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NORMA TCNICA

L5.301
Out/2000 16 PGINAS

Zooplncton marinho : mtodos qualitativo e quantitativo mtodo de ensaio

Companhia Ambiental do Estado de So Paulo Avenida Professor Frederico Hermann Jr., 345 Alto de Pinheiros CEP 05459-900 So Paulo SP Tel.: (11) 3133 3000 Fax.: (11) 3133 3402 http: // w w w . c e t e s b . s p . g o v . b r

ZOOPLNCTON MARINHO Mtodos Qualitativo e Quantitativo (Mtodo de ensaio)

L5.301 out/2000

SUMRIO

Pgina

Introduo ............................................................................................................................01 1.Objetivo ............................................................................................................................02 2.Documentos complementares ...........................................................................................02 3.Definies .........................................................................................................................03 4.Aparelhagem ....................................................................................................................04 5.Execuo do ensaio ..........................................................................................................05 6.Resultados ........................................................................................................................07 7.Preservao .......................................................................................................................09 8. Referncia bibliogrfica ...................................................................................................10 Anexo A - Equipamentos para Anlise do Zooplncton Marinho ....................................11 Anexo - B - Modelo de Ficha de Anlise.............................................................................14 Anexo - C - Referncias Bibliogrficas para Identificao do Zooplncton Marinho ............................................................................................................15 Anexo - D - Modelo de Laudo Tcnico ...............................................................................16

Introduo O zooplncton marinho inclui animais que vivem em suspenso na gua, pois oferecem pouca ou nenhuma resistncia s correntes. Encontram-se distribudos em toda a coluna d'gua, apresentando muitas vezes estratificao e migrao verticais relacionadas aos fatores fsicos, qumicos e biolgicos, principalmente em relao disponibilidade de alimento e variao da intensidade luminosa. A diversidade do zooplncton no ambiente marinho alta e acentuadamente maior do que a encontrada na gua doce. Praticamente todos os grupos de invertebrados esto presentes. Inclui, principalmente, apendiculrios, cladceros, coppodes e quetognatos, podendo ser registrados com freqncia medusas, dololos, salpas, larvas de moluscos, ostracdios, anfpodos, etc. comum encontrar coppodes como grupo dominante, sendo em geral, suplantado na poca de reproduo de outros grupos. Os vertebrados tambm esto presentes sob a forma de ovos e larvas de peixes e compem o ictioplncton. Muitos organismos passam todo o seu ciclo de vida no plncton (holoplncton, euplncton ou plncton permanente), como alguns coppodes e cladceros; outros, passam somente parte do ciclo de vida no plncton, em forma de ovos, larvas ou adultos (meroplncton, hemiplncton ou plncton temporrio), como larvas de diversos crustceos. Alguns autores consideram tambm o plncton epibentnico, que compreende organismos que, apesar de viverem associados ao fundo, permanecem no plncton durante parte do dia, como ostracdios e cumceos ( Omori & Ikeda,1984).

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Em geral, a densidade mxima do zooplncton ocorre nas camadas superficiais onde h, entre outros fatores, densidades mais elevadas de fitoplncton. Diferenas de distribuio entre regies costeira e ocenica so comuns. guas costeiras e rasas contm maior diversidade e densidade de organismos zooplanctnicos. Isto ocorre em funo, principalmente, da presena de formas tanto holoplanctnicas prprias dessa regio como da grande maioria do meroplncton, j que o bentos nessa regio mais variado, devido diversidade de habitats e menor espessura da coluna d'gua. A quantidade de zooplncton de um local depende tambm de diversos outros fatores, como perodo do dia, estao do ano, concentrao de nutrientes, densidade de fitoplncton, presena de substncias txicas na gua, entre outros.

