UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA E.A.P.

FARMACIA Y BIOQUMICA

Prctica N3: DETERMINACIN CUANTITATIVA DE PLOMO POR EL MTODO BAMBACH BURKEY

Departamento Acadmico de Farmacologa, Bromatologa y Toxicologa
Asignatura de Toxicologa y Qumica Legal

Quinto Ao Semestre 2013-I

Profesor Responsable: Q.F. Jos Llahuilla Quea Integrantes: Cano Mori, Csar Eduardo Chvez Carbajal, Lucero Gamarra Domnguez, Eliane Lima Clemente, Jon Prez Guerrero, Fiorella Quispe Ibarra Anthony 08040003 08040103 08040007 07040066 08040106 08040024
Horario de Laboratorio: Martes 10:00 am 2:00 pm

Departamento Acadmico de Farmacologa, Bromatologa y Toxicologa

Prctica N3: DETERMINACIN CUANTITATIVA DE PLOMO POR EL MTODO BAMBACH BURKEY

INTRODUCCIN
La contaminacin y el envenenamiento con plomo son problemas muy difundidos en las dos ltimas dcadas, el foco de inters acerca de la toxicidad del plomo en los seres humanos ha variado desde la exposicin industrial de este elemento al ambiental, a pesar de la tendencia observada en cuanto a una disminucin del uso de Plomo a nivel mundial, por ser un elemento no bio-degradable, sus concentraciones son ahora muy elevadas en la mayora de las ciudades. La intoxicacin crnica por plomo se le denomina Saturnismo, esta enfermedad se caracteriza por un no correcto de los glbulos rojos, el sistema cardiovascular y, quizs lo ms importante el sistema nervioso central. El plomo genera un amplio rango de efectos txicos que incluyen anemia, fallas renales, hipertensin, desrdenes gstricos e intestinales, disturbios en el sistema nervioso perifrico y permanentes problemas neuro-psicolgicos, desarrollo cognitivo retardado, deficiencias de atencin y de audicin, osteoporosis e inclusive llegando en muchos casos hasta ocasionar la muerte. La exposicin al plomo es muy amplia, esta puede ocurrir por contacto directo con bateras para autos, aditivo en la gasolina, revestimiento de cables, produccin de tuberas, cisternas, proteccin de materiales expuestos a la intemperie, fabricacin de municiones, pigmentos para pinturas y barnices, fabricacin de cristales, esmaltado de cermica, litargirio, soldadura de latas, antispticos1. La dificultad para el diagnstico se incrementa ms an, cuando la fuente de exposicin al plomo es inusual como pueden ser medicinas folclricas, cermica, ingestin de cuerpos extraos que contengan plomo, suplementos de calcio de hueso de animales, recipientes de plomo y balas retenidas de heridas por arma de fuego entre otros 2. A pesar de ser una de las enfermedades laborales ms antiguas, muchos de los trabajadores expuestos no cuentan con las medidas de proteccin personales adecuadas y se intoxican no slo ellos sino sus familias, ya que transportan el plomo al hogar en sus vestimentas, recurdese aqu que los nios son la poblacin ms vulnerable para este tipo de intoxicacin3. Es por ello que en el presente trabajo determinaremos la presencia de Plomo en una muestra biolgica de Orina por el mtodo de Bambach Burkey.

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Objetivos
o Comprender y poner en prctica las normas de Bioseguridad. o Conocer el efecto toxicolgico del Plomo en el organismo humano. o Determinar cuantitativamente mediante el Mtodo de Bambach - Burkey la cantidad de Plomo presente en una muestra de origen biolgico (orina).

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MARCO TERICO
El plomo puede ser inhalado y absorbido a travs del sistema respiratorio ingerido y absorbido por el tracto gastrointestinal; la absorcin percutnea del plomo inorgnico es mnima, pero el plomo orgnico si se absorbe bien por esta va. Despus de la ingestin de plomo, ste de absorbe activamente, dependiendo de la forma, tamao, trnsito gastrointestinal, estado nutricional y la edad; hay mayor absorcin de plomo si la partcula es pequea, si hay deficiencia de hierro y/ o calcio, si hay gran ingesta de grasa inadecuada ingesta de caloras, si el estmago est vaco y si se es nio, ya que en ellos la absorcin de plomo es de 30 a 50% mientras que en el adulto es de 10 a 30%.

