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O Papel dos Fitoqumicos na Quimiopreveno do Cancro

The Role of Phytochemicals in Cancer Chemoprevention

Milna Sales Henriques Batista Orientado por: Dr. Themudo Barata

Monografia
Porto, 2010

O papel dos Fitoqumicos na quimiopreveno do cancro ndice

ii

Lista de Abreviaturas .............................................................................................. iii Resumo ................................................................................................................... v Abstract .................................................................................................................. vi Introduo............................................................................................................... 1 1. Fitoqumicos - classificao ................................................................................ 4 2. Quimiopreveno - definio e perspectiva histrica ......................................... 8 3. O processo de carcinognese ............................................................................ 9 4 Mecanismos envolvidos na quimiopreveno do cancro ................................... 10 4.1 Bloquear a fase de iniciao da carcinognese ............................................. 11 4.1.1 Balano espcies reactivas de oxignio/antioxidantes.............................. 11 4.1.2 Induo de enzimas envolvidas na destoxificao................................... 12 4.1.3 Regulao da via de sinalizao do factor de transcrio Nrf2 ................ 13 4.1.4 Diminuio da Inflamao ........................................................................ 17 4.2 Bloquear a fase de promoo da carcinognese ........................................... 19 4.2.1 Induo da apoptose................................................................................ 19 4.3 Bloquear a fase de progresso da carcinognese ......................................... 23 4.3.1 Inibio da angiognese .......................................................................... 23 5. Biodisponibilidade dos fitoqumicos .................................................................. 25 5.1 Biodisponibilidade da EGCG, da curcumina e dos isotiocianatos ............... 28 6. Efeitos sinrgicos dos fitoqumicos ................................................................... 31 Discusso e Concluses ...................................................................................... 32 Referncias Bibliogrficas .................................................................................... 35 ndice de Anexos .................................................................................................. 38

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O papel dos Fitoqumicos na quimiopreveno do cancro Lista de Abreviaturas

iii

ADN cido Desoxirribonucleico ARE/EpRE - (Antioxidant response elements/electrophile response element) Elemento de resposta a antioxidantes/elemento de resposta a electroflicos bZIP (basic leucine zipper) CYP 450 - citocromo P 450 COX ciclooxigenase COX-1 - Ciclooxigenase 1 COX-2 - Ciclooxigenase 2 CNC - Cap n collar DR (Death receptor) - Receptor de morte EGCG - Epigalocatequina-3-galato -GCS (gamma-glutamylcysteine synthetase) Sinttase da - Glutamil cistena GST - Glutationa S-transfrase HO 1 heme oxigenase 1 iNOS (Inducible nitric oxide synthase) - Sintetase do xido ntrico induzida Keap 1(Kelch ECH Associating Protein 1) Neh (Nrf2-ECH homology) NF-kB (Nuclear factor kB) - Factor de transcrio nuclear kB NO (nitric oxide) - xido ntrico NQO - NADP(H):quinona oxidoreductase Nrf2 (NF-E2-related factor 2) factor de transcrio NADP(H) Nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato (forma reduzida) PI3K-Akt - cnase do trifosfato de inositol

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ROS/RNS (reactive oxygen species/reactive nitrosative species) - Espcies reactivas de oxignio/ espcies reactivas de azoto TNF- (Tumor necrosis factor-) - Factor de necrose tumoral TNFR (Tumor necrosis factor- receptor ) - Receptor do factor de necrose tumoral VEGF (vascular endothelial growth factor) factor de crescimento

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Resumo Apesar dos progressos significativos no conhecimento da biologia do cancro, o nmero de mortes causadas por esta temvel doena permaneceu inflexvel at ao final do sculo vinte, seguido de uma tendncia invertida apenas nos ltimos anos. Os achados epidemiolgicos relativamente consistentes de que o consumo de frutos, hortcolas e cereais inteiros, est fortemente associado reduo do risco de cancro, originaram a hiptese de que especficos metabolitos secundrios das plantas biologicamente activos, designadamente fitoqumicos, podem ser responsveis pela aco preventiva observada. Os fitoqumicos podem ser to diversos como os cidos fenlicos, os taninos, os estilbenos, as cumarinas e os flavonides. Estes compostos alimentares oferecem um grande potencial na luta contra o cancro ao inibir processos carcinognicos atravs da regulao da homeostasia da clula e da maquinaria de morte celular. O presente trabalho pretende elucidar alguns aspectos relevantes dos

conhecimentos emergentes sobre os mecanismos celulares que parecem estar envolvidos na quimiopreveno do cancro pelos fitoqumicos.

Palavras-Chave: fitoqumicos, cancro, carcinognese, quimiopreveno, enzimas destoxificantes, apoptose, sinalizao celular, biodisponibilidade.

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vi

In spite of significant progress in our understanding of the biology of cancer, the number of death caused by this dreaded disease remained unabated until the end of the twentieth century, followed by a reverse trend only for the past several years. The relatively consistent epidemiological finding that consumption of fruits, vegetables and whole grains is strongly associated with reduced risk of cancer, has led to the hypothesis that specific biologically-active plant secondary metabolites, namely phytochemicals, may be responsible for the observed prevention action. Phytochemicals can be as diverse as phenolic acids, tannins, stilbenes, coumarins and flavonoids. These dietary compounds offer great potential in the fight against cancer by inhibiting the carcinogenesis process through the regulation of cell homeostasis and cell-death machineries. The aim of the present work is to elucidate some important aspects of emerging knowledge about molecular mechanisms that are likely to be involved in cancer chemoprevention of phytochemicals.

Keywords:

phytochemicals,

cancer,

carcinogenesis,

chemoprevention,

detoxifying enzymes, apoptosis, cellular signalling, bioavailability.

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Introduo Desde Hipcrates (460-377 A.C.) que se conhece a correlao entre alimentao e sade, o qual reconheceu que as diferenas nas doenas dependem dos nutrimentos.(1) No entanto, foi apenas na ltima dcada que vrios estudos epidemiolgicos indicaram uma associao positiva entre o consumo de frutos, hortcolas e cereais inteiros, e uma menor incidncia de cancros do estmago, esfago, pulmes, faringe e cavidade oral, endomtrio, pncreas e clon.(1-5) Estes estudos apoiam a ideia de que mais de 70% de todos os tipos de cancro no so dependentes de um fundo gentico e que podem ser prevenidos atravs de mudanas de estilos de vida, tal como uma alimentao adequada. Com base nestas evidncias cientficas, vrios programas

educacionais deram incio na Europa e na Amrica para promover o consumo de vegetais a fim de diminuir a incidncia do cancro. (2) Contudo, recentemente parece ter ocorrido uma mudana de opinio no sentido de que as evidncias so menos fortes do que originalmente se pensava, sobretudo devido a vrios estudos prospectivos de grande escala que, pondo em evidncia as principais causas de cancro nos pases ocidentais, no encontraram nem efeitos protectores, nem efeitos dbeis, comparativamente queles esperados com base nos estudos prvios de caso-controlo.(2,
4)

No entanto, embora tenham sido colocados em

questo os reais efeitos benficos de uma alimentao rica em vegetais na proteco contra o cancro,(2,
4)

o interesse nos efeitos biolgicos dos seus

constituintes aumentou. As evidncias emergentes sobre uma variedade de mecanismos anti-carcinognicos potencialmente importantes, estimulou o

interesse no conceito de quimiopreveno, concentrando as atenes em particulares frutos e hortcolas ricos em compostos biologicamente activos, Milna Batista 2010

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designados de fitoqumicos.(4) Estes compostos foram seleccionados ao longo da evoluo e armazenados nos tecidos para defender a planta de patogneos ou predadores.(3,
6)

O ser humano foi exposto a uma variedade de fitoqumicos

durante milhes de anos: atravs da cautelosa seleco de espcies de plantas para a sua alimentao, conseguiu evitar as que causam toxicidade aguda. No entanto, vrios fitoqumicos presentes nos alimentos vegetais ainda afectam a sade humana positivamente ou negativamente a longo prazo. Devido sua grande diversidade, os fitoqumicos podem atingir uma ampla variedade de funes fisiolgicas e de vias metablicas.(3) Vrios fitoqumicos tais como os curcuminides da crcuma, os glucosinolatos dos vegetais crucferos, as isoflavonas da soja ou o licopeno do tomate, evidenciam propriedades anticancergenas. Estes compostos actuam atravs de diversos mecanismos celulares e moleculares, incluindo a estimulao de sistemas destoxificantes, a inibio do ciclo de proliferao celular, a induo da apoptose, a

imunomodulao ou inibio da angiognese. Numerosos relatrios destacam as propriedades dos fitoqumicos antioxidantes como sequestradoras de radicais livres, tais como os polifenis. Parece que os efeitos biolgicos desses antioxidantes so diversos e envolvem respostas mediadas pelas clulas e a modulao de vrias vias de sinalizao celular. As hipteses sobre os mecanismos de aco dos fitoqumicos tm procedido frequentemente do conhecimento das suas estruturas qumicas e das suas propriedades fsicoqumicas. Presentemente, o desafio est em interpretar as complexas relaes entre os fitoqumicos presentes na alimentao humana e a sade, tendo em conta, quer a diversidade das suas estruturas qumicas, quer a complexidade dos seus efeitos metablicos.(3) Actualmente, vrias centenas de molculas so