1. Objetivo Esta Norma prescreve os mtodos qualitativo e quantitativo para o exame do zooplncton marinho, visando determinar as comunidades existentes em um ou mais ecossistemas. A informao sobre abundncia e/ou composio do zooplncton pode aplicar-se a um ou mais dos seguintes propsitos: a) utilizao como indicadores das massas de gua, seus processos de deslocamento e mistura; b) utilizao como indicadores pesqueiros; c) auxiliar no estudo e identificao da natureza, extenso e efeitos biolgicos da poluio (orgnica e/ou industrial); d) auxiliar no estudo de caracterizao e diagnstico ambiental; e) auxiliar na interpretao de vrias determinaes fsico-qumicas, tais como: oxignio dissolvido, turbidez, cor, etc.; f) gerar informao regular e constante de sistemas aquticos (monitoramento), com objetivo de fornecer subsdios para a tomada de decises baseada em sries histricas contnuas. Os objetivos de cada projeto especfico que iro determinar a natureza da informao que o zooplncton deve fornecer.

2. Documentos complementares 2.1 Norma Tcnica CETESB L5.314 - Mtodos de coleta de zooplncton marinho e de gua doce.

3. Definies
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Para efeitos desta Norma so adotadas as definies de 3.1 a 3.8. 3.1 Comunidade Conjunto de populaes que ocupa uma dada rea. 3.2 Ecossistema Qualquer unidade (biossistema) que abranja todos os organismos que funcionam em conjunto (a comunidade bitica) numa dada rea, interagindo com o ambiente fsico de tal forma que um fluxo de energia produza estruturas biticas claramente definidas e uma ciclagem de materiais entre as partes vivas e no-vivas. 3.3 Habitat Lugar do ecossistema em que vive um organismo ou populao. 3.4 Holoplncton (ou Euplncton ou Plncton Permanente) Conjunto de organismos que vive todo o seu ciclo de vida no plncton. 3.5 Ictioplncton Conjunto de ovos e larvas de peixes que vive no plncton. 3.6 Meroplncton (ou Hemiplncton ou Plncton Temporrio) Conjunto de organismos que vive parte do seu ciclo de vida no plncton. 3.7 Planctonte Organismo que vive no plncton. O plncton de guas doces chamado de limnoplncton e o marinho de haloplncton (ou haliplncton). 3.8 Populao Qualquer grupo de organismos da mesma espcie (ou outros grupos dentro dos quais os indivduos podem trocar a informao gentica) que ocupa um espao determinado. 3.9 Taxon Qualquer classe cujos elementos sejam organismo biolgicos e cuja definio seja tipo de semelhana compartilhada por eles. algum

3.10 Zooplncton
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Comunidade de pequenos animais que vive em suspenso nas guas doces, salobras e marinhas. 4. Aparelhagem 4.1 Aparelhos para amostragem Ver Norma Tcnica CETESB L5.314 (item 2.1), Boltovskoy (1981) e Tranter (1968). 4.2 Reagentes 4.2.1 Formaldedo 40% neutralizado com tetraborato de sdio (20g/L) ou bicarbonato de sdio (5g/L), na concentrao final de 4% (= Formol 10%). Diluir uma (1) parte de formaldedo 40% em nove (9) partes de gua destilada. 4.2.2 Corante rosa-de-bengala. Sugere-se a concentrao final de 0,1%. Dissolver um (1)g em um (1) litro de formaldedo 4%. 4.2.3 Glicerina 50%. Diluir uma (1) parte de glicerina lquida em uma (1) parte de gua destilada. 4.3 Aparelhos para execuo da anlise 4.3.1 Recipiente de base afunilada com fundo desmontvel, contendo malha de nilon de dimetro de poro igual ou inferior malhagem usada na coleta (ver Anexo A - Fig. 1). Exemplo: se na coleta foi empregada malha de 180 m para filtrar o zooplncton, a malha do recipiente deve ser 180 m ou, de preferncia, menor do que esse tamanho. 4.3.2 Bqueres de 100 a 1000 mL. A seleo da capacidade dos bqueres depende do volume de amostra coletada. 4.3.3 Pipeta Stempel (ver Anexo A - Fig. 2). 4.3.4 Lamnulas, lminas comuns e escavadas. 4.3.5 Placas de Petri, com fundo quadriculado (ver Anexo A - Fig. 3). 4.3.6 Pissetes (frasco lavador) de 500 mL. 4.3.7 Pinas de ponta fina. 4.3.8 Estiletes com ponta reta. 4.3.9 Contador manual, se possvel, de vrias teclas.

