ADHESINAS E INVASINAS DE BACTERIAS PATGENAS: UNA VISIN ESTRUCTURAL

1. LA ADHESIN Y LA INVASIN POR PARTE DE L. monocytogenes

1.1. Internalinas de L. monocytogenes Listeria monocytogenes es una bacteria que se desarrolla intracelularmente y es causante de la Listeriosis. Es uno de los patgenos causantes de infecciones alimentarias ms virulentas. Puede cruzar las 3 mayores barreras de defensa: intestino, placenta y barrera hematoenceflica. L. monocytogenes es un bacilo Gram positivo, pequeo (0,4 a 0,5 micrones de ancho x 0,5 a 1,2 de largo) no ramificado y anaerobio facultativo capaz de proliferar en un amplio rango de temperaturas (1 C a 45 C) y una elevada concentracin de sal. Es catalasa positiva y no presenta cpsula ni espora. Tiene flagelos pertricos, gracias a los cuales presenta movilidad a 30 C o menos, pero es inmvil a 37 C, temperatura a la cual sus flagelos se inactivan.El ciclo infectivo de L. monocytogenes inicia con su internalizacin a la clula hospedera, ya sea por fagocitosis en el caso de los macrfagos o por fagocitosis inducida (invasin) en los fagocitos no profesionales. En todo caso, es el propio microorganismo el que promueve su ingreso, asegura su libertad en el citosol de la clula eucarionte, prolifera eficazmente y se desplaza hacia el exterior, para inducir su ingreso a las adyacentes, sin que ello represente su exposicin a la accin defensiva de anticuerpos, complemento y polimorfonucleares (PMNs) . En concreto, los eventos implicados en el proceso infectivo global, son:

Internalizacin a la clula del hospedero. Sobrevivencia en fagolisosoma. Escape del fagolisosoma. Liberacin y replicacin bacteriana en el citosol de la clula blanco. Movilidad bacteriana en base reorganizacin del citoesqueleto de la clula hospedera. Extensin del filopodio y diseminacin directa a la clula vecina. Formacin del fagolisosoma. Escape del fagolisosoma. Liberacin de Listeria monocytogenes al citosol y reinicio del ciclo (Fig. 1 y 2)

1.2. Protenas listerianas que participan en la internalizacin 1.2.1. Las internalinas A y B y otros miembros de la familia Inl. La entrada de L. monocytogenes a las clulas epiteliales se ha estudiado ampliamente, lo que ha permitido identificar a la internalina A (InlA), protena de 80 kDa que media la entrada bacilar a las clulas del epitelio intestinal humano

