2.

4- Oxidao metablica da glicose

A glicose ocupa uma posio central no metabolismo de muitos seres vivos, apresentando um nvel relativamente alto de energia potencial, o que a torna um bom combustvel para as reaces que ocorrem no ambiente intracelular. Este facto potenciado pela possibilidade de armazenamento celular em formas polimricas de elevado peso molecular (amido, glicognio, etc.) que so compatveis homeostaticamente (no desregulam os nveis de glicose no sangue). A glicose, em situaes de exigncia energtica, vai ser libertada destas formas polimricas de armazenamento, ficando disponvel para entrar em processos de oxidao e consequente extraco de ATP. de realar, que a glicose tambm usada como percursor de inmeros intermedirios metablicos em reaces de biossntese. De uma forma geral, podemos apontar trs vias metablicas principais para a glicose: o seu armazenamento (como polissacrido); a sua oxidao pela via das pentoses-fosfato, originando ribose-5-fosfato para a sntese de cidos nucleicos, e de NADPH para processos de reduo; a oxidao via gliclise originando piruvato e providenciando ATP e intermedirios metablicos de outras vias. A gliclise consiste numa srie de dez reaces qumicas, catalisadas por enzimas, nas quais uma molcula de glicose vai ser degradada em duas molculas de piruvato. Durante a sequncia de reaces, uma parte da energia livre, proveniente da degradao da glicose, vai ser conservada em ATP e NADH. Este processo o caminho central no catabolismo da glicose e de uma importncia vital para inmeros organismos, alguns dos quais tm neste processo, a sua nica fonte de energia metablica. comum dividir a gliclise em duas fases distintas: a fase de preparao e a fase de oxireduo; a cada uma delas vo corresponder cinco reaces qumicas. Na primeira fase gastam-se 2 molculas de ATP em duas fosforilaes; esta fase acaba com a formao de 2 trioses, 2 molculas de gliceraldedo 3-fosfato, que resultam da clivagem da glicose. Na fase de oxi-reduo vai haver um retorno do investimento de 2 molculas de ATP da fase anterior: vo ser formadas 4 molculas de ATP (atravs da fosforilao de ADP), para alm de 2 molculas de NADH, por cada molcula de glicose. Esta fase termina com a formao de piruvato.

A equao geral da gliclise ento a seguinte:

Esta equao pode ser separada em 2 processos distintos: por um lado a converso de glicose a piruvato, uma reaco exergnica, e por outro a formao de ATP a partir de ADP e Pi, endergnica. Na soma das duas, conclui-se que a gliclise tem uma variao de energia livre padro de -85kJ/mol. O processo de gliclise est esquematizado na figura seguinte: Sequncia Reaces Gliclise

1. A molcula de glicose fosforilada no carbono 6, por aco da hexoquinase, formando glucose-6-fosfato, H gasto de uma molcula de ATP. 2. A glicose-6-fosfato vai sofrer uma isomerizao, por aco da fosfohexose isomerase, formando-se ento frutose-6-fosfato. 3. Fosforilao da frutose-6-fosfato no carbono 1, mais uma vez com gasto de um ATP, formando-se frutose-1,6 bifosfato. Esta reaco o primeiro e mais importante ponto de regulao da gliclise: a formao de frutose 1,6-bifosfato exclusiva da via metablica da gliclise. Alm disso, a enzima PFK-1 uma enzima reguladora cuja actividade aumentada quando a clula entra em necessidades energticas (relao [ATP]/[ADP] menor que 1). 4. Clivagem da frutose 1,6-bifosfato que origina 2 trioses fosfatadas: o gliceraldedo 3fosfato e a dihidroxiacetona fosfato. 5. Apenas uma destas trioses pode ser directamente degradada nos processos seguintes da gliclise, que o gliceraldedo 3- fosfato. H ento a converso rpida da dihidroxiacetona fosfato em gliceraldedo 3-fosfato pela triose-fosfato isomerase. Chegase ao final da fase preparatria e a molcula de glicose inicial d origem a 2 molculas de gliceraldedo 3-fosfato. 6. O gliceraldedo formado na fase preparatria vai ser oxidado a 1,3-bifosfoglicerato, no para um grupo carboxilo livre, mas com a ajuda do fosfato inorgnico. O aceitador de hidrognios o NAD+, formando-se NADH + H+. 7. A enzima fosfoglicerato quinase catalisa a transferncia do fosforilo do grupo carboxilo do 1,3-bifosfoglicerato para um ADP, formam-se 2 molculas de ATP e de 3fosfoglicerato. Esta reaco e a anterior juntas constituem um processo conjunto em que o 1,3-bifosfoglicerato o produto intermdio: no total das 2 reaces, a reaco de formao de ATP acaba por ser exergnica tipo de formao de ATP dita como fosforilao ao nvel do substrato (intervm o o 1,3-bifosfoglicerato). 8. Troca entre o grupo fosforilo e o hidroxilo do glicerato, formando-se ento 2fosfoglicerato, num processo que ocorre em 2 etapas com a ajuda a fosfoglicerato mutase. 9. Nesta reaco, d-se a desidratao do 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato (PEP), por aco da enolase: h a remoo de 1 molcula de gua. 10. No ltimo passo da gliclise, que tambm um importante ponto regulador de todo o processo, a piruvato quinase desfosforila o fosfoenolpiruvato para o ADP, formando-se mais uma vez 2 molculas de ATP e o produto final da gliclise, o piruvato (num primeiro momento formada a forma enol do piruvato, o enolpiruvato e s depois adquire a forma ceto - simplesmente piruvato).

Analisando o destino dos produtos finais da gliclise, em condies aerbias, a gliclise apenas a primeira etapa da degradao completa da glicose: as 2 molculas de NADH vo ser reoxidadas na cadeia respiratria, na mitocndria, o que fornece a energia para a sntese de ATP por fosforilao oxidativa; O piruvato vai ser oxidado e transformado em acetato, que constituir o grupo acetilo da acetil-CoA. Esta segue para o ciclo de Krebs, sendo oxidada a CO2; No total, 30 a 32 molculas de ATP so formadas por cada molcula de glicose. Em condies anaerbias, o piruvato vai entrar em processos de fermentao lctica ou alcolica. No caso da fermentao lctica, d-se a reduo do piruvato a lactato: o piruvato aceita os electres do NADH e regenera NAD+, que permite a continuao da gliclise; Na fermentao alcolica, temos a converso do piruvato em etanol e C02 atravs de 2 passos. No primeiro passo, h uma descarboxilao irreversvel do piruvato formando-se acetaldedo. No 2 passo o acetaldedo reduzido a etanol, atravs da aco do lcool desidrogenase e do poder redutor do NADH, formando-se ainda CO2; Formam-se 2 molculas de ATP. A regulao do mecanismo de aco da gliclise conseguida atravs de um complexa interaco entre os nveis [ATP]/[ADP] presentes na clula, regenerao de NADH e regulao alostrica de vrias enzimas, nomeadamente a hexoquinase, PFK-1 e a piruvato quinase (G bastante negativos em todas as reaces catalisadas por estas enzimas). Para alm disso, existem certos metabolitos que do a informao e a percepo se a clula est com energia em excesso ou se pelo contrrio, necessita de uma activao do mecanismo da gliclise para se obter mais ATP. O piruvato, em condies aerbias, pode ser oxidado originando o grupo acetil da acetil-CoA (libertando-se dixido de carbono) que ir posteriormente entrar no ciclo de Krebs. Esta descarboxilao oxidativa catalisada pelo complexo piruvato-desidrogenase (PDH). Este complexo constitudo por mltiplas cpias de trs enzimas distintas - E1 (piruvato desidrogenase), E2 (dihidrolipoilo transacetilase) e E3 (dihidrolipoilo desidrogenase) - e necessita de 5 coenzimas: tiamina pirofosfato (TPP), flavina adenina dinucletido (FAD), Coenzima A (CoA), nicotinamida adenina dinucletido (NAD) e Lipoato. So tambm componentes vitais deste sistema em cada um destes grupos prostticos

as vitaminas tiamina (no TPP), riboflavina (no FAD), niacina (no NAD) e pantotenato (na CoA). A coenzima A formada por pantotenato, 3-fosfoadenosina difosfato (forma fosforilada de ADP) e -mercato-etilamina qu possui um grupo tiol (-SH) muito reactivo que fundamental no papel da CoA como transportadora de grupos acilo, como por exemplo o acetilo, que forma a acetil-coA. Os grupos acetil ligam-se a este grupo tiol formando tiosteres; j o o lipoato possui dois grupos tiol podendo formar ligaes dissulfito atravs de oxidao, sendo um bom transportador de H+ e de grupos acetil simultaneamente. Analisando mais pormenorizadamente a estrutura do PDH vemos que a enzima E2 tem trs subunidades/domnios distintos, um o local de ligao do lipoato ao resduo de Lis desta enzima, outro o local de ligao de E1 e E3 e o terceiro o centro activo, acetiltransferase. O TPP liga-se ao centro activo de E1 e o FAD ao centro activo de E3. A aco do complexo PDH um exemplo de canalizao do substrato, a aco da enzima sobre o substrato d-se por arrasto, no havendo libertao de produtos intermedirios para fora do complexo, reagindo assim mais rapidamente.

No primeiro passo, d-se a descarboxilao do piruvato pelo TPP da enzima E1, formandose hidroxietilo TPP, sendo nesta reaco que o complexo PDH exerce a sua funo de especificidade de substrato. No passo 2, h oxidao do grupo hidroxietilo a acetato que se liga a um dos grupos tiol do lipoato, ficando o outro reduzido a SH. O lipoato transporta ento o acetato at coenzima A, ligando-se este ao grupo tiol desta coenzima. Nos passos 4 e 5 h reoxidao dos grupos tiol do lipoato para este iniciar nova ronda de oxidao do piruvato. Esta reoxidao dos grupos tiol d-se por reduo do FAD (presente da E3) e posteriormente do NAD+. A regulao da produo de acetil-CoA feita pelo produto, ou seja ATP, acetil-CoA, NADH e mesmo cidos gordos de cadeia longa inibem o complexo PDH. Pelo contrrio, AMP, CoA e NAD+ activam o complexo, dado que a sua maior concentrao indica um fluxo menor de produo de acetil-CoA. De um modo geral, a reaco de oxidao do 5

piruvato activada em situaes de maior exigncia energtica, encaminhando mais acetilCoA para o Ciclo de Krebs. Em mamferos, esta regulao ainda complementada por modificao covalente da estrutura proteica. O complexo PDH inibido por fosforilao de um resduo de Ser numa das subunidades de E1 por uma protena cinase. A E1 activada novamente pela aco da outra protena reguladora existente no complexo, uma fosfoproteina que vai remover o grupo fosforilo por hidrlise, tendo portanto aco contrria cinase. A aco destas protenas regulada pela relao [ATP]/[ADP]. Uma maior relao [ATP]/[ADP] activa a protena cinase inibindo a produo de acetil-CoA e uma menor relao [ATP]/[ADP] activa a fosfoprotena activando novamente o complexo PDH.

2.5- Regulao da Gliclise, Oxidao de Hexoses, Via Das Fosfopentotoses

Mecanismos de regulao no hormonal da gliclise As oses, em particular a glicose, devem a sua importncia ao facto de a sua oxidao fornecer aos organismos vivos grande parte da energia que lhes necessria. A gliclise processa-se no citosol e regulada por trs enzimas: a primeira regula a entrada de glicose na via glicoltica, j que a enzima que catalisa a primeira reaco desta via metablica, e as outras duas regulam a via propriamente dita. importante frisar que as trs enzimas reguladoras correspondem s enzimas que catalisam reaces unidireccionais, isto , as enzimas que catalisam as reaces inversas (gliconeognese) no so as mesmas que catalisam as reaces na gliclise.

Regulao da entrada de glicose na via glicoltica - Hexocinase: Esta enzima catalisa a fosforilao da glicose em glicose-6-fosfato. As hexocinases I,II e III so inibidas pelo produto da reaco, glicose-6-fosfato. Se a metabolizao da glicose-6-fosfato menor que a sua sntese, esta acumula-se inibindo a hexocinase. Por outro lado, a hexocinase IV, predominante no fgado, no sofre regulao alostrica pela Glicose-6P, e possui um valor de Km mais elevado, pelo que a sua saturao ocorre para nveis mais elevados de glicose, permitindo a sua eficcia no metabolismo de altos nveis de glicose. A sua regulao consiste na inibio por uma protena especfica, que pode ser dissociada pela molcula de glicose (ficando a enzima activa). Caso haja uma baixa concentrao de glicose no sangue, ocorre inactivao da hexocinase IV pela frutose-6P (atravs do transporte da enzima para o ncleo da clula onde se liga reversivelmente protena reguladora); uma vez restaurados os nveis de glicose, esta reverte o processo anterior, dissociando a protena reguladora da hexocinase IV, que readquire a sua capacidade cataltica. 7

Regulao da via propriamente dita: Fosfofrutocinase-1:

A fosfofrutocinase-1 um enzima muito complexa que catalisa a fosforilao da frutose-6fosfato em frutose-1,6-bisfosfato - terceira etapa da via glicoltica. A regulao alostrica desta enzima coordenada por vrios activadores e inibidores. Em relao aos activadores: AMP, ADP (indicadores de falta de molculas energticas ATP), e a frutose-2,6-bisfosfato (que no uma composto intermedirio da gliclise, e pode ser indicadora de uma falha em reaces de fosforilao, induzindo a produo de frutose-1,6bisP, que j um intermedirio da gliclise e possibilita a sua continuao) . Quanto aos inibidores: ATP (a sua abundncia relativa indica disponibilidade de energia), frutose-1,6-bisfosfato e citrato (que indica a abundncia de intermedirios do ciclo de Krebs). Piruvato-cinase:

A piruvato-cinase catalisa a ltima reaco da via, a converso de fosfoenolpiruvato em piruvato. A sua regulao alostrica consiste no activador frutose 1-6-bisfosfato, e numa srie de inibidores: ATP, Acetil-CoA, cidos gordos de cadeia longa (indicadores da presena de fontes de energia) e a alanina (que pode ser sintetizada a partir do piruvato por transaminao). Existem duas isoenzimas principais de piruvato-cinase: L (fgado liver), que possui regulao hormonal, e M (msculo).

Oxidao de outras Hexoses Frutose: A frutose pode ser obtida, na sua forma livre, pela ingesto de frutas, ou como constuitunte do dissacrido sacarose, a qual hidrolisada pela enzima sacarase (obtendo-se uma molcula de frutose e outra de glicose). incorporada na via glicoltica de duas formas distintas, dependendo do local onde o seu metabolismo decorre. O primeiro passo ser a fosforilao da frutose, pela enzima hexocinase: 8

Frutose + ATP

Mg2+

Frutose 6-fosfato + ADP

sendo o produto frutose 6-fosfato incorporado na via glicoltica (transformada em frutose 1,6bisfosfato, continuando a via metablica). Por outro lado, se a fosforilao da frutose ocorrer no fgado, onde se encontra presente a enzima frutocinase, a fosforilao ocorre no carbono C1 da frutose, ao invs do carbono C6: Frutose + ATP
Mg2+

Frutose 1-fosfato + ADP

A frutose 1-fosfato sofre clivagem em gliceraldedo e di-hidroxiacetona-fosfato pela enzima frutose 1-fosfato aldolase: Frutose 1-fosfato gliceraldedo + di-hidroxiacetona-fosfato

A di-hidroxiacetona-fosfato transformada em gliceraldedo 3-fosfato pela triose-fosfato isomerase, e o gliceraldedo fosforilado pela enzima triose cinase, formando gliceraldedo 3fosfato. As duas molculas de gliceraldedo 3-fosfato obtidas so incorporadas na gliclise. Galactose: A galactose obtida por hidrlise da lactose (acar do leite), catalisada pela enzima lactase, da qual resulta uma molcula de galactose e uma de glicose. A galactose comea por ser fosforilada, no fgado, pela enzima galactocinase: Galactose + ATP
Mg2+

Galactose-1-fosfato + ADP

A converso da galactose 1-fosfato no epmero glicose-1-fosfato realizada na sua forma conjugada com o transportador uridina difosfato (UDP), que actua como coenzima de transferncia de grupos. (1) A galactose-1-fosfato transformada em UDP-galactose, pela enzima galactose 1fosfato uridiltransferase ocorre transferncia do grupo UDP-glicose para a galactose-1-P. (2) A UDP-galactose transformada em UDP glicose pela enzima UDP-glicose 4epimerase, ocorrendo a oxidao do grupo OH de C 4, no qual resulta um grupo cetona, e posterior reduo deste em hidroxilo, com inverso da orientao (epimerizao). O NAD o cofactor para a oxidao e para a reduo. (3) A UDP-glicose intervm na reaco (1), fornecendo o seu grupo UDP galatose 1fosfato, e havendo libertao de glicose 1-fosfato. 9

A glicose 1-fosfato obtida transformada em glicose-6-fosfato pela enzima fosfoglicomutase, sendo a G6P incorporada na gliclise. Manose: A manose ingerida na forma de polissacridos ou de glicopotenas. O seu metabolismo consiste na sua fosforilao pela enzima hexocinase: Manose + ATP
Mg2+

Manose 6-fosfato + ADP

A enzima fosfomanose isomerase ser a responsvel pela transformao da manose 6fosfato em frutose 6-fosfato, que pode ser degrada pela via glicoltica.

A oxidao de monossacridos como a frutose, galactose e manose permite a obteno de energia a partir de molculas alternativas glicose, o que se revela extremamente vantajoso em situao de dfice de glicose. Assim como a glicose, a degradao da frutose, galactose e manose requer o investimento de molculas de ATP na fosforilao destas molculas, investimento esse que ser compensado posteriormente, ocorrendo formao de molculas de ATP e de molculas com poder redutor (NADH + H +), que podero tambm ser utilizadas para obteno de energia na cadeia respiratria. de salientar que o metabolismo das oses descrito possui uma regulao parcialmente diferente da gliclise, uma vez que os compostos que so incorporados na gliclise no foram alvo do primeiro passo de regulao da gliclise: regulao pela enzima hexocinase. Tal facto pode explicar a menor velocidade de metabolizao da glicose face das outras oses.

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Via das Fosfopentoses

Na maioria das clulas, o maior destino catablico da Glicose-6-Fosfato a gliclise. No entanto, cerca de 10% dessa molcula ser tambm degradado pela Via das Fosfopentoses. Esta via metablica ocorre em clulas de diviso rpida (como a medula ssea, a pele ou a mucosa intestinal), em tecidos com extensa sntese de cidos gordos (como o fgado, tecido adiposo e glndulas mamrias em lactao), ou sntese activa de hormonas esterides (como as gnadas). As principais funes desta via metablica so: a formao de DNA e RNA, a sntese de coenzimas como o ATP, NADH, FADH2 e Coenzima A. Todas as enzimas intervenientes na via das fosfopentoses encontram-se no citosol celular. 1 Fase Fase das reaces oxidativas e irreversveis ou fase das desidrogenases Glicose-6-Fosfato NADP+ NADPH 6-Fosfogliconolactona Enzima: 6-fosfogliconolactonase (hidrolase) Apesar de esta reaco ser espontnea (exergnica), utilizada esta enzima para garantir a total converso das molculas reagentes nos produtos. libertada uma molcula de gua (reaco de hidrlise). essencial a presena de Mg2+, Mn2+ ou Ca2+ para se dar esta reaco. Enzima: Glicose-6-P Desidrogenase. O NADP+ reduzido. essencial a presena de Mg2+ ou Ca2+ para se dar esta reaco

H2O 6-Fosfogliconato NADP+

CO2

NADPH Ribulose-5-Fosfato Ribose-5-fosfato

Enzima: 6-Fosfogliconato Desidrogenase Reaco de oxidao e descarboxilao. Reduo do NADP+ essencial a presena de Mg2+, Mn2+ ou Ca2+ para

Enzima: pentose-fostato isomerase Reaco de isomerizao.

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2 Fase Fase das reaces reversveis no oxidativas

importante referir que a reaco de isomerizao da ribulose-5-P em ribose-5-P ainda faz parte da primeira fase desta via metablica. Regulao da Via Metablica A regulao desta via metablica efectuada tanto a nvel da sntese das enzimas que catalisam as reaces da via, como de regulao alostrica por parte dos substratos e metabolitos. Regulao por sntese de enzimas:

A regulao por sntese de enzimas consiste na regulao da transcrio dos genes que codificam as enzimas catalticas desta via, aumentando ou diminuindo a sua produo em funo das necessidades da clula. Desidrogenases: sntese induzida por hormonas (insulina e tiroxina) Transcetolase: sntese controlada pela Vitamina B1 na sua forma activa, Tiamina Pirofosfato. Regulao alostrica:

A regulao alostrica consiste na inibio da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase por parte do NADPH. Dado que a glicose-6-P existente na clula direccionada para a gliclise ou para a via das fosfopentoses de acordo com as necessidades da clula, caso esta necessite 12

(ou no) de produzir molculas redutoras de NADPH. Assim sendo, faz sentido que esta molcula seja um regulador alostrico da enzima que catalisa a entrada da glicose-6-fosfato na via das fosfopentoses (G6P desidrogenase). Para altos nveis de NADPH, ocorre inibio da enzima G6P desidrogenase, e consequente inbio da prpria via das fosfopentoses; a glicose6-fosfato segue, portanto, a via glicoltica. Por outro lado, quando existe baixa concentrao de NADP+ no citosol, existe necessidade de produo de molculas de NADPH, pelo que a enzima G6P desidrogenase ir ser estimulada alostericamente pelo NADP + e ir encaminhar a G6P para a via das fosfopentoses. Destino Metablico dos Intervenientes Com a realizao da via das fosfopentoses, so formados compostos que possuem diversas funcionalidades na clula. O produto final da primeira fase desta via metablica, a ribose-5-fosfato, um percursor na sntese de nucletidos para incorporao destes nos cidos nucleicos. O NADPH formado na fase oxidativa possui um papel fulcral na manuteno de um ambiente redutor no interior da clula: a sua oxidao possibilita a reduo do glutatio, que na sua forma reduzida, constitui uma eficiente proteco das protenas, lpidos e outros compostos de elevada importncia biolgica contra as molculas ou radicais oxidantes que possam existir na clula, como o radical superxido e o hidroxilo, ou a molcula de perxido de hidrognio. Como exemplo desta funo so os eritrcitos, nos quais existem grandes quantidades de oxignio molecular, que um forte oxidante, havendo a necessidade constante de prevenir e reverter oxidaes de biomolculas. O NADPH constitui ainda um elemento fundamental nas reaces de biossntese redutora de cidos gordos e outras molculas, actuando como agente redutor. Na segunda fase da via das fosfopentoses, h formao de compostos intermedirios da via glicoltica: frutose-6-fosfato e gliceraldedo-3-fosfato. Estes compostos podem incorporar-se na via glicoltica, quer no sentido da realizao da gliclise, quer no sentido da gliconeognese, no qual h formao de glicose-6-fosfato que poder reintegrar novamente a via das fosfopentoses.

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2.6- Catabolismo de cidos Gordos e Cetognese

Uma vez que j foram previamente abordados os conceitos bsicos relativos aos lpidos, assim como a sua digesto e transporte, vamos ento focar a oxidao dos cidos gordos, um conjunto de trs vias que tem como objectivo final a obteno de energia. De facto, o catabolismo de cidos gordos uma das fontes de energia mais importantes para muitos organismos, estando responsvel, por exemplo, por cerca de 80% das necessidades energticas do corao e fgado dos mamferos. Em primeiro lugar temos a -oxidao, na qual os cidos gordos sofrem sucessivamente a remoo de pares de carbonos sob a forma de acetil-CoA, com incio no terminal carboxil da cadeia. Se pensarmos no caso do cido palmtico, que possui dezasseis carbonos, so necessrias sete passagens pela cadeia oxidativa para que restem apenas dois carbonos que so automaticamente convertidos em acetil-CoA; logo, obtm-se um total de oito unidades de acetil-CoA. Note-se que a formao de cada molcula de acetil-CoA implica a remoo de quatro tomos de hidrognio (4 H+ e 4 e-). Na segunda fase apresenta-se o ciclo do cido ctrico, em que o facto mais importante, neste caso, o de as molculas de acetil-CoA provenientes da -oxidao serem oxidadas a CO2, juntando-se s molculas derivadas da glicose (via gliclise e oxidao do piruvato). Estas duas fases tm lugar na mitocndria e reduzem os transportadores de electres NADH e FADH2. Por ltimo, temos na terceira fase a cadeia respiratria, na qual os electres tm como aceitador final o O2, dando-se a formao de H2O e ATP.

-Oxidao de cidos Gordos Saturados com Nmero Par de Carbonos

Embora a -oxidao se altere naturalmente de organismo para organismo, o essencial do processo mantm-se: composta por quatro passos repetidos tantas vezes quantas necessrias. Trata-se de uma espcie de maneira elegante de quebrar uma ligao CH2-, relativamente estvel por natureza. A preparao nos trs primeiros passos de uma ligao CC menos forte, com uma cetona, faz com que esta seja um alvo mais fcil para um ataque nucleoflico pelo grupo SH da Coenzima A no passo final. No primeiro passo da -oxidao, observa-se a desidrogenao do grupo acil-CoA, o que vai induzir a formao de uma ligao dupla entre os Carbonos e , resultando num novo composto designado trans-2-Enol-CoA (o 2 designa a posio da ligao dupla). Este novo composto tem a configurao trans, embora normalmente as ligaes nos cidos gordos insaturados sejam cis. 14

Esta reaco catalisada por trs isoenzimas da acil-CoA desidrogenase, cuja utilizao depende do tamanho da cadeia: a very-long-chain acyl-CoA dehydrogenase (VLCAD), que actua em cidos gordos que tenham entre doze e dezoito carbonos; a medium-chain (MCAD), para cadeias com quatro a catorze carbonos e a short-chain (SCAD), no caso de cadeias com quatro a oito carbonos. Estas isoenzimas so flavoprotenas que possuem o FAD como grupo prosttico. Uma vez este reduzido, ir doar imediatamente os electres para a cadeia respiratria, com o auxlio da electron transferring flavoprotein (ETF). Neste passo junta-se gua ligao dupla entre os carbonos e , com o objectivo de formar o estereoismero L do -hidroxiacil-CoA, o 3-hidroxiacil-CoA. Esta reaco catalisada pela enol-CoA hidratase, sendo anloga reaco da fumarase no ciclo do cido ctrico. No terceiro passo d-se a desidrogenao do L--hidroxiacil-CoA a -cetoacil-CoA. A enzima interveniente a -hidroxiacil-CoA desidrogenase, sendo o aceitador de electres o NAD+. Esta reaco anloga que se d na desidrogenao do malato no ciclo do cido ctrico. O quarto e ltimo passo catalisado por uma enzima que se chama vulgarmente tiolase, mas cuja designao correcta acil-CoA acetiltransferase. A funo da tiolase promover a ligao do cetoacil-CoA a uma molcula livre de Coenzima A, o que quebrar a ligao com o terminal carboxil, libertando-se um acetil-CoA e ficando o cido gordo dois carbonos mais curto. Pode fazer-se uma analogia entre esta reaco e a hidrlise, uma vez que o -cetoacilCoA clivado pelo grupo tiol da coenzima A. Os trs ltimos passos da -Oxidao so catalisados por um conjunto diferente de enzimas conforme o tamanho do cido gordo em questo: no caso de a cadeia ter mais de doze carbonos, usada a protena trifuncional (TFP), que consiste num agregado de trs protenas muito eficiente na sua funo devido proximidade entre os centros activos das protenas que o compem; para cadeias com at doze carbonos, existe um conjunto de quatro enzimas solveis na matriz mitocondrial. Sendo a -oxidao a primeira parte do catabolismo dos cidos gordos, esta responsvel pela produo de trs tipos de produtos: acetil-CoA (um por cada passagem), electres (dois pares por passagem, nos transportadores adequados, NADH e FADH 2) e caties H+ (quatro por passagem). O acetil-CoA pode ser oxidado a CO 2 e H2O no ciclo do cido ctrico, que ir tambm implicar a libertao de electres. Os H + e os electres provenientes tanto da -oxidao como do ciclo do cido ctrico prosseguem ento para a cadeia respiratria, num processo que j foi descrito em apresentaes anteriores, cujos produtos so gua e energia sob a forma de ATP.

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Catabolismo dos cidos gordos insaturados

A maior parte dos cidos gordos presentes nos fosfolpidos e triacilgliceris so insaturados, tendo uma ou mais duplas ligaes. Estas ligaes esto em configurao cis, no podendo portanto ser activados pela enol-CoA-hidratase, a enzima que catalisa a adio de H2O dupla ligao do 2-Enol-CoA durante a -oxidao. Assim, torna-se necessrio recorrer a duas enzimas: uma isomerase e uma redutase. Qualquer que seja a conformao da cadeia de hidratos de carbono, a -oxidao ocorre normalmente at primeira dupla ligao encontrada. Para melhor compreenso do mecanismo de oxidao iremos ilustrar com dois exemplos. O cido oleico um cido gordo mono-insaturado (C18:1) com uma dupla ligao entre C9 e C10. Aps a sada dos primeiros trs pares de carbono como acetil-CoA forma-se o cis-3-dodecenol-CoA. Devido sua configurao cis torna-se um substracto inapropriado para a enol-CoA-hidratase, que actua exclusivamente em duplas ligaes de configurao trans. Recorre-se ento enzima 3-2-enol-CoA-isomerase que vai isomerizar o cis-3-enol-CoA em trans-2-enol-CoA, que convertido pela enol-CoA-hidratase em trans-2-dodecenol-CoA. Este pode seguir depois a via normal da -oxidao, formando mais seis molculas de acetil-CoA. Nos casos em que temos um cido gordo poli-insaturado (como o caso do cido linoleico, de 18 carbonos) outra enzima necessria. Este cido gordo tem uma configurao cis-9- cis-12. O cido linoleicoCoA segue a sequncia inicial da -oxidao, originando trs molculas de acetil-CoA e um cido gordo insaturado com a configurao cis-3- cis-6. Este no pode ser usado pelas enzimas da -oxidao, pois as duplas ligaes esto na posio e configurao erradas. A aco combinada da enol-CoA-isomerase e do 2,4-dienolCoA-redutase vo permitir a reentrada do composto no seguimento da -oxidao, como est explicado na figura da pgina seguinte. A oxidao de cidos gordos com ligaes duplas em carbonos mpares d-se pela cis-2-Enol-CoA-isomerase e em carbonos pares pela cis-2-Enol-CoA-isomerase (que vai criar uma dupla ligao num carbono mpar) e pela 2,4-Dienol-CoA-reductase, pelo mecanismo explicado anteriormente

Catabolismo dos cidos gordos com nmero mpar de tomos de carbono

A -oxidao dos cidos gordos com nmero mpar de tomos de carbono d-se exactamente da mesma forma que a -oxidao dos cidos gordos com nmero par de tomos de carbono. No entanto, no ltimo passo desta via metablica, temos um cido gordo com 16

cinco carbonos. Ao ser oxidado vai originar uma molcula de acetil-CoA e outra de propionilCoA. O acetil-CoA pode entrar no ciclo do cido ctrico, mas o propionil-CoA segue outra via, que envolve trs enzimas. Pela propionil-CoA-carboxilase (ligada ao cofactor biotina) transforma-se em D-metilmalonil-CoA que, atravs da metilmalonil-CoA-epimerase forma o seu estereoismero L. Este sofre depois um rearranjo intramolecular para formar succinilCoA, catalisado pela metilmalonil-CoA-mutase (mais coenzima B12).

