Recuento Bacteriano Humedales

CUANTIFICACION DE BACTERIAS NITRIFICANTES, DENITRIFICANTES, FIJADORAS DE NITROGENOY HETEROTROFAS DE HUMEDALES ARTIFICIALES SUB-SUPERFICIALES PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA RESIDUAL.
ERICKA TRINIDAD GAITAN. COD: 4801044.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA. FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS. MICROBIOLOGIA CON ENFASIS EN ALIMENTOS. PAMPLONA. 2006.
CUANTIFICACION DE BACTERIAS NITRIFICANTES, DENITRIFICANTES, FIJADORAS DE NITROGENOY HETEROTROFAS DE HUMEDALES ARTIFICIALES SUB-SUPERFICIALES PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA RESIDUAL.
ERICKA TRINIDAD GAITAN. COD: 4801044.
Trabajo de pasanta como requisito de graduacin.
Irma Janeth Sanabria. Directora de proyecto.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA. FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS. MICROBIOLOGIA CON ENFASIS EN ALIMENTOS. PAMPLONA. 2006.
CONTENIDO Pg. INTRODUCCIN 4. 1. OBJETIVOS. 5. 2. JUSTIFICACIN. 6. 3. MARCO REFERENCIAL 7. 3.1. MARCO TEORICO 7. 3.1.1. Microbiologa del agua.. 7. 3.1.2. Agua residual 7. 3.1.3. Humedales 8. 3.1.4. Humedales sub-superficiales. 10. 3.1.5. Ventajas de los humedales sub-superficiales 10. 3.1.6. Remocin biolgica 11. 3.1.7. Nitrificacin biolgica 12. 3.1.8. Denitrificacin 12. 3.1.9. Fijacin biolgica del nitrgeno molecular 13. 3.2. MARCO CONTEXTUAL.. 14. 3.3. MARCO LEGAL 15. 4. METODOLOGA... 16. 5. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES. 18. 6. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS 19. 7. CONCLUSIONES.. 27. 8. RECOMENDACIONES O SUGERENCIAS 28. 9. GLOSARIO.... 29. 10. BIBLIOGRAFA... 30. 11. ANEXOS. .. 32.
INTRODUCCIN Este trabajo es una recopilacin de toda la parte experimental y terica desarrollada en el laboratorio de microbiologa ambiental de la Universidad del Valle en colaboracin con el proyecto Modelacin de los mecanismos involucrados en la remocin de nutrientes y materia orgnica en humedales sub-superficiales para el tratamiento de aguas residuales domesticas, durante la segunda etapa del mismo. En los ltimos aos se ha aumentado la contaminacin por parte de la poblacin, incluyendo la contaminacin de las fuentes de agua, situacin que afecta la disponibilidad de las mismas, estos hechos han llevado a la comunidad cientfica a la bsqueda de soluciones para mantener un equilibrio en el medioambiente. Actualmente se estn realizando investigaciones para el modelamiento de humedales subsuperficiales en el trpico, por ser un mtodo natural para el tratamiento de aguas residuales domesticas. Los estudios buscan aportar informacin que ayude a la optimizacin en la aplicacin de estos tratamientos, ya que se trabaja con ellos pero como un modelo de caja negra, debido a que no se han esclarecido completamente las comunidades, poblaciones, e interacciones que all se llevan a cabo. Dentro de las actividades realizadas esta el recuento de los cuatro grupos bacterianos (nitrificantes, denitrificantes, fijadoras de nitrgeno y hetertrofas), de los humedales artificiales sub-superficiales para el tratamiento de agua residual de la planta ubicada en Ginebra-Valle, y apoyo a las actividades desarrolladas en laboratorios de docencia. En este informe, basado principalmente en el recuento de bacterias nitrificantes, denitrificantes, fijadoras de nitrgeno, y hetertrofas de humedales sub-superficiales como componentes fundamentales en la eliminacin de contaminantes en los humedales anteriormente mencionados, para el tratamiento de aguas residuales, se pretende aportar datos que contribuyan a la elaboracin de un modelo matemtico. La realizacin del proyecto fue a nivel de campo, con toma de muestras en la estacin de Ginebra Valle, las cuales fueron procesadas en el laboratorio.
1. OBJETIVOS.
1.1. OBJETIVO GENERAL.
Incursionar en el campo investigativo, como apoyo en el rea de microbiologa para el desarrollo del proyecto Modelacin de los mecanismos involucrados en la remocin de nutrientes y materia orgnica en humedales sub-superficiales para el tratamiento de aguas residuales domesticas, durante la segunda etapa del mismo.
1.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS. Evaluar y aplicar los protocolos propuestos para el recuento de bacterias nitrificantes y fijadoras de nitrgeno, por la tcnica de placa en superficie, bacterias hetertrofas por la tcnica de placa en profundidad, y bacterias denitrificantes por el mtodo del numero mas probable (NMP). Proponer recomendaciones para optimizar los protocolos propuestos para el aislamiento de las bacterias de inters. Apoyar las actividades del laboratorio de docencia. Actualizar la base de datos en formato PDF del grupo de investigacin GAOX. (Grupo de investigacin en procesos avanzados de oxidacin).
2. JUSTIFICACIN. Con el crecimiento de la poblacin mundial la demanda de agua para el consumo humano y la contaminacin de las fuentes de agua, hacen necesario aplicar mtodos de tratamiento a las aguas residuales domesticas e industriales para evitar la contaminacin de los cuerpos de agua a los cuales se vierten estas agua residuales para un mejor cuidado del ambiente y del recurso hdrico. En el rea del tratamiento de aguas residuales hay varias opciones a la hora de escoger, sin embargo estos mtodos pueden llegar a ser demasiado costosos y an si el beneficio es grande, los costos son una limitante para la puesta en marcha de dichos tratamientos no obstante se han venido estudiando mtodos naturales, igualmente efectivos en el tratamiento de las aguas residuales como son los humedales artificiales de flujo subsuperficial. Este trabajo contribuye a la recopilacin de datos, para el estudio y anlisis de este tipo de humedales, con el fin de usarlos en modelacin, con miras a la aplicacin a gran escala de este tipo de tratamiento.
3. MARCO REFERENCIAL 3.1. MARCO TEORICO 3.1.1. Microbiologa del agua. La hidrosfera es un hbitat adecuado para el crecimiento microbiano, ya que contiene agua, que es necesaria para el metabolismo microbiano. En la hidrosfera hay poblaciones microbianas autctonas que comparten un nmero limitado de caractersticas generales. Los microorganismos del agua pueden crecer a baja concentracin de nutrientes. En el medio acutico, la mayora presentan movilidad por flagelos u otros mecanismos. La hidrosfera se divide en los hbitats de agua dulce (limnticos) como lagos, estanques, pantanos, fuentes, humedales, arroyos y ros, y los hbitats marinos como ocanos, mares y estuarios. (Atlas, Richard, 2002). En el ambiente acutico, el papel de los microorganismos en la degradacin de materia orgnica refleja el proceso que ocurre en las plantas de tratamiento de aguas residuales, pero adems de esto los microorganismos en el ambiente acutico pueden ser importantes como indicadores de contaminacin. (Lester et al., 1999). A diferencia de las plantas de tratamiento de aguas residuales, muchas aguas naturales contienen muy poca materia orgnica y consecuentemente tienen baja densidad microbiana. Si la biodegradacin de compuestos especficos puede ocurrir esto transcurre bajo condiciones de limitaciones severas de nutrientes. Las bajas concentraciones de nutrientes podran no permitir el crecimiento excepto a tasas muy bajas, esto podra significar que el flujo de energa en el sistema es insuficiente para el mantenimiento de la poblacin microbiana (Atlas, Richard, 2002). 