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(lnea Caco-2) y a algunas otras clulas epiteliales. La InlA est codificada por el gen InlA que, a su vez, forma parte de una familia de multigenes llamada Inl, a la cual tambin pertenece el gen de la InlB, molcula proteica de 67 kDa que promueve el ingreso listeriano a los hepatocitos, tanto in vitro como in vivo, y a otras lneas celulares, epiteliales o de fibroblastos, incluidas las HeLa, HEp-2, L2 y Vero. 1.2.1.1. El complejo InlA / E-cadherina: E-caderina es una glicoprotena transmembrana, dependiente de Ca+2 e involucrada en la adhesin celular. El receptor de Inl fue identificado por afinidad cromatografa. La parte extracelular de las E-caderinas tiene 5 dominios parecidos a los de la Ig. La E-cadherinas estn unidas a la actina citoesqueletica, mediante la cateninas .El Hec1 (dominio terminal n de la e cadherina) se une con la Inl A se cristaliz este complejo y se observ que llena casi por completo el vaco central del LRR que es curvado. La Hcel1 interacta con el dominio de la LRR o el domino de la In lA lo cual concuerda con la observacin de que el dominio LRR funcional como andamio estructural modular generado por interaccin de protenas. Se comprob que la Ecadherina mureina a diferencia de la E-cadherina humana contiene un glutamato en posicin 16 y no es reconocido por la InlA, pero esta unin puede ser alcanzada por una mutacin de E16p de E-cadherina mureina. El ion calcio est presente en la interfase InlA/Hecl1 explicando as el aumento de estabilidad del dominio del complejo en presencia del calcio. La dependencia de calcio a la interaccin lnlA/E-cadherina tambin explica como la bacteria ser liberada en el citosol despus del dominio .una vez dentro de la clula la fuerza del complejo InlA/E-cadherina es reducida debido a los niveles inferiores de calcio, liberndola bacteria con las membranas del husped. La interaccin es crucial para la expresin de listeria. Los ratones no son susceptibles a la infeccin oral con listeria monocytogenes ya que son incapaces de atravesar la barrera intestinal de la rata, ya que la InlA se ha desarrollado y especificado como un patgeno humano (Fig. 3). 1.2.1.2. InlB y sus receptores La Inlb es la nica internalina cristalizada y ms estudiada Su estructura es una molcula elongada con el dominio capa de LRR.IR a un extremo y un dominio de GW en el otro .InlB purificadas y de tamao completo adicionalmente conllevan a la fosforilacin de la tirosina de las protenas de las clulas husped. La interaccin de la MET (factor de crecimiento de los hepatocitos), que es un receptor tirosina quinasa cuyo ligando natural es el factor de crecimiento derivado de los hepatocitos (HGF). Se ha demostrado que, an por separado, cualquiera de estas protenas es suficiente para permitir la invasin celular, siendo un heterodimero compuesto de una subunidad de 45Kda y una subunidad de 145Kda ,la subunidad a y la regin amino de la subunidad b forman parte del dominio extracelular , con InlB atreves del receptor MET con su dominio LRR .Un fragmento de la capa y la LRR es suficiente pata activacin de la c-met , la interaccin entre InlB y c-met ha sido localizada en la cara cncava de la LRR , donde los residuos aromticos de la superficies juegan un papel crucial en la unin recepcin. Dos molculas han sido

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descritas para la adicin de e la Inlb en adicin al c-met: gClq-r y la heparina, tanto la gClrq-R como la heparina interactan con el dominio GWEl rol de gClq-R en el InB para el dominio bacterial no est determinado actualmente pero se sabe que el gClr-R compite con la LTA para la unin con InlB, la adicin de la gClr-R a la bacteria conlleva a la liberacin de InlB de la superficie celular hacia el medio. La relevancia in vivo del glicosaminoglicano es demostrado de que la listeria monocytogenes invade clulas deficientes en la sntesis de glicosamonoglicano. La heparina y los receptores C-met pueden actuar sinrgicamente, en forma muy parecida a la HGf, el cual interacta con ambos receptores. Recientemente la existencia de un cuarto, y an no identificado receptora ha sido postulada (Fig. 4). 1.2.1.3. Protena p60 Esta protena de 60 kDa se localiza en la superficie bacteriana y, adems de resultar trascendental para el crecimiento celular, tambin participa en la invasin intestinal por L. monocytogenes; se trata de una mureina-hidrolasa ajena al regulador central de virulencia prfA, presente en todas las cepas virulentas. Cuando el gen que codifica para la p60 es afectado, las mutantes con bajos niveles de la protena son filamentosas y manifiestan una pequea o nula capacidad para invadir a las clulas hospederas. 1.2.1.4. ClpC ATPasa sta pertenece a la familia de protenas Clp (100 kDa) de shock trmico, implicadas en la tolerancia al estrs de varios microorganismos procariticos y eucariticos. Su papel en la invasin es el de promover el escape bacteriano del compartimiento fagosmico de los macrfagos pero, adems, favorece la invasin in vivo de los hepatocitos, junto con la InlA, InlB y ActA. 1.3. Las 2 vas de internalizacin de L. monocytogenes 1.3.1. Ingreso mediado por la InlA Esta va de internalizacin tambin implica al receptor de la InlA: la caderina-E, la cual corresponde a una glicoprotena transmenbranal (110 kDa) dependiente de Ca2+, que se expresa principalmente en los tejidos epiteliales, incluido el del tracto digestivo. Dicha protena sustenta la adhesin clula-clula a travs de las interacciones homoflicas de sus dominios extracelulares, aunque tambin desempea un papel crtico en la diferenciacin de las clulas y en el mantenimiento de la cohesin y arquitectura del tejido. Al margen de la InlA, el nico ligando heteroflico que reconoce a dicha caderina es la integrina humana E7, que media la adhesin entre los linfocitos intraepiteliales y los enterocitos. En las clulas epiteliales polarizadas, la caderina-E se localiza principalmente en la membrana basolateral y se concentra en las uniones adherentes; de acuerdo con ello, el ingreso bacteriano mediado por la InlA ocurre 19 fundamentalmente a travs de la cara basolateral (posterior) de las clulas epiteliales. La regin extracelular de la caderina-E consta de 5 mdulos, en el primero de los cuales se encuentra una secuencia (HAV), necesaria en las interacciones homoflicas. Los estudios recientes indican que la adhesin de L. monocytogenes a las clulas epiteliales depende de las LRRs4 de la InlA, las cuales reaccionan con el dominio extracelular de la caderina-E; adicionalmente, el dominio citoplsmico de esta

