BIOTECNOLOGIA APLICADA I

Prof. MSc. Fbio Henrique Portella

PROGRAMAO
08h 08:30
08:30 09h 09h 10h 10h 10:20h 10:20h - 11h 11h 12h 12h 13:30h 13:30 15:10 15:10 15:30 15:30 17:00 Apresentao Mdulo I Panorama da Biotecnologia no Brasil e no Mundo Mdulo II - Definio, histrico e princpios Intervalo (20min) Mdulo III- Legislao, biotecnologia x produo qumica, cintica Mdulo IV Aplicao da biotecnologia na agricultura Almoo (1h30min) Mdulo V Indstria de alimentos, bebidas e enzimas Intervalo (20min) AVALIAO

PANORAMA DA BIOTECNOLOGIA NO BRASIL E NO MUNDO

Aproximadamente 80 mil produes cientficas no Brasil entre 1998-2007, concentrando-se nas reas de genmica/protemica, clulas-tronco, clonagem e produo heterloga de protenas, OGMs Brasil: 20 lugar no mundo

Aproximadamente 21 mil patentes no mundo entre 1998-2007, concentrandose nas reas nanobiotecnologia, OGM, terapia gnica, clonagem e produo heterloga de protenas e controle biolgico em agricultura
Mercado de biotecnologia no mundo cresceu 14% entre 2002-2006, movimentando aproximadamente U$160bi, sendo 63% proveniente do setor mdico/farmacutico No Brasil, h 2417 grupos de pesquisa ligados Biotecnologia, com destaque para os setores de agricultura e sade/farmacutica

PANORAMA DA BIOTECNOLOGIA NO BRASIL E NO MUNDO

A regio Sudeste a de maior destaque na pesquisa e mercado de Biotecnologia no Brasil 57% das pesquisas financiadas pelo Governo Federal e 31% pelos Estados

Entraves para o desenvolvimento no Brasil formao inter e multidisciplinar insatisfatria, falta de (ps)graduandos e capacitadores, baixos incentivos fiscais e salrios
EUA tem forte indstria de biotecnologia farmacutica e vem financiando pesquisas para combate do bioterrorismo, antraz, bola e botulismo. Em 2005, foram investidos U$51 bi na indstria Comunidade Europeia destaca-se o Reino Unido, principalmente na rea de biofrmacos, com investimentos em torno de 150milhes/ano Na sia, destacam-se Japo, China e ndia

PANORAMA DA BIOTECNOLOGIA NO BRASIL E NO MUNDO

No Brasil, h aproximadamente 49 cursos de ps-graduao em Biotecnologia distribudos em 12 Estados, incluindo MSc., DSc. e Mestrados Profissionalizantes No Brasil, entre 2004-2007, foram investidos R$210 milhes em Biotecnologia pela iniciativa pblica. No setor privado, o grupo Votorantim j investiu aproximadamente R$ 300 milhes No Brasil, o investimento privado ainda incipiente. Burocracia para atender legislao aumentam os custos. No mundo, existem em torno de 350 biofrmacos para 150 doenas, como mal de Alzheimer,artrite reumatide, ataques cardacos, cnceres, dermatite, diabetes, doena do Crohn, esclerose mltipla, fibrose cstica, hemofilia, insuficincia cardaca, hansenase, leucemia, lupus.

PANORAMA DA BIOTECNOLOGIA NO BRASIL E NO MUNDO

Desde 2009, o Brasil negocia transferncia de tecnologia entre multinacionais internacionais e o Brasil para fabricao de frmacos no Pas por Biotecnologia para pelo menos 25 patologias, como doena de Gaucher , antiasmticos e imunossupressores

Segundo o BNDES so necessrios 25 doutores e investimento inicial de U$10mi para abrir uma indstria de biotecnologia

NMERO DE EMPRESAS DE BIOTECNOLOGIA NO MUNDO

Canad Sua

ndia
Reino Unido Porto Rico Brasil Dinamarca Japo

Fonte: ABDI, 2006

Sucia
China

10000

20000

30000

40000

50000

60000

RANKING DOS PASES EMPREGADORES DE FUNCIONRIOS NO SETOR DE BIOTECNOLOGIA

Canad
Sua ndia Reino Unido Porto Rico Brasil Dinamarca Japo Sucia China

Fonte: ABDI, 2006

10000

20000

30000

40000

50000

60000

PANORAMA DA BIOTECNOLOGIA NO BRASIL E NO MUNDO

n Empresas 350, com concentrao em SP e MG
sade humana sade animal reagentes

Principais empresas de Biotecnologia no BR:

Instituto Butant Fundao Oswaldo Cruz (FIOCRUZ) Instituto de Tecnologia do Paran (TECPar) Instituto Ludwig EMBRAPA IAC Fundao Biominas Biobrs Hemobras Instituto Bio-Manguinhos Ach

15% 10%
13%

8%

40% 14%

agricultura
ambiente e bioenergia outros

Fonte: CEBRAP, 2011

Definio
Biotecnologia implica no uso de microrganismos, clulas animais ou vegetais, enzimas e produtos bioativos para quebrar, sintetizar ou transformar materiais, integrando o uso da bioqumica, microbiologia e engenharia gentica, em processos industriais, agricultura, dentre outros
Smith, J.E. Biotechnology, 2.ed. Edward Arnold: New York, 1988.

Histrico
6000 a.C Sumrios e babilnios produziam cerveja 4000 a.C Produo de pes pelos egpcios

1800 a.C Descoberta do vinho

1665 Hooke descobre as clulas 1675 Leewenhoek visualizou MO ao microscpio

1797 Uso de vacina contra varola

1830 Descobrimento das protenas 1845 Schleiden e Schwan teoria celular

1855 Descoberta da bactria Escherichia coli

Histrico
1857 Pasteur observou a habilidade fermentativa de determinados microrganismos, tornando-se o pai da biotecnologia 1863 Hereditariedade de Mendel 1883 Descoberta das enzimas por Payen Persaz

1897 Eduard Buchner demonstrou produzir lcool a partir de carboidratos utilizando-se leveduras
1914 (1 Guerra Mundial) Produo de glicerol e acetona por via microbiana; uso de bactrias para tratar esgotos na Inglaterra 1919 Uso da palavra biotecnologia pela 1 vez Sculo XIX processos realizados em condies no-asspticas 1929 Descoberta da penicilina por Flemming

Histrico
1939 (2 Guerra Mundial) Alta produo de antibiticos

1940 Introduo de tcnicas asspticas

1944 DNA responsvel pela hereditariedade 1953 Watson e Crick demonstram a estrutura do DNA

1973 Herbert Boyer, Stanley Cohen e cols. fizeram experimentos que levaram ao desenvolvido do DNA recombinante (DNA bacteriano + DNA sapo)
1982 Insulina engenheirada a partir de genes humanos expressos em E.coli, tornando-se o 1 agente teraputico aprovado para uso clnico em humanos 1984 Clonagem do vrus HIV

Histrico
1986 Testes em campo com transgnicos

1997 Clonagem da ovelha Doly

Sculo XX Estudos com gentica aplicada e tecnologia do DNA recombinante

2000 Projeto Genoma Brasileiro (Xyllela fastidiosa)

Princpios da Biotecnologia
Tecnologia de fontes renovveis
Tecnologia de resduos Tecnologia da fermentao Tecnologia ambiental Engenharia biomolecular

Legislao Brasileira
Lei 11.105/2005 Estabelece normas de

segurana e mecanismos de fiscalizao de atividades que envolvam organismos geneticamente modificados OGM e seus derivados, cria o Conselho Nacional de Biossegurana CNBS, reestrutura a Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana CTNBio, dispe sobre a Poltica Nacional de Biossegurana PNB.

Biotecnologia x Produo Qumica

Vantagens da bioproduo
Bioconverses do maior rendimento (Y yield)

Operam em baixas temperaturas, pH neutro

Especificidade cataltica na produo

Desvantagens da bioproduo
Risco de contaminao Necessidade de tcnicas de separao Reaes mais lentas

Cintica bacteriana Curva de crescimento

Metablitos primrios produzidos concomitante com o crescimento do microrganismo (vitaminas) Metablitos secundrios produzidos durante a fase estacionria (antibiticos) Idiofase produo de metablitos secundrios Trofofase produo de biomassa e metablitos primrios Idiofase produo de metablitos secundrios

Adaptao do MO ao meio

N morte > n crescimento escassez de nutrientes e alta densidade microbiana - competio Crescimento exponencial (alta velocidade e taxa metablica) - TROFOFASE

N morte = n crescimento - IDIOFASE

Cintica Microbiana
Principais parmetros teis no estudo de cintica microbiana
Biomassa (X) - (g/L), UFC/mL

Rendimento de biomassa por substrato (Yx/s) = DX/ DS (gX/gS)