Cetognese
Ao processo que consiste na formao de corpos cetnicos a partir de cidos gordos d-se o nome de cetognese. Os corpos cetnicos so produzidos sempre. No entanto, quando se verifica uma escassez tal de hidratos de carbono que a energia tem de ser obtida atravs da degradao de cidos gordos, a produo de corpos cetnicos aumenta. So produzidos essencialmente nas mitocndrias das clulas hepticas. H a quebra da cadeia de carbonos do cido gordo em segmentos que contm apenas 2 carbonos, segmentos esses que se encontram sob a forma de acetil-CoA. Normalmente o acetil-CoA oxidado no ciclo dos cidos tricarboxlicos, mas, no caso de no haver glicose suficiente, vai-se verificar uma carncia de intermedirios deste ciclo pelo que vai ocorrer a acumulao de acetil-CoA. Assim, d-se a converso do acetil-CoA em cido acetoactico, que posteriormente se poder converter em cido -hidroxibutrico e acetona. O cido -hidroxibutrico no um corpo cetnico, de acordo com as regras da IUPAC (no tem grupo cetona). No entanto, considera-se como corpo cetnico devido sua quase instantnea converso no organismo. A cetognese d-se em 3 passos principais: Condensao de duas molculas de acetil-CoA em acetoacetil-CoA, por aco da tiolase; Condensao do acetoacetil-CoA com um terceiro acetil-CoA por aco da HMGCoA sintetase, formando -hidroxi-metilglutaril-CoA (HMG-CoA). O mecanismo base desta reaco semelhante ao da condensao do oxaloacetato com acetil-Co-A para a produo de cido ctrico, no ciclo de Krebs; Degradao do HMG-CoA em cido acetoactico (corpo cetnico) e acetil-CoA por aco da HMG-CoA liase. Aps a formao do cido acetoactico, d-se a sua reduo a cido -hidroxibutrico por aco da -hidroxibutirato-desidrogenase, sendo que tambm se pode verificar a descarboxilao do cido acetoactico a acetona e CO2. Os corpos cetnicos so facilmente transportados pelo sangue para as clulas que os metabolizam. 17

De forma a poderem ser utilizados pelas clulas, o cido acetoactico activado por transferncia de um acetil-CoA a uma molcula de succinil-CoA. O cido -hidroxibutrico normalmente oxidado a cido acetoactico novamente antes da sua utilizao. Nas clulas, h a converso dos corpos cetnicos em acetil-CoA. A produo de corpos cetnicos regulada pela disponibilidade de acetil-CoA. Se a mobilizao de cidos gordos do tecido adiposo elevada, a -oxidao dos cidos gordos no fgado ir ocorrer a uma taxa elevada, assim como a sntese dos corpos cetnicos a partir do acetil-CoA resultante. A taxa de produo de corpos cetnicos aumenta se o indivduo sofre de subnutrio. No fgado, o acil-CoA formado no citosol pode seguir duas vias distintas. Pode sofrer -oxidao por parte das enzimas nas mitocndrias ou pode ser convertido em triacilgliceris ou fosfolpidos, sendo que a via a ser seguida depende da taxa de transferncia da cadeia de acil-CoA para o interior de mitocndria. Esta uma importante forma de regulao dos processos envolvendo o catabolismo de cidos gordos. A partir do momento em que entram na mitocndria, os cidos gordos sero reduzidos a acetil-CoA. O malonil-CoA o primeiro intermedirio da biossntese de cidos gordos no citosol, sendo que a sua concentrao aumenta sempre que se verifica uma boa reserva de hidratos de carbono. A inibio da carnitina-aciltransferase I pelo malonil-CoA inibe a oxidao dos cidos gordos sempre que h um nvel de glicose suficiente no fgado. Relativamente s enzimas intervenientes na -oxidao, sempre que a concentrao de NADH elevada relativamente de NAD+, a hidroxiacil-CoA inibida; por outro lado, altas concentraes de acetil-CoA inibem a aco da tiolase.

-oxidao (trs ciclos) aco da isomerase (passagem de cis-3 para trans-2 -oxidao (um ciclo)

aco da redutase atravs do NADPH aco da isomerase (a dupla ligao transferida para o segundo carbono) -oxidao (quatro ciclos) 18

2.7- CATABOLISMO DE PROTENAS E AMINOCIDOS, E UREOGNESE

A protena tem muitas funes importantes no corpo: o sangue necessita das protenas para os glbulos vermelhos, glbulos brancos e numerosos compostos do plasma; a imunidade do corpo tambm depende das protenas, que so necessrias para a formao dos anticorpos e dos glbulos brancos que combatem as doenas; as enzimas e as hormonas (por exemplo a insulina) tambm so protenas, etc. As protenas podem ser encontradas em produtos animais como carne, peixe, ovos, leite e seus derivados e em alimentos vegetais como cereais, gros e sementes. Todas as fontes de protenas contm alguns dos aminocidos essenciais, mas em quantidades variadas. A degradao das protenas realizada, inicialmente, por enzimas que so sintetizadas no estmago, pncreas e intestino delgado. Tanto o pncreas como o estmago sintetizam enzimas sob a forma inactiva (zimognios) que so activadas por clivagem proteoltica. O intestino delgado, por outro lado, sintetiza as enzimas j activas. Uma das enzimas sintetizadas pelo estmago o pepsinognio, forma inactiva. A sua forma activa designa-se por pepsina. Neste processo de activao esto envolvidas as hormonas: gastrina, histamina e acetilcolina. A gastrina produzida nas clulas G ao nvel do antro gstrico que vai ser excretada para o sangue. Quando a concentrao de gastrina aumenta, esta vai actuar ao nvel das clulas parietais do estmago. Estas clulas fazem com que haja produo de HCl atravs de uma bomba H+, k+, ATPase (bomba de protes). Assim, o pH no interior do estmago diminui o que faz com que o pepsinognio se transforme em pepsina (pepsina quebra as ligaes peptdicas). O suco pancretico contm o tripsinognio e o quimiotripsinognio, formas inactivas cujas formas activas designam-se por tripsina e quimiotripsina, respectivamente. A tripsina e a quimiotripsina hidrolisam polipptidos, transformando-os em oligopptidos. Ao nvel do duodeno, o tripsinognio entra em contacto com a enterocinase, enzima segregada pelas clulas da mucosa intestinal, convertendo-se em tripsina, que por sua vez contribui para a converso do precursor inactivo quimiotripsinognio em quimiotripsina, enzima activa.

Existem duas vias para a degradao das protenas: via proteoltica da ubiquitina (dependente de ATP) e via lisossomal (independente de ATP). Ambas resultam na quebra das ligaes peptdicas entre os aminocidos numa protena pelas proteases.

Via da ubiquitina
Em geral, na via da ubiquitina, as protenas so degradadas por um complexo de protease 26S (tambm designado por proteassoma) que reconhece as protenas a ser degradas pela presena de ubiquitina nestas. A ubiquitina uma protena, presente em todas as clulas eucariticas, que possui um importante papel na marcao de protenas para a sua degradao. Trs enzimas (E1, E2 e E3) participam na conjugao de ubiquitina s protenas. Inicialmente, a enzima E1 liga-se ubiquitina tornando-a activa. A ubiquitina activada ento ligada enzima E2 e posteriormente enzima E3 que catalisa a transferncia da ubiquitina para a protena alvo. Esta protena ubiquitinada depois digerida por um complexo de protease 26S. Esta protease energizada por ATP poupa a ubiquitina, que reciclada, desdobra a protena e digere-a. 19

Via lisossomal
Lisossomas so vesculas repletas de enzimas hidrolticas em estado inactivo. O perfeito funcionamento das enzimas lisossmicas depende de um pH prximo de 5. Dentro destas enzimas destacam-se as catepsinas B, C, D, H, L, s quais se atribui a degradao de protenas associadas membrana celular e de diversas outras protenas em condies de privao nutricional (em tecidos como o fgado, o rim e o msculo cardaco). Existem dois caminhos alternativos dos quais derivam os materiais a serem digeridos pelos lisossomas: autofagia e endocitose. A autofagia diz respeito digesto gradual dos componentes da prpria clula. O primeiro passo da autofagia um mecanismo de envolvimento da protena a ser digerida por uma membrana do retculo endoplasmtico, ou membrana plasmtica formando ento uma vescula designada por autofagossomo. Este autofagossomo funde-se com os lisossomas ocorrendo digesto do seu contedo. A endocitose est envolvida no processo de degradao de materiais estranhos vindos do extracelular (por meio da endocitose), de protenas de membrana e componentes celulares envelhecidos. Esta protelise estimulada pelo jejum no fgado. A protelise ocorre atravs de processos selectivos e no selectivos. Entre os no selectivos esto a macroautofagia (fuso de lisossomas com vacolos originrios do complexo de Golgi e retculo endoplasmtico liso) e a microautofagia (invaginao da superfcie lisossomal que leva produo de vesculas cujo contedo proteico sofre degradao no interior do lisossoma). Ao processo contnuo de sntese e degradao das protenas d-se o nome de reciclagem ou renovao proteica. Em geral um adulto degrada 1-2% das suas protenas por dia. Cerca de 75-80% dos aminocidos libertados so usados para nova sntese proteica e os restantes 20-25% so degradados (e no armazenados). A renovao proteica permite a sntese de protenas adequadas assim como a degradao de protenas desnecessrias. Para alm disso, protege as clulas de acumulao de protenas anormais (como por exemplo erros na sntese proteica ou desnaturao espontnea). Protenas Degradao Aminocidos de notar que a degradao das protenas em resposta ao stress, deficincias nutritivas e cansao pode ser suprimida ou promovida. Em resposta ao stress, o corpo segrega a epinefrina, a noreepinefrina, o cortisol e outras hormonas. Os glicocorticides (tais como o cortisol) tm uma aco catablica, suprimindo, assim, a sntese de protenas e promovendo a degradao destas em aminocidos. Este processo necessrio para neutralizar o stress. No entanto, se o processo for prolongado, o catabolismo resultante muito prejudicial ao corpo que pode resultar na supresso do sistema imunitrio, dos orgos digestivos, das hormonas de crescimento e de outros sistemas importantes do corpo. Quando um corpo apresenta deficincias nutritivas, ou seja, quando no pode metabolizar correctamente acares, hidratos de carbono e gorduras que participam nos ciclos da gliclise e ciclo de krebs haver digesto das protenas endgenas a fim de produzir energia. O uso da protena para a obteno de energia no necessariamente econmico para o corpo, porque a manuteno, o crescimento, e o reparo dos tecidos so comprometidos para se encontrar necessidades de energia. Tambm, a fatiga e outras condies da sade podem causar um estado catablico superior. Os aminocidos, constituintes das protenas, podem ser usados como precursores de molculas biolgicas azotadas, pois tm na sua constituio um grupo amina. O excesso de aminocidos da dieta no armazenado nem excretado mas sim convertido em piruvato, 20 Sntese

oxalacetato e -cetoglutarato. Consequentemente, os aminocidos podem tambm ser considerados precursores da glicose, cidos gordos e corpos cetnicos. Deste modo, podem ser considerados compostos energticos. O maior local de degradao dos aminocidos o fgado e neste processo est envolvido a eliminao do grupo amina dos aminocidos a ser degradados. As principais reaces envolvidas na eliminao do grupo amina so a transaminao e a desaminao oxidativa. A uma transaminao acoplada a uma desaminao oxidativa d-se o nome de transdesaminao. Na transaminao h transferncia do grupo amina de um aminocido para um -cetocido, originando o -cetocido e aminocido correspondentes: aminocido A + cetocido B aminocido B + cetocido A Na desaminao oxidativa h remoo do grupo amina de um aminocido, catalisada por uma aminotransferase com reduo de NAD + (ou NADP+) a NADH + H+(ou NADPH + H+): aminocido + NAD(P)+ + H2O cetocido + NAD(P)H + H+ + NH4+ As aminotransferases que catalisam este tipo de reaces so especficas para cada tipo de aminocidos originando -cetocidos correspondentes. Assim, no decurso do seu catabolismo os aminocidos perdem os seus tomos de azoto que, na sua maioria, so incorporados na ureia e excretados na urina. O amonaco (NH3) forma-se em todos os tecidos, mas como um composto extremamente txico para o organismo incorporado em alguns compostos menos txicos. O amonaco pode ser transportado para o fgado sob a forma de glutamato, glutamina ou alanina. Em meio aquoso o amonaco (NH3) encontra-se sob a forma de io amnio (NH4+). O amonaco obtido a partir dos aminocidos quando estes so necessrios como percursores da glicose ou para fornecer energia. O metabolismo bacteriano no lmen intestinal tambm uma fonte importante de amonaco, sendo absorvido e transportado para o fgado. A glutamato desidrogenase catalisa a reaco em que se forma glutamato a partir da incorporao de amonaco no -cetoglutarato. A reaco contrria catalizada pela mesma enzima. O glutamato um dos aminocidos que entram nas transaminaes e desaminaes oxidativas. A glutamato desidrogenase regulada alostericamente por nucletidos de purinas. Quando os nveis de ADP e GDP so elevados, nessessrio a oxidao de aminocidos para a obteno de energia e a glutamato desigrogenase aumenta a sua actividade no sentido de degradar glutamato. Por outro lado quando os nveis de ATP e GTP so elevados estes so activadores alostricos da sntese de glutamato. A glutamina representa metade dos aminocidos em circulao e o seu grupo amina um doador de azoto para vrias classes de molculas como as bases pricas e o grupo amina da citosina. Na presena da glutamina sintase e ATP o amonaco incorporado no glutamato formando glutamina. Esta reaco ocorre em duas etapas. Numa primeira fase, o ATP doa um grupo fosforil ao glutamato formando-se um composto intermedirio (-glutamil-fosfato). Na segunda fase, o amonaco reage com este composto intermedirio deslocando o fosfato inorgnico para produzir glutamina. O amonaco produzido na degradao dos aminocidos nos msculos tambm transportado para o fgado sob a forma de alanina usando o ciclo glicose-alanina. Nos msculos o amonaco reage com o -cetoglutarato na presena da glutamato- desidrogenase formando glutamato, que por sua vez na presena de alanina-transaminase transfere o seu grupo amina para o piruvato formando alanina. A alanina no fgado transfere o seu grupo amina para o -cetoglutarato por intermdio da alanina-transaminase. Em condies de necessidade energtica as protenas que esto nas clulas musculares so degradadas e os grupos amina so transferidos para produzir glutamina e alanina e transportados para o rim e fgado. 21

O fgado o principal destino da glutamina e da alanina do sangue, onde o amonaco libertado pela alanina aminotransferase, glutaminase e glutamato desidrogenase. A ltima tambm produz NADH e -cetoglutarato, um intermedirio do glicognio. De uma forma geral, dos processos de degradao de aminocidos resultam grupos amina, que no sendo utilizados pelo organismo para sintetizar novos aminocidos ou outros produtos azotados, so modificados dando origem a um produto final que ser excretado. O grupo amina removido a partir do aminocido degradado forma ies amnio. O io amnio extremamente txico para os organismos da grande maioria dos mamferos terrestres e por isso tem que ser convertida num composto no txico, e portanto tolervel, por estes. Este composto designa-se ureia. A ureia produzida a partir de vrias reaces sequenciais que constituem o Ciclo da Ureia (Ureognese ou Ciclo de Krebs-Henseleit) e posteriormente excretada na urina. A formao de ureia - NH2CONH2 - ocorre nas clulas hepticas, principais clulas do fgado, a partir de dois compostos inorgnicos, dixido de carbono CO2 e ies amnio NH4+. Estes ies tm origem na remoo de grupos amina. Para a remoo dos grupos amina existem diferentes processos possveis. Num processo est envolvida uma transdesaminao: a transaminao envolvida na transferncia do grupo amina de um aminocido para o ceglutarato originando glutamato e por outro lado, a desaminao oxidativa catalisada pela glutamato - desidrogenase, havendo remoo do grupo amina do glutamato. O grupo amina resultante entra no ciclo da ureia. Um segundo processo inclui duas reaces de transaminao. A primeira destas a transferncia do grupo amina para o -cetaglutarato resultando a formao do glutamato. A segunda, catalisada pela aspartato aminotransferase, a transferncia do grupo amina do glutamato para o oxaloacetato resultando ento a formao de aspartato. O Aspartato formado entra no ciclo da ureia pela condensao com a citrulina. Desta forma, um segundo grupo amina entra no ciclo, dando portanto origem a um segundo tomo de azoto que ser utilizado na formao de ureia. Uma pequena parte dos ies amnio utilizada no ciclo da ureia pode ser originada pela oxidao de aminocidos pelas bactrias existentes na flora intestinal e transportada at ao fgado pela veia porta. O ciclo da ureia inclui cinco reaces principais que permitem a sntese do composto orgnico ureia a partir de dois compostos inorgnicos, dixido de carbono CO 2 e ies amnio NH4+. As duas primeiras reaces do ciclo envolvido ocorrem nas mitocndrias e as restantes trs no citosol das referidas clulas. O ciclo inicia-se com a formao do Carbomoil Fosfato. Esta reaco catalisada pela carbomoil fosfato sintase I (CPSI) e irreversvel, constituindo, assim, um local importante de regulao do ciclo. Esta reaco implica o consumo de duas molculas de ATP. Segue-se a a formao de citrulina na qual se d a transferncia do grupo carbomoil para a ornitina pela ornitina transcarboximoilase. A ornitina uma molcula transportadora que permite a progresso do ciclo pois auxilia no transporte de citrulina do interior da mitocndria para o citosol. Segue-se a sntese de argininosuccinato, catalisada pela argininosuccinato sintetase, e onde ocorre condensao da citrulina com o aspartato. Esta reaco desencadeada pela clivagem de ATP, da qual resultam AMP e pirofosfato. O pirofosfato rapidamente hidrolisado originando dois fosfatos inorgnicos. Existe, assim, consumo de dois equivalentes de ATP. A reaco que se segue a clivagem de argininosuccinato, catalizada pela ariginosuccinato liase, da qual resultam fumarato e arginina. Por fim tem-se a clivagem de arginina da qual resultam a ornitina e a ureia. A enzima que catalisa esta clivagem designa-se arginase. Esta enzima existe exclusivamente no fgado o que torna a produo de ureia exclusiva a este rgo. Existem, ainda, transportadores especficos para a ornitina na membrana mitocondrial interna pelo que depois de originada esta transportada para o interior da mitocndria permitindo iniciar-se um novo ciclo. A ureia formada transportada pelo sangue at aos rins para posteriormente ser excretada na urina. O fumarato formado no ciclo da ureia convertido em malato estando nesta reaco envolvida a enzima fumarase. No citosol, o malato pode por um lado ser convertido em oxaloacetato que por sua vez pode ser convertido em aspartato ou por outro lado ser transportado para o interior da mitocndria e a entrar no ciclo do cido ctrico. Os NADH 22

formados em ambas as situaes podem ser oxidados pela cadeia transportadora de electres dando, cada molcula de NADH, origem a 2,5 molculas de ATP. Por outro lado, o fumarato tambm um interveniente no ciclo do cido ctrico. Os ciclos esto assim interligados. Apesar disto, estes ciclos ocorrem independentemente e a comunicao entre ambos depende do transporte de intermedirios entre a mitocndria e o citosol. Vrias enzimas do ciclo do cido ctrico incluindo a fumarase (fumarato hidratase) e a malato desidrogenase esto presentes como isoenzimas no citosol. O fumarato originado a partir da sntese no citosol de arginina pode ser convertido em malato no citosol e estes intermedirios podem ser depois metabolizados no citosol ou transportados para o interior da mitocndria para serem usados no ciclo do cido ctrico. O aspartato formado na mitocndria por transaminao entre o oxaloacetato e o glutamato pode ser transportado para o citosol onde funciona como dador de azoto no ciclo da ureia. A regulao do ciclo da ureia pode ser considerada a dois nveis. A regulao principal do ciclo da ureia realizada pelo N-acetil glutamato (formado a partir da acetil-CoA e do glutamato) que activa alostericamente a carbomoil fosfato sintase I (CPSI). Tal como j foi mencionado esta enzima cataliza a primeira reaco do ciclo sendo por isso determinante na sua regulao global. Se for seguida uma dieta rica em protenas, os aminocidos excedentes so desaminados. Disto resulta um aumento da concentrao de glutamato e portanto de Nacetil glutamato. O N-acetil glutamato activa a CPSI, e desta forma, promove o desenrolar do ciclo da ureia com o objectivo de compensar o excesso de azoto existente. Existe um outro tipo de regulao do ciclo, s que este a longo prazo. Sabe-se que alteraes na dieta podem induzir ou inibir a transcrio das enzimas envolvidas no ciclo da ureia. Por exemplo, em jejum, h um aumento da degradao das protenas constituintes de alguns tecidos o que induz a sntese de enzimas intervenientes no ciclo da ureia, de forma a compensar o excesso de io amnio originado.

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2.9- Gliconeognese
Na ausncia de glicose, a manuteno da glicemia faz-se a partir da sntese de glicose a partir de percursores no glicdicos. Define-se gliconeognese como a formao de glicose a partir de material no glicdico. O fgado e os rins so denominados stios de gliconeognese, e compensam a sua fraca capacidade glicoltica com a elevada capacidade gliconeognica (processos realizados em clulas diferentes). Nestes stios os precursores seguem vias especiais, dando genericamente e directa ou indirectamente piruvato, que segue a via comum. So os aminocidos, os lpidos e o lactato que seguem as vias especiais. Nos aminocidos a via faz-se apenas utilizando aminocidos glicoformadores, que a partir de aminaes ou transaminaes originam piruvato, -cetoglutarato, oxaloacetato ou SuccinilCoA. Nos lpidos, apenas o glicerol se converte em dihidroxicetona fosfato, um interveniente da gliclise/gliconeognese. O lactato, como se sabe, produzido constantemente nos eritrcitos e tambm nos msculos sob exerccio intenso. Como no existem nestes locais as enzimas necessrias para fazer o processo inverso, ento tem que ser transportado at ao fgado (ou rim) que atravs do ciclo de Cori oxidado a piruvato. A via comum ou final por assim dizer o processo inverso da gliclise, em tudo igual, excepto em trs reaces, as de regulao. De uma maneira ou de outra, todos os produtos das vias especiais do origem a piruvato, que ento convertido em oxaloacetato que origina fosfoenolpiruvato. O que sucede que o oxaloacetato formado dentro da mitocndria e o fosfoenolpiruvato fora desta, ento, como o oxaloacetato no consegue atravessar a membrana, tem de ser convertido em malato para poder ser transportado para fora da mitocndria e voltar a oxaloacetato para originar fosfoenolpiruvato, no primeiro e segundo passos da gliconeognese (um dos passos de regulao). Pode-se ver no esquema a representao das duas vias antagnicas intervenientes. A regulao deste processo metablico feita pelas enzimas dos passos de regulao. As duas primeiras, a piruvato carboxilase e a fosfoenolpiruvato carboxicinase so estimuladas pelo acetil-CoA, e so passos com grande energia de activao, sendo altamente desfavorveis (como se pode ver 24 glicolise/gliconeognese, e as enzimas

gasta-se um ATP e um GTP, molculas que cedem a energia necessria para ultrapassar esse obstculo). No por acaso que os passos de maior energia de activao so os de regulao, faz sentido que assim seja, de modo a garantir a permanncia de apenas um sentido de cada vez. A frutose-1,6-bisfosfatase estimulada pelo citrato e inibida pelo AMP (que estimula a gliclise, fazendo sentido inibir a gliconeognese) e pela frutose-2,6-bifosfato, molcula controlada pelo sistema hormonal insulina/glicagina. Por ultimo, e na regulao da ultima reaco da gliconeognese, encontramos a glicose-6-fosfatase que apesar de no ser controlada alostericamente varia aproximadamente de uma maneira linear com a concentrao de substrato. Como se pode ver pelo esquema, a gliconeognese um processo que requer muita energia, de modo que um processo de recurso quando no h mais nada que fornea glicose de uma maneira mais fcil, no sentido de aumentar a glicemia.

Catabolismo dos aminocidos glicognicos

Quanto ao destino dos produtos que advm do seu metabolismo, os aminocidos podem dividir-se em glicognicos, que originam metablitos que so incorporados como intermedirios no Ciclo de Krebs e no metabolismo da glicose (piruvato, alfa-cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato e oxaloacetato), e cetognicos, que originam metablitos que so incorporados no metabolismo dos lpidos, podendo formar cidos gordos ou corpos cetnicos (acetil-CoA ou acetoacetil-CoA). importante referir que existem aminocidos que, no decurso do seu catabolismo, originam acetil-CoA e intermedirios do Ciclo de Krebs ou da gliclise, sendo classificados como simultaneamente glicognicos e cetognicos. Actualmente, a leucina tido, por muitos, como o nico aminocido exclusivamente cetognico. De seguida, ir-se- explicar mais a fundo o catabolismo de alguns dos aminocidos glicognicos. No demais referir que o facto de os aminocidos poderem gerar piruvato e/ou intermedirios do ciclo de Krebs e/ou acetil-CoA permite compreender que, ao serem oxidados a CO2, podem contribuir para a sntese de ATP sendo, a par com os glcidos e os lpidos, compostos potencialmente energticos. Para se compreenderem os mecanismos presentes no catabolismo dos aminocidos, necessrio ter, pelo menos, estas duas noes bsicas: Transaminao - consiste na transferncia reversvel do grupo amina de um aminocido para um alfa-cetocido, na presena da transaminase, produzindo o aminocido correspondente ao alfa-cetocido, e o alfa-cetocido correspondente ao 25

aminocido original. Geralmente, o aceitador do grupo amina o alfa-cetoglutarato, que convertido em glutamato Desaminao oxidativa - por aco da glutamato desidrogenase, d-se a remoo do grupo amina, sob a forma de io amnio livre, a partir do glutamato proveniente, sobretudo, das reaces de transaminao. O NAD+ funciona como aceitador de electres, isto quando o pH de 9.0, pois caso este suba para 9.5, o aceitador de electres ser o NADP+.

- A asparagina hidrolisada, por aco da asparaginase, originando aspartato e ies amnio. Seguidamente, o aspartato sofre uma transaminao (aspartato + alfa-cetocido glutamato + oxaloacetato) originando oxaloacetato.

- A serina sofre uma desaminao, originando piruvato, sendo que o grupo amina libertado como io amnio, ao invs de ser transferido para outro composto.

- A cistena convertida a piruvato por um processo que liberta io amnio e enxofre, que advm da oxidao do grupo tiol da cistena. Existe outro processo alternativo de catabolismo da cistena, processo este em que no h perda do grupo azotado formando-se, em vez de piruvato, taurina (que , em ltima anlise, eliminada na urina).

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- Aquando da transaminao do aspartato e da alanina forma-se, para alm de, respectivamente, oxaloacetato e piruvato, glutamato.

- O glutamato pode, por desaminao, originar alfa-cetoglutarato (intermedirio do Ciclo de Krebs) e, por outro lado, pode tambm dar origem a alfa-cetoglutarato por aco da glutamato desidrogenase. Esta reaco d tambm origem ao io amnio. O alfa-cetoglutarato pode seguir dois caminhos distintos, sendo utilizado como intermedirio no Ciclo de Krebs ou, pelo contrrio, numa outra transaminao.

- A treonina um exemplo de aminocido simultaneamente glicognico e cetognico, uma vez que forma acetil-CoA e glicina. A acetil-CoA precursora de corpos cetnicos e a glicina potencialmente glicognica, dado que pode ser convertida a serina por aco da serinahidroximetiltransferase. (ver, na apresentao, a figura-resumo da relao entre o catabolismo dos aminocidos e o Ciclo de Krebs / Gliconeognese.) Os ies amnio, formados por transaminao/desaminao oxidativa e por outras reaces so exportados dos tecidos extra-hepticos para o fgado atravs de dois mecanismos de 27

transporte: a sntese de glutamina e o ciclo glicose-alanina (sendo que e dar mais importncia ao primeiro, uma vez que o mais utilizado). - Sntese da Glutamina:

Primeira reaco sntese da glutamina, por parte da maioria dos tecidos, a partir do glutamato, como forma de armazenamento temporrio no txico e transporte de amnio para o fgado ou para os rins. Segunda reaco a glutamina hidrolisada, no fgado e rim, a glutamato e amnia, pela aco da enzima glutaminase. A partir da ultima reaco: No fgado o NH3 utilizado na sntese da ureia; No rim o glutamato sofre desaminao oxidativa, dando origem a alfa-cetoglutarato, sendo excretadas, na urina, dois ies amnio para cada glutamina transformada em alfa-cetoglutarato. Nos tbulos renais, o amonaco protonado a ies amnio, que neutralizam os cidos metablicos na urina.

Metabolismo do glicognio
A glicose pode ser armazenada, no nosso organismo, sob a forma de glicognio. Este , ento, um polissacardeo originado por polimerizao da glicose. O glicognio muito ramificado, possuindo ligaes glicosdicas -1,4 ao longo de um mesmo ramo, e ligaes 1,6 nos pontos de derivao de novos ramos, assim como terminais no redutores, na sua maioria. As reservas de glicognio esto centradas no fgado e no tecido muscular esqueltico, onde este aparece sob a forma de grnulos citoslicos, juntamente com a generalidade das enzimas necessrias ao seu metabolismo. No que diz respeito a esse mesmo metabolismo, tm-se os processos de glicogenlise, catablico, que visa a obteno de glicose-6-fosfato (G-6-P) a partir do glicognio, e de glicognese, sntese / alongamento de molculas de glicognio, anablico. Na glicogenlise, por aco da glicognio-fosforilase, um resduo de glicose removido de um terminal no redutor da cadeia de glicognio. A ligao -1,4 atacada por 28

um fosfato inorgnico, originando-se glicose-1-fosfato (G-1-P), e encurtando-se a cadeia Fosforlise. A actividade desta enzima sucessivamente repetida, e cessada quando esta atinge um ponto distncia de 4 resduos de uma ramificao (ligao -1,6). A, necessria a enzima desramificante, para se poder continuar o processo. Em primeiro lugar, a enzima desramificante actua como transferase, transferindo um bloco de 3 resduos de glicose para um terminal no redutor, formando-se uma ligao -1,4. Posto isto, o nico resduo restante na ramificao removido pela aco de glicosidase desta enzima, soltando-se uma molcula de glicose simples, e assim se obtm de novo uma cadeia apelativa actividade da fosforilase. Segue-se a aco da fosfoglicomutase, que catalisa a reaco reversvel entre a G-1-P e a G-6-P. Inicialmente fosforilada, a enzima cede o seu grupo fosfato G-1-P, formando-se glicose-1,6-difosfato. Esta cede o seu fosfato-1 de novo enzima, que se fosforila novamente, originando-se G-6-P. No tecido muscular esqueltico, o glicognio de consumo local A G-6-P obtida entra directamente na gliclise, que conduzir produo de energia necessria contraco muscular. J no fgado, o objectivo ltimo , sim, a libertao de glicose para o sangue, nomeadamente em perodos em que a glicmia tende a baixar, como em jejum, para restabelecer os nveis desta. Existe ento, apenas no fgado, a G-6-fosfatase. Esta enzima protena integrante da membrana do retculo endoplasmtico, tendo o seu centro activo na face interna da mesma membrana. Tal facto implica a existncia de transportadores especficos para mover a G-6-P para o interior do retculo, e para conduzir os produtos da sua hidrlise, glicose e fosfato inorgnico, de volta ao citosol. A glicose ento encaminhada corrente sangunea por outro transportador (GLUT2). Quando se verifica uma elevada glicmia, ou em perodos de repouso, no msculo, todo este processo cessado e tem incio a glicognese. A glicognese inicia-se com a aco inversa da fosfoglicomutase, obtendo-se, a partir de G-6-P, G-1-P, que por sua ver reage com o UTP para originar UDP-glicose, o substrato do alongamento da molcula de glicognio. A enzima glicognio-sintase vai catalisar este processo, transferindo resduos de glicose da UDP-glicose para um terminal no redutor do glicognio, formando-se uma ligao -1,4. A enzima ramificante vai, depois da adio de diversos resduos pela sintase, transferir um fragmento de 6-8 resduos terminal, formando-se uma ligao -1,6, e uma nova ramificao. Em resposta incapacidade da glicognio-sintase de sintetizar uma molcula de glicognio a partir do zero, surge a glicogenina, que para alm de ser a molcula onde os primeiros resduos de glicose se vo ligar, tambm a enzima que catalisa estas mesmas para longe do

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ligaes, com a sua actividade intrnseca de glicosiltransferase. Chegando aos 8 resduos de comprimento, inicia-se ento a aco da glicognio-sintase. Sumarizando a regulao no hormonal dos processos metablicos do glicognio, temos, a regulao por fosforilao reversvel das enzimas glicognio-fosforilase e glicognio-sintase, da responsabilidade das cinases (fosforilao) e da fosfatase-1 (desfosforilao). A fosforilao vai activar a fosforilase, e inactivar a sintase, favorecendo a glicogenlise, enquanto que a desfosforilao tem o efeito oposto, contribuindo para a ocorrncia de glicognese. As cinases e a fosfatase-1 podem ainda ser, tambm, reguladas por fosforilao. No msculo, a glicognio-fosforilase ainda activada e inibida alostericamente pelo AMP e ATP, respectivamente, e a cinase da fosforilase activada alostericamente pelo complexo clcio-calmodulina. A glicognio-sintase activada por ligao G-6-P, uma vez que esta facilita a sua desfosforilao. Os transportadores de glicose do fgado, GLUT2, permitem um equilbrio entre a concentrao de glicose no sangue e nos hepatcitos. A glicose, quando em grande quantidade, vai activar a fosfatase-1, que por sua vez inactiva a fosforilase, inibindo-se a degradao do glicognio.