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ltima se asocia a las cateninas, mismas que interactan con la actina del citoesqueleto. Es decir, la regin citoplsmica de la caderina-E no interacta con la InlA, pero se requiere para la internalizacin bacilar.

1.3.2. Internalizacin mediada por la InlB. Otro mecanismo mediante el cual L. monocytogenes ingresa a las clulas eucariontes est basado en la interaccin de la InlB5 con su receptor gC1q-R6, lo que a su vez- promueve otras reacciones trascendentales que conducen a la reestructuracin de la actina del citoesqueleto. Cabe sealar que el enlace de la InlB al gC1q-R7 depende de la presencia de cationes divalentes y que la regin N-terminal altamente cida de este ltimo parece contener al blanco de la primera. Una vez ocurrida la reaccin internalina receptor, ocurre lo siguiente: o Se fosforila la tirosina de tres protenas del hospedero: Gab1, Cb1 y Shc, con lo cual stas activan a la 3-cinasa fosfatidil-inositol (3-cinasa PI); dicha enzima representa una de las protenas de sealizacin que promueve la internalizacin bacteriana. o La protena p85 interacta con protenas tirosn-fosforiladas, lo que activa a las p85-p110, incrementando los niveles de fosfatidilinositol 3,4-difosfato y de fosfatidilinositol 3, 4,5-trifosfato. Ambas fosfoinositidinas fungen como segundos mensajeros y su elevada concentracin afecta la curvatura de la bicapa lipdica membranosa, facilitando la internalizacin listeriana.

2. Estructuras de otras adhesinas bacterianas e invasinas:

2.1. Yersinia pseudotuberculosis: invasina Y. pseudotuberculosis es una bacteria gramnegativa enteropatognica causante de gastroenteritis. Requiere de invasinas para cruzar el epitelio intestinal y llegar a las placas de peyer. La invasina induce la formacin de pseudpodos en las clulas del epitelio para que de esta manera la envuelvan y entre en dicha clula para luego pasar a los ndulos linfoides. El dominio C-terminal D5 de las invasinas adopta le pliegue de lectinas de tipo C que tpicamente atan ligandos de carbohidrato o polipptido. Los dominios D4 y D5 vinculan dos dominios de fibronectina tipo III (FnIII).Estructuralmente, los dominios D4 y D5 parecen imitar a la FnIII. Dominio D4 y D5 forman un superdominio de integrina (Fig. 5). 2.2. Mecanismo de adhesin del EPEC a la clula intestinal: Complejo de Intimina/Tir EPEC induce una alteracin histopatolgica en el intestino conocida como lesin A/E (adherencia y eliminacin). La lesin se lleva a cabo mediante un mecanismo de virulencia complejo, que induce la degeneracin de las microvellosidades y altera la morfologa normal de la regin apical del enterocito. El modelo de patognesis de EPEC se divide en tres fases: a) adherencia inicial, b) inyeccin de factores y transduccin de seales, y c) contacto ntimo.