Rendimento de produto por substrato (Yp/s) = DP/ DS (gP/gS) Rendimento de produto (Yp) = dP/dt Consumo de substrato (qs) = -dS/dt Velocidade mxima de crescimento (mmax) velocidade durante a fase exponencial = dX/dt (h-1) Estimativa de X em um determinado tempo (fase log) X = Xo.e mmax.t = lnX = lnXo + mmax.t

Cintica Microbiana Clculo de mmax

10000

Biomassa (g/L)

8000

Fase exponencial

6000
4000 2000 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8

Tempo (h)

Cintica Microbiana Clculo de mmax

ln Biomassa (g/L)
10 8 6 4

y = 1,3824x - 0,6716

mmax = dX/dt = tga lnX = lnXo + mmaxt mmax = (9-6,2)/(7-5) = 1,4h-1

2
0

4 Tempo (h)

Componentes dos processos unitrios

Microrganismos (inculo) Substratos, gua
Frascos (Erlenmeyer, Fernbach, biorreatores, dornas)

Aplicaes da Biotecnologia na Indstria

Agricultura Indstria de alimentos Empresas de saneamento Produo biocombustveis/energia de

Produo de biomassa microbiana

Indstria de bebidas Indstria farmacutica Produo de enzimas

Indstria de Minerao e petrleo Produo de compostos orgnicos (solventes, pigmentos) Meio ambiente Biolixiviao

Biorremediao

Agricultura
Controle biolgico (Bacillus thurigiensis, B. subtilis, B. popilliae, B. larvae, B. israelensis) pulverizao dos compostos bioativos ou esporos do MO Bactrias fixadoras de nitrognio (Rhizobium sp., Bradyrhizobium sp.) Transferncia de genes de interesse para plantas (cultura de tecidos) Melhor assimiladoras de fertilizantes

Resistncia a herbicidas (soja transgnica Monsanto resistente ao glifosato), microrganismos, insetos, nematelmintos
Aumentada produo de leos Aumentada capacidade fotossinttica Fixao de N2 atmosfrico Compostos secundrios de plantas (genes transferidos para MO) piretrinas (inseticida)

Agricultura
Controle biolgico e Pragas
B. thuringiensis, Beauveria

Biocontrole (www.biocontrole.com.br), Itaforte (www.itafortebioprodutos.com.br), Megabio (www.megabio.com.br), Bug Agentes Biolgicos (www.bugbrasil.com.br), Biocontrol (www.biocontrol.com.br) e Promip (www.promip.agr.br)

Agricultura
Caracterstica do produto Velocidade de ao Eficcia de controle Espectro de efeito Resistncia dos insetos alvo Danos ao meio ambiente Resduos Pesticidas qumicos rpido Aproximadamente 100% largo frequente frequente presente Pesticida microbiano devagar Aproximadamente 100% estreito raro Nenhum j mostrado ausente

Indstria de Alimentos
Panificao fermentos (leveduras) Laticnios Vinagre SCP Single Cell Protein (probiticos) Aditivos alimentares, como flavorizantes, antioxidantes, estabilizantes, acidulantes (cido ctrico, cido ltico) Molho de soja (shoyu) Cogumelos (Agaricus bisporus) Aminocidos (suplementos, flavorizantes glutamato monossdio e lisina, adoantes fenilalanina, aspartame) Vitaminas (complexo B, riboflavina) Xaropes de glucose e frutose Gomas polissacardeos espessantes

Indstria de Alimentos
Produto cido ctrico Aminocidos Gomas Substrato melao Microrganismo Aspergillus niger Corynebacterium glutamicum (Glu), Brenibacterium flavum (Lys) Pseudomonas sp., Leuconostoc sp.

Vitaminas

Pseudomonas sp., Propiniobacterium sp., Acetobacter sp. e os fungos Eremothecium ashbyi, Ashbya gossypii

Indstria de Alimentos (Panificao)

Trigo S. cerevisae* CO2 Evaporao do etanol Crescimento da massa

*Fermento produo de biomassa

Indstria de Alimentos Laticneos

Soro do leite ou leite (lactose) cido ltico Iogurte
Creme de leite Bactrias lticas Diacetis (gosto e aroma peculiares)
Bactrias lticas (Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus thermophilus), 45C

Manteiga

Indstria de Alimentos Laticneos

Leite
Enzima renina, bactrias lticas cido ltico

Coagulao das protenas (casena) - coalho

Corte do produto slido (queijo)

Bactrias lticas (Streptococcus sp. e Leuconostoc sp.

