UNIVERSIDADE TCNICA DE LISBOA

Faculdade de Medicina Veterinria

PARASITOSES GASTROINTESTINAIS EM OVINOS EM REGIME EXTENSIVO E INTENSIVO EM EXPLORAES DO RIBATEJO PORTUGAL

PEDRO FILIPE BRANCO ANASTCIO

CONSTITUIO DO JRI Doutor Jos Augusto Farraia e Silva Meireles Doutor Lus Manuel Madeira de Carvalho Doutora Ilda Maria Neto Gomes Rosa Dr. Lus Alberto dos Santos Fragoso da Silva

ORIENTADOR Dr. Lus Alberto dos Santos Fragoso da Silva

CO-ORIENTADOR Doutor Lus Manuel Madeira de Carvalho

2011

LISBOA

UNIVERSIDADE TCNICA DE LISBOA

Faculdade de Medicina Veterinria

PARASITOSES GASTROINTESTINAIS EM OVINOS EM REGIME EXTENSIVO E INTENSIVO EM EXPLORAES DO RIBATEJO PORTUGAL

PEDRO FILIPE BRANCO ANASTCIO Dissertao de Mestrado Integrado em Medicina Veterinria

CONSTITUIO DO JRI Doutor Jos Augusto Farraia e Silva Meireles Doutor Lus Manuel Madeira de Carvalho Doutora Ilda Maria Neto Gomes Rosa Dr. Lus Alberto dos Santos Fragoso da Silva

ORIENTADOR Dr. Lus Alberto dos Santos Fragoso da Silva

CO-ORIENTADOR Doutor Lus Manuel Madeira de Carvalho

2011

LISBOA

 Famlia e Amigos

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Agradecimentos

Aos Professores da Escola Secundria e Faculdade, pelos ensinamentos transmitidos, em especial ao Professor Lus Madeira de Carvalho, pela sua amizade, pacincia e orientao e Professora Lusa Mateus, pela sua amabilidade, simpatia e disponibilidade para ajudar,

Ao Dr. Lus Fragoso e Paulo Pedrosa, pela amizade, empatia e conhecimentos transmitidos,

minha Dau, Isabel, Mano, Pedro, colegas e amigos, em especial ao Ricardo,

Aos meus Pais e Avs,

Um sentido Obrigado, por tudo o que fizeram e fazem por mim.

iii

iv

Parasitoses Gastrointestinais em ovinos em regime extensivo e intensivo em exploraes do Ribatejo Portugal

Resumo As parasitoses e doenas parasitrias dos ovinos so responsveis por enormes perdas de produo, devidas ao grande impacto, tanto no bem-estar como na sade animal, causando uma importante diminuio no balano econmico. Na clnica de espcies pecurias merecem especial ateno as parasitoses por nemtodes, em especial por Estrongilideos Gastrointestinais (EGI) e por coccdias do gnero Eimeria spp. essencial o estabelecimento de planos de profilaxia, para manter aceitveis os nveis de infeco, sendo para tal necessrio o conhecimento detalhado das espcies parasitrias envolvidas e respectiva carga e a sua prevalncia. Os objectivos deste estudo foram determinar e comparar a frequncia das espcies parasitrias existentes em trs exploraes de ovinos em regime extensivo e intensivo, assim como os nveis de eliminao nas mesmas exploraes. Na explorao em regime intensivo, ou seja, de engorda, pretendeu-se tambm averiguar a eficcia do diclazurilo em tratamentos profilticos contra infeces naturais de Eimeria spp., assim como a rentabilidade econmica da administrao de desparasitante, com o intuito de concluir se esta medida profilctica/teraputica se traduziria ou no num maior valor de lucro final. Nos ovinos adultos os gneros de nemtodes de EGI mais frequentes foram Trichostrongylus, Teladorsagia e Strongyloides e as espcies de Eimeria spp. mais frequentes foram Eimeria bakuensis, E. ahsata, E. ovinoidalis e E. parva. Os nveis de eliminao mais graves foram observados em animais em perodo gestacional e puerperal. Nos ovinos jovens, o gnero de EGI mais frequentes foi Strongyloides e as espcies de Eimeria spp. identificadas com mais frequncia foram Eimeria bakuensis, E. ovinoidalis, E. crandallis/weybridgensis e E. parva. Em borregos em extensivo registaram-se maiores valores de eliminao de EGI e menores de oocistos de Eimeria spp. relativamente a borregos em regime intensivo. A administrao de desparasitante (diclazurilo e netobimim) provocou uma diminuio considervel nos nveis de infeco, tanto de EGI como de oocistos de Eimeria spp.. Inversamente, a no administrao de desparasitante permitiu um aumento das mesmas. Ainda assim, o diclazurilo mostrou ineficcia e o netobimim eficcia duvidosa, atravs do TRCOF. O grupo ao qual foi administrado desparasitante teve uma maior taxa de crescimento relativamente ao outro grupo, com um maior peso vivo e valor lquido final por animal, estando associado a este procedimento um valor de lucro per capita de 5,23 .

Palavras-chave: Parasitoses, Nveis de infeco, Estrongildeos Gastrointestinais, Eimeria spp., Ovinos, Ribatejo. v

vi

Ovine Gastrointestinal parasitic infections in extensive and intensive sheep farms in Ribatejo Portugal

Abstract Sheep parasites and parasitological diseases are responsible for huge production losses, due to their big impact in animal welfare and health, causing an important decrease on the economical balance. In large animal practice, nematode parasites are important, especially Gastrointestinal Strongyles (GIS), and coccidia of genus Eimeria. The establishment of prophylaxis plans is essential to keep acceptable infection levels, being necessary a detailed knowledge about parasitological species involved, as well as their burden and prevalence. The aims of this study were to calculate and compare the frequency of parasitological species present in three different sheep farms in extensive and intensive regimens, as well as the egg shedding levels at the same farms. On the intensive regime holding, i.e., of animal fattening, it was assessed the diclazuril efficacy on prophylaxis treatments against Eimeria spp. natural infections, as well as the economical profitability of anticoccidial drugs administration, to conclude if this prophylactic/therapeutic measure would give a highest final profit. In adult sheep, the most frequent GIS genera were Trichostrongylus, Teladorsagia and Strongyloides. Eimeria bakuensis, E. ahsata, E. ovinoidalis and E. parva were the most frequent species of genus Eimeria. More serious shedding levels were observed in pregnant and puerperal animals. In lambs, the most frequent genus of GIS was Strongyloides and Eimeria bakuensis, E. ovinoidalis, E. crandallis/weybridgensis and E. parva were the most frequent species of Eimeria spp.. Extensive regime lambs registered higher levels of GIS epg and lower levels of Eimeria spp. oocysts when compared with lambs on the intensive regimen. The administration of diclurazil and netobimim caused a considerable reduction of both GIS and Eimeria spp. oocysts infection levels. Inversely, a non-administration allowed an increase of both. However, diclurazil showed low activity and netobimim a doubtful efficacy, using Fecal Egg Count Reduction Test (FECRT). The diclazuril group showed a higher growth rate when compared with the other group, with a higher live weight and final liquid value per animal, being this procedure associated with a profit of 5,23 per capita.

Keywords: Parasitological diseases, Infection levels, Gastrointestinal strongyles, Eimeria spp., Sheep, Ribatejo.

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viii

ndice Agradecimentos Resumo Abstract ndice ndice de Figuras ndice de Grficos ndice de Tabelas Lista de abreviaturas e siglas I - Introduo II Objectivos III - Descrio das actividades realizadas durante o estgio curricular 1. A.D.S. Baixo Tejo e Luso-Pecus Lda 1.1. A.D.S. do Baixo Tejo 1.2. Luso-Pecus 2. Laboratrio de Parasitologia e Doenas Parasitrias IV - Reviso Bibliogrfica 1. Filo PROTOZOA 1.1. Eimeria spp. 1.1.1. Ciclo de vida 1.1.1.1. Esporulao 1.1.1.2. Infeco e esquizogonia 1.1.1.3. Gametogonia e formao do oocisto 1.1.2. Coccidiose 1.1.3. Tratamento e controlo 1.2. Cryptosporidium sp. 1.2.1. Ciclo evolutivo 1.2.2. Criptosporidiose 1.2.3. Tratamento e controlo 2. Classe NEMATODA 2.1. Famlia STRONGYLOIDIDAE 2.1.1. Gnero Strongyloides 2.2. Famlia TRICHOSTRONGYLIDAE 2.2.1. Gnero Nematodirus 2.2.2. Gnero Teladorsagia 2.2.3. Gnero Haemonchus 2.2.4. Gnero Trichostrongylus 2.2.5. Gnero Cooperia ix iii v vii ix xiii xiv xv xvi 1 3 4 4 4 5 6 7 7 8 9 10 10 10 10 12 13 14 14 15 16 18 18 20 20 21 22 23 24

2.2.6. Tratamento e controlo de teladorsagiose, tricostrongilose, cooperiose e hemoncose. 2.3. Famlia CHABERTIDAE 2.3.1. Gnero Chabertia 2.3.2. Gnero Oesophagostomum 2.4. Famlia TRICHURIDAE 2.4.1. Gnero Trichuris 3. Classe TREMATODA 3.1. Gnero Fasciola 3.2. Gnero Dicrocoelium 4. Classe CESTODA 4.1. Moniezia expansa e Moniezia benedeni V - Contribuio pessoal para o conhecimento das Parasitoses Gastrointestinais em exploraes de ovinos no Ribatejo-Portugal 1. Coccidioses e helmintoses em exploraes ribatejanas de ovinos em regime extensivo e intensivo 1.1. Introduo 1.2. Material e mtodos 1.2.1. Exploraes e animais 1.2.2. Delineamento experimental e amostragem 1.2.3. Processamento das amostras 1.2.4. Anlise de dados 1.3. Resultados 1.4. Discusso de resultados 2. Relao do grau de parasitismo com ganhos mdios dirios de borregos em regime intensivo 2.1. Introduo 2.2. Material e Mtodos 2.2.1. Explorao e animais 2.2.2. Delineamento experimental e amostragem 2.2.3. Processamento das amostras 2.2.4. Anlise de dados 2.3. Resultados 2.4. Discusso de resultados VI - Concluses VII - Perspectivas futuras VII - Bibliografia VIII - Anexos A1. Casustica dos actos sanitrios realizados durante as actividades desenvolvidas no A.D.S. do Baixo Tejo x

24 25 25 25 27 27 28 29 31 33 34 36 36 36 36 36 37 38 39 39 46 52 52 52 52 52 53 53 54 61 64 65 66 73 73

A2. Casustica dos actos clnicos realizados durante as actividades desenvolvidas na Luso-Pecus Lda. A3. Anlise inferencial efectuada atravs do programa R-Project 3.1. Explorao Malhada de Meias (E.M.M.) 3.1.1. Adultos 1Colheita & 2Colheita - oocistos de Eimeria spp. 3.1.2. Adultos 1Colheita & 2Colheita - OPG 3.1.3. Borregos 1Colheita & 2Colheita - oocistos de Eimeria spp. 3.1.4. Borregos 1Colheita & 2Colheita - OPG 3.2. Explorao Porto Alto (E.P.A.) 3.2.1. Comparao entre grupo Estudo (E) & Controlo (C) 3.2.1.1. OPG, E0-C0 3.2.1.2. Oocistos de Eimeria spp., E0-C0 3.2.1.3. OPG, E21-C21 3.2.1.4. Oocistos de Eimeria spp., E21-C21 3.2.1.5. OPG, E42-C42 3.2.1.6. Oocistos de Eimeria spp., E42-C42 3.2.1.7. OPG, E63-C63 3.2.1.8. Oocistos de Eimeria spp., E63-C63 3.2.1.9. Pesos, E0 & C0 3.2.1.10. Pesos, E21 & C21 3.2.1.11. Pesos, E42 & C42 3.2.1.12. Pesos, E63 & C63 3.2.2. Comparao dentro dos grupos 3.2.2.1. Pesos Grupo Controlo dia 0 a 63 3.2.2.2. Pesos Grupo Estudo dia 0 a 63 3.2.2.3. Oocistos de Eimeria spp. - Borregos Grupo Estudo 3.2.2.4. Oocistos de Eimeria spp. - Borregos Grupo Controlo 3.2.2.5. OPG Borregos Grupo Estudo 3.2.2.6. OPG Borregos Grupo Controlo 3.2.3. Comparao 1 colheita entre borregos E.M.M. & E.P.A. 3.2.3.1. OPG, E.M.M. & E.P.A. 3.2.3.2. Oocistos de Eimeria spp., E.M.M. & E.P.A. A4. Mtodos Coprolgicos 4.1. Mtodo de McMaster 4.2. Mtodo de Flutuao com acar (Willis) 4.3. Tcnica de Sedimentao 4.4. Mtodo de Sedimentao Difsica de Ritchie 4.5. Coproculturas de coccidias de Eimeria spp. 4.6. Coproculturas de Estrongilideos Gastrointestinais xi

74 77 77 77 77 77 77 77 77 77 77 78 78 78 78 78 78 78 79 79 79 79 79 79 79 79 80 80 81 81 81 82 82 83 84 85 86 87

4.7. Identificao de Estrongilideos Gastrointestinais

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ndice de Figuras Figura 1 - Espcies de Eimeria spp. em ovinos Figura 2 - Ciclo de vida de Nemtodes Gastrointestinais. Figura 3 - Fotografias de ovos de Estrongilideos gastrointestinais Figura 4 - Ciclo de vida de Strongyloides sp. Figura 5 - Ovos de Trichuris ovis Figura 6 - Ciclo de vida de Tremtodes Figura 7 - Ciclo de vida de Dicrocoelium dendriticum Figura 8 - Ovos de Moniezia expansa e M. benedeni Figura 9 - Localizao geogrfica das exploraes em estudo 11 17 18 19 27 29 32 34 37

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ndice de Grficos Grfico 1 e Grfico 2 - Distribuio ordenada de cargas parasitrias e frequncia relativa (%) das espcies de EGI identificados na E.C.V.F. Grfico 3 e Grfico 4 - Distribuio ordenada de cargas parasitrias e frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. identificadas na E.C.V.F. Grfico 5 e Grfico 6 Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais e oocistos de Eimeria spp. em animais de diferentes faixas etrias, pr e ps colheita, na E.M.M. Grfico 7 e Grfico 8 - Frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. e das espcies de Estrongilideos Gastrointestinais identificadas nos adultos da E.M.M. Grfico 9 e Grfico 10 - Frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. e das espcies de Estrongilideos Gastrointestinais identificadas nos borregos da E.M.M. Grfico 11 e Grfico 12 Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais no grupo de Estudo e Controlo e espcies identificadas na E.P.A. Grfico 13 e Grfico 14 - Nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. no grupo de Estudo e Controlo e espcies identificadas na E.P.A. Grfico 15 e Grfico 16 - Nveis de eliminao de EGI e oocistos de Eimeria spp. de borregos em regime extensivo e intensivo pr-tratamento. Grfico 17 Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais nos diferentes dias de colheita de amostras Grfico 18 Mdias aritmticas dos nveis de eliminao de EGI nos diferentes dias de colheita Grfico 19 Nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. nos diferentes dias de colheita de amostras Grfico 20 - Mdias aritmticas dos nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. nos diferentes dias de colheita Grfico 21 - Evoluo dos pesos dos grupos de Estudo e Controlo Grfico 22 Evoluo dos pesos dos grupos de Estudo e Controlo de acordo com valores mdios

39 40

41 42 43 44 45 46 55 55 57 57 58 59

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ndice de Tabelas Tabela 1 - Caractersticas morfolgicas de Eimeria spp. de ovinos Tabela 2 - Escala para classificao de cargas parasitrias Tabela 3 - Outras espcies de parasitas identificadas na E.C.V.F. Tabela 4 - Algumas espcies de parasitas identificadas na E.M.M. Tabela 5 - Outras espcies de parasitas identificadas na E.P.A. Tabela 6 Escala para a avaliao da eficcia de desparasitantes Tabela 7 - Pesos dos borregos nos dois grupos estudados Tabela 8 - Custos relativos administrao de desparasitante Tabela 9 - ndices produtivos, custos e ganhos econmicos Tabela 10 - Casustica da actividade sanitria realizada em bovinos Tabela 11 - Casustica da actividade sanitria realizada em pequenos ruminantes Tabela 12 - Casustica da actividade clnica realizada em bovinos Tabela 13 - Casustica da actividade clnica realizada em pequenos ruminantes Tabela 14 - Casustica da actividade clnica realizada em equinos Tabela 15 - Chave de identificao de Nemtodes Gastrointestinais e Nemtodes Pulmunares em ovinos e caprinos. 88 9 38 40 41 45 54 59 60 60 73 73 74 75 76

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Lista de abreviaturas e siglas

A.D.S. A1 A2 BaD BPD cm D0 D21 D42 D63 E.C.V.F EGI E.M.M. E.P.A. I.A.C.A. I.D.T. L1 L2 L3 L4 L5 mm OPG p.v. P.V. TRCOF m

Agrupamento de Defesa Sanitria Adultos primeira colheita Adultos segunda colheita Borregos pr-desparasitao Borregos ps-desparasitao Centmetro Colheita dia 0 Colheita dia 21 Colheita dia 42 Colheita dia 63 Explorao extensiva da Leziria de Vila Franca Estrongilideos Gastrointestinais Explorao extensiva de Malhada de Meias Explorao intensiva do Porto Alto Associao Portuguesa Industriais de Alimentos Compostos para Animais Intradermotuberculinizao Larvas no primeiro estadio de desenvolvimento Larvas no segundo estadio de desenvolvimento Larvas no terceiro estadio de desenvolvimento Larvas no quarto estadio de desenvolvimento Larvas no quinto estadio de desenvolvimento Mlimetro Ovos por grama Peso de venda Peso vivo Teste de Reduo de Contagem de Ovos nas Fezes Micrometro bito

xvi

I - Introduo A produo animal moderna tem o objectivo de produzir grandes quantidades de produto com elevado grau de qualidade, em condies que proporcionem o bem-estar animal e que seja economicamente vivel. As parasitoses e doenas parasitrias so, segundo Cordero del Campillo (1999), responsveis por perdas de produo em redor dos 10%, nos pases pertencentes Unio Europeia. Estas devem-se ao grande impacto causado tanto no bem-estar como na sade animal, e causam importante diminuio no balano econmico. Assim sendo, na clnica de espcies pecurias (e tambm de animais de companhia) merecem especial ateno. Na gnese das doenas parasitrias, intervm trs variveis: o hospedeiro, o parasita e o ambiente, estando a ocorrncia de doena clnica portanto dependente do

equilbrio/desequilbrio destes trs factores. De uma forma geral, a maioria dos animais parasitados no manifesta doena clnica, podendo contudo registar ndices produtivos inferiores aos do seu potencial, para alm do risco de desenvolvimento de doena, que acarretar ainda maiores prejuzos. portanto essencial o estabelecimento de planos de profilaxia, para manter as cargas parasitrias dentro de nveis aceitveis. Em exploraes modernizadas, o acompanhamento dos ndices produtivos e a capacidade financeira para a realizao de exames coprolgicos regulares permite conhecer bem o estado sanitrio no que diz respeito a doenas parasitrias e outras, permitindo assim o ajuste destes planos. Para alm das claras vantagens na sanidade animal, estes ajustes previnem o uso indevido de anti-parasitrios de largo espectro, minimizando o aparecimento de resistncias. A sensibilizao para esta problemtica ocorreu numa visita a uma das exploraes assistidas pelo Dr. Lus Fragoso, que se encontrava numa situao precria relativamente ao controlo de parasitoses. Nesta explorao os animais estavam extremamente parasitados, com infeces mistas causadas por parasitas pertencentes Sub-classe COCCDIA, s Classes NEMATODA, TREMATODA e CESTODA. As perdas de produo eram considerveis, com ndices produtivos baixos (baixos ndices reprodutivos, m condio corporal, elevada mortalidade neonatal, entre outros). Assim surgiu a ideia de explorar esta temtica, projecto que culminou na elaborao da presente dissertao. A ideia inicial do estudo previsto era determinar a prevalncia das diversas espcies parasitrias presentes nesta explorao. Posteriormente a ideia foi desenvolvida, e em concordncia com o Dr. Lus Fragoso e com o Professor Lus Madeira de Carvalho, optouse por analisar tambm outra explorao em regime extensivo e ainda uma outra em regime intensivo. Assim o trabalho desenvolvido teve o objectivo de conhecer a frequncia de espcies parasitrias em vrias exploraes com diferentes regimes. Esta diferenciao dos regimes de produo permitir um melhor conhecimento de cada situao, para que as intervenes 1

futuras nas exploraes sejam mais direccionadas, melhorando a produo na regio, o bem-estar animal e diminuindo o risco do aparecimento de resistncias aos anti-parasitrios de largo espectro, ao efectuar uma escolha teraputica mais direccionada e eficaz.

II Objectivos

Os objectivos desta dissertao so:

1. Rever aspectos importantes das parasitoses gastrointestinais em pequenos ruminantes, nomeadamente o seu ciclo biolgico, epidemiologia, aspectos zoonticos, sintomas/patogenia, diagnstico e controlo/tratamento.

2. Determinar e comparar a frequncia das espcies envolvidas nas parasitoses gastrointestinais em exploraes ribatejanas de ovinos, em regime extensivo e intensivo.

3. Determinar os nveis de eliminao de ovos e oocistos nas exploraes estudadas.

4. Relacionar o grau de parasitismo com ganhos de peso em borregos em regime intensivo.

5. Verificar a eficcia do diclazurilo contra infeces naturais por Eimeria spp..

6. Avaliar a vantagem econmica do uso profilctico de desparasitante.

III - Descrio das actividades realizadas durante o estgio curricular O estgio curricular foi realizado em trs instituies, no Agrupamento de Defesa Sanitria (A.D.S.) do Baixo Tejo, na empresa Luso-Pecus Lda (estes localizados na zona do Ribatejo) e no Laboratrio de Parasitologia e de Doenas Parasitrias da Faculdade de Medicina Veterinria, Universidade Tcnica de Lisboa. Sero seguidamente descritas de forma mais pormenorizada as actividades efectuadas em cada um dos locais. 1. A.D.S. Baixo Tejo e Luso-Pecus Lda O estgio nestas duas instituies decorreu durante um perodo de cinco meses, com incio dia 1 de Novembro de 2010 e trmino a 30 de Maro de 2011, com uma carga horria de aproximadamente 50 horas semanais, o que se traduz em cerca de 1100 horas. Durante este perodo, foi acompanhada a actividade do Dr. Lus Fragoso no A.D.S. do Baixo Tejo e na Luso-Pecus Lda, em que desempenha as funes de Coordenador e Executor e onde presta servios na rea de clnica de espcies pecurias e equinos, respectivamente. 1.1. A.D.S. do Baixo Tejo O A.D.S. do Baixo Tejo abrange exploraes sobretudo no concelho de Benavente com as freguesias de Benavente, Samora Correia, Barrosa e Santo Estvo, e tambm no concelho da Chamusca, Vila Franca de Xira, Azambuja, e ainda algumas exploraes no concelho de Torres Vedras. As actividades realizadas e acompanhadas no A.D.S. do Baixo Tejo enquadram-se nos planos estabelecidos para o controlo das principais doenas que afectam a populao bovina, ovina e caprina, atravs de programas de vigilncia, vacinao e de desparasitao e ainda no caso dos bovinos, de testes de pr-movimentao. As opes profilcticas so adaptadas em funo das caractersticas e da raa dos animais e ainda do tipo de explorao. A mesma filosofia sanitria aplicada sempre que se detectam doenas distintas das j definidas no programa base ou se existe o perigo de ecloso de focos de novas doenas que possam afectar o estado geral do efectivo em questo ou do conjunto de efectivos da regio. O plano profiltico anual dos bovinos inclui colheita de sangue para pesquisa de: Brucelose (Plano de Erradicao e Vigilncia da Brucelose Bovina), Leucose Bovina (Plano de Erradicao e Vigilncia da Leucose Enzotica Bovina) e Peripneumonia Bovina (Plano de Erradicao e Vigilncia da Peripneumonia Contagiosa Bovina), a

Intradermotuberculinizao (I.D.T.) do efectivo (Plano de Erradicao e Vigilncia da Tuberculose Bovina) com a respectiva leitura 72 horas depois e ainda a vacinao contra enterotoxmias e desparasitao, que sendo opcionais ficam portanto ao critrio do produtor.

