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Reproduo em procariotos

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Introduo O processo de fisso binria - Uma viso geral O processo de segregao dos cromossomos bacterianos Seleo do stio de diviso durante a diviso celular simtrica Seleo do stio de diviso durante a diviso celular assimtrica Formao do septo de diviso e a separao das clulas filhas Reproduo pela formao de esporos mltiplos, inativos Metabacterium polyspora O processo de reproduo em Epulopiscium fischelsoni - uma bactria vivpara Introduo A diviso celular um processo complexo, que ocorre de variadas maneiras, dependendo do tipo de organismo. Em eucariotos, os microtbulos do fuso mittico atuam como a fora motriz durante a segregao cromossomal. Nas clulas animais e em fungos, um anel de actina-miosina se forma na poro mediana de uma clula em diviso, sendo que a fora gerada pela interao entre estas duas protenas promove o crescimento interior do septo de diviso. Nas plantas, a formao do septo complexa, devido parede celular espessa. Assim, surge na regio central da clula um disco, que cresce de forma centrfuga. Em todos estes casos o stio de diviso celular definido indiretamente pelos microtbulos, pois o posicionamento do fuso mittico parece ser crucial no direcionamento do plano de diviso. Nas plantas um feixe transiente de microtbulos envolve a clula no plano de diviso, com um possvel papel na seleo do stio de diviso. Embora intensamente estudado, o processo de diviso celular em procariotos ainda pouco conhecido, existindo alguns modelos propostos. Uma das principais concluses obtidas destes estudos refere-se ao fato da diviso celular em procariotos corresponder a um processo extremamente complexo e regulado, tanto em termos espaciais como temporais. Assim, h uma srie de mecanismos que regulam os eventos de duplicao e segregao do cromossomo e a formao do septo de diviso, garantido a eficincia do processo. Outro importante achado refere-se intensa participao de protenas citoplasmticas, atuando como anlogos do citoesqueleto de clulas eucariticas, no processo de diviso celular. At o momento, os estudos indicam que a maioria dos procariotos se divide por fisso binria, originando duas clulas filhas idnticas logo aps a duplicao e segregao cromossomal. O ciclo celular

bacteriano pode ser divido em duas fases: 1) Um ciclo de DNA, que inclui a replicao e segregao dos cromossomos e 2) um ciclo de diviso, com a citocinese e separao das clulas filhas. No entanto, estudos com outras bactrias, tais como a bactria pedunculada Caulobacter crescentus, revelam um processo mais complexo de diviso, originando clulas distintas morfolgica e fisiologicamente. Relatos mais recentes da literatura descrevem a ocorrncia de diferentes procesos de reproduo no domnio Bacteria. Assim, em Epulopiscium, uma bactria "gigante" simbionte intestinal do peixe cirurgio, foi observada a ocorrncia de viviparidade, com a formao de 1 a 7 clulas filhas ativas metabolicamente, as quais so liberadas aps a lise da clula me. Neste mesmo gnero e em Metabacterium polyspora, foi descrita a formao de mltiplos esporos intracelulares. Tais relatos deixam claro o quanto ainda desconhecemos sobre a reproduo em procariotos e que estes organismos so capazes de exibir mais de um mecanismo de reproduo. Artigos de reviso recentemente publicados trazem uma viso geral dos principais mecanismos de reproduo adotados por certos organismos procariticos. A seguir, so listados dois destes artigos. Caso tenha interesse em consult-los, clique nos links abaixo: 1) Alternatives to binary fission in bacteria (2005) 2) Beyond binary fission: some bacteria reproduce by alternative means (2006) Visando abordar de maneira geral os eventos associados reproduo procaritica por meio da fisso binria, passaremos a descrever os principais resultados obtidos a partir de pesquisas realizadas especialmente com Escherichia coli e Bacillus subtilis.
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O processo de fisso binria - Uma viso geral Fisso binria em B. subtilis Esta bactria corresponde a um excelente modelo de estudo devido sua capacidade de originar endsporos, quando em condies desfavorveis. Neste sentido, um dos aspectos que mais chamou a ateno dos pesquisadores foi que durante a reproduo o septo de diviso era formado na regio mediana da clula, enquanto na esporulao o septo localizava-se na regio prxima a um dos plos celulares (Fig. 1). A fisso binria ocorre quando a clula cresce, atinge cerca do dobro de seu comprimento e se divide. Paralelamente, h a duplicao e segregao do DNA (Fig. 1a). Por outro lado, na esporulao, h a duplicao do cromossomo, mas o septo formado tem localizao polar, sendo esta a regio de formao do endsporo (Fig. 1b).