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3.2.1. Adherencia inicial La adherencia es un proceso fundamental en la patognesis y de ella pueden distinguirse dos fases; la primera implica la adherencia inicial entre las mismas bacterias, mientras que la segunda supone la adherencia de las bacterias a la clula del husped. Estos fenotipos estn directamente relacionados con dos factores de virulencia importantes de EPEC: los pelos formadores de penachos (BFP) y el agelo (Fig. 6). Los BFP son pelos o mbrias que permiten que las bacterias se agrupen entre ellas y formen microcolonias (un fenotipo conocido como autoagregacin), estos sucesos promueven la adherencia localizada tpica de EPEC en el intestino delgado. El contacto entre las bacterias y la clula del husped se relaciona directamente con el agelo de EPEC (Fig. 6). Sin embargo, tambin se han referido otros factores como la adhesina intimina o los lamentos cortos de EspA. 3.2.2. Inyeccin de factores y transduccin de seales Una vez que la bacteria est adherida, inyecta a la clula una serie de protenas mediante el sistema de secrecin tipo III (SSTT) (gura 1B). La mayor parte de estas protenas est codicada en el cromosoma de EPEC, dentro de una isla de patogenicidad de 35 kb conocida como el locus de la eliminacin del enterocito o LEE (gura 2B). La isla de patogenicidad LEE est organizada en cinco operones policistrnicos (LEE1 a LEE5); estos operones forman tres dominios de virulencia que codican a los siguientes genes: a) los operones LEE1 , LEE2 y LEE3 codican los genes de las protenas del SSTT, las cuales forman un complejo de aguja (CA); b) en el LEE4 los genes de las protenas que se secretan a travs del SSTT las cuales se conocen de forma colectiva con el nombre de Esp (protenas secretadas por EPEC); y c) en LEE5 estn codicadas la adhesina bacteriana intimina y su receptor, llamado Tir porque se transloca por la misma bacteria a travs del SSTT hacia el interior de la clula. Las protenas del SSTT forman el CA; este complejo atraviesa la membrana interna, el espacio periplsmico y la membrana externa de la bacteria y permite la secrecin de protenas (Fig. 7). El CA es una compleja maquinaria macromolecular cuya estructura y funcin estn conservadas dentro de un gran nmero de patgenos gramnegativos, como Yersinia, Shigella, Salmonella y EPEC. El SSTT de EPEC se ensambla de manera coordinada por al menos 19 protenas; la plataforma del CA inicia con la localizacin de la protena EscV en la membrana interna y EscC en la membrana externa (gura 4). A continuacin se agregan otros componentes de membrana interna (EscR, EscS, EscT y EscU) que completan la plataforma del CA. La protena EscN se agrega como el componente citoslico del SSTT; sta funciona como una ATP-asa citoplsmica para proveer la energa necesaria al sistema. La lipoprotena EscJ conecta la plataforma en la membrana interna (EscR, EscS, EscT, EscU y EscV) con la protena EscC en la membrana externa y forma un conducto cilndrico que atraviesa el espacio periplsmico, a travs del cual pasa la protena EscF para establecerse nalmente como la punta del CA. Este complejo de aguja le permite a EPEC secretar protenas hacia el medio extracelular. A travs del CA pasan tres protenas codicadas en el LEE conocidas como protenas translocadoras. La primera de ellas, EspA, se ensambla directamente con EscF y se polimeriza en la punta o regin distal del CA.

