INTRODUCCION

Despus de la obtencin de y recoleccin de la respectiva planta uncaria tomentosa se realiz el estudio fotoqumico de los extractos secos con el propsito de dar mayor conocimiento con base cientfico, de los metabolitos secundarios presentes en la planta. Para la obtencin de las muestras se realizamos extracciones siguiendo los estndares y empleando solventes de distintas polaridades, adems empleando tcnicas aprendidas en clase, asimismo se emple los diferentes equipo del laboratorio N 2.

OBJETIVO GENERAL

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Detectar las diferentes clases de metabolitos presentes en las plantas como son los alcaloides, los flavonoides, las quinonas, las saponinas, los taninos, compuestos fenlicos, compuestos triterpenoides, los esteroides, cardiotnicos y los leucoantocianidinas.

1. MARCO TEORICO
1.1. REPARACION DE MUESTRA PARA EL TAMIZAJE FITOQUIMICO
Hasta comienzos del siglo pasado, la farmacognosia se haba desarrollado principalmente en su aspecto botnico, refirindose particularmente a la descripcin e identificacin de las drogas, tanto enteras como pulverizadas, as como a su historia, comercio, recoleccin, preparacin y almacenamiento.(1) Farmacoergasia Se encarga del estudio del cultivo, recoleccin, secado y almacenamiento de las plantas. Estos son los denominados factores implicados en la produccin de Cultivo: Plantas silvestres y cultivadas: Las drogas vegetales se obtienen de plantas medicinales que pueden ser silvestres (crecen espontneamente) o cultivadas (controlando todo el proceso de produccin). Para nuestra practica hemos utilizado trozos de Uncaria tomentosa (Will) DC. No obstante, la recoleccin de estas plantas silvestres precisa de una planificacin y un control para evitar, en cualquier caso, la recoleccin indiscriminada e inadecuada que impida el posterior desarrollo de la especie o que altere a otras especies. El clima: Diversos factores extrnsecos relacionados con el clima, pueden afectar el cultivo de las plantas medicinales. El crecimiento y desarrollo de las plantas y generalmente, la naturaleza y cantidad de sus metabolitos secundarios se ven afectados por la temperatura, lluvia, orientacin, duracin del da (incluyendo la calidad de la luz) y altitud.

Temperatura: La temperatura es un factor de gran importancia en el control del desarrollo y metabolismo de las plantas. En general la formacin de esencias parece elevarse con temperaturas altas, aunque en das muy clidos puede producirse una excesiva prdida.

Lluvias: La importancia de los efectos de la lluvia en la vegetacin debe ser considerada ya que su efecto con las propiedades de retencin del agua del suelo puede llegar a una prdida de sustancias hidrosolubles de las hojas y de las races por maceracin, hecho conocido y aplicado a algunas plantas productoras de alcaloides (especialmente de Solanceas), hetersidos e incluso esencias. Duracin del da y caractersticas de las radiaciones: Las plantas varan mucho en sus necesidades, tanto respecto a la cantidad como a la intensidad de la luz requerida. En ciertos casos, las investigaciones han demostrado que la luz es un factor que influye en la cantidad de hetersidos o de alcaloides producidos.

Altitud: Para el xito del cultivo de las plantas medicinales es necesario estudiar las condiciones en las cuales florece la planta en estado salvaje o espontneo y reproducir esas condiciones o mejorarlas. Recoleccin: La recoleccin de especies vegetales depende de las caractersticas de cada especie. Se puede hacer de forma manual o mecanizada. Las cortezas se recolectan generalmente tras un periodo hmedo, pues de esta forma se separan ms fcilmente del leo. Para la recoleccin de gomas, gomorresinas, etc. Conservacin: Los vegetales al ser arrancados de su medio natural, ven alterado su equilibrio metablico y proliferan reacciones y fenmenos que degradan la droga vegetal recolectada. Las causas de alteracin pueden ser internas o externas. Causas de alteracin interna: Principalmente, son las reacciones enzimticas por medio de las enzimas propias de la planta que catalizan reacciones que llevan a la degradacin de la especie vegetal siendo las ms comunes: hidrlisis de glcidos (hidratos de carbono), de