Adaptado de Angert (2005) Nature Rev. Microbiol., 3:214-224.

Fig. 1 Ciclos de vida em B. subtilis. Em (a) ciclo vegetativo. Em condies favorveis, a clula aumenta de tamanho, replica o cromossomo (azul) e se divide por fisso binria. O aparato de diviso montado, com a protena FtsZ (verde) formando um anel no meio da clula, onde ocorre a diviso. Em condies de exausto ambiental (Fig. 1b), a clula forma esporos. As duas cpias do cromossomo assumem uma nova configurao, que se estende de um plo a outro. A maquinaria de diviso montada nos dois plos, mas a diviso ocorre somente em um deles. Parte de um dos cromossomos fica presa por um septo de diviso, sendo empacotado pelas protenas do septo, em um compartimento fechado (presporo). O pr-esporo ento englobado pela clula me. O pr-esporo preparado para a dormncia, pois protenas se ligam, protegendo o DNA, o citoplasma mineralizado e formada uma barreira protica ao redor da estrutura.

Vrios so os aspectos ainda pouco elucidados sobre a diviso celular. Por exemplo, como ocorre a segregao do DNA? Como o septo de diviso localizado corretamente? Os estudos vm mostrando que as bactrias possuem uma srie de protenas citoplasmticas que atuam como um verdadeiro citoesqueleto, sendo responsveis pela correta migrao do DNA e posicionamento do septo. Existem autores que vm utilizando o termo "replissomo" para descrever a complexa maquinaria celular envolvida no processo de diviso. Alm disso, dados recentes tambm revelam que os lipdeos de membrana so importantes componentes do replissomo. Dentre os diversos componentes da maquinaria, uma protena denominada MreB, semelhante actina, est implicada na segregao do DNA. Um dos componentes mais estudados corresponde protena FtsZ, um homlogo estrutural da tubulina que, durante a fisso binria, se organiza como um anel no centro da clula e atua como ponto de ancoragem de outros elementos do aparato. Estes outros componentes redirecionam o crescimento da parede celular e protegem o DNA de danos enquanto o envelope invagina. FtsZ uma protena muito conservada e uma das primeiras protenas a se organizar no fututro stio de diviso. Nos prximos tpicos discutiremos a protena FtsZ em maior detalhe. Em condies normais, o septo de diviso somente formado aps a segregao do DNA duplicado. Vrios so os processos que resultam em tal situao. Um deles corresponde prpria ocluso do futuro stio de diviso pelo nucleide ainda no segregado. Ao que parece, o