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estudadas como potenciais agentes quimiopreventivos e mais de 50 compostos esto a ser testados em ensaios clnicos. Apesar destes esforos, a quimiopreveno representa um tpico altamente controverso por questes ticas, econmicas e cientficas.(2) . A carcinognese geralmente um processo complexo e multi-etpico no qual ocorrem alteraes moleculares e celulares distintas. A fim de simplificar a compreenso das diferentes opes possveis para a quimiopreveno no desenvolvimento e na progresso do cancro, so descritas as seguintes etapas: iniciao, quando as clulas esto expostas a um agente carcinognico; promoo, quando as clulas anormais persistem e iniciam uma etapa pr-neoplsica; progresso, fase final da tumorignese, quando ocorre crescimento celular descontrolado. Um agente quimiopreventivo do cancro poderia ser efectivo em qualquer uma das etapas clssicas da carcinognese (iniciao, promoo, progresso). A interveno na carcinognese multi-etpica atravs da modulao das vias de sinalizao intracelulares fornece a base da quimiopreveno com uma vasta variedade de fitoqumicos alimentares. As clulas cancergenas adquirem resistncia apoptose atravs da expresso aumentada de protenas anti-apoptticas, e/ou por uma represso ou mutao de protenas apoptticas. Por conseguinte, uma excelente abordagem para inibir a promoo e a progresso da carcinognese, e para remover clulas pr-malignas e malignas do organismo, seria pela induo da apoptose ou da paragem do ciclo celular atravs de compostos quimiopreventivos O alcance da eficcia desses agentes pode ser profundo, uma vez que o curso natural do total desenvolvimento de um cancro clinicamente evidente relativamente longo e por vezes demora dcadas.(7)

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O papel dos Fitoqumicos na quimiopreveno do cancro 1. Fitoqumicos: classificao

Estima-se que os frutos, hortcolas e cereais inteiros, tenham algures entre 5.000 a 25.000 fitoqumicos individuais, dos quais apenas uma pequena fraco foi identificada. Com a presena de milhares de fitoqumicos, imperativo classificar os diferentes agentes para melhor estudar as complexas misturas encontradas nos vegetais.(8) Os fitoqumicos apresentam uma grande diversidade de estruturas qumicas. Estes compostos podem ser classificados em vrios grupos, sendo os principais: compostos fenlicos, terpenides, alcalides e outros compostos nitrogenados, hidratos de carbono e lpidos.(3) (anexo 1) Os compostos fenlicos, frequentemente referidos como polifenis, constituem um dos grupos mais numerosos de metabolitos secundrios das plantas. No so biossintetizados em mamferos, sendo assim necessria a sua ingesto. Em resultado da sua ubiquidade nas plantas, estes compostos so parte integral da alimentao humana. Nas plantas, estes constituintes participam de uma forma decisiva na morfologia (ex: pigmentao), crescimento, reproduo e resistncia a patogenias e predadores (atravs do aumento da adstringncia, o que leva a que a sua ingesto seja pouco atractiva).(9) Estruturalmente, os compostos fenlicos compreendem um anel aromtico comportando um ou mais grupos hidroxilo substituintes, originando desde compostos fenlicos simples at molculas altamente polimerizadas.(10) Os compostos fenlicos podem ser classificados em diferentes classes de acordo com a disposio da cadeia carbonada ligada ao anel aromtico (C6)(9): flavonides, compostos cumarnicos, taninos, cidos fenlicos e estilbenos.(2) Grande parte das pesquisas realizadas sobre os efeitos fisiolgicos dos compostos fenlicos centra-se no estudo dos flavonides. Todos os flavonides

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possuem o mesmo elemento estrutural, o difenilpropano, formado por dois anis aromticos ligados por uma cadeia de trs tomos de carbono (C6-C3-C6) que, geralmente constitui um heterociclo central contendo oxignio (11), e tm a presena de, pelo menos, trs hidroxilos fenlicos, um deles ligado a uma ose, quando sob a forma de hetersidos (substncias formadas pela condensao de uma ou mais oses, muitas vezes, a glucose, com um grupo no osdico denominado aglicnico ou genina).(9) Conhecem-se mais de 4000 compostos(11), sendo frequentemente encontrados no meio metablico na forma heterosdica. Contudo, tambm podem aparecer na forma livre (geninas - sem unidades de acar). Os hetersidos so normalmente solveis na gua ao contrrio das formas livres.(9) De acordo com as caractersticas estruturais so classificados em subclasses: flavanonas (naringenina, eriodictiol), flavonas (apigenina, luteolina), flavonis (quercetina, campferol, miricetina), flavanis ou catequinas

(catequina, epicatequina, epigalocatequina, epicatequina galato), antocianidinas (cianidina,malvidina), e isoflavonas ou isoflavonides (daidzena, genistena).(1112)

Os compostos cumarnicos derivam de lactonas dos cidos ortohidroxicinmico, estando presente em diferentes partes das plantas. O seu nome deve-se ao facto de ter sido primeiramente encontrada na espcie Coumarona odorata. Dos compostos cumarnicos mais conhecidos citam-se entre outros, a cumarina, a umbeliferona, a herniarina, o esculetol, etc. Apesar da grande predominncia de compostos cumarnicos simples no reino vegetal, outras subclasses destes compostos so encontrados de forma bastante diversificada entre a taxonomia botnica, como as furanocumarinas (bergapteno, xantotoxina), as piranocumarinas (visnadina) e as furanocromonas (quelina).(9, 12)

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Os taninos so compostos fenlicos com elevada massa molecular (entre 500 e 3000 daltons) e tm capacidade para formar complexos com protenas. A sua presena em folhas ou frutos confere caracterstica adstringente, importante como mecanismo de defesa geral da planta contra o ataque de insectos. Os taninos so comumente divididos em duas subclasses: os hidrolisveis (polisteres de cidos fenlicos) e os condensados ou proantocianidinas (de estrutura prxima dos flavonides), estes representados pelos taninos catquicos e as procianidinas oligomricas (caso da procianidina B-2) formadas por dois ou quatro monmeros da catequina ou da epicatequina. J os taninos hidrolisveis so sempre constitudos por steres de uma ose e de um nmero varivel de cidos fenlicos. Quando o cido glhico est presente origina os galhotatinos. O representante mais simples do grupo de taninos hidrolisveis o 1 O galoilD-glicopiranose (-glicogalina), identificado h mais de um sculo como produto natural.(9, 12) Os cidos fenlicos derivados dos cidos hidroxibenzicos ou dos cidos hidroxicinmicos so os cidos fenlicos mais comuns nas plantas. Os cidos hidroxicinmicos ocorrem mais frequentemente como steres simples ligados a cidos carboxlicos ou glucose, e os cidos hidroxibenzicos esto geralmente presentes sob a forma de hetersidos (ou glicosdeos). So representativos dos cidos hidroxicinmicos, o cido cafeico, o cido para-cumrico e o cido ferlico. De entre os derivados dos cidos hidroxibenzicos, temos o cido glhico (um dos constituintes dos taninos), o cido procatecico e o cido vanlico. (9-10, 12) Os estilbenos so compostos orgnicos que contm o 1,2-difeniletileno como grupo funcional. O resveratrol (3,5,4 -trihidroxiestilbeno) um membro dos estilbenos, sendo muito abundante nas uvas e moderadamente nos mirtilos e

