Faculdade de Medicina da Universidade do Porto Aula desgravada de Imunologia n 12 2 de Novembro de 2006

Antignios antigenicidade e imunogenicidade

Aula leccionada pela Prof. Doutora Cristina Guimares

Vamos falar sobre antignios. antignios At aqui j ouvimos falar da maturao dos linfcitos B e T e do receptor para o antignio da superfcie dos linfcitos B e T (a imunoglobulina de membrana como um receptor para o antignio dos linfcitos B e o TCR como um receptor para o antignio na superfcie dos linfcitos T). no Timo que ocorre a maturao dos linfcitos B e T e uma das propriedades da clula madura a tolerncia para os antignios do prprio (protena do prprio, com constituintes celulares do prprio e que os linfcitos B e T aprendem a tolerar, a reconhecer como self). O antignio que vamos falar hoje o antignio que vai ser alvo da resposta imunolgica que vamos ter que eliminar no decorrer de uma resposta imunolgica para que o estado de sade de homeostasia do indivduo regresse. Antignio Antignio A primeira caracterstica que a substncia tem que ter no fazer parte do prprio (porque para isso ns temos tolerncia) e, portanto, ser estranho ao organismo, sendo reconhecido como tal. Assim, o antignio uma substncia que reconhecida como no prpria, por uma imunoglobulina, anticorpo ou TCR, e que vai desencadear uma resposta imunolgica (uma resposta imune inata e posteriormente uma resposta adaptativa, do tipo celular ou do tipo humoral). Desta capacidade que a substncia estranha tem de desencadear esta resposta imune, decorre uma outra propriedade que a de ser um imunognio. imunognio Imunognio uma substncia capaz de desencadear uma resposta imune (especfica) de tipo humoral ou celular e tem tambm a capacidade de desencadear memria imunolgica. Um imunognio um antignio. Mas por sua vez a antigenicidade no significa inerentemente a outra propriedade (imunogenicidade). Existem substncias que so reconhecidas como um antignio mas que no so capazes de desencadear memria imunolgica e, portanto, no so imunognios (ex.: Hapteno ver slide 1 da pg. 3 que uma substncia que por si s no desencadeia resposta imune e que, portanto, precisa de se ligar a uma protena transportadora chamada carrier, passando ento a ter capacidade de desencadear uma resposta imunolgica. Outro exemplo o caso de Antignios antigenicidade e imunogenicidade 1

determinados antignios designados timotimo-independentes que no so capazes de desencadear memria imunolgica e portanto estes tambm no so imunognios). A substncia tem que ser um antignio e com capacidade de desencadear memria imunolgica para que haja imunogenicidade. imunogenicidade No conceito em si de anticorpo, podemos considerar substncias com diferente capacidade de antigenicidade sendo que esta est relacionada com a complexidade qumica da substncia (ex.: um bom imunognio uma protena e um mau imunognio um acar. Uma protena, com a sua estrutura complexa terciria ou quaternria uma substncia qumica com uma complexidade estrutural que a leva a ser uma substncia com uma antigenicidade reconhecida e que vai desencadear por parte do sistema imunolgico uma resposta). Quando pensamos num antignio, pensamos na capacidade que ele tem de ser reconhecido, ou pela imunoglobulina ou pelo TCR. Considerando a globalidade de uma protena, nem todas as sequncias de aminocidos, nem todos os eptopos da protena vo ser alvo da resposta imune portanto, da produo de anticorpos. Nessa mesma protena, h determinadas sequncias de aminocidos que vo desencadear a produo de 1, 10, 20, n anticorpos de acordo com os eptopos que essa protena tiver. O anticorpo produzido para essa sequncia de aminocidos um anticorpo especfico para esse segmento. Eptopo Assim, na protena vamos poder definir locais de ligao imunoglobulina que se chamam eptopos ou determinantes antignicos. antignicos Se fizssemos a experincia com uma mesma protena e uma populao de animais da mesma espcie, veramos que h determinados eptopos que so sempre alvo da produo de anticorpos. Nessas protenas, esses eptopos (sequncias de aminocidos), de acordo com os genes ou a capacidade gentica de determinados indivduos, so imunodominantes. imunodominantes Se fizssemos um estudo da nossa capacidade de produo de imunoglobulinas para uma determinada protena, provavelmente haveria eptopos especficos para determinado local da protena que estariam presentes em todos ns. Esses eptopos so eptopos imunodominantes. evidente que, de indivduo para indivduo, a capacidade de produzir imunoglobulinas perante determinado eptopo antignico vai mudar. Geneticamente, produzimos anticorpos para determinados eptopos da protena e a nossa variabilidade gentica tambm nos concede a capacidade, ou no, de produo de anticorpos para determinados eptopos antignicos. Ento, vamos ter uma molcula que reconhecida por uma imunoglobulina ou por TCR, com capacidade de desencadear memria imunolgica, que lhe confere a propriedade de imunogenicidade. Como vimos anteriormente, um exemplo de uma substncia que no tem essa imunogenicidade o Hapteno. Hapteno Quimicamente, uma substncia pequena, com baixo peso molecular e bem definida. Isoladamente no imunognica logo, precisa de se ligar a uma protena transportadora (carrier). O conjunto formado j tem capacidade de se ligar a um anticorpo ou ao TCR. Ento,

