI), technologie complexe ncessitant des appareils sophistiqus et une programmation entirement informatise du traitement. Cette dmarche connat cependant des limites : - limprcision des bords de la tumeur ; il nest en effet pas toujours possible de sadapter des limites microscopiques, invisibles, voire extrmement complexes, - le mouvement des organes irradier, qui ncessite des marges de scurit et qui va obliger inclure plus de tissu sain dans le volume irradi, - les imprcisions du repositionnement du patient dune sance lautre, qui ncessitent aussi le recours des marges de scurit. Il existe des domaines de recherche concernant ces trois problmes. En effet, limprcision des limites tumorales est sans arrt rduite grce aux progrs de limagerie mdicale (scanner, IRM, TEP, fusion dimages, etc.). Les mouvements des organes peuvent tre suivis ou grs par des techniques spciales dinterruption de lirradiation lorsque le volume cible sloigne de sa position de rfrence. Il existe aussi des techniques dasservissement de lirradiation au cycle respiratoire du patient. Enfin, la prcision du repositionnement peut faire des progrs grce lutilisation dune imagerie utilise lors du repositionnement du patient chaque sance, tirant parti de marqueurs ou de repres lis la tumeur. 2) Le fractionnement et ltalement (figure 2) dune radiothrapie contribuent fortement leffet diffrentiel. En effet, le fractionnement du

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traitement en sances espaces de 6 24 heures permet la rparation des radio-lsions molculaires au niveau de chaque cellule. Il assure donc la survie des tissus renouvellement lent. Le fractionnement est ainsi le point cl de la qualit dune radiothrapie vis--vis des effets long terme dans les tissus sains qui assurent la prennit de lorganisme. Survie cellulaire

Tissus sains

Tumeur hal-00001383, version 1 - 24 Nov 2006 Seuil de gurison de la tumeur

Nombre de fractions
Figure 2 : Survie cellulaire en fonction de la progression dune irradiation fractionne, amplification cumule de leffet diffrentiel.

Ltalement du traitement sur plusieurs semaines permet, quant lui, la rparation tissulaire par la repopulation cellulaire. Cet talement assure la survie des tissus renouvellement rapide et permet aux patients de supporter une irradiation. A noter que ltalement favorise galement la survie de la tumeur et il faut donc considrer un compromis entre un talement trop long qui rduirait compltement les effets secondaires aigus dune irradiation mais empcherait le traitement efficace de la tumeur et un talement trop bref qui serait certes plus efficace sur la tumeur mais exposerait le patient des effets secondaires aigus insupportables. Lors de ces mcanismes de rparation molculaire et de restauration tissulaire, la rptition des fractions ou des sances dirradiation va crer progressivement une accumulation des faibles diffrences qui existent au niveau cellulaire en terme de radio-sensibilit. Au bout dun traitement de 25, 30 ou voire plus de fractions, la diffrence sera telle que les tissus sains, bien quaffects par lirradiation, auront la capacit de se restaurer compltement aprs la fin de celle-ci, tandis que la tumeur profondment modifie aura accumule suffisamment de lsions cellulaires pour quelle finisse par disparatre compltement. Il faut noter que lapplication optimale de ce compromis, bas sur une sance de

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radiothrapie de 2 Gy par jour, est ralise lorsque la sensibilit des tissus sains est lgrement plus faible que celle de la tumeur. Lors dune situation inverse, le fractionnement du traitement aurait bien videmment leffet inverse et provoquerait une survie de la tumeur au prix de lsions du tissu sain, sans bnfice pour le patient. En cas de diffrence entre tumeur et tissu sain dfavorable pour le tissu sain, la rduction de la diffrence (ici dfavorable) reprsente un avantage sur le chemin de la destruction de la tumeur. Nous avons vu que les radiations de hauts TEL crasaient les diffrences entre tissus et peuvent reprsenter, dans ces cas-l, une solution thrapeutique. Ces cas sont ceux des tumeurs naturellement radiorsistantes ainsi que ceux des tumeurs prsentant des rgions hypoxiques. 3) La troisime solution pour obtenir un effet diffrentiel rside dans la pharmaco-modulation de la rponse tumorale lirradiation. Des mdicaments anti-cancreux sont administrs en mme temps que la radiothrapie pour renforcer leffet diffrentiel. Leur mode daction est de rduire la repopulation cellulaire tumorale pendant lirradiation. En effet, ces chimiothrapies agissent prfrentiellement sur les cellules en prolifration rapide. Elles permettent de rduire la multiplication des cellules tumorales au cours de ltalement, facteur de rsistance au traitement. Leur action se produit aussi sur les tissus sains renouvellement rapide mais ceux-ci pourront cicatriser compltement aprs la fin de lirradiation. Enfin, laction de la chimiothrapie est trs complmentaire de celle des radiations ionisantes puisque les cellules dans la phase de rplication de lADN (phase S) sont plus radio-rsistantes et beaucoup plus chimiosensibles. Ainsi la destruction slective du tissu tumoral par la radiothrapie permet la gurison locale authentique dun nombre important de cancers. Cette dmarche permet le plus souvent de conserver des organes et des fonctions qui seraient atteintes par la tumeur ou supprimes par des techniques ablatives, comme la chirurgie dexrse large qui est la mthode de rfrence du traitement des tumeurs au stade loco-rgional. Malgr tout, la radiothrapie reste encore frquemment en chec pour trois raisons : - les tumeurs sont souvent trop tendues pour permettre dutiliser le potentiel dune radiothrapie trs localise - les tumeurs ont des conformations trs complexes qui peuvent les situer au contact de structures vitales radio-sensibles, ce qui empche de dlivrer la dose ncessaire la destruction de la tumeur - enfin, et surtout, il existe comme nous lavons vu des tumeurs qui sont, par nature ou du fait de lhypoxie, radio-rsistantes.

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IV - Comment peut-on progresser et quelles sont les perspectives physiques pour la radiothrapie ?
Nous avons vu quun certain nombre dobstacles la ralisation idale dune radiothrapie sont de nature morphologique, mcanique, technique ou physique. Heureusement, des progrs toujours plus importants dans loptimisation de la rpartition anatomique de la dose sont encore possibles : la radiothrapie avec modulation dintensit, des techniques informatiques complexes de planification inverse (un logiciel sophistiqu permettant de proposer une solution balistique un choix de distribution de dose impos), la dosimtrie par simulation de Monte Carlo qui permet de calculer les dpts dnergie dans des structures complexes (ce qui nest pas toujours possible aujourdhui), la dosimtrie en dose biologique pour mieux matriser les phnomnes de tolrance des tissus sains. Enfin, on dveloppe toutes les techniques sophistiques de contrle, en temps rel, de la position de la cible irradier.

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Figure 3 : Comparaison des dpts de dose en profondeur de photons de haute nergie, dlectrons de 21 MeV et de noyaux de carbone de 270 MeV/u. Le disque fonc reprsente une tumeur. (GSI, Darmstadt, Allemagne)

Un autre grand domaine de dveloppement porte sur lutilisation des rayonnements de haut TEL (figure 3) qui, nous lavons vu, ont des proprits biologiques particulires en rduisant les possibilits de radiorsistance des tumeurs. De plus, les particules lourdes et charges qui possdent ces caractristiques ont une balistique extrmement favorable avec un pic de Bragg qui permet :

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- de dlivrer le maximum de dose au volume tumoral, - de ne pas avoir de faisceau de sortie, - davoir un couloir dentre sous-dos par rapport la zone traiter. Ceci reprsente des caractristiques idales et tout fait opposes celles des photons qui sont utilises quotidiennement Enfin, dautres techniques relevant dune physique la pointe du progrs sont explores, telles que lutilisation du rayonnement synchrotron. Cest un rayonnement X dnergie moyenne (10 150 keV) ayant une intensit un million de fois suprieur celui dun gnrateur classique de rayons X, ce qui permet denvisager des concepts nouveaux dirradiation par exemple en utilisant seulement une bande spectrale troite pour exploiter certaines formes deffet photo-lectrique pour le traitement des tumeurs.