O plano profiltico dos ovinos e caprinos consiste na colheita de sangue para pesquisa de Brucelose (Plano de Erradicao e Vigilncia da Brucelose em pequenos ruminantes) e ainda, no caso dos ovinos, de vacinao contra a lngua azul. Tal como nos bovinos, os produtores de ovinos optam ou no por realizar a profilaxia contra enterotoxmias e parasitoses. Em casos em que o Mdico Veterinrio responsvel, em concordncia com o produtor entendeu ser necessrio, procedeu-se vacinao de alguns efectivos contra os seguintes agentes e/ou afeces: Rinotraqute Infecciosa Bovina (IBR), Diarreia Viral Bovina (BVD), Parainfluenza (PI3), Vrus Respiratrio Sincicial Bovino (BRSV), Leptospirose, Clamidiose, Pasteurelose, Rotavrus, Coronavirus Bovino e Escherichia coli. Os testes de pr-movimentao surgem como uma medida profiltica contra a disseminao de doenas como a Tuberculose e Brucelose bovina e esto integradas nos planos de erradicao nacional. Deste modo, todos os animais com fins reprodutivos e todas as fmeas com mais de 12 meses de idade que sejam movimentadas de uma explorao para outra tm de ser sujeitos a este teste, que consiste na I.D.T. e na colheita de sangue para pesquisa de Brucelose, s podendo ser movimentados os que apresentem resultados negativos realizados menos de um ms. Nas Tabelas 10 e 11 apresentadas em anexo sero representadas as casusticas dos actos sanitrios realizados durante as actividades desenvolvidas no A.D.S. Baixo Tejo. Na Tabela 10, o campo de sanidade normal engloba colheita de sangue, vacinao contra clostridioses, desparasitao e intradermotuberculinizao. Na Tabela 11, o campo sanidade normal compreende colheita de sangue, desparasitao e vacinao contra clostridioses. A vacinao contra a lngua azul est includa no campo vacinaes fora do programa, uma vez que, durante o perodo de estgio, esta vacina foi apenas administrada aos ovinos e a alguns bovinos em situaes excepcionais, no se incluindo assim no campo sanidade normal. Em ambas as tabelas o campo desparasitaes considera desparasitaes feitas fora do programa de sanidade. 1.2. Luso-Pecus As actividades desenvolvidas atravs da Luso-Pecus Lda, decorreram nos mesmos locais descritos para as actividades do A.D.S. do Baixo Tejo e ainda no concelho do Cartaxo, Salvaterra de Magos, Alcochete, Goleg, vora e Coruche. O acompanhamento dirio do Dr. Lus Fragoso no seu trabalho ao longo destes cinco meses de estgio, possibilitou a observao e participao na resoluo de diversos casos clnicos em diferentes reas tais como Clnica, Cirurgia e Reproduo de equinos, bovinos e caprinos. Foram no total acompanhados 689 actos veterinrios, sendo 313 deles em bovinos, 77 em pequenos ruminantes e 299 em equinos. 5

 apresentada em anexo a casustica dos diferentes actos clnicos, ocorridos durante o perodo de estgio, agrupados em trs tabelas distintas (Tabelas 12, 13 e 14, consoante se tratem de casos ocorridos nas espcies bovina, ovina/caprina e equina, respectivamente). 2. Laboratrio de Parasitologia e Doenas Parasitrias A parte final do estgio foi realizada no Laboratrio de Parasitologia e de Doenas Parasitrias da Faculdade de Medicina Veterinria, Universidade Tcnica de Lisboa, sob orientao do Professor Doutor Lus Madeira de Carvalho. Este foi iniciado a 31 de Maro e finalizado a 15 de Julho, com uma durao de aproximadamente 720 horas, divididas entre colheita de fezes nas exploraes (90 horas) e entre a realizao de anlises coprolgicas (630 horas). Dentre as anlises coprolgicas, foram efectuados exames qualitativos para pesquisa de ovos, mediante tcnicas de flutuao como o mtodo de Willis e tcnicas de sedimentao passiva ou atravs de centrifugao. Foram tambm realizados exames para a pesquisa de Cryptosporidium sp., por esfregao fecal e pelo mtodo de Ritchie, posteriormente corados pelo Ziehl-Neelsen, e coproculturas de fezes para identificao de Estrongilideos Gastrointestinais (EGI) e de coccdias de Eimeria. Foram efectuados exames quantitativos atravs da Tcnica de McMaster para contagem de ovos de EGI e de coccdias. Foi ainda efectuada a necrpsia de um borrego em conjunto com o Sector de Anatomia Patolgica do Departamento de Sanidade Animal.

IV - Reviso Bibliogrfica Os parasitas merecem especial ateno por parte do Mdico Veterinrio de animais de companhia e de produo, pois podem ter aces muito nocivas para os hospedeiros. Os parasitas so responsveis pela diminuio do bem-estar animal, causando leses nos tecidos, nos sistemas e na totalidade do organismo atravs do trauma directo que infligem nas clulas e rgos. Podem, por vezes, perturbar as funes mecnicas dos rgos, sem contudo lesarem directamente os tecidos dos hospedeiros. Quase todos os parasitas tm aco irritante e pr-inflamatria, e alguns tm ainda capacidade de induzir modificaes tecidulares. Podem ter aco espoliadora, subtraindo os nutrientes ao hospedeiro e tambm ter aco txica, por libertao de compostos, que podem ser produto do seu catabolismo ou resultantes da sua morte, podendo ainda produzir substncias que induzem reaces alrgicas ou do tipo anafiltico. Actuam tambm como veculos de transmisso de outros agentes infecciosos, de forma directa (vectores) ou indirecta, servindo de porta de entrada para infeces posteriores, no sendo no entanto a causa directa da infeco (Ortega Mora & Rojo Vzquez, 1999). Os parasitas tm grande impacto tanto no bem-estar, como na sade animal, causando importantes perdas econmicas. Estas perdas econmicas so devidas repercusso nos ndices produtivos (atrasos de crescimento, diminuio do ganho de peso vivo ou perca de peso, reduo das taxas reprodutivas, como a fecundidade e prolificidade) e s rejeies post-mortem (Romero, Sancho & Vzquez, 1996; Khan, Sajid, Khan, Iqbal & Hussain, 2010). A existncia de animais parasitados aumenta os gastos com a teraputica e/ou profilaxia e propicia ainda o aparecimento de resistncias teraputica anti-parasitria. Para se atingirem padres elevados de produtividade e de bem-estar animal necessrio um controlo eficaz dos parasitas a longo prazo. Quando as medidas profilticas no funcionam, no esto implementadas ou so impraticveis, o controlo tem que ser complementado com um diagnstico e o tratamento tem que ser rpido. A reviso bibliogrfica efectuada apresenta-se com o objectivo de relembrar e consolidar alguns conceitos, no mbito da epidemiologia, ciclo de vida, morfologia, tratamento e controlo das espcies de parasitas que frequentemente parasitam os ovinos. 1. Filo PROTOZOA A maioria das espcies de protozorios so de vida livre, algumas parasitam animais, outras parasitam vegetais (Vignau, Venturini, Romero, Eiras & Basso, 2005). So seres eucariticos unicelulares que possuem um ou mais ncleos e um citoplasma com organides que cumprem as distintas funes vitais. A sua alimentao feita por pinocitose ou por fagocitose (Bowman, 2003). Deslocam-se por uma de quatro formas: atravs de um nico flagelo, por meio de clios, atravs de prolongamentos citoplasmticos chamados pseudpodes ou por deslizamento (Sancho, 2009). 7

A reproduo dos protozorios pode ser sexuada, chamada gametogonia ou assexuada por esporogonia ou esquizogonia, onde o trofozoto (forma do protozorio no hospedeiro) cresce e o ncleo se divide repetidamente (Urquhart et al., 1996) por diviso binria ou por brotamento (Vignau et al., 2005). Esta estrutura denominada esquizonte e aps maturao dever apresentar uma grande quantidade de merozotos que sero libertados posteriormente invadindo as clulas adjacentes (Urquhart et al., 1996). Por vezes, como no caso das coccdias do gnero Eimeria, a reproduo ocorre de forma sexuada e assexuada no mesmo hospedeiro, e noutros, como no caso do Plasmodium, a reproduo assexuada ocorre no hospedeiro vertebrado enquanto a reproduo sexuada ocorre num vector artrpode (Urquhart et al., 1996).

1.1. Eimeria spp. As eimerias pertencem classe COCCDIA e famlia EIMERIIDAE. Tm distribuio mundial, parasitam aves domsticas e silvticas, bovinos, ovinos, caprinos, sunos, equinos, coelhos e outros mamiferos, localizando-se principalmente no epitlio do intestino, podendo tambm encontrar-se no rim e fgado (Hidalgo Argello & Cordero del Campillo, 1999a). A identificao dos oocistos feita pela avaliao do seu tamanho (que varia de 10 a 56 por 8 a 41 m), pela sua forma (que pode ser esfrica, sub-esfrica, elipside, ovide) pela presena ou no de micrpilo (poro numa das extremidades), pela presena ou ausncia de cpsula polar (cpsula que cobre o micrpilo) e de corpos residuais, auxiliada ainda pelo seu tempo de esporulao (Hidalgo Argello & Cordero del Campillo, 1999a; Wang et al., 2010). As caractersticas morfolgicas de Eimeria spp. de ovinos esto detalhadas na tabela 1.

Tabela 1 - Caractersticas morfolgicas de Eimeria spp. de ovinos

Espcie Tamanho em m Forma Cr do oocisto Cpsula polar Patogenicidade Residuo do oocisto Residuo do esporocisto Tempo de esporulao em dias a 20C

Eimeria ahsata

29-44 x 17-28

Ovide Alongada a elipsoidal, com paredes paralelas Elipsoidal larga a esfrica Forma de urna, ovide

Amarelada

++

2-3

Eimeria bakuensis

23-36 x 15-24

Amarelada

++

2-4

Eimeria crandallis

17-28 x 17-22

Incolor

+/-

+/++

1-3

Eimeria granulosa

22-37 x 17-26

Amarelada

3-4

Eimeria intricata

40-56 x 30-41

Elipsoidal

Castanha

3-7

Eimeria marsica

15-22 x 11-14

Elipsoidal

Incolor

Eimeria weybridgensis

17-31 x 14-19

Elipsoidal larga a esfrica

Incolor Amarela castanha a verde, plida Incolor a amarelo plido

1-3

Eimeria faurei

25-37 x 19-27

Oval a piriforme

+/-

1-3

Eimeria ovinoidalis

17-28 x 12-23

Oval a elipsoidal Elipsoidal com paredes delicadas Esfrica a subesfrica

+++

1-3

Eimeria pallida

12-20 x 8-15

Incolor

1-3

Eimeria parva

10-22 x 10-19

Incolor

+/++

3-5

Adaptado de: Bayer animal Health GmbH (2008) Baycox Technical Information.

5% Toltrazuril Coccidiocide for Lambs,

1.1.1. Ciclo de vida O ciclo de vida das coccdias do gnero Eimeria divide-se em duas fases, a fase exgena e a fase endgena. A primeira ocorre fora do corpo e onde se d a esporulao. A segunda inicia-se com a ingesto do oocisto esporulado, ocorrendo assim no interior do organismo do hospedeiro. nesta fase que ocorre a infeco e se d a esquizogonia (Urquhart et al., 1996; Bowman, 2003).

1.1.1.1. Esporulao Os oocistos no esporulados so constitudos por uma massa protoplasmtica nucleada envolta por uma parede resistente, os quais aps serem eliminados nas fezes e em condies ideais de humidade (75%) e temperatura (27C) vo sofrer esporulao, onde o ncleo se divide e forma quatro corpos cnicos. Estes corpos cnicos tornam-se arredondados e do origem aos esporoblastos, que posteriormente passam a ser conhecidos por esporocistos, originando o material protoplasmtico do seu interior, aps diviso, dois esporozotos. O oocisto passa neste momento a ser denominado oocisto esporulado e esta ltima a forma infectante (Urquhart et al., 1996; Bowman, 2003).

1.1.1.2. Infeco e esquizogonia Aps ingesto do oocisto esporulado, o hospedeiro torna-se infectado. ento que os esporocistos so libertados e os esporozotos deixam o esporocisto. Na maioria dos casos cada esporozoto penetra uma clula epitelial e ganha forma arredondada, passando ento a chamar-se trofozoto. Este divide-se aps alguns dias, formando um esquizonte constitudo por merozotos. Quando a diviso est completa o esquizonte rompe-se e os merozotos invadem as clulas adjacentes (Urquhart et al., 1996; Bowman, 2003).

1.1.1.3. Gametogonia e formao do oocisto Os merozotos agora dentro de uma nova clula desenvolvem-se originando gametcitos, tanto masculinos como femininos. O gametcito feminino cresce, mantendo-se unicelular (Urquhart et al., 1996) e induz a hipertrofia do ncleo e citoplasma da clula em que se encontra, que quando matura toma o nome de macrogametcito. O gametcito masculino sofre repetidas divises nucleares tornando-se multinucleado, chamando-se ento microgametcito. Cada um destes ncleos vai dar origem aos microgmetas, organismos uninucleados flagelados (Bowman, 2003), sendo apenas nesta curta fase que as coccdias se conseguem locomover (Urquhart et al., 1996). Alguns destes microgmetas vo encontrar e fecundar os macrogametcitos, dando origem ao zigoto. ento formada uma parede em redor do zigoto, dando origem ao oocisto. O oocisto libertado pela ruptura da clula hospedeira e seguidamente excretado nas fezes, podendo assim, dentro de pouco tempo, com teor de humidade, temperatura e disponibilidade de oxignio adequados, dar-se a esporulao, onde o esporonte se divide em quatro esporoblastos tornando-se um oocisto esporulado, completando-se assim o ciclo (Bowman, 2003). 1.1.2. Coccidiose A coccidiose ou eimeriose uma doena parasitria infecciosa causada por protozorios do gnero Eimeria, tambm conhecidos por coccdias. A infeco ocorre por ingesto de

10

oocistos esporulados, que geralmente se desenvolvem e reproduzem no epitlio do intestino delgado, causando danos nos tecidos e desencadeando alteraes clnicas (Ordaz, 2008). Segundo Sancho (2009), so reconhecidas onze espcies de eimerias envolvidas na coccidiose ovina: Eimeria ahsata, E. intricata, E. bakuensis, E. crandallis, E. weybridgensis, E. granulosa, E. faurei, E. parva, E. pallida, E. ovinoidalis e E. marsica, representadas na figura 1. Figura 1 - Espcies de Eimeria spp. em ovinos a) Eimeria intricata b) Eimeria ahsata c) E. bakuensis d) Eimeria marsica

49x35 m (amp.55x)

38x23 m (amp.71x)

28x18 m (amp.93x)

20x14 m (amp.130x)

e) Eimeria faurei

f) E. ovinoidalis

g) Eimeria pallida

h) Eimeria parva

33x25 m (amp.73x)

24x21 m (amp.100x)

18x13 m (amp.122x)

15x15 m (amp.127x)

i) Eimeria granulosa

j) Eimeria crandallis/weybridgensis

25x18 m (amp.104x) Fotografias a), b), c), d), e), f), g), h) e j) originais; Fotografia i), adaptada de: Bayer Animal Health GmbH (2008) Baycox 5% Toltrazuril Coccidiocide for Lambs, Technical Information.

Ridler (2008) refere que apenas as Eimeria crandallis e E. ovinoidalis so patognicas, no entanto Hidalgo Argello & Cordero del Campillo (1999a) referem a E. crandallis como sendo moderadamente patognica, exacerbando no entanto os efeitos da E. ovinoidalis. J Dittmar, Mundt, Grzonka, Daugschies & Bangoura (2009) e Wang et al. (2010), afirmam que as mais patognicas so as Eimeria ahsata, E. ovinoidalis, E. bakuensis e E. crandallis, sendo as restantes consideradas de baixo poder patognico. Os oocistos de Eimeria spp. podem ser encontrados em ovinos de todas as idades, mas so mais prevalentes em borregos, verificando-se mais frequentemente nesta faixa etria sinais

11

de coccidiose, funcionando os adultos como reservatrios, pois tendem a excretar oocistos sem manifestarem doena (Foreyt, 1986). Para o diagnstico de coccidiose necessria a identificao de oocistos do gnero Eimeria nas fezes, mas importante perceber que esta por si s no suficiente, por poderem ser encontrados oocistos em animais saudveis, e poder existir doena clnica grave e at fatal em animais que no apresentam oocistos nas fezes (pois a fase assexuada pode-se encontrar no incio e os oocistos podem ainda no ter tido tempo de se desenvolver, no aparecendo assim nas fezes). tambm necessrio que a histria pregressa, os sinais clnicos e as leses post-mortem (em caso de bito) estejam de acordo com o diagnstico (Bowman, 2003). O sinal clnico mais comum diarreia crnica (pastosa e aquosa, s vezes sanguinolenta) acompanhada de tenesmo, embora o tenesmo e fezes sanguinolentas no se observem em adultos (Bowman, 2003). Pode tambm originar anemia, sndrome de m absoro e perda de electrlitos (Wang et al., 2010), desidratao, anorexia e at prolapso rectal (Foreyt, 1986). A gravidade das leses est relacionada com a densidade de parasitas e a sua localizao na mucosa. Aps o rebentamento dos esquizontes ou gamontes o tecido recupera lentamente a sua morfologia, no entanto, em casos de infeco grave em que os esquizontes se encontram muito profundos na mucosa ou sub-mucosa, as leses so to extensas que se d hemorragia, tornando-se a diarreia hemorrgica. Em infeces leves verifica-se edema localizado e atrofia das vilosidades, sendo estas alteraes responsveis por sndrome de m absoro intestinal e quebras de produo, com perdas econmicas elevadas (Urquhart et al., 1996). A coccidiose clnica tende a ocorrer em situaes que causem stress (Bowman, 2003): no periodo puerperal, na poca de transio Inverno-Primavera, em pocas de chuva, em exploraes com ms condies higinicas, em sistemas intensivos (Urquhart et al., 1996), em situaes de alterao da dieta e quando os animais se encontram imunodeprimidos por doena concomitante (Foreyt, 1986). A alimentao em feedlots onde ocorreu contaminao prvia com oocistos, assim como em pastagens contaminadas e pastos muito irrigados, tambm podem ser factores predisponentes (Urquhart et al., 1996), pois os oocistos tm uma longevidade considervel, suportando variaes trmicas entre -30C e 40C, podendo persistir durante vrios anos dentro deste intervalo de temperatura (Foreyt, 1986). 1.1.3. Tratamento e controlo Uma vez que a erradicao da coccidiose no parece ser possvel devido sua ampla prevalncia, grande capacidade reprodutiva do parasita e grande resistncia dos oocistos no meio ambiente, a melhor filosofia de combate s coccidioses parece ser um bom maneio sanitrio e o uso profilctico de frmacos anti-coccdias, antes do aparecimento de um surto. 12

Os principais factores predisponentes ao aparecimento de coccidiose clnica so a presena de guas estagnadas, a contaminao do solo e a sobrelotao das exploraes (pois esta leva ao aparecimento de doenas que podem precipitar o aparecimento de infeco). Impe-se assim a eliminao deste tipo de situaes. imprescindvel a limpeza das camas assim como dos bebedouros, o armazenamento de alimentos deve ser feito com boas condies higinicas e deve-se reduzir o stress ao mximo (Urquhart et al., 1996). Em caso de surto importante que se efectue a separao de animais com doena, de maneira a prevenir o mais possvel a transmisso atravs das fezes, de alimentos e guas a animais no infectados (Foreyt, 1986). A profilaxia teraputica com a administrao de coccidiostticos antes da ocorrncia de surtos tende a ganhar fora, pois o combate teraputico em situaes clnicas pouco eficaz (Bowman, 2003). A administrao adequada de frmacos contra coccdias pode reduzir drasticamente ou mesmo acabar com a coccidiose clnica (Foreyt, 1986). Os frmacos contra coccdias podem ser coccidiostticos, que s actuam sobre as primeiras fases evolutivas, prevenindo o desenvolvimento das coccdias. No entanto permitem o estabelecimento dos parasitas nas clulas intestinais, estimulando uma resposta imunitria (Ordaz, 2008). Este tipo de produtos administram-se com fins preventivos, na gua de bebida, em pedras de sal ou no alimento durante largos perodos de tempo em alturas susceptveis ao aparecimento de surtos, como em situaes que causem stress, transio dos borregos para feedlots ou quando os animais frequentam pastagens com muita gua ou lamacentas (Foreyt, 1986). Os frmacos podem ser tambm coccidicidas, os quais so produtos que atacam e eliminam coccdias em qualquer fase evolutiva, sendo usados em surtos agudos de coccidiose. Os frmacos mais usados contra a coccidiose so a monensina, aureomicina, a associao de monensina com aureomicina, lasalocida, decoquinato, administrada na rao ou na suplementao alimentar e mais recentemente os derivados tiazidicos (diclazurilo e toltrazurilo). Descobriu-se recentemente, que a utilizao de bolos intraruminais de sulfametazina de libertao lenta em cabritos, ajuda a controlar e at prevenir a coccidiose (Ordaz, 2008). 1.2. Cryptosporidium sp. Cryptosporidium sp. um parasita protozorio de distribuio mundial, havendo relatos de infeces em mais de 40 espcies de animais domsticos e espcies selvagens, incluindo mamferos, aves, rpteis e peixes (Uluta & Voyvoda, 2004). Tendo potencial zoontico, h possibilidade de ocorrer infeco cruzada entre animais domsticos, de laboratrio e o Homem, uma vez que Cryptosporidium sp. no tem um hospedeiro especfico, nem penetra nas suas clulas. Est reportado que borregos com diarreia, infectados por Cryptosporidium sp. excretam em mdia 4,8x109 oocistos por grama de fezes, que contribuem significativamente para 13

infeces em humanos por contacto directo ou por contaminao de guas (Qulez et al., 2008). 1.2.1. Ciclo evolutivo O ciclo evolutivo do Cryptosporidium sp. semelhante ao de Eimeria spp., no entanto, a esporulao d-se no interior do hospedeiro (Urquhart et al., 1996). Os oocistos so excretados pelas fezes, cada um com quatro esporozotos, disseminando assim a doena. Aps a ingesto, os oocistos abrem, libertando os quatro esporozotos que invadem as microvilosidades gstricas, ou a metade inferior do intestino delgado (Tzipori & Ward, 2002). na bordadura em escova das microvilosidades que se d a esquizogonia, gametogonia, fertilizao e esporulao (Bowman, 2003). A gametogonia ocorre aps duas ou trs geraes de esquizontes, sendo produzidos oocistos at 72 horas aps a gametogonia (Fayer, 2008). Estudos recentes comprovam a existncia de dois tipos de oocistos. O primeiro, correspondendo a 80% dos oocistos, tem paredes espessas e eliminado nas fezes, promovendo a disperso da doena. O segundo tipo, no qual se incluem os restantes 20%, apresenta paredes finas e enquista no intestino, promovendo a auto-infeco (Melo, 2006), a progresso crnica da infeco em pacientes normais e a hiper-infeco mortal em doentes imunodeprimidos (Bowman, 2003).