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2.10- Sntese de cidos Gordos

a) Biossntese de cidos gordos
Os cidos gordos so sintetizados sempre que h excesso calrico na dieta, em diversos rgos, como sejam o fgado, crebro, rim, pulmo, tecido adiposo, entre outros. O local desta sntese no citoplasma da clula, sendo que a principal origem do carbono para esta via proveniente dos glcidos da dieta alimentar. A glicose convertida em piruvato (via gliclise), que entra para a mitocndria, formando acetil-CoA e oxaloacetato. Como a sntese de cidos gordos ocorre no citoplasma, ao passo que a sntese de acetil-CoA ocorre na mitocndria necessrio transportar a acetil-CoA para o citoplasma. Isto feito pelo sistema de transporte dos cidos tricarboxlicos, tambm chamado ciclo do citrato: o citrato formado na mitocndria por condensao do acetil-CoA com oxaloacetato difunde-se para o citoplasma, onde clivado pela citrato-liase em acetil-CoA ( fonte dos carbonos utilizados na sntese) e oxaloacetato, que depois reduzido a malato pela malato desidrogenase, que se pode difundir de volta para a mitocndria ou originar piruvato (reduo do malato a piruvato pela enzima mlica, que pode ser uma fonte de NADPH, como referido mais frente), que tambm se difunde para a mitocndria. 1 Passo carboxilao da acetil-CoA a malonil-CoA um processo irreversvel, no ocorrendo, portanto, na -oxidao. A reaco catalizada pela acetil-CoA carboxilase. Esta protena, que na clula animal constitui um polipptido multifuncional, necessita da biotina e constituda por 3 regies funcionais: protena transportadora de biotina, que est ligada covalentemente biotina por uma ligao amida; biotina carboxilase, responsvel pela activao do CO2 (proveniente do io bicarbonato), e sua transferncia para a biotina, numa reaco dependente de ATP; transcarboxilase, responsvel pela transferncia do CO2 da biotina para a acetilCoA, produzindo o malonil-CoA. Complexo multienzimtico da sntese de cidos gordos Este complexo constitudo por um dmero, em que cada monmero consiste numa cadeia polipeptdica que contm as setes actividades enzimticas da sntese: -cetoacil-ACP sintetase, acetil-CoA-ACP transacetilase, malonil-CoA-ACP transferase, tioesterase, cetoacil-ACP redutase, enoil-ACP redutase e -hidroxiacil-ACP desidratase.

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Sntese de cidos gordos A ACP (protena transportadora de acil) uma pequena protena que contm um grupo prosttico, 4-fosfopantetana. O grupo SH pertencente a este grupo prosttico o local de ligao do grupo malonilo (CoA libertada) durante a sntese, atravs da malonil-CoA-ACP transferase. O grupo acetilo (proveniente da acetil-CoA, CoA libertada) necessrio para a primeira reaco do primeiro ciclo da sntese, ligando-se ao grupo SH da -cetoacil-ACP sintetase, ligao esta promovida pela acetil-CoA-ACP transacetilase. As cadeias de cidos gordos so formadas a partir de repetidas sequncias (ciclos) de 4 passos: 1 reaco: condensao do grupo acetilo e do grupo malonilo formando o acetoacetil-ACP, atravs da -cetoacil-ACP sintetase; por cada passagem pelo ciclo, a cadeia aumentada em 2 carbonos e libertada uma molcula de CO2 do grupo malonilo, a qual foi adicionada aquando da carboxilao da acetil-CoA a malonilCoA; 2 reaco: reduo do acetoacetil-ACP, formando-se o -hidroxibutiril-ACP, sendo catalisada pela cetoacil-ACP reductase; o NADPH oxidado a NADP+; 3 reaco: remoo do elemento gua (desidratao do -hidroxibutiril-ACP), formando-se o trans-2-butenoil-ACP, atravs da -hidroxiacil-ACP desidratase; forma-se uma dupla ligao entre o C2 e o C3; 4 reaco: a dupla ligao do trans-2-butenoil-ACP reduzida (saturada), formando-se butiril-ACP, reaco catalisada pela enoil-ACP reductase. Aqui o dador de electres, tal como na 2 reaco, o NADPH, que oxidado a NADP+. Posteriormente, o grupo butiril-ACP transferido do grupo SH do ACP para o grupo SH da -cetacil-ACP sintetase, de forma a se poder ligar mais um grupo malonilo ACP, e assim se poder reiniciar um novo ciclo de 4 reaces. As reaces de condensao e reduo param, geralmente, aps 7 ciclos, com a formao do composto saturado palmitil-ACP (16 carbonos). Numa reaco de hidrlise (quebra da ligao entre o palmitato e a ACP), catalisada pela tioesterase, ocorre a libertao do palmitato do ACP. Reaco geral do processo: 8 acetil-CoA + 7ATP + 14NADPH + 14H+ 14NADP+ + 6H2O Palmitato + 8CoA + 7ADP + 7Pi +

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A activao prvia dos cidos gordos consiste numa reaco catalisada pela acil-CoA sintetase: os cidos gordos reagem com o ATP e CoA gerando-se como produtos AMP, pirofosfato (PPi) e acil-CoA (cido gordo + CoA + ATP acil-CoA + AMP + PPi). Fontes de NADPH As principais fontes de NADPH para as redues ocorridas durante a sntese so: a enzima mlica, na reaco de converso do malato a piruvato; a via das fosfopentoses, que decorre igualmente no citoplasma; a enzima desidrogenase isoctrica, que catalisa a formao -cetoglutarato a partir do isocitrato, durante o ciclo de Krebs.

b) Alongamento e reduo dos cidos gordos sintetizados

O destino metablico do palmitato formado ser tioesterificado com a CoA formando palmitil-CoA (acil-CoA sintetase) que pode estar na origem de triacilgliceris e outros lpidos (esterificao, isto , os cidos gordos reagem com lcoois produzindo steres; particularmente importante no tecido adiposo, fgado, glndula mamria activa e intestino delgado), de cidos gordos com maior nmero de carbonos ( alongamento), de cidos gordos insaturados (dessaturao) ou sofrer, eventualmente, -oxidao (os cidos gordos transportados para a mitocndria pela carnitina so, atravs da -oxidaao, degradados em acil-CoA e acetil-CoA, que por sua vez so intervenientes no ciclo de Krebs). Neste trabalho apenas vamos focar o alongamento e a dessaturao. Alongamento O palmitato, que o principal produto da sntese de cidos gordos nas clulas animais, o percursor das cadeias longas de cidos gordos. Pode ser alongado para formar estearato (18:0) (estearato (18C) forma-se por adio de 2 tomos de carbono ao palmitato (16C) ) ou mesmo maiores cidos gordos saturados, por sucessivas adies de unidades de 2 carbonos

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(do malonil-CoA) acil-CoA, atravs da aco dos sistemas de alongamento dos cidos gordos presentes no retculo endoplasmtico liso e na mitocndria. O sistema de alongamento mais activo do reticulo endoplasmtico estende a cadeia de palmitoil-CoA, formada por 16 carbonos, a mais 2 carbonos, formando o estearoil-CoA. O palmitato o percursor do estearato e dos cidos gordos saturados de cadeia longa, como o palmitoleato e o oleato. Os mamferos no podem converter oleato em linoleato ou em -linolenato, os quais so fundamentais na dieta alimentar, pois so cidos gordos essenciais. A converso do linoleato a outros cidos gordos polinsaturados e eicosanides est esboada na figura. Os cidos gordos insaturados esto indicados com o nmero de carbonos seguidos do nmero de ligaes duplas e este seguido da posio dessas ligaes duplas. Dessaturao Cada dessaturao consiste em acrescentar 1 ligao dupla ao cido gordo, mantendo o nmero de carbonos. Ou seja o cido gordo deixa de ser saturado e passa a ser insaturado. Reparemos na dessaturao do palmitato a palmitoleato: mantm o mesmo nmero de carbonos (16) mas acrescenta uma ligao dupla na posio 9. O palmitato e o estearato so os percursores dos cidos gordos monoinsaturados mais comuns do tecido animal: o palmitoleato, 16:1(9), e o oleato, 18:1(9). A ligao dupla introduzida dentro da cadeia do cido gordo por uma reaco de oxidao catalizada pela acilCoA dessaturase, que uma oxidase. Nesta reaco, dois substratos diferentes, o cido gordo e o NADH ou NADPH, so simultaneamente oxidados. O trajecto do fluxo do electro inclui um citocromo b5 e uma flavoprotena (citocromo b5 redutase), os quais, tal como a acil-CoA desaturase, esto no reticulo endoplasmtico. Nos mamferos no h sntese de cidos gordos polinsaturados, apenas de monoinsaturados: o palmitoleato e o oleato. Os hepatcitos dos mamferos podem introduzir ligaes duplas na posio 9 dos cidos gordos, mas no podem introduzir ligaes duplas adicionais entre o carbono 10 e o metil terminal. Portanto, os mamferos no conseguem sintetizar linoleato, 18:2(9,12), ou -linolenato, 18:3(9,12,15). As plantas, contudo, podem sintetizar tanto cidos gordos polinsaturados como cidos gordos monoinsaturados. Pelo facto de serem os percursores necessrios para a sntese de outros produtos, o linoleato e o linolenato so cidos gordos essenciais para os mamferos, mas como estes no os conseguem sintetizar, devem ser obtidos a partir de vegetais. Uma vez ingerido, o linoleato deve ser convertido em certos cidos polinsaturados, particularmente, o -linolenato, o eicosatirenoato e o araquidonato. O araquidonato, 20:4(5,8,11,14) um percursor essencial regulao dos lpidos, dos eicosanides.

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Regulao da Sntese de cidos gordos O citrato forma-se dentro da mitocndria, no ciclo de Krebs, quando o oxaloacetato reage com o acetil-CoA e por aco da enzima citrato sintase forma o citrato. Quando a concentrao de acetil-CoA e ATP, na mitocndria, aumenta, o citrato transportado para fora da mitocndria. A, vai activar a enzima acetil-CoA carboxilase, que por sua vez vai catalisar a formao do malonil-CoA. Portanto, a activao desta enzima constitui a etapa limitante da biossntese de cidos gordos. O citrato inibe a actividade da fosfofrutocinase-1, reduzindo o fluxo de carbono atravs da gliclise. O citrato um activador alostrico, uma vez que quando se liga enzima acetil-CoA carboxilase (num stio diferente do seu centro activo), vai provocar uma alterao conformacional desta enzima, o que faz aumentar a actividade enzimtica. Portanto, o Vmax da reaco aumenta. O citrato tem um papel muito importante no metabolismo celular na medida que impede que o combustvel metablico seja consumido e em vez disso armazenado como cidos gordos. Para alm do citrato, a acetil-CoA carboxilase pode ser activada pela hormona insulina que vai provocar uma desfosforilao da enzima. Na sua forma activada a acetil-CoA carboxilase polimeriza-se em longos filamentos. Esta enzima tambm regulada por modificaes covalentes. A fosforilao, provocada pelas hormonas epinefrina e glicagina, inactiva a enzima e reduz a sua capacidade activao pelo citrato, retardando assim a sntese de cidos gordos; a fosforilao acompanhada pela sua dissociao em subunidades monomricas e pela consequente perda de actividade. Nos vertebrados, o palmitoil-CoA, que o produto principal da sntese de cidos gordos, um inibidor retrgrado da enzima. A enzima pode ainda ser inactivada por molculas de acil-CoA de cadeia longa. Se a sntese de cidos gordos e a -oxidao se dessem ao mesmo tempo, os 2 processos constituiriam um ciclo ftil, perda de energia. Assim durante a sntese de cidos gordos, a produo do primeiro intermedirio, o malonil-CoA, no permite a -oxidao ao nvel da membrana mitocondrial interna. Quando uma clula ou organismo tem mais combustvel metablico do que o necessrio para as suas necessidades energticas, este excesso convertido em cidos gordos e armazenado como lpidos. H uma relao inversa entre lipognese heptica e a concentrao de cidos gordos livres. Quando ingerimos excesso de cidos gordos insaturados a expresso dos genes que codificam muitas enzimas lipognicas no fgado suprimida. Esta regulao da actividade enz

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2.11- Sntese dos Lpidos

Biosntese dos Triacilgliceris
O triacilglicerol (TAG) um ster derivado dos cidos gordos e de um nico lcool, o glicerol. assim formado pela unio de trs cidos gordos a uma molcula de glicerol, substituindo estes os trs grupos hidroxilo (-OH) do glicerol pelos seus, formando molculas de gua durante o processo. normalmente identificado como um leo ou gordura e produzido e armazenado nos organismos vivos para fins de reserva alimentar. Os triacilgliceris constituem cerca de 90% dos lpidos ingeridos na alimentao e no organismo os seus locais de sntese incluem o retculo endoplasmtico liso e algumas enzimas localizadas no citosol e na mitocndria. So compostos essencialmente apolares, pois as regies polares dos seus precursores desapareceram na formao das ligaes do tipo ster. Por isso constituem molculas muito hidrofbicas que so insolveis em gua e solveis em solventes orgnicos, como o lcool, benzeno, ter e clorofrmio. Os triacilgliceris podem ser hidrolisados, libertando com isso cidos gordos e glicerol. O principal precursor dos triacilgliceris o glicerol-3-fosfato. Este pode ser obtido principalmente de duas formas: atravs da gliclise, a glicose sofre a aco da enzima glicerol-3-fosfato desidrogenase citosslica que se encontra ligada ao NAD ou ento atravs da enzima glicerol cinase em processos que ocorrem no fgado e no rim, sendo que neste caso o glicerol proveniente do metabolismo dos quilomicrons transformado directamente em glicerol-3-fosfato. Numa primeira fase, so removidos os dois primeiros grupos hidroxilo livres do glicerol-3-fosfato e adicionados dois cidos gordos aos pontos respectivos de esterificao por duas molculas de acil CoA sintetase, sendo que esta reaco ocorre na presena da aciltransferase existente na mitocondria. Desta primeira fase resulta a molcula de cido fosfatdico (dois cido gordos e um grupo fostato ligados a uma molcula de glicerol). Neste ponto a via pode seguir para a formao de triacilglicerol ou de glicerofosfolipdio, como veremos adiante. Pela via do triacilglicerol existem mais 2 passos. No primeiro, o grupo fosfato hidrolisado pela fosfatidato fosfatase presente no citosol para formar um 1,2diacilglicerol. De seguida o diacilglicerol convertido em triacilglicerol por transesterificao com um terceiro acido gordo na presena da enzima aciltransferase. Os triacilgliceris seguem nessa altura 2 vias: aqueles que so ingeridos so transportados para os tecidos atravs de lipoprotenas especficas, os quilomicrons, enquanto que os formados no fgado pelo processo acima enunciado so transportados para os tecidos extra-hepticos (muscular e adiposo) pelas very low density lipoproteins (VLDL). 36

Biosntese dos Fosfolpidos

A sntese dos fosfolpidos (que como j sabemos se dividem principalmente em glicerofosfolpidos e esfingolpidos) ocorre principalmente no retculo endoplasmtico liso nas clulas eucariotas - e pode-se dividir em 4 passos: 1-Sntese da molcula que vai ser a espinha dorsal do fosfolpido (glicerol ou esfingosina) 2-Ligao de cidos gordos a essa estrutura por ligao ster ou amida 3-Adio de uma cabea hidroflica atravs duma ligao fosfodister 4-Alterao ou troca do grupo hidroflico para termos a estrutura final (este ltimo passo s acontece em alguns casos) Nos glicerofosfolpidos os passos 1 e 2 so comuns via dos triacilglicerois: dois cidos gordos so esterificados no C1 e C2 do L-glicerol-3-fosfato. Normalmente, mas no necessariamente, existe um cido saturado em C1 e um cido insaturado em C2. O 3 passo a adio da cabea hidroflica o passo fulcral: quando o diacilglicerol (o principal percursor da sntese dos glicerofosfolpidos) se liga a cabea hidroflica. Os dois grupos hidroxilo ao reagirem com o cido fosfrico formam um ster. Existem duas estratgias para formar essa ligao fosfodister. O CDP (citidina difosfato) pode estar ligado ou ao diacilglicerol ou cabea hidroflica. Os organismos procariotas utilizam exclusivamente a primeira estratgia, enquanto que os organismos eucariotas podem usar ambas O primeiro passo da sntese da cardiolipina e da fosfatidiletanolamina em E. coli um exemplo da primeira estratgia para ligao entre a cabea e o CDP-diacilglicerol: O ataque nucleoflico pelos grupos hidroxilo da serina e do glicerol 3-fosfato originam respectivamente a fosfatidilserina e o fosfatidilglicerol 3 fosfato (que s depois perder esse grupo fosfato formando-se o fosfatidilglicerol) A fosfatidilserina por descarboxilao transforma-se ento na fosfatidiletanolamina. Duas molculas de fosfatidilglicerol podem-se juntar e, com a eliminao de um glicerol, originar cardiolipina. Caso o organismo em questo seja um eucariota a sntese da cardiolipina ser diferente: fosfatidilglicerol ir juntar-se ao CDP-diacilglicerol e no a outra molcula de fosfatidilglicerol. Num organismo eucariota o fosfatidilinositol sintetisado pela reaco do CDP-diacilglicerol com o inositol. O Fosfatidilinositol poder, por cinases especficas, originar compostos derivados que sero muito importantes na transduco de sinal. As leveduras podem produzir a fosfatidiletanolamina por descarboxilao da fosfatidilserina. Importante o facto da fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina serem interconvertveis por uma reaco de troca de cabeas. Por metilao poder ser obtida a partir desta ltima a fosfatidilcolina 37

Por outro lado, nos mamferos, o processo inverso: a fosfatidilserina provem da reaco de interconverso com a fosfatidiletanolamina, sendo que a sntese desta um dos exemplos da segunda estratgia anteriormente referida. Nos mamferos existe um processo de reutilizao da colina, sendo esta convertida em CDP-colina e produzindo-se depois a fosfatidilcolina. Por um processo anlogo a etanolamina recuperada tranformando-se em CDP-etanolamina e posteriormente em fosfatidiletanolamina. As clulas dos mamferos tm processos semelhantes aos das bactrias excepto para sintetizar a fosfatidiletanolamina e a fosfatidilcolina. Nestes organismos, esta converso apenas ocorre no fgado A sntese dos plasmognios envolve o PAF(platelet-activating factor) que um plasmognio especfico que funciona como mediador biolgico poderoso. Esta sntese iniciase na dihidroxiacetona-fosfato, envolve a formao de uma ligao ter, seguida da ligao de uma cabea hidroflica e por ltimo a formao de uma ligao dupla por uma desaturase. Quanto sntese dos esfingolpidos esta ocorre em 4 fases: 1- Sntese da amina de 18 carbonos esfinganina a partir da serina e do palmitil-coA 2- Ligao do cido gordo por uma ligao de amida 3- Formao da ceramida a N-acil-esfingosina 4- Ligao da cabea hidroflica: um composto glicosdico ou uma fosfatidilcolina, obtendo-se respectivamente um cerebrsido ou uma esfingomielina. Os fosfolpidos aps serem sintetizados no R.E.Liso vo ser transportados para as membranas celulares especficas por vesculas de transporte e protenas especficas, no sendo transportados por difuso simples, porque no so hidrosolveis.

Biossntese do Colesterol e Esterides em geral

O colesterol desempenha um papel crucial como componente das membranas celulares e como percursor de hormonas esterides e cidos (sais) biliares. uma molcula essencial em muitos animais, incluindo os humanos, mas no requerida na dieta dos mamferos, pois todas as clulas (mas principalmente as hepticas) podem sintetiz-lo a partir de um simples percursor: o acetato. Este facto foi demonstrado por Konrad Bloch, em 1940, que ao marcar com istopos os carbonos do acetato (CH3-COO-) e fornec-lo como alimento a ratos, verificou que o colesterol (27 Carbonos) produzido possua esses carbonos marcados. Outra pista importante foi a descoberta do esqualeno (30 Carbonos) e das unidades isoprenides (cada uma com 5 carbonos). 38

Separemos ento a sntese do colesterol em 4 passos que passo a explicar: 1 Partindo de 3 molculas de acetil-CoA, formamos o mevalonato (C6): Duas molculas de acetil-CoA, por aco de uma tiolase, formam acetoacetil-CoA, que junto com mais um acetil-CoA, por aco da enzima HMG-CoA-sintase forma o intermedirio HMG-CoA (HMG-CoA = Hidroximetilglutaril-CoA). Finalmente, por aco da HMG-CoA redutase, com 2NADPH + 2H+ , obtemos o mevalonato. 2 O segundo passo consiste em converter o mevalonato nos isoprenos activos: A partir do mevalonato, por aco da mevalonato 5-fosfotransferase, e fosfomevalonato cinase, 3 grupos fosfato so transferidos de ATP para a molcula formando os intermedirios: 5-fosfomevalonato, 5-pirofosfomevalonato e 3-fosfo-5pirofosfomevalonato, que por sua vez sofre uma descarboxilao, e perdendo um fosfato, surge o isopentenil-pirofosfato, que por uma isomerase, transforma-se tambm em dimetilalilpirofosfato (que so ambos os isoprenos activos). 3 Condensao das seis unidades isoprenides para formar o esqualeno: Os dois ismeros mencionados anteriormente condensam-se cabea com cauda, e por libertao de um pirofosfato formam geranil-pirofosfato (C10). Este por sua vez, condensa, tambm cabea com cauda com um isopentenil-pirofosfato, libertando novo pirofosfato e formando farnesil-pirofosfato (C15). Duas molculas de farnesil-pirosfato condensam, desta vez cabea com cabea formando assim, com libertao de ambos os grupos pirofosfato, o esqualeno (C30 e linear). 4 O ltimo passo consiste na ciclizao do esqualeno para formar o colesterol: Na presena de oxignio molecular (O2), vemos que a enzima esqualenomonoxigenase usa um desses tomos para formar o esqualeno-2,3-epxido, enquanto o O restante reduzido pelo NADPH em H 2O. Isto acontece num sistema complexo que envolve por exemplo o citocromo P-450. Por aco de ciclases, forma-se o intermedirio lanosterol, que aps uma srie de reaces (principalmente migraes e remoes de grupos metilo) se converte finalmente em colesterol. No caso das plantas, partindo do esqualeno-2,3-epxido, teramos o estigmasterol e nos fungos, o ergosterol. De notar que partindo do esqualeno (C30) se obtm o colesterol (C27), em que os carbonos perdidos se devem formao dos anis do ncleo esterlico. Para alm do colesterol e seus derivados (hormonas esterides, sais biliares e vitamina D), a partir de intermedirios como o isopentenil-pirofosfato conseguimos formar outros compostos (vitaminas lipossolveis: A,E,K; borracha natural, carotenides, componentes da clorofila, transportadores da cadeia electrnica como a ubiquinona e a plastoquinona, entre outros).

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Estudando as hormonas esterides, conclui-se que a sua formao a partir do colesterol deve-se por oxidao e clivagem das suas cadeias laterais, dependendo de um sistema complexo, com citocromo P-450, adrenodoxinas, presena de NADPH e O 2. So efectivas em concentraes mnimas, e comparativamente aos sais biliares, consomem pouco colesterol. Forma-se primeiramente a pregnenolona, a partir da qual se formam as restantes hormonas: no crtex das glndulas supra-renais mineralocorticides (controlo da reabsoro de ies inorgnicos como Na+, Cl- e HCO3- pelos rins) e glicocorticides (regulao da gliconeognese e reduo da resposta inflamatria). E nas gnadas, a formao das hormonas sexuais (progesterona (regulao do ciclo reprodutor feminino), andrognios e estrognios (regulao dos caracteres sexuais secundrios masculino (testosterona) e feminino (estradiol), respectivamente)). O ltimo tpico ento a formao dos sais biliares, pois o organismo s consegue excretar o colesterol na sua forma original ou como cidos biliares. Estes podem ser: primrios, se forem produzidos no fgado (como o cido clico e quenodesoxiclico); ou secundrios, se formados no intestino (caso do cido desoxiclico e litoclico). Por comparao das estruturas de sais biliares e colesterol, concluiu-se que para formar os primeiros a partir do segundo ocorrem principalmente o desaparecimento da ligao dupla, bem como hidroxilaes sucessivas por monoxigenases (dependentes tambm do citocromo P-450, NADPH e O2).

Regulao da biossntese dos triacilglicridos

Depois de clarificados os processos de biossntese de triacilglicerois, fosfolpidos, e do colesterol e seus derivados, importa perceber as vias, pelas quais estes processos vo ser regulados, de forma proveitosa para o organismo. Sendo os cidos gordos produtos iniciais de vrias vias metablicas, importante perceber o que provoca o desencadeamento de algumas destas em detrimento das restantes; assim, para uma determinada concentrao de cidos gordos, a formao preferencial de reservas energticas, na forma de triacilglicerois, ou a de lpidos de membranas vai depender do estado de maturao do organismo em questo. Como exemplo, temos o caso de uma clula em crescimento, que passa por processos de diviso celular, e na qual a concentrao de cidos gordos vai ser preferencialmente usada para a formao de fosfolpidos, utilizados como constituintes das membranas celulares em formao. Esta regulao processa-se tambm a nvel hormonal, assumindo a insulina, neste campo, um papel fundamental. Por observao da figura seguinte, podemos verificar que esta interveno se processa a 2 nveis. 40

Figura 1 Regulaao da biossntese dos triacilglicerois pela insulina Assim, a insulina estimula a biossntese de triacilglicerois, quer pela estimulao da gliclise, quer pela transformao do acetil-coA a cidos gordos; daqui, fcil perceber, que em doenas que envolvam a desregulao funcional da insulina, como a Diabetes Mellitus, o acetil-coA proveniente da gliclise vai ser preferencialmente usado em vias alternativas formao de triacilglicerois, como a formao de corpos cetnicos. Depois da formao de cidos gordos, entramos noutro nvel de regulao: o ciclo sistmico de regulao dos triacilglicerois, ilustrado na figura seguinte:

Figura 2 Ciclo sistmico de regulao dos triacilglicerois Sabe-se que 75% dos cidos gordos libertados pela liplise so re-esterificados a triacilglicerois, no seguimento deste ciclo, em vez de serem utilizados como combustvel. Este facto mantm-se praticamente inalterado mesmo em condies de jejum. O funcionamento deste ciclo, perante condies de necessidade energtica, consiste na libertao de cidos gordos do tecido adiposo para a corrente sangunea, onde 25% dos mesmos, sero utilizados em processos oxidativos para a produo de energia. A nvel hormonal, esta libertao de 41

cidos gordos estimulada pela glicagina e pela epinefrina. A utilidade deste ciclo questionvel, existindo no entanto uma vantagem evidente que reside no facto, deste constituir uma reserva de energia que permite uma resposta muito rpida. O facto da razo de re-esterificao de cidos gordos se manter aproximadamente constante, mesmo em jejum, leva necessidade de existncia de uma via que permita manter a concentrao de glicerol3P constante. Esta via a gliceroneognese, que permite a transformao do piruvato a dihidroxiacetona (DHAP), que ser posteriormente transformada a glicerol-3P; a sua importncia reside no controlo da taxa de cidos gordos libertados para o sangue. A gliceroneognese controlada enzimaticamente pela expresso da PEPCK (PEP carbocinase) que estimula esta via metablica. A regulao transcripcional da PEPCK feita por enzimas glicocorticides (cortisol e dexametasona). Como pode ser observado na figura ??, estas enzimas actuam de forma antagonista no fgado e tecido adiposo; assim, as glicocorticoides vo activar a PEPCK no fgado, e como tal, estimular a sntese e exportao de triacilglicerois, e inibir a expresso da PEPCK no tecido adiposo diminuindo a reciclagem de cidos gordos e, assim aumentar a sua concentrao no sangue. Sendo a biossntese do colesterol um processo complexo e que envolve o gasto de energia (ATP), vantajoso regular este processo em conjunto com a ingesto diria. Como foi referido atrs, o passo limitante na via do colesterol a converso do HMG-coA a mevalonato; esta reaco catalisada pela HMG-coA reductase, que regulada transcripcionalmente e a nvel hormonal. Ao nvel da transcrio, o gene que a codifica regulado pela famlia de protenas SREBPs (sterol binding element-binding proteins). Estas, aquando da sua sntese, localizam-se no retculo endoplasmtico (RE). Sendo que, apenas o terminal amina funciona como activador transcripcional, logo a activao do gene da HMGcoA reductase s ocorre aps a clivagem proteoltica e posterior migrao para o ncleo, do terminal amina. Perante nveis elevados de colesterol, a SREBPs permanecem inactivas formando um complexo com a SCAP no RE. Quando os nveis de colesterol baixam vai haver libertao deste complexo e posterior dupla clivagem proteoltica que permite a activao do gene, e posterior produo de colesterol. A nvel hormonal, vamos ter um controlo proporcionado pela insulina que favorece a forma activa da enzima atravs duma desfosforilao, e pela glicagina que atravs duma fosforilao produz a forma inactiva. Existem ainda outros mecanismos: elevados nveis de colesterol intracelular activam a ACAT que promove a transformao do colesterol em steres de colesterol, e por fim, elevados nveis de colesterol extracelular diminuem a transcrio do gene codificador dos receptores de LDL, que, por endocitose promovem o uptake de colesterol para dentro da clula.

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3.1- Catabolismo e Biossntese de cidos nucleicos, nucletidos e nuclesidos

Os cidos nucleicos so constitudos por nucletidos que so compostos, por sua vez, por uma base azotada, uma pentose e um grupo fosfato. Existem bases pricas e pirimdicas, que so derivadas da purina e da pirimidina respectivamente. As bases pricas so a adenina ( 6aminopurina ) , a guanina ( 2amino6oxipurina ) , a hipoxantina ( 6-oxipurina ) e a xantina ( 2,6-dioxipurina ). As bases pirimdicas so a citosina ( 4-amino-2-oxipirimidina ), o uracilo ( 2,4-dioxipirimidina ), a timina ( 5-metil-2,4dioxipirimidina ), o cido ortico ( 2,4-dioxi-6-carboxipirimidina ). As nucleoprotenas que so ingeridas na dieta sofrem a aco de proteases e so degradadas em protenas e cidos nucleicos. Os ltimos so transformados em nucletidos pela aco de nucleases. Existem dois tipos de nucleases: Endonucleases: cindem ligaes no interior da cadeia polinucleotdica e podem originar nucletidos 5-fosfoterminais ( por exemplo, as desoxirribonucleases no pncreas, por ciso de ligaes 3-5 ) ou nucletidos 3-fosfoterminais ( por exemplo, as desoxirribonucleases no bao, por ciso de ligaes entre um grupo fosfato e o carbono 5 ); Exonucleases: cindem ligaes fosfodister nas extremidades da cadeia polinucleotdica. Os nucletidos so ento desfosforilados por hidrlise em nuclesidos ( por aco de nucleotidases ). Os nuclesidos pricos ( adenosina e guanosina ) sofrem catabolismos diferentes: A adenosina desaminada por aco da adenosina desaminase formando-se inosina. Em seguida, esta sofre a aco de uma enzima a nucleosidase perdendo a sua pentose ( ribose ou desoxirribose ) e origina-se hipoxantina, a qual oxidada pela aco da xantina oxidase ( o aceitador de electres o oxignio molecular ) formando-se xantina. A guanosina perde a sua pentose atravs da actuao de uma nucleosidase, formando-se guanina. Esta desaminada ( por aco da guanina desaminase ) ocorrendo formao da xantina. A xantina um composto comum degradao da adenosina e guanosina e oxidada a cido rico por aco da xantina oxidase.

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O produto final do catabolismo de purinas o cido rico, que o produto de excreo dos seres humanos. Os nuclesidos pirimdicos ( citidina, uridina e timidina ) so degradados a ureia, cido propinico, actico, amonaco e dixido de carbono da seguinte forma: O nuclesido hidrolisado por aco de uma nucleosidase, perdendo a sua pentose e originando a base pirimdica correspondente; A citosina pode ser desaminada e originar uracilo ou ento pode ser metilada, formandose metil-citosina, a qual desaminada e d origem timina; O uracilo reduzido, por oxidao do NADPH e forma-se di-hidrouracilo, sendo este transformado em ureia e -alanina ( sendo esta degradada a CO2, NH3 e cido actico ); A timina igualmente reduzida por oxidao do NADPH, formando-se di-hidrotimina, que origina ureia e -aminoisobutirato ( que transformado em CO2 e cido propinico ). Resumidamente: Nas purinas o anel prico mantido no produto final do seu catabolismo, o cido rico. Na pirimidinas o anel pirimdico destrudo, da o aparecimento de aminocidos e outros produtos.