V - Conclusion
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Nous voyons donc que beaucoup de possibilits de progrs dpendent de lapplication de mthodes physiques, que ce soit au niveau du diagnostic par limagerie, au niveau de la sophistication balistique des traitements et mme au niveau des progrs radio-biologiques, car ils passent par la mise en uvre de radiations particulires qui sont en ellesmmes des dfis technologiques pour la physique.

Remerciements
Nous remercions Stphanie Corde pour son aide dans la ralisation des figures et Madame Christine Sgura (CHU de Grenoble) qui a dactylographi le texte.

Bibliographie
Pour en savoir plus le lecteur est invit consulter les sites Internet suivants :
http://www.sfro.org http://www.chu-rouen.fr/ssf/ther/radiotherapie.html http://perso.wanadoo.fr/adasta/rayonsx.htm http://www.zoomcancer.com/tumeur_cancereuse.html http://www.lyon151.inserm.fr/CIJ-Cancer/traitement/radio.html

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Hadronthrapie par faisceaux d'ions lgers : le projet ETOILE

Joseph REMILLIEUX et Marcel BAJARD Institut de Physique Nuclaire Universit Claude Bernard Lyon 1, Villeurbanne
ml : j.remillieux@ipnl.in2p3.fr m.bajard@ipnl.in2p3.fr

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Ds 1947, R. Wilson proposa d'utiliser les proprits balistiques et ionisantes des ions pntrant dans la matire (pic de Bragg) pour traiter les tumeurs cancreuses par hadronthrapie. Cette ide ne fut exploite cliniquement qu' partir de 1954 Berkeley aux USA, o l'on traita dans un laboratoire de physique jusqu'en 1993, date d'arrt de l'acclrateur, plus de 2500 patients par divers faisceaux d'ions (du proton au non). Depuis cet arrt, de nombreux centres cliniques ddis uniquement la protonthrapie ont t implants travers le monde, notamment en France Orsay et Nice. Actuellement, seuls le Japon et l'Allemagne sont dots d'installations plus lourdes permettant l'hadronthrapie par des faisceaux d'ions carbone, projectiles aux proprits balistiques et radiobiologiques notablement plus performantes que celles des protons. Cinq projets d'implantation de centres cliniques d'hadronthrapie par ions carbone sont en cours en Europe (Allemagne, Autriche, France, Italie et Sude). La ralisation du centre allemand vient de commencer Heidelberg. Quant au projet franais ETOILE (Espace de Traitement Oncologique par Ions Lgers dans le cadre Europen) il vient d'tre publi et ce sont ses principales caractristiques qui sont prsentes ici : nombre de patients qui pourront tre traits (1000/an), mode d'acclration (synchrotron de 75 m de circonfrence), nombre de salles de traitement (3), cots d'investissement (80 M) et d'exploitation (12 M/an), taille des quipes mdicales (58 personnes) et techniques (16), site d'implantation de rfrence (ple mdical Est de Lyon).

I - Introduction et historique du projet ETOILE

Le projet franais ETOILE (Espace de Traitement Oncologique par Ions Lgers dans le cadre Europen) propose de construire un centre mdical ddi au traitement de certaines tumeurs cancreuses par faisceaux d'ions carbone issus d'un synchrotron. Ce sera un centre de soins et de recherche clinique. Le projet est fond sur des principes biologiques et physiques forts, faisant apparatre les faisceaux dions carbone comme la meilleure modalit dirradiation actuelle. Les premiers rsultats cliniques obtenus depuis 1994 au NIRS (Japon) et depuis 1997 au GSI (Allemagne) ont dmontr la faisabilit du traitement en routine par ions carbone avec des rsultats prometteurs, en particulier pour les cancers inoprables et rsistant aux rayonnements conventionnels. La technologie dun tel synchrotron ddi la mdecine est parfaitement matrise en France et en Europe, grce lexprience des grands instruments de physique et lexprience clinique du GSI.

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LUniversit Claude Bernard Lyon 1 (UCBL) a pris linitiative en 1999 de confier des mdecins et des physiciens la rdaction dun cahier des charges pour la cration dun centre dhadronthrapie par ions lgers. Cette tude a reu le soutien financier de lANVAR, de la Rgion RhneAlpes, de la Communaut Urbaine de Lyon et du Ministre de la Recherche. L'avant-projet qui a suivi s'est concrtis en 2002. Il est le fruit dune collaboration troite entre mdecins (oncologues, radiothrapeutes des Hospices Civils de Lyon, du Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble, du Centre Lon Brard de Lyon), scientifiques (physiciens, informaticiens, conomistes des Universits de Lyon et Grenoble, radiophysiciens de Lyon, Grenoble, ainsi que de Nice et Orsay) et ingnieurs spcialistes des acclrateurs (CEA et CNRS dans le cadre d'une convention avec l'UCBL). Il a donn lieu une premire coopration europenne avec le Centre GSI Darmstadt, le CERN Genve et la fondation TERA Milan, puis la constitution d'un rseau europen (ENLIGHT) dans le cadre du 5me Programme Cadre de Recherche et Dveloppement (PCRD). Le centre ETOILE prvoit de traiter terme au moins 1000 malades par an avec un recrutement national, voire europen.

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II - Intrt physique et biologique des faisceaux d'ions lgers

Contrairement aux rayons conventionnels, photons et lectrons, dont le profil de dose dlivre aux tissus dcrot avec la profondeur traverse, celui des ions - incluant les protons - est caractris par un dpt de dose lev en fin de parcours (dnomm pic de Bragg), alors que

Figure 1 : Comparaison des dpts de doses pour des photons, des lectrons et des ions carbone dans de l'eau (milieu proche des tissus biologiques). On remarque la prcision de ce dpt en profondeur pour les ions carbone : c'est le pic de Bragg.

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la dose dpose en amont (correspondant la rgion du plateau), est beaucoup plus faible (figure 1). La position en profondeur du pic de Bragg est contrle par lnergie incidente du faisceau, elle peut donc tre modifie, permettant de dposer le maximum dnergie au sein dun volume cible circonscrit (la tumeur), tout en limitant l'irradiation des tissus sains en amont et en protgeant les tissus sains en aval (figure 2).

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Figure 2 : Pour traiter en profondeur les tumeurs de grand volume, il est ncessaire de superposer des pics de Bragg de diffrentes nergies et de moduler leur intensit pour avoir une rpartition homogne du dpt de dose. On remarque que pour une mme dose dpose en amont de la tumeur l'effet biologique dans celle-ci est plus important avec les ions carbone qu'avec les protons.

Ces proprits, allies une faible diffusion latrale (figure 3), confrent une excellente prcision balistique aux ions carbone, au del mme de celle des protons.

Figure 3 : A une profondeur donne, la diffusion latrale dun faisceau d'ions carbone est beaucoup plus faible que celle d'un faisceau de protons.

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Les ions carbone ont de plus lavantage datteindre, au pic de Bragg, un transfert dnergie linique (TEL) lev dans la matire, bien suprieur celui des photons et des protons. Ils crent ainsi des radiolsions cellulaires plus difficilement rparables, telles que des coupures double-brin de lADN. De plus, les tumeurs hypoxiques, dont la radiorsistance est caractrise par le rapport OER (Oxygen Enhancement Ratio), seront plus efficacement strilises par ce rayonnement de haut TEL. Lefficacit biologique lie aux dommages cres par des ions plus lourds que des protons est due la trs forte densit dionisation dans leurs traces (figure 4).

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proton 30 MeV/u in water Gervais B. et al. 100 50 0 -50 0 -100 100 200 300

100 50 0 -50 0 -100

Argon 65 MeV/u in water Gervais B. et al.

100

200

300

Figure 4 : Comparaison de la densit d'vnements d'ionisations dans les traces dions argon et de protons aux mmes chelles longitudinales (en nm) dans de leau. (B. Gervais et al., GANIL, communication prive)

Ces proprits radiobiologiques, caractristiques du pic de Bragg tal (figure 2), confrent aux ions carbone une efficacit biologique relative leve (EBR ~ 1,5 3) cest--dire que le mme effet biologique peut tre obtenu pour une dose physique 1,5 3 fois plus faible quavec des photons.

