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Virologia clnica: 1- Qual o tipo de gen do HPV/HIV/HSV ?

? HPV - DNA circular de fita dupla HIV - RNA de fita simples positiva HSV DNA linear de fita dupla 2- Como acontece a entrada do vrus HPV na clula e qual protena responsvel por isso? A entrada do vrus ocorre atravs do receptor integrina-6 por meio de endocitose, processo em que ocorre invaginao da membrana plasmtica com ingesto das partculas virais e formao de uma vescula chamada endossomo. 3- Como acontece a entrada do HPV no organismo da pessoa? A entrada do vrus acontece por meio de um ferimento na epiderme. 4- Como acontece a entrada do DNA HPV no ncleo celular, qual protena responsvel por isso? A L2 responsvel pelo transporte do DNA viral at o ncleo. 5- Como acontece a replicao do DNA HPV e quais genes so responsveis por esse processo? A E2 remove as histonas do DNA viral desenrolando o DNA e prevenindo sua condensao. Enquanto a E1 possui papel de helicase, desnaturando a fita de DNA e interagindo com o complexo de replicao viral (DNA polimerase alfa, primase e a SSB). 6- Como acontece o processo de montagem do vrus HPV e quais genes responsveis por isso? A montagem do vrus pouco conhecida mas sabe-se que a L2 recruta os capsmeros para o nucleo e d-se a montagem do vrus com consequente empacotamento do DNA. 7 - Cite o ciclo viral do HPV? O HPV tem tropismo pelas clulas epiteliais. Ele atua na camada basal, onde se encontram os queratincitos que so clulas indiferenciadas com grande atividade mittica. O HPV inicia a sntese de protenas precoces E1 e E2. Por ao dessas protenas d-se a replicao do genoma (fase de estabelecimento). O vrus comea sua replicao passando a mesma quantidade de cpias de DNA para as clulas filhas. A sntese de E6 e E7 conduz a transformao celular e dai a clula passa a ter um ciclo de vida mais rpido e dividir-se mais frequentemente. O aumento do nmero de clulas leva ao espessamento da camada basal e formao do papiloma, pois a medida que essas clulas basais vo se dividindo elas vo migrando para as camadas superiores e diferenciando-se progressivamente. Os genes tardios L1 e L2 so expressos apenas nas camadas superiores, terminamente diferenciadas, sendo responsveis pela montagem e encapsidao do vrus. As clulas das camadas mais superficiais vo entrando naturalmente em apoptose pois esse tecido constantemente renovado, logo, ocorre a liberao do vrus medida que elas vo morrendo, sendo esse o mecanismo que ele utiliza para a sua transmisso.

8- Cite as funes das principais protenas virais do HPV: Protenas precoces: E1 e E2 vo regular a replicao viral e a expresso de protenas virais. E6 vai induzir a transformao celular complexando-se protena P53 e acelerando sua degradao. E7 vai induzir tambm a transformao celular interagindo com protenas que regulam negativamente a proliferao celular. Protenas iniciais: L1 e L2 vo constituir o capsdeo viral. 9- Quais so as caractersticas da patognese do vrus HPV? O vrus HPV mantm-se dentro do hospedeiros durante longo perodos, causando infeces persistentes, s que a maioria dos efeitos no costumam ser graves (isso depende do tipo do HIV) porque a infeco mantm-se localizada e pode regredir espontaneamente e os tecidos infectados esto continuamente sendo regenerados, porm podem ocorrer reinfeces. O perodo de incubao, ou seja o intervalo entre a entrada do vrus no organismo at o aparecimento dos sinais clnicos de 6 2 anos. Indivduos imunossuprimidos apresentam recorrncias e a forma mais grave da doena. 