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La polimerizacin permite que la aguja molecular se extienda y forme un puente fsico que posibilita el contacto entre la bacteria y la membrana de la clula (gura 4). Evidencias ultraestructurales han demostrado que EspA forma un conducto cilndrico en cuyo interior pasan las protenas EspB y EspD. Estas protenas se hallan en la membrana de la clula eucaritica y completan el conducto llamado SSTT-translocn, que conecta y permite la comunicacin molecular entre la bacteria y la clula y por el cual EPEC inyecta directamente a las protenas efectoras de la virulencia. Las protenas efectoras se han clasicado en protenas codicadas en el LEE (EspF, EspG, EspH, EspZ, Map y Tir) y no codicadas en el LEE (Cif, EspG2, NleC, y NleD). EspF redistribuye protenas importantes de las uniones estrechas intercelulares, con lo que se atena la resistencia transepitelial. EspG y EspG2 degradan la red de microtbulos por debajo de donde se encuentra la bacteria adherida a la clula. Por su parte, EspH modula la estructura del citoesqueleto de actina, as como la formacin de lopodios durante la lesin A/E. La protena EspZ se acumula en zonas donde crecen los pedestales de actina; pero, no se ha demostrado un papel especco dentro de la patognesis de EPEC. Map se ubica con protenas de la mitocondria, en donde altera el potencial de membrana y propicia la liberacin del citocromo C e induccin de apoptosis. Entre estos factores, la inyeccin de Tir en el citosol es un paso crucial durante la lesin A/E y la formacin de los pedestales. El transporte de Tir a travs del SSTT-translocn se lleva a cabo mediante una chaperona especca llamada CesT. Una vez en el citosol, un fragmento central de Tir (dominio hidrofbico) se inserta dentro de la membrana plasmtica de la clula, con lo que expone hacia el espacio extracelular un fragmento de 107 aminocidos conocido como TIBA (rea de unin a intimina), con el que se une a la protena de membrana externa de EPEC llamada intimina. La intimina es una protena, llamada adhesina, que se ancla en la membrana externa de la bacteria. La bacteria se une a una clula intestinal blanco "arponeando" y encajando su receptor, llamado receptor translocador de intimina (Tir), en la membrana de la clula epitelial husped. La nueva informacin estructural demuestra cmo la bacteria se une a las clulas intestinales al unir sus protenas intiminas a las protenas Tir insertadas. La intimina se exporta por la va secretoria general hacia el periplasma y se inserta en la membrana externa por un mecanismo de autotransporte. La protena posee 2 sitios funcionales: la regin N-terminal -altamente conservada en diferentes cepas de EPEC- entra en la membrana bacteriana externa e interviene en la dimerizacin, y la regin C-terminal -variable- define los diversos tipos de intimina. Esta ltima se extiende desde la bacteria e interacta con receptores en la membrana de la clula husped. 3.2.3. Contacto ntimo y formacin de pedestales La ltima etapa de la infeccin por EPEC se caracteriza por la unin estrecha entre la bacteria y la clula del husped, as como la formacin de los pedestales de actina (Fig. 8). Tras la unin de Tir con intimina, aqul se fosforila en el residuo 474 por una protena de la familia Src-cinasa conocida como c-Fyn. La forma fosforilada de Tir recluta a la protena adaptadora Nck, la cual atrae, interacciona y activa al nal a otras protenas reguladoras del citoesqueleto, como WASP (protena del sndrome de Wiskott-Aldrich) y el complejo Arp2/3. Todas estas protenas activadas atraen la polimerizacin de actina hacia la zona donde est Tir fosforilada, lo que inicia la reorganizacin del citoesqueleto. Los pedestales se forman por