1.2.2. Criptosporidiose A criptosporidiose considerada uma das maiores causas de diarreia neonatal e morte em borregos com menos de um ms de idade (Uluta & Voyvoda, 2004; Qulez et al., 2008; Ridler, 2008), por provocar alteraes evidentes na mucosa do leo, com atrofia, intumescimento e eventualmente fuso das microvilosidades (Tzipori & Ward, 2002). Num estudo efectuado por Uluta e Voyvoda (2004), a prevalncia de infeces por Cryptosporidium sp. em borregos foi de 46,5%, enquanto noutros estudos a prevalncia de infeces por Cryptosporidium sp. em borregos variou entre 12% e 23,3%. Demostraram tambm que o grau de infeces por Cryptosporidium sp. era significativamente maior em borregos com diarreia (79,1%) do que em borregos sem diarreia (18,2%). Ridler (2008) refere que, em estudos epidemiolgicos, 10 a 20% de ovelhas escolhidas aleatoriamente apresentaram-se parasitadas por Cryptosporidium sp.. A diferena na prevalncia de criptosporidiose em borregos e ovelhas criados em zonas geogrficas diferentes, pode resultar de um diferente grau de infecciosidade de diferentes populaes de Cryptosporidium sp., de diferentes contaminaes ambientais (Uluta e Voyvoda, 2004), das diferentes resistncias do oocisto esporulado no ambiente, da presena de outros portadores e dos diferentes estados imunitrios dos possveis hospedeiros (Melo, 2006). referido que ms condies higio-sanitrias e de maneio da explorao influenciam a infeco por Cryptosporidium sp. (Uluta e Voyvoda, 2004). 14

A infeco por Cryptosporidium sp. ocorre principalmente em borregos com menos de um ms, aparecendo tambm em situaes que causem imunodepresso (Uluta & Voyvoda, 2004) e ocorre sobretudo pela via oral-fecal associada ingesto de gua e alimentos contaminados, mas tambm por contacto directo, atravs de fomites (Chalmers & Giles, 2010) e ainda pela inalao de oocistos (Tzipori & Ward, 2002; Fayer, 2008). Podem ser observados oocistos de Cryptosporidium sp. tanto em animais clinicamente saudveis como em animais doentes (Uluta & Voyvoda, 2004). Clinicamente, a doena caracteriza-se por anorexia, letargia, clicas e diarreia inicialmente profusa, aquosa e com colorao amarela, aparecendo no final pastosa, de cor cinzenta clara e com frequncia intermitente (Fonseca, 2000).

1.2.3. Tratamento e controlo Compreender as fontes de infeco, os hospedeiros e as vias de transmisso vital para o controlo desta parasitose, para a qual no se dispe ainda de um tratamento nem vacinao eficientes, possivelmente pela localizao do protozorio na bordadura em escova dos entercitos, que dificulta a penetrao e aco de frmacos (Tzipori & Ward, 2002; Chalmers & Giles, 2010). Assim sendo, um bom maneio e boas condies higio-sanitrias so fundamentais no combate criptosporidiose (Chalmers & Giles, 2010). A preveno a nvel de maneio passa por no se permitir a acumulao de estrume, pela limpeza regular dos bebedouros e das camas entre grupos diferentes e no mesmo grupo, por evitar a sobrelotao de animais na explorao e em caso de doena, separar os animais afectados dos restantes. A descontaminao das exploraes tem mostrado poucos resultados devido resistncia natural dos oocistos e ineficcia dos desinfectantes, sendo recomendada a lavagem das superfcies e utenslios com gua quente e detergente, seguida da aplicao de desinfectantes amoniacais ou perxido de hidrognio associado quer a cido-peractico ou nitrato de prata (Chalmers & Giles, 2010), contudo estes procedimentos de rotina podem ser impraticveis na maior parte das exploraes. O controlo teraputico mais comummente usado o lactato de halofuginona em ovinos (Chalmers & Giles, 2010) e lactato de halofuginona e lasalocida em bezerros. No entanto, a dose teraputica desta ltima est muito prxima da dose txica (Viu, Qulez, SnchezAcedo, Cacho & Lpez-Bernad, 1999). Podem tambm ser usados antibiticos da famlia dos aminoglicosideos, ionforos e macrlidos, que tm alguma eficcia. Viu et al. (1999) referem que o tratamento profiltico com paromomicina altamente eficaz e no txico, j Castro-Hermida et al. (2002) referem a -ciclodextrina como altamente efectiva no tratamento profilctico, com beneficios na preveno da diarreia em animais infectados, e uma considervel diminuio na contagem de oocistos e melhorias significativas nos ganhos dirios de peso. 15

2. Classe NEMATODA Os nemtodes so organismos pertencentes ao filo NEMATHELMINTHES e constituem o mais numeroso grupo de metazorios existente no solo, encontrando-se tambm em elevado nmero em ambientes aquticos. Na Classe NEMATODA, existe grande variabilidade inter-espcies com uma notvel variedade de dimenses, formas e habitats. Existem espcies de vida livre, que constituem o grupo maioritrio e espcies que parasitam diferentes hospedeiros. Estes ltimos constituem um importante grupo do ponto de vista econmico, uma vez que causam elevados danos, tanto em animais como em plantas, com grandes perdas produtivas associadas (Urquhart et al., 1996; Bowman, 2003). Os nemtodes so organismos com forma cilndrica, com as extremidades (cabea e cauda) normalmente pontiagudas (Sancho, 2009). Locomovem-se atravs de movimentos ondulatrios rpidos por contraco e relaxamento independente das massas musculares dorsais e ventrais (Bowman, 2003). Geralmente alimentam-se de lquido das mucosas, produtos da digesto e fragmentos celulares do hospedeiro. O seu sistema digestivo tubular e constitudo por boca ou cpsula bucal, esfago, intestino e um sistema excretor. A boca normalmente um simples orifcio, ou abre-se numa cpsula bucal, que pode conter dentes. O esfago pode apresentar diferentes formas: rabditiforme, filariforme, bulbiforme simples e duplo, muscular-glandular e tricuride, podendo esta variao da forma ser usada como critrio para a diferenciao dos diferentes grupos de nemtodes. O intestino possui microvilosidades para aumentar a rea de absoro. O aparelho excretor difere entre sexos, sendo constitudo pelo nus no caso das fmeas, enquanto no macho consiste numa cloaca na qual se abre tambm o ducto ejaculador e se encontra o rgo copulador, espculas e gubernculo (Urquhart et al., 1996). O rgo reprodutor feminino engloba o ovrio, oviducto, tero e vagina que comunica com o exterior atravs da vulva, j o masculino constitudo por um nico testculo, e pelo canal deferente que termina no ducto ejaculador que como j referido se abre na cloaca (Bowman, 2003). O ciclo biolgico dos nemtodes pode ser directo ou indirecto. No mbito desta reviso bibliogrfica ser apenas abordado detalhadamente o ciclo directo, que compreende uma fase endgena e uma fase exgena. A fase exgena comea quando animais parasitados eliminam ovos atravs das fezes e contaminam os pastos. Quando o ovo chega ao meio exterior, e em condies edafo-climticas adequadas, tem lugar o desenvolvimento embrionrio, formando-se a larva de primeiro estadio (L1), que sai do ovo e se alimenta de matria orgnica constituinte das fezes. A L1 passa ento a larva de segundo estadio (L2), que aps se alimentar da mesma forma que a L1 se transforma na larva de terceiro estadio (L3) ou larva infectante a qual possui uma bainha dupla que lhe confere uma grande resistncia ao meio exterior, sendo a mortalidade da mesma muito inferior das restantes fases larvares. Quando as L3 migram das fezes para as ervas e so ingeridas, o ciclo entra 16

na fase endgena (Romero et al., 1996; Sargison, 2008). Nesta fase, o hospedeiro ingere as L3 na pastagem, que uma vez no intestino ou no abomaso, se desencapsulam e penetram as glndulas gstricas onde passam ao quarto estadio larvar (L4). Aps novo desenvolvimento passam ao quinto estadio larvar (L5) dando origem aos adultos. Uma vez completada a maturao sexual, os adultos copulam e as fmeas iro posteriormente eliminar ovos, comeando assim um novo ciclo (Sancho, 2009). O ciclo de vida dos nemtodes encontra-se ilustrado na figura 2, sendo as variaes a esta descrio genrica do ciclo mencionadas posteriormente.

Figura 2 - Ciclo de vida de Nemtodes Gastrointestinais.

Fase endgena

Fase exgena

Adaptado de Sissay (2007), Helminth Parasites of Sheep and Goats in Eastern Ethiopia. p.17.

Os ovos dos nemtodes tm forma ovide, so incolores e possuem um invlucro fino. O seu tamanho oscila entre 70-90 m de comprimento por 40-60 m de largura, com excepo dos ovos pertencentes ao gnero Nematodirus, que podem ultrapassar os 130 m de comprimento. Os ovos so eliminados na fase de blstula, com um nmero varivel de blastmeros (4 a 32) dependendo da espcie. Com excepo dos ovos de Nematodirus spp., a identificao morfolgica dos restantes ovos muito difcil, pois so bastante semelhantes, sendo necessria a elaborao de coproculturas para se proceder identificao das L3 (Mir, Meana & Almera, 1993).

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Figura 3 - Fotografias de ovos de Estrongilideos gastrointestinais a) Nematodirus spp. b) Strongyloides sp. c) EGI d) EGI

Fotografias originais: a) 160x80 m (amp.23x); b) 50x20 m (amp.64x); c) 88x48 m (amp.38x); d) 90x50 m (amp.39x)

As L3 so a forma infectante dos nemtodes gastrointestinais, pelo que tm grande importncia do ponto de vista epidemiolgico. So vermiformes, medem entre 600 a 1500 m de comprimento e 20 a 30 m de largura. Possuem um esfago do tipo filariforme e caracterizam-se por estarem rodeadas por uma bainha, excepto nos nemtodes de vida livre (Miro et al., 1993). Para a classificao das L3 de diferentes espcies de nemtodes, so usados vrios critrios, entre os quais: o nmero de clulas intestinais (que podem variar entre 8 a 32), o tipo de cauda (curta, <40 m, mdia, 40-110 m e grande, >110 m) e o tamanho da larva (muito pequena, <600 m, pequena, 600-640 m, mdia, 640-700 m, grande, 700-820 m e muito grande, >1000 m) (Sancho, 2009). Sero seguidamente abordados alguns dos parasitas gastrointestinais pertencentes classe NEMATODA mais importantes em ovinos.

2.1. Famlia STRONGYLOIDIDAE 2.1.1. Gnero Strongyloides Os nemtodes do gnero Strongyloides pertencem Ordem RHABDITIDA e possuem um esfago caracterstico de forma rabditiforme. So parasitas comummente encontrados na mucosa do intestino delgado de animais muito jovens e regra geral tm pouca importncia clnica, podendo no entanto, em circunstncias raras, dar origem a enterites graves (Urquahart et al., 1996; Bowman, 2003). Os ovos de Strongyloides sp. so pequenos (45 a 65 m por 25 m), com cerca de metade do tamanho dos ovos tpicos de estrongildeos. Tm casca fina, so ovais com os plos achatados e possuem no seu interior a larva infectante L3, filariforme (Sancho, 2009). Uma vez no exterior a larva infectante identifica-se pela ausncia de bainha e por ter um esfago bem visvel, o qual tem um comprimento de aproximadamente 40% do total da larva (Wyk et al., 2004). Os nemtodes do gnero Strongyloides tm ciclos reprodutivos tanto parasitrios como de vida livre. Na fase parasitria no existem machos, sendo esta composta inteiramente por fmeas, as quais no tm gnadas masculinas (Hidalgo Argello & Cordero del Campillo, 1999b). As fmeas produzem ovos por partenognese, e as larvas que eclodem destes ovos 18

so homognicas podendo desenvolver-se em larvas infectantes (atravs de dois estadios larvares) ou em adultos e fmeas de vida livre (atravs de quatro estadios larvares). Quando a L3 tem oportunidade, infecta o hospedeiro, por penetrao cutnea atravs dos folculos pilosos, por ingesto, ou por via transmamria (Viney & Lok, 2007), migrando at ao intestino onde amadurece e finalmente completa a transformao em L5 (fmea adulta). A sua via de entrada mais habitual a cutnea e atingem mais rpidamente a maturao sexual as larvas que entram por esta via do que as que o fazem por ingesto ou via transmamria (Hidalgo Argello & Cordero del Campillo, 1999b; Anderson, 2000; Bowman, 2003). Na fase de vida livre os machos e fmeas reproduzem-se, originando larvas heterognicas que, salvo raras excepes, se transformam directamente em larvas infectantes (Anderson, 2000; Bowman, 2003). O ciclo de vida dos nemtodes Strongyloides sp. est ilustrado na figura 4. Figura 4 - Ciclo de vida de Strongyloides sp.

Ciclo de vida de Strongyloides sp.. As caixas cinzentas representam alteraes no desenvolvimento da descendncia das femas adultas: (1) diferenciao sexual; (2) As L 1 fmeas podem originar directamente L3 ou completar o seu desenvolvimento em fmeas de vida livre. Adaptado de: Viney & Lok (2007), Strongyloides spp. p.7.

Em ruminantes as infeces por Strongyloides papillosus so as mais prevalentes. Em ovinos considera-se que tm um comportamento comensal sendo as infeces normalmente moderadas e assintomticas, ocorrendo doena apenas em infeces macias e normalmente em animais recm-nascidos e lactantes infectados por via transmamria (Hidalgo Argello & Cordero del Campillo, 1999b; Bowman, 2003). A doena manifesta-se sobretudo em animais jovens, e depende dos transtornos digestivos causados pelos parasitas adultos no duodeno e jejuno. Os sinais clnicos incluem diarreia (frequentemente acompanhada de sangue e muco), desidratao, anorexia, apatia e anemia ligeira a 19

moderada (Urquhart et al., 1996; Hidalgo Argello & Cordero del Campillo, 1999b). Por alterao da digesto e absoro, h perda de peso e baixos ndices de crescimento. As L5 exercem tambm uma aco txica devido a produtos de secreo e excreo que lesionam a mucosa do hospedeiro e favorecem a penetrao de bactrias como a Salmonella ou colibacilos (Hidalgo Argello & Cordero del Campillo, 1999b). O tratamento para infeces causadas por Strongyloides sp. raramente necessrio, no entanto, o uso de benzimidazis, avermectinas ou milbemicinas so altamente eficazes na sua eliminao (Urquhart et al., 1996).

2.2. Famlia TRICHOSTRONGYLIDAE 2.2.1. Gnero Nematodirus Nematodirus spp., parasita ubiquitrio, mas mais comum em zonas temperadas, tem especial importncia em ovinos pois causa uma das parasitoses mais graves (Sancho, 2009). Os ovos de Nematodirus spp. so relativamente maiores que os dos restantes nemtodes, com um comprimento de 150 a 230 m e uma largura de 67 a 110 m. Tm forma elptica, com uma parede muito resistente permitindo s L3 sobreviver no pasto at trs anos. Apresentam um embrio dividido em quatro a oito blastmeros ficando entre os blastmeros e as paredes do ovo um amplo espao cheio de lquido. As L3 de Nematodirus spp. so consideradas larvas muito grandes (933-1160 m), a bainha da cauda comprida, e possuem na parte final da cauda uma incisura dorsal. O seu intestino constitudo por oito clulas triangulares (Sancho, 2009). O ciclo de vida directo como o dos restantes tricostrongilideos, apenas com uma variao na fase exgena, onde em vez de abandonar o ovo sob a forma de L1, esta prossegue o seu desenvolvimento a L2 e L3, eclodindo ento na forma de L3 e migrando para a erva onde ser ingerida por um novo hospedeiro (Uriarte, Miro, Meana & Rojo-Vazquez, 1993). O desenvolvimento de L1 a L3 geralmente muito lento, demorando at dois meses em zonas de clima temperado (Urquhart et al., 1996). A ecloso das L3 infectantes d-se a temperaturas superiores a 11C, cessando a ecloso das mesmas quando a temperatura ultrapassa os 17C. No entanto as larvas no eclodem sem que os ovos sejam submetidos a temperaturas inferiores a 10C, com mximo sucesso quando expostos a temperaturas de cerca de 4C durante quatro semanas (van Dijk & Morgan, 2009). A nematodirose uma doena parasitria em que os efeitos patognicos se devem principalmente aos estadios larvares. Em casos mais graves verifica-se leso extensa e atrofia das microvilosidades com eroso da mucosa, coincidindo o aparecimento destas leses com o desenvolvimento das L4 em L5. A capacidade de o intestino efectuar trocas de lquidos e nutrientes fica portanto muito delibitada, dando origem ao aparecimento de diarreia. Esta faz com que os animais parasitados fiquem perigosamente desidratados 20

(Urquhart et al., 1996; Sargison, 2008). Segundo Bowman (2003), animais jovens infectados que apresentem diarreia profusa podem morrer entre dois a quinze dias aps o aparecimento dos primeiros sinais clnicos, podendo a mortalidade atingir os 30%. Os animais gravemente parasitados por Nematodirus spp. apresentam como principal sinal clnico diarreia aquosa, seguida de desidratao, depresso, dor abdominal, perda de apetite, perda de peso e reduzido crescimento de l (Kaufmann, 1996; Scott P.R., 2007; Sargison, 2008). O controlo das nematodiroses pode ser conseguido evitando o pastoreio de sucessivas geraes de animais na mesma pastagem. O tratamento anti-helmntico profilctico deve ser efectuado entre Maio e o incio de Junho, altura de maior incidncia de L3 nas pastagens. Idealmente, durante este perodo, os animais devem ser desparasitados em intervalos de trs semanas com benzimidazis ou pr-probenzimidazis, com avermectinas ou milbemicinas, sendo estas ideais pelo facto de actuarem sobre formas em hipobiose. A rotatividade anual das pastagens entre ovinos e bovinos tambm est indicada, permitindo a morte das L3 especficas para cada espcie (Jackson & Coop, 2007). 2.2.2. Gnero Teladorsagia As espcies includas neste gnero so as principais causadoras de gastroenterite parasitria em ruminantes, encontrando-se no abomaso e intestino delgado (Sancho, 2009). Segundo Sancho (2009), os ovos pertencentes a este gnero so ovides a elipsides, no muito largos e possuem uma mrula com muitos blastmeros de pequena dimenso. J as L3 pertencentes a este gnero so consideradas grandes (797-959 m), a bainha da cauda curta e cnica, possuem dezasseis clulas intestinais e a sua cabea quadrada. Wyk, Cabaret & Michael (2004), referem que a cabea com presena de ombros tambm uma caracterstica importante para a sua identificao. O seu ciclo evolutivo directo e leva geralmente trs semanas a completar-se, mas em determinadas circunstncias muitas das L3 ingeridas entram em hipobiose na fase inicial de transformao em L4, por perodos que podem ir at seis meses, fase denominada Fase Pr-tipo II (Urquhart et al., 1996; Jackson & Coop, 2007). No fim do Inverno quando as L3 que se encontravam em hipobiose ficam metabolicamente activas e continuam o desenvolvimento at fase adulta, d-se o aparecimento dos sinais clnicos da teladorsagiose de Tipo II ou Teladorsagiose de Inverno. A teladorsagiose de Tipo I ou Teladorsagiose de Vero ocorre passadas trs a quatro semanas da ingesto de formas larvares infectantes (L3), no passando estas pelo estado de hipobiose (Knox, 2000; Jackson & Coop, 2007). A teladorsagiose causa abomasite crnica em animais jovens, diarreia aquosa profusa, anemia e hipoproteinmia caracterizada por edema sub-mandibular (Bowman, 2003; Jackson & Coop, 2007). Segundo Urquhart et al. (1996) o sinal clnico mais frequente a 21

perda de peso acentuada. Os animais ficam desidratados e emaciados, no entanto o apetite mantm-se intacto, sinal que parece ser paradoxal considerando as grandes alteraes patolgicas no abomaso. Na necrpsia, o rmen, retculo e omaso podem estar repletos de comida, mas o tracto digestivo, do crdia em diante, est normalmente vazio devido m funcionabilidade do abomaso (Bowman, 2003). 2.2.3. Gnero Haemonchus As espcies pertencentes ao gnero Haemonchus so hematfagas e parasitam o abomaso. Os ovos pertencentes a espcies deste gnero so ovais com plos assimtricos, embrionados com dezasseis a 32 clulas e medem 70 a 85 por 41 a 48 m. As L3 so consideradas larvas mdias, com cerca de 650 a 825 m de comprimento, a bainha da cauda mdia e termina de forma aguda com uma bifurcao caracterstica. Possuem dezasseis clulas intestinais, que no incio tm forma pentagonal e no fim tm forma rectangular (Sancho, 2009). Segundo Wyk et al. (2004), apresentam cabea em forma de bala. O seu ciclo biolgico directo, e a fase pr-parasitria tpica da famlia TRICHOSTRONGYLIDAE. A ecloso dos ovos em L1 ocorre na pastagem, e passam a L3 num perodo de cinco dias. Antes da sua ltima transformao, estes nemtodes desenvolvem uma lanceta perfurante na extremidade anterior, a partir da qual conseguem obter sangue dos vasos sanguneos da mucosa (Urquhart et al., 1996). A hemoncose caracteriza-se por uma anemia hemorrgica aguda, provocada pelos hbitos hematfagos do parasita (Urquhart et al., 1996) que pode remover at um dcimo do volume de eritrcitos circulantes por dia em infeces mais brandas, no fatais, que durem cerca de dois meses, podendo ir at um quinto do volume dos eritrcitos circulantes por dia nas situaes mais graves, geralmente de evoluo fatal (Bowman, 2003). A anemia torna-se evidente cerca de duas semanas aps a infeco. Nas semanas subsequentes o hematcrito tende a estabilizar num nvel baixo, devido a um aumento compensador da eritropoiese, que numa fase final, devido contnua perda de ferro e protena e da inaptncia crescente, comea a cessar por esgotamento da medula, levando a uma nova diminuio do hematcrito que pode culminar em morte (Urquhart et al., 1996). Quando o hematcrito inferior a 15% os animais apresentam-se muito fracos, com respirao superficial sendo o prognstico nesta fase muito reservado. Os animais jovens so os mais afectados, mas os adultos em situaes de stress podem tambm sofrer anemias fatais. Segundo Bowman (2003), o principal sinal da hemoncose a palidez da pele e mucosas sendo segundo Urquhart et al. (1996) tambm frequente a colorao escura das fezes (melena) e alteraes do velo, com perda de l. A hemoncose, tal como a teladorsagiose, pode originar anasarca (devido perda de protena), manifestada sobretudo na zona submandibular, bem como taquicardia e taquipneia. Normalmente no h perda de apetite e em 22

surtos agudos pode no haver perdas de peso. A diarreia no comum em infeces causadas por Haemonchus sp., aparecendo apenas em infeces mistas (Scott, 2007; Sargison, 2008). Waller & Chandrawathani (2005) referem que a hemoncose a parasitose mais patognica em pequenos ruminantes e provavelmente a nica parasitose gastrointestinal em ovinos que pode ser diagnosticada sem se recorrer utilizao de testes laboratoriais, devido anemia bvia e caracterstica. 2.2.4. Gnero Trichostrongylus Trichostrongylus spp. um dos parasitas envolvidos na chamada gastroenterite parasitria ovina (Miro et al., 1993), no entanto sozinho raramente provoca doena (Urquhart et al., 1996). A maioria dos parasitas do gnero Trichostrongylus encontra-se no intestino delgado, havendo algumas espcies que se alojam no abomaso. Romero et al. (1996) caracteriza os ovos de Trichostrongylus spp. de forma oval, com os plos ligeiramente desiguais, segmentados e de invlucro fino, com um comprimento de 79 a 118 m por 31 a 56 m de largura. As L3 so consideradas larvas pequenas (619-796 m), a bainha da cauda tambm pequena com forma cnica aguda. Possuem dezasseis clulas intestinais e cabea quadrada. Segundo Wyk et al. (2004), a diferena de tamanho e o facto de possuirem cabea quadrada sem ombros, so duas caractersticas muito importantes na distino de Trichostrongylus spp. dos nemtodes do gnero Teladorsagia. Trichostrongylus spp. tm um ciclo de vida directo, sendo a fase pr-parasitria tpica de tricostrongildeos, no entanto o desencapsulamento das L3 ocorre no abomaso, demorando o desenvolvimento do ovo at L3, em condies adequadas, sete a quinze dias (Urquhart et al., 1996). As L3 so muito resistentes e sobrevivem ao Inverno nas pastagens em nmero suficiente para causar infeces na Primavera (Bowman, 2003). Segundo Urquhart et al. (1996), podem entrar em anidrobiose e aps o incio das chuvas, hidratarem e tornarem-se rapidamente activas e viveis para provocar infeco. As infeces graves por Trichostrongylus spp. causam rpida perda de peso e diarreia, e em infeces mais leves causam inapetncia e baixos ndices de crescimento (Urquhart et al., 1996). Bowman (2003) refere que infeces leves so assintomticas e que infeces graves causam prostao e diarreia aquosa de cor esverdeada escura. Langrov et al. (2008) afirmam que tal como os nemtodes do gnero Teladorsagia, os do gnero Trichostrongylus tambm entram em hipobiose e que o facto de existirem to poucos relatos desse fenmeno se deve a um problema de metodologia. Uma vez que estas L 3 so muito pequenas, passam facilmente despercebidas sendo necessrio o uso de ampliaes adequadas. Estas no so normalmente utilizadas, pois a maior parte das L3 de outras espcies so maiores, usando-se assim por norma ampliaes menores.