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amendoins. Nas uvas, atinge a sua maior concentrao na casca (50 100 g por grama), constituindo os vinhos tintos a sua fonte predominante. O resveratrol pode apresentar-se quer na forma livre (configurao cis ou trans), quer na forma heterosdica. A partir do resveratrol podem formar-se naturalmente uma srie de anlogos, destacando-se o pteroestilbeno e o piceatanol. (10) Os terpenides, outra classe principal de fitoqumicos, tm caractersticas lipoflicas na natureza. Os terpenides apresentam unidades isoprnicas nas suas estruturas e so, por isso, conhecidos como isoprenides. Podem ser classificados de acordo com o nmero de unidades isoprnicas C5 incorporadas estrutura. (anexo 2) Dessa forma, os terpenides formam uma grande famlia de compostos estruturalmente diversos, destacando-se os monoterpenos (formados por duas unidades isoprnicas), os sesquiterpnicos (formados por trs unidades isoprnicas), os diterpenos (com quatro unidades isoprnicas), e os triterpenos (com 6 unidades isoprnicas). Os monoterpnicos e sesquiterpnicos so constituintes dos leos essenciais. Nos monoterpnicos, os hidrocarbonetos podem ser acclicos (mirceno, da folha do loureiro, etc.) ou monocclicos (limoneno, dos citrinos, etc.). Nos diterpenos podemos encontrar o Gingko biloba. Um exemplo dos triterpenos ser o giseng. Algumas transformaes nos esqueletos estruturais dos terpenides levam biossntese de classes de produtos naturais com propriedades fsico-qumicas e farmacolgicas prprias, como os esterides, vitaminas lipoflicas, grande parte dos leos essenciais, saponinas e glicosdeos cardiotnicos.(9, 12) Os alcalides so definidos como constituintes azotados, de origem nopeptdica, tendo aminocidos como precursores biossintticos. Encontram-se nas plantas, normalmente combinados com cidos orgnicos, formando sais solveis

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e so dotados de grande actividade biolgica. Quimicamente, os alcalides podem ser classificados de acordo com o aminocido precursor. A ttulo de exemplo, considera-se os seguintes tipos de estruturas para os quais se indica um alcalide representativo: purina (cafena) e quinolizidina (lupanina, do tremoo).(9, 12) No grupo de compostos nitrogenados incluem-se os glucosinolatos (sulfohetersidos), particularmente, os glucosinolatos alifticos (a mostarda-negra Brassica nigra) e os glucosinolatos indlicos (brcolo Brassica Oleraceae).(9, 13) 2. Quimiopreveno - definio e perspectiva histrica Quando Michael Sporn cunhou pela primeira vez em 1976 o termo quimiopreveno, referindo-se actividade da vitamina A e dos seus anlogos sintticos na preveno de certos tipos de cancro, ele originou um novo domnio na pesquisa do cancro.(2,
13-14)

De acordo com uma definio mais moderna e

completa, a quimiopreveno inclui o uso de agentes naturais ou farmacolgicos para suprimir, interromper ou inverter a carcinognese (15) nas suas fases iniciais. Nos ltimos 5 anos, o termo quimiopreveno passou de 4.000 para 10.000 referncias na Pubmed, e na actualidade geralmente utilizado para indicar a capacidade de uma molcula, no s prevenir, mas tambm curar o cancro.(2) Recentemente, o atributo quimiopreventivo tem sido associado a um contexto mais amplo, em concreto o estilo de vida, tal como uma alimentao adequada.(2,
13)

Ao longo dos anos, um vasto nmero de agentes quimiopreventivos presentes

em produtos naturais tem sido avaliado(8) atravs de diferentes abordagens experimentais: estudos epidemiolgicos; ensaios clnicos; estudos em modelos com animais em que a carcinognese induzida experimentalmente; testes in vitro em linhas celulares.(2) Mais recentemente, o foco tem sido orientado para os Milna Batista 2010

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alvos moleculares dos agentes quimiopreventivos no intuito de identificar os mecanismos de aco destes compostos bioactivos.(8) O Instituto Nacional do Cancro (NCI National Cancer Institute) americano, baseado em numerosos relatrios sobre a actividade anticancergena de molculas que ocorrem naturalmente, identificou 40 plantas comestveis possuindo potenciais compostos quimiopreventivos.(2) Desta forma, o instituto americano mantm uma base de recursos para fitoqumicos com potenciais propriedades quimiopreventivas. 1 3. O processo de carcinognese Actualmente, o conceito de carcinognese multi-etpica prope que o cancro desenvolvido ao longo de um perodo de tempo por acumulao de mutaes somticas numa nica clula, resultando em alteraes fenotpicas graduais, desde a clula normal pr-neoplsica, progredindo para a neoplsica. Estas diferentes etapas na carcinognese so geralmente descritas como: iniciao (dias), promoo (vrios anos) e progresso (1-5 anos). A iniciao irreversvel e inclui a alterao inicial ao nvel do cido desoxirribonucleico (ADN) pelos agentes carcinognicos qumicos ou fsicos.(2) O curso da transformao celular (ou iniciao) envolve a mutao gentica, o metabolismo carcinognico e a reparao deficiente do ADN. Nesta fase inicial, os carcinognicos ambientais (alimentares, tabaco, poluio) induzem uma ou mais mutaes simples, incluindo pequenas deleces nos genes que controlam o processo da carcinognese.(8) A promoo envolve mecanismos epigenticos, sendo um processo relativamente lento e reversvel. A fase de promoo caracterizada por uma

http://resresources.nci.nih.gov/database.cfm?id=1165

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desregulao das vias de sinalizao do controlo da proliferao celular e da apoptose, levando acumulao de divises anormais de clulas pr-malignas.(2,
8)

A progresso geralmente irreversvel e caracteriza-se pelas alteraes genticas no caritipo, as quais surgiram pela acumulao de genes mutados, resultando em anomalias cromossmicas. A fase de progresso desencadeia a ltima etapa da carcinognese com invaso, angiognese e potencial metastizao (8) A transformao de clulas pr-malignas para malignas envolve a activao de proto-oncogenes e/ou inactivao dos genes supressores tumorais. Ambos os tipos de genes, quando mutados, causam alteraes em processos celulares preponderantes, relacionados com o crescimento celular e a proliferao.(2) No desenvolvimento tumoral, as clulas tm de alcanar certas caractersticas para adquirir malignidade: capacidade de serem auto-suficientes, em termos de sinais de crescimento; potencial replicativo ilimitado; insensibilidade a sinais de paragem de proliferao; capacidade de escapar apoptose; capacidade de induzir e manter a angiognese; capacidade de invaso de tecidos e de metastizao.(5) 4. Mecanismos envolvidos na quimiopreveno do cancro Muitos fitoqumicos presentes numa alimentao rica em frutos e hortcolas tm sido propostos como potenciais agentes quimiopreventivos.(2) Segundo a classificao proposta em 1985 por Lee Wattenberg, os fitoqumicos podem agir como agentes bloqueadores, imediatamente antes ou durante a iniciao da carcinognese ou como agentes supressores, actuando no decorrer das fases de promoo e de progresso. Os agentes bloqueadores previnem a activao Milna Batista 2010

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metablica de pr-carcinogneos ou aumentam as actividades enzimticas na destoxificao carcinognica (biotransformao) para uma eficiente eliminao de carcinogneos ou espcies reactivas de oxignio/azoto (reactive oxygen species/reactive nitrosative species - ROS/RNS). Os agentes supressores inibem a promoo e a progresso do cancro aps a formao de clulas prneoplsicas, interferindo com a regulao do ciclo celular, os sinais de transduo, a regulao da transcrio e a apoptose.(2,
4-5, 14, 16)

Alguns agentes

quimiopreventivos podem funcionar, quer como bloqueadores, quer como supressores atravs de mecanismos distintos.(14) 4.1 Bloquear a fase de iniciao da carcinognese 4.1.1 Balano espcies reactivas de oxignio/antioxidantes O balano entre a carga oxidativa e a defesa antioxidante no organismo decisivo na manuteno da integridade e funcionalidade das membranas, das protenas e dos cidos nucleicos.(17) As ROS incluem uma variedade de molculas qumicas diversas extremamente instveis, tais como os anies superxido, os radicais hidroxilo e o perxido de hidrognio. Estes ltimos so geradores de radicais hidroxilo e portanto susceptveis de causar danos no ADN. Os radicais superxido e hidroxilo podem ser formados exogenamente ou no interior das clulas a partir das enzimas citoslicas (ex: oxidases do NADPH) e da cadeia respiratria na mitocndria.(2) A formao de ROS inevitvel em organismos aerbios, estando a sua produo fisiolgica associada a importantes processos celulares. As clulas mantm o seu potencial redox atravs de um sistema intracelular de defesas antioxidantes, em concreto, enzimas como a catalase, a dismtase do superxido, a peroxdase da glutationa, a