esteres, de hetersidos; oxidaciones; condensaciones y polimerizaciones; isomerizaciones y racemizaciones. Causas de alteracin externa: El calor, las radiaciones, la humedad, el ataque de parsitos, microorganismos, insectos, entre otros. Todas estas causas potenciales de alteracin deben ser tenidas en cuenta, sobre todo en el proceso de almacenamiento de la muestra. Hay dos procesos fundamentales para evitar la accin enzimtica y conservar las drogas vegetales. Inhibicin enzimtica: Es un proceso reversible que consiste bsicamente en eliminar el agua de la especie hasta valores inferiores al 10 %. Al descender la cantidad de agua, las enzimas detienen su actividad, quedan inhibidas y la planta se conserva. Al tratar la droga conservada con agua, las enzimas pueden recuperar su actividad, por lo que es un proceso reversible. Los procedimientos utilizados para eliminar el agua son: Desecacin natural: Es el procedimiento ms lento y econmico, pero generalmente menos efectivo. Tenemos la desecacin al aire libre y al sol, la desecacin al aire libre y a la sombra. Desecacin artificial: El secado con calor artificial es generalmente ms adecuado ya que permite un control de la temperatura, de la humedad ambiental y del tiempo que dura la operacin. Tenemos los tneles de secado, las torres de secado, las estufas al vaco, la radiacin infrarroja. Liofilizacin o criodesecacin al vaci: Es el mtodo que ms reduce la cantidad de agua de una droga. Consiste en congelar rpidamente la droga a temperaturas muy bajas, entre -40oC y -80oC, y luego sublimar el agua aplicando vaci y calentando. El agua pasa directamente del slido a vapor, y la droga queda con una cantidad de agua muy baja y adquiere una consistencia esponjosa. Inactivacin enzimtica: Es un proceso irreversible que consiste en la destruccin las enzimas que pierden as su capacidad catalizadora y al inactivarse no progresa la degradacin de la droga. Tambin recibe el nombre de estabilizacin de una droga. Hay varios mtodos para inactivar las enzimas:

Con alcoholes a ebullicin: es un mtodo que est claramente en desuso ya que muchos principios activos se solubilizan en el alcohol, lo cual destruye la droga. sta se sumerge solo unos instantes en alcohol hirviendo.

Con vapores lquidos: Por ejemplo con vapor de agua, se introducen las drogas, colocadas en bandejas, dentro de una autoclave a 100-120oC. La temperatura necesaria en vegetales es superior a la requerida para estabilizar otros materiales, donde suelen bastar unos 60oC. Con vapores alcohlicos, el cual es un mtodo muy utilizado en la industria, permite trabajar a temperaturas ms bajas que cuando se trabaja con vapor de agua.

Mtodos de desinfeccin: muchas drogas deben de ser sometidas a un tratamiento especfico para evitar la proliferacin de microorganismos, insectos y otras especies animales. Almacenamiento: Las drogas almacenadas en sacos, cajones de madera, cajas de cartn y bolsas de papel absorben aproximadamente de 10 a 12% o ms de humedad. La farmacopea europea seala el contenido de humedad permisible para la fcula, la goma arbiga y otras drogas. Deben de ponerse en un envase hermtico con un deshidratante. Para grandes cantidades pueden emplearse cajones con cal viva en el fondo y una rejilla o arpillera para separar la droga de la cal. Las condiciones de almacenamiento de las drogas vegetales que se enuncian a continuacin: Almacenar en lugar fresco La temperatura es un factor importante en la conservacin de la droga, ya que el calor produce perdida de los principios activos, sobre todo de las esencias. Preservar de la luz provoca la decoloracin de la mayora de las drogas. Aislar de la atmsfera, porque el contacto con el aire facilita la oxidacin de los principios activos.

 Si son cortezas tres o cuatro aos, las races se pueden guardar 2-3 aos y las que tienen sustancias voltiles se pueden almacenar generalmente menos de 1 ao. Las drogas aromticas deberan ser anuales. Para el almacenamiento de las drogas desecadas se prefieren cajas metlicas a las de plstico. El aspecto de la droga (entera, fraccionada, pulverizada) tambin condiciona el tiempo de almacenamiento.(1)

RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS SECUNDARIOS Metabolitos secundarios Es el producto de un metabolismo especfico, originados a partir de un metabolismo primario, de distribucin restringida, con una funcin metablica especfica, se encuentran almacenados en el interior de las vacuolas. (4) Los metabolitos secundarios, tienen funciones ecolgicas especficas como atrayentes o repelentes de animales. Muchos son pigmentos que proporcionan color a flores y frutos, jugando un papel esencial en la reproduccin atrayendo a insectos polinizadores, o atrayendo a animales que van a utilizar los frutos como fuente de alimento, contribuyendo de esta forma a la dispersin de semillas. (5) Otros compuestos tienen funcin protectora frente a predadores, actuando como repelentes, proporcionando a la planta sabores amargos, hacindolas indigestas o venenosas. Tambin intervienen en los mecanismos de defensa de las plantas frente a diferentes patgenos, actuando como pesticidas naturales. (5)