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2.2.5. Gnero Cooperia As espcies pertencentes ao gnero Cooperia so ubiquitrias e parasitam na maioria das situaes o intestino delgado de ovinos, havendo referncia da sua presena tambm no abomaso, sendo at a presena de Cooperia punctata mais frequente no abomaso do que no intestino delgado (Chollet et al., 2000). Os ovos destes nemtodes tm a forma tpica dos ovos de EGI, possuem paredes paralelas, plos iguais e arredondados e so constitudas por dezasseis a 32 blastmeros. As L3 so consideradas larvas grandes (700-977 m) e possuem a bainha da cauda de tamanho mdio e com forma de espigo (Romero et al., 1996). O seu intestino constitudo por dezasseis clulas com forma pentagonal, possuem cabea em forma de bala e apresentam dois pontos refrcteis no limite da cavidade bucal, os quais so anatomognomnicos (Wyk et al., 2004). O ciclo de vida de Cooperia spp. directo havendo infeco atravs de L3, tpico da superfamlia. Almera, LLorente & Uriarte (1996), referem que tal como os nemtodes dos gneros Teladorsagia e Trichostrongylus, tambm os nemtodes do gnero Cooperia entram em hipobiose na fase inicial de L4, em reas de clima temperado. Os nemtodes do gnero Cooperia desempenham normalmente um papel secundrio na patogenia das gastroenterites parasitrias sendo considerados moderadamente

patognicos. Podem causar perda de apetite e consequentemente baixos ganhos mdios dirios de peso (Urquhart et al., 1996). 2.2.6. Tratamento e controlo de teladorsagiose, tricostrongilose, cooperiose e hemoncose. No tratamento de teladorsagiose, tricostrongilose, cooperiose e hemoncose, Scott (2007) refere o uso de benzimidazis ou probenzimidazis, compostos imidazlicos e

tetrahidropirimidinas e ainda avermectinas ou milbemicinas, considerando-os como os frmacos mais eficazes. Fleming et al. (2006) referem que no caso do uso de benzimidazis, devem ser administradas duas doses no espao de doze horas para maximizar a sua eficcia, uma vez que estes so metabolizados muito rapidamente. Deve tambm ser restringida a alimentao 24 horas antes da administrao de desparasitante para atrasar o trnsito intestinal e aumentar assim a disponibilidade do frmaco e a sua eficcia. Uma vez que a Primavera a poca de maior incidncia destes parasitas nas pastagens, seria vantajoso evitar o pastoreio neste perodo, no entanto, dado o carcter utpico desta medida, previamente transferncia de animais para outra pastagem vazia, estes devem ser desparasitados para no a contaminarem. Pode tambm ser utilizado um sistema rotacional de pastagem anual entre bovinos e ovinos, para criar um ano de descanso para cada espcie (Urquhart et al., 1996; Scott, 2007), uma vez que as L3 infectantes para uma

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das espcies animais so removidas do pasto pela outra, estando ainda sujeitas dessecao as que no so removidas desta forma (Sargisson, 2008). 2.3. Famlia CHABERTIDAE 2.3.1. Gnero Chabertia Esta espcie cosmopolita est, em conjunto com os nemtodes dos gneros Teladorsagia, Trichostrongylus, Cooperia e Haemonchus, envolvida na gastroenterite parasitria ovina. No entanto, a sua presena ocorre em baixas quantidades, sendo raramente por si s causa de doena, localizando-se as suas formas adultas a nvel do clon (Urquhart et al., 1996). Sancho (2009) caracteriza a forma dos ovos de Chabertia sp. em ovais a elipsoidais, amplos com plos ligeiramente achatados e possuindo dezasseis a 32 blastmeros pequenos. As L3 so consideradas larvas grandes pois tm um comprimento de 710 a 789 m, a bainha da cauda muito comprida, e a extremidade posterior da cauda afilada e cnica. Segundo Wyk et al. (2004) apresentam cabea larga e achatada e tm 28 a 32 clulas intestinais que apresentam forma quadrangular quando vistas a fresco. O seu ciclo de vida directo, como na maioria dos tricostrongildeos. Na fase parasitria, as L3 penetram na mucosa do intestino delgado onde aps uma semana se transformam em L4, que emergem na superfcie da mucosa e migram. Uma vez chegadas ao cego, completam o seu desenvolvimento at atingirem a forma L5. Os adultos jovens migram para o clon onde podem ser encontrados. Esta passagem de L3 a L5 demora aproximadamente 25 dias aps a infeco (Urquhart et al., 1996). Urquhart et al. (1996) referem que as L3 tm capacidade de sobreviver ao Inverno em zonas temperadas, e que as L4 podem ficar em hipobiose incrustadas na parede do intestino grosso, emergindo no final do Inverno ou incio da Primavera. Segundo Anderson (2000) so as L5 e os adultos maduros que tm maior poder patognico, uma vez que se fixam com a sua enorme cpsula bucal dirigida anteroventralmente e fazem a digesto de grandes quantidades de mucosa antes de a ingerirem, resultando em hemorragia local e perda de protenas atravs da mucosa lesada. A cabertiose causa diarreia grave e descargas muco-sanguinolentas (Anderson, 2000) que segundo Urquhart et al. (1996) causam anemia com hipoalbuminmia, podendo causar perdas de peso graves. O tratamento e controlo de cabertiose semelhante ao anteriormente referido para a teladorsagiose, tricostrongilose, cooperiose e hemoncose. 2.3.2. Gnero Oesophagostomum Os membros deste gnero so bastante conhecidos pois tm a particularidade de formar ndulos no intestino (Anderson, 2000). Encontram-se em todo o mundo, sendo as parasitoses causadas por eles mais importantes nas reas tropicais e sub-tropicais, e tm predileco para o cego e clon (Urquhart et al., 1996). 25

Romero et al. (1996) caracteriza os ovos pertencentes ao gnero como largos, de forma oval, com dimenses compreendidas entre 70 a 76 m de comprimento por 36 a 40 m de largura e com os plos idnticos. Possuem casca fina e uma mrula constituda por oito a dezasseis blastmeros grandes, no entanto, Anderson (2000) e Cordero del Campillo et al. (1999) referem que os ovos possuem 16 a 32 blastmeros. As L3 de Oesophagostomum spp. so grandes (756 a 915 m), possuem cauda comprida e extremidade posterior larga e cabea larga e achatada (Sancho, 2009). O tamanho, nmero e forma das clulas intestinais so segundo Wyk et al. (2004) factores muito importantes na distino entre as L3 de Chabertia sp. (que tm 32 clulas intestinais) e as de Oesophagostomum spp. que tm 18 a 22 clulas intestinais com forma triangular, quando vistas a fresco. No entanto, Sancho (2009) e Romero et al. (1996), referem que no existem diferenas entre os dois gneros quanto ao nmero de clulas intestinais. A transmisso do parasita d-se por ingesto de L3, no entanto, h autores que referem a transmisso por penetrao cutnea. As L3 ingeridas penetram na mucosa do intestino delgado e do intestino grosso podendo originar ou no ndulos, nos quais se vo transformar em L4 (Urquhart et al., 1996). As L4 desencapsulam e emergem na superfcie da mucosa, migrando posteriormente para o clon e cego onde se transformam em L5, a forma adulta (Anderson, 2000). H evidncia que, em reas temperadas, o Oesophagostomum spp. entra em hipobiose em L4, encapsulado em ndulos na mucosa, durante o Outono e o Inverno. Pensa-se que esta a principal forma de sobrevivncia do parasita entre Primaveras, sendo contudo referido que este consegue sobreviver ao Inverno sob a forma de L3 na pastagem (Urquhart et al., 1996). As L3 encapsuladas na mucosa causam uma reaco inflamatria grave, que se pode expressar clinicamente por diarreia ftida, a qual pode mesmo levar morte. Estes ndulos posteriormente tornam-se caseosos, com ps esverdeado e uma L4 viva no interior (Urquhart et al., 1996). Bowman (2003) refere que os ndulos caseosos posteriormente podem calcificar, sendo esta calcificao responsvel por anomalias na motilidade intestinal e inflamao aguda. Quando as L4 emergem, podem causar ulcerao da mucosa originando enterite ulcerativa. A doena torna-se cada vez mais debilitante e progride para a cronicidade, causando anemia e hipoalbuminmia devido a perda de protenas e de sangue pelas zonas lesadas (Urquhart et al., 1996). Os sinais clnicos descritos por Urquhart et al. (1996) em infeces agudas so diarreia verde-escura, perda de peso acentuada e por vezes, edema sub-mandibular e em infeces crnicas, diarreia intermitente com perda de peso e anemia. Bowman (2003) refere que os principais sinais clnicos da esofagostomose so a presena de fezes aquosas, escuras e muito ftidas, verificando-se tambm emaciao e fraqueza marcada. O quadro clnico est associado s reaces nodulares devido presena de larvas e no presena de formas adultas no lmen do clon e cego. Assim a doena est mais associada 26

a pacientes com infeco subclnica do que a pacientes com presena de ovos nas fezes. Deste modo o diagnstico depende de uma boa interpretao dos sinais clnicos ou de achados patognomnicos necrpsia. As medidas de tratamento e controlo das esofagostomoses so as mesmas que as usadas para os restantes tricostronglideos uma vez que a sua epidemiologia idntica (Urquhart et al., 1996). 2.4. Famlia TRICHURIDAE 2.4.1. Gnero Trichuris Os nemtodes pertencentes a este gnero so dos mais fceis de identificar pois na sua forma adulta possuem um corpo em forma de chicote e encontram-se no cego e clon do hospedeiro (Anderson, 2000). Os ovos de Trichuris sp. tm forma de limo, com dois oprculos salientes, podem ser castanhos ou amarelos e apresentam um tamanho de 70 a 80 m de comprimento por 25 a 40 m de largura (Sancho, 2009). Figura 5 - Ovos de Trichuris ovis

Imagens originais com 80x38 m (amp.41x).

A forma infectante dos nemtodes pertencentes ao gnero Trichuris so as L1, que se encontram no interior do ovo e demoram cerca de um a dois meses a desenvolver-se. Aps a ingesto dos ovos os oprculos so digeridos, a larva sai e penetra no epitlio do intestino desenvolvendo-se a este nvel at ao estadio adulto (Urquhart et al., 1996). Bowman (2003) e Hidalgo Argello & Cordero del Campillo (1999c) referem que os ruminantes esto frequentemente parasitados, sendo as infeces leves regra geral assintomticas, no entanto, referem tambm que animais jovens com elevadas cargas parasitrias podem ocasionalmente sofrer hemorragias macias, muitas vezes fatais. Urquhart et al. (1996) referem que, em infeces graves, os hospedeiros sofrem uma inflamao diftrica na mucosa cecal. Esta acontece devido aco da lanceta existente na extremidade anterior do parasita, que se movimenta constantemente na sub-mucosa em busca de sangue e lquido. Corra (1976) e Hidalgo Argello & Cordero del Campillo (1999c) referem que, o parasita pode ter aco txica, atravs do uso de substncias hemolticas quando ingere sangue, causando anemia hemoltica em infeces macias. As leses causadas pelo

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parasita podem actuar como porta de entrada de outros agentes, favorecendo assim o aparecimento de infeces secundrias. Os sinais clnicos associados incluem dor abdominal, fezes estriadas com sangue, anemia e algumas vezes febre moderada. As tricurioses tm pouca relevncia uma vez que embora tenham elevada prevalncia as infeces so leves e assintomticas e os surtos isolados so raros. Os pr-benzimidazis, benzimidazis e avermectinas ou milbemicinas so altamente eficazes contra adultos de Trichuris sp. mas no so tanto contra as formas larvares. 3. Classe TREMATODA Na classe TREMATODA esto incluidas trs Ordens, MONOGENEA, ASPIDOGASTREA e DIGENEA. No mbito desta reviso sero apenas abordados os parasitas pertencentes Ordem DIGENEA. Os tremtodes adultos possuem ventosas para fixao, podendo ser encontrados nos ductos biliares, tracto digestivo e sistema vascular dos hospedeiros. Apresentam forma folicea caracterstica, sendo achatados dorsoventralmente, e o seu tracto digestivo caracteriza-se por ser incompleto, terminando em fundo de saco cego. So hermafroditas, podendo ocorrer tanto fertilizao cruzada, como autofertilizao (Urquhart et al., 1996; Bowman, 2003). O ciclo de vida dos tremtodes pertencentes Ordem DIGENEA requer um hospedeiro intermedirio. Os hospedeiros infectados eliminam ovos do parasita no meio ambiente, os quais so elipsoidais e oprculados num s plo. No ovo, o embrio transforma-se numa larva piriforme ciliada denominada miracdio. A exposio do miracdio a luz com comprimento de onda de 650 nm, estimula a produo de uma enzima proteoltica que debilita o cimento proteico responsvel pela manunteno do oprculo no seu lugar. A actividade do miracdio e a hipertonia do meio interno do ovo pressionam o oprculo e promovem a sua abertura, possibilitando a sada do miracdio, o qual necessita de encontrar e penetrar um gastrpode, a Lymnea truncatula na Fasciola hepatica e gastrpodes pertencentes aos gneros Cernuella, Cochlicella, Helicella e Monacha, entre outros, no caso de Dicrocoelium dendriticum (Vzquez, 2010). Quando o miracdio encontra o hospedeiro intermedirio, adere a este por suco e penetra nos tecidos moles com o auxlio de uma enzima citoltica. Uma vez no interior, o miracdio desenvolve-se para a forma de esporocisto, num saco alongado que contm uma srie de clulas germinativas. Estas clulas desenvolvem-se passando a chamar-se rdias, as quais migram para o hepatopncreas do gastrpode. As clulas germinativas das rdias em condies adequadas evoluem, dando origem s cercrias, os estadios finais, que so tremtodes jovens com caudas longas. Se as condies ambientais no forem as ideais, as rdias do origem a uma segunda gerao de rdias. As cercrias deixam o gastrpode depois de estimuladas por uma 28

alterao de temperatura ou de intensidade da luz. Aps abandonarem o gastrpode fixamse na vegetao, perdem a cauda e enquistam, denominando-se ento metacercrias. As metacercrias enquistadas aps serem ingeridas perdem a parede externa do quisto, atravs da mastigao e a parede interna, que digerida pela aco de enzimas no intestino. Deste modo o tremtode jovem abandona o quisto e penetra na parede do intestino delgado, onde se transforma na forma adulta (Wescott & Foreyt, 1986; Urquhart et al., 1996; Bowman, 2003; Sargison, 2008; Keiser & Utzinger, 2009). Figura 6 - Ciclo de vida de Tremtodes

Adaptado de: www.coccdia.icb.usp.br/disciplinas/BMP222/aulas/Trematoides_2011.ppt

3.1. Gnero Fasciola Os membros deste gnero so comummente conhecidos por tremtodes hepticos, pois so encontrados nos ductos biliares e parnquima heptico. Em ovinos e bovinos so responsveis por mortalidade e grande morbilidade, caracterizada por perda de peso, anemia e hipoproteinmia. Os ovos de Fasciola hepatica so ovais, operculados, amarelos e com cerca de 130 a 150 m de comprimento por 63 a 90 m de largura e os de Fasciola gigantica so semelhantes aos de F. hepatica mas maiores, com um comprimento de 190 m por 100 m de largura. A F. hepatica adulta possui forma de folha com a extremidade anterior cnica, colorao castanho-acizentada e cerca de 3,5 cm de comprimento por 1 cm de largura. A F. gigantica maior que a F. hepatica podendo atingir 7,5 cm de comprimento, sendo o seu formato mais foliceo e a sua extremidade anterior cnica mais curta (Urquart et al., 1996; Rojo Vsquez & Ferre Prez, 1999). O ciclo de vida da Fasciola hepatica e F. gigantica semelhante ao acima descrito para a classe TREMATODA, no entanto a escala de tempo difere. No caso de F. hepatica o ciclo de vida completa-se em cerca de dois a trs meses, enquanto o ciclo de vida de F. gigantica 29

 superior, com fases parasitrias mais longas, demorando o ciclo cerca de sete a oito meses a completar-se (Wescott & Foreyt, 1986). A perpetuao das fascioloses est dependente de trs factores que influenciam o desenvolvimento dos gastrpodes, sendo eles a disponibilidade de habitats, a temperatura e humidade adequados sua reproduo (Wescott & Foreyt, 1986). A fasciolose ovina pode ser aguda, sub-aguda ou crnica. A fasciolose aguda ocorre geralmente em borregos infectados pela primeira vez. Segundo Rojo Vsquez & Ferre Prez (1999), origina-se pela ingesto quase simultnea de aproximadamente mil metacercrias e segundo Urquhart et al. (1996), pela ingesto de duas mil. Rojo Vsquez & Ferre Prez (1999), referem a existncia de dois tipos de fasciolose aguda em ovinos. O primeiro tipo caracteriza-se pela existncia de 1000 a 2500 larvas no fgado, das quais 60% se encontram em migrao pelo parnquima. O segundo tipo de fasciolose aguda caracterizase pela presena de 700 a 1000 larvas imaturas no fgado, encontrando-se mais de 60% nos ductos biliares. Devido aos traumatismos causado pelo grande nmero de larvas no fgado, os animais com fasciolose aguda tendem a apresentar um quadro de anemia hemorrgica aguda, normocrmica e normoctica. A anemia pode evoluir to rapidamente que se podem observar mortes repentinas durante o perodo de pr-patncia, devido a grandes perdas sanguneas e colapso heptico. Os animais apresentam debilidade, palidez das mucosas, taquipneia e em alguns casos hepatomeglia palpvel, com dor abdominal associada e ascite. O curso desta fasciolose curto, acabando os animais por morrer ao fim de doze dias aps o aparecimento dos primeiros sintomas (Rojo Vsquez & Ferre Prez, 1999; Scott, 2007; Sargison, 2008). A fasciolose sub-aguda ocorre em ovinos que ingerem metacercrias durante longos perodos de tempo (semanas a meses), ocorrendo os surtos normalmente no fim do Outono e Inverno. Quando este tipo de fasciolose ocorre podem ser encontrados entre 500 a 1500 larvas no fgado, existindo um equilbrio entre as formas adultas e as imaturas. Os ovinos afectados perdem peso durante uma a duas semanas antes do aparecimento dos primeiros sintomas (Rojo Vsquez & Ferre Prez, 1999). Quando estes surgem, os animais ficam letrgicos, incapazes de acompanhar o rebanho, desenvolvem gradualmente uma anemia hipocrmica e macroctica e hipoproteinmia, apresentando ento palidez das mucosas, sobretudo da conjuntival, edema sub-mandibular e ascite. Podem ainda apresentar dor abdominal palpao, embora apenas um pequeno nmero apresente hepatomeglia palpvel. Podem ocorrer mortes sbitas devido a hepatite infecciosa e hemoglobinria bacilar, causadas por Clostridium novyi tipo B e D, respectivamente (Rojo Vsquez & Ferre Prez, 1999; Scott, 2007; Sargison, 2008). A fasciolose crnica a forma clnica mais frequente nos ovinos, surgindo os sinais clnicos no final do Inverno e prncipio da Primavera. Este tipo de fasciolose causado praticamente por larvas adultas, podendo ser encontradas entre 250 a 300 larvas nos ductos biliares. O 30

sintoma mais comum a perda de peso, acompanhada de anemia hemorrgica crnica, hipocrmica e macroctica, e hipoalbuminmia. Os animais apresentam palidez das mucosas e podem apresentar edema sub-mandibular e ascite nos casos mais avanados assim como fibrose heptica e colangite hiperplsica (Wescott & Foreyt, 1986; Urquhart et al., 1996; Rojo Vsquez & Ferre Prez, 1999; Scott, 2007; Sargison, 2008). Para o tratamento de fasciolose pode-se usar o triclabendazol, que remove todos os estadios larvares com mais de uma semana de idade ou rafoxanida, closantel, nitroxinil e clorsulon que removem formas com mais de quatro semanas de idade. Os anti-helmnticos usados para nemtodes como o albendazol e netobimin tambm so eficazes, no entanto necessrio o uso de uma dose superior (Urquhart et al., 1996; Scott, 2007). essencial proceder ao tratamento dos animais antes destes serem colocados em pastagens, para prevenir reinfeces, e no final das pocas de pastoreio para eliminar formas adultas que se possam eventualmente ter desenvolvido (Wescott & Foreyt, 1986). 3.2. Gnero Dicrocoelium Neste gnero encontram-se vrias espcies, entre elas o Dicrocoelium dendriticum, ubiquitrio e D. hospes e D. chinensis, apenas reportados em frica e na China, respectivamente. Os adultos de Dicrocoelium dendriticum encontram-se nos ductos biliares e vescula biliar de muitos mamferos, inclundo ruminantes (Manga Gonzlez & Quiroz Romero, 1999; Otranto & Traversa, 2002; Manga-Gonzlez et al., 2004; Manga-Gonzlez & Gonzlez-Lanza, 2005). So parasitas pequenos, quando comparados com Fasciola hepatica, medindo cerca de 5 a 12 mm de comprimento por 1,5 a 2,5 mm de largura. O seu corpo translcido, achatado dorsoventralmente e de forma lanceolada com um tero preto e vesculas vitelinas brancas bem visveis a olho n (Manga Gonzlez & Quiroz Romero, 1999; Otranto & Traversa, 2002). Os ovos so pequenos, com 38 a 45 m de comprimento por 22 a 30 m de largura. Tm forma elptica assimtrica, possuem parede grossa e um oprculo pouco visvel, de cor castanha. No seu interior possuem duas manchas redondas de cor mais intensa, dispostas transversalmente, que correspondem s massas germinais e possuem ainda um miracdio (Manga Gonzlez & Quiroz Romero, 1999; Otranto & Traversa, 2002; Sancho 2009). O ciclo de vida do Dicrocoelium dendriticum tem a particularidade de necessitar de dois hospedeiros intermedirios para se completar (um gastrpode terrestre e uma formiga do gnero Formica), demorando quase seis meses para o fazer (Otranto & Traversa, 2002). Aps ingesto do ovo pelos gastrpodes (primeiro hospedeiro intermedirio), o ovo eclode e o miracdio transforma-se em esporocisto de primeira gerao e posteriormente de segunda gerao, atravs de multiplicao assexuada, em cerca de trs a quatro meses. Os esporocistos de segunda gerao iro originar muitas cercrias (pois no existem as formas de rdia), que uma vez desenvolvidas migram do hepatopncreas para as cavidades 31

pulmonares, com a ajuda das suas caudas, produtos enzimticos e estiletes dentro das ventosas orais. As cercrias so ento expelidas em aglomerados de pelo menos 5000, envolvidas em muco, que so ingeridas pelas formigas, transformando-se depois em metacercrias no espao de um a dois meses. Uma ou duas destas metacercrias podem alojar-se no gnglio subesofgico das formigas (que cumpre as funes de crebro) e causam ataques catalpticos a temperaturas inferiores a 15C, que vo paralisar a formiga, facilitando a sua ingesto pelos ruminantes na pastagem. Uma vez no intestino delgado dos hospedeiros definitivos, as metacercrias desenquistam pela aco de enzimas duodenais e migram primeiro para os ductos biliares e depois para a vescula biliar via ducto coldoco, sem fazerem migrao para o parnquima heptico. Na vescula biliar, as metacercrias transformam-se em adultos, que se reproduzem por auto-fecundao ou fecundao cruzada. Os ovos produzidos pelos adultos so eliminados no ambiente, atravs das fezes do hospedeiro definitivo, ficando assim completo o ciclo, como est ilustrado na figura 7 (Manga Gonzlez & Quiroz Romero, 1999; Otranto & Traversa, 2002; Otranto & Traversa, 2003; Sargison, 2008). Figura 7 - Ciclo de vida de Dicrocoelium dendriticum

Ciclo de vida de Dicrocoelium dendriticum. Adaptado de: Otranto & Traversa (2003).