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Alm de ocorrer uma produo de ROS

atravs do metabolismo oxidativo, estas espcies reactivas tambm podem resultar da destoxificao de compostos xenobiticos.(8) A forma mais efectiva de prevenir a carcinognese bloquear a sua iniciao, prevenindo os danos no ADN provocados pelas ROS. Por exemplo, o sequestro directo de ROS altera o metabolismo das molculas pr-carcinognicas no sentido de que no so convertidas em espcies carcinognicas pelas enzimas de metabolizao da fase I (em particular o citocromo P 450 CYP 450), ou ento, so removidos da clula por uma segunda linha de defesa que envolve enzimas de conjugao da fase II (ex: glutationa S-transfrase (GST), glicuronidases e sulfotransfrases). Tm sido classificados vrios fitoqumicos como anti-iniciadores, incluindo a genistena, os indis, o resveratrol e os compostos sulfurosos alilo.(5, 8) 4.1.2 Induo de enzimas envolvidas na destoxificao As enzimas de metabolizao de xenobiticos tm um papel fundamental na activao e/ou destoxificao de carcinogneos.(19) Os agentes bloqueadores (fitoqumicos) contrapem a actividade de potenciais carcinogneos exgenos ou endgenos, suprimindo as reaces da fase I e/ou activando as reaces da fase II, ambas catalizadas por enzimas metablicas. Estas enzimas esto envolvidas nas duas principais reaces de biotransformao: as reaces da fase I que envolvem reaces de oxidao, reduo e hidrlise de xenobiticos (nomeadamente frmacos, toxinas e carcinogneos) e as reaces da fase II que implicam a conjugao de molculas hidrossolveis (glicuronidao, sulfatao, acetilao, metilao e conjugao com a glutationa) com xenobiticos.(2) Estes dois grupos de enzimas tambm so conhecidas como enzimas activadoras e destoxificantes, respectivamente, com Milna Batista 2010

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base nas consequncias biolgicas das reaces enzimticas. A famlia do CYP 450, um grupo importante de monooxigenases, metaboliza muitos xenobiticos e cataliza vrias reaces da fase I. Os produtos do metabolismo da fase I so muitas vezes intermedirios genotxicos altamente reactivos que formam substratos para as enzimas da fase II, ou interagem com o ADN e outras protenas, podendo causar mutaes e/ou alteraes das vias de sinalizao. Alguns fitoqumicos induzem a activao da transcrio de enzimas da fase I ou II, atravs do elemento de resposta aos xenobiticos (xenobiotic response

element - XRE) e do elemento de resposta aos antioxidantes (Antioxidant response elements - ARE), respectivamente. Os agentes bloqueadores que induzem apenas enzimas destoxificantes so denominados de indutores monofuncionais (sulforafano, tert-butihidroquinona), enquanto que os compostos que induzem, simultaneamente, as monooxigenases CYP e as enzimas destoxificantes so designados de indutores bifuncionais (indol-3-carbinol). (2, 4, 16) 4.1.3 Regulao da via de sinalizao do factor de transcrio Nrf2 A propriedade dos agentes quimiopreventivos, quer como indutores monofuncionais, quer como bifuncionais de enzimas metabolizadoras de frmacos, indicou a existncia de mltiplos mecanismos regulatrios na expresso de genes das enzimas destoxificadoras. De entre todas estas enzimas, a GST e a NADP(H):quinona oxidoreductase (NQO) tm uma reaco muito aumentada ao estmulo qumico e ambiental, especialmente os indutores monofuncionais. O estudo gentico da regio promotora dos genes da GST e da NQO levaram descoberta de uma sequncia promotora (enhancer), nomeadamente o elemento de resposta a antioxidantes/elemento de resposta a electroflicos (Antioxidant response elements/electrophile response element Milna Batista 2010

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ARE/EpRE). As evidncias indicam que esta sequncia ARE/EpRE tem um papel central na regulao do sistema de defesa celular e est fortemente relacionada com os efeitos citoprotectores de agentes indutores quimiopreventivos

alimentares, especialmente os indutores monofuncionais.

Esforos no sentido

de identificar protenas ligadas ao ARE, revelaram a existncia de um factor de transcrio, NF-E2-related factor 2 (Nrf2), o qual tem um papel determinante na regulao da expresso de genes mediada pelo ARE.(2,
16)

Vrias protenas tm

sido identificadas como reguladores-chave da activao do ARE, mas a descoberta do Nrf2 abriu caminho para elucidar o mecanismo de activao do mesmo. Por essa razo, no ponto seguinte deste trabalho irei incidir sobre este factor de transcrio. O Nrf2 um factor de transcrio da famlia Cap n collar (CNC) e contm um domnio de ligao ao ADN, basic leucine zipper (bZIP). O Nrf2 contm seis domnios altamente conservadores, designadamente, o Nrf2-ECH homology (Neh) 1 at ao Neh 6. De entre estes domnios interessa destacar os seguintes: o Neh 1, que corresponde regio CNC e ao domnio bZIP, necessrios para a ligao ao ADN e para a dimerizao com outros factores de transcrio; o domnio Nh2, que permite a ligao com o domnio Kelch ECH Associating Protein 1(Keap 1), um regulador negativo do Nrf2; e o Neh3, necessrio para a activao transcricional. O papel preponderante que o Nrf2 desempenha na regulao da expresso de muitas enzimas antioxidantes e destoxificantes tem sido verificado em vrios estudos in vivo com ratinhos deficientes (Knockouts) em Nrf2, nos quais a expresso das enzimas referidas foi severamente suprimida. Verificou-se adicionalmente que os ratinhos Knockout manifestaram uma susceptibilidade aumentada aos carcinogneos e que ficaram refractrios aos

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O papel dos Fitoqumicos na quimiopreveno do cancro efeitos quimioprotectores de compostos quimiopreventivos.(6,


20)

15 Tal como

mencionado anteriormente, muitos fitoqumicos podero exercer os seus efeitos quimiopreventivos bloqueando a etapa de iniciao da carcinognese. Para um subconjunto destes compostos, a quimiopreveno sobretudo originada pela induo dos genes reguladores Nrf2/ARE. Sob condies basais, em que se mantm nas clulas a homeostasia do sistema redox, o Nrf2 sequestrado pelo Keap 1, o seu repressor citoslico, e fica bloqueado no citoplasma como um complexo inactivo. O heterodmero Nrf2-Keap 1 funciona como um sensor intracelular contra as alteraes nas concentraes de electrfilos ou de ROS. O Nrf2 uma molcula de semi-vida muito curta, em que a maior parte ubiquitinada, tendo como destino a degradao proteossomal mediada pelo Keap 1. Da que em condies basais, o Nrf2 uma protena muito instvel, e est em constante renovao porque o Keap 1 incide activamente sobre ele para ubiquitinao e degradao. Esta instabilidade um sistema de feed-back negativo, elaborado para prevenir um excesso de acumulao de antioxidantes na clula.(21) Em resposta aos indutores do Nrf2 (stresse oxidativo ou compostos quimiopreventivos), este fosforilado e dissocia-se da protena inibidora Keap 1. A dissociao do complexo Nrf2-Keap 1 um pr-requisito para a translocao nuclear. Uma vez no ncleo, o Nrf2 liga-se ao ARE em associao com a protena Maf, activando a expresso dos genes-alvo. (anexo 3) Atravs da induo dos genes das enzimas antioxidantes e

destoxificadoras da fase II, os fitoqumicos aumentam a destoxificao de prcarcinogneos ou carcinogneos e protegem as clulas normais dos danos provocados por electrfilos e intermedirios reactivos de oxignio, portanto,

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diminuindo a incidncia da iniciao e reduzindo o risco de cancro. Alguns exemplos de fitoqumicos indutores do Nrf2 incluem o sulforafano (vegetais crucferos), a curcumina (aafro-da-ndia), a epigalocatequina-3-galato (EGCG)/ (ch verde), o resveratrol (uvas), os compostos cinamonil (canela), o zerumbone (gengibre), os compostos organosulfurados (do alho), e o licopeno (tomate). Por exemplo, o sulforafano (isotionianato) demonstrou capacidade de aumentar os nveis da quinona reductase, da uridina difosfato glucuronil transfrase (UDPGT), da GST e da heme oxigenase 1 (HO 1). Estes resultados esto relacionados com o facto do sulforafano estabelecer uma ligao covalente com os grupos tiol do Keap 1, permitindo a libertao do Nrf2 com subsequente localizao nuclear. Alm disso, o sulforafano ainda suprime a degradao proteossomal. Tambm foi observado que os isotiocianatos induzem a activao do Nrf2 atravs do aumento da fosforilao, levando acumulao nuclear, mas teve pouco efeito no atraso da degradao.(20) Os compostos quimiopreventivos podem igualmente causar directamente a clivagem da ponte dissulfdica entre o Nrf2 e o Keap-1. (6, 22) Embora o Keap 1 seja o maior regulador da activao do Nrf2, existem mais evidncias indicando mltiplos nveis de regulao do Nrf2. Por exemplo, a fosforilao do Nrf2 por vrias cnases, de entre as quais a cnase da protena C (PKC) e a cnase do fosfatidilinositol 3 (PI3K).(22) Desde a descoberta do Nrf2, diversos estudos tm demonstrado o seu papel positivo na proteco contra o cancro e doenas relacionadas com o stress oxidativo. At aqui, o principal foco da pesquisa tem sido a procura de activadores do Nrf2 para quimiopreveno, contudo, recentes descobertas sugerem que existe um lado negro do Nrf2. Estudos in vitro mostram que a expresso aumentada do Nrf2 pode levar a um aumento de protenas intracelulares do