DNA se liga a uma srie de lipdeos da membrana, no permitindo que o anel FtsZ seja montado. Outras protenas, denominadas sistema MinCD, impedem a montagem do complexo FtsZ nos plos. Alm destas, vrias outras vm sendo estudadas, tais como EzrA, que afeta a estabilidade dos polmeros FtsZ, otimizando sua montagem apenas nos locais corretos. No caso de danos ao DNA, as protenas YneA e SulA desestabilizam o anel, impedindo a diviso.
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O processo de segregao dos cromossomos bacterianos Esta etapa da diviso celular procaritica foi analisada a partir dos estudos com B. subtilis, como mencionado anteriormente, uma bactria capaz de esporular. A partir dos estudos com mutantes incapazes de realizar o processo completo de segregao cromossomal, foi verificado que sempre um mesmo segmento de DNA era o primeiro a atingir os plos celulares. O mapeamento deste segmento de DNA revelou que tal seqncia correspondia regio situada adjacente oriC, que a origem de replicao do DNA cromossomal. Em E. coli, a replicao do cromossomo ocorre quando o complexo protena DnaA-ATP se liga a stios em oriC. A ligao promove o desenovelamento da oriC, o recrutamento de uma helicase (DnaB) e a montagem de um replissoma. A iniciao da replicao regulada, ocorrendo uma vez a cada ciclo celular. A Figura 2 esquematiza o ciclo de iniciao da duplicao do DNA mediado pela protena DnaA.

Adaptado de Boeneman, K. & Crooke, E. (2005) Curr. Op. Microbiol., 8:143148.

Fig. 2 Regulao da atividade de DnaA. Quando na presena de excesso de ATP, a protena DnaA se liga ao ATP e se complexa em oriC, iniciando a replicao do DNA. A DnaA hidrolisa o ATP, originando ADP e passando para a forma inativa. Nesta forma, h a interao de DnaA-ADP ligada a oriC com fosfolipdeos cidos da membrana citoplasmtica, promovendo a reciclagem de DnaA para sua forma ativa, ligada ao ATP.

O conjunto DnaA/oriC/lipdeos de membrana encontra-se situado na poro mediana da clula e, medida que a sntese das molculas de DNA ocorre, estas migram para os plos, liberando assim a regio central para a formao do septo de diviso. Em eucariotos, o movimento e segregao dos cromossomos controlado pelos centrmeros. Estes, ligam-se aos microtbulos do fuso mittico atravs de conjuntos proticos denominados cinetcoros. O movimento do cromossomo ao longo do fuso ocorre como resposta a uma fora exercida nos cinetcoros, seja pela ao de protenas motoras ou pela montagem-desmontagem dos microtbulos que formam o fuso. O fato da regio oriC estar sempre localizada nas vizinhanas do polo celular sugere que esta regio poderia conter uma sequncia do tipo centrmero. Alm disso, pela sua localizao sempre igual, foi especulado que deveria haver a participao de uma ou mais protenas, desempenhando o papel dos cinetcoros ou das protenas motoras dos eucariotos. A partir de outros estudos, foi identificada um protena, denominada Spo0J que, em linhagens mutantes, promovia alteraes na segregao dos cromossomos de clulas vegetativas. Em clulas onde o gene spo0J foi deletado, a oriC deixava de se localizar nos plos celulares, indicando que a protena Spo0J poderia estar envolvida no posicionamento polar da oriC. Por meio de estudos microscpicos,verificaram que a protena Spo0J forma focos se se ligam ao DNA em um ou mais stios, nas proximidades de oriC. Assim, cada cpia da regio onde est a origem de replicao parece ter seu prprio conjunto de Spo0J. O achado mais marcante em relao a estes eventos de segregao corresponde rpida migrao deste conjunto (DNA-Spo0J) ao longo do eixo celular. Tal fenmeno sugere a existncia de protenas geradoras de fora e a presena de alguma estrutura anloga a um citoesqueleto. Dados mais recentes sugerem a participao de uma protena, denominada RacA, no processo de migrao dos cromossomos para os plos. Ao que parece, esta protena exerce um papel anlogo ao desempenhado pelo fuso mittico. A replicao bacteriana seria como uma mitose? O conjunto de Spo0J poderia ser comparado funcionalmente aos cinetcoros, que so as organelas envolvidas na ligao dos centrmeros aos microtbulos do fuso. Alternativamente, Spo0J poderia atuar em uma fase inicial,

transformando as regies oriC recm-replicadas em estruturas com um dobramento tal que seriam ento separadas por outras protenas (talvez RacA). Isto poderia ter um papel importante, pois sabe-se que em bactrias, os eventos de replicao se sobrepem. Nestes casos, a separao correta evitaria o emaranhado de cromossomos. Tais achados no so surpresa, uma vez que os eucariotos e os procariotos devem ter evoludo a partir de um ancestral comum, que era eficiente na segregao cromossomal. Assim, no teria porque este evento ser to distinto nas bactrias, onde a grande maioria dos processos ocorrem de forma similar aos eucariotos.