Por otro lado, si tenemos en cuenta que la biosntesis de muchos de ellos comparten numerosos intermediarios que derivan de las mismas rutas metablicas. Sin embargo, la diferenciacin entre metabolitos primarios y secundarios puede no ser del todo adecuada. (5) Las principales rutas de biosntesis de metabolitos secundarios derivan del metabolismo primario del carbono. (5)

Es importante destacar que tambin reciben la denominacin de productos naturales y tienen un importante y significativo valor medicinal y econmico, derivado ste ltimo de su uso en la industria cosmtica, alimentaria, farmacutica. Un gran nmero de estos productos naturales, que ya se usaban en la medicina antigua como remedios para combatir enfermedades, se utilizan en la actualidad como medicamentos, resinas, gomas, potenciadores de sabor, aromas, colorantes, etc. (5)

Se agrupan en cuatro clases principales. 1. Terpenos. Entre los que se encuentran hormonas, pigmentos o aceites esenciales. 2. Compuestos fenlicos. Cumarinas, flavonoides, lignina y taninos. 3. Glicsidos. Saponinas, glicsidos cardiacos, glicsidos cianognicos y glucosinolatos. 4. Alcaloides.

LOS ALCALOIDES: En cuanto a su estado natural, los alcaloides son esencialmente sustancias presentes en todos los rganos de la planta, pueden encontrarse mayoritariamente en hojas (cocaina, nicotina, pilocarpina), en flores (escopolamina, atropina), en frutos (alcaloides del opio, peletiarina, coniina), en semilla (piperina, arecolina), en corteza (quinina, tubocurarina), en la raiz (emetina y cefalina). (6) Dentro del anlisis de la composicin qumica de la corteza de Uncaria tomentosa ha revelado la presencia de alcaloides, hetersidos del cido quinovico, triterpenos, esteroles y compuestos fenlicos. (6) Por lo tanto, aun no existe una definicin exacta para los alcaloides, pero se puede considerar como: Un compuesto orgnico de origen natural con propiedades farmacolgicas importantes a dosis bajas y que responden a reacciones comunes de precipitacin (6)

FUNCIN DE LOS ALCALOIDES EN LAS PLANTAS

La funcin de los alcaloides en las plantas no es aun clara, existen algunas sugerencias sobre el rol que juegan estas sustancias en los vegetales como: Sirven como productos de desecho o almacenamiento del nitrgeno sobrante, esta funcin es equivalente a la del cido rico o de la urea en los animales.

 Debido a que en su mayora, los alcaloides son asociados con cidos orgnicos que le facilita el transporte en la planta, pueden servir como productos de almacenamiento del nitrgeno no metabolizado o para transporte del mismo. Por lo general, los alcaloides son localizados en los tejidos perifricos de los diferentes rganos de la planta, es decir en el recubrimiento de las semillas, corteza del tallo, raz o fruto y en la epidermis de la hoja; esto nos permite pensar que los alcaloides cumplen una importante funcin como es la de proteger a la planta, por su sabor amargo de estos, del ataque de insectos. Los alcaloides pueden servir de reguladores del crecimiento, durante la germinacin de algunas plantas como la cebada, cuando se encuentran en suelos deficientes de potasio (6)

RECONOCIMIENTO DE LOS ALCALOIDES

Las tcnicas de reconocimiento son basadas en la capacidad que tienen los alcaloides en estado de sal (extractos cidos), de combinarse con el yodo y metales pesados como bismuto, mercurio, tugsteno formando precipitados; estos ensayos preliminares se pueden realizar en el laboratorio. (6)

En la prctica, se utilizan reactivos generales para detectar alcaloides como: La solucin de yodo-yoduro de potasio (Reactivo de Wagner) Mercurio tetrayoduro de potasio (reactivo de Mayer) Tetrayodo bismuto de potasio (reactivo de Dragendorff) Solucin de cido pcrico (reactivo de Hager) cido slico tngtico (reactivo de Bertrand)

PREPARACIN DE ALGUNOS REACTIVOS PARA ALCALOIDES

El reactivo de Mayer: Se prepara disolviendo 1.3 g de bicloruro de mercurio en 60 ml de agua y 5 g de yoduro de potasio y se afora a 100 ml. Los alcaloides se detectan como un precipitado blanco o de color crema soluble en cido actico y etanol.

El reactivo de Dragendorff: Se prepara mezclando 8 g de nitrato de bismuto pentahidratado en 20 ml de cido ntrico al 30% con una solucin de 27.2 g de yoduro de potasio en 50 ml de agua. Se deja en reposo por 24 horas, se decanta y se afora a 100 ml. La presencia de alcaloides se detecta por la formacin de un precipitado naranja rojizo cuando se le adiciona esta reactivo a una solucin cida de alcaloides. De los precipitados lavados se puede recuperar los alcaloides con una solucin saturada de carbonato de sodio. Algunas sustancias oxigenadas con alta densidad electrnica como es el caso de las cumarinas, etc. pueden dar falsos alcaloides con el reactivo de Dragendorff.