3.1.2. Agua residual. Los residuos lquidos se producen por las actividades humanas diarias (aguas residuales domesticas) y por diferentes actividades agrcolas e industriales. Mediante drenaje a travs del alcantarillado, las descargas de residuos lquidos alcanzan las masas naturales de aguas superficiales, como ros, lagos y ocanos. Estas mismas capas de agua se utilizan de formas alternativas : como agua potable , para uso domstico e industrial y para el riego ; para el cultivo de peces y mariscos ; y para piscinas y otras actividades de ocio ,por lo tanto es crucial mantener la calidad de esta agua naturales lo mejor posible .El mantener la calidad de agua significa no sobrecargar con nutrientes orgnicos e inorgnicos, o con sustancias toxicas, nocivas o inaceptables desde el punto de vista esttico .No deben alterase significativamente su oxigenacin, temperatura, salinidad, turbidez o pH. Las aguas naturales tienen la capacidad inherente de auto purificacin. Los microorganismos acuticos hetertrofos utilizan y mineralizan lo nutrientes orgnicos. El amonio se nitrifica y junto con otros nutrientes inorgnicos es utilizado e inmovilizado por las algas y plantas acuticas superiores. Las bacteria patgenas se reducen y finalmente se eliminan por las presiones de competencia y depredacin ejercidas por poblaciones
acuticas autctonas es as como las aguas naturales pueden aceptar una cantidad moderada de aguas residuales sin depurar, sin que se produzca un deterioro significativo de la calidad. El aumento en el volumen de las aguas residuales lleva a la bsqueda de nuevas soluciones que lleven a un uso adecuado del agua natural y la posibilidad de reutilizar aguas residuales domesticas tratadas (Atlas, Richard, 2002). De los constituyentes enumerados en la tabla 1, los slidos suspendidos, los compuestos orgnicos biodegradables y los organismos patgenos son de mayor importancia, y por ello la mayora de instalaciones de manejo de aguas residuales son diseadas para su remocin. TABLA 1. Principales constituyentes de inters en el tratamiento de aguas residuales. (Crites, Tchobanoglous, 2000). Constituyentes Slidos suspendidos totales Razn de inters Formacin de depsitos de lodos y condiciones anaerobias. Compuestos orgnicos Agotamiento del oxigeno en fuentes biodegradables naturales y desarrollo de condiciones spticas. Constituyentes inorgnicos Constituyentes inorgnicos adicionados por disueltos (Slidos disueltos el uso. totales ) Aplicaciones en la reutilizacin de aguas residuales Metales pesados Constituyentes metlicos adicionados por el uso. Muchos metales se clasifican como Polutantes de prioridad. Nutrientes Crecimiento excesivo de la vida acutica. Indeseable, eutrofizacin, concentracin de nitratos en agua para consumo humano. Patgenos Transmisin de enfermedades. Polutantes orgnicos prioritarios Sospechosos de ser carcinognicos, mutagnicos, teratogenicos o de toxicidad aguda alta. Muchos polutantes prioritarios son resistentes a los mtodos de tratamientos convencionales. (Conocidos como contaminantes orgnicos refractarios.)
3.1.3. Humedales (wetlands). Los humedales son ambientes acuticos de poca profundidad en los que predominan las plantas emergentes. Estos se desarrollan en condiciones climticas diversas en zonas acuticas superficiales con escaso drenaje. Las plantas emergentes sirven como base para la clasificacin de los humedales. Los humedales y sistemas acuticos de tratamiento son aquellos que utilizan plantas acuticas y animales para el tratamiento de aguas residuales municipales e industriales. Los humedales construidos son una alternativa natural a los mtodos tcnicos de tratamiento de aguas de desecho (Atlas, Richard, 2002). Son sistemas pasivos de depuracin, se caracterizan por su simplicidad de operacin, un bajo o nulo consumo energtico, una baja produccin de residuos, un bajo impacto ambiental sonoro y una buena integracin al medio ambiente rural. Hay varios tipos de humedales y sistemas acuticos de tratamiento como:
Fig.1 Sistemas de humedales para el tratamiento de aguas residuales(A, estanque con plantas libres flotantes; B, estanque de flujo sub-superficial horizontal con plantas emergentes; C, humedal de flujo sub-superficial horizontal; D, humedal de flujo vertical). (Stottmister ,2003) Humedales artificiales de flujo libre Como pantanos o cinagas. Con su vegetacin parcialmente en el agua. Profundidad entre 100- 450 mm. Humedales artificiales de flujo sub-superficial La vegetacin emergente se planta en el medio que puede ser grava o arena. El propsito de la vegetacin es proveer oxigeno ala zona radicular y aumentar el rea superficial para el crecimiento biolgico en la zona de las races.
Profundidad del lecho 0, 45 a 1 m. y tienen una pendiente caracterstica desde 0 a 0,5 %.
Sistemas acuticos de plantas flotantes Plantas flotantes suspendidas con races relativamente largas (Jacinto de agua), y la raz sirve como medio para el crecimiento de pelculas de bacterias. Lentejas de agua (sistemas de sombreado superficial). Sistemas combinados Combinacin de humedales y sistemas acuticos para lograr objetivos en relacin a la calidad del agua. Los humedales de flujo sub-superficial tienen ventajas respecto a los de flujo superficial: Menor incidencia de mal olor debido a la naturaleza subterrnea del flujo. Bajo riesgo de exposicin directa de las personas y de aparicin de insectos gracias al flujo subterrneo. Proteccin trmica debido a la acumulacin de restos vegetales y del flujo subterrneo, ventaja interesante en los pases nrdicos, donde la cobertura del hielo y nieve invernal no afectan el proceso. Entre lo inconvenientes cabe destacar: Mayor coste de construccin debido fundamentalmente al material granular, el coste puede incrementarse hasta un 30 %. Menor valor como ecosistema para la vida salvaje debido a que el agua es difcilmente accesible a la fauna. Colmatacion del medio granular por grasas y aceites, aportes continuos de materiales finos inertes.
Ventajas frente a los sistemas convencionales mecanizados: Simplicidad en operacin.Requieren un tiempo bajo de operarios y pocos equipos electromecnicos; pueden ser explotados por operarios con poca experiencia. Consumo energtico mnimo o nulo.En general limitado al pre-tratamiento o elevaciones. Baja produccin de residuos durante la operacin del sistema, bajo costo de explotacin y mantenimiento en la operacin del sistema. Fiabilidad en la operacin del sistema de tratamiento. Con tiempos de permanencia hidrulica muy altos. Bajo impacto ambiental.
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Creacin y restauracin de zonas hmedas aptas para potenciar vida salvaje, educacin ambiental y zonas de recreo.