Bowman (2003), refere que Dicrocoelium dendriticum no causa doena clnica em bovinos e em ovinos at aos dois anos de idade, no entanto, por ter uma vida relativamente longa, a gravidade e extenso das alteraes patolgicas tendem a aumentar com o decorrer da infeco. Deste modo, os ovinos mais velhos so os mais frequentemente prejudicados,

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podendo apresentar cirrose progressiva, manifestada clinicamente por caquxia, diminuio da produo de l, diminuio da produo leiteira e envelhecimento prematuro. Manga Gonzlez & Quiroz Romero (1999), referem que os sinais clnicos da dicroceliose no so patognomnicos, estando a aco patognica do parasita condicionada pela carga parasitria infectante. Assim uma carga parasitria de at 1000 larvas no tem qualquer significado clnico, infeces com cargas parasitrias compreendidas entre as 1000 e 3000 larvas tm alguma influncia no rendimento da produo e quando a carga parasitria ultrapassa as 5000 larvas pode-se estar perante casos mais graves de dicroceliose, com maiores repercusses clnicas. No entanto Otranto & Traversa (2002), referem que animais com mais de 100 larvas j apresentam sintomatologia clnica. Animais com dicroceliose clnica podem apresentar anemia, edemas, emaciao e em casos mais graves cirrose, cicatrizes na superfcie do fgado, distenso marcada dos ductos biliares com tumefaco do fgado e colangite (Manga Gonzlez & Quiroz Romero, 1999; Otranto & Traversa, 2002; Manga-Gonzlez et al., 2004). No tratamento da dicroceliose usado com muito sucesso o netobimin na dose de 20mg/kg e albendazol, na dose de 15 a 20 mg/kg. Frmacos usados contra cstodes e nemtodes so eficazes mas em doses muito superiores (Urquhart et al., 1996). Outra forma de controlar esta doena parasitria evitar o pastoreio nas primeiras horas da manh e ltimas da tarde, por serem os momentos mais propcios para que as formigas parasitadas se encontrem nas plantas em fase de tetania (Vzquez, 2010). 4. Classe CESTODA Os cstodes so helmintes achatados dorsoventralmente, longos, com segmentos mais largos que compridos e sem pigmentos. O seu tamanho pode ir desde poucos milmetros at vrios metros de comprimento. O seu corpo constitudo por esclex, pescoo e estrbilo. O esclex esfrico e possui rgos de fixao. O pescoo encontra-se entre o esclex e o estrbilo, curto e sem segmentos e corresponde zona de crescimento. O estrbilo ou corpo composto por segmentos chamados de progltides, proglotes ou anis. Os progltides formam-se a partir do pescoo e maturam medida que se afastam do esclex. Cada progltide geralmente contm rgos reprodutores, tanto masculinos como femininos que podem ser de trs tipos: imaturos (sem rgos sexuais desenvolvidos), maduros (com rgos masculinos e femininos diferenciados) ou grvidos (apenas com tero repleto de ovos) (Sancho, 2009). Os cstodes tm um ciclo de vida indirecto, o que significa que utilizam mais que um hospedeiro. A forma adulta ou sexualmente madura do parasita hermafrodita e encontrase no hospedeiro definitivo, enquanto as formas imaturas, chamadas metacstodes, se encontram num ou mais hospedeiros intermedirios.

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4.1. Moniezia expansa e Moniezia benedeni Ambas as espcies pertencem Famlia ANOPLOCEPHALIDAE, e ao Gnero Moniezia. Os adultos de Moniezia spp. so longos, podendo ultrapassar os dois metros. Os adultos de Moniezia expansa possuem progltidos com largura at 1,5 cm e com glndulas interproglotidianas em toda a largura, enquanto os de Moniezia benedeni podem chegar aos 2,5 cm com glndulas interproglotidianas apenas na zona central (Urquhart et al., 1996). Sancho (2009), refere que os ovos de M. expansa so muito caractersticos, medindo cerca de 50 a 60 m. Tm forma triangular, com cpsula grossa refringente e com a oncosfera no seu interior rodeada pelo aparelho piriforme. Os ovos de M. benedeni so semelhantes, mas possuem forma quadrangular e so ligeiramente maiores (80 a 90 m).

Figura 8 - Ovos de Moniezia expansa e M. benedeni a) Moniezia expansa b) Moniezia benedeni

Fotografias originais: a) 70x68 m (amp.37x); b) 72x72 m (amp.36x)

O ciclo de vida de Moniezia spp. tem duas fases, a fase endgena e exgena. O ciclo comea na fase endgena quando os ruminantes ingerem erva com caros oribatdeos infectados com um cisticercide. O desenvolvimento deste dentro do hospedeiro definitivo leva cerca de um a dois meses, tempo durante o qual o cisticercide por digesto do caro se liberta e se fixa parede intestinal atravs do protoescolx, onde se comea a transformar em adulto. Uma vez completamente desenvolvida, a forma adulta produz ovos por autofecundao, que se desenvolvem dentro do progltide. Na extremidade do corpo do parasita, os progltides contendo ovos maduros soltam-se (sozinhos ou em grupos) e so excretados nas fezes do hospedeiro, desintegrando-se no exterior e libertando os ovos com uma oncosfera (larva de primeira gerao) no seu interior. Os ovos podem ser tambm excretados soltos nas fezes, sendo necessria a sua libertao do progltide, pela desintegrao deste no intestino. Uma vez no exterior, o ciclo entra na fase exgena, com a ingesto dos ovos pelo hospedeiro intermedirio (caros coprfagos oribatdeos). Uma vez ingeridos, verifica-se a ecloso do ovo com libertao da oncosfera, que perfura o intestino e migra para a cavidade abdominal onde num perodo de dois a seis meses se vai desenvolver at dar origem a uma larva cisticercide (larva de segunda gerao). O ciclo de vida completa-se quando um hospedeiro definitivo ingere o caro oribatdeo contendo a larva cisticercide. No caso de M. expansa, os primeiros ovos so excretados nas fezes do 34

hospedeiro definitivo, quatro a seis semanas aps a infeco (Ramajo Martn & Muro Alvarez, 1999; Sargison, 2008; Sancho, 2009). Urquhart et al. (1996) e Scott (2007), referem que infeces causadas por adultos de Moniezia spp. so pouco patognicas, uma vez que estas se alimentam do contedo intestinal do hospedeiro. Os animais com infeces macias podem apresentar reduo de ganhos mdios dirios, depresso, diarreia e at mesmo obstruo intestinal, no entanto, no foi possvel demonstrar experimentalmente efeitos clnicos substanciais, mesmo com cargas parasitrias elevadas (Urquhart et al., 1996; Ramajo Martn & Muro Alvarez, 1999). Para o tratamento destas parasitoses so usados frmacos do grupo dos benzimidazis (Scott, 2007) ou derivados das quinolonas, como a niclosamida e o praziquantel, sendo este o medicamento de eleio (Ramajo Martn & Muro Alvarez, 1999). Bowman (2003) refere que a renovao das pastagens importante, uma vez que destri as camadas de hmus e assim o habitat dos caros oribatdeos (hospedeiros intermedirios do parasita).

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V - Contribuio pessoal para o conhecimento das Parasitoses Gastrointestinais em exploraes de ovinos no Ribatejo-Portugal

1. Coccidioses e helmintoses em exploraes ribatejanas de ovinos em regime extensivo e intensivo 1.1. Introduo O parasitismo e as doenas parasitrias reduzem a produtividade em exploraes de ovinos, impondo-se a execuo de programas de controlo contra estas infeces. Para tal, necessrio o conhecimento detalhado das espcies destes parasitas, as respectivas cargas parasitrias e a sua prevalncia. Os objectivos deste estudo foram determinar e comparar a frequncia das espcies parasitrias existentes em duas exploraes do concelho de Benavente e uma do concelho de Vila Franca de Xira em regime extensivo e intensivo, assim como os nveis de eliminao nas mesmas exploraes. 1.2. Material e mtodos 1.2.1. Exploraes e animais Este estudo foi efectuado entre Maro e Julho de 2011, em duas exploraes no concelho de Benavente, uma em regime extensivo e outra em regime intensivo, e numa explorao em regime extensivo pertencente ao concelho de Vila Franca de Xira. A escolha destas exploraes prendeu-se com o facto de serem motivo de visita frequente e alm disso eram representativas dos diferentes sistemas de produo ovina da zona. Uma das exploraes de regime extensivo localizava-se em Malhada de Meias (E.M.M.), com as coordenadas de latitude, 3844'39.12"N e de longitude 847'9.87"W. No momento da primeira colheita, os borregos tinham sido desparasitados h cerca de dois meses, e os adultos h cerca de seis. A outra explorao em regime extensivo localizava-se na Lezria de Vila Franca (E.C.V.F.), com as coordenadas de latitude 3853'28.55"N e de longitude 857'57.84"W, tendo os animais, no momento da colheita, sido desparasitados h cerca de seis meses. Em ambas as exploraes os animais de todas as faixas etrias eram mantidos na pastagem durante todo o ano e no lhes era fornecida qualquer suplementao alimentar. A explorao de regime intensivo era uma explorao de engorda de borregos (E.P.A.), localizada no Porto Alto com as coordenadas de latitude 3854'45.12"N e de longitude 851'30.21"W. Os borregos entraram na explorao com cerca de ms e meio de idade onde foram desparasitados pela primeira vez, desconhecendo-se a sua situao sanitria no perodo anterior sua entrada na explorao. A sua alimentao era base de rao constituda por 16% de protena bruta, 5,07% de fibra bruta, 2,65% de matria gorda bruta e 5,57% de cinza bruta. 36

O mapa da figura 9 mostra a localizao das trs exploraes.

Figura 9 - Localizao geogrfica das exploraes em estudo

Adaptado de Google Earth www.googleearth.com

1.2.2. Delineamento experimental e amostragem Para se proceder avaliao parasitria das exploraes em estudo, foi efectuada a colheita de fezes de forma directa, por toque rectal. Nos casos em que tal no foi possvel, foi efectuada a colheita de fezes recentes a partir do solo. As amostras fecais foram colhidas com luvas de borracha, colocadas em sacos de plstico prprios e mantidas temperatura de refrigerao at serem transportados para o laboratrio onde foram armazenadas a 4C. As amostras fecais foram analisadas no mximo 24 horas aps a colheita. Uma das exploraes, localizada na Lezria de Vila Franca (E.C.V.F.), era constituda por cerca de quinze animais com idades compreendidas entre os seis meses e os nove anos. Nesta explorao as amostras foram colhidas individualmente a todos os animais por toque rectal e foram processadas cinco subamostras da amostra conjunta. A explorao localizada em Malhada de Meias (E.M.M.) era constituda por cerca de 800 animais. As colheitas foram efectuadas nos adultos desta explorao de forma aleatria, para que a amostra fosse representativa da explorao. No entanto, as amostras dos borregos foram colhidas em todos por toque rectal. Na primeira colheita efectuada nesta explorao foram processadas vinte amostras, dez de adultos e dez de borregos, resultando estas amostras da homogeneizao do total de fezes colhidas para cada grupo. Os borregos foram desparasitados aps a colheita com dois desparasitantes diferentes 37

(Netobimin, Hapasil e Diclazurilo, Vecoxan), optando-se nos adultos pela no desparasitao uma vez que as fmeas se encontravam em gestao avanada, para evitar desta forma problemas devido ao stress causado pelo maneio. Na segunda colheita, efectuada passados dois meses, foram processadas dez amostras, cinco de adultos e cinco de borregos. A explorao localizada no Porto Alto (E.P.A.) era uma engorda de borregos constituda por 300 animais, dos quais foram estudados 20, seleccionados aleatoriamente. Estes foram separados em dois grupos, constitudos por cinco fmeas e cinco machos cada. Um dos grupos, ao qual no foi administrado desparasitante, foi designado de grupo Controlo, e o outro grupo ao qual foram administrados dois tipos diferentes de desparasitante (Netobimin, Hapasil e Diclazurilo, Vecoxan) foi designado grupo de Estudo. Em ambos os grupos as amostras foram colhidas por toque rectal e do conjunto de fezes de cada grupo e aps homogeneizao foram processadas cinco subamostras. 1.2.3. Processamento das amostras Para a deteco de ovos de nemtodes, cstodes, tremtodes e de coccdias nas amostras, foram efectuadas tcnicas de flutuao e sedimentao com acar (Mtodo de Hoffmann) como as descritas por Ueno & Gonalves (1998). O grau de contaminao foi determinado pela contagem de ovos por grama de fezes atravs da tcnica de McMaster, descrita por Madeira de Carvalho, Meireles & Fonseca (2008). Para a avaliao do grau de parasitismo em ovinos utilizou-se a classificao proposta por Hansen & Perry (1990) (citado por Mederos et al. 2010), descrita na tabela 2 abaixo apresentada. Tabela 2 - Escala para classificao de cargas parasitrias Contagens de OPG < 500 500 1500 > 1500 Grau de Parasitismo Leve Moderado Grave

As coproculturas de nemtodes gastrointestinais foram efectuadas segundo a tcnica de Madeira de Carvalho (2001) com durao de doze dias e a sua identificao foi efectuada segundo Wyk et al. (2004), a um mnimo de cem larvas. As coproculturas de coccdias de Eimeria foram efectuadas com a adio de uma soluo a 2% de dicromato de potssio para evitar crescimento de fungos e bactrias. Estas foram colocadas na estufa a 26-28C, durante sete dias, e a sua identificao morfolgica foi efectuada segundo Dittmar et al. (2009) e a Bayer HealthCare (2008). Foi ainda efectuada a tcnica de Ritchie como a

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descrita por Fayer & Xiao (2008) e esfregaos fecais para a deteco de Cryptosporidium sp. (Martins, Sousa, Madeira de Carvalho, Bacelar & Cannas da Silva, 2007). 1.2.4. Anlise de dados A anlise estatstica dos dados gerados, foi efectuada de forma descritiva, grfica e inferencial, recorrendo a medidas de tendncia central e de disperso, grficos diversos e testes estatsticos. Para o efeito, foram utilizados os softwares Microsoft Excel 2007 e R, verso 2.9.0 (disponvel em: www.r-project.org). Na anlise estatstica inferencial foram usados os testes no paramtricos de Wilcoxon, Mann-Whitney e Friedman. O teste de Wilcoxon (Wilcoxon matched-pairs signed-ranks test) um teste que compara dois grupos emparelhados. O teste Mann-Whitney (Wilcoxon rank sum test) um teste que compara dois grupos no emparelhados e o teste de Friedman um teste que permite a comparao de trs ou mais grupos emparelhados. Nos testes estatsticos realizados consideraram-se estatisticamente significativos efeitos com valor de p igual ou inferior a 0,05. 1.3. Resultados Os ovinos da explorao E.C.V.F. apresentavam uma carga parasitria baixa, expressa em contagens de ovos por grama de fezes (OPG) para os EGI e em contagem de oocistos por grama de fezes para as coccdias do gnero Eimeria. Os nveis de eliminao de OPG em 50% das anlises estavam compreendidos entre os 200 e 350, com um valor mediano de 275 OPG. Atravs da elaborao de coproculturas de EGI com 2,08 L3 por grama de fezes, o que equivale a um rendimento de 0,76%, aferiu-se que 56% dos EGI pertenciam ao gnero Trichostrongylus, 24% ao gnero Teladorsagia e 20% ao gnero Strongyloides (grfico 2). Foram, no entanto, identificados ovos de Nematodirus spp. nas cmaras de McMaster, embora no tenham sido identificados na observao das coproculturas.

Grfico 1 e Grfico 2 - Distribuio ordenada de cargas parasitrias e frequncia relativa (%) das espcies de EGI identificados na E.C.V.F.

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As contagens de oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes foram de 300 e 375 em 50% das anlises com um valor mediano de 350 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes. Estes dados podem ser observados na distribuio ordenada das cargas parasitrias, representadas no grfico 3. Aps a anlise das coproculturas realizadas especificamente para os oocistos de Eimeria spp., constatou-se que a espcie mais frequente foi a Eimeria bakuensis seguida da E. ahsata, da E. parva e da E. ovinoidalis, com 45,54%, 24,11%, 16,07% e 4,46%, respectivamente (grfico 4).

Grfico 3 e Grfico 4 - Distribuio ordenada de cargas parasitrias e frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. identificadas na E.C.V.F.

Grfico 4 - Frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. identificadas. int Eimeria intrincata; ahs Eimeria ahsata; bak Eimeria bakuensis; c/w Eimeria crandalis/weybridgensis; gra Eimeria granulosa; fau Eimeria faurei; ovi Eimeria ovinoidalis; mar Eimeria marsica; par Eimeria parva; pal Eimeria pallida.

Foram tambm identificados nos exames coprolgicos realizados alguns parasitas de outros gneros e espcies, apresentados na tabela 3.

Tabela 3 - Outras espcies de parasitas identificadas na E.C.V.F.

Colheita 1 Faixa etria A Cryptosporidium sp. Trichuris ovis Fasciola hepatica Dicrocoelium dendriticum Moniezia benedeni Moniezia expansa Nematodirus spp.

Faixa etria: A - Adultos

A anlise coprolgica respectiva primeira colheita efectuada na E.M.M., revelou uma enorme quantidade e diversidade de parasitas existentes, entre eles, EGI, coccdias tanto de Eimeria spp. como de Cryptosporidium sp., cstodes e ainda tremtodes da espcie Dicrocoelium dendriticum, como mostra a tabela 4.

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Tabela 4 - Algumas espcies de parasitas identificadas na E.M.M.

Colheita Grupo BaD A BPD A Cryptosporidium sp. Trichuris ovis Fasciola hepatica Dicrocoelium dendriticum Moniezia benedeni Moniezia expansa Nematodirus spp.

Grupo: A Adultos; BaD Borregos antes da administrao de desparasitante; BPD - Borregos aps administrao de desparasitante

Como possvel visualizar nos grficos de distribuio ordenada 5 e 6 abaixo apresentados, na primeira colheita os adultos apresentavam contagens elevadas de OPG com um mximo de 3500 e um mnimo de 1150, e o valor mediano era de 1700. Das cargas parasitrias analisadas, 50% encontravam-se entre os 1500 e 2350 OPG. Foram tambm observadas cargas semelhantes de oocistos de Eimeria spp., com um valor mediano de 2425 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes, valores mnimos e mximos de 1200 e 3000, respectivamente. Os valores de cargas parasitrias encontravam-se em 50% dos casos entre 1600 e 2500 oocistos por grama de fezes. Os jovens apresentavam cargas parasitrias superiores s dos adultos, com 50% dos animais apresentando valores de OPG compreendidos entre 2200 e 3200, com medies mnimas de 2100 OPG e mximas de 4400 OPG, e um valor mediano de 2375. Na populao de borregos, em 50% dos animais, foram determinados valores compreendidos entre 9750 e 10700 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes, com um valor mediano de 10300. Foram ainda feitas medies mnimas de 9475 e mximas de 12100 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes. No Grfico 6 est ainda representado um outlier com um valor de 13750. Grfico 5 e Grfico 6 Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais e oocistos de Eimeria spp. em animais de diferentes faixas etrias, pr e ps colheita, na E.M.M.

Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais e oocistos de Eimeria spp. em animais de diferentes faixas etrias, pr e ps desparasitano. A1 Adultos primeira colheita; A2 Adultos segunda colheita; BaD Borregos pr-desparasitao; BPD Borregos ps-desparasitao

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As coproculturas realizadas para a identificao das larvas correspondentes aos OPG de EGI e dos oocistos de Eimeria spp. demonstraram que as espcies mais frequentes de Estrongilideos Gastrointestinais nos adultos pertenciam aos gneros Trichostrongylus e Strongyloides, com valores percentuais de 40 e 33,5 respectivamente. Seguiram-se os gneros Teladorsagia com 12,5% e Haemonchus com 11,4% dos EGI identificados, como se pode ver no grfico 7. Os gneros menos frequentes foram Chabertia, Cooperia e Oesophagostomum. Relativamente s espcies de oocistos do gnero Eimeria, como possvel observar no grfico 8, as espcies mais frequentes foram Eimeria granulosa (20%), seguida de E. bakuensis (19%), E. ovinoidalis (14%), E. ahsata (13%) e de E. parva e E. crandalis/weybridgensis (12%). As eimerias menos frequentes foram as E. faurei (4%), E. marsica (5%) e E. pallida (1%). A E. intricata no foi identificada nos adultos. Grfico 7 e Grfico 8 - Frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. e das espcies de Estrongilideos Gastrointestinais identificadas nos adultos da E.M.M.

Frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. e das espcies de Estrongilideos Gastrointestinais identificadas nos adultos. int Eimeria intrincata; ahs Eimeria ahsata; bak Eimeria bakuensis; c/w Eimeria crandalis/weybridgensis; gra Eimeria granulosa; fau Eimeria faurei; ovi Eimeria ovinoidalis; mar Eimeria marsica; par Eimeria parva; pal Eimeria pallida.

Nos borregos, como possvel verificar nos grficos 9 e 10, o Strongyloides sp. foi a espcie mais frequente, com um valor percentual de 93,7. A segunda espcie mais frequente foi Trichostrongylus spp. com apenas 4,7% seguida de Teladorsagia spp. com 0,7%. A espcie Cooperia spp. no foi identificada na respectiva coprocultura, sendo que as restantes espcies identificadas variaram entre 0,1% e 0,7%. Relativamente s espcies de Eimeria spp., as mais frequentes foram as E. bakuensis (23%) e E. parva (16%) e as menos frequentes as E. intricata e E. granulosa, ambas com 3%. As restantes espcies, E. crandalis/weybridgensis, E. ovinoidalis, E. marsica, E. ahsata, E. faurei, e E. pallida representavam respectivamente, 13%, 11%, 10%, 9%, 6% e 6% do total.

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Grfico 9 e Grfico 10 - Frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. e das espcies de Estrongilideos Gastrointestinais identificadas nos borregos da E.M.M.

Frequncia relativa (%) das espcies de Eimeria spp. e das espcies de Estrongilideos Gastrointestinais identificadas nos borregos. int Eimeria intrincata; ahs Eimeria ahsata; bak Eimeria bakuensis; c/w Eimeria crandalis/weybridgensis; gra Eimeria granulosa; fau Eimeria faurei; ovi Eimeria ovinoidalis; mar Eimeria marsica; par Eimeria parva; pal Eimeria pallida.