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balano oxidativo, de enzimas destoxificadoras da fase II e de transportadores, os quais podem fornecer, s clulas cancergenas, vantagens no crescimento e causar resistncia s quimioterapias.(22) 4.1.4 Diminuio da Inflamao Desde longa data se reconhece que a inflamao um factor de risco para determinados cancros. Um exemplo evidente o aumento de risco do cancro colo-rectal associado doena inflamatria intestinal.(23) A inflamao por si s no causa cancro; as mutaes e as alteraes epigenticas, decorrentes da exposio ambiental ou de alteraes imunitrias, concorrem para o processo carcinognico. Vrios mediadores pr-inflamatrios, tais como as citocinas, as quimiocinas, as prostaglandinas, o xido ntrico e os leucotrienos desregulam as cascatas de sinalizao nas clulas, o que contribui para o desenvolvimento de neoplasmas. Existem igualmente evidncias circunstanciais de que a inflamao sistmica crnica, associada talvez a factores metablicos adversos, pode ser um meio condutor para cancros do tracto digestivo. Estas linhas de evidncia focaram a ateno nos sinais moleculares associados inflamao e nos fitoqumicos que os modulam.(4) Por conseguinte, nessa rea de pesquisa do cancro inclui-se a clarificao dos mecanismos de sinalizao intracelulares envolvidos na activao do factor de transcrio nuclear kB, Nuclear Factor-kB (NF-kB), e a induo da ciclooxigenase 2 (COX-2) e da sintetase do xido ntrico induzida (inducible nitric oxide synthase iNOS), e como que eles influenciam o processo inflamatrio. O NF-kB muitas vezes visto como um elemento decisivo para estabelecer o elo entre a inflamao e o cancro.(17) O NF-kB um factor de transcrio sensvel ao sistema redox,
(6, 24)

encontrando-se normalmente no
6, 17)

citoplasma como parte de um complexo inactivo,(4,

mas quando as clulas Milna Batista 2010

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recebem o sinal (radicais livres, estmulo inflamatrio, carcinogneos, promotores tumorais, endotoxinas, e radiao) que activa a via de sinalizao do NF-kB,(6) este move-se para o ncleo(4, 6, 17) onde vai induzir a expresso de mais de 200 genes. Estes genes, no s afectam a inflamao como tambm esto associados apoptose, proliferao e metastizao.(4,
17)

Muitos desses

genes-alvo activados pela via do NF-kB so elementos-chave no estabelecimento de muitos cancros agressivos.
(17)

Uma srie de fitoqumicos, incluindo o

resveratrol, o limoneno, a glicirrizina (alcauz), o gingerol, o indol-3-carbinol, a genistena, a apigenina e outros mais, tm demonstrado inibir a actividade do NFkB em diferentes etapas da sua via reguladora.(4) Por exemplo, a curcumina suprime a produo do factor de necrose tumoral (tumor necrosis factor- TNF-), uma citocina pr-inflamatria que leva activao da cnase da protena reguladora IkB, necessria translocao do NF-kB para o ncleo
(4, 6)

; enquanto

que o cido cafeico impede especificamente a ligao do NF-kB sua sequnciaalvo no ADN. Os efeitos a jusante dos inibidores do NF-kB so a diminuio da expresso das enzimas-chave pr-inflamatrias como a iNOS e a COX-2.(4) A ciclooxigenase (COX) existe em duas isoformas: a COX-1 e a COX-2, as quais tm diferentes distribuies nos tecidos e funes fisiolgicas. A COX-1 constitutivamente expressa e produz prostaglandinas essenciais agregao plaquetria e manuteno da integridade da mucosa gstrica, enquanto que a COX-2 pr-inflamatria e apenas expressa em resposta a certos estmulos, tais como mitognios, citocinas, factores de crescimento, ou hormonas.(4, 6) de referir um dado significativo sobre o efeito inibitrio da quercetina na transcrio da COX-2, no s in vitro, como tambm in vivo.(4, 17)

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A iNOS, predominantemente localizada nos astrcitos e na microglia, cataliza a produo de xido ntrico (NO), um potente mediador inflamatrio. O excesso de produo de NO mediado pela iNOS est envolvido em perturbaes inflamatrias e imunolgicas, cancro, entre outros. (6) Tm sido investigados vrios fitoqumicos pelos seus efeitos inibitrios sobre o NO, de entre os quais a curcumina, o gingerol e a quercetina. A supresso do NO poder provavelmente reflectir a inactivao da iNOS.(17) 4.2 Bloquear a fase de promoo da carcinognese 4.2.1 Induo da apoptose A apoptose considerada um mecanismo pelo qual os fitoqumicos poderiam exercer propriedades quimiopreventivas, as quais tm sido verificadas em clulas malignas in vitro. A importncia desta observao tornou-se bvia pela constatao do mecanismo de aco pelo qual os frmacos quimiopreventivos exercem o seu efeito, em concreto, a induo da apoptose. (25) A programao da morte celular, apoptose, desempenha um papel central na homeostasia de vrios processos biolgicos. O conceito de apoptose envolve a aco concertada de numerosas vias de sinalizao intracelulares, incluindo os membros da famlia das caspases (proteases de cistena), armazenadas em muitas clulas na forma zimognica ou procaspases. Esta definio de apoptose contrasta com outras formas de morte celular, em concreto a autofagia, a oncose e a necrose. A apoptose um processo de morte celular subordinado a controlos genticos muito restritos, com aspectos bioqumicos e morfolgicos

caractersticos: atrofia celular, formao de vesculas (blebbing) membranares, condensao da cromatina e formao de uma escada de ADN com mltiplos

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fragmentos resultantes da clivagem do ADN nas zonas internucleossmicas. As caspases implicadas na apoptose so classificadas em iniciadoras (ex: caspases 8, 9 e 10) e efectoras (ex: caspases 3, 6 e 7). A clivagem proteoltica das procaspases uma etapa essencial na activao da caspase iniciadora que vai ser amplificada pela activao sequencial em cascata. (25) De uma forma geral, a apoptose pode ser dividida em duas vias distintas: a via extrnseca (atravs de receptores de morte, DR - death receptor) e a via intrnseca (mitocondrial).(8, 20, 25) Os DR so receptores da superfcie da membrana celular que desencadeiam a apoptose mediante a interaco com o seu ligando especfico.(20) De entre eles destacam-se: Fas (CD95 ou Apo1), o receptor do factor de necrose tumoral (Tumor necrosis factor- receptor - TNFR), o DR3 (tambm designado por Apo3, WSL-1, TRAMP ou LARD), o DR4, ou o DR5 (tambm designado por Apo2, TRAIL-R2, TRICK2 ou KILLER).(25-26) Ambas as vias apoptticas vo ser activadas pelas caspases, sendo a primeira activada pela caspase 8 e a segunda pela caspase 9.(25) Na via extrnseca, a activao do DR (Fas) pela interaco com o seu ligando Fas (FasL - Fas Ligand) induz uma agregao de receptores e a formao de um complexo de sinalizao indutor de morte (DISC DeathInducing Signaling Complex). O complexo recruta a procaspase 8, via Fasassociated death domain (FADD), resultando a activao da caspase 8. Esta caspase activada cliva e activa directamente a caspase 3 que, por sua vez, cliva outras caspases.(20, 25) A caspase 3 activada, cliva a poli (ADP-ribose) polimerase (PARP), a qual determinante no processo apopttico.(8) No mecanismo intrnseco, a mitocndria um organelo central na sinalizao da morte celular, atravs da sua capacidade de regulao

