EFEITO MATRIZ CALIBRADORES E CONTROLES

Calibradores e controles - Efeito Matriz

Calibradores e controles
Padres calibradores, comumente denominados padres, e calibradores proticos so usados em um processo analtico para designar um valor numrico concentrao presente em amostras com valores desconhecidos usando as leituras ou respostas analticas encontradas. Os materiais de controle so usados na avaliao da confiabilidade de um processo analtico, particularmente referente preciso e exatido e tambm como um meio de monitorar o desempenho analtico no dia a dia, ms a ms, etc. As especificaes dos padres calibradores, calibradores proticos e materiais de controle dependem das aplicaes a que se destinam. Todos devem ser apropriados para o mtodo analtico onde sero usados e devem produzir respostas semelhantes s amostras a serem analisadas. Para os padres calibradores ou calibradores proticos o valor estabelecido deve ser o mais exato possvel. Qualquer erro ou incerteza no valor estabelecido se refletir na qualidade dos resultados obtidos em amostras dos pacientes. essencial que os materiais de controle, padres calibradores e calibradores proticos sejam homogneos e estveis. A homogeneidade se refere pequena variao de frasco a frasco que deve ser insignificante em relao variao total ocorrendo no ensaio. Deve-se minimizar os erros durante a reconstituio dos frascos utilizando gua de qualidade reagente e pipetas calibradas para se obter a melhor exatido possvel. Os analitos presentes nos materiais devem ser estveis durante o prazo de validade.

Calibradores proticos
A observao de que os padres aquosos no so adequados para uso como calibradores em sistemas automticos de anlise, levou vrios fabricantes ao desenvolvimento dos multicalibradores, assim chamados porque a partir de um s material pode-se realizar as calibraes de vrios procedimentos. Estes calibradores so produzidos a partir de uma matriz protica e certamente os valores dos analitos so aferidos e estabelecidos utilizando mtodos de referncia ou mtodos definitivos calibrados com padres calibradores de grau C ou superior. Estes materiais so considerados padres secundrios e o grau de cer teza da sua concentrao depende exclusivamente da exatido do mtodo utilizado para designar os valores das concentraes dos analitos nestes calibradores. Do ponto de vista terico estes calibradores seriam considerados adequados para os sistemas automticos porque tm matriz protica, na maioria das vezes humana, e apresentam viscosidade bastante semelhante s amostras humanas. Entretanto do ponto de vista prtico os calibradores mostram algumas limitaes que reduzem acentuadamente sua capacidade em transferir exatido a um sistema analtico. Estas limitaes so devidas ao efeito da matriz, fazendo com que o sinal gerado por um calibrador no seja o mesmo quando se utiliza diferentes mtodos de ensaio. Vrios rgos de padronizao dos Estados Unidos, dentre eles o CAP e o NCCLS tem concentrado seus esforos no sentido de desenvolverem materiais que possam ter a mesma resposta frente aos diferentes mtodos de ensaio de um analito.

Neste momento, o consenso de que o uso de soros frescos congelados, padronizados com mtodos definitivos ou de referncia, possa ser a melhor maneira de transferir exatido para os fabricantes de instrumentos e reagentes e para os laboratrios, porque estes materiais so a forma mais prxima, qumica e fisicamente dos soros de pacientes e tambm porque no contm aditivos. A obteno de soros frescos congelados bastante difcil no Brasil e sugere-se que os laboratrios procurem avaliar o estado da exatido de seus mtodos atravs da participao em programas de proficincia proporcionados pelas sociedades profissionais, que tero maiores facilidades para selecionar materiais com reduzidos efeitos de matriz.

Estas diferenas podem ser observadas nas instrues de uso que acompanham os produtos e chegam a valores bem significativos dependendo do analito, sendo mais importantes nos mtodos para determinao das atividades enzimticas.