A segunda colheita na E.M.M. realizada cerca de dois meses aps a primeira colheita, mostrou uma reduo considervel na diversidade de parasitas. Nos adultos apenas o Trichuris ovis foi encontrado e nos borregos o Nematodirus spp., como possvel verificar na tabela 4 anteriormente referida. Nas anlises coprolgicas efectuadas s amostras colhidas na segunda visita explorao, os adultos apresentavam valores inferiores aos da primeira colheita. As diferenas entre os valores de OPG e de oocistos de Eimeria spp. registados nas duas colheitas no foram significativas (v=14; p=0,13 para p<0,05 e v=15; p=0,06 para p<0,05, respectivamente). Como possvel observar nos grficos 5 e 6 anteriormente apresentados, os nveis de oocistos de Eimeria spp. estavam prximos de zero, com um mximo de 50 oocistos por grama de fezes. Os nveis de OPG atingiram um mximo de 1600, um mnimo de 200 e um valor mediano de 900, com 50% dos valores entre 400 e 1400 OPG. Os borregos apresentaram um aumento nas contagens de OPG comparativamente com a primeira colheita, embora este aumento no tenha sido significativo (v=6; p=0,81 para p<0,05), com um valor da mediana de 3350, um mximo de 3950 e um mnimo de 2700. Do total de valores obtidos nas contagens, 50% encontravam-se entre 3050 e 3750 OPG. Todavia estamos a falar de um aumento ps desparasitao, quando devia ocorrer uma reduo do OPG, situao que discutiremos mais frente. Embora a diminuio nos nveis de oocistos de Eimeria spp. entre as duas colheitas parea significativo pela observao dos grficos de distribuio normal 5 e 6, os dados no permitem transpor esta anlise para a populao uma vez que os valores de p no foram significativos (v=15; p=0,06 para p<0,05). Verificou-se que 50% das contagens encontravam-se entre 3400 e 6200 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes, com um mximo de 6450, um mnimo de 1600 e um valor da mediana de 4400. Na explorao intensiva do Porto Alto, os animais do grupo Estudo e do grupo Controlo apresentavam na primeira colheita infeces baixas por EGI, com valores medianos de 250 43

OPG e 200 OPG respectivamente, no entanto no grupo Estudo, 50% das contagens de OPG encontravam-se entre 150 e 350, com valores mnimos de 150 OPG e valores mximos de 400 OPG. No grupo Controlo 25% das contagens apresentaram valores de OPG compreendidos entre 200 e 450, com uma contagem mxima de 500 OPG e mnima de 100 OPG. A elaborao de coproculturas para EGI com 0,94 L3 por grama de fezes correspondentes a um rendimento de 0,36% demonstrou que 100% dos ovos de EGI eram de Srongyloides sp.. Os grficos 11 e 12 permitem visualizar o atrs referido. Grfico 11 e Grfico 12 Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais no grupo de Estudo e Controlo e espcies identificadas na E.P.A.

Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais no grupo de Estudo e Controlo e espcies identificadas nas respectivas coproculturas. Estudo D0 Grupo de Estudo, colheita efectuada no dia zero; Controlo D0 Grupo Controlo, colheita efectuada no dia zero.

Quanto aos oocistos do gnero Eimeria, o grupo Controlo apresentava um valor mediano de 18000 por grama de fezes e 75% dos valores das contagens encontravam-se entre 16800 e os 18050 oocistos por grama de fezes. No grupo de Estudo, os valores das contagens encontravam-se entre 12700 e 14400 oocistos por grama de fezes, com excepo de dois outliers. O valor mediano foi de 13700 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes. Como possvel visualizar nos grficos 13 e 14, as coproculturas realizadas para a determinao das espcies existentes mostraram que a Eimeria parva a mais frequente, seguida da E. bakuensis e E. faurei com valores percentuais de 32,2, 22,83 e 14,98, respectivamente. As espcies menos frequentes foram a E. pallida e a E. intricata com valores de 0,08% e 0,16% respectivamente. A E. granulosa no foi identificada nesta explorao.

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Grfico 13 e Grfico 14 - Nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. no grupo de Estudo e Controlo e espcies identificadas na E.P.A.

Nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. no grupo de Estudo e Controlo e espcies identificadas nas respectivas coproculturas. Estudo D0 Grupo de Estudo, colheita efectuada no dia zero; Controlo D0 Grupo Controlo, colheita efectuada no dia zero; int Eimeria intrincata; ahs Eimeria ahsata; bak Eimeria bakuensis; c/w Eimeria crandalis/weybridgensis; gra Eimeria granulosa; fau Eimeria faurei; ovi Eimeria ovinoidalis; mar Eimeria marsica; par Eimeria parva; pal Eimeria pallida.

Nesta explorao foram ainda encontrados oocistos de Cryptosporidium sp. e ovos de Moniezia expansa em ambos os grupos, como ilustra a tabela 5.

Tabela 5 - Outras espcies de parasitas identificadas na E.P.A.

Colheita Grupo Estudo 1 Controlo Cryptosporidium sp. Trichuris ovis Fasciola hepatica Dicrocoelium dendriticum Moniezia benedeni Moniezia expansa Nematodirus spp.

Como possvel verificar no grfico de distribuio ordenada 15 a seguir apresentado, os borregos da explorao extensiva (E.M.M.) apresentaram valores de eliminao de OPG superiores aos dos borregos em regime intensivo (E.P.A.), sendo esta diferena estatisticamente significativa (v=55; p = 0,002 para p<0,05). Quanto aos nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp., os borregos da explorao extensiva (E.M.M.) diferiram dos borregos em regime intensivo (E.P.A.), com valores inferiores nos primeiros (ver grfico 16), sendo esta diferena estatisticamente significativa (v=2; p=0,006 para p<0,05).

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Grfico 15 e Grfico 16 - Nveis de eliminao de EGI e oocistos de Eimeria spp. de borregos em regime extensivo e intensivo pr-tratamento.

1.4. Discusso de resultados Os animais da E.C.V.F. (adultos) apresentavam-se pouco parasitados por EGI, sendo os mais frequentemente identificados Trichostrongylus spp. (56%), Teladorsagia spp. (24%) e Strongyloides sp. (20%). Urquhart et al. (1996), Bowman (2003) e Sancho (2009) referem que a espcie Teladorsagia spp. a principal causadora de gastroenterite parasitria em ruminantes, e Urquhart et al. (1996) referem tambm que o Trichostrongylus spp. um dos parasitas envolvidos na chamada gastroenterite parasitria ovina. Embora neste estudo os animais se encontrassem parasitados por estas espcies, no apresentavam sinais clnicos, o que provavelmente ser devido baixa carga parasitria que possuam na altura da colheita, que no seria suficiente para originar doena clnica. Os baixos nveis de eliminao de parasitas nesta explorao so provavelmente devidos ao muito baixo encabeamento por hectare associado a um bom maneio e estratgia de controlo de parasitoses pelo produtor. Na E.M.M., os adultos encontravam-se altamente parasitados, com presena de uma vasta variedade de parasitas e elevados nveis de OPG, tendo os gneros mais frequentes de EGI sido Trichostrongylus (40%) e Strongyloides (33,5%), seguidos de Teladorsagia (12,5%). Os animais apresentavam-se com perda de peso e alteraes no velo, apresentando alguns ainda diarreia e desidratao, sinais clnicos sugestivos de parasitose gastrointestinal. Nowosad, Malczewski, Skalska, Fudalewicz-Niemczyk & Gawor (2000), referem num estudo realizado na Polnia, que as espcies de EGI mais frequentes em ovinos pertencem aos gneros Haemonchus, Teladosargia, Trichostrongylus, Cooperia e Nematodirus; j Mederos et al. (2010), num estudo realizado no Canad, referem que as espcies mais frequentes em ovinos adultos e borregos pertencem aos gneros Teladorsagia, Haemonchus e Trichostrongylus e Al-Shaibani, Phulan, Arijo & Qureshi (2008) referem num estudo realizado no Paquisto, as espcies dos gneros Haemonchus, Trichostrongylus, Teladorsagia e Strongyloides como as mais frequentes em ovinos adultos em modo de produo extensivo. Os resultados obtidos nestas duas exploraes esto assim de acordo com os dados referidos na bibliografia consultada, excepto para Strongyloides sp. que

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representam em ambas as exploraes uma elevada percentagem relativa do total de EGI, no sendo contudo referida como espcie maioritria na bibliografia.

Os animais da E.C.V.F. (adultos) apresentavam-se tambm parasitados por Eimeria spp., no evidenciando, no entanto, sinais clnicos associados a coccidiose. Este achado vai ao encontro do referido por Foreyt (1986), que afirma que ovinos adultos se encontram frequentemente parasitados por Eimeria spp. sem apresentarem sintomatologia clnica, funcionando como reservatrios, pois tendem a excretar sem manifestarem doena. A espcie de Eimeria spp. mais frequentemente identificada foi a Eimeria bakuensis (45,54%), seguida da E. ahsata (24,11%) e da E. parva (16,07%). Estes resultados so semelhantes aos descritos por Barutzki, Marquardt & Gothe (1990) num estudo efectuado na Alemanha e por Wang et al. (2010) num estudo efectuado na China, e concordam parcialmente com os resultados apresentados por Bakunzi, Thwane, Motsei & Dzoma (2010), que referem como sendo mais frequentes as espcies E. bakuensis, E. crandallis/weybridgensis e E. ahsata. J nos ovinos adultos da E.M.M., os oocistos do gnero Eimeria mais frequentes pertenciam s espcies E. granulosa (20%), E. bakuensis (19%) e E. ovinoidalis (14%), o que contraria os resultados apresentados num estudo efectuado na Alemanha por Barutzki, Marquardt & Gothe (1990), em que as contagens de E. granulosa tiveram menor frequncia relativamente s restantes. A presena de parasitas pertencentes ao Gnero Moniezia em ambas as exploraes sugere a existncia de contaminao das pastagens por caros oribatdeos. Na E.M.M. os animais encontravam-se tambm parasitados por Trichuris ovis, que segundo Hidalgo Argello & Cordero del Campillo (1999c) e Bowman (2003) parasitam frequentemente ruminantes, sendo estes portadores assintomticos. Foram tambm encontradas as espcies Dicrocoelium dendriticum (o que sugere a existncia de gastrpodes e formigas na pastagem), Cryptosporidium sp. (parasita jovens borregos e adultos geralmente

imunodeprimidos) e ainda Nematodirus spp.. Esta alta variedade e quantidade de parasitas registadas na E.M.M. pode ser devida ao perodo de gestao e de lactao em que o rebanho se encontrava, perodo no qual os animais apresentam uma quebra na imunidade devida a alteraes endcrinas, reflectindose esta numa alterao hospedeiro/parasita (Gibbs, 1986), com aumentos nas quantidades de ovos excretados. Os elevados nveis de eliminao podem tambm ser justificados pelo alto encabeamento por hectare (que promove uma maior contaminao das pastagens), pelo facto de os animais serem apenas desparasitados uma ou duas vezes por ano (o que segundo Pedreira et al. (2006) no provoca qualquer reduo nos valores de OPG) e ainda pelo facto de apenas ter sido administrada uma dose de desparasitante (segundo Fleming et al. (2006) a eficcia deste aumenta de 50% para 92% quando administrado com doze horas

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de intervalo) e de no ter sido retirada a alimentao 24 horas antes da administrao (o que aumentaria a disponibilidade e eficcia do frmaco). O facto da E.C.V.F. e da E.M.M., duas exploraes com o mesmo sistema de produo (extensivo), terem nveis de eliminao de ovos de EGI e de oocistos de Eimeria spp. to diferentes, dever-se- fundamentalmente ao grau de contaminao das pastagens (na E.M.M. o encabeamento por hectare era bastante superior ao da E.C.V.F.), ao estado fisiolgico (na E.M.M. quase todos os adultos se encontravam em fase peri-parto e na E.C.V.F. no) e idade dos animais (a E.C.V.F. era constituda s por adultos e a E.M.M. tinha muitos borregos) sugerindo tambm ms prticas de maneio e no aplicao de medidas estratgicas de controlo de parasitoses na E.M.M..

Na E.M.M. foi efectuada uma segunda colheita cerca de dois meses aps a primeira, na qual os adultos apresentavam valores de OPG e de oocistos de Eimeria spp. inferiores aos da primeira colheita, prximos de zero nestes ltimos, bem como uma reduo considervel nos restantes parasitas, tendo sido apenas identificado o Trichuris ovis. O facto de na altura da primeira colheita os adultos serem constitudos maioritariamente por fmeas gestantes ou em perodo puerperal (encontrando-se assim numa situao de baixa imunidade e stress) pode justificar o maior nvel de OPG em relao segunda colheita, bem como a presena de Cryptosporidium sp. (Santn & Trout, 2008), pois nestas situaes os animais ficam mais susceptveis a parasitoses (Urquhart et al., 1996). possvel que na segunda colheita a ausncia de Cryptosporidium sp. e at de outros parasitas, assim como a grande diminuio de oocistos de Eimeria spp., se deva ao aumento natural da imunidade materna posterior ao parto (Urquhart et al., 1996; Pedreira et al., 2006).

Quanto aos animais jovens, na E.M.M., tambm apresentavam altos nveis de eliminao de parasitas, tendo sido Strongyloides sp. (93,7%) a espcie mais frequente de EGI, seguida de Trichostrongylus spp. (4,7%) e Teladorsagia spp. (0,7%). Estes resultados esto parcialmente de acordo com os apresentados por Crespo & Jorge (1996), que referem Teladorsagia spp., Trichostrongylus spp. e Strongyloides sp. como as espcies mais frequentes em animais com idades compreendidas entre os seis e doze meses, provenientes do Ribatejo e Alentejo, no entanto, as frequncias so bastante diferentes. Mederos et al. (2010), num estudo realizado no Canad, referem que as espcies mais frequentes em borregos, tal como nos adultos, pertencem aos gneros Teladorsagia, Haemonchus e Trichostrongylus. Relativamente s espcies de Eimeria spp., as mais frequentemente identificadas nos borregos da E.M.M. foram as E. bakuensis (23%), E. parva (16%) e E.

crandallis/weybridgensis (13%). Estes resultados esto de acordo com os apresentados por Paredes (2010), que refere as E. bakuensis, 48 E. parva, E. ahsata e E.

crandallis/weybridgensis como as mais frequentes em borregos criados em regime extensivo. Foram tambm identificados parasitas do Gnero Moniezia, nomeadamente Moniezia expansa, o que sugere a contaminao das pastagens por caros oribatdeos.

Na colheita efectuada cerca de dois meses aps desparasitao, os borregos apresentaram uma diminuio nos nveis de oocistos de Eimeria spp., no entanto, verificou-se um aumento nas contagens de OPG comparativamente primeira colheita. provvel que o aumento de OPG nos borregos entre a primeira e segunda colheitas, mesmo aps administrao de desparasitante se deva ao facto de os adultos, por no terem sido desparasitados, terem continuado a excretar ovos de EGI de tal modo que o desparasitante contra EGI administrado no tenha conseguido diminuir a carga parasitria, nem prevenir a recontaminao dos borregos, traduzindo-se num aumento da carga de OPG. Por outro lado, este resultado pode ser explicado com base num estudo efectuado por Pedreira et al. (2006), que referem que protocolos anti-parasitrios de uma ou duas desparasitaes no tm efeito nos valores de OPG. A diminuio na carga de oocistos de Eimeria spp. deve-se certamente ao desparasitante administrado, assim como ao desenvolvimento de imunidade trans-especifica associada ao crescimento (Barutzki, Marquardt, & Gothe, 1990). Houve tambm uma reduo considervel na diversidade de parasitas, sendo apenas identificado na segunda colheita o Nematodirus spp., o que sugere resistncia no ambiente ou que o princpio activo do desparasitante utilizado no foi o mais adequado.

Apesar da presena de ovos de Nematodirus spp., o no aparecimento de formas larvares nas coproculturas pode dever-se ao facto de os ovos deste parasita para eclodirem, terem de ser submetidos a temperaturas inferiores a 10C e posteriormente a temperaturas superiores a 11C (cessando a ecloso acima dos 17C), tendo a ecloso maior sucesso quando expostos a temperaturas inferiores a 4C durante um perodo de quatro semanas. Estes pr-requisitos no foram cumpridos pois as coproculturas foram efectuadas a 26C, e os ovos expostos a temperaturas inferiores a 10C durante muito pouco tempo, sendo assim justificada a no ecloso dos ovos de Nematodirus spp. como referem van Dijk & Morgan (2010).

Quanto aos borregos da explorao intensiva de engorda (E.P.A.), estes apresentavam-se levemente parasitados por EGI, pertencentes na sua totalidade ao gnero Strongyloides (totalidade dos ovos de EGI que eclodiram atravs da coprocultura elaborada). Mederos et al. (2010) referem que as espcies de EGI mais frequentes pertencem aos gneros Teladorsagia, Haemonchus e Trichostrongylus.

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Os animais encontravam-se parasitados por Eimeria spp., sendo as mais frequentes Eimeria parva (32,20%) seguida de E. bakuensis (22,83%) e de E. faurei (14,98%). Estes resultados esto de acordo com os apresentados por Paredes (2010), que refere estas trs espcies como as mais frequentes em borregos criados em regime intensivo e parcialmente de acordo com Dittmar et al. (2010), que referem estas trs espcies como as mais frequentes contudo precedidas pela E. ovinoidalis, que embora tenha sido identificada na E.P.A. teve uma frequncia inferior. importante referir ainda, que no foi identificada nesta explorao a E. granulosa, resultado que corrobora os de Paredes (2010), que num estudo realizado no Alentejo no encontrou esta espcie em borregos em regime intensivo. Uma vez que desconhecida a situao sanitria no perodo anterior entrada dos borregos na explorao, no possvel aferir quanto ao baixo nvel parasitrio relativamente a EGI que os animais possuam. possivel que estes tenham sido desparasitados nas exploraes precedentes, uma vez que possuam um leve grau de infeco, no entanto, a presena de Strongyloides sp. e M. expansa sugere que estes no tenham sido desparasitados, pois regra geral os desparasitantes usados so anti-helmnticos que actuam em nemtodes e tambm em cstodes. tambm possvel que a infeco leve por EGI se deva ao facto de que na altura em que os borregos foram retirados da pastagem, ainda se encontrarem em fase de amamentao, no se alimentando de erva e estando assim menos sujeitos contaminao oral. Quanto aos nveis de oocistos de Eimeria spp. possvel que os borregos tenham sido infectados por contacto directo, atravs da pastagem onde nasceram e atravs dos beres das mes, pois as coccidioses nas fmeas adultas tendem a ocorrer aps o parto, em situaes de imuno-depresso e stress (Gibbs, 1986; Bowman, 2003). Uma vez que os borregos em condies de campo se infectam naturalmente nos primeiros dias de vida e a susceptibilidade doena aumenta tambm nas primeiras semanas de vida (Le Sueur, Mage & Mundt, 2009), possvel que a infeco possa ter sido exacerbada pelo facto de os animais terem sido desmamados (sujeitos a uma mudana na alimentao) e colocados num feedlot, onde possivelmente foram expostos a um solo previamente contaminado pelos oocistos que ali podem persistir durante vrios anos, pois tm uma longevidade considervel, suportando variaes trmicas entre -30C e 40C (Foreyt, 1986; Platzer, Prosl, Cieslicki & Joachim, 2005). Estes factores so segundo Foreyt (1986) e Urquhart et al. (1996) predisponentes ao aparecimento de coccidiose clnica, pois o solo contaminado e a sobrelotao promovem o desenvolvimento exponencial das eimerias. Isto aliado ao facto de os animais serem expostos a uma alterao brusca na alimentao, que causa stress e imuno-depresso, provoca tambm uma alterao e diminuio da flora intestinal e consequentemente diarreia, que permite maior liberdade penetrao e desenvolvimento pelas eimerias.

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 muito provvel que a parasitose por Cryptosporidium sp. a que os borregos estavam sujeitos tivesse sido contrada previamente entrada dos borregos na explorao. possvel que o contgio tenha sido efectuado pela via oral-fecal associada ingesto de gua contaminada, por contacto directo com as mes e atravs de fomites (Chalmers & Giles, 2010) ou pela inalao de oocistos (Tzipori & Ward, 2002; Fayer, 2008). O facto de terem sido colocados num feedlot pode exacerbar a infeco pela grande concentrao de animais aumentando assim a excreo e a re-infeco. A alterao abrupta da dieta pode tambm, como foi referido para as eimerias, promover o desenvolvimento de Cryptosporidium sp.. importante referir que os borregos das exploraes intensiva e extensiva se encontravam maioritariamente parasitados por nemtodes do gnero Strongyloides, que representaram 100% das espcies de EGI na E.P.A. e aproximadamente 94% na E.M.M.. Os nveis de eliminao de ovos de EGI foram significativamente superiores nos borregos em extensivo, o que pode ser explicado pelo facto de estes terem estado sempre na pastagem juntamente com o rebanho, contaminando-se assim por ingesto de erva com larvas infectantes, bem como pelo facto de se encontrarem num perodo de baixa imunidade contribuindo a conjugao destes factores para a ocorrncia de um pico de eliminao de ovos. As espcies de Eimeria spp. identificadas nestas exploraes com diferentes modos de produo foram as mesmas, apenas com diferenas nas suas frequncias, sendo na E.P.A. mais frequente a E. parva seguida da E. bakuensis, enquanto na E.M.M. foi o inverso. Relativamente aos nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp., os borregos da E.P.A. apresentaram valores significativamente superiores relativamente aos borregos da E.M.M.. Esta diferena vai de encontro ao referido por Jackson & Coop (2007), que afirmam que infeces por oocistos do gnero Eimeria tendem a ocorrer com maior grau de gravidade em feeldlots do que em exploraes extensivas. No entanto, os valores de eliminao na E.M.M. so superiores aos referidos na bibliografia consultada para exploraes em modo de produo extensivo, o que pode ser devido ao facto de se encontrarem num perodo de baixa imunidade, como foi referido anteriormente.

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2. Relao do grau de parasitismo com ganhos mdios dirios de borregos em regime intensivo 2.1. Introduo Infeces naturais por Eimeria spp. ocorrem normalmente nos primeiros dias de vida, podendo infeces macias originar doena nas primeiras semanas ps-nascimento. Tanto a coccidiose clnica como a sub-clnica afectam a performance produtiva, com baixos ganhos de peso, ms condies corporais e baixo rendimento de carcaa. O risco do desenvolvimento de doena clnica em borregos recm-desmamados particularmente alto em regimes intensivos, pois as grandes densidades promovem maior acumulao e proporcionam condies favorveis para a rpida esporulao e grande viabilidade dos oocistos (Le Sueur, Mage & Mundt, 2009). Deste modo o controlo com frmacos anti-coccdias frequentemente necessrio para prevenir surtos clnicos. Os objectivos deste estudo foram verificar a eficcia do diclazurilo (Vecoxan) em tratamentos profilticos contra infeces naturais de Eimeria spp. em relao a um grupo controlo, averiguar a relao entre a diminuio do grau de parasitismo e o aumento dos ganhos de peso nestes dois grupos e aferir acerca da rentabilidade econmica da administrao de desparasitante, com o intuito de concluir se esta medida

profilctica/teraputica se traduz num maior valor de lucro final.