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debajo de donde la bacteria est adherida y se componen sobre todo de actina polimerizada y otras protenas relacionadas con actina, como actinina , mbrina, miosina, talina y ezrina. La reorganizacin del citoesqueleto altera la morfologa y siologa normal de la regin apical de las clulas, lo que lleva al nal a la prdida de las microvellosidades intestinales y su funcin. 3.3. Bordetella pertussis: Pertactina Bordetella pertussis (B. pertussis) es el agente etiolgico de la tos ferina, enfermedad prevenible por vacunacin, que infecta exclusivamente al humano y se localiza en las vas area superiores. Pertenece al gnero Bordetella y fue aislada por primera vez en cultivo puro en 1906 por Bordet y Gengou. Los miembros del gnero Bordetella son cocobacilos gramnegativos, con un tamao promedio de 0.5 m de dimetro por 2 m de longitud, se pueden observar como bacterias aisladas o en pares. Algunos son mviles, con flagelos pertricos. Son bacterias aerobias estrictas con un metabolismo respiratorio. Patogenia B. pertussis posee un marcado tropismo por los cilios del tracto respiratorio y se multiplica en la mucosa. Normalmente la bacteria entra por va area, es atrapada por el mucus y posteriormente los fragmentos de mucina que contienen bacterias son eliminados por las clulas ciliadas. La infeccin por B. pertussis inicia con la adherencia a las clulas epiteliales ciliadas del aparato respiratorio, produciendo un dao tisular localizado. B. pertussis se localiza nicamente en los cilios del epitelio que recubre nasofaringe, trquea y bronquios. Bordetella acta multiplicndose en su superficie, produciendo finalmente la muerte de stas, debido a la produccin de sus compuestos txicos. Los efectos sistmicos son producidos por toxinas liberadas cuando la bacteria se multiplica en el tracto respiratorio. La unin de la toxina pertussis a neutrfilos polimorfonucleares (PMN) aumenta la cantidad de CR3 en la superficie de PMN; as TP y FHA actan en conjunto estimulando la fagocitosis de B. pertussis. En el mecanismo de patogenicidad de B. pertussis interviene una serie de factores de virulencia, entre ellos varias toxinas, aglutingenos, hemaglutinina filamentosa y pertactina. B. Pertussis utiliza varias protenas para adherirse a las clulas epiteliales ciliadas en el tracto respiratorio humano. La pertactina es una protena de la superficie (tambin llamado P.69 debido a su peso molecular aparente); es uno de los factores implicados en la adhesin. La pertactina pertenece a la familia de protenas autotransportadoras, muchos de los cuales son factores de virulencia. Las protenas autotransportadoras de las bacterias Gram-negativas tienen un pptido seal para la translocacin a travs de la membrana interna, un dominio C-terminal especializada, que forma un poro en la membrana externa, y un dominio pasajero que se transporta a travs de la membrana, que forma la parte extracelular de la protena madura. Traducido como una protena precursora de 93 kDa, pertactina se escinde para dar el dominio extracelular P.69 que permanece asociado con el fragmento C-terminal de P.30 incrustado en la membrana externa.

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La pertactina es una molcula alargada formada por una hlice -16 de cadena en paralelo. Al igual que el dominio LRR de internalinas, este pliegue est hecho de unidades en tndem que contiene hebras que se apilan para formar la lmina paralelo. Si bien el dominio LRR tiene una nica hoja en paralelo, hay tres hojas paralelas en pertactina, que conducen a una seccin triangular transversal molecular. Tpicamente, una unidad de repeticin (13 residuos) contribuye con una sola hebra de cada hoja. El pliegue es repetitivo, no se refleja por una secuencia repetitiva correspondientemente. Sin embargo, escaleras de residuos alifticos se forman dentro de la -hlice formada por las cadenas laterales de los residuos en forma equivalente. Un pliegue de hlice N-terminal no se encuentra en pertactina, aunque est presente en muchas protenas que forman -hlices. La pertactina tiene un motivo RGD en una regin de bucle que sobresale de la bhlice, pero sin receptor se ha identificado para pertactina hasta ahora. El papel de la pertactina en la patognesis, la adhesin y la invasin siguen siendo controvertidos. El mecanismo molecular de adhesin mediada por pertactina y la importancia del motivo RGD no estn claras o bien. Otros factores de virulencia: Adhesinas Hemoaglutinina filamentosa (FHA): B. pertussis tienen la capacidad de adherirse a los cilios del epitelio respiratorio. El mecanismo de adherencia se relaciona con una protena denominada hemaglutinina filamentosa la cual es capaz de aglutinar diversos tipos de eritrocitos. Esta protena contiene una secuencia denominada RGD (Arg-Gly-Asp) que facilita la unin a las integrinas sulfatadas de las membranas de las clulas respiratorias ciliadas. Toxina pertussis: Funciona como adhesina en su capacidad para unirse a las clulas ciliadas y a los macrfagos.

3.4. Las adhesinas de tipo 1 y pili P unido a sus receptores Entre los microorganismos responsables de las infecciones del tracto urinario, Escherichia coli posee un papel principal, puesto que las enterobacterias son las responsables ms frecuentes de infecciones del tracto urinario. E. coli coloniza el intestino humano desde las primeras horas tras su nacimiento y se convierte en el anaerobio facultativo ms abundante de la flora microbiana del colon. La patogenicidad de E. coli est influida por diversos factores que oscilan entre la presencia de adhesinas y produccin de toxinas. El E. coli es un ejemplo clsico de microorganismo que necesita la coordinacin de diversos factores de virulencia para garantizar la transicin desde una simple colonizacin del husped hasta una fase de infeccin con consecuencias patolgicas. Escherichia coli uropatgena (UPEC), la causa principal de las infecciones en las vas urinarias, pueden adherirse e invadir el urotelio de las clulas de la vejiga y el rin. La adherencia de UPEC depende de dos sistemas principales: los pili P (pili, plural de pilus, es la palabra latina para pelo; son filamentos proteicos largos,