El reactivo de Dragendorff modificado Comprende dos soluciones: Solucin a: 0.85 g de subnitrato de bismuto disueltos en una mezcla de 10 ml de cido actico y 40 ml de agua. Solucin b: 8 g de yoduro de potasio disueltos en 20 ml de agua.Se mezclan 5 ml de solucin a con 5 ml de solucin b y 20 ml de cido actico para luego completar a 100 ml con agua. El reactivo de Hager: Consiste en una solucin saturada de cido pcrico en agua, este reactivo precipita la mayora de los alcaloides, los picratos se pueden cristalizar y ello permite por medio de resinas intercambiadoras, separar los alcaloides. El reactivo de Bertrand: Se disuelve 12.0 g de cido slico tngstico en agua y se afora a 100 ml, se ensaya con solucin de alcaloides sales (en HCl 1%). (6)

1.2. TAMIZAJE FITOQUIMICO

En el anlisis de los metabolitos secundarios presentes en una planta, existen una serie de mtodos utilizados para su deteccin que pueden ser histolgicos, biolgicos, fisicoqumicos y qumicos. El tamizaje fotoqumico o screening qumico es una de las etapas iniciales de la investigacin fotoqumica, que permite determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes qumicos presentes en una planta y a partir de all, orientar la extraccin y/o fraccionamiento de los extractos para el aislamiento de los grupos de mayor inters. El tamizaje fotoqumico consiste en la extraccin de la planta con solventes apropiados y la aplicacin de reacciones de coloracin, adems debe permitir la evaluacin rpida con reacciones sensibles, reproducibles y de bajo costo. Los resultados del tamizaje fotoqumico constituyen nicamente una orientacin y deben interpretarse en conjunto con los resultados del screening farmacolgico. Si hay presencia de flavonoides en el screening fotoqumico y una accin anti-inflamatoria en el screning farmacolgico, entonces se podr asociar a la fraccin de flavonoides. Entonces esta fraccin puede ser aislada y sometida a pruebas ms especficos. (2).

1.3. EXTRACCION
La extraccin es un proceso de transferencia de materia. Los mtodos de extraccin implica el tratamiento del material vegetal con el disolvente adecuado, que solubilice dentro de lo posible, y nicamente con el principio deseado.(3)

Puesto que los alcaloides son compuestos de carcter bsico, su solubilidad en los diferentes solventes vara en funcin del pH, es decir segn se encuentre en estado de base o de sal:

En forma de base, son solubles en solventes orgnicos no polares como benceno, ter etlico, cloroformo, diclorometano, acetato de etilo. En forma de sales, son solubles en solventes polares agua, soluciones cidas e hidroalcohlicas.(3)

El fundamento de la extraccin se basa en el carcter bsico de los alcaloides y en el hecho de su existencia en las plantas como sales de cidos orgnicos o como combinaciones solubles de otras sustancias entre los principales se encuentran: los cidos tglico, 3 metil butrico, benzoico, cinmico, hidroxifenil propinico, trpico y tricarboxlicos, y adems con otro tipo de sustancias como taninos y fenoles.(3)

Los vegetales contienen generalmente cantidades apreciables de materia grasa que impide el buen desarrollo en los procesos extractivos, produciendo emulsiones, por lo tanto, es til proceder a una delipidacin o desengrase de la planta seca y molida con solventes como hexano o ter de petrleo; es excepcional, pero puede ocurrir que se extraiga en estos solventes y en medio neutro alcaloides (3)

EXTRACCIN DE ALCALOIDES

Para la extraccin existen dos mtodos generales:

La extraccin en medio alcalino (por un solvente orgnico) y la extraccin en medio cido (con agua, alcohol o solucin hidroalcohlica). Extraccin por un solvente orgnico en medio alcalino: a) La droga pulverizada y desengrasada se mezcla con una solucin alcalina que desplaza los alcaloides de sus combinaciones salinas (aproximadamente 1 Kg de droga con un litro de solucin de hidroxido de amonio al 5% durante aproximadamente 4 horas); las bases liberadas son en seguida solubilizadas en un solvente orgnico de polaridad media. b) El solvente orgnico conteniendo los alcaloides bases es separado y concentrado a presin reducida, luego se agita con una solucin acuosa cida, donde los alcaloides se solubilizan en su forma de sales, mientras que otras sustancias que se encuentren en el extracto como pigmentos, esteroles y otras impurezas restan en la fase orgnica. c) Las soluciones acuosas de las sales de alcaloide son nuevamente alcalinizadas y extradas con un solvente orgnico no miscible; el solvente orgnico es deshidratado sobre una sal anhidra, filtrado y concentrado a presin reducida, el residuo que queda son los alcaloides totales (AT).(3)