10 Quais so os exames laboratoriais que podem ser feitos para o diagnstico do HPV? Papalicolal Presena de clulas epiteliais escamosas vacuoladas (coilocitticas). Alteraes Citolgicas: Coilocitose: A clula apresenta o seu citoplasma vacuolizado, com o ncleo localizado na periferia. Discariose: Os ncleos esto mais hipercrmicos (colorao exagerada) e alterados em sua forma (divididos em 2, disformes, etc). Disceratose: A queratinizao est alterada (hiperceratose ou paraceratose). PCR Os mtodos baseados em PCR so comumente empregados para a deteco de DNA de HPV. Esta reao utiliza uma DNA polimerase, enzima responsvel pela replicao do DNA, alm de uma molcula de DNA simples fita como molde para a sntese de uma nova fita complementar, e de pequenos segmentos de DNA tambm simples fita conhecidos como iniciadores. A replicao do DNA in vitro inicia-se com a desnaturao do DNA molde, ou seja, a separao da dupla fita, o que pode ser obtido por aquecimento. Segue-se o pareamento dos iniciadores com o DNA molde, para que a partir destes pequenos segmentos de DNA dupla fita recm-formados se processe a formao da nova molcula de DNA. Assim, na reao de PCR direciona-se a DNA polimerase para que ela sintetize uma regio especfica do DNA molde de interesse. A reao repetida de forma cclica, geralmente de 25 a 40 vezes. O produto final consiste, ento, de cpias fiis da regio especfica do DNA molde que foi flanqueada pelos iniciadores. O DNA a ser estudado pode ser coletado por escova endocervical, lavado vaginal, fragmento de bipsia fresco ou blocado em parafina. A tcnica de PCR fornece medidas precisas de exposio ao HPV e permitiu que os estudos epidemiolgicos mais recentes comprovassem que a infeco por este vrus um determinante intermedirio e fundamental da seqncia de eventos que leva ao carcinoma do colo uterino. Os mtodos baseados em PCR tm a maior sensibilidade de deteco dos genomas virais e acoplados a um ensaio de hibridizao permitem a deteco de todos os tipos de HPV, em torno de 30 no caso de espcimes provenientes da mucosa genital. Ainda mais, A PCR requer quantidades muito pequenas de DNA da amostra biolgica podendo se utilizadas preparaes relativamente impuras. Por ser um mtodo muito sensvel, necessrio controlar muito bem as condies do ensaio a fim de eliminar os resultados falso-positivos devidos contaminao. O DNA do HPV pode ser amplificado seletivamente por PCR seguida da anlise dos produtos amplificados por diferentes tcnicas incluindo a eletroforese em gel, a hibridizao tipo-especfica, ou ainda pode ser acoplado ao seqenciamento direto do DNA. 11- Qual o mecanismo de replicao viral do HIV? A glicoprotena de superfcie gp120 se liga ao receptor CD4. Por meio dessa ligao a gp120 se liga a um segundo receptor que um receptor de citocinas CCR5, essa ligao induz uma alterao conformacional de gp41, permitindo que ela se desdobre e insira suas terminaes na membrana

celular, isso permiti a aproximao do envelope do vrus com a membrana celular, culminando na fuso e consequente entrada do vrus na clula. No citoplasma da clula ocorre a fase precoce da replicao: A transcriptase reversa utiliza o RNA do vrus para fazer uma fita negativa complementar de DNA , os fragmentos do RNA viral so digeridos. A transcriptase reversa degrada o RNA viral e sintetiza a fita positiva de DNA. O DNA de fita dupla transportado pro ncleo. No ncleo a integrase insere o DNA viral no genoma do hospedeiro. Para que essa integrao ocorra, necessria que a clula esteja ativada. Depois da insero comea a fase tardia da replicao, na qual o DNA viral transcrito ( como acontece com o gene da clula do hospedeiro) pela RNA polimerase II do hospedeiro. 