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De plus, la faible rparabilit des lsions cellulaires induites dans la tumeur par les ions carbone, associe la grande prcision balistique, rduit lutilit du fractionnement du traitement. Ceci permet de diminuer le nombre de sances dirradiation par rapport une radiothrapie conventionnelle, avec des consquences importantes pour le confort du patient et la rduction du cot total du traitement. Enfin, la fragmentation partielle des noyaux du faisceau dans les tissus traverss produit, en faible quantit, des noyaux instables dont certains sont metteurs de positon (par exemple du 11C, de priode 20 min). Cette proprit prsente un intrt car elle permet de visualiser par Tomographie par Emission de Positons (TEP) la distribution de dose pendant ou aprs le traitement et de vrifier la conformit de la dose dlivre la dose prescrite. Cependant ces fragments nuclaires nont pas la mme distribution de parcours que celle des ions non fragments. Ceci explique la queue de distribution observe sur la figure 5 en aval du pic de Bragg tal. Cette queue nexiste pas, bien sr, avec des protons et est dautant moins ngligeable que le projectile incident est plus lourd : il faudra en tenir compte dans le plan de traitement.

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Figure 5 : Dose dpose pour diffrents faisceaux incidents.

III - Donnes mdicales

Les premiers traitements chez lhomme ont t raliss ds 1954 au Lawrence Berkeley Laboratory (USA) par protons et aprs 1957 par ions lgers. Prs de 2500 patients ont t traits, essentiellement par ions hlium et non jusquen 1993 [1].

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Le National Institute of Radiological Science (NIRS) Chiba au Japon a t en 1994 le premier centre mdical ddi au traitement des cancers par ions carbone. Des tudes cliniques descalade de dose et dhypofractionnement [2, 3], exclusivement par ions carbone, ont t conduites chez plus de 1400 patients pour une large varit de tumeurs. Des taux de contrle local de 70 100% 3 ans pour certains cancers radiorsistants ont t rapports (tableau 1). Les possibilits dhypofractionnement ont t particulirement explores pour les cancers du poumon et du foie (4 fractions actuellement), sans majoration de la toxicit. Un deuxime centre mdical ddi (HARIMAC) a t ouvert en 2001 dans la prfecture de Hyogo au Japon. En Europe, seule lAllemagne dispose dun laboratoire de recherche (GSI, Darmstadt), comportant une ligne mdicale avec un faisceau horizontal fixe, d'accs limit quelques mois par an. Depuis 1997, plus de 140 patients ont t traits pour un cancer de la base du crne [4, 5]. La survie sans rcidive 1 an a t de 94% pour les 45 premiers patients (dont 6 pralablement irradis par des photons) traits par ions carbone seuls ou en association avec des photons. Avec une mdiane de suivi de 13 mois, 2 checs en dehors du volume irradi ont t rapports chez 37 patients traits exclusivement par ions carbone pour un chordome ou un chondrosarcome. Les expriences de Berkeley, puis les donnes accumules par le NIRS et plus rcemment par GSI ont clairement dmontr la pertinence du traitement de patients en routine par ions lgers et la possibilit de diminuer le nombre de fractions, confirmant ainsi le gain thrapeutique escompt de lhadronthrapie par ions carbone (tableau 1).

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Localisation

Etudes (phase)

Nombre de patients

Doses (GyE)

Cancers pulmonaires NAPC a stade I

ORL

9303 (I) 9701 (I) 9802 (II) ORL-1 (I) ORL-2 (I) ORL-3 (II) Foie-1 (I) 82 35 62 57 44 11 36

48 34 51 17 19 134 24

Hpatocarcinomes inoprables

Foie-2 (I)

Prostate T1-3 N0M0 Sarcomes Col utrin

Prostate-1 (I) Prostate-2 (II) Sarcomes (I) Col utrin d 1-2 (I)

Tumeurs crbrales

Astrocytome G2 (I) Glioblastome (I)

59.4 - 95.4 68.4 - 79.2 72 48,6 - 70,2 52,8 - 64 57,6 ou 64 49,5 - 79,5 54 - 69.6 48 - 58 48 - 52.8 54 - 72 60 - 66 52,8 - 73,6 52,8 - 72 pelvis : 44.8 50,4 - 55,2 66,8 - 72,4

Nombre de % de % de % de fractions /Dure contrle contrle survie en semaines local 2 ans local 3 ans 3 ans 18/6 62 57 88 9/3 86 75 65 9/3 100 73 18/6 80 b 44 16/4 71 b 44 16/4 61 42 15/5 79 75 50 12/3 8/2 83 79 45 4/1 100 c 94 20/5 100 c c 100 c 100 97 20/5 16/4 73 68 50 24/6 50 58 42 36 40 pelvis : 16/4 24/6 50 22 33/7 17 16

Tableau 1 : Taux de contrle et de survie pour les patients traits par ions carbone exclusifs Chiba Japon (Extraits).

NAPC : non petites cellules Carcinomes pidermodes : 23 % ; autres histologies : 100% c Contrle local valu par biopsies d Carcinome pidermode Stade IIB-IVA

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IV - La distribution de dose dans la tumeur

Pour irradier une tumeur paisse en mode actif, cest--dire sans dgradation des qualits optiques du faisceau, il faut la dcouper en tranches virtuelles correspondant des nergies de faisceau diffrentes (donc des profondeurs de pic de Bragg diffrentes). Dans chaque tranche, il faudra dposer la dose prescrite en balayant le faisceau l'aide d'aimants et en contrlant l'intensit de chaque paquet de particules dans tous les volumes lmentaires prslectionns (figure 6).

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Dose relative (%)

Profondeur en cm
Figure 6 : Pic de Bragg tal par modulation de l'nergie et de l'intensit dun faisceau afin d'avoir un dpt de dose homogne dans une tumeur. (J. Alonso, communication prive)

La qualit thrapeutique du traitement dpend de plusieurs tapes successives : - limagerie de diagnostic permettant le contourage de la tumeur, - le calcul du plan de traitement, - la ralisation de lirradiation, - limagerie de contrle.

1. Imagerie de diagnostic et contourage de la tumeur

Limagerie mdicale regroupe un certain nombre de techniques, doutils et de mthodes qui ont pour objectif de visualiser lanatomie et/ou le fonctionnement du corps humain pour en dtecter les variations pathologiques. Ces techniques non invasives ont pour objectif essentiel, soit dapporter une aide au diagnostic, soit de servir de rfrence anatomique au radiothrapeute ou anatomo-fonctionnelle au chirurgien. La batterie des systmes dimagerie mdicale repose actuellement sur trois grandes techniques et principes physiques (si lon fait exception des ultrasons) : le scanner X ou tomodensitomtre (CT), la rsonance

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magntique nuclaire (IRM), la tomographie par mission de positons (TEP). Le contourage de la tumeur par le mdecin pourra sappuyer sur une base de donnes anatomiques.

2. Plan de traitement
En radiothrapie classique, le scanner X constitue la technique de rfrence pour dtecter et dlimiter la rgion cible partir de laquelle sont raliss les calculs de planification dosimtrique. Cependant, dans le cadre des nouvelles techniques de radiothrapie conformationnelle et dhadronthrapie, qui possdent une bien meilleure balistique, il est ncessaire de dfinir plus prcisment le volume cible en sappuyant sur une imagerie anatomo-fonctionnelle.