Extraccin de alcaloides en medio cido: Hay que recordar que en su estado natural, los alcaloides se encuentran en forma de sales solubles en soluciones acuosas o hidroalcohlicas. La droga seca, pulverizada y desengrasada es extrada con agua acidulada o con alcohol o solucin hidroalcohlica acidulada, tendremos extractos de alcaloides en forma de sales. En estos casos los extractos pueden ser tratados de diferentes formas: Alcalinizacin y extraccin de los alcaloides base con un solvente orgnico no miscible.(3)

 Fijacin de los alcaloides sobre resinas intercambiadoras de iones para luego separarlas por elucin con cidos fuertes. Precipitacin de los alcaloides en forma de yodomercuriatos con el reactivo de Mayer concentrado; el complejo formado es recuperado por filtracin o centrifugacin, luego se redisuelve en una mezcla de aguaalcohol-acetona y se separan los alcaloides hacindolos pasar sobre resinas intercambiadoras de iones. (Esta tcnica es particularmente til para alcaloides amonio cuaternarios).(3)

1.4. FRACCIONAMIENTO
1.5.

PURIFICACION
La cromatografa (chromo= color y graphie=escritura, escribir en colores) fue inventada el 1903 por el botnico ruso Mikhail Tswe tt. Ismailov y Scraiber utilizaron lminas de vidrio para colocar capas muy delgadas de almina y luego aplicaron extractos vegetales, dando as la primera forma de cromatografa de capa fina. Egon Stahl (1956) di el nombre de cromatografa de capa fina, estandariz los procedimientos, equipos y adsorbentes dando un auge a esta tcnica simple, econmica y eficiente. TERMINOLOGA Fase Estacionaria (Adsorbente) Es una de las dos fases que forman un sistema cromatogrfico. Puede ser un slido, un gel o un lquido. Si es un lquido, puede estar distribuido en un slido, el cual puede o no contribuir al proceso de separacin. El lquido puede tambin estar qumicamente unido al slido (Fase Ligada) o inmovilizado sobre l (Fase Inmovilizada). Los adsorbentes ms s utilizados son: Silicagel (se utiliza en el 80% de las separaciones) xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica) Tierra Silcea Kieselguhr Celulosa (Nativa o micro -cristalina) Poliamidas. Estos sorbentes varian en tamao de partcula, da metro del poro, homogeneidad y pureza. Fase Mvil (eluente) Es el fluido (solvente o mezcla de solventes) que se filtra a travs o a lo largo del lecho estacionario (fase estacionaria), en una direccin definida. Puede ser un lquido (Cromatografa Lquid a), un gas (Cromatografa de Gases) o un fluido supercrtico (Cromatografa con Fluido Supercrtico). Cuando se utiliza un lquido como fase mvil mediante una serie eluotrpica (Tabla 1) se escoge la mejor combinacin de solventes miscibles para una buena separacin cromatogrfica de una muestra en sus componentes. El principio de las tcnicas cromatogrficas se basan en la separacin de las sustancias presentes en una mezcla dada, entre dos fases: Fase Estacionaria, que puede ser slida o lquida Fase Mvil, que eluye a travs de la primera y que puede ser un lquido, un gas o la combinacin de ambos - Esto permite distinguir entre dos sistemas cromatogrficos:

Cromatografa de adsorcin Cromatografa de particin Cromatografa de papel (CP) Cromatografa en capa fina (CCF)
Cromatografa en columna (CC): Cromatografa de gas (CG) y Cromatografa liquida de alta resolucin (CLAR O HPLC)

1.6. ELUCIDACION ESTRUCTURAL

2. METODO EXPERIMENTAL
2.2. TAMIZAJE FITOQUIMICO

MATERIALES Matraz Erlenmeyer Matraz probetas Pipetas graduadas Tubos de ensayos Baguetas Gradillas de tubos de ensayo Luna de reloj Pinza para tubo de ensayo Pizeta

REACTIVOS Etanol Limadura de magnesio cido clorhdrico Dragendorff Mayer Wagner H2O FeCl3 NaCl 5% Gelatina 1% Gel-sal Tolueno.