Biossntese das purinas e derivados:

Os nucletidos contm resduos de cido fosfrico, de um acar (em geral uma pentose) e de uma base prica (ou pirimdica). Quer as bases pricas, quer as pirimdica so anis heterocclicos contendo tomos de azoto e carbono. As bases pricas podem ser entendidas como constitudas por um anel de pirimidina (anel com seis tomos, quatro de carbono e dois de azoto) ligado a um anel de imidazol (anel com cinco tomos, trs de carbono e dois de azoto). So bases pricas a adenina, a guanina, a hipoxantina e a xantina. Por hidrlise dos nucletidos pricos, geram-se os respectivos nuclesidos . Estes resultam da unio entre uma purina e um acar em que a ligao envolve o tomo N9 da base. Existem dois tipos de via que levam sntese de nucletidos. So elas a via De novo e via de reaproveitamento ou salvage pathway. Esta segunda via, cujas reaces so catalisadas pelas transferases de fosforibosilo e pelas cinases de nuclesidos, permite recuperar bases e nuclesidos a nucletidos. O anel de purina construdo passo a passo. Este processo comea com a 5-fosforibosilamina. Os aminocidos glutamina, glicina e aspartato, fornecem todos os tomos de azoto do anel da purina. 44

Na sntese de novo das purinas os intermedirios contm ribose-5-fosfato e o primeiro nucletido formado a inosina-5-fosfato (IMP) cuja base a hipoxantina (6-oxipurina). Na primeira reaco a ribose-5-P, formada na via das fosfopentoses, funciona como aceitador dos grupos fosfato - do ATP que se ligam no carbono 1 da ribose gerando-se PRPP; esta reaco catalisada pela PRPP sntase. Na segunda reaco ocorre ruptura da ligao formada na primeira reaco e transferncia do azoto do grupo amida da glutamina para o carbono 1 da ribose formando-se 5-fosforibosilamina; catalisada pela amido-fosforibosil-transferase da glutamina. O azoto N9 do anel purina deriva assim da glutamina. Sucessivamente vo-se incorporando a glicina (C4, C5 e N7), uma unidade monocarbonada cedida pelo N10-formilH4-folato (C8), outro azoto do grupo amida da glutamina (N3), o CO 2 (C6), o grupo amina do aspartato (N1) e outra unidade monocarbonada cedida pelo N10-formil-H4-folato (C2). O processo mostra que a formao de alguns dos intermedirios fosforibosilo da via metablica est acoplada com a rotura de ligaes fosfoanidrido do ATP. a partir do IMP que se formam quer o AMP (por aminao do carbono 6) quer o GMP (oxidao dependente do NAD+ e posterior aminao do carbono 2). O dador do grupo 6amina do AMP o aspartato; na formao do AMP a partir do IMP intervm a sintetase de adenilosuccinato (IMP + aspartato + GTP adenilosuccinato + GDP + Pi). O dador do XMP + NADH) que origina XMP, grupo 2-amina do GMP a glutamina; na formao do GMP a partir do IMP intervm uma desidrogenase (desidrogenase do IMP: IMP + NAD+ o intermedirio que funciona como aceitador do grupo amina da glutamina. A regulao deste processo feita por feedback negativo. Assim, a transformao de IMP em AMP requer GTP e a transformao de IMP em GMP requer ATP, o que permite o estabelecimento de um equilbrio. De qualquer forma, quando h AMP ou GMP em excesso, h uma inibio parcial do processo e no total (excesso de GMP nao afecta formao de AMP). Os nuclesidos monofosfato so convertidos em nuclesidos trifosfato por reaces de fosforilao enzimtica. A fosforilao de AMP a ADP promovida pela adenilato cinase. O ADP formado posteriormente fosforilado a ATP por fosforilao oxidativa ou por enzimas glicolticas. Na via de reaproveitamento (salvage pathway), as bases pricas livres, so reutilizadas para formar novos nucletidos. A base (adenina livre) liga-se ao PRPP (1.) por aco da PRPP transferase e ocorre combinao do composto formado em 1. com a fosforibose para dar origem ao nuclesido que fosforilado. Adenina + PRPP AMP + PPi Os ribonucletidos so precursores dos desoxirribonucletidos. Estes ltimos derivam directamente dos ribonucletidos correspondentes por reduo directa no tomo de carbono C2 da ribose. 45

3.2- Sntese de aminocidos no essenciais

Glutamato O glutamato formado nas mitocndrias dos hepatcitos, atravs de uma transaminao o amino grupo de um aminocido transferido para o carbono do cetoglutarato. dador do io amnio dentro da clula. Glutamina A glutamina formada, normalmente, quando h excesso de NH 4+ nos tecidos. um transportador no txico deste io e forma-se nos rins, fgado e intestino, sendo tambm uma fonte de grupos amina em vrias vias. A glutamina formada a partir do glutamato que reage com ATP, formando-se glutamilfosfato, que ao perder um fosfato inorgnico e com a adio de mais um grupo amina origina ento a glutamina. Estas duas reaces so sintetizadas pela enzima glutamina sintetase. No fgado e nos rins existe uma enzima, a glutaminase, que permite a formao de glutamato a partir da glutamina. Prolina A prolina tambm se forma a partir do glutamato. 1 - O carbono do glutamato reage com o ATP originando o glutamilfosfato. A reaco catalisada pela enzima glutamato-cinase. 2 O glutamilfosfato, atravs da enzima glutamato desidrogenase reduzido pelo NAD(P)H, originando, aps a perda de um fosfato inorgnico, o glutamato semialdedo. Esta reaco catalisada pela enzima glutamato desidrogenase. 3 - glutamato semialdeido, por um processo rpido e no enzimtico, sofre uma ciclizao originando o P5C, que aps reduo por uma molcula de NAD(P)H, origina a prolina.

Serina A serina formada a partir do 3 fosfoglicerato, um composto intermedirio da via da gliclise. 1 O grupo hidroxilo do 3 fosfoglicerato, oxidado pela molcula de NAD+, atravs da fosfoglicerato desidrogenase, originando 3 fosfohidroxipiruvato. 2 Atravs de uma transaminao o glutamato perde o grupo amina, originando a 3 fosfoserina que hidrolisada pela fosfoserina fosfatase, originando-se serina. 3 A serina o percursor da glicina. A serina perde um carbono, atravs da enzima hidroximetiltransferase, que aceite pelo tetrahidrofolato, originando-se glicina. 46

Cistena Os mamferos sintetizam cistena atravs de dois aminocidos: a metionina, que fornece o tomo de enxofre, e a serina que fornece o esqueleto de carbonos. A metionina convertida em homocistena que reage com a serina, formando-se a cistationina , atravs da enzima cistationina sintetase. A cistationina, origina a cistena e o cetobutiraro. A enzima cistationina liase, interfere nesta ltima reaco, e necessita de um cofactor, o PLP (fosfato peridoxal, um cofactor que interfere em descarboxilaes, transaminaes e desaminaes). Aspartato: O aspartato sintetizado atravs do oxaloacetato (intermedirio do ciclio de Krebs) com uma transaminao do glutamato. Ocorre no fgado, rins e corao. Asparagina: A asparagina sintetizada pela amidao do aspartato com a glutamina a doar NH4+. Alanina: A alanina sintetizada atravs do piruvato por transaminao do glutamato. Tirosina A tirosina obtida atravs da fenilalanina com a hidroxilao do carbono quatro do grupo fenilo, pela enzima fenilalanina hidroxilase.

Hidroxiprolina e Hidrolisina Hidroxiprolina e Hidrolisina mantm a estrutura tridimensional do colagnio, principalmente logo aps a sua formao. A hidroxiprolina formada atravs da prolina com a juno de um grupo hidroxilo. (reaco catalisada pela Prolil-4-hidroxilase). A hidroxilisina formada atravs da lisina com a juno de um grupo hidroxilo. (reaco catalisada pela Lisil-4-hidroxilase).

Produtos derivados de alguns aminocidos

Serina Selenocistena Ao contrrio do que o nome possa sugerir, formada a partir da serina. Contm um tomo de selnio (ligado a outro de hidrognio) no lugar onde estaria o grupo hidroxilo na serina. Fosfoserina Em reaces que ocorrem aps a traduo, a serina (na forma de resduo de aminocido) pode ser fosforilada por diversas cinases. A fosforilao ocorre no 47

grupo hidroxilo e constitui um ponto de regulao para diversos mensageiros celulares e enzimas.

Metionina um precursor da homocisteina, referida anteriormente na sntese da cistena. Inicialmente combina-se com o ATP formando S-adenosilmetionina. Sob esta forma perde um grupo metilo, formando-se S-adenosilhomocisteina. A ligao entre a adenosina e a homocisteina ento hidrolisada, formando-se assim os compostos finais.

Importncia do cido flico

O cido flico tem a sua actividade sob a forma reduzida de tetrahidrofolato, este funciona como dador de carbono. O carbono pode ser obtido pela formao da glicina a partir da serina ou por adio directa de formato (CHOO-), sendo para esta ltima reaco necessrio o gasto de uma molcula de ATP. O carbono pode ser cedido sob a forma de diversos grupos funcionais. Esses grupos por ordem crescente de estado de oxidao so: metilo (-CH3), hidroxilo (-CH2OH), forminino (-C=NH) e carboxilo (-CHO).Um exemplo de uma reaco em que o tetrahidrofolato participa a metilao da homocisteina a metionina.

Tirosina um percursor da dopamina, norepinefrina e epinefrina. Para a produo de dopamina adicionado um grupo hidroxilo ao anel fenilo da tirosina, neste passo a tetrahidrobiopterina actua como cofactor da tirosina hidroxilase. Forma-se assim dihidroxifenilalanina (dopa). A dopamina surge por descarboxilao da dopa, catalisada por uma descarboxilase dos AA aromticos. A norepinefrina surge por meio de uma nova adio de um grupo hidroxilo, desta vez ao carbono da dopamina, atravs da dopamina -hidroxilase. A epinefrina obtm-se por metilao do grupo amina da norepinefrina atravs da feniletanolamina N-metiltransferase. A dopamina e a norepinefrina so neurotransmissores e a epinefrina uma hormona. Estes produtos so denominados por catecolaminas. Treonina Tal como a serina, a treonina pode tambm ser fosforilada sob a forma de resduo de aminocido, constituindo um importante ponto de regulao para diversas protenas. Neste caso a fosforilao ocorre com a substituio do grupo hidroxilo.

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Arginina A arginina utilizada como fonte de um tomo de azoto para a sintese do monxido de azoto, um importante vasodilatador, que exerce a sua actividade relaxando os endotlios dos vasos sanguneos. A arginina reage com o oxignio e utilizado NADPH como redutor, numa reaco catalisada pela monoxido de azoto sintase. Como produtos obtm-se o monxido de azoto e citrulina, que ter como destino o ciclo da ureia. Ornitina A ornitina pode ser utilizada como uma outra via para a obteno da prolina. Num primeiro passo, por aco de uma -aminotransferase, o grupo amina do radical da ornitina transferido para o -cetoglutarato. Forma-se glutamato--semialdeido, que sofre uma ciclizao no enzimtica e, por uma reaco de reduo (NAD(P)H oxidado) catalisada pela pirrolina carboxilato redutase, forma-se ento a prolina. Triptofano Por adio de um grupo hidroxilo ao anel fenilo, atravs da triptofano hidroxilase, e por posterior descarboxilao, por acco da descarboxilase dos aminociso aromticos, o triptofano d origem serotonina, um neurotransmissor com propriedades antidepressivas. Cistena - Num passo ps traduo, a cistena, sob a forma de resduo de aminocido, pode reagir com outro resduo homlogo, formando uma ponte dissulfito entre as respectivas cadeias polipeptdicas. Os dois resduos de cistena, ligados pela ponte dissulfito denominam-se por cistina. Estas podem conferir uma grande rigidez s protenas em que esto integradas, sendo responsveis pela grande resistncia mecnica de protenas como a queratina presente, por exemplo, nas unhas e cabelo humanos.

Formao de produtos de aminocidos

Creatina Na formao da creatina esto envolvidas a glicina e a arginina. A arginina (por aco de uma amidinotransferase) transfere um grupo amida para a glicina dando origem ao guanidinoacetato. A creatina o produto da metilao do guanidinoacetato, atravs de uma metiltransferase, que transforma a adenosilmenitionina (dador do grupo metilo) em adenosil-homocistena. A fosfocreatina usada para armazenar energia. O fosfato do ATP transferido para a creatina, formando a fosfocreatina atravs da aco da fosfocinase. A reaco reversvel e o seu sentido depende das necessidades energticas da clula, sendo que o equilbrio est fortemente deslocado no sentido da formao da fosfocreatina. Tanto a creatina como a fosfocreatina podem ser encontradas no msculo, crebro e sangue.

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Creatinina A creatinina formada no msculo a partir da fosfocreatina por uma desidratao no enzimtica e perda de um fosfato inorgnico. A creatinina excretada pelos rins e a depurao uma medida da funo renal. Gama-aminobutirato (GABA) O GABA um neurotransmissor inibitrio. formado por descarboxilao do glutamato atravs da aco de uma glutamato descarboxilase. Glutatio O glutatio formado a partir de trs aminocidos: glutamato, cistena e glicina. Inicialmente o glutamato liga-se cistena (o grupo -carboxlico do glutamato activado pelo ATP formando acilfosfato que depois atacado pelo grupo amina da cistena), por aco da -glutamil cistena sintetase, formando o -Glu-Cis. Seguidamente por aco da glutatio sintetase a glicina ligada aos dois pptidos iniciais (o grupo -carboxlico da cistena activado pelo ATP permitindo a ligao com a glicina). O glutatio funciona como anti-oxidante (particularmente importante no ambiente oxidante dos eritrcitos), est envolvido no transporte de a.a atravs das membranas celulares, serve como cofactor em algumas reaces enzimticas e participa no rearranjo das ligaes dissulfito nas protenas. A forma oxidada do glutatio consiste em duas molculas do mesmo ligadas por uma ligao dissulfito. A glutatio reductase utiliza NADPH como cofactor para reduzir o glutatio. Poliaminas Na sntese de poliaminas esto envolvidas, entre outros, a putrescina (catabolito da ornitina) e a S-adenosil metionina, como dador de dois resduos de propilamina. A funo da ornitina descarboxilase produzir putrescina (4 carbonos) a partir de ornitina (5 carbonos), enquanto a S-adenosil metionina descarboxilase (cuja actividade estimulada pela putrescina,) retira o grupo carboxilo da S-adenosil metionina. A adenosil metionina descarboxilada juntamente com a putrescina e por aco de propilaminotransferase I do origem espermidina e a uma metiltioadenosina. Um segundo resduo propilamina adicionado espermidina por aco da propilaminotransferase II dando origem espermina e a outra metiltioadenosina. As poliaminas so altamente catinicas e tendem a ligar-se aos cidos nucleicos. Com base neste facto acredita-se que as poliaminas participem na sntese de DNA, ou na regulao desse processo.

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3.3- Sntese e degradao das porfirinas e heme, mecanismos reguladores e derivados

(a) Biossntese
As porfirinas so uma classe de molculas orgnicas derivadas de um macrociclo formado por quatro anis pirrol (C4H5N - aromtico) ligados por ligaes metnicas (=CH-). So pigmentos de cor prpura, devido ao carcter aromtico do ciclo. Este macrociclo, tendo os 4 tomos N voltados para o interior, possui no seu centro um espao apropriado para acomodar um io metlico (estabilizando-o por ressonncia). Designam-se por porfirinas livres ou ligadas caso possuam ou no este io. Exemplos de porfirinas ligadas incluem o grupo heme (Fe2+) e a clorofila (Mg2+). Estes compostos comportam-se frequentemente como compostos de coordenao, em que o io metlico pode ter capacidade de ligar mais um ou dois grupos qumicos no eixo perpendicular ao plano do anel da porfirina. No caso do grupo prosttico heme, a funo a desempenhar varia com a protena que o contm: Hemoglobina, Mioglobina - ligao de O2 ou CO ao io Fe2+. Catalase alterao do estado de oxidao do io Fe3+, catalisando a dismutao do Citocromos- transporte electrnico atravs do io Fe3+/Fe2+.

perxido de hidrognio.

A biossntese das porfirinas em humanos ocorre principalmente nas clulas hepticas e da medula ssea, embora possa ocorrer em todas as clulas do organismo, e tem incio com a formao de aminolevulinato ( -ALA). Na mitocndria, o aminocido glicina (proveniente do citosol) reage com succinil- CoA (intermedirio do ciclo de Krebs) formando - amino- - cetoadipato, sendo este descarboxilado a -ALA. As 2 reaces so catalisadas pela ALA (aminolevulinic acid) sintase. As molculas de -ALA juntam-se 2 a 2, (enzima: porfobilinognio sintase/ ALA desidratase), saindo da mitocndria e originando por desidratao molculas de porfobilinognio, um derivado do anel pirrol. Por cada 4 destas molculas forma-se, atravs de desaminao, (enzima: porfobilinognio desaminase/ uroporfirinognio sintase) uma molcula de pr-uroporfirinognio, sendo esta desidratada (enzima: uroporfirinognio III cosintase) a uroporfirinognio III, a primeira porfirina. De seguida ocorre descarboxilao dos 4 substituintes acetilo da molcula anterior (enzima: uroporfirinognio III descarboxilase), formando-se coproporfirinognio III. O mesmo entrar de novo na mitocndria, originando protoporfirinognio (enzima: coproporfirinognio oxidase) por descarboxilao/oxidao de dois dos 4 substituintes propionilo do macrociclo (tornam-se vinilo). A oxidao de 2 tomos 51

N do macrociclo (enzima: protoporfininognio oxidase) d origem molcula de protoporfirina, que por aco da enzima ferroquelatase vai incorporar no centro do macrociclo um io Fe2+ vindo do citosol. Temos ento a molcula heme, produto final da via de sntese, pronta a sair da mitocndria a fim de se ligar a cadeias polipeptdicas (ex: cadeias de globina) formando hemoprotenas. Em humanos, defeitos genticos podem causar a desregulao deste sistema por deficincia de uma das enzimas da via de sntese de porfirinas, causando a acumulao de um dos intermedirios. As doenas deste grupo (uma para cada enzima) so conhecidas por porfrias. Em eucariotas superiores, o principal regulador da via a concentrao de heme na clula, actuando por um mecanismo de regulao retrgrada. A concentrao de Fe2+, por outro lado, actua por retroaco positiva na transcrio da enzima ALA sintase, 1 enzima. No caso dos hepatcitos, em que a sntese de heme ocorre para incorporao em citocromos (P450, c, entre outros), a hemina (heme na forma oxidada Fe3+, constituinte dos citocromos que participam na fosforilao oxidativa) inibe a enzima ALA sintase, bem como a sua sntese e transporte para a mitocndria. Nos precursores dos eritrcitos, o objectivo da biossntese de heme a formao de hemoglobina, pelo que apenas se d aquando da diferenciao e maturao celular, perodo em que sintetizada a hemoglobina. Neste perodo, a concentrao de heme estimula tambm a sntese proteica.

(b) Degradao e pigmentos biliares

Degradao das porfirinas No ser humano, a maioria das porfirinas utilizada sob a forma de grupos heme em molculas como a hemoglobina, a mioglobina, a catalase e os citocromos. A degradao desses grupos heme, principalmente da hemoglobina, envolve processos que decorrem principalmente no bao, na medula ssea e tambm no fgado. Nestes rgos, os eritrcitos danificados ou em final de vida so destrudos, libertando as suas molculas de hemoglobina, que so rapidamente fagocitadas por macrfagos (ou pelas clulas de Kupfer, no fgado). No seu interior, as componentes proteicas (globina) so decompostas em aminocidos, e os grupos heme podem ento ser degradados para fornecer ies Fe 3+ e, posteriormente, bilirrubina. Isto pode ser feito pelos macrfagos em todo o tipo de tecidos, atravs de uma via metablica de dois passos: no primeiro, catalisado pela enzima heme oxigenase, d-se a converso de um grupo heme em biliverdina, um derivado do tetrapirrol de cadeia linear (ocorrendo portanto a clivagem do anel porfrico). Obtm-se tambm como produtos um io Fe2+ livre e uma molcula de CO, sendo esta a nica reaco conhecida que produz CO no organismo humano. O ferro, por um lado, rapidamente captado pela transferrina, para reaproveitamento. O CO ir ligar-se hemoglobina para eventualmente ser expulso nos 52

pulmes. O segundo passo da via consiste na converso da biliverdina em bilirrubina, catalisada pela enzima biliverdina redutase (que utiliza uma molcula de NADPH como fonte de poder redutor). A molcula de bilirrubina tambm uma cadeia aberta de quatro grupos pirrol, cuja conformao se pode alterar na presena de luz. Pigmentos biliares Tal como as molculas de porfirina propriamente ditas, a biliverdina e a bilirrubina so compostos com propriedades pticas particulares, nomeadamente cores caractersticas. Isto pode ser observado facilmente numa simples contuso: a danificao dos capilares provoca derrame e coagulao de sangue, e consequente degradao local de eritrcitos, que libertam hemoglobina. Com o tempo, a zona afectada, inicialmente negra ou roxa, passa a apresentar uma cor esverdeada (devido produo de biliverdina) e posteriormente amarelada (devido sua converso em bilirrubina). Estes dois compostos so designados por pigmentos biliares. A bilirrubina muito pouco solvel, pelo que s entra na corrente sangunea depois de associada albumina srica (ainda na forma no-conjugada). Uma vez chegada ao fgado, grande parte da bilirrubina recm-formada entra nos hepatcitos e, no seu interior, desliga-se da albumina e associa-se a complexos intermdios, que a transportam para o retculo endoplasmtico liso. Aqui, por aco da enzima glicuronil-bilirrubina transferase, a bilirrubina convertida principalmente em bilirrubina diglicuronato, um produto j suficientemente solvel para ser integrado na blis e secretado para o intestino delgado. Chegada ao intestino, a forma conjugada da bilirrubina pode ser convertida, por intermdio de enzimas bacterianas, em vrios outros compostos, principalmente urobilinognio. Uma parte deste produto (altamente solvel) reabsorvida para a circulao, sendo a maior parte captada e reexcretada pelo fgado para o intestino. No entanto, uma fraco de cerca de 5% transportada para os rins, onde oxidada em urobilina (que d urina a sua cor amarelada) e excretada. Por outro lado, o urobilinognio que permanece no intestino pode ser convertido em estercobilina (que por sua vez confere s fezes a sua cor castanho-avermelhada) e prosseguir ao longo do tracto intestinal. Todos estes produtos derivados da bilirrubina so tambm considerados pigmentos biliares. Efeitos nocivos dos pigmentos biliares Problemas no funcionamento do fgado ou na secreo da blis podem provocar fugas de bilirrubina para a corrente sangunea, resultando numa condio conhecida por ictercia, que se caracteriza por uma amarelamento da pele, olhos e mucosas devido ao aumento acentuado da concentrao de bilirrubina no sangue (hiperbilirrubinemia). Isto tambm ocorre por vezes em recm-nascidos que ainda no possuem nveis suficientes da enzima glicuronil-bilirrubina 53

transferase, necessria para o processamento da bilirrubina no fgado. Em condies normais, pouco prejudicial e desaparece com o ajustamento fisiolgico ps-natal, ainda que, em condies de maior fragilidade, possa verificar-se a acumulao excessiva e prejudicial do pigmento em certas regies cerebrais. Um mtodo de tratamento tradicional envolve a exposio a lmpadas fluorescentes (fototerapia), que induzem reaces fotoqumicas que levam converso da bilirrubina em compostos mais solveis e mais fceis de excretar. Importncia da degradao das porfirinas Os produtos da degradao dos grupos heme tm um papel bastante importante na regulao de certas funes celulares e na proteco das clulas contra danos oxidativos. O CO produzido pela heme oxigenase de facto txico quando em concentraes elevadas, mas quando produzido em baixos nveis, como na degradao dos grupos heme, parece desempenhar certas funes de regulao e sinalizao, e actuar como vasodilatador ou como regulador de processos de neurotransmisso. A bilirrubina, por outro lado, o antioxidante mais abundante nos tecidos dos mamferos, actuando na proteco contra os danos oxidativos provocados por radicais livres e formas activas de oxignio (ROS), principalmente nos lpidos e protenas membranares. Quando oxidada, passa a biliverdina, mas rapidamente reconvertida em bilirrubina pela enzima biliverdina redutase. Essa rapidez torna-a um antioxidante bastante poderoso, e de facto mais eficaz que o glutatio (que requer a interaco com duas enzimas diferentes para ser oxidada e novamente reduzida). Regulao da degradao das porfirinas Dada a grande variedade de funes dos produtos resultantes da degradao dos grupos heme, esta via est sujeita a mecanismos de regulao bastante especficos, principalmente ao nvel do primeiro passo da degradao. Existem, no ser humano, pelo menos 3 tipos de isozimas da heme oxigenase. A HO-1 altamente regulada, sendo a sua produo induzida por vrios factores tpicos de ambientes de stress celular. A HO-2, por outro lado, encontra-se principalmente no crebro e testculos, onde continuamente produzida em condies homeostticas. A HO-3 no se encontra ainda bem caracterizada.

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(c) Composio e mecanismo de aco do citocromo P450 na destoxificao heptica

Importncia Biomdica Muitas drogas, poluentes e carcinognios qumicos (xenobiticos) so metabolizados por oxigenases (incorporam oxignio numa srie de substratos, atravs de uma reaco em que o oxignio se liga enzima no sitio activo, e posteriormente reduzido), conhecidas por citocromo P450. O nome de citocromo P450 vem do seu pico de absoro de aos 450 nm. um dos biocatalisadores mais versteis conhecidos pelo homem. As diferentes isoformas do citocromo P450 constituem uma famlia de enzimas contendo Heme. 1) Dado o grande nmero de ismeros (cerca de 150), houve a necessidade de criar uma nomenclatura sistemtica: CYP 1A1 (primeiro nmero famlia (40% de semelhana estrutural), letra subfamilia (55% de semelhana estrutural), segundo nmero identifica dentro da famlia) 2) Tal como a hemoglobina, so hemeprotenas 3) Encontram-se presentes em maior quantidade no fgado e no intestino delgado. Existe uma elevada concentrao no retculo endoplasmtico liso. A estrutura do citocromo P450 semelhante de outros citocromos, apresentando cadeias proteicas, e a presena de um grupo Heme. As monooxigenases (oxidases de funo mista) incorporam somente um tomo de oxignio molecular no substrato. O outro tomo de oxignio reduzido a gua. Para tal, necessrio um doador adicional de electres, ou um co-substrato. Formula geral da reaco: A-H+O2+ZH2 -> A-OH + H2O + Z Estes sistemas de monooxigenases microssomais e citocromo P450 so importantes para a hidroxilao de muitas drogas, e actuam ao nvel do fgado, juntamente com o citocromo b5. O NADH e o NADPH participam na reduo destes citocromos, os quais por sua vez so oxidados pelos substratos numa srie de reaces enzimticas conhecido como ciclo das hidroxilases.

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DROGA-H + O2 + 2Fe2+ (citocromo P450) + 2H+ DROGA-OH + H2O + 2Fe3+ (citocromo P450) Entre os diferentes tipos de droga encontram-se o benzopireno, aminopirina, anilina, morfina, benzoafetamina. Os citocromos P450 tambm esto relacionados com a biossintese de hormonas esterides, mas essa funo foge do mbito do nosso trabalho. Metabolismo de xenobiticos Xenobitico: Composto qumico estranho ao organismo. Para serem excretados, tm de sofrer alteraes qumicas, que ocorrem principalmente ao nvel do fgado. Importncia biomdica O conhecimento a respeito do metabolismo dos xenobiticos fundamental para o entendimento racional da farmacologia e teraputica, toxicologia, pesquisa do cancro e vcio em frmacos. Todas estas reas envolvem exposio a xenobiticos. O metabolismo dos xenobiticos ocorre em 2 fases: Na fase I, a principal reaco a hidroxilao, catalizada pelos citocromos P450. Na fase II, os compostos hidroxilados so convertidos por enzimas especficas em vrios metabolitos polares, atravs da conjugao com diversas substncias. A fase II responsvel pelo aumento da solubilidade (polaridade) e desta forma facilitar a excreo pelo organismo. Isto sucede pois xenobiticos muito hidrofbicos persistiriam no tecido adiposo quase que indefinidamente, se no fossem convertidos em formas mais polares. O termo destoxificao no o mais apropriado, pois as reaces a que os xenobiticos so sujeitos aumentam, por vezes, a sua toxicidade aumentando a sua actividade biolgica.