Composio
Padres calibradores, calibradores proticos e materiais de controle so preparados usando substancias puras (solutos e solventes) de composio conhecida, substancias parcialmente purificadas (enzimas e protenas) ou produtos naturais (soro humano ou bovino). De um modo geral estas substncias so combinadas ou tratadas para se obter as concentraes adequadas para a aplicao do material.

Materiais de controle
Materiais de controle, solues de controle, amostras controle, so materiais usados exclusivamente para fins de controle da qualidade e no devem ser usados em procedimentos de calibrao. Como estes materiais no apresentam graus definidos de incerteza, so inadequados para serem usados como calibradores e para transferir exatido aos procedimentos analticos. Os controles so utilizados com a finalidade de monitorar a preciso e no necessrio que as concentraes dos analitos sejam conhecidas exatamente. Mesmo que no tenham valores definidos ou designados, os materiais de controle podem ser utilizados para monitorar mudanas na exatido, porque neste caso no estaro verificando se a exatido foi adequadamente estabelecida, mas monitorando a manuteno da estabilidade de uma exatido previamente definida por um sistema efetivo. Os controles apresentam comumente os efeitos de matriz, gerando respostas diferentes para os diversos mtodos.

Um sistema analtico requer trs tipos de materiais cuja composio pode diferir: padres calibradores ou calibradores proticos, as amostras controle e as amostras dos pacientes. As diferenas entre as caractersticas fsicas ou qumicas destes materiais (matriz) podem afetar a validade dos

Efeitos da matriz
A matriz o meio fsico-qumico no qual o analito est disperso. Uma soluo de cloreto de sdio em gua pode ser considerada como consistindo de um analito (Na+) em uma matriz de Cle gua. Quando um sistema analtico apresenta diferentes respostas (resultados estatisticamente diferentes) para a mesma quantidade de analito presente em materiais processados (controles e calibradores proticos) e em amostras humanas frescas, esta diferena denominada efeito da matriz. Estes efeitos (bias) introduzem problemas analticos devido diferena das respostas, em procedimentos de calibrao ou para avaliar a exatido de um mtodo usado rotineiramente.

O fenmeno efeito da matriz envolve a participao de quatro grandes componentes do procedimento analtico: engenharia do instrumento, formulao do reagente, princpio metodolgico e composio e forma de processamento dos calibradores proticos e materiais de controle. Dentro de cada uma destas categorias existem fatores que contribuem para a magnitude e direo (positiva ou negativa) da diferena de resposta. Os efeitos da matriz diferem daqueles produzidos por interferncias porque estas ltimas se relacionam a efeitos exgenos (drogas) ou endgenos (bilirrubina, lipemia) e seus efeitos ocorrem tanto nas amostras de pacientes como nos materiais processados (calibradores e controles). Em contraste, os efeitos da matriz so exclusivos de alguns materiais calibradores ou de controle e se originam dos fatores j mencionados. Do ponto de vista ideal os materiais processados (calibradores ou controles) e amostras frescas de pacientes deveriam gerar a mesma resposta em um sistema de medio utilizado na rotina. Infelizmente os materiais processados utilizados para transferir e assegurar a exatido aos laboratrios tem apresentado freqentemente propriedades reativas diferentes daquelas encontradas em amostras frescas de pacientes. O impacto produzido pelo efeito da matriz nas respostas analticas ocorre de maneira complexa, devido a uma grande variedade de mecanismos. Podemos citar como exemplo a utilizao de plasmas vencidos e recalcificados para obteno do soro, modificaes fsicas introduzidas na estrutura macromolecular das protenas e na viscosidade da soluo, ao de estabilizadores, efeitos dos procedimentos e liofilizao, diferenas entre as isoformas das protenas presentes nas amostras nativas e nos materiais processados e combinaes

de concentraes dos analitos que dificilmente so encontradas nas amostras dos pacientes. Parte da publicao Labtest: Usando Controles no Laboratrio Clnico, n13, ano 19, 1998. Jos Carlos de Almeida Basques

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