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curiosamente, vai ocorrer produo de uma resposta para o hapteno, para a protena transportadora e para o conjunto. isso mesmo que nos ilustra esta imagem. Temos o hapteno e a protena transportadora. Se averiguarmos a capacidade de produo de anticorpos, vemos anticorpos especficos para o hapteno, para a protena transportadora e para o conjugado.

Sob o ponto de vista de nomenclatura, na protena definimos eptopos ou determinantes antignicos e por sua vez, no anticorpo, o local de combinao com o eptopo vai designar-se por partopo ver slide 2 da pg. 4 . O partopo o local da imunoglobulina, localizado na sua poro hipervarivel, que tem a capacidade nica de ligao ao peptdeo antignico, com especificidade de ligao. Entre o eptopo e a regio Fab da imunoglobulina vo-se desencadear foras de ligao no covalentes que permitem a ligao entre os dois. Cada imunoglobulina tambm considerada, pelo menos, bivalente. As foras de ligao entre o partopo e o eptopo so o somatrio das foras atractivas e das foras repulsivas que esto presentes em determinada situao na ligao da imunoglobulina com o eptopo antignico. Podemos definir uma constante de dissociao dessa ligao com o conceito de afinidade e avidez. Eptopo conformacional O antignio penetra no nosso organismo e processado e apresentado ao sistema imunolgico. A protena pode ser processada mas tem que manter a sua estrutura nativa conservada para poder ser alvo de ligao com a imunoglobulina. Portanto, o eptopo antignico que se liga imunoglobulina dito conformacional (tem que manter a estrutura nativa da protena para que a imunoglobulina tenha capacidade de se ligar a este eptopo antignico). Eptopo sequencial Por sua vez, o eptopo antignico que se vai ligar ao TCR pressupe que a protena seja processada e degradada e que uma sequncia de aminocidos seja apresentada, com o MHC de classe I ou de classe II, ao TCR. A clula T est restrita ao MHC e precisa da apresentao do eptopo antignico no contexto do MHC. Ento, este eptopo que se liga ao TCR chama-se eptopo sequencial. sequencial Assim, aquilo para que responde o linfcito B no o mesmo para que responde o linfcito T. Da mesma protena, a sequncia de aminocidos que constituem o eptopo a que se liga a imunoglobulina diferente daquela a que se liga o TCR. Um um eptopo conformacional e outro um eptopo sequencial (mais ou menos de 7, 9, 10 aminocidos que so apresentados no contexto do MHC), respectivamente.

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Se ns fizssemos a imunizao de um indivduo ou de um animal de experincia com uma determinada protena, e depois fossemos averiguar a especificidade de ligao das imunoglobulinas produzidas perante essa mesma protena, veramos que a nossa resposta habitualmente policlonal. policlonal Ou seja, ns vamos ter um determinado nmero de clones de linfcitos B a produzir imunoglobulinas todas diferentes entre si, cada uma delas com especificidade de ligao para um determinado eptopo antignico daquela protena. ver slide 2 da pg. 5 As nossas protenas tm uma estrutura considerada terciria ou quaternria; vamos ter uma sequncia de aminocidos que se vo dobrar (digamos assim) sucessivamente, estabelecer ligaes entre si at manter ( custa de hlices e ) uma estrutura quaternria. E vamos ento ter a nossa protena, com os respectivos eptopos, que vai ser alvo da resposta imune. Em princpio, qualquer local da estrutura quaternria da protena pode ser alvo de ligao por um anticorpo; ou seja, pode ser um eptopo antignico para o linfcito B. Se passarmos de uma estrutura quaternria para uma estrutura terciria certas sequncias podem passar a ser um eptopo porque passam a estar disponveis ligao imunoglobulina ou a um anticorpo. Por sua vez, ns precisamos de ter um processamento do antignio at uma estrutura primria, para termos sequncias de aminocidos que so capazes de se ligar ao MHC e fazer a sua apresentao ao TCR do linfcito. O processamento do antignio necessrio para desencadear desencadear uma resposta imune. imune Na imunoglobulina ns consideramos o partopo, com capacidade de ligao ao eptopo. A ligao seria um conjunto das foras interactivas no covalentes entre a imunoglobulina e o antignio. Definimos sempre uma constante de dissociao. Se vssemos de topo, veramos ento a cadeia leve, a cadeia pesada (aleatoriamente qualquer uma delas), com as suas pores hipervariveis e a capacidade de ligao ao eptopo. Portanto, mantendo sempre a estrutura nativa do antignio.