Luego de su absorcin el plomo se distribuye en compartimentos, en primer lugar circula en sangre unido a los glbulos rojos, el 95% del plomo est unido al eritrocito, luego se distribuye a los tejidos blandos como hgado, rin, mdula sea y sistema nervioso central que son los rganos blanco de toxicidad, luego de 1 a 2 meses el plomo difunde a los huesos donde es inerte y no txico. El metal puede movilizarse del hueso en situaciones como inmovilidad, embarazo, hipertiroidismo, medicaciones y edad avanzada4. El plomo cruza la placenta y la barrera hematoenceflica. Finalmente se excretar por orina en un 90%, y en menor cantidad en la bilis, piel, cabello, uas, sudor y leche materna. Hay que recordar que en el hueso est depositado el 90% del plomo y que una disminucin de la plombemia sin quelacin indica esta distribucin a tejido blando y hueso.

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MECANISMO DE ACCIN El plomo tiene gran afinidad por los grupos sulfhidrilo, en especial por las enzimas dependientes de zinc. El mecanismo de accin es complejo; en primer lugar parece ser que el plomo interfiere con el metabolismo del calcio, sobre todo cuando el metal est en concentraciones bajas, el plomo altera el calcio de las siguientes formas 2: a) Reemplaza al calcio y se comporta como un segundo mensajero intracelular, alterando la distribucin del calcio en los compartimentos dentro de la clula. b) Activa la proteinquinasa C, una enzima que depende del calcio y que interviene en mltiples procesos intracelulares. c) Se une a la calmodulina ms vidamente que el calcio, sta es una protena reguladora importante. d) Inhibe la bomba de Na-K-ATPasa, lo que aumenta el calcio intracelular. Finalmente esta alteracin a nivel del calcio traera consecuencias en la neurotransmisin y en el tono vascular lo que explicara en parte la hipertensin y la neurotoxicidad. Por otro lado, el plomo es txico para las enzimas dependientes del zinc, los rganos ms sensibles a la toxicidad son el sistema hematopoytico, el sistema nervioso central y el rin. Interfiere con la sntesis del hem, ya que se une a los grupos sulfhidrilos de las metaloenzimas como son la d aminolevulnico deshidratasa, coproporfiringeno oxidasa y la ferroquelatasa; siendo el resultado final, el aumento de las protoprofirinas como la zinc-protoporfirina(ZPP) y la anemia. A nivel renal interfiere con la conversin de la vitamina D a su forma activa, hay inclusiones intranucleares en los tbulos renales, produce una tubulopata, que en estadios ms avanzados llega a atrofia tubular y fibrosis sin compromiso glomerular, caracterizndose por una proteinuria selectiva. En nios se puede ver un sndrome semejante al de Fanconi, con aminoaciduria, glucosuria, e hipofosfatemia, sobretodo en aquellos con plombemias altas. Varias funciones del sistema nervioso central estn comprometidas, principalmente porque el plomo altera en muchos pasos el metabolismo y funcin del calcio como explicamos previamente. El plomo se acumula en el espacio endoneural de los nervios perifricos causando edema, aumento de la presin en dicho espacio y finalmente dao axonal. El plomo depositado en el hueso es importante por tres razones 4:

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a) En el hueso se realiza la medicin ms significativa de exposicin acumulada al plomo. Actualmente en EEUU y Mxico se usa los rayos X fluorescentes que permiten la medicin de plomo en el hueso (tibia), como un indicador de exposicin y acumulacin, en muchos casos ayuda ms que una plombemia y/o una ZPP, la concentracin de plomo en la tibia correlaciona muy bien con la exposicin acumulativa al plomo, es un mtodo no invasivo e indoloro que por su alto costo slo se usa con fines de investigacin. b) El hueso es reservorio del plomo (95% del plomo corporal total est en el tejido seo) y puede aumentar en sangre cuando existan procesos fisiolgicos patolgicos que provoquen resorcin sea como embarazo, lactancia, hipertiroidismo, inmovilizacin, sepsis, etc. c) Tambin es rgano blanco, ya que el plomo altera el desarrollo seo.