2.2. Material e Mtodos 2.2.1. Explorao e animais Este estudo iniciou-se no dia 5 de Maio e terminou no dia 15 de Julho de 2011, numa explorao de regime intensivo (E.P.A.) localizada no Porto Alto, concelho de Benavente. Esta explorao era uma engorda de borregos, cujos animais foram desparasitados na explorao pela primeira vez na data de incio do estudo, desconhecendo-se a sua situao sanitria no perodo anterior sua entrada na explorao. Os borregos entraram na explorao com cerca de ms e meio de idade. A sua alimentao era base de rao constituda por 16% de protena bruta, 5,07% de fibra bruta, 2,65% de matria gorda bruta e 5,57% de cinza bruta, fornecida ad libitum. 2.2.2. Delineamento experimental e amostragem A explorao era constituda por cerca de 300 animais, dos quais foram seleccionandos 20 de forma aleatria. Estes foram separados em dois grupos, um grupo Controlo que no foi desparasitado, e um grupo de Estudo ao qual foram administrados dois tipos diferentes de desparasitante (Diclazurilo 1mg/kg, correspondendo a 1ml por 2,5 kg P.V. de Vecoxan a 2,5% e Netobimin 7,5mg/kg, correspondendo a 0,15 ml/kg P.V. de Hapasil 5%). Ambos os grupos eram constitudos por cinco machos e cinco fmeas, que foram mantidos juntos ao longo do estudo. 52

Foram colhidas amostras fecais a cada 21 dias, com luvas de borracha por toque rectal, as quais foram colocadas em sacos de plstico prprios e mantidos em frio at serem transportados para o laboratrio, onde foram armazenadas a 4C at serem analisadas no mximo 24 horas aps a colheita. As amostras de fezes de cada grupo foram homogeneizadas, e desta amostra conjunta de cada grupo foram processadas cinco subamostras. Alguns borregos apresentavam-se com diarreia, o que pode ter alterado de certa forma os resultados, uma vez que a colheita das fezes estava dificultada, podendo no se ter colhido uma quantidade equivalente aos restantes. importante referir que todos os borregos fizeram uma grande reaco inflamatria no pavilho auricular onde foi colocado o brinco de identificao, apresentando-se febris na altura seguinte primeira colheita. Este facto atrasou o crescimento destes borregos em relao aos restantes da explorao e pode ainda ter influenciado o nvel de eliminao de oocistos de Eimeria spp. que possuam. Ambos os grupos foram desparasitados aps a terceira colheita. Os borregos foram tambm pesados nos dias das colheitas com uma balana romana para avaliar o seu crescimento em peso (kg).

2.2.3. Processamento das amostras O grau de infeco foi determinado pela contagem de ovos e oocistos por grama de fezes atravs da tcnica de McMaster como descrita por Madeira de Carvalho, Meireles & Fonseca (2008). 2.2.4. Anlise de dados A anlise estatstica dos dados gerados, foi efectuada de forma descritiva, grfica e inferencial, recorrendo a medidas de tendncia central e de disperso, grficos diversos e testes estatsticos. Para o efeito, foram utilizados os softwares Microsoft Excel 2010 e R, verso 2.9.0 (disponvel em: www.r-project.org). Foi utilizado o teste de Shapiro-Wilk para verificar a forma de distribuio das populaes, para se decidir a utilizao para a anlise estatstica de um teste paramtrico ou no paramtrico. Uma vez que os dados no apresentavam uma distribuio normal e assim no cumpriam os pressupostos necessrios realizao de testes paramtricos optou-se pela utilizao de testes no paramtricos de forma a se obter maior rigor estatstico. Foi usado o teste de Mann-Whitney, tambm chamado de Wilcoxon rank sum test, o qual um teste no paramtrico que compara dois grupos no emparelhados. Foi tambm usado o teste de Wilcoxon (Wilcoxon matched-pairs signed-ranks test) o qual um teste que compara dois grupos emparelhados e ainda o teste de Friedman, o qual um teste no paramtrico que compara trs ou mais grupos emparelhados. Nos testes estatsticos 53

realizados consideraram-se estatisticamente significativos efeitos com valor de p igual ou inferior a 0,05.

A eficcia dos desparasitantes utilizados foi avaliada pelo Teste de Reduo de Contagem de Ovos nas Fezes (TRCOF) de acordo com o referido por Coles et al. (1992) em que a percentagem de reduo nas contagens calculada pela frmula: 100 x [ 1 - (XE / XC) ]1. Para a avaliao da eficcia dos desparasitantes foi usada a escala adaptada de Coles et al. (1992) e Craven et al. (1998), descrita na tabela 6. Tabela 6 Escala para a avaliao da eficcia de desparasitantes TRCOF (%) < 90 90 95 > 95 Grau de eficcia Resistncia Duvidosa Eficaz

Para avaliar a vantagem econmica do uso de desparasitante foram calculadas as diferenas de rendimento entre os dois grupos em estudo, contabilizando todos os custos relativos administrao de desparasitante (mo-de-obra, deslocao e custos de frmacos), excepto outros custos de produo como por exemplo a alimentao. 2.3. Resultados Durante o estudo alguns animais da explorao foram afectados por doenas sobretudo do foro respiratrio, sendo estes tratados quando necessrio com medicamentos sem efeito anti-parasitrio ou imunosupressor. No grupo Controlo morreram dois borregos devido a problemas respiratrios, tendo apresentando um deles 131350 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes, no se tendo includo este resultado na anlise estatistica. A anlise coprolgica da primeira amostra colhida na explorao revelou que os borregos de ambos os grupos apresentavam contagens baixas de OPG, com um mximo de 500 no grupo Controlo e 400 no grupo de Estudo, no entanto, o grupo de Estudo apresentava um valor mediano de OPG superior ao do grupo Controlo. Como possivel verificar pela observao da distribuio ordenada representada no grfico 17, no grupo de Estudo, ao qual foi administrado desparasitante, as contagens de OPG foram diminuindo

progressivamente nas colheitas seguintes, apresentando as contagens efectuadas na colheita no dia 21 um valor de mediana de 50 e um mximo de 200 OPG. No dia 42 o valor de mediana tinha baixado para zero, com um mximo de 100 OPG e por fim no dia 63, aps administrao de nova dose de desparasitante o valor da mediana manteve-se no zero, e o
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XE = Mdia aritmtica das contagens no Grupo Estudo; XC = Mdia aritmtica das contagens no Grupo Controlo

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valor mximo tinha diminudo para metade. Como possvel observar no grfico 18 a seguir apresentado, as mdias aritmticas dos nveis de eliminao de OPG no grupo Estudo baixaram gradualmente aps administrao de desparasitante, atingindo valores nulos no periodo posterior segunda desparasitao (dia 63). Grfico 17 Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais nos diferentes dias de colheita de amostras

Nveis de eliminao de Estrongilideos Gastrointestinais nos diferentes dias de colheita de amostras. E.D0 Grupo de Estudo 1 colheita; C.D0 Grupo Controlo 1 colheita; E.D21 Grupo de Estudo 2 colheita; C.D21 Grupo Controlo 2 colheita; E.D42 Grupo de Estudo 3 colheita; C.D42 Grupo Controlo 3 colheita; E.D63 Grupo de Estudo 4 colheita; C.D63 Grupo Controlo 4 colheita

Grfico 18 Mdias aritmticas dos nveis de eliminao de EGI nos diferentes dias de colheita

No grupo de Controlo, onde no tinha sido administrado desparasitante, as contagens foram bem diferentes, pois aps a primeira colheita, onde os valores eram semelhantes aos do grupo de Estudo, estes subiram, apresentando contagens bem mais elevadas. Como possvel verificar no grfico 17 anteriormente apresentado, na colheita efectuada ao grupo Controlo no dia 21 as contagens apresentavam um valor de mediana de 925 OPG, um mximo e um mnimo de 1750 e 600 OPG, respectivamente. As anlises coprolgicas 55

efectuadas amostra colhida no dia 42, demonstraram um valor mximo bastante elevado, na ordem dos 2500 OPG, no entanto o valor mediano era de 700. importante verificar que 50% dos valores contabilizados nesta colheita encontravam-se entre os 700 e os 2500 OPG. A colheita efectuada no dia 63 reflecte a carga parasitria do grupo uma vez submetido pela primeira vez administrao de desparasitante. possvel verificar que aps serem sujeitos aco do desparasitante a carga parasitria a que estavam sujeitos diminuiu abruptamente para um valor mediano de 25 OPG e mximo de 50 OPG. Como possvel observar no grfico 18 apresentado anteriormente, as mdias aritmticas dos nveis de eliminao de OPG no grupo Controlo aumentaram gradualmente, atingindo valores elevados no periodo anterior colheita efectuada no dia 42, tendo baixado abruptamente no perodo posterior desparasitao (dia 63). A anlise estatstica inferencial efectuada foi realizada com o objectivo de determinar se as diferenas nas contagens de OPG entre os dois grupos eram significativas. Esta anlise demonstrou que apenas nas colheitas efectuadas nos dias 21 e 42, as diferenas eram significativas, com valores de p<0,05 (w=0; p=0,03 para p<0,05 e w=0; p=0,03 para p<0,05, respectivamente). Nas colheitas efectuadas nos dias 0 e 63 as diferenas no foram significativas (w=13; p=1 para p<0,05 e w=6; p=0,60 para p<0,05, respectivamente). Foi tambm efectuada uma anlise inferencial pelo teste de Friedman, para verificar se houve diferenas significativas nas cargas de OPG dentro de cada grupo ao longo do tempo. No grupo de Estudo, as diferenas foram sempre significativas, tanto entre as contagens efectuadas nas colheitas do dia 0 ao dia 42 como do dia 0 ao dia 63 (Friedman 2=6,50; p=0,04 para p<0,05 e Friedman 2=9,64; p=0,02 para p<0,05, respectivamente). No grupo Controlo, as diferenas no foram significativas nas contagens efectuadas s fezes das colheitas do dia 0 ao dia 42 (Friedman 2=3,5; p=0,17 para p<0,05), no entanto, nas contagens efectuadas s fezes das colheitas do dia 0 ao dia 63 as diferenas j foram significativas (Friedman 2=9,3; p=0,03 para p<0,05). Os valores das contagens de oocistos de Eimeria spp. eram na altura da primeira colheita altos em ambos os grupos, sendo, no entanto, mais elevados no grupo Controlo, com um valor de mediana de 18000 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes, enquanto no grupo de Estudo o valor da mediana era de 13700. Como se pode verificar no grfico 19 a seguir apresentado, possvel verificar que no grupo de Estudo, ao qual foi administrado desparasitante, as contagens de oocistos de Eimeria spp. foram diminuindo

progressivamente nas colheitas seguintes, onde o valor da mediana da segunda colheita diminuiu para 9225 oocistos de Eimeria spp., com um mximo de 12250 e um mnimo de 8300. Na colheita do dia 42 (terceira colheita) o valor da mediana era de 325 oocistos de Eimeria spp. e zero na quarta colheita. No grupo Controlo, ao qual no foi administrado desparasitante, as contagens de oocistos de Eimeria spp. aumentaram at segunda colheita, diminuindo depois nas seguintes. A mediana dos valores das contagens passou de 56

18000 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes na primeira contagem para 21600 na segunda, diminuindo na colheita de dia 42 para 675 e na de dia 63 aps administrao da primeira dose de desparasitante para 600 oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes. Como possvel observar no grfico 20 a seguir apresentado, as mdias aritmticas dos nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. no grupo Estudo baixaram gradualmente aps administrao de desparasitante, atingindo valores prximos de zero no periodo posterior segunda desparasitao (dia 63), no grupo Controlo aumentaram gradualmente at ao dia 21, tendo baixado no perodo posterior segunda colheita, at atingir valores prximo de zero no perodo posterior desparasitao efectuada no dia 42. Grfico 19 Nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. nos diferentes dias de colheita de amostras

Nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. nos diferentes dias de colheita de amostras. E.D0 Grupo de Estudo 1 colheita; C.D0 Grupo Controlo 1 colheita; E.D21 Grupo de Estudo 2 colheita; C.D21 Grupo Controlo 2 colheita; E.D42 Grupo de Estudo 3 colheita; C.D42 Grupo Controlo 3 colheita; E.D63 Grupo de Estudo 4 colheita; C.D63 Grupo Controlo 4 colheita

Grfico 20 - Mdias aritmticas dos nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. nos diferentes dias de colheita

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Atravs da anlise estatstica realizada, verificou-se que as diferenas nos valores das contagens de oocistos de Eimeria spp. entre os dois grupos, s foram significativas nas amostras colhidas no dia 21 e no dia 63 (w=0; p=0,03, para p<0,05 e w=0; p=0,02, para p<0,05, respectivamente). Nas colheitas do dia 0 e 42 as diferenas no foram significativas (w=5; p=0,15 para p<0,05 e w=4; p=0,34 para p<0,05, respectivamente). Foi tambm verificado se existiram diferenas significativas nas cargas de oocistos de Eimeria spp. dentro de cada grupo ao longo do tempo. No grupo de Estudo, as diferenas foram sempre significativas, tanto entre as colheitas efectuadas at ao dia 42, como at ao dia 63 (Friedman 2=8; p=0,02 para p<0,05 e Friedman 2=12; p=0,01 para p<0,05, respectivamente). No grupo Controlo, as diferenas tambm foram sempre significativas entre cada colheita (S0&S21 v=45; p=0,004 para p<0,05; S21&S42 e S42&S63 v=36; p=0,01 para p<0,05; S0&S21&S42 Friedman 2=6,5; p=0,04 para p<0,05; S0&S21&S42&S63 Friedman 2=10,2; p=0,02 para p<0,05). A pesagem dos borregos com uma balana romana nos dias de colheita das amostras permitiu avaliar a evoluo dos pesos corporais em ambos os grupos. Como possvel verificar no grfico 21 e 22 a seguir apresentados, tanto no grupo Estudo como no grupo Controlo, os pesos (representados por valores medianos no grfico 21 e por valores de mdias no grfico 22) aumentaram progressivamente ao longo do tempo. No grupo Estudo os pesos foram sempre superiores aos do grupo Controlo, no entanto, as diferenas entre os valores das medianas dos pesos de ambos os grupos, colheita a colheita, no foram significativas (colheita a colheita os valores de p foram sempre superiores a 0,05). Grfico 21 - Evoluo dos pesos dos grupos de Estudo e Controlo

Evoluo dos pesos dos grupos de Estudo e Controlo nos dias de colheitas de amostras fecais. E.D0 Grupo de Estudo Pesagem na 1 colheita; C.D0 Grupo Controlo Pesagem na 1 colheita; E.D21 Grupo de Estudo Pesagem na 2 colheita; C.D21 Grupo Controlo Pesagem na 2 colheita; E.D42 Grupo de Estudo Pesagem na 3 colheita; C.D42 Grupo Controlo Pesagem na 3 colheita; E.D63 Grupo de Estudo Pesagem na 4 colheita; C.D63 Grupo Controlo Pesagem na 4 colheita

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Grfico 22 Evoluo dos pesos dos grupos de Estudo e Controlo de acordo com valores mdios

Foi tambm efectuada uma anlise inferencial pelo teste de Friedman, para verificar se houve diferenas significativas nos pesos dentro de cada grupo ao longo do tempo. Em ambos os grupos as diferenas foram significativas, mas no grupo Estudo as diferenas foram mais significativas do que no grupo Controlo (Friedman 2=28,92; p=2,328x10-6 para p<0,05 e Friedman 2=20,16; p=1,569x10-4 para p<0,05). De acordo com o TRCOF a reduo de ovos de EGI nas fezes foi de 91,75%, enquanto a reduo de oocistos de Eimeria spp. foi de 55,38%. Para a avaliao da vantagem econmica do uso de desparasitante procedeu-se comparao dos pesos dos borregos desparasitados e no desparasitados, bem como anlise dos custos inerentes a este procedimento, apresentados nas tabelas 7 e 8, respectivamente. Tabela 7 - Pesos dos borregos nos dois grupos estudados
Grupo Animal 1 2 3 4 E 5 6 7 8 9 10 Mdia Peso 1 (kg) 16,1 17,1 18,8 18 17,8 19,8 16,8 12,4 18,1 14,7 16,96 Peso 3 (kg) 24 25 29 31,5 23,8 29 30 20,6 27 25 26,49 Aumento de Peso (kg) 7,9 7,9 10,2 13,5 6 9,2 13,2 8,2 8,9 10,3 9,53 Mdia C Grupo Animal 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Peso 1 Peso 3 (kg) (kg) 16 17,2 15,3 15,6 14,6 15,6 21 22,3 15,6 17 17,02 16 26,5 21,5 25 23 30,3 35 10 24,5 23,53 Aumento de Peso (kg) 0 9,3 6,2 9,4 8,4 9,3 12,7 -5,6 7,5 6,36

E Grupo Estudo; C Grupo Controlo; Peso 1 Peso vivo (P.V.) medido no dia 0; Peso 3 P.V. medido no dia 42; Aumento de peso diferena entre Peso 3 e Peso 1.

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Tabela 8 - Custos relativos administrao de desparasitante

Factor Netobimin ( ) Diclazurilo ( ) Mo-de-obra ( ) Deslocao ( )
4 3 2 2

Custo 0,0015 / kg 0,0240 / kg 0,2000 / animal 0,0517 / animal 2,0000 / Kg P.V.

Preo de venda (p.v.) ( )

Tabela 9 - ndices produtivos, custos e ganhos econmicos

Grupo Peso mdio inicial (Peso 1) Peso mdio final (Peso 3) Aumento mdio de peso Taxa de crescimento Custo de tratamento ( / kg de P.V. / animal) Valor inicial por animal (/P.V.) Valor bruto final por animal (/P.V.) (a) (b) (c=b-a) (d=(1b/a)x100) (e=aEx0,0255 5 +0,2517) ( ) (f=axp.v.) (g=bxp.v.) Estudo 16,96 kg 26,49 kg 9,53 kg 56 % 0,68 33,92 52,98 52,30 18,38 1,97 Controlo 17,02 kg 23,53 kg 6,51 kg 38 % 0,00 34,04 47,07 47,07 13,03 2,00

Valor lquido final por animal (/P.V.) (h=(bxp.v.)-e) Proveito por animal () Valor lquido (por kg de P.V.) Taxa de rentabilidade por animal Lucro lquido por animal (E&C) i=(h-f) (j=h/b) (k=h/f) (l=hE-hC)

154,17 % 138,27 % 5,23

aE Peso 1 do grupo de Estudo; p.v.- Preo de venda; hE - Valor lquido final por animal do grupo Estudo; hC - Valor lquido final por animal do grupo de Controlo.

2 3 4

Valores fornecidos pelo A.D.S. do Baixo Tejo referentes data do estudo. Para o clculo do custo de deslocao dividiu-se o seu custo fixo (15) pelo total de animais tratados. Valor mdio baseado no preo tabelado pela Associao Portuguesa de industriais de alimentos compostos para animais (I.A.C.A.) referente a borregos entre 22 e 28 kg de raa no especificada para a regio do Ribatejo e Oeste e mercado do Ribatejo. 5 O clculo do custo de tratamento foi efectuado pela multiplicao do peso mdio inicial do grupo de Estudo pela soma dos custos de desparasitante por kg de P.V., somando a este resultado o valor da mo-de-obra e deslocao por cabea.

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Tendo como referncia os pesos mdios apresentados na Tabela 7, assim como os custos associados desparasitao e o preo de venda apresentados na Tabela 8, foram calculados para os dois grupos de borregos em estudo (E e C) diversos ndices produtivos, e ainda os custos e ganhos econmicos, apresentados na Tabela 9.

2.4. Discusso de resultados A anlise coprolgica realizada s amostras da explorao E.P.A. demonstrou que no grupo Estudo, ao qual foi administrado desparasitante, o valor das contagens de OPG diminuiu significativamente ao longo do tempo; j o valor das contagens de OPG no grupo Controlo aumentou no significativamente at terceira colheita (dia 42), tendo ento diminudo significativamente na quarta colheita (dia 63), devido administrao de desparasitante. importante verificar que a diferena entre o valor das contagens de OPG das colheitas efectuadas no dia 0 e no dia 63 entre os dois grupos (dias em que ambos os grupos estiveram sujeitos s mesmas condies) no foram significativas, no entanto, entre as colheitas dos dias 21 e 42, em que o grupo Estudo esteve sujeito aco de desparasitante e o grupo Controlo no esteve, as diferenas foram significativas. Este resultado sugere que o desparasitante usado contra EGI teve aco, sendo contudo a sua eficcia duvidosa, segundo a classificao de Coles et al. (1992) e Craven et al. (1998), uma vez que o valor do TRCOF foi de 91,75%. Relativamente s contagens de oocistos de Eimeria spp., no grupo Estudo, o valor das contagens diminuiu significativamente ao longo do tempo, resultado este que sugere uma boa actuao do desparasitante e vai ao encontro dos apresentados por Platzer et al. (2005). No entanto, segundo a classificao de Coles et al. (1992) e Craven et al. (1998) o frmaco foi ineficaz sugerindo a existncia de resistncias (TRCOF=55,38%). No grupo Controlo, o valor de contagem de oocistos de Eimeria spp. aumentou significativamente da primeira para a segunda colheita (colheitas do dia 0 e dia 21, respectivamente), tendo diminudo significativamente entre a segunda e terceira e terceira e quarta colheita. Este aumento significativo entre a primeira e segunda colheita deu-se provavelmente devido ao facto de o grupo no ter sido desparasitado. A diminuio subsequente nas contagens de oocistos de Eimeria spp. poder ser explicada pelo aumento natural de imunidade dos borregos, como referem Platzer et al. (2005). Comparando ambos os grupos entre colheitas possvel verificar que no dia 0 as diferenas entre os dois no foram significativas, o que normal pois ambos encontravam-se parasitados naturalmente. No dia 21 as diferenas foram significativas, reflectindo este resultado a actuao do desparasitante. No dia 42 as diferenas no foram significativas, sendo este valor um pouco curioso uma vez que um dos grupos, no sendo desparasitado, deveria ter diferenas significativas em relao ao outro. Assim este valor pode reforar a hiptese do ganho natural de imunidade. No dia 63 as diferenas no valor das contagens de oocistos de Eimeria spp. em ambos os grupos, 61

embora sendo baixas, tiveram diferenas significativas. O grupo Estudo que j tinha sido previamente desparasitado tinha baixos valores de contagens de oocistos, os quais desceram para zero aquando da segunda desparasitao. O grupo Controlo ao ser desparasitado baixou os seus valores de cargas parasitrias, no tendo no entanto diminudo para zero, sendo esta diferena uma justificao para a diferena significativa entre ambos os grupos, mesmo que com baixas contagens. Le Sueur, Mage & Mundt (2009) afirmam que o frmaco utilizado (Diclazurilo) tem actividade intracelular varivel de acordo com as diferentes espcies de Eimeria spp., sendo os efeitos desejados a nvel intracelular alcanados com a administrao de doses cinco vezes superiores dose normal e Davis & Gookin (2009) referem que o frmaco tem actividade potente contra coccdias quando administrado em pequenas quantidades no alimento. Num estudo efectuado por Platzer et al. (2005) referido que um grupo tratado com diclazurilo passadas quatro semanas da administrao apresenta a mesma prevalncia de excreo de oocistos que num grupo controlo. Referem ainda que a absoro de Diclazurilo em borregos baixa (grande parte excretada nas fezes) e diminui com o crescimento. Este frmaco parece desta forma ter uma aco mais coccidiosttica do que coccidicida. Verificou-se um aumento de peso significativo tanto no grupo de Estudo como no grupo Controlo. As diferenas nos pesos no foram significativas entre as medies efectuadas em ambos os grupos, entre colheitas. No entanto, atravs do estudo econmico efectuado determinou-se uma taxa de crescimento superior no grupo de Estudo (56%) relativamente ao grupo Controlo (38%). Pelo facto de o peso mdio inicial dos borregos ser muito prximo nos dois grupos, o valor inicial por cabea (tendo em conta o preo de venda tabelado pela I.A.C.A.) era assim semelhante, no entanto, o valor bruto final foi superior no grupo de Estudo em relao ao grupo Controlo. interessante verificar que o produtor ganha menos por kg de P.V. (1,97 ) no grupo Estudo, devido aos custos associados desparasitao, do que no grupo Controlo (2,00 ), ainda assim, pela maior taxa de crescimento dos borregos do grupo Estudo, correspondente a um maior aumento de peso e assim maior peso mdio final e valor lquido final, o produtor tem mais proveito por cabea neste grupo. Uma vez que os animais estiveram sempre sujeitos s mesmas condies, pode-se concluir que o maior aumento de peso no grupo Estudo foi devido administrao de desparasitante. Pode-se ento constatar, pela diferena entre o valor lquido final por animal nos dois grupos, que administrao de desparasitante est associado um lucro lquido por animal de 5,23 . Tendo como modelo a explorao em causa, que era composta por cerca de 300 animais, o produtor teria um lucro de 1569 por ter desparasitado os animais, que no teria se no o tivesse feito. importante realar o facto de neste estudo no terem sido contabilizados outros custos de produo como por exemplo o custo da alimentao, tendo sido considerados custos 62

idnticos para ambas as situaes (custos nos animais sujeitos a desparasitao & no desparasitao). tambm importante referir que os animais devido grande reaco inflamatria a que estiveram sujeitos, apresentando-se febris no inicio do estudo, no cresceram tanto quanto seria de esperar (comparando com a restante populao de borregos da explorao que tiveram maior aumento de peso, e que no foram sujeitos aplicao de brinco identificador, no se apresentando febris). Considera-se, no entanto, que como os borregos foram submetidos s mesmas condies, o crescimento teria sido proporcional ao verificado, caso no tivessem sofrido a reaco inflamatria a que estiveram sujeitos. Deste modo, analisando o custo/benefcio, as diferentes cargas parasitrias e o nvel de bem-estar animal, conclui-se que de enorme importncia e vantajoso desparasitar os animais.