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Os eptopos conformacionais dependem sempre da manuteno da estrutura terciria. Se fizermos a degradao de uma determinada protena para proceder terciria imunizao de um determinado animal e se mantivermos a estrutura terciria, conseguimos estabelecer a produo de anticorpos policlonais para aquela estrutura; se a molcula eventualmente estiver mais degradada ns s vamos conseguir estabelecer a presena de linfcitos T (vamos obter na mesma uma resposta, mas custa de linfcitos T). Portanto o processamento subsequente da protena s vai conseguir levar presena de uma imunidade de tipo celular. celular Nunca conseguiremos identificar num animal de experincia uma imunidade do tipo humoral. Um determinado antignio tem eptopos. A vantagem do antignio considerado em nmero dois (Ag2) ter eptopos semelhantes pode em determinadas situaes ser benfico ou prejudicial para o organismo. Se pensarmos que dois microrganismos diferentes partilham um eptopo comum e que em alturas subsequentes nos infectam, no momento em que este segundo microrganismo nos infectar j temos memria imunolgica para este eptopo antignico e vamos rapidamente produzir uma resposta secundria. Portanto rapidamente vamos proceder eliminao do microrganismo. Isso para ns benigno! Mas se por acaso um terceiro antignio (Ag3) entrar no nosso organismo (por exemplo um antignio alimentar) e produzirmos este tipo de anticorpo, que tem uma capacidade de ligao porque o eptopo semelhante, vamos desencadear fenmenos de alergia alimentar para um determinado alimento que tnhamos ingerido at a sem nos causar qualquer tipo de problema e que em determinada altura passou a causar. Pode-se falar de um alimento, de um antignio inalado ou um antignio qualquer que em determinada altura nos possa causar uma resposta para o qual ns produzimos sinais, sintomas e doena. Esta substncia passa a causar problemas, provavelmente porque o eptopo levou a uma reaco cruzada por semelhana, semelhana ou uma reaco cruzada por identidade de ligao. ligao A imunoglobulina tem capacidade de ligao a um eptopo conformacional; o TCR tem capacidade de ligao a um eptopo sequencial; e perante uma imunizao a uma determinada protena ns podemos produzir uma resposta de tipo humoral ou uma resposta de tipo celular. O TCR tem uma homologia com a organizao estrutural das imunoglobulinas: definimos 2 cadeias, uma e uma , e nesta cadeia definimos uma poro constante e uma poro varivel, sendo a poro varivel a que se liga ao eptopo antignico apresentado no contexto do MHC. Se pelo lado do TCR h uma especificidade de ligao, pelo lado do MHC no h essa especificidade de ligao. Podemos ter a mesma molcula de MHC a apresentar eptopos sequenciais diferentes. A especificidade de ligao dada pelo Antignios antigenicidade e imunogenicidade 5

TCR, e no pela apresentao pelo MHC. A ligao do MHC a um eptopo sequencial no uma ligao constante a (digamos assim) especificidade, como acontece com a ligao entre a imunoglobulina e o seu eptopo, ou o TCR e o seu eptopo.

Processamento antignico: Processamento de antignios endgenos e exgenos

(ver esquemas dos slides pg. 10)

Os antignios endgenos so processados no citoplasma e sero posteriormente apresentados na superfcie da clula, no contexto do MHC de classe I. Os eptopos exgenos sero endocitados, processados e posteriormente apresentados no contexto do MHC de classe II. A activao dos linfcitos T CD-8 ou CD-4 restrita a um MHC de classe I ou MHC de classe II, respectivamente. Ento o processamento antignico pressupe (se ns quisssemos fazer uma estimulao de um animal de experincia e depois averiguar essa resposta imune) que ns saibamos as propriedades das clulas apresentadoras de antignios, antignios sendo que a clula apresentadora do antignio fundamental para a nossa resposta imune ser a clula folicular dendrtica, dendrtica que passar de clula imatura para uma clula madura quando faz o seu caminho at o rgo linfide secundrio para proceder apresentao antignica. Nessa fase inicial uma clula caracteristicamente fagoctica; posteriormente (no rgo linfide secundrio) deixa de o ser, e faz a apresentao antignica no centro germinativo aos linfcitos T e B presentes no local, levando portanto ao desenvolvimento de uma resposta imune de tipo celular ou do tipo humoral. A apresentao antignica convencional faz-se no contexto do MHC classe I e classe II. Embora no seja uma definio exacta, antignios endgenos so apresentados no contexto do MHC classe I (h excepes), antignios exgenos so apresentados no contexto do MHC classe II (h excepes). Isto a apresentao antignica convencional, no entanto podemos ter uma apresentao antignica dita nono-convencional com molculas chamadas CDCD-1, com uma homologia constituio do MHC classe I. A cadeia constituda por molculas CD-1, e a cadeia na mesma pela 2 microglobulina e fazem essencialmente apresentao dos antignios de tipo dos lpidos.
ver slides da pg. 12