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4.3.10 Frascos de vidro pequenos, com tampa de boa vedao para armazenar os organismos de interesse. 4.3.11 Microscpio binocular comum, com ocular de 10x e objetivas de 6 a 100x. 4.3.12 Microscpio binocular estereoscpico (lupa), com ocular de 10x ou 20x e objetivas intercambiveis (4 a 50x) ou em zoom.

5. Execuo do ensaio 5.1 Princpio do mtodo A anlise do zooplncton pode ser realizada basicamente de duas maneiras: a) Mtodo qualitativo: Qualquer que tenha sido o mtodo de amostragem, quando no se conhece o volume de gua filtrada os resultados so expressos qualitativamente, fornecendo uma indicao da riqueza zooplanctnica (nmero de txons) e sua abundncia relativa (%); b) Mtodo quantitativo: Avalia a densidade zooplanctnica, fornecendo o nmero de 3 organismos de cada txon por unidade de volume, geralmente organismos/m ou organismos/100m3. Outras variveis (no consideradas na presente Norma) podem ser estudadas, como biomassa (peso mido, peso seco e peso seco livre de cinzas), biovolume, etc. Esses parmetros so, geralmente, complementares densidade e, por isso, no devem substitu-la. Quando o mtodo quantitativo utilizado a anlise da densidade de organismos ele fornece tambm a informao qualitativa, desde que tenham sido empregados mtodos de coleta e de anlise das amostras que garantam a representatividade da comunidade zooplanctnica.

5.2 Procedimento 5.2.1 Preparao da amostra: Tanto em campo como em laboratrio, freqentemente h necessidade de se concentrar o zooplncton. Um dos mtodos consiste em remover o sobrenadante da amostra com um tubo cujo pice contm uma pra de borracha, sendo esse tubo introduzido em um cilindro com base contendo malha de nilon para evitar a passagem dos organismos (ver Anexo A - Fig. 4). Outro mtodo mais simples consiste em filtrar diretamente a amostra em um recipiente cuja base desmontvel e o fundo apresenta malha de nilon igual ou inferior empregada na coleta (ver Anexo A - Fig. 1). Pode-se elaborar recipientes de diferentes capacidades, para usar em amostras de diferentes volumes de zooplncton. O material retido na malha , ento, cuidadosamente lavado com uma pissete contendo formaldedo 4% para ser transferido ao recipiente final (bquer ou placa de Petri).

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Recomenda-se corar previamente a amostra com rosa-de-bengala 0,1%, se possvel logo aps a coleta, para facilitar a visualizao dos organismos e controlar as possveis perdas durante o processo de concentrao da amostra.