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3.4- Protenas Celulares

A sntese proteica e um processo complexo que ocorre no citosol, mais precisamente nos ribossomas. Estes so constituidos por protenas e RNA ribossomal organizados em duas subunidades, uma 60S e outra 40S. Nao vamos falar do processo de sintese em si mas dos destinos das protenas que daqui advm. As protenas destinadas a secreo, integrao nas membranas plasmaticas ou incluso em lisossomas partilham os primeiros passos de uma mesma via, que se inicia no retculo endoplasmatico, explicada mais detalhadamente de seguida. As protenas destinadas s mitocndrias, cloroplastos ou ncleo usam mecanismos separados que tambm iro ser abordados. Para alm destas existem outras protenas que simplesmente se mantm no local de sntese (citosol). A sequncia sinal o elemento mais importante em muitas destas vias permitindo marcar as protenas consoante o seu destino. Para muitas protenas esta removida aps a chegada ao destino ou mesmo durante o transporte. Em protenas com destino s mitocondrias ou retculo endoplasmtico esta sequncia localiza-se no residuo N-terminal da sequncia polipeptdica. Analisando especificamente a sequncia sinal que encaminha protenas para o RE temos que a composio das sequncias mais ou menos sempre a mesma, tendo um ou mais resduos aminoacidos carregados positivamente proximos do N-terminal da sequncia que precedem a cadeia hidrofbica de cerca de 10 a 15 resduos. O C-terminal da sequncia composto por resduos polares, terminando no local de clivagem por onde a sequncia vai ser separada da cadeia. O primeiro passo do direccionamento das protenas para o RE comea com a sntese proteica nos ribossomas, com o aparecimento da sequncia sinal logo numa fase inicial, no residuo N-terminal (por onde se inicia a sntese). Ao emergir do ribossoma, a sequncia sinal e o prprio ribossoma ligam-se SRP (partcula de reconhecimento de sinal). A SRP junta-se ao GTP ligando-se de seguida a receptores na membrana do RE. O peptido recebido pelo complexo de translocao peptdica sendo no passo seguinte o SRP desligado do ribossoma (dando-se a hidrlise do GTP). Continua o alongamento do peptido com o complexo a puxlo para dentro do RE (O ATP permite este processo) ate a protena estar completamente sintetizada. A sequncia sinal removida dentro do RE por uma sinal peptidase, dando-se a dissociao e posterior reciclagem do ribossoma. No lmen do RE as protenas continuam a sua modificao, havendo para alm da remoo de sequncias sinais, alterao da conformao dos polipeptidos, formao de ligaes dissulfito entre as cadeias e glicosilao de protenas que ir ser abordada mais frente. De seguida, as protenas so transportadas para o complexo de golgi em vesculas de transporte onde, para alm de haverem mais modificaes a nvel das glicoprotenas, vai haver distino e envio das protenas para os respectivos destinos (por meios ainda no muito bem compreendidos). A nvel deste complexo, as protenas que vo para as membranas, secrees ou lisossomas tm de ser distinguidas por anlise estrutural, j que j no existem as sequncias sinal. Este processo melhor compreendido no caso das hidrolases destinadas aos lisossomas, que so marcadas por fosforilao dos seus resduos de manose. Para direccionar as protenas mitocondriais e dos cloroplastos tambm so necessrias sequncias sinal, mas este direccionamento s se inicia depois de uma protena precursora ser sintetizada e libertada do ribossoma. Esta protena est ligada a protenas chaperone do citosol, sendo entregue membrana do respectivo organito. Depois disto, mecanismos de translocao especializados transportam a protena ate ao seu destino sendo a sequncia sinal removida j no destino final. Em relao ao ncleo, sabemos que as protenas ribossomais so sintetizadas nos ribossomas, vo para o ncleo para serem agrupadas em subunidades ribossomais, regressando depois ao citosol. Por outro lado, os ribossomas sintetizam diversas protenas 57

nucleares (RNA e DNA polimerases, histonas, topoisomerases etc) que tm de ser importadas para o nucleo. Este trfego modulado por um sistema complexo de sinais moleculares e protenas de transporte. Sabemos que o envelope nuclear rebenta em cada diviso celular e que aps o restabelecimento deste, as protenas tm de ser reimportadas. Sendo assim, a sequncia sinal que permite que isto acontea, a NLS (sequncia de localizao nuclear) constituida por 4 a 8 resduos de aminoacidos no removida quando as protenas chegam ao seu destino e pode estar localizada em qualquer sitio da proteina. A importao das protenas ao ncleo mediada por muitas protenas, como as importinas beta e alfa e uma GTPase (mais chamada de Ran). Um dmero de importinas alfa e beta funciona como um receptor de protenas destinadas ao nucleo, ligando-se ao NLS das protenas que estao no citosol. Este complexo translocado atravs do envelope nuclear por um mecanismo dependente da Ran GTPase. As importinas alfa e beta dissociam.se, separando-se a protena da importina alfa j dentro do ncleo. Existem protenas como a LDL, as hormonas peptdicas, as protenas destinadas a degradao entre outras que se ligam directamente a receptores endocticos situados em invaginaes da membrana. Forma-se uma vescula (endossoma) com as protenas e os receptores, havendo posteriormente separao destes sendo o seu destino varivel. As glicoprotenas so protenas que apresentam cadeias de oligossacridos, s quais esto ligadas covalentemente. Estas fazem parte de uma classe chamada glicoconjugados. As cadeias de oligossacridos ligadas as protenas so pequenas mas com uma grande diversidade estrutural. Outra caracterstica das cadeias oligossacridos que amplamente aceite de que dependendo dos seus constituintes em acares e das suas sequncias e conformaes este codificam informao biolgica. Por exemplo, os resduos de manose 6fosfato dirigem as enzimas lisossomais recm sintetizadas aos lisossomas. Existem cerca de 200 monossacridos na natureza, mas apenas 8 so usualmente encontradas nas cadeias de oligossacridos das glicoprotenas, e so elas: a galactose, a glicose, a manose, o cido N-acetilneuramnico, a fucose, o N-Acetilgalactosamina, o Nacetilglicosamina e a xilose. A maioria das reaces de glicosilao envolvidas na biossntese de glicoprotenas utiliza os acares nucleotdicos, e no os acares sozinhos. Isto porque a natureza anidrido da ligao entre o grupamento fosfato e os acares do tipo de altaenergia e de potencial elevado de transferncia do grupo. Os acares deste compostos encontram-se portanto activados, podendo ser transferidos para receptores especficos, desde que existam transferases apropriadas. Como muitas reaces de glicosidao ocorrem no lmen do complexo de Golgi, necessrio haver sistemas que transportem os acares nucleotdicos atravs da membrana. Um desses sistemas o antiporte, o afluxo de um acar nucleotdico contrabalanado pelo efluxo do nucletido correspondente. Existem trs tipos principais de glicoprotenas, consoante a natureza das suas ligaes, que so: as O-ligadas, as N-ligadas e as que esto ligadas a um aminocido carboxil terminal de uma protena, via um resduo de fosforiletanolamina unido a um oligossacrido, que por sua vez est unida a um fosfatidilinositol por uma glicosamina. Para alm destas trs classes principais tambm existem outras protenas que contm mais de um tipo de ligao. As ligaes O-glicosdicas so feitas entre o grupo hidroxilo da serina ou treonina e um acar. Sendo que o acar a que se vai estabelecer a ligao mais predominante o NAcetilgalactosamina. Os acares so doados pelos respectivos acares nucleotdicos, reaces que so catalisadas pelas glicosiltransferases. A montagem das cadeias O-ligadas envolvem estas enzimas que esto distribuidas sequencialmente na membrana do complexo de Golgi, principalmente no compartimento do trans-Golgi. Um exemplo de glicoprotenas com este tipo de ligaes so as mucinas. As ligaes N-glicosdicas so feitas entre o nitrognio amida da asparagina e a NAcetilglicosamina. A sua biossntese envolve o processo intermdio de formao do oligossacrido-pirofosforildolicol (Glc3Man9GlcNAc2-P-P-Dol), que posteriormente faz uma 58

ligao N-glicosdica com um ou mais resduos de asparagina. Ocorrendo por fim o processamento da cadeia de oligossacrido. Dependendo donde pra esse processamento, e como ocorre, podem haver trs classes de oligossacridos: complexas, ricas em manose ou hbridas. No caso das cadeias ricas em manose, apenas os resduos de glicose acrescidos de determinados resduos de manose so removido, sendo que o processamento da cadeia acaba a, apresentando normalmente 2 a 6 resduos de manose. As cadeias complexas contm geralmente resduos terminais cido N-acetilneuramnico e resduos subjacentes de galactose e N-acetilglicosamina, sendo primeiro removidos no retculo endoplasmtico os resduos de glicose e os quatro de manose. Por fim, as cadeias hbridas contm caractersticas das duas classes. O processo de N-glicosilao pode ser dividido em duas etapas. Na primeira etapa existe a formao do oligossacrido-P-P-Dolicol atravs de um lpido chave que actua como receptor de acares. Na segunda etapa existe o processamento da cadeia de oligossacrido (que no ser abordado neste trabalho). O dolicol um poliseprenol que utilizado pelos tecidos eucariotas na biossntese das ligaes anteriores. Este aps a borracha o hidrocarboneto mais longo de ocorrncia natural e de unidades simples. Antes de participar na biossntese o dolicol fosforilado a dolicolfosfato. Depois de fosforilado ele participa na reaco em que se forma o GlcNAcpirofosforil-dolicol (o lpido chave). Esta reaco ocorre na membrana do retculo endoplasmtico. Depois da obteno do lpido seguem-se quatro passos em que existe adio de acares ao lpido, at se obter o oligossacrido-P-P-dolicol. No caso especfico em que se obtm Glc3Man9GlcNAc2-P-P-Dol, seguem-se os seguintes passos: no primeiro existe a adio do segundo GlcNAc, usando o UDP-GlcNAc como doador; a seguir cinco resduos de manose so adicionados utilizando GDP-Manose; depois existe a adio de mais quatro resduos de manose mas desta vez o doador o Dol-P-Man; por fim existe a adoo de trs resduos de glicose perifrica que so doados pelo Dol-P-Glc. Depois de ser formado, o oligossacrido-P-P-Dolicol transferido em bloco para a superfcie luminal da membrana do retculo endoplasmtico, onde se vai ligar por uma ligao N-glicosdica asparagina. Esta reaco catalisada pela oligossacrido: protena transferase. Um outro produto da reaco o dolicol-P-P, que pode ser convertido em dolicol fosfato por uma fosfatase, podendo ser utilizado novamente para o inicio da formao do oligossacrido. A biossntese descrita anteriormente do tipo enzimtica, sendo controlada por diversos factores, entre os quais: o nvel tecidual de dolicol-fosfato e a actividade da oligossacrido transferase. Existe ainda a biossntese de ligaes N-glicosdicas do tipo no enzimtica glicao. Quando existem grandes concentraes de acares redutores, estes podem sofrer uma reaco de adio nucleoflica com os grupo amino livres das protenas formando iminas. Este o passo inicial da reaco de Maillard, onde existe ento a formao da ligao Nglicosdica (fig. seguinte o H2NR a protena):

natural que as glicoprotenas, sendo agregados de cadeias oligossacridas e de polipptidos, tenham a capacidade de desempenhar vrias funes e ter vrias aces de mbitos vrios. Para comear, a prpria ligao covalente da protena a um ou mais oligossacridos induz vrias alteraes na mesma: 59

A parte glicoltica modula propriedades fsico-qumicas da protena, propriedades essas que podem ser muito variadas (tamanho, estabilidade ao calor ou tempo de semivida em circulao) Para alm disso, as glicoprotenas tendem a proteger as protenas a que esto conjugadas da aco das proteases, evitando assim a sua protelise.

No entanto, as funes das glicoprotenas no se restringem aco que tm sobre a parte proteica, e a cadeia oligossacrida por si, tem capacidades mais amplas. Esta funciona como um cdigo, um cdigo de acares, que pode incluir informao sobre processos como interaco entre clulas, desenvolvimento de tecidos e processamento de sinais extracelulares e, dentro da clula, tem papel fundamental no destino e processamento de protenas intracelulares no complexo de Golgi. De uma forma mais geral, as glicoprotenas podem ainda desempenhar as seguintes funes: Coagulao do sangue: tem um papel na resposta imunitria, os anticorpos so glicoprotenas; Podem ter uma funo estrutural, formando o colagnio, que grande parte do tecido conjuntivo no nosso corpo; Funo hormonal: h hormonas que so glicoprotenas, como e o caso da hormona estimulante da tiride; Funo enzimtica: um exemplo e a fosfatase alcalina, existente em vrios rgos; As glicoprotenas podem ser parte integrante de membranas celulares: as cadeias de carbo-hidratos podem ligar-se s protenas integrantes da membrana e formar glicoprotenas que depois tm um papel fundamental nas interaces entre clulas ou entre a clula e a matriz extra-celular. Podem funcionar como agentes lubrificantes e protectores, no caso das mucinas. Estas vo ser responsveis pelo bloqueio da interaco entre bactrias ou qualquer outro tipo de ataque com a superfcie da clula a que esto ligadas, num mecanismo que acontece, por exemplo, no estmago. A produo de muco impede a auto-digesto por parte das vrias enzimas presentes e o ataque do meio cido. As glicoprotenas tm ainda a capacidade de interagir com lectinas e selectinas, que lhes confere funes bastante mais especficas e abrangentes. A parte de carbo-hidratos que se liga a uma protena contem informao importante que intervm em variados processos, como j foi referido. Essa informao est altamente organizada, muito complexa e como tal, necessita de algo que a saiba ler e interpretar, semelhana do que acontece com o cdigo gentico. Vo ser as lectinas que vo ser responsveis por essa interpretao e vo-se ligar cadeia oligossacrida com grande afinidade e especificidade. Depois da interpretao deste cdigo, vo ser capazes de mediar ou desencadear uma grande variedade de processos e funes intra e extra-celulares. Como exemplos de aplicao das lectinas, e s a ttulo de exemplo, temos que estas intervm no mecanismo de renovao dos eritrcitos (nos mamferos), na absoro de galactose nos hepatcitos e na interaco de vrus e bactrias com as clulas hospedeiras. Dentro da famlia destas lectinas, existem as selectinas. Situadas na membrana plasmtica, as selectinas mediam o reconhecimento entre clulas e adeso celular no mbito de vrios processos, como o movimento de clulas imunitrias, os linfcitos T, do sangue para o stio especfico que se encontra infectado ou inflamado. Assim, um linfcito T livre, circulando num capilar, sofre interaces nos ligandos de glicoprotenas da sua superfcie, aco das selectinas que se encontram no endotlio dos capilares. Estas interaces vo atrasar o movimento do linfcito e fazem-no rolar pela superfcie 60

externa do capilar; quanto mais perto o linfcito est do local-alvo, mais fortes vo ser as interaces at ao momento em que o ligando na superfcie do linfcito T promove a adeso celular. Nesse momento, a clula T pra, e sobre a influncia de sinais vindos do prprio local de inflamao, comea o processo de extravaso: o linfcito entra atravs da parede do capilar. As lectinas tambm agem em processos dentro da clula, um destes exemplos foi a j falada distribuio de protenas recentemente sintetizadas no complexo de Golgi. Um resduo de manose de um oligossacrido de uma glicoprotena fosforilado atravs de uma enzima que o reconhece, e, preferencialmente no fim da cadeia de carbo-hidratos, catalisa a reaco de manose a manose-6-fosfato. O resduo fosforilado vai ser depois reconhecido atravs de uma lectina no lado luminal do complexo de Golgi. Esta etiquetao das protenas vai permitir depois a sua transferncia para os lisossomas. Este processo envolve o processamento da grande maioria das enzimas de degradao, as hidrolases.

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3.5- Protenas Plasmticas

Origem, Tipos Principais e Funes
O plasma sanguneo constitudo aproximadamente por 90% de gua e 10% de solutos, de entre os quais 70% correspondem a protenas plasmticas; estas podem ser protenas simples, glicoprotenas (quase na totalidade) ou lipoprotenas. Os tipos principais de protenas plasmticas so: albumina, globulinas, lipoprotenas e fibrinognio. A grande maioria das protenas plasmticas sintetizada no fgado, sendo as restantes produzidas em clulas plasmticas (-globulinas) ou noutros tecidos, como as clulas endoteliais. A sntese destas protenas ocorre em polirribossomas ligados membrana do retculo endoplasmtico rugoso, ficando ligadas ao sistema membranar. As protenas seguem ento para o retculo endoplasmtico liso, depois para o complexo de Golgi, no qual so incorporadas em vesculas secretoras, e finalmente eliminadas para o plasma. Geralmente, as protenas so sintetizadas na sua forma zimognio, sofrendo depois modificaes medida que so transportadas para o exterior da clula, para adquirirem actividade biolgica especfica. As protenas plasmticas apresentam, frequentemente, polimorfismo. A albumina a protena mais abundante no plasma sanguneo. sintetizada na sua forma zimognio prealbumina, sofrendo clivagem peptdica medida que transportada para o plasma. A sua concentrao um factor determinante na manuteno da distribuio de fludos entre o sangue e o espao intersticial tecidular, atravs do equilbrio entre as presses hidrosttica vascular e osmtica. O facto de ser carregada negativamente de extrema importncia, pois evita que seja filtrada a nvel dos glomrulos de Malpighi, cuja membrana basal tambm carregada negativamente. Possui uma parte apolar, a qual permite a ligao de molculas como cidos gordos de cadeia longa, bilirrubina, frmacos, hormonas esterides, vitaminas, e ainda ies como Ca2+ e Mg2+, actuando como transportador destes compostos pelo sangue. As globulinas abrangem uma vasta gama de protenas globulares. Podem ser divididas em quatro classes: 1, 2, e . As globulinas 1, 2 e esto envolvidas no transporte de lpidos, hormonas, vitaminas e ies metlicos. O grupo consiste nas imunoglobulinas, molculas centrais dos mecanismos de aco do sistema imunitrio (incluem os vrios tipos de anticorpos e os receptores de membrana dos linfcitos).

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 Classe 1: Protenas Antitripsina Antiquimotripsina HDL Protrombina Transcortina Glicoprotena cida Globulina de ligao da tiroxina Funo Inibio da tripsina e outras proteases Inibio da quimotripsina Transporte de lpidos Precursor da trombina Transporte de cortisol, progesterona e corticosterona Transporte de progesterona Transporte de iodotironinas

Classe 2: Protenas Ceruloplasmina Antitrombina III Haptoglobina Funo Transporte de ies cobre Inibio da coagulao Ligao da hemoglobina, diminuindo a sua actividade oxidativa para posterior degradao no sistema reticuloendotelial Ciso de steres de colina Precursor da plasmina fundamental na degradao de protenas plasmticas Ligao de proteases e transporte de ies zinco Transporte de vitamina A

Colinesterase Plasminognio Macroglobulina Protena de ligao do retinol

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 Classe : Protenas Funo LDL Transporte de lpidos Transferrina Transporte de ies de ferro Globulina de ligao de hormonas Transporte de testosterona e estradiol sexuais Transcobalamina Transporte de vitamina B12 Protena C-reactiva Activao do sistema complemento

Classe : Protenas IgG IgA IgM IgD IgE

Funo Imunidade mediada por anticorpos Preveno da infeco de mucosas Imunidade mediada por clulas B Receptores membrares das clulas B Resposta alrgica

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As lipoprotenas presentes no sangue so o meio de transporte para os lpidos que no so transportados dissolvidos no plasma nem ligados albumina. As lipoprotenas so agregados esfricos ou discides de lpidos e apoprotenas. Consistem num ncleo de molculas apolares envolto numa monocamada lipdica de molculas anfipticas. A sua classificao baseia-se na sua densidade: quanto maior a quantidade de lpidos apolares no seu ncleo, menor a sua densidade. Existem 5 tipos de lipoprotenas (por densidade crescente): quilomicra, VLDL, IDL, LDL, HDL. A quantidade de apoprotenas aumenta com a densidade (maior nas HDL), e tm a funo de marcadores superficiais. Os quilomicra transportam sobretudo triacilgliceris (da a sua baixa densidade) do intestino delgado para os tecidos; as VLDL, IDL e LDL (so formadas como VLDL, adquirindo gradualmente densidade transformando-se em IDL e depois LDL) so especializadas no transporte de colesterol, fosfolpidos e triacilgliceris (em menor quantidade que os quilomicra) de uns tecidos para outros; por ltimo as HDL so responsveis pela mobilizao do excesso de colesterol dos tecidos para o fgado, onde armazenado. O fibrinognio uma glicoprotena sintetizada nos hepatcitos e nos megacaricitos (clulas da medula ssea responsveis pela produo de plaquetas sanguneas); solvel em gua, e consiste na forma precursora da fibrina (insolvel), responsvel pela formao de cogulos sanguneos. A protena trombina responsvel pela converso do fibrinognio em fibrina, em situao de ruptura do vaso sanguneo.

Metabolismo do Ferro
O ferro um mineral indispensvel ao organismo, visto ser o constitunte central dos grupos heme, permitindo o transporte de oxignio, e de citocromos, que intervm em reaces de oxidao-reduo. ainda constitunte de muitas enzimas, ou actua como cofactor destas. O metabolismo do ferro mais importante nas mulheres do que nos homens, devido menstruao, lactao e gestao. Cerca de 20 mL de eritrcitos so catabolizados por dia, o que resulta em 25mg de ferro. Porm, o sistema reticuloendotelial capaz de reciclar a sua maioria para formar novos glbulos vermelhos. No existe mecanismo fisiolgico para a excreo do ferro, di a extrema importncia da regulao da absoro para controlo das quantidades de ferro no organismo. A nica excreo feita (e mesmo assim, quase insignificante) atravs da sudao, escamao de pele e menstruao.

Transferrina
A transferrina uma glicoprotena do plasma sintetizada pelo fgado,que tem como funo o transporte do ferro para os locais onde este necessrio. Quando no est ligado a esta molcula, o ferro, por ser tanto receptor como dador de electres (muito reactivo), tem tendncia a transformar o perxido de hidrognio em radicais livres (elementos altamente prejudiciais vida celular). A esta molcula podem ligar-se dois ies frricos (Fe3+). A sua concentrao no plasma de 300mg/dL. Normalmente, encontra-se a um tero da saturao mxima. A capacidade total de ligao do ferro do plasma de 300 g/dL. Existem, na superfcie de muitas clulas, receptores (TfR) sensveis transferrina. Quando existem formao do complexo transferrina-TfR, a transferrina passa para dentro da clula por endocitose mediada por receptor. O pH cido existente no lisossoma, ir promover a dissociao do ferro. Este vai para o citoplasma atravs de um Transportador de Metais Divalentes, o DMT1, e a apotransferrina retorna membrana plasmtica, dissocia-se do receptor, reentra no plasma e liga-se a outro io de ferro.

Absoro do ferro a nvel do intestino delgado

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Diariamente, o Homem ingere cerca de 10 a 20 mg de ferro. Porm, somente 1 a 2mg absorvido no intestino, mais concretamente, no duodeno proximal e, em menor quantidade, no jejuno superior. A absoro ao nvel dos entercitos pode ser na forma de ies ou grupos heme. Na superfcie dos entercitos, existe uma enzima, a ferriredutase (por vezes a vitamina C tambm pode adquirir esta funo), que catalisa a reaco: Com a ajuda de um Transportador de Metais Divalentes (DMT1), o io ferro passa para dentro do eritrcito. A, ou se liga ferritina ou transferido atravs da membrana basolateral do entercito para o plasma. Esta passagem permitida por uma ferroportina, uma protena reguladora (IREG1), que interage com a Hefastina (esta contm cobre e permite a reaco inversa da ferriredutase). O io frrico vai posteriormente ser transportado pela tranferrina. Quando o ferro extracelular se encontra associado a um grupo heme, este grupo passa para dentro da clula atravs de uma Transportadora de Heme e, dentro do entercito, a enzima heme oxidase remove-lhe o io ferroso. Quando j foi ingerido suficiente ferro, o entercito bloqueia a absoro do mesmo (mecanismo de controlo da absoro). Este acontecimento tambm pode surgir em resposta necessidade ou no de ferro para realizar a eritropoiese.
Fe 3+ Fe 2 +

Ferritina
Uma molcula de ferritina capaz de armazenar entre 4000 e 4500 ies de ferro. E encontra-se no citoplasma Em mdia, armazena cerca de 23% do ferro corporal (a grande maioria encontra-se ligada a grupos heme). Excepto em situaes patolgicas, existem em pequena quantidade no plasma. A Hemossiderina - ferritina parcialmente degradada ainda ligada a ies de ferro tambm pode estar presente; a sua concentrao aumenta nos tecidos em situaes patolgicas.

Patologias associadas
Anemia por dfice de ferro Pode ser devida a: hbitos alimentares pobres, perda, m absoro ou utilizao indevida de ferro. Hemocromatose Doena autossmica recessiva Existe um excesso de ferro nos tecidos (acima de 15g quando o normal entre 2,5 e 3,5) A concentrao de ferritina muito elevada, em especial no fgado e bao. O ferro em excesso comea a atacar os organelos celulares, nomeadamente as mitocndrias, produzindo danos que podem levar a dano e mesmo morte celular. A quantidade de hemosiderina aumenta nos tecidos. Hemocromatose secundria: pode ocorrer aps transfuses sanguneas ou consumo excessivo de ferro.

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Imunoglobulinas
So glicoprotenas que conferem imunidade humoral ao ser humano. Tambm chamadas de Anticorpos, representam 15-20% das protenas plasmticas. As Imunoglobulinas so sntetizadas e excretadas por clulas plasmticas, derivadas de linfocitos B, no sistema retculoendotelial. Estrutura:

So molculas simtricas, formadas por 4 cadeias polipeptdicas: 2 leves (L) e 2 pesadas (H). Tem uma regio constante, e uma regio varivel (sequncia varivel de aminocidos) que o local de ligao do antignio. As 4 pontes dissulfureto ajudam a manter a estrutura quaternria, enquanto que as outras ligaes, intracadeias (de Cl2 a Cl4 e de Cl1 a VL), mantm a estrutura terciria das cadeias. Formando uma protena globular em forma de Y. Na parte constante, a regio Cl2 delimitada por duas pontes dissulfureto chamada de Regio Hinge, que permite a mobilidade dos braos, sendo sensvel protelise pela pepsina e papana;

H cinco classes de imunoglobulinas com funo de anticorpo: IgM a primeira imunoglobulina a ser expressa na membrana do linfcito B durante o seu desenvolvimento. Na membrana das clulas B, a IgM est na forma monomrica e no plasma sanguneo apresenta-se como pentmero. o primeiro anticorpo a ser produzido numa resposta imunitria primria. IgA a imunoglobulina predominante nas secrees mucosserosas (saliva, nasais, lgrimas, leite, etc.). O principal papel da IgA proteger o organismo da invaso viral ou bacteriana. Mais de 80% aparece sobre a forma monomrica no sangue e apresenta forma dimrica nas restantes secrees. IgG a imunoglobulina mais abundante no plasma (70%-75%) e est distribuda uniformemente entre os espaos intra e extravasculares (possui mobilidade atravs das 67

paredes dos vasos capilares). Sendo a mais importante da resposta imunitria secundria, a unica com capacidade de atravessar a barreira placentria, conferindo um alto grau de imunidade passiva ao feto e recm-nascido. IgE encontrada nas membranas superficiais dos mastcitos e basfilos em todos os indivduos. Esta classe de imunoglobulinas sensibiliza as clulas nas superfcies das mucosas conjuntiva, nasal e brnquica. Responsvel pelas manifestaes fisiolgicas da alergia, nesta situao aumenta a sua frequncia no plasma. IgD tendo funo desconhecida encontra-se em menos de 1% no plasma. Presente na superfcie de quase todas as clulas B maduras.

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3.6- Hemostase, hemoglobina e transporte de gases pelo sangue

Protenas da Hemostase
O termo hemostase est relacionado com a estase do sangue, isto , com a manuteno do mesmo em circulao, tanto pela preveno da extravaso perda de sangue, como pelo impedimento da formao de trombos/cogulos indesejados. De facto, sempre que ocorre a ruptura de um vaso, com o objectivo de atingir a hemostase, recorre-se a quatro mecanismos: constrio vascular, formao de um rolho de plaquetas, formao de um cogulo sanguneo e, por ltimo, o crescimento de tecido fibroso (que pode no ser necessrio). O processo de coagulao consiste numa srie de reaces qumicas que culminam na formao da dita rede de fibrina. Para alm das plaquetas, os factores de coagulao mais importantes podem designar-se atravs da numerao romana, como factores I a XIII (no existe o VI), que se iro activar mutuamente (passando a ter um a agregado ao nome neste caso), numa cascata de reaces (ver tabela 1). Note-se que o nmero associado a cada factor no est relacionado com a ordem de actuao dos mesmos, mas sim apenas pela ordem por que foram descobertos. A coagulao d-se em trs fases (ver esquema): 1. Formao do Activador da Protrombina pode dar-se pela via extrnseca ou pela via intrnseca; 2. A protrombina activada em trombina; 3. A trombina, por sua vez, converte o fibrinognio solvel (outra protena plasmtica formada no fgado) em fibrina insolvel, que formar a parte mais exterior do cogulo. Tabela 1 - Sistema numrico de nomenclatura dos factores coagulao Factor Nome Comum I Fibrinognio II III IV V VII VIII IX Protrombina Factor Tissular (TF) Ca2+ Pro-acelerina Pro-convertina Globulina anti-hemoflica (AHG) Componente Tromboplastina do Plasma 69 de

(PTC) X XI Factor Stuart-Prower Antecedente da Tromboplastina do Plasma (PTA) Factor Hageman Factor Estabilizador da Fibrina (FSF)

XII XIII

H duas vias iniciais para a formao do cogulo sanguneo. Na via intrnseca, mais lenta e complexa, o contacto do sangue com as fibras de colagnio afectadas, em conjunto com as plaquetas activadas, que activa os factores de coagulao. A via comea com a fase de contacto, na qual a precalicrena (PK), o cininognio (HK) e os factores XII e XI so expostos a uma superfcie activante carregada negativamente. O factor XII activado em XIIa por protlise pela calicrena, e, por sua vez, induz a transformao de precalicrena em calicrena, num processo de activao recproca. Por outro lado, o factor XIIa activa o factor XI, com a libertao de bradicinina (um nonapptido de forte poder vasodilatador), a partir do cininognio. Na presena de Ca2+, o factor XIa activa o factor IX numa serina-protease que, por sua vez, cliva uma ligao Arg-Ile no factor X, activando-o numa serina-protease de dupla cadeia, Xa. Para esta ltima reaco, formado o complexo tenase na superfcie das plaquetas activadas, que tm na sua superfcie externa os fosfolpidos (PL) carregados negativamente, fosfatidilserina e fosfatidilinositol (normalmente na superfcie plasmtica interna). Note-se que, em todas as reaces envolvendo zimognios que contenham -carboxiglutamato, os terminais amina servem como locais de ligao com muita afinidade para o Ca 2+. O factor VIII, uma glicoprotena, um cofactor que funciona como um receptor na superfcie das plaquetas dos factores IXa e X. Este activado pela trombina em VIIIa que, por sua vez, inactivado pela degradao da trombina. A via extrnseca, mais rpida e directa, tem este nome porque so as clulas subendoteliais afectadas pela ruptura que libertam a protena TF (factor III), para a corrente sangunea. Com a ajuda de factores de coagulao e de Ca2+ (factor IV), essenciais para todo o processo, a TF convertida em protombinase. A via comea ento com a interaco entre o TF e o factor VII, produzido no fgado, que activado no processo em VIIa. O TF actua como um cofactor para o factor VIIa (formando o complexo factor tissular), melhorando a actividade enzimtica deste, de activao do factor X, por clivagem da ligao Arg-Ile (anloga aco do complexo tenase na via intrnseca). A activao do factor X um elo de ligao importante entre as duas vias de formao do activador da protrombina. Para alm deste, temos que a complexao do factor tissular com o factor VIIa vai tambm activar o factor IX na via intrnseca, sendo, por isso, considerado o passo-chave da coagulao em seres vivos. O TFPI (tissue factor pathway inhibitor) um inibidor da coagulao muito importante. Trata-se de uma protena que circula no sangue associada a lipoprotenas e que inibe directamente o factor Xa por ligao enzima no local activo. O complexo factor Xa-TFPI, por sua vez, inibe o complexo factor VIIa-TF. Os eventos que se do abaixo do factor Xa so designados via final comum. Tanto as vias extrnseca e intrnseca, como a via final comum envolvem uma srie de protenas diferentes, que podem ser classificadas em cinco tipos (ver tabela 2): (1) zimognios de proteases serina-dependentes, que se tornam activas durante o processo; (2) cofactores; (3) fibrinognio; (4) transglutaminase, que estabiliza a rede de fibrinas; e (5) protenas reguladoras e outras. 70

Tabela 2 Funes das protenas envolvidas na coagulao do sangue Zimognios de Serina Proteases Factor XII Liga-se parede endotelial da superfcie afectada, carregada negativamente; activado pelo cininognio e calicrena (elevados pesos moleculares) Factor XI Factor IX Factor VII Factor X Factor II Activado pelo factor XIIa Activado pelo factor XIa na presena de Ca2+ Trombina activada na presena de Ca2+ Activado na superfcie das plaquetas activadas pelo complexo tenase (Ca2+, factores VIIIa e IXa) e pelo factor VIIa na presena de TF e Ca2+ Activado na superfcie das plaquetas activadas pelo activador da protrombina

Nota: os factores II, VII, IX e X so zimognios que contm -carboxiglutamato Cofactores Factor VIII Factor V TF (Factor III) Fibrinognio Factor I Activado pela trombina; o factor VIIIa o cofactor na activao do factor X pelo factor IXa Activado pela trombina; o factor Va o cofactor na activao da protrombina pelo factor Xa Uma glicoprotena existente na superfcie endotelial das clulas afectadas, que funciona como cofactor para o factor VIIa Clivado pela trombina para formar o cogulo sanguneo

Transglutaminase Dependente do Tiol Factor XIII Activado pela trombina na presena de Ca2+; estabiliza as fibras de fibrina por criao de ligaes cruzadas Protenas Reguladoras e Outras Protena C Activada em protena Ca pela ligao da trombina trombomodulina; degrada os factores VIIIa e Va Protena S Trombomodulina Actua como cofactor da protena C; ambas possuem resduos de -carboxiglutamato Encontra-se na superfcie das clulas endoteliais; agrega-se trombina, que por sua vez activa a protena C

O activador da protrombina, tambm designado complexo protrombinase, constitudo por fosfolpidos carregados negativamente, protrombina, clcio e factores Va e Xa. O activador da protrombina tem a funo que o seu nome indica, convertendo a protrombina em trombina (que tem uma actividade protoltica importantssima), na superfcie das plaquetas activadas. o contacto das plaquetas com as fibras de colagnio que desencadeia uma srie de processos bioqumicos que activam a scramblase, responsvel pelo transporte dos ditos fosfolpidos, que vo permitir a formao do activador da protrombina. A protrombina (factor II) uma protena plasmtica, formada continuamente no fgado com o auxlio da vitamina K. Como se trata de uma protena instvel, divide-se facilmente em compostos mais pequenos, como o caso da trombina. 71

O fibrinognio (factor I) uma glicoprotena plasmtica constituda por trs cadeias polipeptdicas diferentes (A,B)2, todas sintetizadas no fgado, ligadas covalentemente por pontes dissulfito. Os trs genes estruturais responsveis encontram-se no mesmo cromossoma, sendo a sua aco regulada coordenadamente nos humanos. As pores A e B das cadeias A e B (respectivamente fibrinopptidos A, FPA, e fibrinopptidos B, FPB) possuem no terminal amina carga negativa, que se deve presena de resduos de aspartato e glutamato, assim como de tirosina O-sulfato na FPB. esta carga negativa que vai contribuir para a solubilidade do fibrinognio no plasma, assim como para prevenir a agregao de vrias molculas de fibrinognio, atravs de repulso electroesttica. A trombina formada actua ento sobre o fibrinognio (factor I), provocando a hidrlise, por molcula, de quatro ligaes Arg-Gly entre os fibrinopptidos e as pores e (das cadeias A e B) do fibrinognio, originando monmeros de fibrina. A remoo dos fibrinopptidos torna expostos locais de ligao, o que induz a polimerizao de vrios destes monmeros, formando-se fibras de fibrina longas. A fibrina uma protena bastante flexvel, de cor esbranquiada, insolvel, constituinte essencial do cogulo sanguneo. Nos estados iniciais da polimerizao, os monmeros apenas se encontram ligados por ligaes covalentes de hidrognio, pouco fortes. ento necessria a aco do factor estabilizador da fibrina (factor XIII), uma transglutaminase, presente em pequena quantidade nas globulinas plasmticas e tambm libertado pelas plaquetas. A trombina tem como funo adicional a activao deste factor, que, ento, favorece a formao de cada vez mais ligaes covalentes, assim como de ligaes cruzadas entre os vrios monmeros, tornando a rede de fibrina numa estrutura tridimensional muito mais forte e compactada, o que provoca uma reteno por aglutinao dos elementos figurados do sangue (eritrcitos, plaquetas, leuccitos granulares e agranulares). A concentrao da trombina formada no processo de hemostase tem de ser cuidadosamente controlada, por duas formas, de forma a evitar excessiva formao de fibrina e activao de plaquetas. Por um lado, a trombina circula no sangue sob a sua forma precursora (inactiva), protrombina, sendo que a cascata de reaces que precede a activao deste zimognio possui um delicado equilbrio activao/inibio. Por outro lado, temos a inactivao da trombina em si, que conseguida atravs de inibidores presentes na circulao, sendo o mais importante a protrombina III, uma -globulina (responsvel por cerca de 75% do controlo). Para alm deste, actuam tambm a 2-macroglobulina, a heparina cofactor II e a 1-antitripsina. Durante a formao de um cogulo, 85-90% da trombina formada adsorvida pelas fibras de fibrina ou combinada com a antitrombina III, prevenindo a extenso do cogulo em demasia, pelo bloqueamento do efeito da trombina sobre o fibrinognio. A antitrombina III inibe os efeitos dos factores IXa, Xa, XIa, XIIa e VIIa (complexado com o TF) na via intrnseca da coagulao. A aco desta protena pode ter uma eficcia ainda muito mais elevada pela sua combinao com a heparina, um anticoagulante importantssimo, que se vai ligar trombina III num local catinico, originando uma alterao conformacional que promove a ligao desta trombina e a outras substncias. Assim, a trombina pra de estimular a fragmentao do fibrinognio, deixando de se formar os monmeros de fibrina e, em ltimo caso, o cogulo. Existem ainda outros factores que contribuem para o sistema anticoagulante, tais como: 1. O facto da parede endotelial ter uma superfcie lisa, que previne a activao das plaquetas; 2. Os glicoclices do endotlio, superfcie externa da membrana plasmtica, que repelem as plaquetas e os factores coagulantes; 3. A trombomodulina, uma protena ligada membrana endotelial, que adere trombina, tornando o processo de coagulao mais lento e activando a protena C. Esta, combinando-se com a protena S, forma a APC ( activated protein C), degrada os factores Va e VIIIa, limitando a sua aco coagulante. 72

Dada ento a aco protectora dos anticoagulantes, tanto a fibrina no utilizada como a pertencente ao cogulo (uma vez cumprida a sua funo), so lisadas, atravs do mecanismo fibrinoltico. Sendo as enzimas activadoras deste mecanismo as serina-proteases, os inibidores do mesmo so, naturalmente, os serpin (serine-proteinase inhibitor), que se acoplam enzima alvo. O principal agente da aco fibrinoltica a plasmina, serina-protease de dupla cadeia, enzima principalmente responsvel pela degradao da fibrina e do fibrinognio. Esta tem a sua origem no plasminognio, onde actuam activadores de dois tipos: alteplase (t-PA) e urocinase (u-PA). A funo comum destes clivar a ligao Arg-Val, produzindo a plasmina A alteplase, assim como o seu inibidor, PAI, so sintetizados e secretados pelas clulas endoteliais, cujas superfcies tm afinidade tanto para o t-PA como para o plasminognio, que activado a plasmina, fixada na superfcie da fibrina (fase slida). Note-se que a activao do plasminognio cerca de cem vezes superior na fase slida, relativamente lquida (sangue circundante). A alteplase libertada na circulao em casos de formao de feridas ou sob stress, no exercendo qualquer actividade se no se encontrar ligada fibrina. Assim, a alteplase est relacionada com a fibrinlise, processo responsvel pela dissoluo de cogulos. A urocinase, de origem urinria, responsvel por fenmenos de migrao celular e remodelao tecidular (degradao de matriz extracelular). A prourocinase o precursor da urocinase, que sintetizada por moncitos, macrfagos, fibroblastos e clulas epiteliais.