Modelo proposto para a segregao cromossomal, em bactrias


(Adaptado de Errington, J. ASM News 64:210-217, 1998) Retornar

Seleo do stio de diviso durante a diviso celular simtrica Como a clula seleciona o stio mediano ainda no est precisamente estabelecido, entretanto muitos dados j existem para explicar esta etapa do processo de diviso celular. Estudos com mutantes de E. coli indicam que as clulas contm trs stios potenciais de diviso: na regio central e nos plos. Normalmente, para que ocorra uma diviso na regio central, os stios polares devem ser inibidos, sem a inibio do stio potencial mediano. Nestas clulas, parece que tal processo se d pela ao cooperativa de um inibidor de diviso com um fator topolgico de especificidade, os quais so codificados pelos genes minC, minD e minE.

Papel das protenas Min, na localizao do septo de diviso


(Adaptado de Rothfield & Zhao. Cell, 84:183-186, 1996)

Parece que, inicialmente, as protenas MinC e MinD atuariam em conjunto, como um inibidor inespecfico de diviso, capaz de bloquear todos os stios possveis de septao. Esta observao se baseia no fato que a diviso fica completamente bloqueada quando minC e minD so expressos, na ausncia de minE. A protena MinE, de alguma forma, conferiria a especificidade topolgica ao sistema, de forma que MinCD bloquearia somente os stios polares, sem interferir com o stio mediano. MinE teria duas funes: 1) Como antagonista de MinCD e 2) Como fator de especificidade topolgica pois quando se liga ao stio central, restringe o conjunto MinCD aos stios polares, no desejados para a diviso. Estudos indicam que estas funes de MinE esto localizadas em domnios distintos na sequncia de 88 aminocidos da protena. A funo antagnica sobre MinCD est localizada em um pequeno domnio N-terminal (MinE1-22). A funo topolgica esta associada a um domnio C-terminal (MinE23-81). Assim, o domnio N-terminal atuaria como um antagonista de MinCD, enquanto o C-terminal atuaria, direta ou indiretamente, como um sensor topolgico, capaz de distinguir o stio potencial mediano daqueles nos polos. Os autores especulam que existiriam uma molcula alvo (topolgico) que marcaria o stio mediano como sendo diferente dos stios polares. A elevada afinidade da regio Carboxi-terminal de MinE por este alvo levaria localizao preferencial da protena na regio mediana, enquanto a poro amino-terminal impediria a ao bloqueadora de MinCD. Como a MinE estaria sequestrada na regio mediana, a protena no estaria disponvel para interferir com a atividade de MinCD nos polos. Dados mais recentes indicam que alm das protenas Min, os fosfolipdeos de membrana tambm teriam papel na seleo do stio de septao. Uma das primeiras protenas que participam do processo de septao, FtsA ou ZipA, poderiam reconhecer e interagir

com um domnio fosfolipdico situado da poro central da membrana da clula, permitindo assim a ligao de FtsZ.

Adaptado de Mileykovskaya, E. & Dowhan, W. (2005) Curr. Op. Microbiol., 8:135142.