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hasta ms de 1 m, que sobresalen de la clula bacteriana, a modo de pelos, y usualmente le sirven para unirse a alguna superficie, sea esta de un tejido, o de otra bacteria; no le sirven para ganar movilidad), que tienen una adhesina PapG en la punta, y que le permiten unirse a los receptores de globsido de glucolpidos (GbO4) de la superficie de las clulas del rin humano. La Pap G posee dos dominios similares a la de FimH con un dominio de unin al receptor de Pap G Nterminal y un dominio C-terminal de pilina. La estructura del dominio de unin al receptor N-terminal de PapG est unido solo a GbO4. Los pili del tipo 1, que contienen la adhesina FimH, que se une a los residuos manosilados de la protena uroplaquina de la superficie luminal de las clulas del epitelio de la vejiga. FimH consiste de dos dominios conectados por un enlazador corto. La Ig como dominio pilina C-terminal, es responsable para el anclaje de la adhesina al pili. El dominio de unin al receptor de azcar N-terminal es una varilla de 11 hebras -barril. La D-manosa se une a la punta del dominio de unin al receptor en un bolsillo que se forma por residuos invariantes entre ms de 200 cepas UPEC. Si una infeccin es causada por una UPEC que no posea pili P, difcilmente podra establecerse en el rin; una diferencia sutil en la virulencia bacteriana puede marcar caminos muy distintos en la evolucin de una infeccin. Tipo 1 y pili P comparten una arquitectura similar. Estn formados por un conjunto helicoidal de subunidades de pilina formando una gruesa varilla proximal (60-70 de ancho). Al distal final, hay una fibrilla ms delgada (20-30 ) con la adhesina localizada en la punta. El dominio de unin al receptor de PapG es una de varilla de ocho hebras -sandwich que puede ser dividido en un una capa superior y una inferior. No hay una homologa significativa con otras estructuras, pero la topologa de la capa inferior es similar a la de la parte correspondiente en FimH. En PapG, el dominio de unin al receptor es considerablemente mayor que en FimH, y el sitio de unin al sustrato, formado por la capa superior, se coloca a lo largo del eje largo de la molcula, no en la punta como se observa para FimH. 3.5. Adhesinas unidas a la fibronectina S. pyogenes (estreptococos del grupo A) son cocos esfricos de 0,5 a 1,0 mm, bacteria anaerobia facultativa Gram-positivo. No es mvil, y no produce esporas. Ocurre como largas cadenas de cocos, y ocasionalmente en pares. Streptococcus pyogenes est clasificado como estreptococos del grupo A. Estreptococos del grupo A tienen tpicamente una cpsula compuesta de cido hialurnico y son betahemolticos (capacidad para destruir las clulas rojas de la sangre). Staphylococcus aureus es una bacteria anaerobia facultativa, grampositiva, productora de coagulasa, catalasa, inmvil y no esporulada. Suele estar en la piel y en las membranas mucosas sin llegar a causar infeccin, pero cuando penetra en los tejidos como puede ser en el caso de una herida puede ocasionar una amplia gama de infecciones debido a su produccin de toxinas. Streptococcus pyogenes y Staphyloccocus aureus, se adhieren a fibronectina sobre clulas epiteliales superficiales. La adhesina de los estreptococos A es el cido lipoteicoico anclado a protenas de superficie celular bacteriana. El cido lipoteicoico se une a la regin N-terminal de la fibronectina a travs de su extremo glicolipidico.