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En plus du scanner X qui constitue une excellente rfrence anatomique, il est donc souhaitable dutiliser lIRM qui prsente un meilleur contraste tissulaire en particulier pour limagerie crbrale. De plus, lIRM peut apporter dautres informations, soit de type mtabolique avec la spectroscopie, soit de type fonctionnel avec lIRM de perfusion ou dactivation qui permettent de mieux caractriser les rgions tumorales fortement htrognes. Enfin, grce son excellente sensibilit et spcificit, la TEP constitue une excellente mthode de dtection prcoce des tumeurs primaires et secondaires. Ces images de nature et de modalit diffrentes apportent des informations fonctionnelles et anatomiques complmentaires qui sont dun grand intrt pour caractriser la rgion tumorale et ainsi mieux dfinir le volume cible. Dans ce but, il convient de dvelopper des logiciels de recalage, de fusion et de visualisation, adapts au travail du radiophysicien. La planimtrie d'un traitement consiste ( partir des donnes concernant les patients et des paramtres du faisceau) : - calculer la distribution de dose sur ordinateur : dans la tumeur (volume cible) et dans les tissus sains (organes risque), - choisir et valider la technique dirradiation : nombre et direction des incidences de faisceau. Il conviendra dadapter les modules existants en radiothrapie et protonthrapie au cas des ions lgers avec un souci de compatibilit avec les systmes conventionnels de planimtrie, afin de pouvoir changer des donnes avec un ensemble de centres partenaires. Les spcificits des ions lgers prendre en compte (en plus des caractristiques du faisceau) sont leur efficacit biologique [6] et la

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production de fragments metteurs + qui devraient permettre de contrler en ligne la dose dpose. Le systme de planimtrie du traitement doit galement permettre de dfinir les caractristiques du faisceau pour assurer lirradiation conformationnelle de la tumeur. Il devra, dans le cas du contrle actif du faisceau, tablir les pas en nergie ncessaires pour couvrir lensemble de la lsion. Pour chaque pas, cest--dire chaque tranche du volume cible, le systme devra galement dfinir les caractristique du balayage en x et y du faisceau. Les problmes rsoudre concerneront aussi : - l'valuation de lerreur de positionnement, - l'valuation des mouvements externes et internes des organes en simulant leur comportement cinmatique (respiration, battements cardiaques, ).

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3. Ralisation de lirradiation
La distribution active de la dose dans la tumeur consiste faire varier l'nergie de sortie de l'acclrateur chaque cycle (quelques secondes) et balayer un faisceau pinceau durant ce cycle, l'aide d'aimants, tout en contrlant son intensit point par point (figure 7).

E min

E max

Figure 7 : Principe d'irradiation d'une tumeur par plans successifs et balayage de faisceau.

Dans certain cas il peut tre utile de faire appel un mode de distribution passif dun faisceau dnergie fixe. Il va s'agir de le ralentir et de le disperser en angle l'aide d'lments massifs, de l'homogniser et de raliser une partie mcanique de compensation appele bolus pour tenir compte de la forme de la tumeur et raliser ainsi une irradiation conformationnelle.

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4. Imagerie de contrle
Lutilisation dune camra TEP, permettant la localisation des fragments metteurs + et donc le calcul de la dose dpose dans le volume cible, pourra se faire soit en ligne pendant lirradiation soit hors ligne aprs lirradiation. Lenregistrement hors ligne constitue une solution plus simple dans la mesure o une camra TEP commerciale convient. Si cette solution bnficie dun temps dacquisition pouvant tre plus long car ralis en post-irradiation, elle souffre de labsence dinformation in situ et de retour immdiat pendant lirradiation. Lenregistrement en ligne donne une information en temps rel sur la qualit de lirradiation mais ncessite la mise au point dune camra ddie lhadronthrapie (angle solide couvert plus grand et rapidit dacquisition suprieure).

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IV - Cahier des charges fonctionnelles pour le centre de traitement ETOILE

Les tableaux 2 et 3 rsument les exigences dfinies par les mdecins pour la construction d'un centre de traitement et les consquences techniques prliminaires afin de pouvoir : - traiter des tumeurs profondes, - optimiser la machine pour les ions carbone tout en ayant la possibilit d'acclrer d'autres types d'ions, - prvoir une irradiation conformationnelle dont la qualit et la continuit soient assures, - obtenir un dpt aussi homogne que possible de la dose dans le volume cible, - reprer et repositionner (le patient et la tumeur), - rgler le point dimpact du faisceau de faon aussi prcise et reproductible que possible, - mesurer en ligne et de diffrentes manires les doses dposes, - optimiser le parcours du patient.

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Projectiles Temps de changement entre les deux types de particules Profondeur de pntration des ions (p, C) Dimensions maximales de la surface dirradiation (perpendiculaire la direction du faisceau incident) Dbit de dose physique maximal continu Distribution de la dose dans le volume cible (I et E max) - chute distale 100 % 30 % - pnombre latrale 80 % 20 % Prcision latrale de la direction du faisceau incident Diamtre du faisceau mi-hauteur Rsolution spatiale du champ dirradiation Scurit du patient : - temps darrt rapide - homognit de la dose dans le volume cible - prcision de la dose dpose Technique active dirradiation avec le faisceau : - nergie rapidement variable - intensit rapidement variable - faisceau pinceau variable en position Etudier la possibilit d'avoir aussi une irradiation passive Nombre de salles1

protons jusqu 16O < 1 heure 2 27 cm dans leau 20 x 20 cm2 2 Gy avec un temps de traitement d'une minute par litre infrieure 3 mm infrieure 2 mm 2 mm au niveau du volume cible variable de 4 10 mm 2 mm 200 s cart tolrable 2,5 % 2,5 % Oui Oui Oui Oui - 2 salles de traitement avec faisceau horizontal - 1 salle de traitement avec faisceau vertical (avec la possibilit dinstallation dun faisceau horizontal supplmentaire) Chambres dionisation - 2 pour le contrle de la position et de la forme du faisceau - 2 pour le contrle de la dose - 1 pour la redondance Tte : 1 mm Corps : 2 mm 1000 patients traits par an en routine aprs trois ans de fonctionnement 15 sances en moyenne par patient 220 jours annuels de traitements

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Dosimtrie (mesures) minimale juste avant le patient (par ligne de faisceau)

Prcision du positionnement du patient par rapport au faisceau, avec une contention approprie Hypothse de travail avec trois salles de traitement

Tableau 2 : Cahier des charges mdicales.

Au cours de l'avant-projet est apparu l'intrt de mener la pr-tude d'une salle de traitement avec tte rotative isocentrique.

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Acclrateur nergie variable Sources

Energies finales pour une pntration de 2 27 cm dans leau Variation de lnergie et de lintensit Variation de la profondeur de pntration Dimensions du faisceau (largeur totale mi-hauteur) Intensit typique du faisceau pour un dbit de dose physique de 2 Gy/mn dans un litre

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Variations pour chaque nergie en fonction du plan de traitement et de la conformation de la tumeur Fluctuation de la position du faisceau l'isocentre pendant le cycle dextraction Balayage latral du faisceau dans la salle de traitement Angles dentre du faisceau facilement variables Reproductibilit de la dlivrance de la dose, son homognit et ses contours

Synchrotron 2 sources dions pour ions carbone et protons (+ possibilit d'utilisation d'autres ions) type ECRIS (Electron Cyclotron Rsonance Ion Source) C : 85 400 MeV/uma p : 50 200 MeV La variation de lnergie ncessite des rglages rapides de lacclrateur (environ 1 seconde) Par pas de 1 mm si la pntration est infrieure 20 cm Par pas de 1,5 mm si la pntration est suprieure 20 cm Spot de 4 10 mm de diamtre ajustable par pas de 2 mm au niveau du patient Nombre maximal en particules par dversement au niveau du patient : 12 6+ C : 4 x 108 10 protons : 1 x 10 valeurs typiques en balayage actif (rf : PIMMS [7]) Variation dintensit Imax/Imin = 1000 Dure du cycle : 1 10 secondes Infrieure 15 % du diamtre du spot mihauteur Aimants de balayage horizontal et vertical Tte rotative isocentrique la place du faisceau fixe vertical Contamination du faisceau infrieure 1 % Surveillance en ligne prcise des paramtres du faisceau Surveillance en ligne du spectre des ions de la source Dviateur rapide en 200 s Arrt faisceau mcanique associ

Arrt rapide du faisceau

Tableau 3 : Caractristiques techniques.

VI - Systme acclrateur
Le projet technique [8] a t tudi pendant deux ans en partenariat entre les Universits Claude Bernard Lyon et Joseph Fourier Grenoble, le CEA/DSM et le CNRS/IN2P3. Le projet ETOILE prvoit la construction d'un synchrotron de 24 m de diamtre, permettant de dlivrer des faisceaux d'ions lgers d'nergie variable (de 80 400 MeV/nuclon pour les ions carbone) une profondeur maximale de 27 cm dans les tissus. Il est prvu de raliser trois salles dirradiation : deux avec un faisceau horizontal, une avec un faisceau vertical et un faisceau horizontal. Une option a t tudie pour remplacer

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cette dernire salle par une salle avec une tte isocentrique (gantry) permettant de faire tourner le faisceau autour du patient. Le btiment principal couvrira une superficie d'environ 60 m x 60 m. Une extension est possible pour une salle de traitement supplmentaire.