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diferenciada do movimento de protenas pr-apoptticas (Ex: Bax) e antiapoptticas (como o Bcl2) no seu espao intermembranar, dependendo do tipo de estmulo.
(26-27)

Os danos no ADN e o stress oxidativo so exemplos clssicos de

sinais que podem activar a via apopttica mitocondrial. Estes sinais de stresse geralmente resultam na ruptura da membrana mitocondrial e libertao de protenas internas como o citocromo c, um factor crucial no processo de apoptose.(20) Ocorre a dissipao do potencial de membrana mitocondrial e a redistribuio do citocromo c do espao intermembranar para o citosol, possibilitando a activao da caspase 9. Posteriormente, o citocromo c libertado, em conjunto com uma protena reguladora, Apaf-1, e a caspase 9, clivam a caspase 3, activando-a.
(8)

Portanto, as caspases 8 e 9 activadas, activam

caspases efectoras, as quais por sua vez vo clivar uma srie de protenas celulares, nomeadamente, protenas estruturais, protenas nucleares, protenas do citoesqueleto e molculas de sinalizao.(25) Alm disso, os membros da famlia de protenas Bcl2 (anti-apopttica) so decisivos no controlo da apoptose mediado pela mitocndria: o Bcl2 e os seus homlogos so capazes de interromper as perturbaes na membrana mitocondrial e a libertao do citocromo c, e de outros factores apoptticos. Contrariamente, o Bax (pr-apopttico) promove todos esses eventos. O balano entre Bcl2/Bax, as duas protenas antagonistas, considerado um critrio decisrio na morte celular programada.(8) Recentemente tem sido publicado um nmero considervel de estudos que estabelecem uma relao entre fitoqumicos alimentares e apoptose. (20) A induo da apoptose pode eliminar completamente clulas geneticamente danificadas de um tecido.(4) Em grande parte dos fitoqumicos tm sido observados efeitos na

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regulao das vias intrnsecas da apoptose.(8) o caso da EGCG que demonstrou, em numerosas linhas celulares, aumentar a caspase 9 e a Bax, modular membros da famlia de protenas Bcl2, e aumentar o Fas. De igual modo, a quercetina, a genistena e a apigenina revelaram induzir a apoptose em vrias clulas cancergenas. Atravs de resultados obtidos em diversos estudos com modelos de animais, praticamente todos os fitoqumicos mencionados

anteriormente demonstraram retardar o desenvovimento de tumores. (20) Vrias outras classes de fitoqumicos, incluindo compostos organosulfurados

provenientes do alho (Allium sativum) e isotiocianatos, tm demonstrado a capacidade de induzir apoptose em linhas celulares. Num estudo experimental, verificou-se que a administrao oral do glucosinolato sinigrina (o precursor do isotiocianto de alilo) na sua forma pura ou atravs de couves de Bruxelas cruas (brassica oleracea var. gemmifera) ricas em sinigrina leva a uma amplificao da resposta apopttica ocorrida nas criptas colorectais 24 horas aps a exposio a um carcinognio qumico, o 1,2 dimetilhidrazina. Quer nos modelos animais, quer em indivduos, um elevado nvel de ocorrncia de processos apoptticos nas criptas torna-se um factor protector contra a neoplasia colo-rectal. Constatou-se que o sumo de couve de Bruxelas exerce os mesmos efeitos anti-proliferativos do isotiocianto de alilo in vitro, embora no contenha o mesmo composto na forma livre. Ainda no est bem esclarecido quais sero os produtos secundrios e metabolitos na couve-de-bruxelas responsveis por esta actividade biolgica, mas alguns produtos j esto identificados.(4) Muitos fitoqumicos evidenciaram a capacidade de induzir a paragem do ciclo celular. o caso dos isotiocianatos, dos flavonides, dos polifenis, dos estilbenos, das antocianidinas e das procianidinas todos eles causaram a

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paragem de G2/M em numerosas linhas celulares.(20) Os genes que controlam o ciclo celular sofrem, muitas vezes, mutaes que resultam na proliferao contnua das clulas transformadas. Por exemplo, mutaes no gene p27 so comuns na maioria dos tumores pancreticos; da mesma maneira, a maioria dos cancros do clon exibem mutaes no gene p53.(8) 4.3 Bloquear a fase de progresso da carcinognese 4.3.1 Inibio da angiognese A angiognese, a formao de novos vasos a partir de uma rede vascular pr-existente, um processo decisivo em diversas doenas, em concreto o cancro.(28) A angiognese tumoral um dos processos-chave no microambiente tumoral, e portanto, controlar este processo uma estratgia importante na preveno de cancros invasivos(5, 29). De entre os fitoqumicos mais estudados na modulao da angiognese encontram-se a EGCG, o resveratrol e a curcumina.(28) Muitas molculas reguladoras da angiognese foram identificadas e caracterizadas recentemente, incluindo o factor de crescimento Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF). No microambiente tumoral, as clulas progenitoras endoteliais (endothelial progenitor cells - EPC) tambm tm um papel preponderante na angiognese tumoral. A mobilizao de EPC a partir da medula ssea para o sangue perifrico regulada por citocinas derivadas do tumor. Em resposta a estas citocinas, a EPC pode contribuir para a angiognese tumoral e o crescimento de certos tumores. Desta forma, a EPC considerada um importante alvo para a terapia anti-angiognica. Estratgias que bloqueiam a mobilizao da EPC para a circulao sangunea podero fornecer uma nova abordagem na inibio da angiognese tumoral. Durante a angiognese, a

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sinalizao do VEGF mediada pelo ligando dependente da via de sinalizao da cnase do trifosfato de inositol (PI3K-Akt). A cnase Akt tem um papel central nas clulas endoteliais maduras. A activao de Akt promove a sobrevivncia da clula pela inibio da apoptose e intervm na induo da migrao do VEGF na clula endotelial. Novas evidncias sobre o mecanismo pelo qual a EGCG inibe a angiognese tumoral sugerem que a EGCG inibe a migrao celular do VEGF nas clulas endoteliais associadas ao tumor e nas clulas progenitoras endoteliais, mas no nas clulas endoteliais normais. Alm disso, demonstrou-se que a EGCG inibe a via de sinalizao da PI3K-Akt, atravs da inibio da fosforilao da Akt, especificamente nas clulas endoteliais associadas ao tumor, mas no nas clulas endoteliais normais. Desta forma existe a possibilidade de usar a EGCG, seja como um agente isolado, seja como co-adjuvante de tratamentos anti-cancergenos, por perodos relativamente longos, uma vez que no txica para clulas normais.(29) No que diz respeito ao resveratrol, ele tem demonstrado efeitos na diminuio da produo de VEGF e da interleucina-8.(28) Alm disso, o seu efeito protector nas clulas vasculares muitas vezes apontado como estando relacionado ao sequestro de ROS.(13, 28) Curiosamente, o perxido de hidrognio tambm parece ser crucial na angiognese, induzindo a expresso de mediadores angiognicos como o VEGF. As ROS tambm so produzidas pelas clulas endoteliais em resposta a estmulos com factores de crescimento, tal como o VEGF. Deste modo, alguns dados indicam que as propriedades sequestradoras do resveratrol podero contribuir para o seu efeito antiangiognico.(28) O efeito da curcumina no crescimento tumoral tambm tem sido estudado. A curcumina demonstrou prevenir totalmente a induo da sntese de VEGF e poder tambm afectar a angiognese atravs de outros factores de

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crescimento. Num estudo em ratos foi referido que a curcumina inibiu o factor bsico do crescimento dos fibroblastos (Basic fibroblast growth factor bFGF).(5,
28)

5. Biodisponibilidade dos fitoqumicos Apesar da extensa literatura sobre a actividade anticancergena dos fitoqumicos alimentares, a importncia fundamental da sua biodisponibilidade e do seu metabolismo tem sido por vezes negligenciada. De acordo com as declaraes emitidas pelo Grupo de Trabalho de Quimiopreveno americano, um dos principais aspectos de um potencial agente quimiopreventivo a sua segurana: deve ser administrado em doses muito mais reduzidas

comparativamente s de um frmaco quimiopreventivo, uma vez que os indivduos receptores podero ser saudveis. No entanto, a partir de uma apreciao da literatura, parece claro que as concentraes dos agentes quimiopreventivos geralmente descritas nos artigos cientficos, encontram-se dentro de um intervalo semelhante ou superior ao das doses farmacolgicas. (2) Apesar de alguns estudos estimarem uma mdia de ingesto total de 1g/dia de compostos fenlicos na alimentao humana, torna-se extremamente difcil calcular com preciso a ingesto desses compostos.(2) Para avaliar a ingesto so necessrios registos alimentares e tabelas de composio alimentar para os fitoqumicos. Porm, esta abordagem apresenta um nmero de limitaes, inerentes s dificuldades de avaliar ingestes alimentares e a carncia de tabelas detalhadas de composio alimentar para os fitoqumicos. Os mtodos mais comuns para estimar a ingesto baseiam-se em questionrios de frequncia alimentar ou a recordao das 24 horas precedentes repetidos, mas a preciso desses questionrios e dos auto-relatos ainda incerto. Vrias tabelas de Milna Batista 2010