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Determinacin cuantitativa de plomo por el mtodo de Bambach-Burkey I. Parte Experimental

I.I. REACTIVOS, MATERIALES Y EQUIPOS Reactivos
Muestra Problema previo tratamiento ( Orina) Citrato de Amonio Rojo Fenol Hidrxido de Amonio Cianuro de Potasio 10% Clorhidrato de Hidroxilamina 20% Ditizona Standar Buffer Cianuro de Amonio

Cantidad
15ml 15ml III gotas X gotas 5ml 1ml 15 ml 50ml 7ml

Materiales
Pipetas de 20,10 y 5 ml Probeta Pera de Bromo Soporte Universal Beaker

Cantidad
3 1 2 1 1

Equipo
Campana extractora Espectrofotmetro

Cantidad
1 1

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I.II. Fundamento
Determinacin del plomo mediante la ditizinometria, que consiste en la formacin de un complejo coloreado (naranja rojizo) por reaccin del plomo con la Ditizona en medio orgnico, que se lee en el espectrofotmetro a 520nm.

I.III. Toma y preparacin de la muestra I.IV. Tcnica Operatoria

Primero se realiza la destruccin de la materia orgnica, que puede ser por va hmeda (por accin del HNO3 cc, H2SO4 y HClO4) o por va seca (por accin del HNO3 y calentar hasta sequedad en una mufla 450C x 1h. Luego se hace la Cuantificacin:
-Citrato de amonio evita que los metales precipiten. -NH4OH (Dar el pH ideal = 8) -NaCN favorece la formacin del complejo ditizonometrico. -Hidroxilamina Cl, capta todos los metales menos al Pb. - Di tizona, forma el complejo quelante Ditizona-metal

Posteriormente se procede a aadir una solucin de buffer (pH = 3.4) y agitar por 4 minutos, hasta separacin de dos fases: fase clorofrmica y fase acuosa (plomo libre) Utilizar la fase corofrmica y aadir 7mL de amonio cianurada y 15mL de ditiazona estndar, agitar por 4 minutos y dejar separar. Da lugar a coloracin naranja-rojiza. Leer en espectrofotmetro a 520nm.

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Mecanismo de Reaccin:

DI TIZONA (VERDE)

FORMACION DEL COMPLEJO DITIZONATO DE PLOMO (pp. NARANJA)

I.VI. Curva de calibracin

II. III.

Resultados Discusin de resultados

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IV. Conclusiones
Mediante el presente estudio se lleg a determinar la Cuantificacin de Plomo por el mtodo de Bambach y Burkey presente en una muestra de orina, teniendo como resultado una concentracin correspondiente a Si bien podemos decir que es factible encontrar presencia de concentraciones de Plomo en orina, llegamos a concluir que la concentracin encontrada en este estudio Probablemente la orina en estudio se trate de una persona

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V.

BIBLIOGRAFIA

1. Keogh JP y Boyer LV. Lead en Sullivan y Krieger editores: Clinical Environmental Health and Toxic Exposures. Lippincott Williams & Wilkins, 2da edicin, 2001 2. Shannon Michael. Lead en Haddad, Shanon y Winchester editores: Clinical Management of Poisoning and Drug Overdose. WB Saunders, 3ra edicin, 1998. 3. Manejo de la intoxicacin por plomo en la niez. Salud Pblica Mx 2003; Vol. 45(sup 2):225-231 4. Krantz A, Dorevitch S. Metal exposure and common chronic diseases: A guide for the clinician. Dis Mon 2004; 50:215-262.

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