1. Production des ions

La technologie des sources dions est acquise et permet de fournir les espces et les intensits requises, que ce soit pour les protons, lhlium, loxygne ou le carbone. Linjection peut utiliser deux sources de type ECR (Electron Cyclotron Resonance) qui satisfont lintgralit du cahier des charges pour les espces dions considres. Ces sources peuvent tre aimants permanents et reprsentent alors le meilleur choix en termes de cot et de fiabilit puisqu'elles n'utilisent ni alimentation de puissance ni systme de refroidissement haute pression.

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2. Pr-acclration
Le systme d'injection reprsent figure 8 va de la production des ions dans deux sources jusqu' l'entre dans le synchrotron en passant par une ligne d'analyse basse nergie, un acclrateur linaire (RFQ + linac), un plucheur et une ligne moyenne nergie.

Figure 8 : Elments du systme d'injection dans le synchrotron.

3. Synchrotron
C'est le type d'acclrateur qui rpond le mieux au cahier des charges. Il permet de satisfaire les spcifications mdicales et dobtenir la souplesse requise. Son utilisation mdicale a t dmontre par de nombreuses ralisations, par exemple en Allemagne, au Japon ou aux Etats-Unis. Il est adopt pour toutes les nouvelles gnrations dinstallations ddies au traitement du cancer par ions lgers, quand les

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nergies sont de lordre de 400 MeV/uma (projet de Heidelberg HICAT, projet italien CNA, projet sudois de l'Institut Karolinska, projet autrichien Med-AUSTRON). Le projet ETOILE s'est appuy sur l'tude prliminaire dtaille PIMMS de synchrotron mdical effectue au CERN [7]. Le choix du synchrotron a t motiv par les considrations suivantes : - bonne adaptation pour l'acclration d'ions 12C 400 MeV/A (B ~ 6,35 T x m), - grande souplesse en variation d'nergie (distribution active de la dose), - flexibilit du cycle d'acclration (tumeurs mobiles et/ou non connexes), - gating possible : dclenchement de lirradiation sur critres physiologiques,

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- commutation rapide d'une espce d'ions l'autre, - fonctionnement en impulsions indpendantes (chargement, acclration, dversement), - fiabilit leve. Ce choix a t trait de manire extensive dans de nombreuses tudes techniques ralises au cours des 10 dernires annes et loccasion de nombreuses initiatives proposant une installation hospitalire ddie [9-13]. Le synchrotron fonctionne de manire pulse afin de rpondre aux contraintes de souplesse dj prsentes. Le cycle de la machine (figure 9) peut tre vari de dversement en dversement et selon les caractristiques du volume traiter (les valeurs donnes ne sont que des ordres de grandeur).
Champ
Dversement 0,2 4 s

gating
Injection et acclration 0,7 s Palier 0,2 8,7 s

Temps

Fin de cycle 0,5 s

Figure 9 : Cycle du champ dans les aimants du synchrotron.

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4. Distribution du faisceau
La structure gnrale de l'installation dhadronthrapie ETOILE est donne figure 10. Aprs une pr-acclration, les ions sont injects dans le synchrotron pour tre acclrs jusqu leur nergie nominale. Les particules sont alors extraites et transportes le long des lignes de faisceau jusquaux salles de traitement qui sont desservies par une structure dite en arte de poisson. Le systme de balayage actif est situ en extrmit de ligne et peut tre, si besoin, remplac par un systme passif de distribution.

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Figure 10 : Structure gnrale de l'installation.

VII - Dfinition du btiment

1. Site
L'implantation de rfrence du centre Lyon est le site du Vinatier, proximit immdiate dhpitaux (l'hpital neurologique, lhpital cardiologique, le futur hpital Mre-Enfant, le centre rgional de lutte contre le cancer Lon Brard, lhpital Edouard Herriot), de nombreuses cliniques, dunits de recherche et dun ple dimagerie mdicale. Ce site lest de Lyon, proche des autoroutes et de laroport de Lyon Saint-Exupry, est dun accs particulirement facile.

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2. Niveau traitements et niveau services

Les plans des installations du centre dhadronthrapie sont reprsents figure 11 (plans du niveau traitements et du niveau services). La salle du synchrotron mesurera elle seule environ 30 m x 30 m. Pour le gnie civil, ce sont les tudes de radioprotection qui dterminent les paisseurs des protections biologiques aussi bien pour les murs latraux que pour la dalle situe au plafond du synchrotron (effet de ciel). Selon les spcifications des mdecins, laccueil est au mme niveau que les salles de traitement et la machine. Le parcours du patient a t dtermin afin d'viter les rencontres soit avec les autres patients soit avec les techniciens ou les chercheurs. Ltage du btiment est destin accueillir les services mdicaux (salles d'examen, scanner et IRM) et les services gnraux ainsi que les auxiliaires (distribution lectrique, rfrigration, ventilation). Il recevra aussi toutes les alimentations de puissance afin de minimiser leur distance avec les quipements. La distribution du faisceau en arte de poisson permet une volution aise du btiment et en particulier limplantation optionnelle dune tte isocentrique (Gantry), montre figure 12.

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VIII - Contrlecommande de la machine

Le contrle-commande (figure 13) doit rpondre aux spcifications suivantes : - AGIR depuis les sources d'ions jusquaux salles de traitement, - RGLER et surveiller les paramtres, grer les scurits, raliser linterface avec les oprateurs, - RALISER la fonction essentielle de modulation, impulsion par impulsion, des paramtres permettant de rgler lnergie, le diamtre du faisceau et lintensit au niveau du patient, - INTERFACER les quipements par des standards d'acquisition (VME, VXI), les actions des oprateurs, la gestion des bases de donnes et l'archivage. Des bus de terrain pour les boucles optiques de la source, pour linstrumentation HF, pour les alimentations, seront utiliss, - CONTRLER par des logiciels spcifiques en temps rel.

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Figure 11 : Plans du btiment ETOILE.

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Figure 12 : Solution avec GANTRY.

IX - Qualit du traitement
Elle sera assure par les actions suivantes : - tests quotidiens sur le faisceau raliss en Assurance-Qualit, - positionnement des patients et contrle de la position par imagerie X, - dtection des mouvements, synchronisation respiratoire, - excution du plan de traitement, - mesure des doses dposes, - mesure en ligne de lintensit, du centrage et de la forme du faisceau, - imagerie TEP de la dose effectivement dpose.

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1. Contrle de l'irradiation
Le systme de contrle du traitement doit raliser les tches suivantes afin d'assurer la qualit du traitement : - SLECTIONNER le planning de traitement partir de la BASE DE DONNES du patient, - LANCER les REQUTES auprs du systme de commande et contrle de lacclrateur en vue dobtenir les CARACTRISTIQUES du faisceau correspondant ce planning de traitement, - RGLER et contrler les aimants de balayage, - CONTRLER et matriser lintensit et la position du faisceau, - CONTRLER l'ARRT/MARCHE selon lavancement du traitement, - INTERFACER la communication avec les oprateurs mdicaux, - ARCHIVER toutes les informations utiles concernant le traitement.

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Figure 13 : Structure du commande-contrle.

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2. Qualification pour le traitement

Les diagnostics de dosimtrie en temps rel seront calibrs partir de chambres d'ionisation talonnes. Pour cette calibration, des chambres d'ionisation de rfrence seront places dans un volume d'eau. Les chanes de mesures de rfrence (chambre d'ionisation, cble, lectromtre) seront talonnes par un laboratoire central agr. Pour un traitement donn, on ralisera au pralable une srie de mesures sur un fantme deau pour valider la configuration-machine. Des mesures peuvent galement tre effectues l'aide de fantmes solides (type plaques en plastique) et de chambres d'ionisation plaques parallles (PPIC) et multifils (MWPC). Des dveloppements sont actuellement mens sur des gels polymres pour donner une cartographie tridimensionnelle de la dose dpose.