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composio alimentar para os fitoqumicos tm sido elaboradas nos ltimos anos. Incluem-se, por exemplo, as diferentes bases de dados do Departamento de Agricultura da Amrica, a base de dados Phenol-Explorer para todos os compostos fenlicos, inclusive os cidos fenlicos, etc. No entanto, estas bases de dados ainda esto incompletas tendo em conta a diversidade considervel de fitoqumicos nas plantas.(2) Vrios parmetros tm um profundo impacto nos nveis de fitoqumicos nos alimentos, tais como, genticos, factores ambientais (incluindo local de produo ou prticas agrcolas), processamento alimentar e armazenamento.(2, 5) Visto que as propriedades dos compostos fenlicos dependem da sua biodisponibillidade, torna-se imperativo investigar esta questo antes de analisar a sua eficcia quimiopreventiva.(2) Tal como foi referido no incio, a maioria dos compostos fenlicos esto armazenados nas plantas conjugados a um grupo glicosdico, sendo que este pode variar no seu grau de polimerizao. Embora tenha sido observado em ratos a absoro de compostos fenlicos atravs do estmago, o local predominante de absoro no ser humano ocorre no intestino. A extenso da absoro intestinal, por exemplo, da quercetina, que ocorre nos frutos na sua forma glicosdica, rutina, determinada pelo tipo de glicosdeo.(10) De facto, as diferentes estruturas qumicas dos compostos fenlicos determinam a sua selectividade na absoro intestinal. No entanto, apesar dos compostos fenlicos estarem geralmente presentes no intestino delgado na forma de derivados glicosilados,(2) estes geralmente no so encontrados no plasma, na urina e nos tecidos, porque para permitir a sua passagem pela barreira intestinal, as glicosidases removem a parte glucdica.(10) Os nveis plasmticos e urinrios representam bons marcadores para verificar a biodisponibilidade dos compostos

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fenlicos e dos seus metabolitos. De uma maneira geral, menos de 10% dos compostos fenlicos (ou dos seus metabolitos) ingeridos so detectados na urina e no plasma, onde as concentraes dificilmente atingem 1 M.(2) Aps a hidrlise pelas glicosidases e correspondente formao das agliconas, os compostos fenlicos so submetidos ao mesmo processo de biotransformao dos frmacos: so conjugados por metilao, sulfatao, glucuronidao ou uma combinao dos anteriores.(2,
30)

Este processo um ponto crucial em termos de actividade

quimiopreventiva, ou seja, os conjugados podem alterar significativamente as propriedades biolgicas do composto original.(2) Os resultados de um estudo em ratos indicaram que a ingesto de elevadas doses de quercetina origina uma maior formao do composto conjugado, isoramnetina, o qual ainda mais activo na inibio da xantina oxdase do que a sua correspondente aglicona.(30) Outro aspecto relevante o facto de que, quando os compostos fenlicos so administrados em doses farmacolgicas (centenas de miligramas), ou consumidos numa alimentao rica nesses mesmos compostos (superior a 1g/dose), eles podem rapidamente saturar as vias de conjugao, levando deteco de compostos no conjugados no plasma. Portanto, as concentraes utilizadas influenciam, no s a qualidade e a quantidade das espcies em circulao, mas tambm a distribuio dos compostos fenlicos e dos seus respectivos metabolitos nos tecidos. De facto, enquanto que grandes doses so metabolizadas no fgado, as pequenas doses so primeiramente metabolizadas pela mucosa intestinal. As concentraes sanguneas de um composto fenlico no conjugado (forma livre), ou dos seus metabolitos, no influenciam significativamente a capacidade antioxidante do plasma. No entanto, quando a contribuio dos

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compostos fenlicos alimentares (0,5-1g da alimentao) considerada no seu conjunto, o poder antioxidante no plasma aumenta para um valor situado entre 50 a 75 M equivalentes de vitamina C. A baixa biodisponibilidade comum nos compostos no conjugados, em conjunto com as complexas reaces de transformao, torna difcil uma anlise causa-efeito. Pelo contrrio, quando ingeridos atravs do alimento, a combinao dos fitoqumicos antioxidantes pode sugerir um fundamento para a quimiopreveno.(2) 5.1 Biodisponibilidade da EGCG, da curcumina e dos isotiocianatos A EGCG tem sido proposta como o mais activo constituinte responsvel pelos efeitos quimiopreventivos do ch verde. Dados recolhidos a partir de muitos estudos clnicos, experimentais e epidemiolgicos suportam claramente que o consumo de ch verde pode diminuir a incidncia de muitos tipos de cancro, incluindo o gstrico, o esofgico, o colorectal, o pancretico, o pulmonar, o da mama, o da prstata e o ovrico. Os mecanismos anticarcinognicos tm sido elucidados em vrios modelos experimentais. A EGCG demonstrou actividade sequestradora de radicais livres e capacidade de aumentar a destoxificao atravs da induo selectiva ou modificao de enzimas da fase II. Adicionalmente, a EGCG consegue inibir marcadores bioqumicos da iniciao e promoo de tumores, inibindo assim o desenvolvimento e crescimento do cancro. Embora a baixa biodisponibilidade sistmica(10) registada em modelos de animais seja um obstculo no que diz respeito administrao de EGCG, os seus efeitos benficos promissores convenceram os investigadores a conduzir estudos em humanos. A investigao em humanos na rea da farmacocintica indica que, aps a administrao oral de EGCG, a qual apresenta baixa absoro intestinal, encontram-se nveis sricos sub-micromolares ou dentro de intervalos

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nanomolares, enquanto que as concentraes sricas fisiolgicamente relevantes esto a nveis micromolares (10-100 M) Aps a ingesto, a EGCG est principalmente na forma livre e seguidamente excretada pela urina como um conjugado -glucorondeo ou sulfato. Alm disso, observaram-se grandes diferenas individuais nos nveis plasmticos de EGCG. Portanto, os factores que influenciam a biodisponibilidade e a biotransformao da EGCG ainda carecem de esclarecimentos. As mltiplas funes biolgicas e as potenciais propriedades

anticancergenas da curcumina (ex: aafro-da-ndia) tm sido amplamente revistas. As actividades da curcumina incluem efeitos anti-inflamatrios, anti.angiognicos, anti-oxidativos, entre outros. de salientar que a sua capacidade de prevenir e inibir a tumorignese em diferentes rgos tem sido confirmada em vrios modelos com ratos. A curcumina consegue inibir a actividade das isoenzimas do citocromo P450 da fase I, resultando na diminuio da activao metablica de compostos carcinogneos. Contrariamente, a curcumina tem a capacidade de induzir as enzimas GST destoxificadoras da fase II. Dado que algumas das enzimasalvo destoxificadoras exibem polimorfismos, a influncia da variao gentica nos efeitos quimiopreventivos da curcumina necessitam de adicionais avaliaes. Aps uma administrao oral, a curcumina exibe baixa biodisponibilidade sistmica. Esta caracterstica farmacocintica da curcumina o resultado de uma baixa absoro e de considerveis conjugaes metablicas. A partir de estudos no ser humano verificou-se que as concentraes de curcumina, aps uma administrao oral, eram apenas na ordem dos nanomolares no plasma, e no tecido heptico, no era detectvel. Na maioria dos estudos in vitro, as concentraes detectadas para a obteno dos