12- Quais so os tipos de HPV que podem causar o cncer de colo de tero e qual o mecanismo responsvel por isso? HPV 16,18,31 e 45. As protenas E6 e E7 induzem a transformao celular. A E5 aumenta a transduo de sinal para os fatores de crescimento e a E6 induz a degradao da protena p53, que uma protena que induz mecanismo de reparo na diviso da clula e impede a proliferao descontrolada desta. Com a inibio da p53 a clula se prolifera constantemente e isso pode causar o cncer de colo de tero. 13- Quais so as manifestaes clnicas do HPV? Verrugas: nos ps e mos, mas geralmente regridem, so comuns na infncia e adolescncia. Tumores benignos de cabea e pescoo: verrugas orais e laringe, costumam ser benignas e dificilmente recorrem aps a remoo cirrgica. Verrugas anogenitais: Ocorrem quase que exclusivamente na genitlia externa e regio perianal Displasia e Neoplasia uterina: A infeco habitualmente assintomtica, mas pode ocasionar prurido leve. 14- Quais so as vacinas disponveis para o HPV e como so administradas? Quadrivalente previne contra os tipos virais HPV - 6 e HPV 11, e contra os condilomas, que so as verrugas venreas, HPV -16 e HPV 18; Bivalente combate especificamente os condilomas (HPV-16 e 18), que so responsveis por mais de 70% dos cnceres de colo do tero. Em trs doses, e quando a pessoa toma j tomou a primeira dose a segunda administrada no segundo ms e a terceira no sexto ms. 15- Quais so as caractersticas estruturais do vrus HIV? um vrus envelopado que tm duas fitas de RNA de fita positiva dentro do capsdeo, associadas s protenas que so utilizadas na replicao: transcriptase reversa, integrase e protease. O envelope do vrus formado por espculas que so constitudas por glicoprotenas. As glicoprotenas mais importantes so a gp120 que uma protena de membrana que tem o stio de ligao dos receptores celulares. 16- O HIV tem tropismo por quais clulas? Clulas do sistema imune: Linfcitos, macrfagos, moncitos e clulas dendrticas. 17- Qual o mecanismo pelo qual o HIV entra na clula hospedeira? A glicoprotena gp120 do envelope do vrus se liga ao receptor CD4 na clula hospedeira, depois se liga um receptor de citocinas CCR5, isso induz uma alterao conformacional na glicoprotena gp41 fazendo com que ela insira suas terminaes na membrana da clula hospedeira e isso aproxima o vrus da clula, ocorrendo a fuso. 18- Cite o mecanismo de replicao viral do HIV: A primeira etapa da replicao, chamada de fase precoce, ocorre no citoplasma, onde a transcriptase

reversa sintetiza uma fita de DNA negativa a partir do RNA viral. A transcriptase reversa degrada o RNA viral e sintetiza a fita positiva de DNA, formando um DNA de fita dupla. Esse DNA transportado para o ncleo e l ocorre a integrao com o genoma do hospedeiro atravs da enzima integrase. Na fase tardia da replicao o DNA de fita dupla transcrito pela RNA polimerase II do hospedeiro e assim o vrus pode sintetizar suas protenas virais. 19- Cite como ocorre a montagem do vrus HIV: A poliprotena gp160 sintetizada no reticulo endoplasmtico e transportada para o complexo de golgi onde clivada produzindo as protenas virais gp120 e gp41. Depois disso, essas protenas so transportadas para a membrana plasmtica. As poliprotenas estruturais so sintetizadas nos ribossomos livres e so reunidas no citoplasma junto com o RNA viral e logo tudo transportado para a membrana plasmtica. 20- Como ocorre a liberao do vrus HIV da clula hospedeira? O vrus liberado por um processo de brotamento onde ocorre fuso com a membrana plasmtica da clula e posterior liberao do vrus, com a insero das prprias protenas virais que esto na membrana plasmtica e protenas da prpria membrana tambm. 21- Como ocorre a maturao do vrus HIV? A maturao do vrus HIV ocorre no espao extracelular. A enzima protease realiza a clivagem dos precursores das protenas estruturais, de modo que o vrus toma a sua forma caracterstica apresentando nucleocapsdio em forma de cone. 22- Quais so os genes auxiliadores do HIV e qual a funo de cada um deles? Rev: regulao do processamento do RNA e transporte para o citoplasma. Nef: alteraes de sinais de ativao celular, progresso para a AIDS. Vif: bloqueio de protenas antivirais, montagem do vrus e infectividade. Vpu: montagem e liberao do vrus. Vpr: transporte do cDNA para o ncleo. 