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3. Contrle de dose en temps rel au niveau du patient

Lors du traitement, le contrle en temps rel et au niveau du patient sera garanti par un ensemble de chambres fils (mesure de profil) et un ensemble de chambres dionisation (contrle de lintensit et de la dose). La Tomographie par Emission de Positons pourra indiquer la direction de la trace du faisceau et ultrieurement la dose dpose, aprs reconstitution du parcours de tous les fragments metteurs de positon (en fonction du tissu rencontr, de l'nergie et de la nature du faisceau). De nouveaux dtecteurs, en cours de mise au point, seront valider afin de pouvoir tre utiliss en redondance pour le contrle de l'irradiation.

X - Flux de patients
Le scnario de fonctionnement en phase de routine est le suivant : ouverture 260 jours par an (dont 220 jours pour les traitements et 40 pour la maintenance) ; 5 jours par semaine ; 14 heures par jour (dont 11 pour la ralisation des irradiations). Avec une hypothse prudente dune dure moyenne de 30 minutes par sance, prs de 15000 sances devraient tre ralises chaque anne. Le personnel mdical et technique prvu pour assurer ce nombre annuel de sances est de 74 personnes.

XI - Cots et dlais
Le cot d'investissement prvu dans l'option sans gantry est de 80 M (tableau 4). Il devrait pouvoir tre rduit par la ralisation d'tudes dtailles communes entre les partenaires europens. Loption avec gantry impliquerait un surcot de 8 M.

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Dsignation

Investissements hors taxes prix novembre 2001 scnario sans tte rotative isocentrique (M) 8,83 6,45 4,68 8,25 23,2 8,23 15 5,22 79,86

Production des ions, acclrateur linaire et lignes de faisceau basse nergie. Synchrotron Distribution du faisceau et systme de balayage Contrle Btiment et infrastructures (dont matrise duvre) Equipements des salles Cot du personnel de ralisation Alas 7% Cot total (M)

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Tableau 4 : Cots d'investissement.

Le cot dexploitation sera, selon les hypothses retenues, de 11 14 M par an. Ce cot inclut l'amortissement du dficit structurel de monte en charge et le remboursement des emprunts. Son financement, dans le cadre du systme de sant, devra prendre en compte le caractre national du centre. Avec lhypothse trs prudente dune moyenne de 15 sances par traitement, le cot moyen pour chacun des 1000 patients traits serait alors de 11 14K. Les possibilits de diminution du nombre de sances, en cours dexploration au NIRS (Japon), devraient permettre de rduire de faon importante le cot moyen par traitement et de permettre un plus large accs cette thrapie innovante.

Calendrier
2003 : 2003-2004 : 2004 2006 : 2007 2010 : 2011 : dcision de principe, lancement des tudes du btiment dcision dfinitive, engagement du btiment ralisation tests, premiers patients, puis monte en charge fonctionnement en routine

XII - Rseau entre les projets europens

Il existe actuellement cinq projets europens de centres mdicaux ddis lhadronthrapie par ions carbone2. La construction du centre allemand de Heidelberg a commenc en 2002.

Heidelberg (Allemagne), Milan (Italie), Stockholm (Sude),Vienne (Autriche), Lyon (France)

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Un rseau europen entre ces projets (ENLIGHT3) a t initi en 2001 par lESTRO4 et lEORTC5. Des groupes de travail ont t crs en 2002 pour coordonner les projets mdicaux (pidmiologie, valuation clinique), lvaluation mdico-conomique et les projets de recherche : radiobiologie, dosimtrie, imagerie, techniques de production du faisceau et de dlivrance de la dose. Le dveloppement de ces programmes de recherche au niveau europen aura d'importantes retombes pour l'volution de l'ensemble de la radiothrapie et pour la sant publique.

XIII - Recherches et formations accompagnant le projet ETOILE

Les recherches associes au projet -outre les recherches cliniquesportent sur des aspects technologiques et biologiques.

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Des laboratoires de Lyon et de Grenoble travaillent raliser des outils daide informatique pour le suivi de lirradiation des tumeurs d'organes en mouvement (poumon, foie, ...). Un rseau de chercheurs (physiciens nuclaires, physiciens mdicaux, radiobiologistes de lINSERM et du CEA) est constitu pour mettre en commun des travaux sur la modlisation des effets biologiques des ions carbone et sur les mcanismes spcifiques, molculaires et gntiques de la radiorsistance. L'tude d'une camra TEP volue, ddie au fonctionnement en ligne pour l'hadronthrapie, est mene par des chercheurs du CEA, du CNRS/IN2P3 et du CERMEP de Lyon. Cette coopration entre physique et mdecine se traduira aussi par la cration, la rentre 2004, dun master Rhne-Alpin de physique mdicale.

XIV - Groupe de projet

La structure actuelle du groupe ETOILE est la suivante
Comit de Direction Jean-Pierre GRARD, Directeur Mdical Joseph REMILLIEUX, Directeur Physicien Jol ROCHAT, Manager Marcel BAJARD, Direction Technique Claude DETRAZ, Mission Europe Comit de Projet Jean-Pierre GRARD Joseph REMILLIEUX Jol ROCHAT MARCEL BAJARD Michel BOLLA Marcel LIEUVIN Yves TERRIEN Yves DCLAIS Marcel JACQUEMET

3 4

European Network for Research in Light Ion Therapy European Society for Therapeutic Radiology and Oncology 5 European Organisation for Research and Treatment of Cancer

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Comit Mdical (groupe de coordination) Jean-Pierre GRARD Michel BOLLA Pascale ROMESTAING Jacques BALOSSO Pascal POMMIER

Groupe de recherche (chefs de projet) Albert DEMEYER Jean-Yves GIRAUD Behzad SHARIAT Dominique SAPPEY-MARINIER Pascal POMMIER Jacques BALOSSO

Informations et Secrtariat : Jocelyne CHARNAY Projet ETOILE - IPNL - Universit Claude Bernard Lyon 1 F-69622 Villeurbanne Cedex Tl : 04 72 43 12 82 Fax : 04 72 43 12 43 e-mail : j.charnay@ipnl.in2p3.fr

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XV - Conclusion
Le projet ETOILE est n de la rencontre entre mdecins oncologues et physiciens des ions lourds et des particules. Il s'est dvelopp depuis grce la collaboration de nombreuses autres disciplines (imagerie, mcanique, informatique, biologie cellulaire, physique des acclrateurs, etc). De nombreuses tapes du projet ncessitent de solides connaissances en physique : simulation des interactions ion-solide et de la fragmentation nuclaire, mthodes d'acclration et de dtection des particules charges, acquisition et transfert rapide de donnes, illustrant parfaitement le thme de cette cole d't de physique (e2phy 2002) qui est de rendre la physique attrayante par ses multiples facettes fondamentales et socitales. La mise en route rcente de la construction du centre d'hadronthrapie de Heidelberg en Allemagne est trs stimulante pour notre groupe de projet dont un des objectifs aujourd'hui est de prouver aux autorits mdicales et dcisionnelles qu'ETOILE est une chance que la France doit saisir pour disposer d'une thrapie innovante dans le traitement de certains cancers.

Remerciements
Les auteurs remercient tous les membres du groupe ETOILE et leurs tablissements de rattachement, ainsi que les quatre autres groupes de projet europens avec qui ils collaborent. Ils expriment aussi leur gratitude la Rgion Rhne-Alpes, au Grand Lyon, l'ANVAR et au Ministre de la Recherche pour le soutien moral et financier qu'ils apportent au projet.