ENSAYOS REALIZADOS: 1. El Ensayo de Shinoda, permite reconocer la presencia de Flavonoides en un extracto vegetal. El ensayo se considera positivo cuando el alcohol amlico se colorea de amarillo, naranja o rojo intenso en todos los casos. (II). 2. El ensayo de Mayer y el de Wagner, permite identificar alcaloides, se produce de la forma descrita para los ensayos de Dragendorff, hasta obtener la solucin acida. si al aadir 2 o 3 gotas de la solucin reactiva de Mayer o Wagner respectivamente, se observa opalescencia, turbidez definida, precipitado coposo, entonces se considera positiva la presencia de este tipo de metabolito secundario. (II) 3. El ensayo de espuma permite reconocer la presencia de Saponinas tanto del tipo esteroidal como triterpenica. (II) 4. Para la identificacin de los TANINOS, se somete a sequedad y luego se agrega Tricloruro Frrico al 10%. Tambin se practica la precipitacin con gelatina: sobre el extracto acuoso se aade solucin de gelatina 1% que contiene adems NaCl 10%. De esta forma precipitan todos los taninos los pseudotaninos de alta concentracin. 5. Para la identificacin de los NAFTOQUINONAS se emplean el ensayo de BORNTRANGER. Si la fase acuosa alcalina se colorea de rosado a rojo, el ensayo se considera positivo.(II)

ENSAYOS Y REACTIVOS USADOS PRUEBA DE SHINODA PARA FLAVONOIDES Los flavonoides al ser tratados con cido clorhdrico y magnesio dan complejos coloreados de plido a oscuro. Al aadir un poco de alcohol isoamilico y agitar, el color pasa a la capa isoamilica. (III) REACTIVO DE KEDDE PARA G-GLUCOSA Y GLICOSIDOS CARDIACOS En medio alcano se forma un intermedio de ion cardenolico, que se adiciona nucleofilicamente en la posicin orto a los grupos nitro del aromtico; se forma un anin de color rojo violeta estabilizado por isomera. (III) REACTIVO DE LIEBERMANN-BURCHARD TRITRERPENICOS. PARA ESTEROIDES Y GLICOSIDOS

Ocurre una deshidratacin con formacin de un doble enlace conjugado a un segundo doble enlace, lo que da un producto coloreado. (III)

REACTIVO DE DRAGENDORFF PARA ALCALOIDES AMINAS TERCIARIAS Formacin de Yoduro doble colorido y en algunos casos insolubles, de formula general Bil3.B.Hi donde B es la molcula de alcaloide.(III) REACTIVO WAGNER Yoduro-Yoduro de potasio para alcaloide Formacin de Yoduro de doble alcaloide precitado caf. (III) REACTIVO DE MAYER PARA ALCALOIDES. Precipitacin con un ion grande formacin de un yoduro Doble, de formula general Hgi2-B.HI, donde B es la molcula alcaloide precipitado blanco.(III). REACTIVO GELATINA-SAL PARA TANINOS Ocurre la hidrolisis del tanino dando un compuesto fenlico y sin azcar. (III). REACTIVO DE ROSENHEIM PARA FLAVONOIDES Las sales de oxonio de todas las antocianinas y antocianinas se disocian hidroliticamente cuando estn en solucin diluidas, formndose la base de oxonio (II) que se isomera formando la pseudo-incolora (I) (III).

(A) PROCEDIMIENTO DE TAMIZAJE FITOQUIMICO

Identificar presencia Flavonoide

Identificar presencia Alcaloides

Identificar presencia Saponinas

Identificar presencia Taninos

Identificar presencia Naftoquinonas

Identificar presencia Flavonoide

Para identificar flavonoides se aplic el ensayo de shinoda que consiste en Mg + 2 o 3 gotas de HCl conc. En 3 mL de la alcuota separada, y que es reconocido por los colores caractersticos.

Identificar presencia Flavonoide

Para identificar flavonoides se aplic el ensayo de shinoda que consiste en Mg + 2 o 3 gotas de HCl conc. En 3 mL de la alcuota separada, y que es reconocido por los colores caractersticos.

1 mL+ 5 gotas de Rvo. de Dragendorff

1 mL+ 5 gotas de Rvo. de Mayer

1 mL+ 5 gotas de Rvo. de Wagner

Identificar presencia de taninos

4 mL se llev a sequedad

3 mL se llevo a sequedad y se disolvi con 3 mL de agua destilada y se reparti en tres tubos de ensayo en partes equivalentes

1mL se llevo a sequedad y se disolvi con 0.5 mL de FeCl3 10%

1 mL + 0.5 mL NaCl

1 mL+ 0.5 mL rtvo. Gelatina

1 mL0.5 mL gel -sal

Identificar presencia de Naftoquinonas

3 mL se llev a sequedad y luego se disolvi con tolueno y 1 mL y 1mL. De NaOH 10%

Identificar presencia de saponinas

2 mL. Se llevo a sequedad y luego se disolvi con 2 mL de agua y luego se agito durante un minuto.