Principales inconvenientes frente a sistemas convencionales: Requieren una superficie superior (20-80 veces superior ). Coste de construccin similar, o incluso mayor. Larga puesta en marcha, desde meses hasta un ao. Difciles de disear bien dado al alto numero de procesos y mecanismos implicados en la eliminacin de contaminantes. Pocos o ningn factor de control durante la operacin.
Los humedales construidos e han utilizado para tratar una gamma amplia de aguas residuales: Aguas domsticas y urbanas. Aguas industriales ,incluyendo fabricacin del papel ,productos qumicos y farmacuticos, cosmticos, alimentacin, refineras y mataderos entre otros. Lixiviados de vertederos. Aguas de drenaje de extracciones mineras. Aguas de escorrenta superficial agrcola y urbana. Tratamiento de fangos de depuradora. (Atlas, Richard, 2002).
3.1.6. Remocin biolgica. Dado que tanto el nitrgeno como el fsforo pueden causar impacto en la calidad del agua que los recibe ,la descarga de uno o ambos constituyentes debe ser controlada con frecuencia .El nitrgeno puede estar presente en las aguas residuales de varias maneras por ejemplo en forma orgnica amoniaco , nitritos o nitratos. El fsforo se encuentra en las aguas residuales en forma de fosfatos complejos los cuales representan cerca de la mitad de los fosfatos de las aguas residuales municipales y provienen del uso de estos materiales en detergentes sintticos (Atlas et al., 2002). La figura 2 muestra el flujo del nitrgeno en la tierra.
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Figura 2. Ciclo del nitrgeno .Los pasos crticos en la fijacin del nitrgeno, en la nitrificacin y en la denitrificacin estn mediados por las bacterias. 3.1.7. Nitrificacin biolgica .En la nitrificacin biolgica, el amoniaco se oxida en un proceso de dos pasos: primero a nitritos luego a nitratos. En la conversin de amonio a nitritos representada por la Nitrosomonas sp. ocurre el mayor consumo de oxgeno (4.33 mg O2 / mg N-NH4+ oxidado), adems de que se generan iones hidrgeno, propiciando en el cultivo un descenso del pH. En un primer paso, la enzima amonio mono-oxigenasa (AMO) transforma al amonio en hidroxilamina, que posteriormente se convierte en nitrito, mediante la hidroxilamina xidoreductasa (HAO).
(AMO)
NH 4 + + H + + 2e - + O 2
(HAO)
NH 2 OH + H 2 O NO 2 - + 5 H + + 4e -
NH 2 OH + H 2 O
La conversin de nitritos a nitratos esta representada por Nitrobacter sp. Mediante la accin de la nitrito xido-reductasa (NOR):
(NOR)
NO2- + H 2 O
NO3- + 2 H + + 2 e -
Las bacterias nitrificantes son quimiolitotrfas y utilizan la energa de la nitrificacin para fijar CO2, son microorganismos sensibles y extremadamente susceptibles a un amplio rango de sustancias inhibitorias .A partir de estudios realizados tanto en laboratorio como en plantas a gran escala se encontr que los siguientes factores afectan el proceso de nitrificacin: Concentracin de amonio y nitritos.
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Relacin DBO5 / TKN (ver glosario). Concentracin de oxigeno disuelto. Temperatura. pH
Las concentraciones de oxigeno disuelto que estn por encima de 1 mg /L son esenciales para que ocurra el proceso de nitrificacin. Si los niveles de oxigeno disuelto caen por debajo de este valor el oxigeno se convierte en el nutriente limitante y la velocidad de nitrificacin disminuye o el proceso se detiene. Existe un rango ptimo entre pH 7.5 a 8.6, pero los sistemas que estn aclimatados a valores de pH menores llevan a cabo la nitrificacin con xito (Atlas et al., 2002). 3.1.8. Denitrificacin. Las bacterias denitrificantes obtienen energa para su crecimiento de la conversin en nitrgeno gaseoso, pero requieren una fuente de carbono para la sntesis celular .Dado que los efluentes nitrificados tienen, por lo general un bajo contenido de materia carboncea, se requiere con frecuencia una fuente externa de carbono. La desnitrificacin es un proceso respiratorio anaerobio heterotrfico del tipo anxico, donde la reduccin del nitrato hasta N2 sigue una serie de pasos que involucran la actividad de enzimas diferentes.
Nar Nir
nitrito
Nor
Nos
NO3Nitrato
NO2- NO
oxido ntrico
N2O oxido nitroso
N2
nitrgeno gaseoso
Nar: nitrato reductasa; Nir: nitrito reductasa; Nor: oxido ntrico reductasa; Nos: oxido nitroso reductasa. Dentro de las variables que afectan el proceso de denitrificacin se encuentran: Concentracin de nitratos Concentracin de carbono Temperatura pH
3.1.9. Fijacin biolgica de nitrgeno molecular. La fijacin de nitrgeno molecular la llevan a cabo diversos gneros de bacterias de vida libre, algunas de las cuales estn asociadas a la rizosfera y gneros de bacterias que forman asociaciones mutualisticas con las plantas. El proceso de reduccin de nitrgeno a amoniaco es catalizado por la enzima nitrogenasa. El complejo de la enzima nitrogenasa tiene dos coproteinas, una que contiene hierro y molibdeno, y otra que solamente contiene hierro. La nitrogenasa es muy sensible al oxigeno, necesita una presin parcial o muy baja de este elemento para poder realizar su
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actividad. Los genes que determinan la fijacin del nitrgeno, estn sometidos a una rigurosa regulacin gentica. Existe un sistema regulador muy complejo que controla la expresin de numerosos genes nif necesarios para la sntesis de la nitrogenasa activa. La fijacin necesita adems de la nitrogenasa, ATP, una ferrodopsina reducida y quizs otros citrocromos y enzimas. La ecuacin total de la reaccin se muestra a continuacin:
El amonio es el primer producto que se detecta en el proceso de fijacin, y tal como lo indica la DG`o positiva (DG`o = + 150 Kcal. /mol = 630 Kj / mol), la reaccin requiere una considerable entrada de energa. El amonio se asimila en forma de aminocidos, que se polimerizan, formando protenas. (Atlas et al., 2002).
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3.2. MARCO CONTEXTUAL La universidad del valle , el instituto de investigacin y desarrollo de agua potable saneamiento bsico y conservacin del recurso hdrico (CINARA ), el departamento de biologa vegetal aplicada ,el instituto VON HUMBOLDT y la corporacin autnoma regional del Valle del Cauca (CVC) se unen para la realizacin del proyecto : Modelacin de los mecanismos involucrados en la transformacin y remocin de nutrientes y materia orgnica en humedales artificiales sub-superficiales para el tratamiento de aguas residuales domesticas en el ao 2003. La investigacin se centra en identificar los principales mecanismos involucrados en la transformacin de nutrientes y materia orgnica en un humedal artificial sub-superficial, para el tratamiento de aguas residuales domsticas. El trabajo es realizado en Santiago de Cali, Valle del Cauca, por el proyecto ya especificado y atendiendo al problema de contaminacin del recurso hdrico, y las posibilidades de re-uso de aguas residuales domsticas tratadas. En el laboratorio de Microbiologa ambiental de la Universidad del Valle, son llevados a cabo los recuentos de bacterias nitrificantes, denitrificantes, fijadoras de nitrgeno y hetertrofas, con el propsito de conocer la proporcin de las poblaciones ya mencionadas presentes en la interaccin planta-rizosfera.