5.2.2 Procedimento de anlise: Dependendo da quantidade de zooplncton, as amostras so tratadas integralmente (item 5.2.2.1) ou parcialmente (subamostragem) (item 5.2.2.2.). 5.2.2.1 Procedimento para anlise de amostra total: Amostras com pequeno nmero de organismos (< 200 organismos) devem ser analisadas integralmente. A amostra concentrada (ou no, se preferir) transferida aos poucos para uma placa de Petri com fundo quadriculado e todos os organismos so contados e identificados sob microscpio estereoscpico. Para a identificao de determinados indivduos, pode ocorrer a necessidade de maior aumento. Nesse caso, eles so transferidos para lminas contendo glicerina 50%, com o auxlio de pinas de ponta fina, e examinados separadamente sob microscpio binocular comum. Entretanto, as amostras de zooplncton contm, na maioria das vezes, um nmero muito elevado de organismos, o que torna necessria a subamostragem. 5.2.2.2 Procedimento para anlise de subamostra: Para a subamostragem, retirar e contar separadamente os animais maiores. Transferir a amostra concentrada para um bquer (100 a 1000 mL) e diluir conforme a quantidade de zooplncton. Homogeneizar a amostra com movimentos aleatrios e retirar uma subamostra da soluo com uma pipeta Stempel. Transferir para uma placa de Petri, esperar alguns minutos para o material decantar, contar e identificar todos os organismos sob microscpio estereoscpico. Organismos menores que precisam de aumento maior para sua identificao devem ser removidos e montados em glicerina 50% entre lmina e lamnula, para observao em microscpio comum. Identificar, sempre que possvel, os organismos ao nvel de espcie. Se necessrio, alguns organismos podem ser removidos e estocados em pequenos frascos, para serem empregados em futuras comparaes e/ou identificaes. Deve-se considerar que, alm do erro envolvido na obteno de amostra representativa de um corpo d'gua, a subamostragem tambm introduz um erro na obteno do nmero de organismos zooplanctnicos por unidade de volume. Contudo, esse erro pode ser controlado e minimizado e a densidade estimada dentro de limites estatsticos pela contagem de vrias subamostras (Frontier, 1981). Desta forma recomenda-se retirar, pelo menos, trs subamostras
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de cada amostra, contendo, cada uma delas, aproximadamente 100 organismos. Anotar cada resultado na ficha de anlise (ver Anexo B). Observao: Alm deste mtodo h outros procedimentos de subamostragem (ver Boltovskoy,1981). Um deles consiste na diluio da amostra em um bquer e a retirada de alquotas com um subamostrador tipo concha (Wickstead, 1965) (ver Anexo - Fig. 5). Recomenda-se tambm, a retirada de pelo menos 3 alquotas com aproximadamente 100 indivduos em cada uma delas. Outro mtodo muito empregado o fracionamento de amostras, que apresentam um nmero muito grande de organismos, com o fracionador Folsom (Folsom Plankton Sample Splitter) (ver Anexo A - Fig. 6). A amostra pode ser dividida vrias vezes, a fim de se obter uma quantidade menor, porm, satisfatria para a anlise quantitativa. 5.3 Identificao dos organismos zooplanctnicos: Para a identificao dos organismos zooplanctnicos recomendada a consulta aos trabalhos citados no Anexo C.

6. Resultados Os itens 6.1 e 6.2 referem-se aos clculos que devem ser feitos levando-se em conta o nmero total de indivduos presentes na amostra. Desta forma, no caso da realizao de subamostragem, deve-se calcular antes esse valor, da seguinte forma: No. total de organismos na amostra = (N x V) / S Onde: N = Nmero total de indivduos encontrados nas subamostras V = Volume empregado na diluio da amostra, em mL S = Volume total correspondente s subamostras, em mL Exemplo: A amostra foi diluda em 300 mL e foram retiradas 3 subamostras de 5 mL cada. Foram identificados 410 indivduos nas 3 subamostras (= 15 mL), sendo 145 coppodes Paracalanus parvus, 132 coppodes Euterpina acutifrons, 67 cladceros Penilia avirostris, 39 quetognatos Sagitta enflata e 27 larvas de crustceos. No. total de organismos na amostra = (410 x 300) / 15 = 8200 sendo: No. total de coppodes Paracalanus parvus na amostra = (145 x 300) / 15 = 2900 No. total de coppodes Euterpina acutifrons na amostra = (132 x 300) / 15 = 2640 No. total de cladceros Penilia avirostris na amostra = (67 x 300) / 15 = 1340 No. total de quetognatos Sagitta enflata na amostra = (39 x 300) / 15 = 780 No. total de larvas de crustceos na amostra = (27 x 300) / 15 = 540
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Anotar os resultados na ficha de anlise (ver Anexo B).

6.1 Anlise qualitativa Quando no se conhece o volume de gua filtrada, os resultados so expressos em termos de riqueza e abundncia relativa. Riqueza - A riqueza obtida pela contagem do nmero de txons de mesma categoria (famlias ou gneros ou espcies) presentes na amostra, considerando-se o nvel de identificao mais detalhado (sempre que possvel, o nvel de espcie). Exemplo: Foram encontradas 8 espcies (Acartia lilljeborgi, Paracalanus quasimodo, Paracalanus parvus, Sagitta enflata, Penilia avirostris, Oikopleura albicans, Oikopleura dioica e Lucifer faxoni). A riqueza ser ento, igual a 8. Abundncia Relativa - A abundncia relativa calculada da seguinte forma: % spy = (n x 100) / N Onde: spy = grupo ou espcie y n = nmero de organismos da espcie y N = nmero total de organismos na amostra Exemplo: Foram identificados 320 organismos, dos quais 50 pertenciam ao grupo dos coppodes (da espcie Acartia lilljeborgi). Portanto: % Acartia lilljeborgi = (50 x 100) / 320 = 16%