ESTRACTO CON DIFERENTES DISOLVENTES

DICLOROMETANICO

Lieberman Burchard Borntranger Kedde

Realiza el ensayo directo Llevar a sequedad y re disolver en tolueno o benceno. Realizar el ensayo Llevar a sequedad y re disolver en etanol. Realizar el ensayo

EXTRACTO METANOLICO

Lieberman Burchard Shinoda Gelatina, sal, gelatina-sal Dragendorff Mayer Kedde Rosenheim

Llevar r a sequedad y re disolver en diclorometano. Realizar el ensayo Realiza el ensayo directo Llevar a sequedad y re disolver en agua.. Realizar el ensayo Llevar a sequedad y re disolver en HCl.. Realizar el ensayo Llevar a sequedad y re disolver en HCl.. Realizar el ensayo Llevar a sequedad y re disolver en etanol. Realizar el ensayo Llevar a sequedad y re disolver en agua.. Realizar el ensayo

EXTRACTO ACUOSO ACIDO (H2O/H+)

Dragendorff

Realiza el ensayo directo

Mayer
Wagner

Realiza el ensayo directo Realiza el ensayo directo

EXTRACTO ACUOSO (H2O)

Shinoda Rosenheim Espuma Gelatina, sal, gelatina-sal

Llevar a sequedad y re disolver en MeOH; Realizar el ensayo Llevar a sequedad y Realizar el ensayo Realiza el ensayo directo Realiza el ensayo directo

2.3.

EXTRACCION PERCOLACION
MATERIALES -Na2SO4 -Na2CO3 -pera de decantacin -acetato de etilo

PROCEDIMIENTO 1.-Se procede a alcalinizar el concentrado de ua de gato obtenido por percolacin (30 ml) hasta un pH 8.5

30 ml obtenidos de la percolacin de la ua de gato

En el bicker en el cual se encontraba el percolado se le agrego 10g. de Na2CO3 para asi poder alcalinizarlo.

Se agito con una bagueta el percolado y los 10g de Na2CO3

Se procedi a registrar el pH obtenido

pH inicial = 3.5

pH final =8.5

2.-Procediendo a lo indicado, se coloc el percolado ya alcalinizado en una pera de decantacin para asi poder extraer la fase acuosa de este.

Se coloc el percolado alcalinizado en la pera de decantacin para poder extraer la fase acuosa.

Se utiliz como disolvente acetato de etilo

Se coloc el disolvente en la pera de decantacin, para as poder extraer la fase acuosa

Procedimos a separar la fase acuosa del preparado

2.4.

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (CCF)

PARTE EXPERIMENTAL: IDENTIFICACIN DEL ANETOL POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA: NA: El extracto obtenido y pesado, redisolverlo en el disolvente elegido

Fase Mvil: cloroformo y metanol

Preparacin de la fase mvil

y sembrar en una cromatoplaca de silica gel GF 254

Adelgazamiento de capilares para el sembrado Revelado: 254nm 365nm PRIMERO: Las placas deben estar activadas para evitar que tengan adsorbidas molculas de agua que disminuiran su actividad. una vez activadas se marca con lpiz la zona de siembra a 1,5 cm del borde inferior de la placa se aguzan los capilares, se toma la muestra y se siembra con cuidado. La siembra debe ser puntual, lo ms pequea posible para que luego en la corrida se resuelva mejor. Para lograr la concentracin se debe testear previamente la concentracin adecuada: si siembro mucho se observa una especie de "volcn" porque la muestra bloquea el paso del solvente, no dando a basto para que ocurra una

competencia entre FE , FM y Muestra, si siembro poco, no ver al revelar las sustancias sembradas.

SEGUNDO: Una vez sembradas y secas, las placas se colocan en las cubas, que debieron ser previamente saturadas por media hora con la FM. La cantidad de FM que se coloca en la cuba es pequea, ya que esta no bebe tocar el punto de siembra.

TERCERO: El desarrollo, transcurre hasta que la FM llegue aproximadamente a 1 cm del borde superior En ese momento se sacan las placas con la pinza y se marca con lpiz, el frente del solvente

CUARTO: Una vez marcado el frente se seca con cuidado con corriente de aire caliente forzada, hasta que se evapore completamente los restos de FM. Las placas estn listas para revelar En el caso de la placa de la foto , se observa que la corrida de la derecha tiene mucha cantidad de muestra porque se aprecia la forma de "volcn"

retirar la placa luego de desarrollo, dejarla secar en un extractor de vapores y analizar con una lmpara UV.