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Bibliographie
[1] JR. Castro, DE. Linstadt, JP. Bahary, PL. Petti, I. Daftari, JM. Collier, PH. Gutin, G. Gauger, TL. Phillips. Experience in charged particle irradiation of tumors of the skull base: 1977-1992. Int J Radiat Oncol Biol Phys 1994;29:647-55 [2] H. Tsujii, S. Morita, T. Miyamoto, J. Mizoe, T. Kamada, H. Kato, H. Tsuji, S. Yamada, N. Yamamoto, K. Murata. Experiences of carbon Ion Radiotherapy at NIRS. Radio-Oncology VII (ed. Kogelnik HD), Monduzzi Editore, 2002 [3] H. Tsujii. Current status of hadrontherapy with carbon ion beams. Eur J Cancer 2001;37(suppl. 6):251 [4] J. Debus, T. Haberer, D. Schulz-Ertner, O. Jakel, F. Wenz, W. Enghardt, W. Schlegel, G. Kraft, M. Wannenmacher. Carbon ion irradiation of skull base tumors at GSI. First clinical results and future perspectives. Strahlenther Onkol 2000;176:211-6 [5] D. Schulz-Ertner, T. Haberer, O. Jakel, C. Thilmann, M. Kramer, W. Enghardt, G. Kraft, M. Wannenmacher, J. Debus. Radiotherapy for chordomas and lowgrade chondrosarcomas of the skull base with carbon ions. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2002;53:36-42 [6] J. Gueulette et al. Protons RBE for early intestinal tolerance in mice after fractionated irradiation. Radiotherapy and oncology 61 (2001) 177-184 [7] Proton-Ion Medical Machine Study (PIMMS). Part I, CERN/PS 99-010 (DI) March 1999 & Part II, CERN/PS 2000-007 (DR) May 2000 [8] Projet ETOILE : rapport LYCEN 2002-01 ou rapport DAPNIA 02-06 Rsum du projet Volume I : Aspects mdicaux et conomiques. Recherches associes Volume II : Avant-projet technique Disponibles en anglais et en franais [9] D. Bhne. Synchrotrons for cancer therapy. EPAC 1992 p 217 [10] U. Amaldi et al. A hospital based hadrontherapy complex. EPAC 1994 p 49 [11] P. Mandrillon. High energy medical accelerators. EPAC 1990 p 263 [12] P. Bryant. Developments in the design of proton and ion accelerators. EPAC 1998 p 207 [13] Proposal for a dedicated ion beam facility for cancer therapy. Universittklinik Heidelberg, Deutsches Krebsforschungzentrum Heidelberg, Gesellschaft fr Schwerionenforschung Darmstadt (1998)

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Limagerie TEP en hadronthrapie

Dominique SAPPEY-MARINIER CERMEP, Hpital Neurologique Universit Claude Bernard Lyon 1, Lyon
ml : Dominique.Sappey-Marinier@univ-lyon1.fr

Limagerie mdicale regroupe un certain nombre de techniques, doutils et de mthodes qui ont pour objectif de visualiser lanatomie et/ou le fonctionnement du corps humain pour en dtecter les variations pathologiques. Ces techniques non invasives ont pour objectif essentiel soit dapporter une aide au diagnostic, soit de servir de rfrence anatomique au radiothrapeute ou anatomo-fonctionnelle au chirurgien.

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I - Limagerie de diagnostic
La batterie des systmes dimagerie mdicale [1] repose actuellement sur trois grandes techniques et principes physiques, si lon fait exception des ultrasons: le scanner X, l'IRM et la TEP.

Le scanner X ou tomodensitomtre
Avec les techniques radiologiques bases sur lutilisation des rayons X, on obtient une information de type anatomique qui atteint une trs grande rsolution spatiale et une bonne diffrentiation tissulaire avec le tomodensitomtre (TDM), dnomm aussi scanner X. Dune grande rapidit et trs facile daccs, le scanner X reprsente encore la technique dimagerie la plus prcise et la plus utilise. Particulirement performante pour la dtection des cancers localisation thoracique ou abdominale (Figure 1), cette technique constitue toujours la rfrence anatomique pour la planification des traitements par radiothrapie.

Figure 1 : Coupe thoracique en vue coronale et sagittale.

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Limagerie par rsonance magntique (IRM)

Plus rcemment, lIRM a permis dobtenir non seulement des images anatomiques dune grande rsolution et dexcellent contraste mais aussi des images fonctionnelles et mtaboliques [2,3]. Ainsi, lIRM constitue la technique de rfrence en particulier pour ltude des pathologies crbrales du fait dune meilleure caractrisation anatomopathologique. Outre les mthodes de perfusion et de diffusion qui auront prochainement un impact dans la caractrisation des pathologies tumorales, lIRM dite fonctionnelle permet de suivre indirectement les phnomnes mtaboliques et hmodynamiques conscutifs lactivation neuronale. Cette technique est particulirement utile en neurochirurgie pour la localisation des rgions fonctionnelles (langage, mmoire) proches de la tumeur rsquer ou traiter dans le cadre dun bilan pr-chirurgical ou pr-radiothrapeutique.

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Quant la spectroscopie ou IRM mtabolique, elle constitue une mthode non irradiante unique pour la caractrisation tissulaire. Par la dtection de certains mtabolites comme le lactate, marqueur dun mtabolisme anarobie, ou de la choline, marqueur dune activit membranaire caractristique des processus tumoraux, la spectroscopie permet non seulement didentifier certaines tumeurs mais surtout de caractriser les variations rgionales mtaboliques qui constituent un indicateur de lactivit tumorale (Figure 2). Cette approche permet alors au radiothrapeute de dfinir le volume cible avec plus de prcision et de spcificit.

Figure 2 : A) IRM pondre en T2 montrant une tumeur de type oligoblastome de haut grade, B) Spectres RMN proton prlevs sur limage mtabolique du NAA (C) dans la tumeur (1) et dans le tissu crbral normal (2) montrant une absence de N-actylaspartate (marqueur neuronal) (2 ppm) et une augmentation de lipides (1,3 ppm) dans la rgion tumorale.

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Tomographie dmission de positons (TEP)

Le principe de la TEP (Figure 3) repose sur la dtection des photons dannihilation produits en concidence lors dune dsintgration + dans la matire. Aprs injection dune molcule, traceur dun mtabolisme ou dune fonction, associe un isotope metteur de positons, la TEP au 18F- fluoro-doxyglucose (FDG) permet de dtecter des tumeurs trs petites qui possdent une augmentation de leur mtabolisme glucidique [4].

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Figure 3 : Une molcule de FDG (traceur) marque par un isotope radioactif (Fluor 18) est injecte au patient. Lisotope tant metteur de positons, ce dernier sannihile avec un lectron voisin pour donner naissance 2 photons qui partent en direction oppose avec une nergie de 511 KeV chacun (figures de gauche). La dtection en concidence de ces 2 photons par une couronne de dtecteurs permet dacqurir un sinogramme (image du milieu) et de reconstruire une image du corps-entier en 3 dimensions (droite). Les zones noires correspondent une fixation leve du FDG (cerveau, reins, vessie, tumeurs).

Lutilisation rcente de cette technique pour lexploration du corpsentier en fait la technique dexcellence de diagnostic des pathologies oncologiques (Figure 4) (tumeurs crbrales, cancer du poumon, cancer du sein, cancer colorectal, dtection des lymphomes).

II - Place de limagerie dans la planification du traitement

En radiothrapie, le scanner X constitue la technique dimagerie de rfrence pour raliser la planification du traitement par radiothrapie. Connaissant la rgion cible, dlimite par le mdecin sur les images de scanner, le radiophysicien prvoit le traitement et calcule la dose dpose dans cette rgion (Figure 5).

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Figure 4 : Images TEP ( gauche et en couleur) dune tumeur crbrale marque au FDG superpose avec une image IRM et ( droite) dun corps-entier montrant une petite tumeur localise dans le poumon droit.

Figure 5 : Planification dun traitement par radiothrapie : les courbes de dose dpose sont superposes une image de scanner X (TDM) du crne.

Cependant, dans le cadre des nouvelles techniques de radiothrapie conformationnelle ou dhadronthrapie, qui possdent une meilleure prcision balistique, il parat ncessaire de dfinir plus prcisment le volume cible en sappuyant sur une imagerie anatomofonctionnelle.

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En plus du scanner X qui constitue une excellente rfrence anatomique, il est donc souhaitable dutiliser lIRM qui prsente un meilleur contraste tissulaire en particulier pour limagerie crbrale. De plus, lIRM peut apporter dautres informations, soit de type mtabolique avec la spectroscopie, soit de type fonctionnel avec lIRM de perfusion ou dactivation, qui permettent de mieux caractriser les limites des rgions tumorales. Enfin, grce son excellente sensibilit et spcificit, la TEP utilisant du FDG ou de la mthionine constitue la meilleure mthode de dtection prcoce des tumeurs primaires et secondaires. Ces images de nature et de modalit diffrentes apportent des informations complmentaires qui sont dun grand intrt pour caractriser la rgion tumorale et dfinir le volume cible. Dans ce but, il convient de dvelopper des logiciels de recalage, de fusion et de visualisation adapts au travail du radiophysicien.