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VI - Concluses

Os trabalhos experimentais realizados no mbito desta dissertao permitiram concluir que, nos ovinos adultos, as espcies de estrongilideos gastrointestinais mais frequentemente identificadas foram Trichostrongylus spp., Teladorsagia spp. e Strongyloides sp. e as espcies de Eimeria spp. mais frequentemente identificadas foram Eimeria bakuensis, E. ahsata, E. ovinoidalis e E. parva. Ainda nesta faixa etria, foi tambm detectada com regularidade a presena de ovos de Nematodirus spp., Moniezia benedeni e M. expansa. As cargas parasitrias mais graves foram observadas em animais que se encontravam em perodo gestacional e puerperal.

Nos ovinos jovens, as espcies de EGI mais frequentemente identificadas foram Strongyloides sp. e as espcies de Eimeria spp. identificadas com maior frequncia foram Eimeria bakuensis, E. ovinoidalis, E. crandallis/weybridgensis e E. parva. Os animais encontravam-se tambm frequentemente parasitados por Cryptosporidium sp. e Moniezia expansa. Comparando os individuos em regime extensivo e intensivo foi possvel verificar que os borregos em regime extensivo (E.M.M.) apresentaram valores de eliminao de OPG superiores aos dos borregos em regime intensivo (E.P.A.), no entanto, os nveis de eliminao de oocistos de Eimeria spp. foram inferiores nos borregos em regime extensivo (E.M.M.) em relao aos borregos em regime intensivo (E.P.A.).

Relativamente ao uso de desparasitante, a sua administrao provocou uma diminuio considervel das cargas parasitrias, tanto de EGI como de oocistos de Eimeria spp.. Inversamente, a no administrao de desparasitante permitiu um aumento das mesmas. Atravs do TRCOF, o diclazurilo (Vecoxan) mostrou-se ineficaz e o netobimim (Hapasil) mostrou ter eficcia duvidosa.

O grupo ao qual foi administrado desparasitante teve uma maior taxa de crescimento relativamente ao outro grupo, com um maior peso vivo e valor lquido final por animal, ao qual est associado um valor de lucro per capita de 5,23 . Este resultado permite aferir que os desparasitantes usados actuaram devidamente, e que realmente bastante vantajoso e de enorme importncia a sua administrao, do ponto de vista econmico e de bem-estar animal.

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VII - Perspectivas futuras

Num trabalho futuro seria interessante aumentar o tamanho da amostra, aumentando o nmero de exploraes e de animais envolvidos, de modo a que esta fosse mais representativa da realidade da regio do Ribatejo. Com estas duas medidas estaria aberto o caminho para a determinao da prevalncia das diferentes espcies parasitrias nas exploraes em estudo.

Neste trabalho foi utilizado para desparasitao dos animais o diclazurilo, com reduo considervel nas contagens de oocistos de Eimeria spp. excretados. Contudo, Mundt, Dittmar, Daugschies, Grzonka & Bangoura (2009) referem que borregos tratados com toltrazurilo apresentaram contagens inferiores de oocistos de Eimeria spp. excretados, menor durao do periodo de excreo e uma reduo mais acentuada de sinais clnicos relativamente a animais tratados com diclazurilo e a animais que no receberam qualquer tratamento, referindo ainda Le Sueur et al. (2009) que com a utilizao de toltrazurilo h maiores ganhos de peso. Deste modo era interessante avaliar a eficcia clnica e vantagem econmica do uso de toltrazurilo nos animais desta regio comparativamente ao diclazurilo, para posteriormente se considerar a sua utilizao na prtica clnica.

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VIII - Anexos

A1. Casustica dos actos sanitrios realizados durante as actividades desenvolvidas no A.D.S. do Baixo Tejo

Tabela 10 - Casustica da actividade sanitria realizada em bovinos

Sanidade normal Leituras da prova da Tuberculina Tuberculinizao e desparasitao de bezerras Aplicao de brincos de identificao Testes de pr-movimentao Vacinaes fora do programa Desparasitao Administrao de vitaminas Total

N de casos 4144 5001 657 59 200 1037 302 91 11491

Tabela 11 - Casustica da actividade sanitria realizada em pequenos ruminantes

Sanidade normal Desparasitao Vacinaes fora do programa Total N de casos 2750 2310 2575 7635

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A2. Casustica dos actos clnicos realizados durante as actividades desenvolvidas na Luso-Pecus Lda.

Tabela 12 - Casustica da actividade clnica realizada em bovinos

Aparelho Digestivo Enterotoxmia Hrnia abdominal Aparelho Msculo-esqueltico e locomotor Cascos Claudicao Pele e tecido subcutneo Abcessos Limpesa e desinfeco de feridas Aparelho Reprodutor Diagnstico de Gestao / Controlo Reprodutivo Prolapso uterino Prolapso vaginal Reteno secundinas Parto distcico Cirurgias Pequenas cirurgias Deslocamento do abomaso esquerda Deferentectomia Fistula vagino-rectal Outros Administrao de vitaminas Leptospirose Necrpsia Reticulo-pericardite traumtica Total

N de casos 3 2 1 5 4 1 13 1 12 184 175 3 2 3 1 13 10 1 1 1 104 91 7 3 3 322

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Tabela 13 - Casustica da actividade clnica realizada em pequenos ruminantes

Aparelho Reprodutor Diagnstico de Gestao / Controlo Reprodutivo Outros Pequenas cirurgias Mamites Total N de casos 75 75 2 1 1 77

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Tabela 14 - Casustica da actividade clnica realizada em equinos

Aparelho Digestivo Clica Aparelho Respiratrio Broncopneumonia Obstruo area recorrente Oftalmologia Trauma Aparelho Msculo-esqueltico e locomotor Claudicao Pele e tecido subcutneo Limpesa e desinfeco de feridas Aparelho Reprodutor Diagnstico de Gestao / Controlo Reprodutivo Cirurgias Castrao Pequenas cirurgias Outros Administrao de vitaminas Administrao de vacinas Colocao de chips Colheita de sangue para hemtipo Desparasitao Resenhos Total

N de casos 2 2 3 2 1 1 1 6 6 15 15 35 35 4 1 3 233 29 6 48 46 55 49 299

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A3. Anlise inferencial efectuada atravs do programa R-Project

3.1. Explorao Malhada de Meias (E.M.M.) 3.1.1. Adultos 1Colheita & 2Colheita - oocistos de Eimeria spp. Wilcoxon signed rank test V = 15, p-value = 0,0625 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.1.2. Adultos 1Colheita & 2Colheita - OPG Wilcoxon signed rank test V = 14, p-value = 0,125 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.1.3. Borregos 1Colheita & 2Colheita - oocistos de Eimeria spp. Wilcoxon signed rank test V = 15, p-value = 0,0625 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0

3.1.4. Borregos 1Colheita & 2Colheita - OPG Wilcoxon signed rank test V = 6, p-value = 0,8125 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2. Explorao Porto Alto (E.P.A.) 3.2.1. Comparao entre grupo Estudo (E) & Controlo (C) 3.2.1.1. OPG, E0-C0 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 13, p-value = 1 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.1.2. Oocistos de Eimeria spp., E0-C0 Wilcoxon rank sum test W = 5, p-value = 0,1508 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0

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3.2.1.3. OPG, E21-C21 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 0, p-value = 0,02652 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.1.4. Oocistos de Eimeria spp., E21-C21 Wilcoxon rank sum test W = 0, p-value = 0,02857 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0

3.2.1.5. OPG, E42-C42 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 0, p-value = 0,02652 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.1.6. Oocistos de Eimeria spp., E42-C42 Wilcoxon rank sum test W = 4, p-value = 0,3429 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.1.7. OPG, E63-C63 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 6, p-value = 0,6084 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.1.8. Oocistos de Eimeria spp., E63-C63 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 0, p-value = 0,02107 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.1.9. Pesos, E0 & C0 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 60, p-value = 0,472 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0

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3.2.1.10. Pesos, E21 & C21 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 65, p-value = 0,2712 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.1.11. Pesos, E42 & C42 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 57, p-value = 0,3467 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0

3.2.1.12. Pesos, E63 & C63 Wilcoxon rank sum test with continuity correction W = 53, p-value = 0,2662 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.2. Comparao dentro dos grupos 3.2.2.1. Pesos Grupo Controlo dia 0 a 63 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 20,1646, df = 3, p-value = 0,0001569 3.2.2.2. Pesos Grupo Estudo dia 0 a 63 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 28,92, df = 3, p-value = 2,328e-06 3.2.2.3. Oocistos de Eimeria spp. - Borregos Grupo Estudo E0 & E21 & E42 & E63 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 12, df = 3, p-value = 0,007383

E0 & E21 & E42 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 8, df = 2, p-value = 0,01832 3.2.2.4. Oocistos de Eimeria spp. - Borregos Grupo Controlo C0 & C21 & C42 & C63 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 10,2, df = 3, p-value = 0,01694

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C0 & C21 & C42 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 6,5, df = 2, p-value = 0,03877

C0 & C21 Wilcoxon signed rank test V = 45, p-value = 0,003906 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0

C21 & C42

Wilcoxon signed rank test V = 36, p-value = 0,007813 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0

C42 & C63

Wilcoxon signed rank test V = 36, p-value = 0,007813 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.2.5. OPG Borregos Grupo Estudo E1 & E2 & E3 & E4 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 9,6486, df = 3, p-value = 0,0218

E1 & E2 & E3 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 6,5, df = 2, p-value = 0,03877 3.2.2.6. OPG Borregos Grupo Controlo C1 & C2 & C3 & C4 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 9,3, df = 3, p-value = 0,02556

C1 & C2 & C3 Friedman rank sum test Friedman chi-squared = 3,5, df = 2, p-value = 0,1738

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3.2.3. Comparao 1 colheita entre borregos E.M.M. & E.P.A. 3.2.3.1. OPG, E.M.M. & E.P.A. Wilcoxon signed rank test V = 55, p-value = 0,001953 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0 3.2.3.2. Oocistos de Eimeria spp., E.M.M. & E.P.A. Wilcoxon signed rank test V = 2, p-value = 0,005859 alternative hypothesis: true location shift is not equal to 0

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A4. Mtodos Coprolgicos

4.1. Mtodo de McMaster

Esta tcnica usada para contagem de ovos/oocistos por grama de fezes.

Material: - Soluo saturada de acar - Rede metlica (80-100 malhas por polegada) - Copos de vidro ou plstico - Pipeta de Pasteur com pra de borracha - Cmara de McMaster

A tcnica de McMaster elabora-se diluindo duas grama de fezes de ovino em vinte e oito ml de soluo saturada de acar (sacarose). A soluo obtida filtrada (por rede metlica), homogeneizada e imediatamente introduzida nas duas clulas de uma cmara de McMaster. Esperar 3 a 4 minutos para que os ovos adiram parte superior da cmara e observar ao microscpio. A contagem de ovos/oocistos efectuada na totalidade das duas clulas, multiplicando-se o nmero de ovos/oocistos contados por 50 e expressando-se o resultado em nmero de ovos/oocistos por grama de fezes (OPG/oocistos de Eimeria spp. por grama de fezes). Esta tcnica apresenta um limiar mnimo de deteco de 50 ovos/oocistos por grama de fezes. Quando a contagem negativa, o animal ou a amostra so considerados negativos, embora se proceda tambm a sua cultura.

Adaptado de: Ueno & Gonalves (1998)

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4.2. Mtodo de Flutuao com acar (Willis)

A tcnica de Flutuao com acar (Wllis), usada para detectar a presena de ovos de helmintes nas fezes (EGI e cstodes) e tambm de coccidias de Eimeria spp..

Material: - Copos de vidro ou plstico (cinco cm de altura, com boca larga) - Vareta de vidro - Rede metlica (50-100 malhas por polegada) - Tubo de ensaio (10 ml) - Soluo saturada de acar (30%)

Para elaborar a tcnica prepara-se a suspenso fecal, misturando duas a trs grama de fezes com 28 ml de soluo saturada de acar (sacarose) dentro de um copo. Aps homogeneizao, filtra-se a suspenso de fezes atravs da rede metlica para outro copo, a qual vai ser transferida para um tubo de ensaio. Coloca-se uma lamela sob o menisco formado na parte superior do tubo de ensaio sem que se permita a formao de bolhas. A lamela deve ficar em contacto o menisco no mnimo durante quinze minutos (para que os ovos flutuem aderindo lamela), at que seja removida e colocada sob uma lmina para ser observada ao microscpio.

Adaptado de: Ueno & Gonalves (1998) 83

4.3. Tcnica de Sedimentao

A tcnica de Sedimentao tem a vantagem de recuperar ovos que sedimentam mesmo quando utilizada a tcnica de flutuao.

Material: - Copo de vidro (250-500ml) - Copo de sedimentao (300-500 ml) - Rede metlica (80-100 malhas por polegada) - Pipeta de Pasteur com ponta grossa (dois mm de dimetro) - Vareta de vidro

A tcnica efectuada colocando cinco a dez grama de fezes num copo de vidro e adicionando 60 a 70 ml de gua. Depois de homogeneizar com vareta, adiciona-se gua at obter o volume aproximado de 300 ml. Posteriormente filtra-se a soluo fecal para um copo de sedimentao, atravs de uma rede metlica e espera-se dez a vinte minutos. Decantase o sobrenadante sem agitar o sedimento e adiciona-se novamente gua at ao topo do copo de sedimentao e esperar novamente dez a vinte minutos (este processo repetido se necessrio at clarificar a suspenso). Finalmente decanta-se o sobrenadante e retira-se o sedimento com uma pipeta, que se coloca entre lmina e lamela, para observar ao microscpio.

Adaptado de: Ueno & Gonalves (1998) 84

4.4. Mtodo de Sedimentao Difsica de Ritchie

Esta tcnica usada para deteco de Cryptosporidium sp. Nas fezes.

Material: - Tubo de centrfuga de 10 ml - gua destilada - ter sulfrico - Rede metlica - Gaze - Pipeta de Pasteur

Para a realizao da tcnica misturam-se cerca de 0,5 ml de fezes (ou o equivalente ao tamanho de uma pequena ervilha no caso de fezes slidas), com trs ml de gua destilada, num tubo de centrfuga de 10 ml. Deve-se agitar no vortex durante um minuto e posteriormente adiciona-se trs ml de ter sulfrico e agitar vigorosamente durante trinta segundos. Perfaz-se o volume final de 10 ml com gua destilada e filtra-se por um passador de rede e duas camadas de gaze, para um tubo limpo, de forma a eliminar os detritos fecais de maiores dimenses. Centrifuga-se o filtrado a 1000 rpm, durante um minuto. A fase que fica entre o ter e o sedimento recolhida com uma pipeta de Pasteur para um tubo limpo onde se vai adicionar gua destilada at perfazer o volume de 10 ml para se centrifugar novamente a 2500 rpm, durante 10 minutos. Despreza-se o sobrenadante, efectua-se esfregao com o sedimento e cora-se com Ziehl-Neelsen para observar ao microscpio.

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4.5. Coproculturas de coccidias de Eimeria spp.

O objectivo das coproculturas dar condies de esporulao aos oocistos eliminados nas fezes.

Material: - Placa de Petri - Dicromato de Potssio a 2% - Papel de filtro

Para a realizao de coproculturas de coccdias de Eimeria spp. colocam-se uma a duas grama de fezes (que contm os oocistos) numa placa de Petri com papel de filtro, onde adicionada uma soluo de dicromato de potssio a 2% (aco bactericida e fungicida). As coproculturas so colocadas em estufa a 26-28 C durante sete dias, arejadas diariamente procedendo-se tambm ao exame dirio dos oocistos para ajuizar acerca do

desenvolvimento dos esporozotos e posterior determinao das diferentes espcies de Eimeria spp. presentes. A identificao morfolgica das diferentes espcies de oocistos esporulados foi efectuada de acordo com Dittmar et al. (2009) e Bayer HealthCare (2008). A esporulao completa-se em 1-7 dias temperatura ambiente.

Coprocultura de fezes com Eimeria spp.. Fotografia Original

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4.6. Coproculturas de Estrongilideos Gastrointestinais

Devido semelhana entre os diferentes ovos de estrongilideos, procedemos a culturas fecais para obteno de larvas infectantes do 3 estadio (L3) a partir dos ovos existentes nas fezes.

Material: Recipientes de plstico descartavl; Papel de alumnio; Pelcula de Parafilm;Placa de Petri; Pipeta; Tubos de centrfuga de 10 ml; gua; Soluto de Lugol

A tcnica consistiu em colocar 50-70 grama de fezes em recipientes de plstico, que posteriormente foram humedecidas e homogeneizadas. As culturas eram cobertas com papel de alumnio perfurado e colocadas na estufa durante 11-14 dias temperatura de 2628 C e humidade relativa de 70-80%. Aps cumprido o tempo de incubao, o copo com a coprocultura era preenchido com gua e invertido sobre uma placa de Petri que era preenchida com 15-20 ml de gua. Aps 24 horas, a totalidade do remanescente de gua com as L3 era recolhida com pipeta e transferida para tubos de centrfuga de 10 ml, os quais eram cobertos com pelcula de Parafilm para reduzir a concentrao de oxignio e consequentemente o metabolismo larvar. Procedeu-se concentrao das L3 por sedimentao natural (durante 24 horas) ou por centrifugao a 1500 rpm durante trs minutos. As larvas isoladas por um ou outro mtodo eram observadas em suspenso aquosa entre lmina e lamela e atravs da fixao e colorao diferencial com soluto de lugol. A percentagem dos gneros e espcies de cada amostra era estabelecida com base na contagem e identificao de pelo menos 100 larvas de terceiro estadio. As lavas infectantes foram identificadas de acordo com as caractersticas morfomtricas referidas por Wyk et al. (2004).

Desenho original

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4.7. Identificao de Estrongilideos Gastrointestinais

Tabela 15 - Chave de identificao de Nemtodes Gastrointestinais e Nemtodes Pulmunares em ovinos e caprinos.

N 1 Descrio
(a)

(X = 30 m)

Identificao 2 9

(b)

Bainha da cauda ausente ou discreta Bainha da cauda proeminente

Bainha da cauda ausente ou discreta Esfago sem bulbo Esfago rabditiforme (bulbo duplo) 3 4

Bainha da cauda ausente ou discreta Esfago < 30% do comprimento do corpo Esfago 40% do comprimento do corpo 5 6 Nemtode de vida livre

Helmintes corados uniformemente de cor castanho-escuro com iodina; Esfago muitas vezes rabditiforme < 40% do comprimento do corpo; corpo largo com cauda muito comprida sem bainha; cabea irregular e achatada Esfago < 30% do comprimento do corpo; larva pequena e letrgica com protuberncia na cabea; bainha da cauda discreta < 0,5 X; cauda termina em ponta suavemente arredondada Esfago 40% do comprimento do corpo Comprimento do corpo < 500m; dimetro <0,7X Comprimento do corpo > 520m; dimetro 1,0X Comprimento do corpo < 500m; dimetro <0,7X Cauda muito pontiaguda, sem espinho Cauda muito pontiaguda, com espinho Cauda composta, sem espinho Cauda composta, com espinho Bainha da cauda ausente; esfago 40% do comprimento da larva; sem bulbo; dimetro da larva 1,0X; cabea forma de bala; cauda grossa

D. filaria

7 8 Protostrongilideo Protostrongylus Muellerius Neostrongylus Cystocaulus Strongyloides sp.

8 9

Bainha da cauda proeminente > 0,5X; esfago < 30% do comprimento da larva; larva fresca muito activa na presena de luz Larva uniformemente corada castanho-escuro, com iodina 10 Larva corada castanho-claro cranialmente e castanho11 escuro caudalmente, com iodina Toda a larva uniformemente corada de cor castanho-escuro com iodina; esfago com 1 bulbo proeminente caudalmente (em larvas activas); cabea com forma de bala Bainha da cauda 3,5X; filamento 40-50% da bainha; larva muito Bunostomum pequena Bainha da cauda 4,5X; filamento 50% da bainha; larva muito Gaigeria pequena Larva corada castanho-claro cranialmente e castanho-escuro caudalemente com iodina; esfago sem bulbo proeminente Bainha da cauda sem filamento 12 Bainha da cauda com filamento 15

10

11

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N 12

Descrio

(a)

(X = 30 m)

Identificao

(b)

Bainha da cauda 1,0-1,5X que afila rapidamente (bico de lpis); cabea algo achatada; sem filamento Cauda lisa (apenas visvel quando retirada a bainha) 13 Cauda em forma de digito (visvel quando retirada a bainha) 14 Cauda lisa; bainha sem filamento Bainha 1,0X; cabea sem ombros Bainha 1,2X; cabea com ombros Tr. Axei Teladorsagia

13

14

Cauda com pequenas proturberncias em forma de digito; bainha sem filamento; cabea sem ombros; 16 clulas intestinais Bainha 1,0X, sem filamento, cauda irregular Trichostrongylus spp. Bainha 1,7X, cauda irregular Tr. falculatus Bainha com filamento; larva corada castanho-claro cranialmente, castanho-escuro caudalmente; 16 clulas intestinais Cabea com dois pontos refracteis 16 Cabea sem pontos refracteis 17 Cabea em forma de bala, com lados oblquos e com 2 pontos refracteis; bainha com 20% de filamento Bainha 1,5X; filamento 20% Cooperia spp. Bainha 2,5X; filamento 20% C. oncophora Cabea da larva sem pontos refracteis; bainha > 2,0X 16 clulas intestinais 18 clulas intestinais Larva com 16 clulas intestinais; bainha > 2,0X Bainha 2,5X, com 10-15% filamento; cabea forma de bala com lados oblquos; 16 clulas intestinais Bainha 4,0X com 25% filamento; 28-32 clulas intestinais (rectangulares a fresco); cabea larga e achatada Bainha 5,0-5,5X com 50% filamento; 18-22 clulas intestinais (triangulares a fresco); cabea larga e achatada Oito clulas intestinais; larva muito grande; cabea em forma de bala mas ligeiramente achatada na ponta; cauda em forma de digito Bainha 9,0X com 50-60% filamento; cauda com projeco em forma de digito medialmente entre duas pequenas projeces em forma de cunha Bainha 9,0X com 50% filamento; cauda em forma de V (vista lateral) ou tricspide (vista latero-ventral) Bainha 6,0X, cauda termina num ponto fino, com 2 entalhes dorsalmente 18 19

15

16

17

18

Haemonchus sp. Chabertia sp. Oesophagostomum spp. Nematodirus spp. N. spathiger N. filicollis N. battus

19

(a)

Cabea refere-se a parte cranial/anterior da larva; bainha refere -se extenso caudal da bainha da cauda (b) Apesar de serem listadas algumas espcies, as L3 apenas podem ser identificadas at ao gnero, com algumas excepes. Adaptado de Wyk et al. (2004).

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