Transporte de Oxignio pelo Sangue

A circulao sangunea responsvel pelo fornecimento de oxignio a todos os tecidos do corpo. No pulmo o oxignio difunde-se dos alvolos para o sangue dos capilares. Este depois bombeado do corao para os tecidos. O oxignio maioritariamente (97%) transportado em associao com a hemoglobina presente nos eritrcitos segundo um mecanismo j estudado anteriormente. O restante transportado dissolvido no plasma sanguneo. apenas atravs desta associao que se consegue fornecer todo o oxignio necessrio ao bom funcionamento dos tecidos. A difuso deste gs ocorre quando h diferenas de presso parcial de oxignio (Po 2) entre duas zonas. Nos alvolos Po2 de 104 mm Hg enquanto nos capilares que chegam com sangue venoso de 40 mm Hg. O sangue que chega aos tecidos tem uma Po 2 de 95 mm Hg enquanto os tecidos apresentam uma Po2 varivel, em mdia de 23 mm Hg. O oxignio liberta-se da hemoglobina e difunde-se para os tecidos, saindo o sangue venoso com uma Po2 de 40 mm Hg, igual Po2 do interstcio. Por 100 ml de sangue temos 15g de hemoglobina e cada grama de hemoglobina consegue-se ligar a 1.34 ml de oxignio. Assim, temos que 100 ml de sangue conseguem transportar cerca de 20 ml de oxignio, se a hemoglobina estiver 100% saturada. A capacidade de associao entre o oxignio e a hemoglobina pode ser quantificada. O oxignio liga-se reversivelmente ao grupo heme da hemoglobina. Esta ligao favorecida quando Po2 alta e quebra-se quando Po2 baixa. A curva de dissociao oxi-hemoglobina mostra o grau de saturao da hemoglobina pelo oxignio. A uma Po2 de 95 mm Hg (ao sair do pulmo) a hemoglobina est 97% saturada com oxignio enquanto aos 40 mm Hg (sangue venoso) tem um grau de saturao de apenas 75%. Podemos ainda considerar o valor P50 como uma nova medida de afinidade relativa entre o oxignio e a hemoglobina. O P50 o valor de Po2 para o qual metade da hemoglobina est saturada de oxignio. A curva de dissociao tem uma forma sigmide. Isto deve-se estrutura tetramrica da hemoglobina, que permite que ela transite entre uma conformao de 73

estado T (de pouca afinidade) para uma de estado R (de grande afinidade) medida que o oxignio se vai ligando. A curva de dissociao oxi-hemoglobina afectada por diversos factores, nomeadamente pH, [CO2], temperatura e [BPG] (2,3-bifosfoglicerato). A concentrao de protes, de dixido de carbono e de BPG afectam na medida em que estes so efectores que promovem a libertao de oxignio, favorecendo a forma desoxigenada da hemoglobina. Apesar de no ocuparem o stio de ligao do oxignio hemoglobina, a sua ligao implica mudanas conformacionais na hemoglobina que vo afectar a capacidade de ligao do oxignio. Uma vez que estes efectores alostricos se ligam a stios especficos da hemoglobina os seus efeitos so cumulativos. A concentrao de CO2 e o valor de pH na hemoglobina esto directamente relacionados, como veremos mais frente. Quando o sangue fica ligeiramente mais cido, diminuindo do valor normal de pH de 7.4 para 7.2 verifica-se um desvio da curva de cerca de 15% para a direita. Um aumento de pH desvia a curva para a esquerda. Perto dos tecidos (por estarem metabolicamente activos) a concentrao de dixido de carbono e de protes elevada. Quando o sangue chega aos capilares favorecida a ligao destes efectores e, como tal, a afinidade da hemoglobina para o oxignio menor (P50 diminui), favorecendo a sua libertao. O resultado geral que o oxignio tem maior facilidade em se libertar da hemoglobina para o plasma sanguneo e da para a mioglobina presente nos tecidos. Ao regressar aos pulmes a concentrao de protes e a presso parcial de Co 2 baixa, o que favorece a sua libertao da hemoglobina, aumentando a afinidade desta para o oxignio. Este efeito conhecido como o efeito de Bohr, e pode ser explicado pela seguinte reaco: HHb+ + O2 HbO2 + H+ , onde HHb+ uma forma protonizada da hemoglobina. Um dos grandes contributos para o efeito de Bohr provocado pelo His 146 da subunidade . Este resduo, quando ligado ao H + ajuda a estabilizar a hemoglobina no estado T, diminuindo portanto a sua afinidade para o oxignio e, consequentemente, o valor de P 50. Assim, podemos dizer que medida que a concentrao de protes ligados hemoglobina aumenta verifica-se uma transio para o estado T, que favorece a libertao de oxignio. A protonizao de outros resduos tem um efeito semelhante. O BPG conhecido por diminuir a afinidade da hemoglobina para o oxignio, desviando a curva de dissociao oxi-hemoglobina para a direita. Tal como o dixido de carbono e o H+, a ligao do oxignio e do BPG hemoglobina est inversamente relacionada, e pode ser explicado pela seguinte reaco: HbBPG + O2 HbO2 + BPG O BPG uma pequena molcula sintetizada nos eritrcitos, que se liga a uma pequena cavidade da hemoglobina desoxigenada (estado T). Na hemoglobina oxigenada (estado R) esta cavidade demasiado pequena para que a BPG se ligue. Quando a BPG est ligada hemoglobina desoxigenada estabiliza a sua conformao T, diminuindo a sua capacidade de se ligar ao oxignio e facilitando a libertao deste para os tecidos. Em situaes de hipoxia prolongadas (por exemplo a altitudes elevadas, onde Po2 baixa) a concentrao de BPG aumenta. Este ajuste tem um efeito relativamente pequeno na ligao do oxignio hemoglobina nos pulmes, mas nos tecidos libertado muito mais oxignio. Por isso que atletas que treinem nestas condies conseguem aumentar temporariamente a sua capacidade aerbica. Um aumento da temperatura corporal tambm se traduz num desvio da curva de dissociao para a direita, diminuindo a afinidade da hemoglobina para o oxignio e favorecendo a libertao deste para os tecidos. Isto muito importante, por exemplo, em caso de exerccio fsico, onde a temperatura corporal aumenta e necessrio um maior fornecimento de oxignio.

Transporte de Dixido de Carbono pelo Sangue

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Verifica-se que, em condies normais de repouso, 4ml de CO 2 so transportados para os pulmes por cada 100ml de sangue, transporte esse que ocorre com o referido gs sob trs formas: dissolvido (7%), como bicarbonato atravs de hidratao (70%) e em combinao com a hemoglobina (23%). Relativamente ao transporte de CO2 dissolvido no plasma, em condies normais apenas 0.3 ml desse gs so transportados dessa forma por cada 100 ml de sangue. Para que ocorra o transporte de CO2 sob a forma de io bicarbonato, este sofre uma reaco de hidratao em que o CO2 dissolvido no sangue reage com a gua, por aco da anidrase carbnica, que existe e actua no interior dos glbulos vermelhos, formando cido carbnico:

O cido carbnico formado imediatamente dissociado em hidrognio e ies bicarbonato: A anidrase carbnica acelera a reaco do CO2 com a gua cerca de 5000 vezes. Assim, esta reaco atinge o equilbrio em meras fraces de segundo. Esta reaco d-se ainda antes de o sangue abandonar os capilares junto ao tecido onde o CO 2 foi recolhido. Os ies H+ resultantes da reaco combinam-se com a hemoglobina. Os ies bicarbonato difundem-se dos glbulos vermelhos para o plasma. De forma a manter a electroneutralidade, ies cloreto so transferidos para o interior dos eritrcitos para ocuparem o lugar dos ies que sairam, o que requer a presena de uma protena transportadora. Esta a forma mais importante de transporte de CO 2 no sangue (verifica-se que por aco de um inibidor da anidrase carbnica, a acetazolamida, a taxa de transporte de CO 2 dos tecidos para os pulmes to baixa que a p CO2 nos tecidos passa dos normais 45mmHg para 80mmHg). Finalmente, o CO2 pode tambm ser transportado por combinao com a hemoglobina, reagindo com os radicais amina desta molcula, formando a carbamino-hemoglobina (carbamino Hb), e protenas plasmticas (a sua quantidade no plasma apenas um quarto da de hemoglobina, no sendo o transporte efectuado desta forma muito significativo). A formao da carbamino-hemoglobina uma reaco reversvel com formao de uma ligao fraca que facilmente destruda para que o CO2 se liberte para os alvolos pulmonares, onde a pCO2 menor que nos capilares. H um efeito caracterstico no transporte de CO 2 no sangue e que ocorre principalmente nos pulmes, o efeito de Haldane, onde se verifica que a ligao de O2 hemoglobina causa a menor afinidade desta para com as molculas de CO2 (a hemoglobina torna-se mais cida). Verifica-se assim uma dissociao do CO2 da hemoglobina e a libertao do excesso de ies H+ da hemoglobina (os produtos libertados vo levar ao processo inverso da formao do cido carbnico, obtendo-se gua e CO2). Verifica-se tambm o efeito de Bohr, segundo o qual as altas concentraes de H+ e de CO2 no sangue causam uma diminuio da afinidade da hemoglobina para com o O 2 (o CO2 liga-se a hemoglobina impedindo que o O2 o faa). Em tecidos em rpida metabolizao, tais como o msculo em contraco, muito CO2 e cido so produzidos. A presena de maiores nveis de CO2 e H+ nos capilares de tal tecido metabolicamente activo promove a libertao de O2 da oxi-hemoglobina. Este importante mecanismo para enfrentar a maior necessidade de oxignio nos tecidos metabolicamente activos foi descoberto por Christian Bohr, em 1904. Este efeito verifica-se maioritariamente junto dos tecidos. Os ies formados a quando do transporte, nomeadamente H+, levam a uma diminuio do valor do pH do sangue, em parte contrariada pela aco de tampes que diminuem [H +] (diminuio do pH de 7.41 para 7.37 quando o CO2 entra em circulao).

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3.7- MSCULO E CONTRACO MUSCULAR

A unidade de organizao histolgica do msculo esqueltico a fibra muscular, uma clula larga e cilndrica, multinucleada. Grupos de fibras musculares agrupam-se formando fascculos que, finalmente, se associam para formar os diferentes tipos de msculos. O interior da fibra muscular est ocupado maioritariamente por miofibrilhas de 1 a 2m de dimetro. Cada fibra pode conter, desde vrias centenas, at muitos milhares de miofibrilhas. Por sua vez, cada miofibrilha apresenta cerca de 1500 filamentos de miosina e 3000 de actina, dispostos lado a lado. Em cortes longitudinais pode ser observada a estriao transversal to caracterstica das miofibrilhas. Esta estriao devida presena de actina e miosina, as duas principais protenas contrcteis do msculo. A banda I apresenta-se mais clara porque a luz polarizada atravessa facilmente os finos filamentos de actina que a constituem. A banda A apresenta-se mais escura por ser composta por actina e espessos filamentos de miosina, o que dificulta a passagem da luz. O comprimento relativo das bandas varia consoante o msculo examinado se encontre em posio de repouso ou contraco. O comprimento da banda A permanece constante em todas as fases de contraco, mas a banda I maior na posio de repouso e menor no msculo contrado. No meio de cada banda I existe uma linha transversal escura - linha Z, que une miofibrilhas adjacentes. Os filamentos de actina esto ligados linha Z, estendendo-se para cada lado dessa membrana para interagirem com os filamentos de miosina. A unidade estrutural a que se referem todos os fenmenos morfolgicos do ciclo contrctil o sarcmero, que se define como sendo o segmento compreendido entre duas linhas Z consecutivas, incluindo uma banda A e a metade de duas bandas I contguas. Cada fibra muscular est revestida por uma membrana - sarcolema. Os ncleos da clula muscular estriada so numerosos e o seu nmero depende do comprimento da fibra. O sarcoplasma de uma fibra muscular pode definir-se como o contedo do sarcolema quando se excluem os ncleos. O retculo sarcoplasmtico (RS) um sistema contnuo de sarcotbulos limitados por membranas, que se estende por todo o sarcoplasma formando uma rede tubular de malha fina que envolve cada miofibrilha. Os tbulos longitudinais distribuem-se em intervalos regulares ao longo das miofibrilhas, confluindo em canais orientados transversalmente e de calibre maior - cisternas terminais. Pares paralelos de cisternas terminais distribuem-se transversalmente entre as miofibrilhas ligando-se a um elemento intermdio de menor dimetro - tbulo T. Os tbulos terminais longitudinais e as cisternas terminais do RS esto intimamente relacionados com a libertao dos ies Ca2+. As diferenas observadas nas fibras musculares so resultado da diversidade das protenas que as constituem. Os componentes contrcteis bsicos da fibra muscular so quatro protenas 76

agregadas em dois componentes multimoleculares, os filamentos grossos de miosina e os filamentos finos de actina, tropomiosina e troponina. Nenhuma protena por si s apresenta propriedades contrcteis. O filamento de miosina composto por cerca de 300 molculas de miosina. A molcula individual de miosina constituda por seis cadeias polipeptdicas, ou seja, por duas cadeias pesadas e quatro cadeias leves. Existem dez isoformas diferentes das cadeias pesadas de miosina. As isoformas tm actividade biolgica semelhantes, mas so constitudas por diferentes aminocidos. Para cada um dos tipos de cadeias leves de miosina tambm existem isoformas (lentas e rpidas). As duas cadeias pesadas formam uma dupla hlice, em que cada cadeia se apresenta com uma das extremidades enrolada, formando conjuntamente duas massas de protena globular, designadas por cabeas de miosina. Deste modo, existem duas cabeas livres, lado a lado, numa das extremidades da dupla hlice da molcula de miosina. As cabeas das molculas de miosina so ainda constitudas pelas quatro cadeias leves (duas por cabea), que ajudam no controlo da funo das cabeas durante o processo de contraco muscular. O local responsvel pela actividade enzimtica da molcula de miosina e pela afinidade com a actina so as cabeas. Por outro lado na cauda da molcula de miosina que se encontram os locais de afinidade desta para com as restantes molculas adjacentes de miosina. A cauda composta pela restante poro em dupla hlice das cadeias pesadas de miosina. Pelo agrupamento das caudas das molculas de miosina forma-se o corpo do filamento de miosina. As cabeas de miosina projectam se para o exterior deste filamento. Existe uma pequena parte da poro em dupla hlice de cada molcula de miosina que se afasta identicamente do corpo do filamento acompanhando a cabea e constituindo um brao que possibilita o afastamento das cabeas de miosina relativamente ao corpo do filamento. O brao e a cabea de miosina designam-se conjuntamente por ponte transversa (PT). Vrias centenas destas molculas de miosina encontram-se agrupadas em feixes, com as cabeas viradas numa direco ao longo de metade do filamento, e na direco oposta na outra metade, deixando uma regio mdia livre e isenta de projeces numa distncia de aproximadamente 0.2m. Assim, as cabeas de miosina projectam-se para fora na direco dos filamentos de actina e so os nicos elos de ligao, estruturais e mecnicos, entre os filamentos grossos e finos. O filamento de actina tambm um filamento complexo, composto por trs partes distintas: actina, tropomiosina e troponina. Existem vrias isoformas de tropomiosina e de todos os trs componentes da troponina, contudo conhece-se apenas uma forma de actina. A actina a principal componente deste filamento e as troponina e tropomiosina so conhecidas como protenas reguladoras. A parte central do filamento de actina uma molcula proteica constituda por uma dupla fita de actina F enrolada em hlice. Cada fita da dupla hlice de actina F composta de 77

molculas polimerizadas de actina G (monmeros). Existem cerca de 13 dessas molculas por cada volta, de cada fita, da hlice. A cada uma das molculas de actina G encontra-se fixa uma molcula de ADP, constituindo assim os locais activos dos filamentos de actina, com os quais interagem as pontes transversas dos filamentos de miosina para promoverem a contraco muscular. O filamento de actina contm tambm duas fitas adicionais de protena que so polmeros de molculas de tropomiosina. Pensa-se que cada fita de tropomiosina est fracamente ligada a uma de actina F. Assim, no estado de repouso, cobre os locais activos da actina impedindo a interaco actomiosnica e consequentemente a contraco muscular. Existe tambm um complexo de trs molculas proteicas globulares, denominado troponina. Uma dessas protenas globulares tem grande afinidade pela actina - troponina I, outra pela tropomiosina - troponina T, e a terceira pelos ies Ca 2+ - troponina C. Este complexo fixa a tropomiosina actina funcionando como um interruptor, "ligando" ou "desligando" o filamento de actina. A grande afinidade da troponina pelos ies Ca 2+ inicia o processo de contraco. Existem outras protenas adicionais que desempenham diversos papis na estrutura e funo musculares: titina, nebulina, -actinina, desmina e calcioneurina. A contraco muscular consiste, essencialmente, na ligao e deslizamento das cabeas de miosina sobre os filamentos de actina F. A ligao da actina miosina implica alteraes na conformao, que so muito importantes, sobretudo na cabea de miosina. Estas alteraes dependem do nucletido presente (ADP ou ATP). As alteraes conformacionais promovem o impulso de fora responsvel pelo movimento dos filamentos de actina em relao aos de miosina. A energia envolvida neste processo fornecida, em ltima instncia, pela hidrlise do ATP a ADP e Pi. O impulso de fora por si prprio ocorre como consequncia de alteraes na conformao da cabea de miosina, quando o ADP se desliga da mesma. Os principais eventos bioqumicos durante um ciclo de contraco e relaxamento muscular podem ser representados por cinco etapas. Na fase de relaxamento da contraco muscular, a cabea de miosina hidrolisa ATP a ADP e Pi. Estes compostos permanecem ligados. O complexo ADP-Pi-miosina resultante energtico e encontra-se por isso numa conformao de elevada energia. No incio desta fase o Ca 2+ sarcoplasmtico bombeado para o RS por ATPases. No interior deste o Ca 2+ liga-se a uma protena especfica calsequestrina. Desta ligao resulta uma diminuio da concentrao de Ca 2+ livre no RS associada a uma diminuio da energia necessria para a remoo destes ies do sarcoplasma para o RS.

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Quando o impulso nervoso que percorre o neurnio motor atinge a juno neuromuscular, h libertao de acetilcolina (ACH) para a fenda sinptica. Com efeito, a ACH liga-se a locais especficos (receptores nicotnicos) na membrana da clula muscular, induzindo uma alterao conformacional na superfcie dos canais inicos. Com a abertura destes canais apenas os ies de Na+ fluem e despolarizam a membrana da clula. Paralelamente, ocorre uma propagao desse potencial de aco, atravs do sistema T, para o interior da clula. Tal acontecimento provoca a libertao de ies Ca 2+ (armazenados nas cisternas terminais) para o sarcoplasma que contacta com as miofibrilhas. Estes ies libertados ligam-se ento a locais reguladores especficos nas troponinas C presentes nos filamentos de actina, de facto, a cada molcula de troponina C ligam-se quatro ies Ca 2+. Esta ligao do Ca2+ troponina provoca uma alterao conformacional no complexo troponinatropomiosina-actina, removendo a inibio mecnica que impedia a interaco entre a actina e a cabea da miosina. Portanto, quando a contraco do msculo estimulada a actina tornase acessvel e a cabea de miosina liga-se a esta. Forma-se ento o complexo actina-miosinaADP-Pi. A formao deste complexo promove a libertao de Pi, que inicia o impulso de fora. Segue-se a libertao de ADP. Associada a estes acontecimentos h uma alterao significativa na conformao da cabea de miosina relativamente cauda. A cabea de miosina puxa a actina cerca de 10nm na direco do centro do sarcmero. Estes passos constituem o impulso de fora. A miosina encontra-se agora num estado de baixa energia, incorporando o complexo actina-miosina. Posteriormente uma outra molcula de ATP liga-se cabea de miosina originando a formao do complexo actina-miosina-ATP. O complexo miosina-ATP tem pouca afinidade para com a actina, pelo que esta libertada do complexo inicial. Esta ltima etapa muito importante no processo de relaxamento pois dependente da ligao de uma molcula de ATP ao complexo actina-miosina. Comea ento um novo ciclo com a hidrlise de ATP, formando-se de novo a conformao de energia elevada. A hidrlise de ATP utilizada como ponto de regulao do ciclo descrito. As regies em dobradia (regies de flexibilidade da molcula) permitem a grande amplitude do movimento da cabea de miosina, bem como o contacto entre as cabeas de miosina e a actina. Se os nveis intracelulares de ATP diminurem (por exemplo aps morte), este no est disponvel para se ligar cabea de miosina e por isto a actina no se dissocia do complexo e consequentemente no h relaxamento. Esta a explicao para o rigor mortis. A contraco muscular depende da energia fornecida pelo ATP. A concentrao de ATP na fibra muscular apenas suficiente para manter a contraco por 1 a 2 segundos no mximo. Deste modo, para uma actividade muscular mais intensa necessrio sintetizar ATP. As principais fontes de produo de ATP so a fosfocreatina, glicognio e respirao celular. Existem pelo menos dois tipos distintos de fibras no msculo esqueltico, uma 79

predominantemente activa em condies aerbias (fibras vermelhas) e outra em condies anaerbias (fibras brancas). As fibras vermelhas (ricas em mioglobina) utilizam sobretudo a respirao celular distintamente das fibras brancas que utilizam a fermentao lctica. Ambas utilizam o ATP preexistente na fibras e as reservas de fosfocreatina. A fosfocreatina a fonte a partir da qual a sntese de ATP mais rpida. Esta contm ligaes fosfato de alta energia. A sua clivagem liberta energia que promove a fixao do io fosfato ao ADP, reconstituindo ATP. No entanto, a quantidade de fosfocreatina na fibra muscular muito pequena apenas 5 vezes maior que a de ATP pelo que a energia combinada do ATP armazenado com a fosfocreatina existente no msculo s capaz de promover uma contraco muscular mxima por apenas 5 a 8 segundos. A segunda fonte de energia que usada para reconstituir tanto o ATP como a fosfocreatina o glicognio previamente armazenado no sarcoplasma das clulas musculares. A libertao de glicose a partir de glicognio dependente de uma glicognio fosforilase muscular especfica, que pode ser activada por Ca2+, epinefrina e AMP. No sentido de gerar glicose-6-fosfato para a gliclise no msculo esqueltico, a glicognio fosforilase b deve ser activada em glicognio fosforilase, catalisada por uma fosforilase b cinase. O Ca 2+ promove a activao desta fosforilase b cinase tambm por fosforilao. Assim, o Ca2+ tanto inicia a contraco muscular como activa uma via para fornecer a energia necessria. O AMP, produzido pela degradao de ADP durante o exerccio muscular, pode tambm activar a glicognio fosforilase b, sem existir fosforilao. A epinefrina tambm activa a glicogenlise no msculo. A degradao do glicognio a piruvato e lactato, liberta energia que ser utilizada para converter o ADP em ATP. Este ATP ser usado directamente para energizar a contraco muscular ou para refazer as reservas de fosfocreatina. Por outro lado, a importncia do mecanismo da gliclise dupla: alm das reaces glicolticas poderem ocorrer na ausncia de oxignio (razo pela qual a contraco muscular pode ser mantida por muitos segundos mesmo quando no se dispe de oxignio), o ritmo de formao de ATP deste processo mais rpido que a formao de ATP quando os nutrientes celulares reagem com o oxignio. Contudo, acumulam-se muitos produtos terminais da gliclise nas clulas musculares de modo que a gliclise inibida, perdendo-se a capacidade de preservar a contraco muscular mxima aps cerca de 1 minuto. Segue-se a respirao celular (RC), na presena de oxignio, ou fermentao do lactato, na ausncia de oxignio. A RC ocorre na mitocndria e engloba uma srie de reaces envolvendo produo de ATP. As fibras musculares tm duas fontes de oxignio: (a) oxignio que difunde do sangue para as fibras; (b) oxignio libertado pela mioglobina no sarcoplasma. A mioglobina a nica protena que se liga ao oxignio nas fibras musculares. Na presena de oxignio, o piruvato entra na mitocndria onde completamente oxidado em reaces que originam ATP, CO 2 e H2O. A RC fornece a maioria 80

do ATP necessrio nas actividades mais intensas. Quando os nveis de oxignio se encontram baixos como resultado de uma intensa actividade muscular, a maior parte do piruvato produzido na gliclise convertido em lactato, num processo designado por fermentao lctica. Assim a RC envolve maior produo de ATP, cerca de 36 ATP por cada molcula de glicose relativamente gliclise anaerbia. A contraco prolongada e vigorosa de um msculo leva ao estado conhecido de fadiga muscular. Um factor importante da fadiga muscular a reduo da libertao de ies Ca2+ do retculo sarcoplasmtico, resultando num declnio de Ca 2+ no sarcoplasma. Outros factores que contribuem para a fadiga muscular incluem o esgotamento da fosfocreatina, escasso oxignio, insuficincia de glicognio e de outros nutrientes, acumulao de lactato e de ADP, e falha nos impulsos nervosos. Uma vez que o aumento dos nveis de lactato promovem uma diminuio no pH nos fluidos do corpo, a fadiga muscular pode ser ver vista como um mecanismo homeosttico que impede que o pH caia para valores mais baixos que o aceitvel. Do ponto de vista anatmico, o msculo liso, distinto do esqueltico por no apresentar estrias. A actina e a miosina esto presentes e deslizam uma sobre a outra para produzir a contraco. Em vez das linhas Z, existem corpos densos no citoplasma ligados membrana celular e aos filamentos de actina (ligados pela -actinina). O msculo liso contm, identicamente ao esqueltico, tropomiosina. Contudo a troponina est ausente. Em geral, as fibras do msculo liso tm poucas mitocndrias e por isso dependem muito da gliclise para responder s suas necessidades metablicas. O Ca2+ est envolvido no incio da contraco do msculo liso, tal como no esqueltico. Uma vez que os retculos endoplasmticos so pouco desenvolvidos o aumento da concentrao intracelular de Ca2+ que inicia a contraco deve-se principalmente entrada do Ca2+ proveniente do lquido extracelular pelos canais de Ca2+ regulados por voltagem. Alm disso, a miosina do msculo liso precisa de ser fosforilada para que possa existir activao da ATPase da cabea de miosina. No msculo esqueltico tambm existe fosforilao e desfosforilao da miosina, contudo a fosforilao no necessria para a activao da ATPase. No msculo liso, o Ca 2+ liga-se calmodulina. A calmodulina contm 148 resduos de aminocidos e tem quatro domnios de ligao ao Ca 2+. Quando a calmodulina se liga ao Ca2+ adquire a capacidade de activar cinco cinases diferentes. Uma destas a cinase da cadeia leve de miosina. As restantes so a fosforilase cinase, as Ca2+/calmodulina cinases I, II e III. Uma outra protena tambm activada pela calmodulina a calcineurina. Esta fosfatase inactiva os canais de Ca2+ desfosforilando-os. No msculo liso, da ligao da calmodulina ao Ca2+, resulta um complexo que activa a cinase da cadeia leve de miosina dependente da calmodulina. Esta enzima cataliza a 81

fosforilao do resduo de serina na posio 19 da cadeia leve de miosina. Esta fosforilao aumenta a actividade da ATPase, distintamente do que ocorre no msculo esqueltico e cardaco em que a contraco iniciada pela ligao do Ca2+ troponina C. A miosina desfoforilada pela fosfatase da cadeia leve da miosina da clula. de notar que a desfosforilao da cinase da cadeia leve de miosina no resulta necessariamente no relaxamento do msculo liso porque existem outros mecanismos envolvidos. Um destes o mecanismo de ponte trancada, no qual as ligaes cruzadas de miosina permanecem ligadas actina por algum tempo mesmo depois da diminuio da concentrao do Ca2+ sarcoplasmtico, permitindo uma contraco sustentada com pouco gasto energtico. Esta contraco sustentada importante no msculo liso vascular. O relaxamento do msculo ocorre quando se d a dissociao total do complexo Ca2+- calmodulina ou quando outro mecanismo entra em aco. O AMP cclico participa em reaces que envolvem a fosforilao da cinase da cadeia leve de miosina. Esta fosforilada exibe uma actividade significamente menor para com o complexo Ca2+- calmodulina e desta forma menos sensvel activao. Assim, um aumento do AMP cclico inibe a resposta de contraco do msculo liso, mesmo quando os nveis de Ca2+ intracelular aumentam. Este mecanismo molecular explica o relaxamento do msculo por estimulao -adrenrgica. A caldesmona tambm desempenha um papel importante na regulao da contraco deste msculo. Em concentraces reduzidas de Ca2+, a caldesmona liga-se ao complexo tropomiosina-actina, impedindo a interao actomiosnica e consequentemente a contraco. Para concentraces elevadas de Ca2+, a caldesmona desliga-se da actina por ligao ao complexo Ca 2+calmodulina. Deste modo a actina fica livre para se ligar miosina permitindo a contraco. Por outro lado, a caldesmona tambm esta sujeita a fosforilao/ desfosforilao. Quando fosforilada no se pode ligar actina permitindo assim a interaco actomiosnica e consequentemente a contraco. As estrias do msculo cardaco so semelhantes s do msculo esqueltico e as linhas Z tambm esto presentes. Existem mitocndrias alongadas em contacto directo com as miofibrilhas musculares. No ponto em que a extremidade de uma fibra entra em contacto com outra, as membranas de ambas ficam paralelas, formando uma srie extensa de dobras. Estas reas so designadas por discos intercalares e localizam-se nas linhas Z. Os discos intercalares possibilitam uma unio firme entre as fibras, mantendo a coeso intracelular permitindo que a traco de uma unidade contrctil possa ser transmitida longitudinalmente para a seguinte. O msculo cardaco funciona como se fosse um sinccio, mesmo no existindo pontes protoplasmticas entre as clulas. A base molecular de contraco do msculo cardaco , de forma geral, semelhante do msculo esqueltico, uma vez que tambm nesta esto envolvidas a actina, miosina, 82

tropomiosina e troponina e o mecanismo o j descrito anteriormente. O msculo cardaco, distintamente do msculo esqueltico, exibe ritmicidade intrnseca e micitos individuais que se comunicam entre si devido natureza de sinccio. O sistema tubular T mais desenvolvido no msculo cardaco, enquanto o retculo sarcoplasmtico menos extenso. Por esta razo o fornecimento intracelular de Ca2+ para a contraco menor. O msculo cardaco depende, portanto, do Ca2+ extracelular para a contraco. O AMP cclico desempenha um papel crucial no msculo cardaco. Este controla os nveis intracelulares de Ca 2+, atravs de activaes de cinases. Estas cinases activadas fosforilam vrias protenas de transporte no sarcolema e retculo sarcoplasmtico, assim como do complexo regulador troponina-tropomiosina, afectando os nveis intracelulares de Ca2+ ou as respostas a ele. Existe uma correlao entre a fosforilao da troponina I e o aumento da contraco do msculo cardaco, induzida por catecolaminas. Como descrito acima, o Ca2+ extracelular desempenha um papel importante na contraco do msculo cardaco. A entrada e sada de Ca 2+ regulada por processos que envolvem trs protenas transmembranares. Os canais de Ca2+ constituem a principal via de entrada de ies Ca2+ para o meio intracelular. A principal via de entrada o canal lento de Ca2+ regulado por voltagem. Existem tambm canais rpidos de Ca2+ (presentes no plasmalema) que, apesar de em menor nmero, contribuem para o aumento inicial de Ca 2+ mioplasmtico. Este aumento promove a abertura do canal de libertao de Ca 2+ do RS. O permutador Ca2+- Na+ a principal via de sada de Ca 2+ intracelular. Em repouso contribu para a manuteno de um nvel baixo de Ca2+ intracelular livre, atravs da troca de um Ca2+ por trs Na+. A energia para o movimento contra gradiente de Ca 2+ para fora da clula provm do movimento a favor do gradiente do Na+ para dentro da clula. Esta troca contribui para o relaxamento, mas para ocorrer na direo inversa durante a contraco. A Ca2+ ATPase situada no sarcolema tambm contribui para a sada destes ies, mas desempenha um papel relativamente menor quando comparado ao papel do permutador Ca2+- Na+.

