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UNISA - UNIVERSIDADE DE SANTO AMARO

PARASITOLOGIA CLNICA
Relatrio referente as aulas prticas de parasitologia clnica, abordando os mtodos de Hoffman e Ritchie, e uma anlise microscpica do material obtido

Prof. Dra. Carolina Beyrold

Farmcia 5 Sem Matutino Bruna Manzi Humberto Casale

So Paulo, 26 de Maro de 2012 Mtodo De Hoffman OBJETIVO GERAL O mtodo de Hoffman detecta a presena de ovos nas fezes, e aps colorao com lugol possvel verificar a presena de cistos de protozorios e larvas de helmintos. OBJETIVO ESPECFICO O mtodo Hoffman um tipo de exame parasitolgico de fezes. Consiste basicamente na mistura das fezes com gua, onde ser filtrada por uma gaze cirrgica e deixado em repouso, formando uma consistente sedimentao dos restos fecais ao fundo do clice. Essa sedimentao inserida em lmina, feito um esfregao e observado em microscpio. Este mtodo detecta a presena de ovos nas fezes, e aps colorao com lugol possvel verificar a presena de cistos de protozorios e larvas de helmintos. MATERIAIS UTILIZADOS Coletor com fezes Amostra de fezes Clice cnico de 200 ml Gazes Lugol Lmina Lamnula Luvas Microscpio

Copo descartvel

Basto de vidro gua

DESENVOLVIMENTO Fomos orientados a colocar luvas, colocamos 2 g de fezes em um frasco com cerca de cinco ml de gua, e tritura bem com o basto de vidro depois acrescentamos mais 20 ml de gua e filtrar a suspenso para um clice cnico de 200 ml de capacidade, por intermdio de gazes cirrgicas corretamente posicionadas na boca do clice os detritos foram retidos e posteriormente lavados com 20 ml de gua , agitando se constantemente com o basto de vidro depois deixa essa suspenso repousa durante duas hora a 24 horas. Se o liquido estiver lmpido e o sentimento bom, Aps 60 minutos recolha o sedimento com uma pipeta Pasteur, coloca-se o lquido na lmina, adicione um corante (lugol) e por fim cubra com a lamnula. Observe a lmina ao microscpio com uma objetiva de 10x e, posteriormente, mude para a objetiva de 40X. A inspeo da lmina dever ser feita escolhendose um canto e ento movendo-se a lmina para ao canto oposto, em um movimento de ida e volta, procurando sobrepor parcialmente os campos microscpicos. RESULTADOS

Foram encontrados cistos de E. coli , Strongyloides stercoralis e Endolimax nana na amostra. Mtodo de Ritchie INTRODUO Este mtodo foi proposto por Ritchie em 1948, sendo um dos mais recomendados, pois rpido, fcil de ser executado e muito sensvel. Baseia-se no processo de centrfugosedimentao das formas parasitrias num sistema de formol e ter. til tanto para cistos de protozorios como para ovos e larvas de helmintos. Baseia-se na sedimentao atravs da centrifugao e na lavagem do material com ter, um solvente orgnico que forma uma fase apolar, que retm artefatos vegetais e toda gordura contida na amostra, durante a centrifugao da suspenso das fezes (Ritchie, 1948). O inconveniente deste mtodo a utilizao do ter, material inflamvel, voltil e explosivo. Por isso algumas modificaes tm sido sugeridas por alguns autores, como por exemplo a substituio do ter pelo acetato de etila, que alm de ser menos inflamvel, aumenta a eficincia do mtodo na deteco global de formas parasitrias. (YOUNG et al., 1979; GARCIA & SHIMIZU, 1981; CARVALHO et al., 2002). OBJETIVOS O mtodo de Ritchie tem como objetivo a identificao de doenas parasitrias, a partir da visualizao de cistos e ovos presentes nas fezes

do indivduo, e eventualmente a presena de larvas. MATERIAIS E MTODOS Formol 10%, ter, gua destilada, Gaze, Taa para EPF, Pipeta de 5 mL, Tubo de ensaio, Centrifuga, Lmina Lamnula.

Primeiramente a amostra fecal foi diluda em gua destilada a 5% em um Taa para EPF. A soluo resultante foi filtrada em gaze dobrada em 4x atravs de um funil de vidro, sendo utilizados 20 mL do sobrenadante. Este foi centrifugado por 3 minutos a 2.500 rpm, em seguida foi decantado o sobrenadante e o sedimento foi suspendido com 5 mL de formol 10%, que permaneceu por mais 3 minutos em repouso. O formol adicionado serve para fixar as formas parasitrias. Aps, adicionou-se 3 ml de ter, que serve para retirar a gordura das fezes. O tubo foi tampado com uma borracha e agitado por 30 segundos, sendo liberada a presso que os reagentes exerceram. Retirada a tampa e novamente centrifugada por 3 minutos a 2.500 rpm. Aps decantar o sobrenadante, utilizou-se uma gota do sedimento com uma gota de lugol para a preparao da lamina e visualizao ao microscpio. Em um pequeno aumento (objetiva de 10 X) possvel visualizar ovos e larvas, em um mdio aumento (40 X) possvel observar cistos. RESULTADOS

No material analisado no observamos nenhuma forma parasitria presente. CONCLUSO Os mtodos parasitolgicos devem ser realizados de maneira apropriada, buscando uma maior sensibilidade e especificidade na deteco dos parasitas intestinais. Em um laboratrio de rotina importante fazer mais de um mtodo de concentrao para detectar as formas parasitrias, principalmente quando h baixa carga parasitria. A tcnica de Hoffman muito utilizada, pois econmica e muito eficiente, porm ela dispende de maior tempo para realizar a sedimentao espontnea. J a tcnica de Ritchie devido ao seu alto custo promove uma rpida sedimentao com o auxlio da centrfuga, pouco utilizada, normalmente, sendo substituda pela a tcnica de Hoffmann. Ambos os mtodos utilizado para a pesquisa de ovos, cistos e larvas de helmintos, buscando assim diagnosticar algumas doenas parasitolgicas que afetam o individuo. Baseando nos resultados obtidos, busca-se determinar o tratamento adequado para a parasitose, priorizando a reabilitao da sade do paciente.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Fonseca Almeida, A; Santos, V.M.; Tonani, K.A.A; Segura-Muoz, S.I. Adaptao ao Mtodo de Ritchie para diagnstico de Helmintos e Protozorios de lodo de esgoto com minimizao de produtos qumicos. SOUZA, P. X. Nova Abordagem Laboratorial na Investigao das enteroparasitoses em Humanos. Universidade Federal Fluminense, 2005.

Endolimax nana cisto (aumento de 1000X colorao hematoxilina frrica)

Strongyloides stercorales larva rabditide (aumento de 400 X corante Lugol)

Entamoeba coli- trofozoito (aumento de 1000X colorao hematoxilina frrica)

Enterobius vermicularis

Entamoeba coli- cisto (aumento de 1000X colorao hematoxilina frrica)