6.2 Anlise quantitativa Na anlise quantitativa os resultados so expressos em nmero de organismos por unidade de volume, geralmente m3 (ou 100 m3), considerando-se a quantidade de gua filtrada durante a coleta do zooplncton. A expresso : N organismos/m3 = C / V Onde: C = nmero total de organismos de uma espcie V = volume de gua filtrada na coleta, em m3 Exemplo: Foram encontrados 120 cladceros da espcie Penilia avirostris na amostra total. O volume de gua filtrada na coleta foi 10 m3. Assim: N Penilia avirostris/m3 = 120 / 10 = 12
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Realizar o clculo para cada txon identificado e obter o total de organismos na amostra. O resultado final transcrito para a ficha de anlise (ver Anexo B) e para o laudo (ver Anexo D). 6.3 Consideraes gerais Ocorrem naturalmente grandes variaes de densidade nas populaes zooplanctnicas, em resposta a vrios fatores, tais como: crescimento, reproduo, ritmos dirios (migraes), distribuio agrupada, etc. A preferncia e tolerncia em relao a um fator ambiental, diferem no s entre as espcies, mas tambm podem ser diferentes ao longo do ciclo de vida de cada uma delas. Alm disso, as variaes na comunidade zooplanctnica esto relacionadas com outros fatores, que incluem tanto as variveis ambientais normalmente medidas como outras incomensurveis ou insuspeitas. Desta forma importante o emprego de procedimentos matemticos para analisar, especialmente as situaes ecolgicas onde no h um padro definido. Os mtodos matemticos mais freqentemente utilizados no estudo do plncton so: - correlao; - ndices de diversidade; - ndices de similaridade; - ndices biticos; - anlise de agrupamento; - anlise dos componentes principais; e, - anlise fatorial.

7. Preservao Aps a anlise, a amostra transferida para um frasco devidamente etiquetado. A etiqueta deve conter todas as informaes necessrias para a pronta identificao da amostra. recomendado manter um registro de todas as amostras analisadas e estocadas. A amostra deve ser preservada em formaldedo de 4 a 5%, neutralizado com tetraborato de sdio (20g/L) ou bicarbonato de sdio (5g/L), sendo que a diluio do formaldedo deve ser realizada sob capela. O volume de amostra no deve ultrapassar 1/3 do volume da soluo de formol. Recomenda-se tambm a adio de glicerina amostra para evitar a perda de material ao longo do tempo, por evaporao da soluo conservadora. A amostra assim preservada pode ser armazenada por um longo perodo (10 anos ou mais).

8. Referncias Bibliogrficas

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Agudo, E. G. (Coord.). Guia de coleta e preservao de amostras de gua. So Paulo : CETESB, 1987. Boltovskoy, D. (ed.). Atlas del zooplancton del Atlntico Sudoccidental y Mtodos de Trabajo con el Zooplancton Marino. Argentina : Publ. Esp. INIDEP, 1981. CETESB. Mtodos de coleta de zooplncton marinho e de gua doce. So Paulo : Norma Tcnica CETESB L5.314, 1990. Dodson, A. N. & W. H. Thomas. Concentrating plankton in gentle fashion. Limnol. Oceanogr., v. 9, p. 455, 1964. Frontier, S. Clculo del error en el recuento de organismos zooplanctnicos. In: Boltovskoy, D. (ed.). Atlas del zooplancton del Atlntico Sudoccidental. Argentina : Publ. Esp. INIDEP, 1981. p. 163-168. Guelpen, L. V.; D. F. Markle & D. J. Duggan. An evaluation of accuracy, precision, and speed of several zooplankton subsampling techniques. J. Cons. int. Explor. Mer, v. 40, p. 226-236, 1982. McCallum, I. D. A simple method of taking a subsample of zooplankton. New Zealand J. Mar. Freshw. Res., v. 13, n. 4, p. 559-560, 1979. Omori, M. & T. Ikeda. Methods in Marine Zooplankton Ecology. USA : John Wiley & Sons, 1984. Tranter, D. J. (ed.). Zooplankton Sampling. Monographs of Oceanographic Methodology 2. Paris : UNESCO, 1968.