O MHC de classe II tambm vai apresentar o peptdeo antignico no local de ligao e vai faz-lo s clulas T CD-4. A capacidade de apresentao do peptdeo antignico entre o MHC de classe I e o MHC de classe II, permite a apresentao de eptopos I ligeiramente maiores outros ligeiramente mais pequenos, porque as fendas de ligao so diferentes. A fenda de ligao do MHC I fechada nas pontas, permite uma ligao do eptopo antignico diferente a estes locais de ligao. O local de ligao do MHC II aberto, tem este (digamos) fechar das pontas, o que alguns autores dizem ser semelhante a um cachorro com a sua face. (estamos abertos a sugestes sobre o significado desta frase...) Portanto estes eptopos so apresentados no contexto do MHC, fazem a apresentao antignica ao TCR, e isto ser o primeiro sinal de activao de um Antignios antigenicidade e imunogenicidade 6

linfcito T CD-8 e o sinal co-estimulatrio ser dado pela ligao da molcula CD-8 ao MHC, s suas pores invariveis. Falmos de antignios timo-dependentes, antignios timo-independentes, falamos do processamento de antignios endgenos e exgenos, falta falar do contexto do superantignio. ver slides da pg. 14 O superantignio um antignio que no sofre processamento, que vimos que se d para os antignios exgenos e endgenos. Pode ser apresentado ao linfcito T (no no contexto da fenda de ligao do MHC, porque ele no processado), e ligase poro varivel da cadeia do TCR, mas para fazer essa ligao preciso que uma determinada sequncia de aminocidos esteja nesta cadeia . Portanto significa que ns temos que ter geneticamente aquela poro varivel da cadeia do TCR disponvel para podermos fazer ligao do superantignio. Ento a ligao feita fora da fenda de ligao, o que significa que no h especificidade do TCR para o superantignio, portanto todos os linfcitos T que contenham na poro varivel da cadeia uma determinada sequncia de aminocidos podem ser estimulados por aquele antignio. Vai ser uma estimulao policlonal dos linfcitos T no especficos para o antignio ou seja, um determinado conjunto de linfcitos T vai ser estimulado e vai responder dando uma resposta imunolgica exacerbada/aumentada para um determinado antignio. Ento um determinado peptdeo antignico (superantignio) apresentado fora da fenda de ligao e preciso que a cadeia do TCR proponha um conjunto de aminocidos capazes de ligao ao superantignio. O exemplo do superantignio caracterstico o antignio que est presente em determinadas intoxicaes alimentares com sinais e sintomas habitualmente muito rpidos aps a entrada em contacto com este mesmo superantignio. E pronto era s isto que eu tinha para vos dizer
Est aqui mais uma aulita desgravada (apesar do tpico atraso). No se esqueam de lavar os dentes antes de ir pr cama porque depois de tanta matria colada a cuspo as glndulas salivares ressentem-se e diz que o pH acidifica o que provoca cries e isso d mau hlito Pois (fardo de palha) Bom NATAL!! (j que no temos frias de jeito, pelo menos que descansem nesse dia) e um Prspero Ano Novo (nesses 10 segundos os 5 antes da meia-noite, e os 5 segundos aps mas NADA de lcool meus amigos, que isso diz que d esteatose... ou cirrose... biopat o dir Mas pronto, festejem pelo menos esses escassos momentos na passagem de ano antes de voltarem a mergulhar em Frmaco). J agora... Queramos agradecer a ns. Aos que gostam de ns e aos cromos do costume! E tambm a todos aqueles que desgravam estas preciosas aulas a pensar no curso! Se encontrarem algum erro j sabem, contactem-nos em qualquer uma das esquinas da FMUP (mas no prometemos que v adiantar alguma coisa) Patrcia Fernandes

Nuno Couto Turma 16 Antignios antigenicidade e imunogenicidade 7