21/02/2013

Tcnicas Cromatogrficas

Prof. Cleiton Nunes DCA/UFLA

Bibliografia

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Cromatografia
chrom [cor] + graphe [escrever] (grego) Mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de uma mistura atravs da distribuio desses componentes entre duas fases: uma permanece estacionria, e a outra se move atravs dela.

Runge (1850): espalhamento de tintas sobre um papel de filtro atravs da passagem de solventes. Botnico russo Mikhael Tswett (1906): Separao de misturas de pigmentos vegetais em colunas recheadas com adsorventes slidos e solventes variados. Kuhn e Lederer (1930): incio da cromatografia moderna. Separao de xantofilas da gema do ovo usando coluna recheada com CaCO3 e ter como fase mvel.

Processo cromatogrfico

Eluente
fase mvel + amostra

_____________ F. estacionria Eluato

fase mvel + analito

Eluio

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Cromatografia

Tcnica

Planar

Coluna

Fase mvel

Lquido

Lquido

Gs

Fase estacionria

Liquido

Slido

Liquido

Slido

Liquido

Slido

Aplicaes da cromatografia

Preparativa
purificao de substncias isolamento de substncias

Analtica
identificao de substncias quantificao de substncias

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O processo cromatogrfico

Princpios de separao

Adsoro

Principio de separao: competio de adsoro AN-FE por stios na FE (polar)

FE: slido adsorvente Alumina Al2O3 slica SiO2 FM: Hexano Metil-tercbutil-eter CHCl3 CH2Cl2 Aplicaes: separao e purificao de reagentes e materiais sintetizados ou extrados de produtos naturais, etc.

F.M. L G S

F.E

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Princpios de separao Partio Princpio de separao: diferena de solubilidade AN entre FM/FE FE: FE lquida ligada superfcie do suporte (SiO2)
F.M. L G F.E L

FE polar
Mais usado

FE apolar

FM: MTBE, CHCl3, CH2Cl2, hexano

FM: acetonitrila, MeOH, tetrahidrofurano, H2O

Aplicaes: aplicvel a uma srie de tipos de amostras

Princpios de separao

Troca inica

Princpio de separao: atrao entre ons do AN por stios catinicos/aninicos na FE

FE: matriz de polmero ou slica com grupos catinicos/aninicos ligados FE troca catinica: SO3-, COOFE troca aninica: NR3+

F.M.

F.E

FM: solues tampo

Aplicaes: separao de espcies inicas orgnicas ou inorgnicas.

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Princpios de separao

Excluso molecular Princpio de separao: diferena de tamanho das molculas de AN. Maiores eluem 1 FE: polmeros porosos. (PVA, poliacrilamida, S-DVB)

FM:

solvente orgnico - permeao em gel aquosa - filtrao em gel

F.M.
poros

F.E

Aplicaes: purificao de macromolculas, estimativa da massa molecular de macromolculas.

Princpios de separao Afinidade

Princpio de separao: interaes especficas entre um tipo de molcula na amostra e uma segunda molcula quimicamente ligada FE. Aps a purificao, o analito eludo pela mudana no pH, fora inica, temperatura ou reagente especfico

Aplicaes: purificao de molculas biologicamente ativas.

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Processos de eluio em cromatografia lquida FASE NORMAL FE polar FM apolar

apolar polar

FM mais usadas: Metil-tercbutil-eter Clorofrmio Diclorometano Hexano

Processos de eluio em em cromatografia lquida

FASE REVERSA

FE apolar

FM polar

polar apolar FM mais usadas: Acetonitrila Metanol Tetrahidrofurano gua