..../Anexo - A

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ANEXO A - EQUIPAMENTOS PARA ANLISE DO ZOOPLNCTON MARINHO

Figura 1 - Recipiente com base de malha

Figura 2 - Pipeta Stempel .../Anexo A (continuao)


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ANEXO A (cont.)

Figura 3 - Placa de Petri com fundo quadriculado

Figura 4 - Equipamento para concentrar o zooplncton .../Anexo - A (continuao) ANEXO A (cont.)


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Figura 5 - Subamostrador tipo concha

Figura 6 - Fracionador Folsom .../Anexo - B

ANEXO B - MODELO DE FICHA DE ANLISE


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Zooplncton Marinho
Local de Coleta: Data de Coleta: Coletor: Subamostrador: Ponto: Data da Anlise: Aparelho de Coleta: Vol. Bquer (mL): No. Amostra: Vol. Filtrado (m3): Tipo de Amostragem: No. Subamostras:

GRUPOS FORAMINIFERA CNIDARIA ANNELIDA MOLLUSCA COPEPODA

1a.

Subamostra 2a.

3a.

Densidade (org./m3)

Abundncia Relativa (100%)

CLADOCERA

ECHINODERMATA CHAETOGNATHA

CHORDATA OUTROS TOTAL OBSERVAES

______________________________________ Assinatura do Bilogo Responsvel

.../Anexo - C

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ANEXO C - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS PARA IDENTIFICAO DO ZOOPLNCTON MARINHO

C-1 Boltovskoy, D. (ed.). Atlas del zooplancton del Atlntico Sudoccidental Trabajo con el Zooplancton Marino. Argentina : Publ. Esp. INIDEP. 1981.

y Mtodos de

C-2 Newell, G. E. & R. C. Newell. Marine Plankton: a Practical Guide. London : Hutchinson Educational, 1963. C-3 Smith, DeBoyd L. A Guide to Marine Coastal Plankton and Marine Invertebrate Larvae. Iowa : Kendall/Hunt Publishing Company, 1977. C-4 Trgouboff, G. E. & M. Rose. Manuel de planctonologie Mediterrane. Paris : Centre National de la Recherche Scientifique, 2 vols., 1957. C-5 Wickstead, J. H. An introduction to the study of tropical zooplankton. London : Hutchinson Tropical Monographs, 1965. C-6 Wickstead, J. H. Zooplancton Marino. Barcelona : Omega, 1979.

.../Anexo D

ANEXO D - MODELO DE LAUDO TCNICO


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CETESB - COMPANHIA DE TECNOLOGIA DE SANEAMENTO AMBIENTAL DIVISO DE ANLISES HIDROBIOLGICAS SETOR DE COMUNIDADES AQUTICAS
ORDEM DE SERVIO: 35.3.00.D.20 DATA DA COLETA: 12/01/96 No. AMOSTRA: 457052 LOCAL DE COLETA: Baa de Santos NOME DO COLETOR: Mario Cruz PTO DE COLETA: 13 VOL. FILTRADO (L): 40

EXAME HIDROBIOLGICO - ZOOPLNCTON MARINHO org./m3 CNIDARIA Hydromedusae Siphonophora ANNELIDA Polychaeta (larvas) MOLLUSCA Bivalvia (larvas) Gastropoda (larvas) CRUSTACEA Amphipoda Cirripedia (larvas) Cladocera Copepoda - nuplios - copepditos - adultos Decapoda (larvas) Ostracoda ECHINODERMATA (larvas) CHORDATA Appendicularia Doliolidae Salpidae TOTAL: Observaes: 97 200 89 141 203 183 73 567 1120 1000 397 18 300 66 37 17 6 4514 % 2,1 4,4 2,0 3,1 4,5 4,1 1,6 12,6 24,8 22,2 8,8 0,4 6,6 1,5 0,8 0,4 0,1 100,0

Assinatura do Bilogo Responsvel

Assinatura do Gerente Responsvel

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