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3.3. MARCO LEGAL La experimentacin va dirigida al tratamiento de aguas residuales domesticas para la realizacin de la modelacin de los humedales en Ginebra (Valle ) y su potencialidad para ser aplicados como solucin al problema de contaminacin del recurso hdrico tanto para la regin como para el pas ,por lo cual se trae a colacin los siguientes decretos : DECRETO 1594 DEL 26 DE JUNIO DE 1984, del ministerio de agricultura y por el cual se reglamenta parcialmente el titulo I de la ley 9 de 1979, axial como el capitulo II de titulo VI parte III Libro II y el titulo III de la parte III Libro I del decreto Ley 2811 de 1974 en cuanto a usos del agua y residuos lquidos. GUIA TECNICA PARA EL DESARROLLO DE PROYECTOS DE REUSO DE AGUAS RESIDUALES DOMESTICAS MUNICIPALES, 2001, Ministerio del medio ambiente, direccin general ambiental sectorial ,grupo de gestin ambiental , urbano y salud .
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4. METODOLOGA.
4.1. Descripcin del sistema. La planta de tratamiento, ubicada en el municipio de Ginebra (Valle del Cauca), perteneciente a la empresa Acuavalle S.A., cuenta con tres humedales de flujo subsuperficial como tratamiento terciario de las aguas residuales domesticas de este municipio, las aguas que llegan al sistema vienen de un tratamiento en la laguna anerobia (fig.. En esta etapa del proyecto se trabajo con las siguientes cargas hidrulicas: Humedal plantado con Heliconia psittacorum 600 ml /10 s. Humedal sin vegetacin 200 ml / 10 s. Humedal plantado con Phragmites australis 400ml / 10 s.
Figura 3. Vista de los humedales Phrag: humedal plantado con Phragmites australis SV: humedal sin vegetacin Caa: columna de agua afluente Cae: columna de agua efluente Hel: humedal plantado con Heliconia psittacorum
4.2. Toma de muestra La toma de muestra de realiz desde octubre 13 hasta diciembre 13 de 2006(para un total de 63 das). Se tomaron dos tipos de muestra , las muestras de columna de agua ( muestra de agua tomada de tubos PVC donde por medio de pequeos orificios fluye el agua, cada humedal tiene la columna de agua del afluente y del efluente ) y las muestras de sustrato (muestra de carbonilla cercana a la rizosfera de las plantas ), Los humedales fueron muestreados en cuatro puntos ,.sustrato y columna de agua del afluente y del efluente, fueron escogidas tres plantas aleatoriamente para la toma de muestra en cada punto para las muestras de carbonilla, en el humedal sin vegetacin las muestras de sustratos tambin se aleatorizaron, se realizo el mismo procedimiento en cada recoleccin . Las muestras fueron trasladadas al laboratorio de microbiologa ambiental para realizar el recuento de microorganismos.
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A las muestras de columna de aguas se realizaron mediciones de oxigeno disuelto. 4.3. Recuento de microorganismos. Se realizaron diluciones sucesivas de las muestras a partir de 1 g. de sustrato y 1 ml de agua respectivamente en solucin salina 0.85 % .las muestras de sustrato se maceraron para desprender los microorganismos , para bacterias fijadoras de nitrgeno (medio para bacterias fijadoras de nitrgeno, protocolos de laboratorio de microbiologa ambiental) y nitrificantes se sembraron por la tcnica de placa en superficie en el medio autotrfico para Nitrobacter 756 c (DSMZ), para ver la morfologa tpica (gotas de agua), se utilizo como control positivo Nitrobacter winogradski DSM 10237 ,las bacterias hetertrofas se sembraron por la tcnica de placa profunda en agar nutritivo (Merck), y las bacterias denitrificantes por el mtodo del nmero mas probable en medio para bacterias denitrificantes (Londoo, 2002)., determinado por la desaparicin de nitrito y nitrato revelado por el reactivo de Griess-Ilosvay tomando 50 ul de muestra a los cuales se agregaron 50 ul del reactivo, se utilizo el medio de cultivo sin inocular como control negativo para asegurar que las bacterias provienen de la muestra. La mxima dilucin fue de 10-7. Para el recuento de bacterias se utilizaron las cajas que presentaron el crecimiento entre 15 y 300, con estos datos se calculo ufc/ml utilizando la siguiente formula:
Ufc/ml =
numero de colonias * factor de dilucin __________________________________ ml sembrados en la placa
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5. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES MES AGOSTO ACTIVIDAD \ SEMANA 2 3 4 5 Lectura de articulo introductoria X X Control T de incubadoras X Organizacin manuales de equipos X Induccin X X Recoleccin de artculos para la X X base de datos. Limpieza de vidrios zona de lavado X Limpieza de estantes Apoyar las actividades del laboratorio de docencia. Lectura de la bitcora Norma Perez. Bsqueda de bibliografa Planificacin del trabajo Revisin de 1 parte del trabajo Reactivar y conservar en glicerol las cepas de E. coli, Salmonella sp y Shigella sp. Toma y procesamiento de muestra Recuento de hetertrofas Recuento de fijadoras, nitrificantes y denitrificantes. Organizacin de datos. Realizacin de grficos. Elaboracin del trabajo final.
SEPTIEMBRE OCTUBRE 1 2 3 4 1 2 3 4
NOVIEMBRE DICIEMBRE 1 2 3 4 5 1 2 3 4
ENERO 1 2
X X X
X X X
X X X
X X X
X X
X X X X
X X
X X X
X X X
X X X
X X X
X X X X X X X X
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6. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS
Se observo el crecimiento de bacterias nitrificantes y fijadoras de nitrgeno, caracterizado por la formacin de colonias translucidas en forma de gota de agua en los respectivos medios de cultivo. (Figuras 4,5 ,6 y 7).
Figuras 4. Figura 5. Crecimiento tpico de bacterias nitrificantes en medio autotrfico para nitrobacter 756c (DSMZ), las colonias se observan en los crculos negros. El medio proporciona nitrito como fuente inorgnica de nitrgeno y las bacterias fijan el CO2 como fuente de carbono, el crecimiento de estas bacterias varia de 13 a 14 das debido a su metabolismo lento.
Figura 6. Figura 7. Bacterias fijadoras. Crecimiento tpico de bacterias fijadoras en medio por componentes para bacterias fijadoras. El medio proporciona fuente de carbono orgnico e inorgnico sin proporcionar fuente de nitrgeno solo los microorganismos capaces de tomar el nitrgeno atmosfrico se desarrollan en este medio.
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Las bacterias denitrificantes se cultivaron en medios lquidos, se considero positivo con la eliminacin total del nitrgeno del medio de cultivo, revelado por la permanencia del color amarillo del medio de cultivo, al adicionar el reactivo de griess ( figura 8 y 9).