23- Qual a caracterstica da patognese do HIV? Primeiro ocorre uma infeco primria que caracterizada por eleva quantidade do vrus no sangue e resposta imunolgica intensa. Na infeco aguda medida que o nmero de linfcitos vai diminuindo, a carga viral vai aumentando. A latncia clnica assintomtica e est relacionada com uma imunodeficincia progressiva. O trmino dessa fase o aparecimento dos sintomas, a pessoa est com o sistema imune to debilitado que comea a adquirir doenas oportunistas que podem levar morte. 24- Quais so as caractersticas da neuropatologia do HIV? Infiltrao nos macrfagos, formao de ndulos de micrglias, formao de sinscios (fuso de micrglias e/ou macrfagos) e ativao e danos dos astrcitos e perda neuronal. 25- Em que situaes pode ser realizado o diagnstico do HIV? Para identificar portadores que possam transmitir o vrus, para identificar indivduos infectados para iniciar a terapia e para acompanhar o curso da doena. 26- Como faz para identificar a infeco recente do HIV? Pelo antgeno p24, enzima transcriptase reversa e RNA viral no sague. 27- Quais so as caractersticas estruturais do HSV? Vrus grandes, envelopados de DNA de fita dupla com uma estrutura proteica localizada entre o capsdeo e o envelope denominada tegumento que contm protenas que regulam o ciclo replicativo

viral. 28- Quais so os genes transcritos pelo HSV? Genes precoces imediatos: protenas envolvidas na replicao e transcrio viral e tambm protenas que degradam mRNA e DNA da clula hospedeira. Durante as infeces latentes os nicos genes transcritos so os genes associados a latncia (LATs). Os genes tardios esto associados a montagem da nova partcula viral, as protenas tardias so sintetizadas no citoplasma e transportadas para o ncleo onde formam procapsdeos que so preenchidos com DNA viral. 20- Qual mecanismo o HSV utiliza para entrar na clula hospedeira? As glicoprotenas B e C virais se ligam glicosaminoglicanas presentes na superfcie da clula ( HS- sultato de hepanara). Essa interao fraca at que a glicoprotena D se liga outros receptores celulares. Em seguida, ocorre uma alterao conformacional da glicoprotena D que permite a interao com o heterodmero gH/gL. Essa interao expe os domnios de fuso de gB e do heterodmero, ento ocorre a fuso e em seguida penetrao do vrus na clula. 21- Cite o mecanismo de replicao viral do HSV: Depois que o vrus entra na clula, o nucleocapsdio transportado at o poro nuclear, onde o DNA viral liberado no ncleo. A protena TIF do tegumento funciona como ativadora da transcrio dos genes iniciais imediatos atravs dos fatores de transcrio celulares. A expresso das protenas iniciais significativamente reduzida ou parada logo aps o incio da replicao, enquanto os genes tardios comeam a ser expressos em altos nveis. Algumas protenas so necessrias para o stio replicativo, onde a replicao tem origem. A helicase/primase recrutada promovendo o desenrolamento do DNA e sntese do iniciador (primer) para a sntese do DNA. O complexo da polimerase inicia a sntese do DNA. O DNA viral transcrito em mRNA pela RNA polimerase II do hospedeiro. 