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En cada tubo de ensayo se colocaron las medidas correspondientes de sustancias como muestra el cuadro: TUBO N
ALMIDON 1%; ml BUFFER FOSFATO pH 6.8:ml HCL O,3N : ml CLNa 0,9%: ml Agua dest.:ml Bao Mara 37 x 5 Amilasa Salival: ml 1 2.0 1.0 3.0 2 2.0 1.0 2.4 0.6 3 2.0 1.0 2.4 0.6 4 2.0 3.4 0.6
A. DETERMINACIN DEL SUSTRATO: TUBOS N 5 6 7 8 DIGERIDO DEL TUBO 1: ml 0.5 DIGERIDO DEL TUBO 2: ml 0.5 DIGERIDO DEL TUBO 3: ml 0.5 DIGERIDO DEL TUBO 4: ml 0.5 HCL 0.05N : ml 5 5 5 5 Sol. de Lugol: ml 0.5 0.5 0.5 0.5 Dejar en reposo por 15 minutos. Leer al fotocolormetro con filtro rojo (660nm)
5 Lectura inicial 0.015 6 0.016 7 0.261 8 0.829 BLANCO 1.757
Calculando la actividad enzimtica con la frmula: Actividad enzimtica = Lectura del blanco Lectura inicial 1) Tubo 5 : Ae= 1.757-0.015 Ae=1.742 2) Tubo 6: Ae=1.757-0.016 Ae=1.741 3) Tubo 7: Ae= 1.757-0.261 Ae=1.496 4) Tubo 8: Ae=1.757-0.829 Ae=0.928
TUBOS DIGERIDO DEL TUBO 1: ml DIGERIDO DEL TUBO 2: ml DIGERIDO DEL TUBO 3: ml DIGERIDO DEL TUBO 4: ml SOLUCION DE GLUCOSA 1%: ml SOLUCION BENEDICT : ml
9 0.5 2
10 0.5 2
11 0.5 2
12 0.5 2
13 -
0.5 2
Mezclar, Incubar en Bao Mara a 100C x 5 y enfriar en agua helada. Los resultados de la interpretacin se encuentran en la parte de Cuestionario.
Tubo N2: El lquido queda incoloro, debido a que se dieron las condiciones ptimas, para que ocurra la reaccin, por lo tanto la hidrlisis es total. En este caso s se aadi la amilasa.
Tubo N3: Queda un color rosado plido, esto demuestra que hubo hidrlisis, pero parcial, ya que no hubo NaCl. Es necesaria una cantidad de sales, por lo tanto, no actu de manera optima.
Tubo N4:
Queda un color azul, con lo cual se demuestra que no hubo reaccin, debido al medio cido en el que se encontraba por la presencia de HCl. La coloracin azul, se da por el contacto del almidn con el lugol.
Tubo N10: El color obtenido en este procedimiento, es celeste verdoso con precipitado rojo ladrillo, con lo cual demostramos hidrlisis, debido a que el producto no fueron en su totalidad azcares reductores. An se aprecia el color base de la solucin (azul), pero disminuido.
Tubo N11: El color obtenido es verdoso con precipitado rojo ladrillo, pero se obtiene menor cantidad de precipitado,
Tubo N12: El color obtenido es celeste, demostrando que con el sustrato trabajado en la reaccion de Benedict, no hubo hidrlisis previa, manteniendo el color del reactivo de Benedict.
Tubo N13: En este procedimiento, debido a que trabajamos con glucosa (azcar reductor), se obtiene una solucin roja, con precipitado rojo ladrillo, en mayor cantidad. El precipitado que se da es CuO2, formado al reaccionar los azcares reductores con el reactivo de Benedict.
4. Explique cules son las condiciones ptimas para una hidrlisis enzimtica del almidn soluble:
Fundamentalmente se necesita: Presencia de un pH ptimo (6.8) Las concentraciones de sustratos y enzimas adecuadas. Temperatura ptima, alrededor de 37.5 C. Un buffer para estabilizar el pH. Concentracin adecuada e iones (NaCl)
Sulfato cprico Citrato de sodio Carbonato anhdrido de sodio NaOH Formando un precipitado rojo ladrillo. Pueden reducir el Cu+2, que tiene color azul, a Cu+, el cual, precipita de la solucin alcalina como Cu2O. Cu+2 Cu+