Figura 8. Figura 9. Microplacas donde se revela la presencia de bacterias denitrificantes, los pozos que luego de agregar el reactivo de griess (reactivo del nitrito) se tornaban de color rojo se toma como negativo, si luego de la adicin del reactivo no hay cambio de color se agrega el polvo de zinc (detecta nitratos) si no hay cambio de color, se detecta la desaparicin de las formas nitrogenadas, la prueba es positiva para el crecimiento de bacterias denitrificantes. En la figura 9 los 5 pozos en la parte inferior corresponden al control negativo. En esta investigacin se cuantificaron las bacterias del ciclo del nitrgeno, ya que los principales procesos para la remocin de nitrgeno de las aguas residuales se da principalmente por nitrificacin /denitrificacin. Las poblaciones encontradas para la zona cercana a la rizosfera varan entre 5,42 y 10,15 unidades logartmicas para bacterias hetertrofas, 5,48 y 8,31 unidades logartmicas para fijadoras de nitrgeno, 4,02 y 7,97 unidades logartmicas para nitrificantes y <2,47 y 10,79 unidades logartmicas para denitrificantes. Se resalta la falta de datos en las grficas correspondientes a las columnas de aguas. Se esperaba encontrar diferencias en las poblaciones de los humedales con plantas y el humedal sin vegetacin, ya que el propsito de la vegetacin es proveer oxigeno a travs de la zona radicular y aumentar el rea superficial para el crecimiento biolgico en la zona de las races , sin embargo el transporte real de oxigeno hacia la zona radicular y luego a la columna de agua es limitado , las races tambin liberan sustancias orgnicas .Estas diferencias no son grandes ya que el humedal sin vegetacin presentaba crecimiento de pastos ( figura 13) , al igual que el humedal plantado con Phragmites y Heliconia, que presentaban crecimiento de gramneas (Leucaena sp.) (figuras 13, 14,15 y 16). Estas plantas poseen una raz densa y expansiva (figura 17.) y en la rizosfera de estas plantas existen altas poblaciones de bacterias fijadoras y nitrificantes.
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a
log UFC/ Bacterias
12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic Heterotrof as Fijadoras Nitrificant es Denitrifica ntes
f echas
b
Log UFC/ bacterias 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov fechas 6 dic 13 dic Heterotrofas Fijadoras Nitrificantes Denitrificantes
c
12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic Fechas Log UFC/g-bact./ml Heterotrofas Fijadoras nitrificantes Denitrificantes
d
12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov fechas 6 dic 13 dic Log UFC/ bacterias Heterotrofas Fijadoras Nitrificantes denitrificantes
Figura 10. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal plantado con Heliconia psittacorum. a. Rizosfera del afluente, hay gran cantidad de bacterias denitrificantes en los tres primeros muestreos. b. Columna de agua afluente, el 27 de octubre disminuye el oxigeno disuelto (figura 18), a su vez hay un descenso en el nmero de bacterias hetertrofas, nitrificantes y fijadoras de nitrgeno, y un aumento de las bacterias denitrificantes. c. Rizosfera del efluente, en las ltimas fechas se resalta el aumento de bacterias hetertrofas. d. Columna de agua efluente. Los vacos en b y d corresponden a las muestras que no fue posible tomar. En todos los puntos de muestro se destaca la disminucin del nmero de bacterias denitrificantes en las dos ltimas fechas de muestreo.
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a
12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 Heterotrof as Fijadoras Nit rif icant es Denit rificant es
12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 het erot rofas Fijadoras Nit rif icant es Denit rificant es
0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov f echas 6 dic 13 dic
13 oct
26 oct
9 nov
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6 dic
13 dic
fechas
10,00 8,00 Heterotrof as 6,00 4,00 2,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic Fechas Fijadoras Nit rif icant es Denit rificant es
10,00 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic f echas Het erotrof as fijadoras Nitrificant es Denitrificant es
Figura 11. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal sin vegetacin. a. Rizosfera del afluente, presenta un aumento de bacterias hetertrofas y denitrificantes el 23 de noviembre. b. columna de agua afluente, del 26 de octubre al 23 de noviembre se da una leve disminucin del oxigeno disuelto (figura 18), y un aumento de bacterias denitrificantes en esta fecha. La cantidad de oxigeno empieza a aumentar el 6 de diciembre fecha en la cual empieza el descenso en el numero de bacterias denitrificantes. c. Rizosfera del efluente, se aprecia un aumento de tres grupos bacterianos (hetertrofas, nitrificantes y fijadoras) el 23 de noviembre. d. Columna de agua efluente, hay disminucin del oxigeno disuelto desde el 26 de octubre hasta el 6 de diciembre (figura 18), sin embargo las bacterias denitrificantes disminuyen a partir del 6 de diciembre. Los vacos en b y d corresponden a las muestras que no fue posible tomar. En todos los puntos de muestreo se destaca la disminucin del nmero de bacterias denitrificantes en las dos ltimas fechas de muestreo.
23
a 12,00
10,00 Log UFC/g-bact./ml 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic Fechas Heterotrofas Fijadoras Nitrificantes Denitrificantes
b 10,00 9,00
8,00 Log UFC/g-bact./ml 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00
Nitrificantes Fijadoras Nitrificantes denitrificantes
13 oct
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
13 dic
fechas
c 12,00
10,00 Log UFC/g-bact./ml 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic Fechas Heterotrofas Fijadoras Nitrificantes Denitrificantes
d
Log UFC/g-bact./ml
12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic fechas
Heterotrofas Fijadoras Nitrificantes Denitrificantes
Figura 12. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal plantado con Phragmites australis. a. Rizosfera del afluente. b. columna de agua afluente, en la muestra del 13 de octubre el oxigeno disuelto es de 6,3 mg/l (figura 18) y se obtuvo un alto nmero de bacterias denitrificantes, para el 13 de diciembre el oxigeno disuelto fue 1,8 mg /l y las bacterias denitrificantes disminuyen, la cual puede ser causada por otra variable. c. Rizosfera del efluente, se aprecia un aumento de bacterias hetertrofas, y una leve disminucin de bacterias nitrificantes y fijadoras. d. Columna de agua efluente, presenta un comportamiento similar al de la columna de agua del afluente donde disminuye el numero de bacterias al igual que la cantidad de oxigeno disuelto. En todos los puntos de muestreo se destaca la disminucin del nmero de bacterias denitrificantes en las ltimas fechas de muestreo.
24
Figura 13. Humedal sin vegetacin, se puede apreciar el crecimiento de pasto (Cyperus rotundus) en todo el humedal. Figura 16. Humedal plantado con Heliconia, se observa la maleza.
Figura 14. Humedal plantado con Phragmites. Se puede ver la maleza
Figura 17. Malezas encontradas en los humedales, se aprecia el tamao de la raz.
Figura 15. Humedal plantado con Heliconia, se observa la maleza.
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Oxigeno disuelto en la columna de agua