Maturao microbiana (acidez e gosto)

Inoculao de outros microrganismos Penicilluim roquefortii queijo roquefort

Penicilluim camembert queijo camembert

Indstria de Alimentos Vinagre

Vinho produzido, cidra, ma
Acetobacter, Acetomonas e Gluconobacter bactrias acticas aerbias estritas

Oxidao do etanol

cido actico (vinagre)

Indstria de Alimentos - SCP

SCP - Single cell protein (probiticos) alto teor de protenas leveduras: Saccharomyes cerevisae, Kluyveromyces fragilis fungos: Agaricus bisporus (champingnon) algas: Scenedesmus sp., Chlorela sp. Spirulina sp. bactrias: Lactobacillus, Bifidobacterium, Zymomonas mobilis)

Produo de aminocidos essenciais

cido L-Glutmico
usado como um componente de nutrio enteral e parenteral; Realador de sabor (glutamato monossdico) 1,5 milhes de toneladas por ano mundialmente. Corynebacterium glutamicum

Alanina
usado como um componente de nutrio enteral e parenteral; Ingrediente para medicamentos (terapia de hipertrofia de prstata)

Valina, treonina, dentre outros

Indstria de Bebidas
Produto Cerveja Vinho Saqu Rum Usque Conhaque Teor alcolico (%v/v) 3-4 14 14-16 50-95 (destilada) 50-95 (destilada) 40-43 (destilada) Substrato Malte da cevada Mosto da uva arroz melao Pasta de cereal sacarificada Mosto de frutas prensadas Microrganismo Saccharomyces cerevisae Saccharomyces cerevisae Saccharomyces cerevisae (Aspergillus oryzae converte amido em glucose) Saccharomyces cerevisae Saccharomyces cerevisae Saccharomyces cerevisae

Produo de cerveja
Semente de cevada
germinao Decantao e resfriamento

Fermentao (8-15C, 2-20d) S. cerevisae

Produo de amilase pelas sementes

Fervura do lquido (volatilizao de substncias indesejveis, coagulao de protenas, esterilizao)

Amido glucose e maltose Malte

Maturao (0C ou menos), dias ou semanas, transformao de substncias, separao das leveduras, adio de CO2 e retirada de gases
Filtrao + estabilizantes de espuma

Filtrao de cascas e bagaos do lquido aucarado

*Baixo grau de assepsia fermentaes abertas

Cerveja

Produo de vinho
Uvas selecionadas SO2 inibio dos MO naturais Prensa das uvas Secura depende do grau de fermentao do carboidrato maior tempo de fermentao S. cerevisae Fermentao Vinho Clarificao (decantao, filtrao) e envelhecimento em barris

Mosto

Biotecnologia e Enzimas
Enzima Microrganismo Aspergillus sp., Bacillus subtilis Trichoderma viride Saccharomyces cerevisae Saccharomyces fragilis Aspergillus niger Aspergillus niger Aspergillus niger Aspergillus oryzae, Bacillus sp. Uso Produo de detergentes, produo de pes e bebidas alcolicas Indstria txtil (jeans com aspecto manchado), sucos de fruta, papel Fabricao de doces Fabricao de doces Produo de detergentes Branqueamento de papeis e tecidos Sucos de frutas e refrigerantes sem resduos Produo de detergentes

Amilases
Celulases Invertase Lactase Lipase Oxidase Pectinase Protease

Biotecnologia e Enzimas
Enzima Renina Estreptoquinase Microrganismo Streptococcus sp. Uso Hipertensivo (produz angiotensina II) Preveno de ataques cardacos (anti-coagulante) Auxiliares na digesto Debridamento e cicatrizao de feridas Teraputica anti-cncer

Tripsina, amilase, lipase

Colagenase, subtilisina Asparaginase

Aspergillus sp., Bacillus sp.

Bacillus sp. -

Produo de enzimas
Brasil consumo de produtos importados
Grandes empresas - Pfizer, Genencor

Mercado mundial tecnologia enzimtica cresce, havendo interesse por processos que:
Tenham baixo custo

Confiram menor impacto ambiental

Utilizem matrias-primas renovveis Reaproveitem subprodutos agroindstria

MSc. Fbio Henrique Portella

Coordenador Especializao Biotecnologia Industrial ISME/FUNESO coordenacaobiotecnologiaisme@hotmail.com