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El Staphyloccocus aureus tambin se une al extremo N-terminal de la fibronectina pero a travs de una protena especifica. La fibronectina es una glicoprotena de gran tamao y de peso molecular 440,000 daltons. Contiene aproximadamente 2300 aminocidos. Esta protena se encuentra en el organismo bajo dos formas: soluble en los lquidos extracelulares especialmente en la sangre, e insoluble fijada a las superficies de las clulas y en las matrices extracelulares. El dominio N-terminal de la fibronectina que contiene cinco fibronectinas tndem tipo I (FNI) se repite. Las protenas bacterianas propias de unin a fibronectina contienen mltiples repeticiones de unin a fibronectina no estructurados. Cada repeticin FNI forma una estructura -sndwich compuesto por dos y tres cadenas hojas. El pptido bacteriano (36 aminocidos) se extiende lateralmente ambos de tres cadenas hojas contribuyendo una cuarta hebra antiparalela formando una interaccin tndem -cremallera. El anlisis de secuencia mostr que las protenas de unin a fibronectina de S. aureus y S. pyogenes contienen varias repeticiones Cterminales, cada uno con supuestos motivos de unin de cuatro a cinco repeticiones consecutivas FNI. La interaccin esperado se verific por calorimetra de titulacin isotrmica usando pptidos bacterianos que contienen los motivos y la construccin de unin a fibronectina previsto que consisten en dos o cinco repeticiones FNI. Esto implica que las protenas de unin a fibronectina contienen dispuestas en tndem de alta afinidad sitios de unin a fibronectina que cambian a partir de un estructurado a una conformacin b-hebra tras la unin a mdulos FNI. 3.6. Protenas de la membrana externa de E. coli y Neisseria meningitidis Al cruzar la barrera sangre-cerebro, E. coli representa la causa principal de meningitis en los recin nacidos. La E. coli presenta una protena de la membrana externa (OmpA) que contribuye a la invasin de las clulas endoteliales microvasculares cerebrales, y constituyen la barrera sangre-cerebro al causar la condensacin de actina. OmpA se une Ecgp, una glicoprotena de 96 kDa presente en la superficie celular. Para OmpX (otra Omp en E. coli que no presenta roles de adhesin e invasin), no se observ ningn fenotipo adhesivo. Las estructuras cristalinas de OmpA y OmpX muestran que ambas son protenas integrales de membrana que comprenden ocho filamentos antiparalelo b-barriles (Fig. 4B). En el exterior, principalmente residuos hidrfobos alifticos que interactan con la forma de membrana una cinta central flanqueado por las fajas de residuos aromticos en la parte inferior y la parte superior del barril, que la posicin del barril en la membrana. Dentro de los barriles, hidrfilo residuos forman una intrincada red de enlaces de hidrgeno, y hay grandes cavidades llenas de agua, pero las protenas no forman poros distintos. La N-y C-terminales se encuentran en el lado periplsmico, y OmpA tiene un dominio periplsmico C-terminal adicional de estructura desconocida. Los b-cadenas estn vinculados por giros cortos en el lado periplsmico, mientras que los bucles largos y flexibles se conectan los b-hebras individuales en el lado extracelular. En OmpX, dos de los bucles forman una sola capa de hoja b inusual hecho de cuatro hebras. Esta hoja b es el sitio predicho de unin al receptor existente

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mediante la formacin de un receptor b-hoja. Una indicacin de esto se ve en el cristal de OmpX, donde dos molculas OmpX se alinean entre s, dando lugar a un filamento antiparalelo de ocho hebras hoja. Neisseria meningitidis puede causar meningitis y septicemia. La adhesin y la invasin de las clulas epiteliales y endoteliales humanas parcialmente por cpsula deficiente de cepas de N. meningitidis que carecen de pili dependen del Omp Opc. Opc se une a la protena srica vitronectina, que a su vez se une integrinas. Proteoglicanos de heparn sulfato fueron identificados como un segundo receptor de Opc en las clulas epiteliales. Opc forma un b-barril alargado que consta de 10 hebras con una seccin transversal elipsoidal y tiene caractersticas muy similares a los de OmpA y OmpX. Hay largos bucles que sobresalen en el lado extracelular con las contribuciones de b-filamentos que se extienden por encima de la superficie de la membrana prevista. Los bucles que sobresalen forman una superficie continua con una ranura que contiene residuos bsicos que pueden estar implicados en la unin de proteoglicanos de heparn sulfato.

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