3.9- Glbulos Vermelhos

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1. Membranas, grupos sanguneos, composio e funcionalidade

Os glbulos vermelhos (ou eritrcitos) so as clulas sanguneas mais abundantes, tendo-se num mm3 de sangue, 5 a 6 milhes destas clulas num indivduo do sexo masculino, e 4 a 5 milhes no sexo feminino. Os glbulos vermelhos tm a forma de discos bicncavos, so anucleados e amitocondriais, apontando-nos este ltimo facto para a ocorrncia de fermentao lctica, para reoxidao do NADH reduzido na gliclise e produo de ATP, ainda que em regime aerbio. A deformabilidade da estrutura do glbulo vermelho uma propriedade fundamental passagem deste pelos capilares sanguneos mais finos, para que no haja ruptura da membrana. Esta flexibilidade assegurada pela densa rede citosqueltica que existe no interior da clula, ligada membrana em diversos pontos. Ao nvel da bicamada fosfolipdica, podemos encontrar protenas transmembranares como a banda 3, trocadora de anies, aquaporinas, associadas ao movimento de H2O e as glicoforinas. No citoesqueleto propriamente dito, surge a espectrina como principal componente desta rede, formando filamentos que unem os complexos juncionais. Estes complexos so constitudos por actina, associada tropomiosina e tropomodulina, que previnem a sua despolimerizao. A banda 4.1 e a aducina, tambm do complexo juncional, estabilizam a ligao entre a espectrina e a actina, embora a banda 4.1 promova tambm a ligao do complexo glicoforina na membrana. Tem-se ainda a anquirina, que vai ligar a prpria espectrina a uma banda 3 membranar, facto que sugere uma eficaz interaco entre o citosqueleto e a membrana, sendo esta no s ao nvel dos complexos juncionais, como tambm no seio dos filamentos de espectrina isolados. Os grupos sanguneos do sistema AB0 so determinados pela presena ou ausncia de antignios A e/ou B, na membrana dos glbulos vermelhos (e de outros tipo de clulas sanguneas). Estes antignios so oligossacridos ligados covalentemente a lpidos ou protenas, formando glicolpidos ou glicoprotenas. Todas as pessoas possuem a chamada substncia H ou antignio O para alguns autores. Esta substncia, sendo produzida por indivduos de qualquer tipo sanguneo, no na verdade um antignio, porque no susceptvel de desencadear uma resposta imunitria. O grupo sanguneo A vai ser ento identificado pela presena da enzima glicosiltransferase que permite adicionar Nacetilgalactosamina substncia H, para formar o antignio A. No caso do grupo B, fala-se de uma glicosiltransferase capaz de adicionar um resduo de galactose a esta mesma substncia H, produzindo-se um antignio B. Um indivduo que seja do grupo AB possui ambas estas enzimas, logo ambos os antignios. No que diz respeito a transfuses sanguneas, tem-se que o grupo 0 pode dar sangue a todos os outros grupos, por exemplo, e subentende-se que cada grupo possa dar a si prprio. Isto deve-se ao facto de se proceder produo de anticorpos contra os antignios inexistentes no grupo em questo. Assim, o grupo 0 produzir anticorpos Anti-A e Anti-B, o grupo A produzir Anti-B, o grupo B, Anti-A, e o grupo AB, nenhum deles. Assim se justificam as relaes ilustradas na figura ao lado. No sistema Rhesus, um indivduo pode ser identificado como Rh + ou Rh conforme tenha ou no nas membranas dos seus glbulos vermelhos o antignio Rh D. Este antignio uma protena, ao contrrio dos do sistema AB0. Um indivduo Rh produzir 84

anticorpos Anti-D na presena do antignio, pelo que no pode receber sangue Rh +. No entanto, o inverso pode suceder. Um glbulo vermelho constitudo maioritariamente por hemoglobina, protena globular que lhes confere a sua cor caracterstica. composta por 4 cadeias polipeptdicas (duas e duas ), cada uma delas com um grupo prosttico Heme. Cada um destes grupos Heme possui um tomo de ferro no centro, ao qual se pode ligar uma molcula de O 2 para o processo de transporte. Gozando desta caracterstica, os glbulos vermelhos tm como principal funo o transporte de O2 dos pulmes para os tecidos, sendo que a percentagem de O2 sanguneo associado hemoglobina atinge os 97%. De entre as suas outras funcionalidades, destaca-se o transporte associado de CO2, aproximadamente 23% do movimento de CO2, dando-se 70% deste mesmo movimento sob a forma de io bicarbonato (HCO3-) dissolvido no plasma. Ainda aqui h interveno dos glbulos vermelhos, uma vez que a enzima anidrase carbnica, presente nestes, que catalisa a reaco CO 2 + H2O H+ + HCO3-, ou seja, o CO2 tem de entrar no glbulo vermelho para se transformar em io bicarbonato, que depois conduzido ao plasma. O H + pode ser aceite pela parte proteica da hemoglobina, facto que associa ainda aos glbulos vermelhos a regulao do pH sanguneo.

2. Factores de crescimento e produo de glbulos vermelhos

Os glbulos vermelhos comeam a sua vida na medula ssea a partir de uma clula estaminal hematopoitica pluripotencial (PHSC), clula essa que pode origem a todos os tipos de clulas sanguneas. Aquando da diviso celular desta, e consequente diferenciao, h uma pequena poro destas clulas (PHSC) que se mantm inalteradas, de modo a garantir a permanncia do processo. O crescimento e reproduo das diferentes clulas estaminais so controlados por mltiplas protenas, chamadas indutoras ou factores de crescimento. Os factores de crescimento celular so genericamente divididos em dois subgrupos: citoquinas e interleucinas. As citoquinas so molculas moduladoras da proliferao e maturao das clulas hematopoiticas. As interleucinas so protenas que transmitem sinais de comunicao entre diferentes tipos de clulas. A eritropoietina pertence ao subgrupo das citoquinas. A formao dos factores de crescimento controlada fora da medula ssea. No caso dos glbulos vermelhos, a exposio do sangue a baixas concentraes de oxignio leva ao seu aumento em nmero. O processo natural de produo de eritrcitos denomina-se eritropoiese. Especificamente ocorre a partir dos proeritroblastos, que so grandes clulas com nuclolos e citoplasma discretamente disformes. A partir desta clula originam-se por reproduo celular o eritroblasto basfilo, que aps 24/48 horas se transforma por maturao em eritroblasto policromatfilo. Esta clula vive em mdia 24 horas e diferencia-se em eritroblasto ortocromtico que 12 horas depois, perde o seu ncleo e d origem ao reticulcito. O reticulcito um eritrcito grande e imaturo, com RNA ribossmico em varias quantidades no seu citoplasma. Este reticulcito tem um perodo de vida mdio de 3 dias, aps o que se transforma em eritrcito e libertado da medula ssea para o sangue circulante. O eritrcito maduro, por esta altura, contm cerca de 34 % de hemoglobina (cerca de 90% em peso seco) e no possui organitos, tendo desde j consigo todas as substncias de que vai precisar ao longo da sua vida (120 dias, aproximadamente). Todo este processo desencadeado e acelerado fundamentalmente por uma hormona, um factor de crescimento j referido, a eritropoietina. A eritropoietina , quimicamente, uma glicoprotena, produzida principalmente no rim e, em menor quantidade, no fgado, circulando livremente no sangue. A hipxia (deficiente oxigenao sangunea) o estmulo principal para a sua produo, qualquer que seja a sua 85

causa (por exemplo, insuficincia respiratria ou cardaca, anemia, etc.), detectada por sensores de oxignio nos aparelhos justaglomerulares renais que, como resposta, aumentam a produo de eritropoietina que, a nvel da medula ssea, estimula a sntese e diferenciao de eritroblastos.

3. Metabolismo do glbulo vermelho

Antes de mais, importante referir que os glbulos vermelhos tm um tempo til de vida de aproximadamente 120 dias. Devido ao desgaste na sua membrana plasmtica, provocado pela sua circulao ininterrupta ao longo dos vasos, tornam-se ineficazes, dando-se a sua destruio essencialmente no bao, mas tambm no fgado e na medula ssea vermelha. Macrfagos, nesses locais, fagocitam esses glbulos vermelhos velhos e fragilizados (e/ou com rupturas), evitando um grande nmero de doenas. Os glbulos vermelhos sofrem fagocitose por aco dos macrfagos e, atravs das enzimas lisossmicas existentes nos vacolos dos ditos macrfagos, os componentes qumicos dos glbulos vermelhos separam-se. A hemoglobina , ento, separada em globina e grupo Heme, seus componentes. A globina degradada nos seus aminocidos constituintes, podendo estes seguir duas vias: ser reutilizados, sendo aproveitados para a sntese proteica, ou ser libertados na corrente sangunea. O ferro removido, nas clulas fagocitrias, do grupo Heme. Quando no armazenado pelos macrfagos, o ferro libertado na corrente sangunea podendo, no plasma, conjugar-se com a protena transportadora transferrina, que o transporta at medula vermelha. Uma vez l, esse ferro utilizado, pelas clulas precursoras de glbulos vermelhos, na sntese de hemoglobina. O ferro em excesso pode ser armazenado na medula ssea e no fgado, sendo que algum tambm perdido na blis, sendo que essa uma das razes pelas quais devemos incluir sempre alimentos ricos em ferro na nossa alimentao. A vitamina B12 tambm usada na sntese de hemoglobina. O factor intrnseco, glicoprotena produzida pelas clulas parietais do estmago, fundamental na absoro da Vitamina B12. Os aminocidos, quando na medula ssea, so utilizados para sintetizar a poro globina da hemoglobina; A eritropoietina, hormona produzida pelos rins, e cuja produo aumentada em situaes de hipxia (deficincia de oxignio), circula atravs do sangue at medula ssea onde vai estimular a eritropoiese. A eritropoiese e a degradao dos glbulos vermelhos procedem, normalmente, ao mesmo ritmo. Se a capacidade de transporte de oxignio decresce, devido eritropoiese no acompanhar o ritmo de degradao dos glbulos vermelhos, a produo destes aumenta (atravs do mecanismo de Feedback negativo j explicado). Quando o ferro removido do grupo heme, a parte no ferrosa deste reduzida a biliverdina (pigmento verde). A biliverdina, por aco da biliverdina redutase, de seguida reduzida a bilirrubina (pigmento amarelo-alaranjado). Essa bilirrubina recm-formada circula, na forma no conjugada, no sangue ligada albumina srica, sendo transportada pelo sistema porta at o fgado onde, aps se conjugar com cido glicurnico, tornando-se na forma conjugada (solvel em gua), secretada para a blis. A bilirrubina conjugada, presente na blis, vai para o intestino delgado e, de seguida, para o intestino grosso onde, aps lhe ser removido o cido glucurnico, se torna, por aco de bactrias, em urobilinognio. Uma pequena poro do urobilinognio formado reabsorvido pelo intestino e, seguidamente, excretado pelo rim onde oxidado a urobilina (pigmento amarelo que d a cor urina), ou seguindo de novo para o fgado. Mas a grande maioria do urobilinognio no reabsorvido, permanecendo no intestino grosso onde oxidado a estercobilina (pigmento castanho), sendo desta forma eliminado nas fezes (cuja cor acastanhada advm da estercobilina).

Lipidmia
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a) Formao e destinos metablicos das lipoprotenas

Os lpidos so transportados no plasma na forma de lipoprotenas. As 4 maiores classes de lpidos esto presentes nas lipoprotenas so: triacilgliceris, fosfolpidos, colesterol, cholesteryl esters e uma fraco muito pequena de cidos gordos livres ( a forma mais activa dos lpidos plasmticos). As quantidades de cada um destes lpidos varia de lipoprotena para lipoprotena. Os 4 maiores grupos de lipoprotenas so: - Quilomicra: so formadas no intestino. Derivam da absoro intestinal dos triacilgliceris ou outros lpidos. So as lipoprotenas menos densas. - VLDL (very low density lipoproteins): formadas no fgado. Lpidos predominantes: triacilgliceris. - IDL (intermediate density lipoproteins): derivam do VLDL (tambm so chamadas VLDL remanescente). Depois de formado, convertido em LDL. Lpidos predominantes: triacilgliceris. - LDL (low density lipoproteins): correspondem fase final do catabolismo das VLDL. Lpidos predominantes: colesterol. - HDL (high density lipoproteins): so formadas no fgado e no intestino. Esto envolvidas no metabolismo dos Quilomicra e das VLDL e tambm no transporte de colesterol. So as lipoprotenas mais densas. A sua funo principal mobilizarem o excesso de colesterol dos tecidos para o fgado, onde armazenado. Lpidos predominantes: fosfolpidos e colesterol. Estrutura das lipoprotenas: As lipoprotenas so formadas por um ncleo apolar (constitudo principalmente por triacilgliceris e cholesteryl esters), uma nica camada superficial de lpidos anfipticos (fosfolpidos e molculas de colesterol livre) e uma parte proteica. Tm uma forma aproximadamente esfrica, devido, precisamente, sua estrutura (com os grupos hidroflicos na superfcie e os grupos hidrofbicos no interior). A parte proteica da lipoprotena chamada apoprotena. a distribuio das apoprotenas que caracteriza a lipoprotena. Em cada lipoprotena pode estar presente uma ou mais apoprotenas. A quantidade desta parte proteica presente em cada lipoprotena muito diferente; por exemplo, nas HDL constitui cerca de 70% da molcula, enquanto que nos quilomicra constitui apenas 1%. As funes das apoprotenas so: serem cofactores enzimticos ou inibidores enzimticos; fazerem a ligao entre a lipoprotena e os receptores lipoproteicos nos tecidos. Enzimas e protenas de transporte: A maioria dos sistemas enzimticos participantes no metabolismo lipoproteico participa na hidrlise das lipoprotenas ricas em triacilglicerol aps as refeies e tm uma diminuta actividade durante o jejum. lipoprotena lipase (LpL): sintetizada pelos adipcitos, micitos (no msculo cardaco e esqueltico) e macrfagos; activada pela apoC-II (e fosfolpidos); determina a hidrlise do triacilglicerol (perda de 90%), o que leva libertao de cidos gordos para os tecidos (utilizados como fonte de energia nos msculos ou na sntese heptica de VLDL e acumulados, como triacilglicerol, no tecido adiposo); origina a perda da apo C dos quilomicra e das VLDL; interactua com quilomicra e VLDL em circulao: leva formao de quilomicra e VLDL remanescentes, que so ricos em colesterol e cholesteryl esters (devido perda de triacilglicerol). 87

lipase heptica (LH): sintetizada pelos hepatcitos; relacionada com o processamento final dos remanescentes de quilomicra; promove a hidrlise do triacilglicerol e dos fosfolpidos em excesso na sua membrana; favorece a interaco das lipoprotenas remanescentes com o receptor LRP; acelera o metabolismo das IDL at LDL. lecitina-colesterol aciltransferase (LCAT): sintetizada no fgado; circula no plasma associada s HDL (que so o seu principal substrato); catalisa a esterificao do colesterol livre, ao promover a transferncia de cidos gordos da lecitina para o colesterol (com formao de steres de colesterl e lisofosfatidilcolina); cofactor: apoA-I, mas outras apoprotenas (AII, A-IV, C-I, D e E) podem tambm activar a enzima. protena de transferncia dos cholesteryl esters (CETP): no uma enzima, mas sim uma protena produzida pelo fgado; promove a transferncia de cholesteryl esters das HDL para as VLDL, IDL e remanescentes e de triacilglicerol em sentido inverso; juntamente com a LCAT, a CETP est envolvida no metabolismo das HDL.

Receptores celulares envolvidos no metabolismo lipoproteico: receptor LDL (LDLR): glicoprotena constituda por cinco domnios funcionais; expresso na maioria das clulas com ncleo (em especial no fgado); envolvido na captao das lipoprotenas com apo B e/ou apo E (LDL, Quilomicra remanescente, IDL e HDL1) e, consequentemente, na regulao do contedo intracelular de colesterol. LRP (LDLreceptor related protein): receptor de membrana multifuncional; estruturalmente comparvel a quatro receptores LDL (com 31 domnios funcionais); expresso, primariamente, no fgado, mas tambm no crebro (neurnios) e na placenta; envolvido na captao heptica de remanescentes (de Quilomicra e VLDL) ricos em apo E. receptor VLDL: estruturalmente semelhante ao LDLR (com oito domnios funcionais); abundante nos hepatcitos, adipcitos e SNC; capaz de fixar lipoprotenas com apoE. receptores HDL: papel central no transporte reverso do colesterol; presente nos hepatcitos; medeia a captao selectiva de colesterol e cholesteryl esters das HDL, contribuindo de forma importante para a homeostasia global do colesterol no organismo; presente tambm nas clulas produtoras de esterides onde facilita a captao do colesterol necessrio sntese hormonal. Concludo a apresentao dos diversos elementos presentes, podemos mais facilmente compreender a formao de lipoprotenas e o metabolismo lipoproteico. Formao de Quilomicra e VLDL Os quilomicra so produzidas pelas clulas intestinais. As VLDL so produzidas nas clulas hepticas. O mecanismo de formao dos quilomicra e das VLDL semelhante. Os quilomicra encontram-se no quilo. So formadas apenas pelo sistema linftico que drena o intestino. So responsveis pelo transporte de todos os lpidos na circulao. As VLDL so o meio de transporte de triacilglicerol desde o fgado at aos tecidos extrahepticos. Quando os quilomicra e as VLDL so formadas contm apenas uma pequena quantidade de apoprotenas C e E; o complemento todo obtido a partir das HDL na circulao. A apo B essencial para a formao tanto dos quilomicra como das VLDL. Tanto no caso dos quilomicra como no caso das VLDL, a apo B sintetizada no retculo endoplasmtico rugoso. Posteriormente, incorporada nas lipoprotenas no retculo endoplasmtico liso, que o principal local da sntese de triacilglicerol. Depois da adio de resduos de hidratos de carbono no complexo de Golgi, os quilomicra so libertadas para o sistema linftico. Quanto s VLDL, so secretadas dentro do espao de Disse (espao entre o hepatcito e o sinuside, que contm o plasma sanguneo) e depois dentro dos sinusides hepticos (pequenos vasos sanguneos semelhantes a capilares mas 88

que contm endotlio fenestrado), sendo depois libertadas no lmen dos capilares sanguneos. O triacilglicerol transportado a partir do intestino nos quilomicra e a partir do fgado nas VLDL. Metabolismo lipoproteico A principal funo do metabolismo lipoproteico o transporte dos triacilglicerol e colesterol do intestino e do fgado para os locais de reserva e utilizao metablica. Por isso, globalmente, pode ser entendido como 3 vias: - via exgena, que compreende a absoro e o transporte das gorduras da dieta at ao fgado (e aos tecidos); - via endgena, que abarca o transporte (e o metabolismo) das VLDL produzidas no fgado; - transporte reverso do colesterol, que est relacionada com a conduo do colesterol, possivelmente em excesso, dos tecidos perifricos para o fgado. (1) Via exgena (Metabolismo dos quilomicra) As gorduras alimentares, depois de emulsionadas e misturadas com os sais biliares e com as lipases pancreticas, so absorvidas no jejuno. Nos entercitos, os cidos gordos e o colesterol derivados da dieta so esterificados, de modo a reconstituir o triacilglicerol e a formar, conjuntamente com a apoB48, sintetizada no intestino, os quilomicra nascentes, que entram na circulao (vindas do sistema linftico). Durante a passagem pela circulao sistmica os quilomicra adquirem, das HDL, apoE e apoC-I, C-II e C-III, constituindo os quilomicra propriamente ditos. Depois, os triacilgliceris so hidrolisados, pela LpL em cidos gordos livres, que so depois armazenados nos tecidos perifricos (de novo, sob a forma de triacilglicerol), utilizados como fonte energtica ou reutilizados na sntese de outras lipoprotenas pelo fgado. Deste processo resultam os quilomicra remanescentes, mais pobres em triacilglicerol e mais ricas em colesterol e j sem a apo A e apo C (que regressam s HDL nascentes, contribuindo assim para a permanente reciclagem e remodelagem das lipoprotenas no plasma). Depois disto, os quilomicra vo para o fgado (onde se ligam ao LRP ou ao receptor HDL), onde so convertidas em cidos gordos e colesterol. (2) Via endgena (Metabolismo das VLDL e LDL) As VLDL, sintetizadas no fgado a partir dos triacilgliceris e fosfolpidos, entram na circulao e sofrem um processo semelhante ao descrito para os quilomicra. Desde a sua constituio ou adquiridas na circulao as VLDL tm apoB-100, apoE e vrias formas de apoC, importantes para a modulao do seu metabolismo (por exemplo, a apoE o ligando crtico de reconhecimento pelos

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receptores LRP e LDL, enquanto que apoC-II um elemento central no metabolismo das VLDL ao co-activar a LpL). Na circulao, as VLDL so hidrolisadas pela LpL (e tambm pela lipase heptica do triacilglicerol) e so progressivamente convertidas em partculas cada vez mais pequenas e mais ricas em colesterol (as VLDL remanescentes ou IDL), que podem seguir 2 vias: ser depuradas pelo fgado (via receptor LDL) ou ser convertidas em LDL. As LDL resultantes apenas contm colesterol e a apo B-100. Vo, ento, ser captadas pelo fgado e pelos tecidos perifricos, via receptor LDL (LDLR). (3) Transporte reverso do colesterol (Metabolismo das HDL) As HDL so um conjunto heterogneo de lipoprotenas, diversas do ponto de vista estrutural e funcional. Podem ter origens diferentes: serem segregadas pelo fgado, sintetizadas directamente pelo intestino (num e noutro caso sob a forma de HDL nascentes ou HDL3), derivarem dos restos redundantes do catabolismo das lipoprotenas ricas em triacilglicerol ou resultarem da interconverso das HDL2 e HDL3 pela aco da CETP, da PLTP ou da lipase heptica. As HDL nascentes tm uma forma de disco, constitudo por fosfolpidos e colesterol, encontrando-se ligada a apo A-1 e a enzima LCAT. Esta enzima permite a converso do colesterol em cholesteryl esters e lisolecitina. Ao mesmo tempo, a molcula de HDL recebe dos tecidos colesterol, levando formao da HDL3, que tem uma forma esfrica, com os lpidos apolares (cholesteryl esters) no interior e os lpidos polares (colesterol e fosfolpidos) no exterior e contendo ainda a apo A-1 ligada e a enzima LCAT, que vai novamente converter o colesterol em cholesteryl esters e lisolecitina. Ao mesmo tempo, a HDL3 vai receber dos tecidos (atravs do receptor ABC-1 (ATP-binding cassette transporter-1) mais colesterol, levando formao de uma molcula com maiores dimenses, a HDL2, que j no tem a LCAT ligada. Depois disto, a HDL2 pode seguir 2 vias: ser reconvertida a HDL3 ou ser destruda. Nesta ltima via, a apo A-1 separa-se da lipoprotena e pode ir directamente para o rim (onde destruda) ou incorporar a Pre-HDL, que a forma mais potente de HDL; enquanto isso, os cholesteryl esters vo-se ligar ao receptor SR-B1 (scavenger receptor class B1), no fgado. O colesterol e os fosfolpidos que constituam a HDL2 tambm vo para o fgado.

b) Formao e mobilizao dos depsitos lipdicos

Grandes quantidades de lpidos podem ser armazenadas no tecido adiposo. Alm do armazenamento de triacilgliceris, o tecido adiposo desempenha funes como isolante trmico e de proteco mecnica. Formao de depsitos lipdicos Na formao dos depsitos lipdicos encontramos 2 possveis fontes de triacilgliceris: fgado ( a principal); alimentao (engloba os lpidos absorvidos ao nvel do intestino e a glicose que possibilita a sntese dos triacilgliceris no tecido adiposo). Os triacilgliceris so formados a partir da esterificao de acil-CoA e glicerol 3-fosfato. O glicerol 3-fosfato utilizado nesta esterificao, e uma vez que no tecido adiposo no se encontra presente a enzima glicerol cinase, sintetizado a partir da glicose, via gliclise, sendo o resultado da reduo da dihidroxiacetona fosfato. A enzima envolvida na reaco de reduo a glicerol 3-fosfato desidrogenase. A acil-CoA pode ter 3 provenincias: 90

Os quilomicra (provenientes do intestino) e as VLDL (provenientes do fgado) sofrem a aco de uma enzima, a lipoprotena lipase, que se encontra na face luminal da membrana das clulas endoteliais dos capilares do tecido adiposo, que catalisa a hidrlise dos triacilgliceris em trs cidos gordos e glicerol. Os cidos gordos livres resultantes entram na sua maioria para os adipcitos e, por aco da acil-CoA sintetase, na presena de CoA e ATP ( por cada cido gordo activado gasta-se um ATP), do origem a acil-CoA. Alguns destes cidos gordos podem no entrar nos adipcitos, ficando na corrente sangunea e sendo transportados em conjunto com a albumina. A glicose que entra para os adipcitos pode ter vrios destinos metablicos: via das fosfopentoses, sendo oxidada a CO2; via gliclise, originando acetil-CoA; ciclo de Krebs, importante na produo de NADPH, que utilizado na obteno de acil-CoA, a partir de acetil-CoA (gliclise). Os cidos gordos provenientes da liplise podem seguir 2 vias: circulao sangunea, sendo transportados com a albumina ou podem dar origem novamente a acil-CoA, atravs da acil-CoA sintetase. A esterificao dos triacilgliceris ocorre em 2 fases. Na primeira fase: Remoo dos dois primeiros grupos hidroxilo livres do glicerol 3-fosfato e adio de 2 cidos gordos nesses pontos. Esta reaco catalisada pela acilCoA sintetase, na presena da acil-transferase; A molcula resultante desta fase o cido fosfatdico; Numa segunda fase: O grupo fosfato do cido fosfatdico hidrolisado pela fosfatidato fosfatase, formando o 1,2-diacilglicerol; O diacilglicerol transesterificado com um terceiro cido gordo, atravs da aciltransferase, originando o triacilglicerol. No citoplasma dos adipcitos existe (em todos os estados metablicos) um ciclo de hidrlise (catalisada pela lpase hormono-sensvel) e sntese (esterificao) de triacilgliceris. No tecido adiposo, a seguir s refeies a actividade da lpase de lipoprotenas est, relativamente ao estado de jejum, aumentada promovendo a hidrlise dos triacilgliceris dos quilomicra. A activao da lpase de lipoprotenas deve-se, sobretudo, aco da insulina que estimula a sua sntese nos adipcitos e a sua migrao para o endotlio. Alm desta aco, a insulina inibe a liplise e favorece o processo de esterificao, estimulando a sntese de aciltransferase do glicerol 3-fosfato, a primeira enzima no processo da sntese dos triacilgliceris. Os quilomicra, via activao da sntese e libertao de uma citocina dos adipcitos tambm estimulam a sntese de triacilgliceris, nos adipcitos. O consumo dos cidos gordos na esterificao favorece a sua captao para dentro dos adipcitos. No perodo que se segue a uma refeio o processo de captao de cidos gordos e esterificao , portanto, mais rpido que o de hidrlise, ocorrendo acumulao de gordura nos adipcitos. Mobilizao dos depsitos lipdicos A liplise (degradao) dos triacilgliceris, nos adipcitos, mediada pela lipase hormonosensvel (inibida pela insulina e estimulada pelas catecolaminas), que promove a libertao dos trs cidos gordos e do glicerol. Os cidos gordos resultantes podem contribuir novamente para a formao de triacilgliceris, ou ento ser libertados para a corrente sangunea, onde so transportados conjuntamente com a albumina, com destino a tecidos consumidores como o msculo e o fgado, onde os cidos gordos se separam da albumina para entrarem nas clulas e sofrerem -oxidao. O glicerol resultante vai para a circulao e segue para tecidos, como o fgado ou rins, onde est presente a enzima glicerol cinase que permite a regenerao da glicose, via gliconeognese. 91