8 7 6 5 4 3 2 1 0 13-oct 27-oct 10-nov 24-nov fecha
mg /l O2
HCAA HCAE SVCAA SVCAE FCAA FCAE 8-dic
Figura 18. Datos de oxigeno disuelto tomado en la columna de agua. HCAA: columna de agua Heliconia afluente. HCAE: columna de agua Heliconia efluente. SVCAA: columna de agua humedal sin vegetacin afluente. SVCAE: columna de agua humedal sin vegetacin efluente FCAA: columna de agua Phragmites afluente. FCAE: columna de agua Phragmites efluente. Los resultados de oxigeno disuelto reflejan los cambios producidos en el humedal a causa de la poda realizada en los humedales el 27 de octubre, los restos vegetales no son retirados de los humedales lo que incrementa el contenido de materia orgnica en los humedales plantados. El nmero de bacterias denitrificantes se redujo considerablemente en los dos ltimos muestreos, se debe tener en cuenta que las acondiciones de anoxia son proporcionadas por el humedal sin embargo su disminucin puede ser causa de la disponibilidad de materia orgnica para la sntesis celular.
26
8. CONCLUSIONES
Los protocolos aplicados permiten la cuantificacin de los grupos bacterianos, en esta etapa fue necesario disminuir el nmero de diluciones, para obtener una buena recuperacin de bacterias fijadoras de nitrgeno. De acuerdo a los resultados obtenidos las poblaciones bacterianas cuantificadas, indican un alto potencial de la ocurrencia de los procesos de remocin de nitrgeno, esto es importante en el tratamiento del agua residual para la eliminacin de las formas nitrogenadas presentes en estas aguas. Las condiciones especficas para cada humedal marcan las diferencias en el nmero de bacterias cuantificadas. En esta etapa del proyecto no fue posible relacionar las variables fsicoqumicas, con el aumento o disminucin de las poblaciones, debido a la falta de datos.
27
9. RECOMENDACIONES
Para encontrar los parmetros que expliquen las variaciones de los microorganismos se recomienda: Tener en cuenta los factores fsico qumicos (pH, T, DBO, concertacin de nitratos (NO3), nitritos (NO2)) que afectan cada grupo bacteriano y asegurar la medicin de dichos parmetros en cada muestreo.
Controlar en los humedales factores que pueden causar variaciones, como la carga hidrulica y malezas.
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10. GLOSARIO
Hetertrofo: microorganismo que sintetiza todo el material celular a partir de compuestos orgnicos. Humedal artificial: sistema construido que replica las caractersticas y capacidad de reciclaje de aguas de los sistemas pantanosos naturales. Modelacin: es la habilidad para describir la situacin problemtica que confronta un analista. Puede expresarse a travs de matemticas, smbolos o palabras, pero es esencialmente una descripcin de entidades y las relaciones entre ellas. Polutante: Es una sustancia que causa contaminacin y por definicin puede causar algn efecto peligroso. Quimiolittrofo: Microorganismos capaces de usar el CO , CO2 o carbonatos como fuente de carbono para la biosntesis celular y que derivan energa de la oxidacin de componentes inorgnicos. Rizosfera: es la parte del suelo inmediata a las races, tal que al extraer una raz, es aquella porcin de tierra que resta adherida a la misma. TKN: Mtodo analtico que determina el nitrgeno total orgnico y el amonio.
DQO :Medida del oxigeno requerido para oxidar todos los compuestos presentes en el agua ,tanto orgnicos como inorgnicos ,por la accin de agentes fuertemente oxidantes en medio cido La materia orgnica se oxida hasta dixido de carbono y agua ,mientras el nitrgeno se convierte en amoniaco.
29
11. BIBLIOGRAFA
ATLAS, M. RONALD; BARTHA, RICHARD, 2002.Ecologa microbiana y microbiologa ambiental, Madrid, Espaa .Adison Wesley. CARRILLO, CERVANTES FRANCISCO; PEREZ, JAIME; GOMEZ, JORGE.2000.Avances en la eliminacin biolgica del nitrgeno de las aguas residuales. Revista Latinoamericana de microbiologa 42:73-82. CRITES, RON; TCHOBANDGLOUS, GEORGE, 2000.Sistemas de manejo de aguas residuales para ncleos pequeos y descentralizados. 1043pp . KHIN, THAN; ANNACHHATRE, AJIT P.2004.novel microbial nitrogen removal processes. Biotechnology Advance 22: 519-532 LESTER, J.N; BIRKETT, J .N.1999.Microbiology and chemistry for environmental scientist and engineers, 2 nd edition, E&fn SPON. Tailor & Francis group. London and New York. LONDOO, 2002.Evaluacin de las tasas de nitrificacin y denitrificacin en la columna de agua de un sistema natural para el tratamiento de agua residual domstica basado en la utilizacin de Spirodella polirrhyza, Tesis de post-grado. Cali-Colombia. Universidad del Valle. MARCHETTO, MARGARITA; GIANOTTI POZZI, ELOISA ;CAMPOS, ROBERTO JOSE; PIRES ,ROBERTO CLETO;2003.Estimate of denitrifying microbiota in terciary sewage treatment and kinetic of denitrification process using different sources of carbon,Brazilian Journal of microbiology. 34:104-110. PREZ, NORMA.2006. Cuantificacin de bacterias nitrificantes, denitrificantes, fijadoras de nitrgeno y hetertrofas de humedales artificiales sub-superficiales para el tratamiento de agua residual. Tesis de pregrado. PRINCIC, ALENKA ; MAHNE,IVAN ;MEGUSAR , FRANCE; PAUL, A. ELDOR ; TIEDJE JAMES.1998.Effects of pH and ammonium concentrations on the community structure of nitrifiying bacteria from wastewater. Applied and Environmetal Microbiology. 3584-3590. RICK, YE W.; STUART, THOMAS M.2001.Microbial nitrogen cycles: physiology, genomics and applications. Current opinion in microbiology 4:307-312. SCMIDT, INGO; SLIEKERS, OLAV; SCHMID;BOCK, EBERHARD;FUERST,JOHN;KUENEN ,GIJS J.;JETTEN, MIKE S. M.; STROUS, MARC.2003.New concepts of microbial treatment processes for the nitrogen removal in wastewater. FEMS Microbiology Reviews 27: 481-492.
30
STOTTMISTER, U.; WIEBNER, A.; KUSCHK, P.; KAPPELMEYER, U.; KASTNER, M. ;BEDERSKI,O. ;MULLER , R.A. ; MOORMANN , H. 2003.Effects of plants and microorganisms in constructed wetlands for wastewater treatment. Biotechnology Advances 22:93-117. TANNER, C. CHRIS; KADLEC, ROBET;GIBBS, MAX C.;SUKIAS, JAMES P. S.; NGUBEN,LONG M. 2002.Nitrogen procesing gradients in subsurface-flow treatment wetlands- influence of wastewater characteristics.Ecological Engineers 18: 499-520.
31
12. ANEXOS Anexo 1. TABLAS DE RESULTADOS NMP 13 octubre/2006 HAR