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III - Limagerie de contrle

Lors dun traitement dhadronthrapie utilisant un faisceau dions carbone, les interactions physiques entre les ions et la matire traverse (principalement compose de molcules deau pour un corps humain) engendrent par phnomne de fragmentation la production de particules plus lgres comme le 10C, 11C, 13N, 14N, 15N, 15O(Figure 6). Or certains de ces atomes sont metteurs de positons et par consquent peuvent tre dtects par TEP. La prsence de particules mettrices de positons et lutilisation de la TEP a donc le double avantage de permettre de suivre le parcours des particules secondaires et donc de calculer la distribution spatiale et dosimtrique du faisceau primaire.

13 12

N 14N 15N O 16O

10

H2O

15

C C C

11

12

e+ e-

12 Figure 6 : Schma de fragmentation des ions C arrivant sur une cible compose de molcules deau (H2O). Cela donne naissance une multitude de noyaux plus lgers dont certains (en rouge) sont metteurs de positons (e+) qui aprs annihilation avec un lectron (e-) de la matire donnent naissance deux photons .

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Lutilisation dune camra TEP permet de dtecter les photons et ainsi de reconstruire une image de la concentration en positons. Lenregistrement de cette image peut se faire soit pendant le traitement par faisceaux dions carbone, et on parle alors denregistrement en ligne, soit aprs. En effet, certains noyaux metteurs de positons comme le 11C ont une demi-vie de 20 min ce qui permet de raliser lexamen TEP aprs le traitement.

Enregistrement TEP
Lenregistrement hors ligne constitue une solution simple dans la mesure o une camra TEP commerciale convient. Si cette solution bnficie dun temps dacquisition pouvant tre plus long car ralis en post-traitement, elle souffre de labsence dinformation in situ et de retour immdiat pendant lirradiation. De plus, le dplacement potentiel des organes aprs lirradiation ainsi que le changement de distribution des isotopes pendant ce dlai peuvent nuire la prcision spatiale des informations. Lenregistrement en ligne prsente plusieurs avantages. Le premier consiste effectuer lenregistrement le plus tt possible pour raliser une image in situ avec la meilleure prcision spatiale. Lenregistrement est alors ralis pendant le traitement. Deuximement, cette configuration permet de dtecter les noyaux de courte priode comme 15O et le 10C qui produisent le plus de signal. Cependant, cette configuration ne permet pas dobtenir une bonne statistique de comptage du fait dun angle solide et dun temps dacquisition trs rduits. Cest pourquoi la ralisation dun tel enregistrement en ligne ncessite la conception dun systme nouveau, adapt aux contraintes du traitement par hadronthrapie, cest--dire ayant la meilleure sensibilit compte tenu dune gomtrie imparfaite. En effet, pour placer la camra autour du patient pendant lirradiation tout en laissant un passage dans laxe du faisceau, il convient dimaginer un anneau de dtection spcial. Comptetenu dun angle solide rduit et de la faible intensit du faisceau de particules secondaires, il est ncessaire de disposer dun systme beaucoup plus sensible que ceux actuellement commercialiss. La figure 7 montre une photographie de la salle de traitement dhadronthrapie du centre GSI Darmstadt (Allemagne) qui constitue lunique centre de traitement utilisant la TEP en ligne. Un outil clinique de dosimtrie La dtection dune image de positons permet dtablir la cartographie des fragments et ainsi de calculer, par une modlisation approprie, la distribution du faisceau primaire et la dose dpose dans le

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volume cible. Cependant, ce travail est complexe et dpend de la prcision du modle utilis. Le modle doit simuler un nombre important de paramtres comme les processus de fragmentation et darrt, les constantes radioactives des particules primaires et secondaires, et les changes entre compartiments. De plus, cette modlisation corrigera les effets dattnuation, de transmission et de dtection des rayons .

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Figure 7 : Salle de traitement par hadronthrapie montrant la disposition des dtecteurs TEP autour du patient pendant lirradiation par faisceau dions carbone. (photographie: A. Zschau, GSI Darmstadt)

Conclusion
La TEP est une nouvelle technique dimagerie diagnostique dont le potentiel va au-del de la cancrologie puisque de trs nombreuses autres molcules peuvent tre marques avec le fluor-18 ou dautres radionuclides. Pour atteindre cet objectif, il faut orienter les dveloppements dans deux directions, en faisant appel dune part aux chimistes, pour dvelopper de nouveaux traceurs, et dautre part aux physiciens, pour dvelopper une instrumentation permettant damliorer la sensibilit et la rapidit des camras pour un cot raisonnable. Dans le cadre des traitements par faisceau dions carbone ou proton, la TEP en ligne constitue une approche nouvelle en radiothrapie qui ncessite des dveloppements mthodologiques et instrumentaux.

Bibliographie
1. P. Grangeat. La tomographie Mdicale, Imagerie morphologique et imagerie fonctionnelle. Paris, Herms Science Publications (2002).

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2. B. Kastler. Comprendre lIRM. Paris, Masson (2001). 3. D. Sappey-Marinier et D.L. Arnold : Lavenir de la rsonance magntique nuclaire en neurologie. La Lettre du Neurologue (2001).

4. J. Maublant, JP. Vuillez, JN. Talbot et al. Tomographie par mission de

positons (TEP) et [F-18]-fluorodsoxyglucose (FDG) en cancrologie. Bull. Cancer 85, p. 935 (1998).

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valuation et gestion des risques lis aux mthodes physiques d'investigation

Andr AURENGO Service de Mdecine Nuclaire Groupe hospitalier Piti-Salptrire, Paris
ml : andre.aurengo@psl.ap-hop-paris.fr

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Dans l'immense majorit des cas, les mthodes d'investigation in vivo utilises en routine clinique prsentent pour les patients des avantages potentiels qui dpassent largement les risques plus ou moins hypothtiques qu'elles leur font encourir. Cela ne dispense pas d'une approche trs rigoureuse de leur utilisation, de l'approfondissement de l'tude de leurs effets secondaires ventuels. Leur utilisation doit galement prendre en compte la protection du personnel des services d'exploration, des services demandeur d'examens, des proches du patient et du public, qui sont ventuellement concerns, selon le type d'investigation. Nous prendrons l'exemple de l'imagerie et nous distinguerons deux groupes de techniques. Nous envisagerons tout d'abord le cas des investigations utilisant des rayonnements ionisants : radiologie classique et interventionnelle, scanographie, radiologie numrise, scintigraphie. Nous dtaillerons les niveaux d'exposition du patient et des autres personnes concernes, comment on peut valuer les risques correspondants et comment leur gestion doit prendre en compte les principes gnraux de la radioprotection, leur dclinaison dans le cadre mdical et la rglementation europenne et franaise. Nous montrerons qu'il faut galement valuer d'autres risques associs, comme ceux qui rsultent de l'utilisation de produits de contraste. Nous examinerons comment ces diffrents lments peuvent s'intgrer dans une stratgie diagnostique efficace et raisonnable. Nous examinerons ensuite le cas des investigations utilisant soit des ultrasons (chographie) soit des champs magntiques statiques et des radiofrquences (IRM). Nous montrerons dans ces deux exemples ce que nous savons des risques de ces techniques, risques hypothtiques et risques avrs (par exemple les problmes de compatibilit lectromagntique poss par l'IRM et les pace-makers). Nous montrerons que ces risques, actuellement trs faibles, peuvent devenir des facteurs limitants des progrs de ces techniques. Il n'est pas possible d'obtenir des informations sur un systme sans interagir avec lui et l'organisme humain n'chappe pas cette contrainte.

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Toute investigation sur l'homme s'accompagne d'une interaction dont les consquences doivent tre connues, values, et compares aux bnfices que l'on peut en attendre pour l'intress, en s'interrogeant toujours sur l'impact que les informations que l'on attend pourront avoir sur la prise en charge du patient. Aucun examen inutile ne devrait tre pratiqu. Cependant, le plus grand danger des examens inutiles n'est probablement pas d'ordre physique mais financier : leur cot reprsente l'chelle d'un grand pays un gaspillage considrable des ressources affectes la sant et les dtourne d'utilisations plus utiles la collectivit.

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