22- Como o HSV causa a infeco latente e qual as caractersticas desta? Geralmente causam doenas no stio da infeco e ento estabelecem uma infeco latente em neurnios que inervam a regio. Os vrus penetram pelas terminaes nervosas e so transportados para o corpo celular do neurnio atravs do axnio em sentindo retrgrado ao estmulo nervoso. O vrus migra pro ncleo do neornio e circularizado pelas enzimas de reparo do DNA, o que leva infeco latente. A ao de VHS no ocorre e a clula continua suas funes. O DNA fica na forma de um epissoma no integrado ao DNA celular que se associa a histonas modificadas que regulam a expresso dos transcritos associados a latncia (LATs), que so RNAs produzidos por splicing. Quando sinais de reativao so recebidos, os vrus retornam ao stio inicial da infeco, causando recorrncia da doena. Caractersticas: Somente uma parte dos neurnios infectada, alguns neurnios sofrem infeco produtiva e so destrudos, os neurnios que apresentam o vrus em estado de latncia abrigam vrias cpias do genoma viral, os genes lticos so desligados mas ocorre a sntese de LATs, nem todos os neurnios expressam LATs e a reativao ocorre em poucos neurnios que contm o genoma viral. 23- Quais os sinais que podem culminar na reativao da infeco latente? Injria ao tecido enervado por neurnios infectados pelo vrus, estresse fsico ou emocional, febre, exposio luz ultravioleta, menstruao, desequilbrio hormonal, etc. Para que a reativao viral tenha sucesso, necessrio que a clula latentemente infectada permita alguma replicao produtiva do vrus e o hospedeiro apresente algum grau de imunodepresso.

24- Quais as caractersticas da infeco ltica do HSV, que ocorre em fibroblastos e clulas epiteliais? Na infeco ltica todo o ciclo de biossntese do vrus realizado e o DNA permanece linear, atravs da ao da protena imediada inicial, que inibe o mecanismo de reparo do DNA celular. 25- Quais so as caractersticas da patognese do HSV? Na fase aguda os vrus replicam em elevados nveis no stio da infeco. A infeco regride e os vrus so eliminados. Os vrus se deslocam dos axnios para o gnglio sensorial do stio da infeco, havendo um perodo de infeco aguda do gnglio, mas que regride. As replicaes virais assintomtica levam transmisso do vrus em perodos de latncia. A disseminao do vrus pode ocorrer atravs de pontes celulares e a transmisso pelo lquido das leses. 26- Quais so os mecanismo de evaso do sistema imune pelo HSV? Bloqueio da ao do INF-gama, bloqueio da associao de molculas virais ao MHC I, impedindo o reconhecimento das clulas infectadas pelos linfcitos TCD8, evaso de anticorpos neutralizantes atravs da disseminao clula-clula, infeco latente em neurnios e inibio da capacidade das clulas B de apresentarem antgenos atravs do MHC de classe II a linfcitos TDC4+. 27- Quais so os exames utilizados para o diagnstico de Herpes simplex? Amostras clnicas: fluido vesical, fluido cerebroespinhal, esfregaos do trato genital, garganta, olhos, reto, pele/mucosas, lavados do trato respiratrio, etc. Efeitos citopatolgicos Esfregaos de Tzanck (raspagem da leso), Papanicolau ou bipsia: As clulas apresentam-se vacuoladas e em sinccios; Isolamento em cultura de clulas: mtodo de escolha se o material for coletado precocemente, colocado num meio adequado para transporte, mantido em gelo e transferido rapidamente para o laboratrio Fibroblastos humanos ou clulas VERO so permissivas infeco pelo HSV - Efeito citoptico aparece em 2 a 7 dias caracterstico em cachos de uva PCR : Rapidez crucial em situaes onde o paciente necessita se beneficiar logo do tratamento Imunofluorescncia: resultado em 24h diferenciao entre HSV1 e 2. 28- Tratamento e preveno de herpes: Drogas que inibem a ao da DNA polimerase viral, impedindo a replicao do vrus Aciclovir; O medicamento no capaz de eliminar a infeco latente; Uso de preservativos sexuais, embora estes no protejam completamente; Evitar o contato direto com as leses e os produtos secretrios destas, que podem ser deixados em copos e talheres usados por pessoas infectadas; O parto cesreo pode evitar a contaminao do feto, caso a me esteja infectada pelo vrus.