Esquema do ciclo celular. (a) A nova clula filha apresenta a origem e a terminao de replicao do DNA ("o" verde, oriC e "T" vermelho, de lado, respectivamente); o sistema Min (bolas verdes e rosas) ligado aos plos, ou oscilando entre os plos; domnios lipdicos nos plos (vermelho). (b) O cromossomo sofre uma rotao, trazendo a oriC para a poro central, onde formado um domnio lipdico rico em cardiolipina (vermelho). O DNA comea a ser replicado pela DnaA, e pela montagem do replissomo (pentgono). (c,d) As origens recm-replicadas se movem em direo aos plos, liberando o domnio lipdico central para agora interagir com FtsZ (prpura). (e) Organizao da maquinaria de diviso (multicolorida) e converso do domnio central em futuros plos. (f) Em E: coli, MinD (rosa) e seu domnio C-terminal (cinza) trocam ADP por ATP (direita), expondo a poro C-terminal, que interage com lipdeos de membrana nos plos. O polmero de MinD-ATP pode crescer em direo ao centro. Prximo ao centro, a ligao de MinE (verde) induz a hidrlise de ATP, levando MinD para a conformao MinD-ADP, despolimerizando-o e voltando para os plos. (g) Vrias molculas de DnaA (amarelo) associadas a ATP ou ADP. Somente quando ligada a ATP a DnaA (diagrama da direita) capaz de se ligar prximo oriC (azul e verde), abrir o DNA e permitir a montagem do replissomo. A forma inativa, DnaA-ADP ligada oriC reciclada na membrana (vermelho).
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Formao do septo de diviso e a separao das clulas filhas Estudos indicam que uma protena presente em E. coli, denominada FtsZ, desempenha importante papel na formao do septo e separao das clulas filhas, durante o processo de diviso celular. A protena FtsZ forma um anel no stio da diviso celular, sugerindo um papel estrutural para esta protena neste processo. Atualmente sabe-se que a FtsZ tem homologia com as pores que se ligam ao

GTP da tubulina, sendo os cristais das duas muito semelhantes e que tambm atua como GTPase. A FtsZ hidrolisa o GTP aps formar estruturas semelhantes a polimeros de tubulina e vem sendo encontrada (ou homlogos) em um grande nmero de espcies de Bacteria e Archaea estudadas at o momento, formando um anel no stio de diviso. Homlogos de FtsZ j foram detectados em clulas vegetais, onde mutaes nestes genes impedem a diviso dos cloroplastos, reforando a hiptese de sua participao na diviso celular e tambm a teoria da endossimbiose. Componentes da maquinaria de diviso celular Durante a diviso, vrias protenas so recrutadas para o anel formado por FtsZ: FtsA, FtsQ, FtsW, FtsL, FtsN, FtsK, FtsI (PbP3) e ZipA, que se organizam em um complexo para realizar a diviso. Exceto por FtsZ, FtsA e ZipA, todas as demais apresentam dominnios transmembranosos e periplasmticos, indicando que atravessam a membrana citoplasmtica. O anel FtsZ localiza-se exatamente no centro de uma clula vegetativa bacilar, como E. coli, sugerindo uma pr-determinao do local, provavelmente mediada por MinE. Durante a diviso o anel FtsZ comea a se contrair, pela remoo sucessiva de suas subunidades, as quais migram para as futuras regies centrais das novas clulas filhas. Assim, acredita-se que os stios de diviso da prxima gerao j esto presentes nas clulas me, sendo o processo de montagem e desmontagem bastante rpido.

