DETERMINACION DE LIPIDOS EN ALIMENTOS UTILIZANDO EL METODO DE BLIGH-DYER

OBJETIVO Determinar Los Lipidos Existentes del man y la soya, Utilizando El Metodo De Bligh-Dyer. FUNDAMENTO TERICO Es una forma de extraccin que supera las dificultades planteadas. Utiliza un sistema monofsico (en este caso una nica fase lquida) formado por una mezcla de cloroformo, metanol y agua en relacin 1:2:0,8 (en volumen) que rpida y efectivamente disuelve los lpidos. El extracto es luego diluido con un volumen de cloroformo y agua, para formar un sistema de dos fases lquidas. Cualquier contaminante ser rpidamente particionado a la fase superior (acuosa), dejando a los lpidos libres de contaminantes en la fase inferior (clorofrmica). La ley de particin establece que si a un sistema de dos fases lquidas (inmiscibles o muy poco miscibles) se le agrega una cantidad de un tercer componente, soluble en ambas fases, ste se distribuir de acuerdo a su solubilidad en cada una de ellas. Esta ley indica que las concentraciones logradas en cada fase constituyen una constante, la constante de particin: [A1] Kd = [A2]

donde [A1] corresponde a la concentracin de la sustancia A en la fase 1 (orgnica) y [A2] a su concentracin en la fase 2 (acuosa). MATERIALES Y REACTIVOS Materiales Tubos de 250 x 25mm. (capacidad = 70 ml) Tubos de 150 x 15mm, (capacidad = 30 ml) con tapa rosca protegida internamente con tefln o PVC. Agitador rotativo para tubos. Centrifuga de baja rotacin. Reactivos Metanol p. a. Cloroformo p. a. Sulfato de sodio anhidro. Solucin de sulfato de sodio 1,5% en agua. PROCEDIMIENTO
Cuando se trata de productos con tenores de grasa encima de 20 % (leche integral en polvo, extracto hidrosoluble de soya, man, semillas, etc.) pesar hasta 2,0 a 2,5g de muestra. Para productos con porcentajes menores de 20% pesar entre 3,0 a 3,5g de muestra (es esencial que las muestras estn completamente molidas).

MAN

SOYA

Transferir las cantidades pesadas para tubos de ensayo con roscas de 70 ml.

Adicionar exactamente 10 ml de cloroformo, 20 ml de metanol 8 ml de agua destilada.

 Tapar hermticamente. Los volmenes de solvente que fueron adicionados (10; 20; 8) corresponden a una relacin en volumen de 1: 2: 0,8 cloroformo, metanol y agua.

En esta proporcin los tres solventes coexisten en una solucin homognea.

Colocar los tubos en el agitador rotatorio por 30 minutos. Adicionar 10 ml de cloroformo y 10 ml de solucin de sulfato de sodio 1,5%. Tapar y agitar por ms 2 minutos. Adicionar 10 ml de cloroformo y 10 ml de solucin de sulfato de sodio 1.5%.

 Tapar y agitar por ms de 2 minutos.

La adicin de ms cloroformo y ms agua muda la proporcin para 2: 2: 1,8 causando la separacin total del cloroformo que carga los lpidos (capa inferior, por tanto todos los lpidos de la muestra quedan disueltos en 20 ml de cloroformo) Dejar separar las capas de forma natural centrifugar a 1000 rpm por 2 minutos para acelerar la separacin.

Retirar la capa inferior (cloroformo) entre 13 y 15 ml y colocarlos en un tubo de 30 ml.

Adicionar aproximadamente 1,0g de sulfato de sodio anhidro.

 Tapar

agitar

para

remover

los

retos

de

agua

que

irremediablemente son arrastrados durante el pipeteado.

Filtrar rpidamente en un embudo pequeo usando papel filtro, la solucin debe quedar limpia cualitativo.

 Medir exactamente 5 ml del filtrado y colocarlos en un Bcquer de 50 ml previamente tarado. Colocar el Bcquer en una estufa a 100C hasta evaporar el solvente (15 a 20 min).

Enfriar en desecador y pesar.

CLCULOS:

P = peso de los lpidos (en gramos) contenidos en 5 ml G = gramos de la muestra.

Cuando las muestras contienen agua encima de 10% a la relacin de solventes 1: 2: 0,8 debe ser realizada considerando el agua contenida en la muestra. Por tanto es necesario conocer la humedad de la muestra. MUESTRA a: man

Peso de la muestra = 2.0408g Peso de matraz solo = 61.5130g Peso matraz + peso se lpidos = 62.2141g Peso de los lpidos (en gramos) contenidos en 5 ml = 0.7011g

MUESTRA b: soya Peso de la muestra = 2.0082g Peso de matraz solo = 95.0129g Peso matraz + peso se lpidos = 96.6076g Peso de los lpidos (en gramos) contenidos en 5 ml = 1.5947g

CONCLUSIONES La adicin de cloroformo y agua carga los lpidos. Los aceites que se obtienen por presin o bien por extraccin con disolventes, aun poseen impurezas, que se separan por una serie de tratamientos como destilacin y filtracin del mismo. Cuando las muestras contienen agua encima del 10% a la relacin de solventes 1:2:0.8 debe ser realizado de purificacin, en una proporcin de que

2:2:1.8 causa la separacin total del cloroformo

considerando el agua contenida en la muestra. Por tanto es necesario conocer la humedad de la muestra.

2. BIBLIOGRAFIA 1986, TEARSON. D; TECNICAS DE LABORATORIO PARA EL ANALISIS DE LOS ALIMENTOS, EDITTORIAL ACRIBIA, ZARAGOZA-ESPAA. JEAN-CLAUDE CHEFTE; INTRODUCCION A LA BIOQUIMICA Y TECNOLOGIA DE LOS ALIMENTOS; EDIT. ACRIBIA; VOLUMEN I; ZARAGOZA-ESPAA. LA CIENCIA DE LOS ALIMENTOS, NORMAN N. POTTER, 1 EDICIN 1973, EDITORIAL EDUX S.A. 1978, MXICO D.F. WWW.ELRINCONDELVAGO.COM