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efeitos biolgicos da curcumina, eram na ordem dos 5-50 M. Embora as concentraes sricas da curcumina sejam consideravelmente baixas, os estudos em modelos com animais reportam que a administrao oral da curcumina pode exercer actividades biolgicas no local de absoro. importante destacar que a curcumina deve persistir nos tecidos-alvo para exibir os seus efeitos protectores contra o cancro. Os isotiocianatos, os metabolitos biologicamente activos dos

glucosinolatos, encontram-se abundantemente nos vegetais crucferos como os brcolos, agries e couves (couve-flor, couves de Bruxelas). Dados

epidemiolgicos obtidos a partir de modelos com animais evidenciam que os isotiocianatos podero prevenir ou atrasar a progresso do cancro do pulmo, do pncreas, da bexiga, da prstata, dos ovrios, da pele, do estmago e do clon. De entre os isotiocianatos, o sulforafano (produto da hidrlise da glucorafanina) e o fenetil-isotiocianato (Phenethyl isothiocyanate - PEITC; produto da hidrlise da gluconasturtina) so os indutores mais eficazes das enzimas de defesa celulares e destoxificadoras (como a GST, NQO1, gamma-glutamylcysteine synthetase (GCS) sinttase da - Glutamil cistena, HO1 e outras). Tal como explicado anteriormente, estas enzimas antioxidantes/destoxificadoras da fase II so genes-alvo do factor de transcrio Nrf2 via ARE. Os isotiocianatos tambm modulam as actividades de outros factores de transcrio nucleares decisivos tal como o factor nuclear-kB (NF-kB) e o activador da protena 1 (AP-1), os quais esto envolvidos na apoptose e nos processos de proliferao, assim como de transformao de clulas malignas. Dados oriundos de estudos farmacocinticos pr-clnicos em modelos com ratos revelaram que as concentraes sricas de sulforafano eram suficientemente elevadas para exercerem um efeito protector

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contra o cancro. Resultados semelhantes foram obtidos em estudos com indivduos.(14) 6. Efeitos sinrgicos dos fitoqumicos Recentemente tm surgido evidncias de que, combinaes especficas de fitoqumicos, podem ser de longe mais protectoras contra o cancro do que os compostos isolados. Numerosos estudos tm vindo a salientar o efeito quimiopreventivo de misturas de compostos fenlicos(11) provenientes do ch verde ou de outras fontes alimentares. Foi descrito que a epicatequina aumentou a induo da apoptose pela EGCG e inibiu a libertao do TNF-. Os resultados deste estudo indicam que, em resultado dos efeitos sinrgicos entre os compostos fenlicos do ch verde, o ch uma mistura mais eficiente para a preveno do cancro do que a suplementao de EGCG. Curiosamente, observou-se que a catalase bloqueou o efeito sinrgico da epicatequina e da EGCG, sugerindo que a produo de perxido de hidrognio e das ROS esto envolvidas no mecanismo de sinergia. Os potenciais efeitos sinrgicos entre os compostos fenlicos e outros fitoqumicos tambm foram investigados. Estudos sobre o efeito da combinao de isotiocianatos e indis (fitoqumicos presentes nos vegetais crucferos), demonstraram que os efeitos sinrgicos podem depender das condies experimentais e das concentraes. A combinao de outros dois fitoqumicos das crucferas, o indol-3-carbinol e o crambe, foi estudada em ratos, tendo sido observado que o grupo experimental submetido a uma dose elevada ficou protegido contra a toxicidade induzida pela aflatoxina B1, mostrando efeitos sinrgicos, enquanto que no grupo submetido a uma baixa dose no foram observados efeitos. Tambm tm sido registados efeitos sinrgicos de alimentos e de outras misturas complexas. Em recentes Milna Batista 2010

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estudos com animais, nos quais se avaliou o efeito da ingesto de vegetais na modulao da expresso de genes, foi descoberto que a maioria dos genes que foram expressos de forma distinta antes e depois da ingesto dos vegetais, representaram alteraes na expresso que poderiam ser interpretadas como um efeito preventivo contra o cancro. Alm disso, os resultados destes estudos indicaram que, o efeito de quatro vegetais isolados nas alteraes da expresso de genes no clon e pulmo de ratos, diferiu do efeito da mistura dos quatro vegetais. Adicionalmente, a mistura dos vegetais apresentou capacidade de modular genes que no foram significativamente modulados por um dos especficos vegetais presentes na mistura.
(31)

Portanto, a associao de vrias

molculas (como naturalmente acontece nos alimentos) poder ser mais eficaz na preveno do cancro do que compostos isolados. Estes aspectos originaram o desenvolvimento da quimiopreveno combinada no sentido de que, baixas doses de agentes quimiopreventivos, diferindo no modo de aco, podem aumentar a eficcia e reduzir a toxicidade, gerando um efeito sinrgico. Discusso e Concluses O tema desta monografia com certeza uma rea de estudo complexa e sinuosa, porm motivadora e aliciante. A pesquisa realizada permitiu-me indagar diversos ramos da cincia, concretamente, Biologia celular, Gentica, Patologia, Bioqumica, Toxicologia, Fisiologia, etc. Reafirmei a minha convico de que conseguir atingir novas etapas no conhecimento gratificante. Neste trabalho foram apresentados apenas alguns dos mecanismos biolgicos geralmente mais observados em determinados fitoqumicos. Contudo, esses exemplos ilustram o enorme potencial destes compostos na modulao do processo carcinognico. Milna Batista 2010

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Da mesma forma que muitos estudos demonstram claramente que os fitoqumicos so altamente eficazes a impedir o desenvolvimento do cancro em cada fase da carcinognese, tambm se constata que estes agentes so protectores para as clulas ditas normais. O exacto mecanismo do efeito diferencial entre clulas normais e anormais que os fitoqumicos evidenciam, no est completamente esclarecido, mas pensa-se ser o resultado da capacidade destes compostos de induzir ou suprimir de forma diferenciada certos eventos celulares, assim como de regular atravs da transcrio, a actividade de vrios genes de defesa. O conhecimento dos mecanismos moleculares subjacentes aos efeitos sinrgicos dos fitoqumicos ainda limitado, mas parece que muitos fitoqumicos agem sinergicamente, o que poder explicar a razo pela qual alguns alimentos mostram efeitos preventivos contra o cancro que no so explicados com base nos compostos bioactivos individuais. Paradoxalmente, a preparao quimiopreventiva mais eficaz a

alimentao. As vrias centenas de compostos presentes nos alimentos diferem na estrutura molecular, na estabilidade, na solubilidade, no metabolismo e na absoro. Eles so submetidos a actividades sinrgicas e/ou competitivas que no podem ser simplesmente reproduzidas num frmaco. Embora os modelos de culturas celulares in vitro e de animais tm demonstrado a eficcia quimiopreventiva de numerosos fitoqumicos, o efeito protector desses agentes no risco de cancro nos seres humanos ainda no est estabelecido de forma conclusiva. Estas inconsistncias parecem reflectir a natureza complexa dos alimentos e dos sistemas biolgicos (i. e., os seres humanos).

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Do mesmo modo que os efeitos benficos destes agentes esto muito bem estudados, os possveis efeitos txicos esto a ser destrinados a passos largos. Desta forma, uma predio bem sucedida das consequncias do consumo destes fitoqumicos por parte do ser humano s ir ser possvel depois de se traarem doses apropriadas e de se atenderem s questes da segurana. Portanto, deparam-se muitas pedras no caminho que tm de ser transpostas antes do uso bem sucedido dos putativos agentes quimiopreventivos no ser humano. Contudo, entender os mecanismos de aco dos fitoqumicos ser um auxlio para esse esforo, uma vez que a maior parte desses compostos so uma parte integral da nossa alimentao. Em termos de sade pblica, a erradicao do cancro nos pases ocidentais representa uma das misses cientficas do novo milnio. Uma pequena histria da medicina: Eu tenho uma otalgia 2000 A.C. Toma, come esta raiz. 1000 D.C. Essa raiz paganismo. Toma, diz esta reza. 1850 D.C. Essa reza superstio. Toma, bebe esta poo. 1940 D.C. Esta poo banha da cobra. Toma, engole este comprimido. 1985 D.C. Esse comprimido ineficaz. Toma, ingere este antibitico. 2000 D.C. Esse antibitico artificial. Toma, come esta raiz.
Traduzido a partir de
(1)

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ndice de Anexos Anexo 1 Principais classes de fitoqumicos nos alimentos ................................ 39 Anexo 2 Subclasses de terpenides ................................................................. 42 Anexo 3 - Via de sinalizao do factor de transcrio Nrf2 .................................. 44

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Anexo 1 Principais classes de fitoqumicos nos alimentos

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Anexo 2 Subclasses de terpenides

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Subclasses de terpenides provenientes de unidades precursoras isoprnicas N de unidades isoprnicas C5 N de tomos de carbono Nome da subclasse da cadeia principal

2 3 4 5 6 8 n

10 15 20 25 30 40 n

Monoterpenos Sesquiterpenos Diterpenos Sesterpenos Triterpenos Tetraterpenos Polisoprenos

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Anexo 3 - Via de sinalizao do factor de transcrio Nrf2

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