Tubos 1 2 3 Dilucion 0,0001 0,00001 0,000001 No. Positivo 4 3 1 No. Negativo 1 2 4 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. 0,00001 0,000001 1E-07 x 338330,0605 L 0 R 0 P 5,94699 Pop. Esta 3,38E+09
HE..
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,01 0,001 0,0001 No. Positivo 4 1 1 No. Negativo 1 4 4 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. 0,001 0,0001 0,00001 x 2116,250209 L R P 0,01 0,01 4706,16 Pop. Esta 2,12E+05
HE
HER
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,0001 0,00001 0,000001 No. Positivo 3 2 0 No. Negativo 2 3 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,00001 136070,3443 0,000001 1E-07 L 0 R 0 P 56361,4 Pop. Esta 1,36E+09
32
SVAR
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,0001 0,00001 0,000001 No. Positivo 2 5 4 No. Negativo 3 0 1 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,00001 281906,9398 0,000001 1E-07 L 0 R 0 P Pop. Esta 1,8E-10 2,82E+09
SVER
FAR
FA
FE
Tubos 1 2 3 Dilucion 1,00E-04 1,00E-05 1,00E-06 No. Positivo 3 3 2 No. Negativo 2 2 3 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 1,00E-05 246440,6218 1,00E-06 1,00E-07 L 0 R 0 P 0,01118 Pop. Esta 2,46E+09
33
FER
Tubos 1 2 3 Dilucion 1,00E-04 1,00E-05 1,00E-06 No. Positivo 3 1 2 No. Negativo 2 4 3 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 1,00E-05 170044,029 1,00E-06 1,00E-07 L 0 R 0 P 16,1595 Pop. Esta 1,70E+09
26 de octubre/2006 HAR
HCAA
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,01 0,001 0,0001 No. Positivo 5 3 0 No. Negativo 0 2 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,001 7921,74367 0,0001 0,00001 L R P 0,01 0,01 12996,9 Pop. Esta 7,92E+05
HCAE
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,0001 0,00001 0,000001 No. Positivo 4 1 0 No. Negativo 1 4 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,00001 167421,2294 0,000001 1E-07 L 0 R 0 P 1229643 Pop. Esta 1,67E+09
HER
34
SVAR
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,01 0,001 0,0001 No. Positivo 5 3 0 No. Negativo 0 2 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,001 7905,288903 0,0001 0,00001 L R P 0,01 0,01 12996,8 Pop. Esta 7,91E+05
SVCAA
SVCAE
SVER
FAR
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,0001 0,00001 0,000001 No. Positivo 4 4 3 No. Negativo 1 1 2 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,00001 525359,6651 0,000001 1E-07 L 0 R 0 P 1E-05 Pop. Esta 5,25E+09
35
FER
9 noviembre/2006 HAR
HER
SVAR
SVER
36
FAR
FER
23 de noviembre/2006 HAR
Tubos 1 2 3 Tubos 1 2 3 Dilucion 0,0001 0,00001 0,000001 No. Positivo 4 4 4 No. Positivo 1 2 1 No. Negativo 1 1 1 No. Negativo 4 3 4 No. Tubos 5 5 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,00001 662897,9569 0,000001 1E-07 Vol.Inoc. x 0,00001 82610,97107 0,000001 1E-07 L 0 R 0 P Pop. Esta 7,4E-08 6,63E+09
HCAA
Dilucion 0,0001 0,00001 0,000001 L 0 R 0 P 2407,82 Pop. Esta 8,26E+08
HCAE
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,0001 0,00001 0,000001 No. Positivo 3 4 4 No. Negativo 2 1 1 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,00001 344843,555 0,000001 1E-07 L 0 R 0 P 6E-09 Pop. Esta 3,45E+09
37
HER
SVAR
SVCAA
SVCAE
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,001 0,0001 0,00001 No. Positivo 5 1 0 No. Negativo 0 4 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,0001 32621,21557 0,00001 0,000001 L 0 R 0 P 2187764 Pop. Esta 3,26E+07
SVER
38
FAR
FCAE
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,01 0,001 0,0001 No. Positivo 5 5 0 No. Negativo 0 0 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. 0,001 0,0001 0,00001 x 23888,07491 L R P 0,01 0,01 2695,83 Pop. Esta 2,39E+06
FER
DIC / 06
HAR
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,01 0,001 0,0001 No. Positivo 2 0 0 No. Negativo 3 5 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,001 446,8615158 0,0001 0,00001 L R P 0,01 0,01 2E+09 Pop. Esta 4,47E+04
HER
Tubos 1 2 3 Dilucion 0,01 0,001 0,0001 No. Positivo 1 1 1 No. Negativo 4 4 4 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,001 606,7688063 0,0001 0,00001 L R P 0,01 0,01 261633 Pop. Esta 6,07E+04
39
Punto HCAA SVCAA SVCAE SVER FAR SVAR