Em condies de necessidades energticas (por exemplo em situaes de jejum ou exerccio fsico), o ciclo de liplise-esterificao no tecido adiposo tambm ocorre mas, como a liplise mais rpida que a esterificao, o somatrio dos dois processos corresponde libertao de cidos gordos livres dos adipcitos para o plasma. No jejum no h quilomicra, a insulina plasmtica est baixa e os adipcitos tm maior sensibilidade aco lipoltica das catecolaminas. Nestas condies, os cidos gordos livres esto aumentados no plasma e so usados como combustveis pelos tecidos nomeadamente os msculos e o fgado. c) Controlo metablico da lipidmia e utilizao metablica tecidual

dos lpidos
As reservas de triacilgliceris no tecido adiposo esto constantemente a sofrer liplise e reesterificao. Estes dois processos so vias completamente distintas, envolvendo diferentes substratos e enzimas. Isto permite que os dois processos sejam regulados separadamente por diversos factores nutricionais, metablicos e hormonais. O resultante destes dois processos determina a quantidade de cidos gordos livres presentes no tecido adiposo, e consequentemente, a concentrao destes em circulao no plasma. Triacilglicerol formado a partir da esterificao de acil-CoA e glicerol-3-fosfato. Dado que no tecido adiposo no est presente a enzima glicerol cinase, o glicerol-3-fosfato tem de ser sintetizado a partir da gliclise, mais concretamente da reduo dihidroxiacetona fosfato. No entanto, a glicose que entra no tecido adiposo tem outros destinos metablicos, tais como a oxidao a CO2, na via das fosfopentoses ou ciclo de Krebs, e produo de NADPH, que essencial na produo de acil-CoA partindo de acetil-CoA (obtido atravs da gliclise). Assim, um aumento da utilizao metablica da glicose (i.e. necessidades energticas), vai-se traduzir numa diminuio da libertao de cidos gordos para a circulao. Isto porque a glicose vai ser preferencialmente oxidada a CO2, fazendo com que se forme menos quantidade de glicerol 3-fosfato, o que implica uma menor taxa de esterificao. Os cidos gordos formados por liplise de triacilgliceris so utilizados para regenerar acil-CoA (devido enzima acil-CoA sintase), e este d origem a acetil-CoA que posteriormente entra no ciclo de Krebs, sendo oxidado a CO2. Deste modo verifica-se uma diminuio de cidos gordos livres no adipcito, o que se traduz numa diminuio da lipidmia. importante referir que nesta situao, a taxa de libertao de glicerol (formado a partir da hidrlise de triacilgliceris) para a circulao se mantm constante, pelo que possvel inferir que a glicose no actua por diminuio da taxa de liplise. Outro aspecto a referir em relao ao efeito da glicose sobre a lipidmia, que em situaes de jejum verifica-se uma diminuio da glicmia e consequentemente existe uma diminuio da taxa de esterificao e formao de triacilgliceris. Deste modo constata-se uma acumulao de cidos gordos no adipcito, e consequentemente, um aumento da concentrao destes em circulao. Por outro lado, um aumento de glicose no sangue traduzse num aumento da taxa de esterificao, o que leva acumulao de triacilgliceris no interior do adipcito. A taxa de libertao de cidos gordos livres do tecido adiposo afectada por diversas hormonas que influenciam, tanto a taxa de esterificao como a de liplise. A insulina inibe a libertao de cidos gordos dos adipcitos, o que se traduz numa diminuio da lipidmia. Ela aumenta a lipognese e sntese de acilglicerol, e tambm a oxidao da glicose a CO2 pela via das fosfopentoses. Todos estes efeitos esto dependentes da presena de glicose e podem ser explicados pelo facto de a insulina aumentar o fluxo de glicose para o adipcito, atravs do transportador GLUT 4. No entanto, a principal aco da insulina no tecido adiposo inibir a actividade da lipase hormono-sensivel, reduzindo a taxa de liplise e consequentemente a libertao de cidos gordos livres e glicerol. Verifica-se ainda que a insulina diminui a taxa de liplise por outras vias. Uma delas inibir a actividade da adenilato-ciclase, que responsvel pela converso de ATP em cAMP, que se traduz numa diminuio da concentrao de cAMP na clula. Dado que a lipase hormono-sensvel passa da sua forma inactiva para a forma activa atravs de uma fosforilao catalisada por uma 92

protena cinase dependente de cAMP, uma diminuio deste causa uma menor quantidade de lipase activa, diminuindo assim a taxa de liplise. Outra via estimular a enzima fosfodiesterase, responsvel pela converso de cAMP em 5 AMP. Uma maior actividade desta enzima implica uma menor concentrao de cAMP, que se traduz numa diminuio da taxa de liplise pelo processo acima descrito. A insulina activa ainda a enzima lipase fosfatase, que responsvel pela converso da lipase hormono-sensivel da sua forma activa, para a inactiva, atravs de uma desfosforilao. Isto faz com que haja menos lipase activa e consequentemente, menor taxa de liplise. Todas estas vias de diminuio da libertao de cidos gordos para a circulao, so vias directas. Alm de actuar sobre estas, a insulina inibe ainda uma via indirecta independente de cAMP, a via de produo da lipase hormonosensivel. Isto faz com que haja uma diminuio da sntese de lipase e consequentemente, uma menor taxa de liplise. Outras hormonas responsveis pela diminuio da libertao de cidos gordos livres so a prostaglandina E1 e cido nicotnico, que inibem a adenilato-ciclase diminuindo a liplise pelo processo j descrito (actuam sobre a adenilato-ciclase de forma anloga insulina). Outras hormonas aceleram a libertao de cidos gordos livres do tecido adiposo, aumentando a taxa de liplise e aumentando assim a lipidmia. As que actuam rapidamente na promoo de liplise incluem as catecolaminas (epinefrina e norepinefrina), ACTH, TSH, GH, e actuam por estimulao da adenilato-ciclase, aumentando a converso de ATP em cAMP, e consequentemente, a quantidade de lipase hormono-sensvel activa, aumentando a degradao de triacilgliceris a cidos gordos e glicerol. As metilxantinas (i.e. cafena) inibem a actividade da enzima fosfodiesterase, causando uma diminuio na converso de cAMP em 5 AMP e portanto, mantendo a taxa de liplise elevada. Os glicocorticoides (que so hormonas esteroides e portanto derivadas do colesterol), difundem facilmente atravs da membrana celular dos adipcitos, ligando-se a receptores especficos do ncleo, aumentando a sntese de lipase hormono-sensivel, por uma via independente de cAMP. Todas estas hormonas tm efeitos antagnicos insulina. Falando agora da utilizao metablica dos lpidos. J foi falado que os triacilgliceris so transportados em circulo, incorporados em lipoprotinas (quilomicra e VLDL), que aps a aco da lipoprotena lipase libertam cidos gordos e glicerol. Os cidos gordos entram nos tecidos atravs de uma protena transportadora que actua por co-trasnporte mediado pelo Na+. Consoante o tecido, os cidos gordos tero diferentes aplicaes. No caso do msculo (esqueltico e cardaco), os cidos gordos sofrem principalmente -oxidao, visto serem a principal fonte de energia destes tecidos em situao de jejum. No caso do tecido adiposo, os cidos gordos so utilizados principalmente para reesterificao de triacilgliceris, atravs da sntese de acil-CoA. importante referir que o msculo tem muito maior afinidade para os cidos gordos do que o tecido adiposo, captando praticamente a totalidade libertada pela aco da LPL, enquanto que o tecido adiposo apenas capta cerca de 2/3. Os cidos gordos restantes ligam-se albumina e so transportados para outros tecidos, nomeadamente o fgado. Esta diferena de afinidade importante em situaes de jejum, fazendo com que o msculo (principalmente o cardaco) tenha assegurada a quantidade necessria de cidos gordos para o seu funcionamento. Outras duas classes de lpidos com elevada importncia metablica so o colesterol e os fosfolpidos. Embora o colesterol possa ser sintetizado por quase todos os tecidos, a sua principal fonte a alimentao. um elemento essencial nas membranas celulares, conferindo-lhes fluidez. tambm o precursor das hormonas esterides e vitamina D, que desempenham um papel fundamental no nosso organismo, actuando das mais diversas formas. Os fosfolpidos, devido a serem molculas anfipticas so os principais constituintes das membranas celulares (bicamada fosfolipdica). So essenciais nas lipoprotenas, formando uma monocamada, permitindo a formao de um ncleo hidrofbico, fundamental no transporte de lpidos em circulao. de referir que alguns fosfolpidos de membrana contm o cido araquidnico, libertando-o por aco da fosfolipase A2, em resposta a sinais hormonais (a fosfolipase A2 cliva a ligao ster entre o cido araquidnico e o glicerol). O 93

cido araquidnico o precursor dos eicosanides, que desempenham um papel essencial no nosso metabolismo.

3.11- Glicmia
Formao e mobilizao da glicose e glicognio: nos hepatocitos vs no msculo
O fgado o rgo fundamental na regulao da glicmia (concentrao de glicose no sangue), tendo assim a funo de glicostato: mantm a glicmia numa gama de valores normal, sendo esta nos mamferos de 4.5-5.5 mmol/L. O mecanismo principal da homeostase da glicose ser ento a troca entre processos de utilizao (gliclise), formao de reservas (glicognese) e formao de nova glicose a partir de substratos no glicdicos (gliconeognese). Aps ingesto, as molculas de glicose absorvidas no intestino chegam ao fgado pela veia porta e so captadas pelos hepatocitos por difuso facilitada, uma vez que no so capazes de se difundirem simplesmente pela membrana. Para isso, utilizam o transportador predominante GLUT-2. Como possveis destinos da glicose, vamos ter ento: - Degradao para fornecimento de energia de clulas (gliclise, ciclo de krebs). - Sntese de glicognio para reserva (at 10% do peso total do fgado) pela glicognese. - Em excesso, tambm para reserva, formao de triacilgliceris, a partir de acetilCoA. - Via das fosfopentoses, para formao de transportadores (NADPH) e nucletidos. Viso Geral dos processos envolvidos: Gliclise: como j vimos, com o intuito de fornecer energia s clulas, mas tambm para fornecer esqueletos de carbono para vias de sntese. De notar que ao degradar sacridos com pelo menos duas unidades, temos de transformar todo os monossacridos resultantes em glicose para prosseguir a via. Isso faz-se atravs de uma srie de reaces, em que intervm enzimas como uridiltransferase, epimerases e o intermedirio UDP-Glicose para finalmente formar a Glicose-1-fostato. Note-se que a passagem de glicose a glicose-6-fosfato fectuada no fgado pela hexocinase IV enquanto no msculo as enzimas intervenientes so a hexocinase I e II. Gliconeognese: para formar ento a nova glicose, a partir de percursores como: piruvato, lactato, glicerol e produtos do catabolismo de alguns aminocidos, que entram no ciclo em pontos diferentes. A glicose produzida nos hepatcitos ento exportada para outros tecidos quando as reservas de glicognio esto (praticamente) esgotadas. Em estado recmalimentado poder conduzir tambm sntese de glicognio. Para exportar ento a glicose, temos o transporte da Glicose-6-fosfato do citosol para o lmen do retculo endoplasmtico do hepatocito (pelo transportador T1). A, por aco da enzima glicose-6-fosfatase (enzima esta inexistente no msculo), temos ento a molcula de glicose, lanada novamente para o citosol, junto com o fosfato restante (respectivamente pelos transportadores T2 e T3), e finalmente, pelo GLUT-2, a glicose lanada na corrente sangunea, aumentando a glicmia. Comparando as duas vias, verifica-se que so o inverso uma da outra (em termos de sentido, porque as enzimas actuantes so outras, como se sabe), e portanto conclui-se que quando a gliclise est muito activada, a gliconeognese est muito inibida. O glicognio representa uma menor percentagem do msculo do que representa no fgado, mas devido maior massa do msculo, a que se encontra a sua maioria, servindo como combustvel, como fonte de reserva de glicose para as prprias clulas musculares. Isto deve-se ao facto das clulas musculares no terem a glicose-6-fosfatase, ou seja tendo incapacidade de passar a glicose para o sangue. 94

Para os processo envolvidos na formao e mobiliazao do glicognio, temos: Glicognese: sntese do glicognio (reserva), a partir de molculas de glicose (a enzima fundamental a glicognio sintase). A glicose transformada em glicose-6-fosfato pela hexocinase correspondente e a glicose-6-fostato, por uma glicomutase, forma a glicose-1fosfato, que por sua vez transformada em UDP-glicose pela UDP-glicose-pirofosforilase. A partir de uma unidade iniciadora (primer) e com o auxilio da glicogenina, forma-se, por adio sucessiva de unidades de UDP-glicose, em que posteriormente o UDP libertado, uma cadeia linear, de ligaes alfa-1,4. Posteriormente, por aco da enzima ramificante, formamse ligaes alfa-1,6, dando a conformao final ramificada do glicognio. Glicogenlise: a degradao do glicognio de modo a obter molculas de glicose, em caso de necessidade. Por aco da glicognio fosforilase, reduz a cadeia de glicognio a menos uma unidade, formando tambm uma molcula de Glicose-1-fosfato. No o inverso do processo anterior, essencialmente porque temos neste caso um processo directo, sem o intermedirio UDP-Glicose. As fosforilases hepticas so dimricas a e b, diferenciadas pelo facto de a primeira ser fosforilada (fosfoserina) e de a segunda no (serina). Nos lisosomas a ciso do glicognio faz-se por hidrlise e no por fosforlise, por uma maltase cida. O ciclo de Cori engloba os vrios processos que ocorrem quer no msculo quer no fgado. No msculo a glicose proveniente do sangue entra em processo de gliclise, com a libertao de 2 ATPs. As duas molculas de cido pirvico formadas entram ento num processo de fermentao lctica, durante o qual o NADH re-oxidado, regenerando o NAD+, algo essencial para que a gliclise se continue a processar. O lactato produzido ir ento entrar na corrente sangunea, estando disponvel para a outra parte do ciclo de Cori - no fgado, que engloba as reaces anteriormente referidas. Este ciclo bastante importante porque, apesar de ter um fraco rendimento energtico, previne a acidose lctica no msculo sob condies anaerbias. Existe um ciclo anlogo ao de Cori ainda menos produtivo que o ciclo da alanina. Neste ciclo, no msculo a partir do piruvato produzida alanina por transaminao, que depois atravs do sangue ir chegar ao fgado onde sofrer a reaco inversa. Em termos de regulao, temos por exemplo a aco especfica da glicagina no fgado (onde tambm actua com o mesmo efeito a epinefrina), que, via AMPc, inibe a gliclise, e ser ento importante em situaes de necessidade energtica, como veremos adiante. Ainda na gliclise, sabe-se que a falta de ATP, ou predominncia de AMP estimula o processo, tal como o faz a frutose-2,6-bisfosfato, que como j vimos, inibiro a gliconeognese, estimulada por sua vez, pelo citrato e acetil-CoA. Para referir a regulao da glicognese/glicogenlise, a glicagina tambm desempenha um papel importante, uma vez que activa a glicogenlise (para obter glicose), estimulando as PKAs, que ao fosforilarem a glicognio fosforilase, activam-na, inibindo tambm a glicognese ao fosforilarem (inactivando) a glicognio sintase. Numa via no dependente de AMPc, temos de libertar clcio (que promove a fosforilao, estimulando tambm a glicogenlise): hormonas como a vasopressina e a epinefrina, ao se ligarem a receptores especficos da membrana, activam o IP3 (fosfatidilinositol-4,5-trifosfato) e o 1,2-diacilglicerol, em que o IP3 promove a libertao do clcio do retculo endoplasmtico e activa a fosforilase cinase, e o segundo activa a protena cinase. No msculo, no existe glicagina apenas a epinefrina que ir estimular os receptores adrenrgicos favorecendo a transformao de ATP em AMPc. O AMPc ir activar as PKAs, estimulando a glicogenlise e inibindo da glicognese. Ainda no msculo o aumento de Ca2+ alm de estimular a contraco muscular, estimula tambm um dado tipo de cinases protecas as cinases proteicas dependentes da calmodulina que iro ter o mesmo efeito: a estimulao da glicogenlise e inibio da glicognese. 95

Outra hormona muito importante, referida tambm adiante, a insulina, que por um processo inverso ao anterior, estimula a glicognese e inibe a glicogenlise. Regulao da Glicemia em estado alimentado A glicemia varia consoante o estado fisiolgico do organismo, dependendo de factores como a alimentao ou o exerccio fsico, entre outros. Muitas formas de stress intenso e trauma, AVC, ataque cardaco e cirurgia podem aumentar temporariamente os nveis de glicose. A glicemia pode tambm variar com o uso de certas drogas, aumentando com o uso de anti depressivos, corticosteroides, diurticos, estrognios, ltio,etc ou diminuindo com o uso de outras, como lcoois, esterides, paracetamol,etc. refira-se por curiosidade que a doena mais associada ao aumento crnico da glicemia a diabetes metillus. Mas vamos nos focar na regulao da glicemia aps a alimentao, em que h um aumento temporrio dos nveis de glicose, atingindo uma concentrao de 6.5 a 7.2 mmol/L. O pncreas essencial na regulao do metabolismo energtico do organismo, ao secretar e lanar na corrente sangunea as hormonas peptdicas essenciais mesma, sendo a insulina e a glucagina as principais. A insulina uma hormona polipeptdica fabricada nas clulas dos ilhus de Langerhans no pncreas que regula o metabolismo dos hidratos de carbono. o principal agente na homeostase dos hidratos de carbono. A quantidade de insulina em circulao tem efeitos extremos espalhados por todo o corpo. Concentraes elevadas de glicose como as que ocorrem logo aps a alimentao estimulam a secreo de insulina. Deste modo a percebe-se que a regulao da glicemia neste estado e feita principalmente atravs da insulina. A regulao da sntese de insulina efectuada atravs dos seguintes mecanismos: a glicose entra nas clulas beta pelo transportador de glicose GLUT2, depois passa pela gliclise e pelo ciclo respiratrio, onde so produzidas molculas de ATP. Ento os canais de potssio como so controlados pelo ATP vo-se fechar e a membrana celular vai ser despolarizada. Sob despolarizao, os canais de clcio (Ca2+) controlados pela voltagem elctrica abrem-se e os ies de clcio difudem-se para dentro das clulas. O aumento do nvel de clcio causa a activao da fosfolipase C, que corta o fosfolipdeo da membrana fosfatidil inositol 4,5bifosfato em 1,4,5-trifosfato e diacilglicerol. O inositol 4,5-bifosfato liga-se s protenas receptoras no retculo endoplasmtico. Isto aumenta ainda mais a concentrao de clcio no interior da clula. O aumento significativo de clcio na clula produz a libertao de insulina previamente sintetizada, que tinha sido armazenada em vesculas secretoras. O nvel de clcio tambm controla a expresso do gene de insulina via protena Ligante de Elemento Responsivo a Clcio (em ingls, CREB) Falta ento explicar de que forma e que a insulina promove a diminuio da glicemia: A insulina liga-se ao seu receptor na membrana do hepatcito e do msculo desencadeando cascatas de activaes enzmicas que desembocam na activao da fosfatase-1 de protenas e na inactivao da cnase-3 da sntase do glicognio. A activao da fosfatase-1 de protenas vai provocar um conjunto de desfosforilaes (na sntase do glicognio, na cnase da fosforlase e na fosforlase do glicognio) que promovem a glicognese e travam a glicogenlise, fazendo com que a glicose seja temporariamente armazenada sob a forma de glicognio. A cnase-3 da sntase do glicognio uma das enzimas envolvidas na inactivao da sntase de glicognio: a inactivao desta cnase tambm contribui para a promoo da glicognese. A insulina suprime tambm a produo de glucagina e, consequentemente, reduz a produo heptica de glicose, sendo assim bastante eficaz na reduo da glicemia. A regulao da secreo de insulina um processo delicado que condicionado por muitas variveis. De algumas j falmos, por exemplo a subida da glicemia estimula a produo e a descida inibe. Adicionalmente, parte da sntese e libertao de insulina pode ocorrer na ausncia de glicose ou carbohidratos , e as clulas beta so tambm ainda influenciadas de 96

alguma forma pelo sistema nervoso autnomo. A acetilcolina, ejectada das terminaes nervosas do sistema nervoso parassimptico, a colecistocinina, difundida por clulas enteroendcrinas da mucosa intestinal, e o peptdeo inibitrio gastrointestinal so algumas substncias que estimulam tambm a libertao de insulina. O sistema nervoso simptico (agonistas adrenrgicos alfa-2) pode por seu turno inibir a libertao de insulina. A libertao de insulina fortemente inibida pela hormona relacionada com o stress, a epinefrina, e o exerccio fsico ao consumir bastante glicose tambm inibe a produo de insulina. Por fim, quando a glicemia se estabelece nos valores fisiolgicos normais, cessa ou diminui a produo de insulina a partir das clulas beta. Se a glicemia cai abaixo desses valores normais, especialmente a valores perigosamente baixos, a libertao de hormonas hiperglicemiantes vai induzir disponibilizao de glicose ao sangue, como vamos ver a seguir. Regulao da Glicemia em jejum O cenrio oposto ao estado alimentado corresponde ao estado de jejum; neste, vai ocorrer uma queda dos nveis de glicmia, para valores entre os 3.3 e os 3.9mmol/L, o que desencadeia um estado de hipoglicmia. Este estado de hipoglicmia, se prolongado, vai levar utilizao e possvel esgotamento das reservas energticas do fgado, o que tem consequncias muito graves a nvel cerebral, podendo as disfunes cerebrais iniciais evoluir para um estado de coma, que pode levar morte. A regulao dos nveis de glicmia na situao de jejum, processada maioritariamente a nvel hormonal, destacando-se a glicagina como hormona principal desta via de regulao da glicmia. A glicagina produzida na poro endcrina do pncreas, nomeadamente nas clulas dos ilhus de Langerhans, apresentando aces antagonistas s da insulina, o que faz sentido pelo facto de serem libertadas como resposta a nveis opostos de glicmia. O esquema seguinte ilustra de uma forma geral os mecanismos de aco da glicagina perante nveis baixos de glicmia, como em situao de jejum:

Aco da glicagina Seguindo o esquema, observamos que perante uma descida dos nveis de glicmia, vai haver libertao de glicagina que vai, por via da adenilato ciclase, gerar AMPc que activa a proteina cinase 1(PKA). Esta vai ser mediadora de todos os efeitos da glicagina, atravs de vrios processsos de fosforilao. A inibio da gliclise conseguida por duas vias diferentes; pela fosforilao e inactivao directa da enzima glicoltica piruvato cinase e pela inactivao da PFK-1 atravs da fosforilao da protena bifuncional PFK-2/FBPase-2 e consequente activao da FBPase-2, que diminui a concentrao de Frutose 2,6- bifosfato. Estas aces da glicagina levam, no s inibio da gliclise, como tambm, estimulao da gliconeognese. Por sua vez, a estimulao da glicogenlise conseguida atravs da activao da fosforilase b cinase, que vai activar a forma activa da fosforilase (forma a) por 97

fosforilao de uma forma menos activa (forma b), o que vai levar formao de glicose 6fosfato. No fgado, este composto pode ser transformado em glicose devido presena de glicose 6-fosfatase, e posteriormente libertado para a corrente sangunea com o intuito de aumentar os nveis de glicmia. De referir ainda, o facto, da fosforilase a ter dois locais alostricos de ligao a glicose, o que a leva funcionar como um sensor de glicose no fgado. Por fim, a inactivao da glicognese, conseguida atravs da diminuio da desfosforilao da glicognio sintetase b (inactiva) e pela fosforilao da glicognio sintetase a (activa). Estas aces privilegiam a forma b da glicognio sintetase, inactivando, desta forma o processo de glicognese.

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3.12- DERIVADOS LIPDICOS ESPECIAIS

(a) Sinais metablicos de natureza lipdica-estrutura,sntese e actividade
Existem diversas classes de lpidos no nosso organismo. Os lpidos de reserva e estruturais so importantes constituintes celulares: lpidos de membrana constituem cerca de 5%-10% da massa total de grande parte das clulas, enquanto que os lpidos de reserva chegam a constituir mais de 80% da massa total do adipcito. Excluindo algumas importantes excepes, estas classes lipdicas desempenham um papel passivo na clula. Outro grupo de lpidos, presentes em muito menores quantidades, tem um papel activo, funcionando como potentes sinais intra e extracelulares. Um grupo muito importante de sinais intracelulares de natureza lipdica so os glicerofosfolipidos (nomeadamente o fosfatidilinositol), cuja estrutura geral a seguinte: atravs de ligaes ster, encontram-se ligados ao carbono 1 e 2 do glicerol um cido gordo saturado e um insaturado, respectivamente. Ao carbono 3 encontra-se ligado um grupo substituinte, atravs de uma ligao fosfodister (no caso do fosfatidilinositol, o grupo substituinte o inositol). O fosfatidilinositol encontra-se na membrana plasmtica sob a forma de fosfatidilinositol 4,5- bisfosfato, que actua em resposta a um sinal hormonal que chega membrana celular e liga-se a um receptor especfico, causando a converso do GDP em GTP da protena Gq , causando a dissociao desta do receptor. Ela vai activar a fosfolipase C que actua sobre o fosfatidilinositol 4,5- bisfosfato, clivando a ligao fosfodister entre o inositol 4,5 bisfosfato e o glicerol, originando dois mensageiros secundrios: diacilglicerol e inositol 1,4,5-trifosfato (IP3). Este ltimo difunde para o citosol, ligando-se a receptores especficos do retculo endoplasmtico, abrindo canais de Ca 2+, aumentando a concentrao deste io no citoplasma. Entretanto, devido sua natureza lipdica, o diacilglicerol movimenta-se livremente na zona hidrofobica da membrana celular, onde se vai ligar protena cinase C, e em conjunto com o aumento da concentrao de Ca2+ vai activa-la. Caso o clcio libertado pelo retculo endoplasmtico no seja suficiente, o IP3 desencadeia a abertura dos canais de Ca2+ da membrana celular. Por fim a protena cinase C vai fosforilar resduos Ser e Thr de protenas alvo, desencadeando assim a resposta celular. Este mecanismo chama-se cascata dos fosfoinositois. Outro grupo de sinais metablicos de natureza lipdica so os eicosanoides, que funcionam como hormonas parcrinas e autcrinas, ou seja, actuam ou na clula que os produz ou nas clulas adjacentes, em vez de serem libertados para a circulao. Estes derivados de cidos gordos tm uma grande variedade de efeitos dramticos nos tecidos: esto envolvidos no processo de reproduo; na inflamao, febre e dor associados a doena ou leso; na coagulao e regulao da presso sangunea; na secreo cida entre outras. So todos derivados do cido araquidnico, libertado por fosfolpidos de membrana, por aco da fosfolipase A2, em resposta a sinais hormonais. So compostos de 20 carbonos e existem 3 classes: Prostaglandinas, Tromboxanos e Leucotrienos. A formao dos dois primeiros inibida por drogas anti-inflamatrias no-esteoides, por inibio da enzima ciclooxigenase, que cataliza um dos primeiros passos da formao destes dois compostos. As Prostaglandinas contm um anel de 5 carbonos, originado pela ligao dos carbonos 8 e 12 do cido araquidnico. Existem dois grupos de Prostaglandinas: PGE (solvel em ter) e PGF (solvel em tampo fosfato), cada um destes contendo numerosos subtipos. Actuam em numerosos tecidos por regulao da sntese de cAMP, e dado que este composto o mediador da aco de diversas hormonas, as Prostaglandinas afectam uma grande variedade de funes celulares tais como a contraco do msculo liso do tero, elevao da temperatura corporal (febre) e causam inflamao e dor. 99

Os tromboxanos tm um anel de 6 membros, contendo um ter, formado pela ligao dos carbonos 8 e 12 do cido araquidnico. So produzidos pelas plaquetas e actuam na formao de cogulos sanguneos e na reduo do fluxo de sangue para o local de coagulao. Os Leucotrienos tm uma srie de ligaes duplas conjugadas. Foram inicialmente descobertas nos leuccitos e so potentes sinais biolgicos, com diversas aces, nomeadamente a contraco dos msculos que envolvem as vias respiratrias, podendo causar ataques asmticos, por excesso de produo. Os esfingolpidos de membrana tambm funcionam como fonte de sinais intracelulares. A estrutura de um esfingolpido consiste na ligao de um cido gordo ao carbono 2 da esfingosina, e ao carbono 3 encontra-se ligado um grupo substituinte, por uma ligao ster. Os esfingolpidos originam-se atravs de reaces da ceramida (o grupo substituinte um tomo de H). Nomeadamente, a esfingomielina (constituinte das bainhas de mielina que revestem o axnio), forma-se atravs da reaco da ceramida com a fosfatidilcolina, originando tambm diacilglicerol, um importante segundo mensageiro como j foi falado (o grupo substituinte da esfingomielina a fosfocolina). A ceramida e a esfingomielina so reguladores potentes de protenas cinases, e a primeira est envolvida na regulao da diviso, diferenciao e migrao celular, e tambm na apoptose. Por fim falando de hormonas esterides. So produzidas essencialmente nas gnadas e suprarenal, sendo libertadas para a circulao sangunea, onde se ligam a transportadores proteicos, sendo assim transportadas para os tecidos alvo. So derivados do colesterol, mais concretamente da pregnolona. Dada a sua natureza lipdica (as hormonas esteroides mantm o ncleo esterol do colesterol) difundem facilmente atravs da bicamada fosfolipdica, ligandose a receptores especficos do ncleo, desencadeando mudanas na expresso gentica e metabolismo. Dada a sua elevada especificidade para esses receptores, apenas quantidades mnimas destas hormonas so produzidas.

b) Converso enzimtica do colesterol em precursores e hormonas esteroides-estimulao, etapas, localizao celular e caracterizao dos produtos
A sntese de hormonas esterides tem como precursor principal o colesterol, composto por vinte e sete tomos de carbono numerados segundo a ordem apresentada no diapositivo 13, esta ordem bastante importante para perceber os mecanismos de formao deste tipo de hormonas. Os locais de sntese destas hormonas so principalmente: glndulas supra-renais, gnodas, fgado, pele e rins. A nvel celular os processos so idnticos nos vrios locais de sntese, o colesterol para esse processo provm em grande parte da poro deste que se encontra em circulao e da converso do piruvato atravs de um processo complexo que envolve o melonovato. A estimulao do processo de sntese de hormonas esterides da responsabilidade de hormonas proteicas hipofisrias, LH (Luteotropic hormone) no caso das gnodas e ACTH (adrenocorticotropic hormone) no caso das glndulas supra-renais e a angiotensina II, um pptido derivado da angiotensina que estimula especialmente a via dos mineralocorticides. A sntese desta classe de hormonas no se d apenas num organelo celular, normalmente esto envolvidos mitocndria e retculo endoplasmtico, como tal o colesterol (molcula hidrofbica) tem que atravessar regies em soluo aquosa (espao inter-membranar mitocondrial), para tal um complexo proteico denominado de StAR (steroidogenic acute regulatory, cuja sntese influenciada positivamente pelos factores estimulantes) liga-se ao colesterol tornando assim possvel a sua difuso atravs desses meios desfavorveis. 100

O mais complexo e principal rgo de produo so as glndulas supra-renais. Nestas estruturas mais precisamente no seu cortx so sintetizados vrios tipos de hormonas esterides: mineralocorticides (mais abundantemente na zona glomerular do cortx) glicocorticides e andrognios (principalmente nas zonas reticular e fasciculada), pode tambm haver formao de estrognios sendo esta a principal fonte deste tipo de hormonas aps a menopausa. O primeiro passo na sntese de hormonas esteris a converso de colesterol em pregnenolona, esta reaco mediada pelo complexo enzimtico citocromo P450scc (side chain clivage) na membrana interna da mitocndria, esta reaco envolve duas hidroxilaes e uma clivagem da sequncia linear do colesterol, formando a pregnenolona uma molcula de 21 carbonos percursora de todas as hormonas esterides.

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Como j referimos existe uma especializao das regies do cortx supra-renal, na zona glomerular d-se a sntese de mineralocorticides, que tem reaces em comum com os glicocorticides que por sua vez tm com os andrognios. A verdade que no podemos distinguir claramente trs vias, mas sim um sistema complexo em que mesmo subprodutos tm actividade, sendo os produtos finais apenas compostos mais activos resultantes de reagentes menos activos, como o caso da corticosterona que tem mais carcter de glicocorticide que de mineralocorticide, mas que o percursor da aldosterona. Tomando mesmo este exemplo, podemos ver que atravs do complexo enzimtico 3 (OHSD) e a 5,4 isomerase a pregnenolona transformada em progesterona que depois hidroxilaes nos carbonos 11, 21, no sendo possvel seguir a via dos glicocorticides porque a zona glomerular no possui o complexo enzimtico citocromo P450 C17 capaz de hidroxilar o carbono 17, responsvel pelo carcter de glicocorticide da molcula. Porm esta zona possui um complexo mitocondrial, aldosterona sintase capaz de hidroxilar o carbono 18 convertendo assim a corticosterona num mineralocorticide mais

Via dos mineralocorticides Via dos glicocorticides Via dos andrognios

poderoso. Quanto zona fasciculada e zona reticular sabemos que possuem uma estrutura enzimtica conhecida como citocromo P417 C17, constitudo por uma liase e hidroxilase que actuam no carbono 17 da molcula, estas enzimas vo ser cruciais tanto na via dos andrognios como na via dos glicocorticides, formando cortisol o glicocorticide mais potente na espcie humana e o principal percursor de andrognios supra-renal a desidroepiandrosterona. Normalmente a via dos glicocorticides predomina em relao dos andrognios, mas problemas a nvel de umas das enzimas da segunda podem provocar excesso de produo de andrognios, os andrognios supra-renais so normalmente transformados na mais potente testosterona atravs da reduo do seu percursor, androstenediona, no carbono 17, apenas pequenas quantidade so produzidas nos nas suprarenais sendo a maioria nos testculos. A nvel testicular a sntese d-se nas clulas de Leydig, o mecanismo bastante parecido com que ocorre nas supra-renais, sendo o estimulador neste caso a LH, a nvel testicular a formao de testosterona pode seguir duas vias, a Via da Progesterona ou 4 via da desidroepiandrosterona ou 5, sendo a segunda preferencial. Como produto final da testosterona temos que do seu metabolismo pode resultar a Dihidrotestosterona (DHT), ou 17-cetoesteris, os segundos acontecem no fgado e so compostos com muito menos poder que o seu percursor, no entanto o primeiro muito mais potente que a testosterona sendo alis a sua forma activa em locais como a prstata, rgos genitais e certas zonas da pele. A reaco mediada pela 5- reductase com NADH envolvido. Os estrognios so uma famlia de hormonas derivadas dos andrognios por aromatizao, podem ser produzidos nas glndulas supra-renais, clulas adiposas, fgado, placenta e nas mulheres em idade frtil nos folculos. A origem dos estrognios perifricos 102

(fora das gnodas) aromatizao de testosterona e seus percursores, sendo de principal importncia em indivduos que no possuem por alguma razo esteroido-gnese folicular. Em termos foliculares a provenincia dos estrognios resulta de uma interaco entre as clulas da teca e da camada granulosa na qual as primeiras produzem andrognios, em especial testosterona que as segundas sintetizam em estrognios em especial o 17estradiol.

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