RESULTADOS Al realizar los ensayos qumicos preliminares con el extracto etanlico obtenido de las hojas de la planta en estudio se obtuvo como resultado la presencia de alcaloides. El extracto etreo de las hojas de uncaria tomentosa se corri por cromatografa en placa delgada (placas de slica gel IB2 ), usando como solvente cloroformo y metanol BIBLIOGRAFIA. Read more: http://profe-farmacognosia.blogspot.com/#ixzz2X3WhQsjN

3. RESULTADOS Y DISCUSIONES 3.1. TAMIZAJE FITOQUIMICO

MUESTRA: Uncaria Tomentosa (ua de gato)

METABOLITOS SECUNDARIOA Flavonoides

ENSAYO Shinoda Dragendorff Mayer Wagner Espuma NaCl Gelatina Gelatina-Sal FeCl3 Tolueno + NaOH 10%

MUESTRA DE UA GATO

+ +++ + ++ + + -

alcaloides

Saponinas

Taninos

Naftoquinonas

o La presencia de los flavonoides en la ua de gato es debido a que el Mg es reducido por el HCl dando como productos H que en liberado en forma de gas y MgCl formado complejos dando coloracin naranja claro de naranja oscuro. o Los alcaloides se encuentran presentes y el resultado ms notorio es con el reactivo Dragendorff. o La presencia de saponinas es debido a la polaridad y la solubilidad que tiene con el agua que por su poder afrogeno forma espuma persistente en promedio de 30 segundos.

o Los taninos frente a la solucin tricloruro frrico dan una coloracin azul y el cual nos indica compuestos fenlicos. o Lo positivo del porque se forma una fase toluenica rosado que da presencia de naftoquinonas.

3.2.

EXTRACCION

El extracto obtenido se le agreg el agente desecante, en este caso Na 2SO4, y luego se dej reposar durante toda una noche para despus proceder a filtrar, el residuo ya filtrado se llev a concentrar a sequedad y el producto obtenido se utilizara en la prctica de cromatografa. 3.3. FRACCIONAMIENTO 3.4. PURIFICACION

4. CONCLUSIONES 4.1. TAMIZAJE FITOQUIMICO

A. En el extracto diclorometanico no se evidencia la presencia de triterpenos-esteroides y quinonas porque resulto negativa. B. El extracto metablico nos evidencia la presencia de triterpenosesteroides y alcaloides en nuestra muestra. C. El extracto acuoso acido nos muestra la presencia de alcaloides D. El extracto acuoso al ser de alta polaridad nos evidencia mucha presencia de saponinas, dudosa presencia de taninos. E. No se aprecia presencia de naftoquinona segn el cuadro del tamizaje realizado.

VI REFERENCIAS
1. UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA, ASPECTOS BSICOS DE FARMACONOGSA PROFESOR EDISON JAVIER OSORIO DURANGO. QF., MSC., PHD. FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA. SEPTIEMBRE 2009 PAG. N 8-20

2. Nikolai Sharapin. Fundamentos de Tecnologa de Productos Teraputicos. Colombia, 2000; p. 198.

3. 1.- UNIVERSIDAD DE ANTOQUIA, ALCALOIDES Y COMPUESTOS NITROGENADOS; Profesor, Gabriel Jaime Arango Acosta PhD, Facultad de Qumica Farmacutica Medelln, junio de 2008. 4. UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA, INTRODUCCIN AL METABOLISMO SECUNDARIO COMPUESTOS DERIVADOS DEL CIDO SHIKIMICO Profesor Gabriel Jaime Arango Acosta Dr. Sc. Pharm. Facultad de Qumica Farmacutica Medelln, mayo de 2010 5. Metabolismo secundario de plantas Adolfo valos Garca. Elena Prez-Urria Carril. Departamento de Biologa Vegetal I (Fisiologa Vegetal). Facultad de Biologa. Universidad Complutense. Madrid. Reduca (Biologa). Serie Fisiologa Vegetal. 2 (3): 119-145, 2009 ISSN: 1989-3620 6. 3.- UNIVERSIDAD DE ANTOQUIA, ALCALOIDES Y COMPUESTOS NITROGENADOS; Profesor, Gabriel Jaime Arango Acosta PhD, Facultad de Qumica Farmacutica Medelln, junio de 2008 7.

I.

Lic. Sonia Pereira Cabrera, Ing. Dvila Vega Torres, Dr. Manuel Dalmeida Saavedra, Dra. Galina Morales Torres. Tamizaje fotoqumico de los Extractos alcolicos, teres y acuoso. Cuba, 2009.Revista Qumica Viva. Vol.8, nmero 3/2009.

II.

Ing. Olga Lock Sing. Anlisis Fotoqumico y el certificado de marcha fotoqumica. Registro y control de calidad de recursos y productos naturales de uso en la salud. Revista Ministerio de Salud. Lima 1999;p.32.