Tubos 1 2 3 Tubos 1 2 3
nmp 000 000 000 000 000

No. Positivo 2 1 0 No. Positivo 2 2 1
Pop.esta <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2

No. Negativo 3 4 5 No. Negativo 3 3 4 No. Tubos 5 5 5 No. Tubos 5 5 5 Vol.Inoc. x 0,001 683,9156901 0,0001 0,00001 Vol.Inoc. x 0,001 1176,082853 0,0001 0,00001 L R P 0,01 0,01 2,3E+07 Pop. Esta 6,84E+04
Dilucion 0,01 0,001 0,0001
FER
Dilucion 0,01 0,001 0,0001 L R P 0,01 0,01 505,624 Pop. Esta 1,18E+05
13 dic /06 Punto HAR HCAA HCAE HER SVAR SVCAA SVCAE SVER FAR FCAA FCAE FER
nmp 000 000 000 000 000 000 000 000 000 000 000 000
Pop. esta <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2
40
ANEXO 2 TABLAS DE RESULTADOS DE LA CUANTIFICACION DE BACTERIAS
heterotrofas HAR HCAA HCAE HER fijadoras HAR HCAA HCAE HER nitrificantes HAR HCAA HCAE HER Denitrificantes HAR HCAA HCAE HER heterotrofas SVAR SVCAA SVCAE SVER fijadoras SVAR SVCAA SVCAE SVER nitrificantes SVAR SVCAA SVCAE SVER 13 oct
13-Oct 7,03 8,41 6,29 6,81 26 oct 6,18 6,64 6,20 6,66 13 oct 5,48 4,95 5,36 5,40 26 oct
26-Oct 5,42 6,12 4,30 7,19 9 nov 6,72 5,00 5,40 6,26 9 nov 5,70 4,53 5,20 5,35
09-Nov 6,19
6,13
23-Nov 8,30 8,66 6,53 10,01 23 nov 6 dic 7,59 5,72 5,16 6,38 23 nov 6 dic 4,41 5,61 4,19 5,15
06-Dic 7,30 6,90 9,72 13 dic 7,35 5,94 8,31 13 dic 5,95 4,70 7,97
13-Dic 6,40 5,70 6,48 10,15
6,37
6,11
6,69 5,50 5,55 5,65
5,45
5,78
4,30 4,32 4,06 4,20
9,53 5,33 9,23 9,13 13 oct 8,48 26 oct
10,27 5,90 9,22 9,37 9 nov 6,13 6,45 6,77 6,57 26 oct 9 nov 6,11 5,48 6,60 5,93 26 oct 9 nov 4,85 3,78 5,24 6,11 26 oct 9 nov 5,90 9,30 9,43 9,50
10,21
9,14 23 nov 5,83
9,82 8,92 < 2,47 9,54 9,43 6 dic 10,44 8,57 6,39 9,01 23 nov 6 dic 6,32 7,86 4,93 8,18 23 nov 6 dic 4,51 6,39 3,94 7,57 23 nov 6 dic 9,49 10,30 < 2,47 7,51 < 2,47 9,24 < 2,47
4,65 < 2,47 < 2,47 < 2,47 4,78 < 2,47 13 dic 6,60 8,35 8,49 7,62 13 dic 6,60 6,20 4,60 5,52 13 dic 5,76 4,60 4,11 4,64 13 dic 4,84 < 2,47 < 2,47 < 2,47 < 2,47 4,16 4,45 5,06 4,02 5,48 6,78 7,33 6,23 8,98 6,79 8,16 6,84
7,04 13 oct 6,77
5,64
5,95
6,34 13 oct 4,98
5,95
5,05
5,00
5,06
Denitrificant. 13 oct SVAR SVCAA SVCAE SVER
9,45
9,03
9,38
9,31
41
heterotrofas FAR FCAA FCAE FER fijadoras FAR FCAA FCAE FER nitrificantes FAR FCAA FCAE FER
13 oct 7,74 6,90 9,09 7,45 13 oct 7,28 6,65 6,36 7,33 13 oct 6,80 5,66 5,60 6,48
26 oct 9,53
9 nov 7,75
23 nov 7,27 6,79 9,05 23 nov 7,45 7,67 6,41 7,65 23 nov 5,38 6,32 3,80 4,42 23 nov 9,51
6 dic 7,81
13 dic 6,71 9,35 10,22 7,84 13 dic 7,46 7,80 6,65 7,34 7,62 13 dic 6,63 4,61 4,18 4,35 5,48
7,77 26 oct 8,31 9 nov
8,05
7,85 6 dic
7,73 26 oct 5,98 9 nov
6,60
6,85 6 dic
6,26 9 nov 9,72
5,54
5,15 13 dic < 2,47 < 2,47 < 2,47 5,07 < 2,47
denitrificant. 13 oct 26 oct FAR 10,79 FCAA 9,23 FCAE 9,39 FER 9,23
6 dic 10,68 < 2,47 6,38 10,68
9,56
9,66
ANEXO 4. Valores de oxigeno disuelto tomado en las columnas de agua.
Punto HCAA HCAE SVCAA SVCAE FCAA FCAE
13-Oct 1,6 2,7 6,3 5,2
26-Oct 0,7 6,9 1,5 3,2 -
23-Nov 6,8 1,1 1,1 1,2 1,7
06-Dic 4,7 0,6 0,7 -
13-Dic 1,3 1,4 1,2 2,3 1,8 1,6
El guin (-), representa las muestras no tomadas por falta de agua en las columnas.
42

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CUANTIFICACION DE BACTERIAS NITRIFICANTES, DENITRIFICANTES, FIJADORAS DE NITROGENOY HETEROTROFAS DE HUMEDALES ARTIFICIALES SUB-SUPERFICIALES PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA RESIDUAL.

ERICKA TRINIDAD GAITAN. COD: 4801044.

ERICKA TRINIDAD GAITAN. COD: 4801044.

Trabajo de pasanta como requisito de graduacin.

Irma Janeth Sanabria. Directora de proyecto.

1.1. OBJETIVO GENERAL.

Profundidad del lecho 0, 45 a 1 m. y tienen una pendiente caracterstica desde 0 a 0,5 %.

Relacin DBO5 / TKN (ver glosario). Concentracin de oxigeno disuelto. Temperatura. pH

N2O oxido nitroso

numero de colonias * factor de dilucin __________________________________ ml sembrados en la placa

6. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS

0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov f echas 6 dic 13 dic

Nitrificantes Fijadoras Nitrificantes denitrificantes

Heterotrofas Fijadoras Nitrificantes Denitrificantes

Figura 14. Humedal plantado con Phragmites. Se puede ver la maleza

Figura 17. Malezas encontradas en los humedales, se aprecia el tamao de la raz.

Figura 15. Humedal plantado con Heliconia, se observa la maleza.

Oxigeno disuelto en la columna de agua

HCAA HCAE SVCAA SVCAE FCAA FCAE 8-dic

12. ANEXOS Anexo 1. TABLAS DE RESULTADOS NMP 13 octubre/2006 HAR

Punto HCAA SVCAA SVCAE SVER FAR SVAR

nmp 000 000 000 000 000

Pop.esta <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2 <3 E 2

Dilucion 0,01 0,001 0,0001

ANEXO 2 TABLAS DE RESULTADOS DE LA CUANTIFICACION DE BACTERIAS

13-Dic 6,40 5,70 6,48 10,15

6,69 5,50 5,55 5,65

4,30 4,32 4,06 4,20

9,53 5,33 9,23 9,13 13 oct 8,48 26 oct

9,14 23 nov 5,83

7,04 13 oct 6,77

6,34 13 oct 4,98

Denitrificant. 13 oct SVAR SVCAA SVCAE SVER

7,77 26 oct 8,31 9 nov

7,73 26 oct 5,98 9 nov

6,26 9 nov 9,72

6 dic 10,68 < 2,47 6,38 10,68

ANEXO 4. Valores de oxigeno disuelto tomado en las columnas de agua.

Punto HCAA HCAE SVCAA SVCAE FCAA FCAE

13-Oct 1,6 2,7 6,3 5,2

26-Oct 0,7 6,9 1,5 3,2 -

23-Nov 6,8 1,1 1,1 1,2 1,7

06-Dic 4,7 0,6 0,7 -

13-Dic 1,3 1,4 1,2 2,3 1,8 1,6

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