Formao do septo e separao das clulas filhas


(Adaptado de Margolin, W. ASM News 65, 1999) Retornar

Seleo do stio de diviso durante a diviso celular assimtrica Em B. subtilis, os stios polares so utilizados para a formao do septo apenas durante a esporulao. Quando crescendo vegetativamente, B. subtilis utiliza a regio mediana para a formao do septo de diviso entretanto, em condies desfavorveis, o stio de septao passa para um dos polos, permitindo a esporulao. Durante o crescimento vegetativo, B. subtilis seria semelhante a E. coli, com MinCD atua conjuntamente, provavelmente com a protena de funo igual MinE, ainda no descoberta, que suprimiria o uso dos stios polares para a diviso. Havendo um estmulo para a esporulao, a especificidade topolgica do sistema seria revertida, ocorrendo liberao dos stios polares. Um modelo explicativo implicaria na existncia de duas MinE, com diferentes propriedades topolgicas, que determinariam a localizao central ou subterminal do septo.
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Reproduo pela formao de esporos mltiplos, inativos Metabacterium polyspora Esta bactria Gram positiva habita o trato GI de cobaias e produz mltiplos (at 9) endosporos. O ciclo de vida desta bactria requer que o organismo circule pelo trato GI, ou seja, depende da natura coprfaga de seu hospedeiro. Esporos de M. polyspora so isolados das fezes do hospedeiro e somente estes esporos maduros sobrevivem passagem pelo estmago, indo germinar no intestino delgado (figura abaixo). Algumas clulas fazem fisso binria neste estgio, mas a maioria esporula. A partir do intestino delgado, as bactrias se depositam no ceco, ondem terminam de esporular. Ao que parece, os pr-esporos ou endosporos maduros no so capazes de realizar fisso binria. Os esporos passam pelo ceco e finalmente so eliminados nas fezes, podendo ser novamente ingeridos pelo hospedeiro, recomeando o ciclo. A esporulao em M. polyspora diferente, com uma diviso iniciada nos dois plos e o DNA vai para os dois compartimentos. Aps o englobamento, o pr-esporo pode se dividir, produzindo outros presporos que amadurecem. Assim, existem 3 ou mais cpias do genoma.

Adaptado de Angert, E.R. (2005). Nature Rev. Microbiol., 3:214-224.

Formao de mltiplos esporos em M. polyspora. a-g: fluorescncia especfica para membrana e capas de esporos. a: as clulas se dividem nos dois plos. b: pr-esporos englobados pela clula me. c. pr-esporos capazes de fazer fisso binria (a seta indica um novo septo de diviso formado). d: diviso e crescimento do pr-esporo. e: amadurecimento do pr-esporo, f: M polyspora com 7 presporos. g: clula que emerge do esporo, se divide nos plos e comea a esporular. h: micrografia de contraste, mostrando fisso binria em M. polyspora, um evento raro.
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O processo de reproduo em Epulopiscium fischelsoni - uma bactria vivpara Desde a sua descoberta, o gnero Epulopiscium tem fascinado os microbiologistas, por suas caractersticas extremamente diferentes daquelas observadas nas bactrias comumente estudadas. Alm de ser nica por suas dimenses (podendo atingir cerca de 600 a 800 nm), estes organismos apresentam um tipo vivparo de reproduo. Dados recentes da literatura revelam que as clulas de Epulopiscium so capazes de gerar de 1 a 7 clulas filhas ativas, em seu interior. Ao que parece, o processo se assemelha esporulao, envolvendo a condensao da molcula de DNA duplicada, que normalmente dirigese aos plos da clula me. Estudos envolvendo anlises microscpicas revelam que aps o

perodo de condensao e migrao do DNA para as extremidades celulares, este se apresenta descondensado, com as clulas filhas ativas metabolicamente. Geralmente, so produzidas 2 clulas filhas, estando uma em cada polo. No entanto, quando so geradas mais que 2 clulas filhas, observa-se a condensao do DNA em regies medianas da clula me, situadas imediatamente abaixo da parede celular.

Esquema geral de uma clula de Epulopiscium originando uma clula filha


(Adaptado de Angert & Clements (2004) Mol. Microbiol., 51:827835)

Estes resultados so bastante recentes, embora em 1998 tenha sido publicado um artigo descrevendo a ocorrncia de "vesculas contendo nucleides" neste organismo. Muito pouco se sabe ainda sobre o processo de reproduo neste organismo, embora os dados obtidos no estudo referente figura acima descrevam tambm a ocorrncia do anel formado pelas protenas FtsZ. Assim, possivelmente em um futuro no muito distante, novas informaes estaro disponveis acerca do processo vivparo de reproduo neste procarioto.