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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO JOO DEL REI

PREPARO DE CURVAS ANALTICAS

Preparo de Curvas Analticas 1- INTRODUO

2- OBJETIVO Preparar curvas analticas por diferentes mtodos e comparar o resultado obtido entre eles atravs de tratamentos matemticos.

3- MATERIAIS E MTODOS 3.1- Materiais, reagentes e equipamentos: 3.2- Mtodos

4- RESULTADOS E DISCUSSO Parte I Padronizao externa O mtodo de calibrao com padro externo um mtodo onde so preparadas solues padres de diferentes concentraes conhecidas. Submete-se essas solues a um mtodo previamente determinado onde cada uma ir gerar uma resposta diferente e a partir dessas respostas como funo das concentraes conhecidas constri-se uma curva analtica, que a construo de um grfico a partir dos dados obtidos e o ajuste dos mesmos a uma equao matemtica adequada. Essa curva usada para a determinao da concentrao do analito na amostra original atravs de uma posterior comparao com a resposta obtida pela amostra processada e analisada pelo mesmo mtodo, sendo assim possvel a quantificao do analito na amostra (HOLLER et al, 2009). Nesse experimento a amostra a ser analisada foi previamente preparada e disponibilizada durante o experimento.

Para a preparao de 100 mL de uma soluo estoque de permanganato de potssio com concentrao 0,0006 molL-1 calculou-se a massa necessria para ser pesada sabendo-se que 1 mol de KMnO4 possui 158,0339 gramas.

Pode-se observar que a massa a ser pesada muito pequena, pois existe a limitao da preciso da balana a ser utilizada. Diante disso chegou-se a concluso que para minimizar o erro associado deve-se fazer uma soluo 10 vezes mais concentrada e a partir dessa soluo, obter-se a soluo desejada atravs da diluio. Partindo-se da soluo obtida atravs da diluio calcularam-se os volumes dessa soluo necessrios para preparar solues padres de concentraes variadas de acordo com os clculos abaixo: Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a :

Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a :

Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a :

Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a :

Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a :

Os volumes calculados so razoveis de serem medidos com uma pipeta graduada. Por falta de disponibilidade de bales volumtricos de 100 mL, utilizaramse bales volumtricos de 50 mL, dessa forma os volumes calculados foram divididos por dois ao realizar o preparo das solues. Os valores obtidos pelos clculos esto expressos na tabela abaixo:

Tabela 1 Volumes de soluo estoque a serem utilizados para o preparo de padres de concentraes pr-determinados.

Concentrao da soluo padro (mol/L)

Volume da soluo estoque calculada (L)

Volume da soluo estoque utilizada (L)

Aps a aferio de cada um dos bales volumtricos contendo os volumes calculados da soluo estoque e o volume de 5 ml de soluo de cido clordrico 1 molL-1, preparou-se uma soluo em outro balo volumtrico de 50 mL utilizando-se 4 mL da amostra previamente preparada e o mesmo volume da mesma soluo de cido clordrico utilizada no preparo dos padres e em seguida aferiu-se o volume com gua destilada. Ao comparar visualmente a tonalidade das solues padres com a tonalidade da soluo da amostra percebeu-se uma maior semelhana com a soluo padro de concentrao igual a .

Para a construo da curva analtica desse mtodo utilizou-se um espectrmetro para a leitura da absoro de cada um dos padres e da amostra. Sabendo-se que o permanganato possui cor prpura e sua cor complementar o verde cuja absoro est na faixa de 500 a 560 nm escolheu-se o comprimento

de onda de 525 nm para ser utilizado na construo da curva. Os dados obtidos esto expressos na tabela abaixo:

Tabela 2 Valores das concentraes das solues padres e suas absorbncias valor da absorbncia da amostra analisada.

Soluo padro analisada (mol/L) / Amostra

Absorbncia 0,073 0,102 0,154 0,199 0,296

Amostra

0,145

A plotagem dos dados mostrados na Tabela 2 e o ajuste linear dos mesmos podem ser visualizados na Figura 1. O ajuste da reta foi feito computacionalmente com a utilizao do programa Origin 6.1, que tambm forneceu sua equao juntamente com os valores para desvio padro e coeficiente de correlao, R. Para a equao de formato , os valores para a e b so, respectivamente,

0,0522 e 0,02053; o erro associado ao coeficiente a o erro do intercepto e o associado a b, inclinao da reta de ajuste. O coeficiente de correlao do ajuste possui valor 0,99951 e o desvio padro calculado para o ajuste de 0,00317.

Figura 1 - Ajuste linear dos dados para calibrao pelo mtodo de padronizao externa.

Para o clculo da concentrao de permanganato de potssio na amostra faz-se necessrio igualar y a resposta obtida na leitura da amostra.

A concentrao do analito na soluo preparada da amostra analisada de . A partir desse valor pode-se encontrar a concentrao da soluo inicial determinando-se a quantidade de matria presente nos 50,00 mL da soluo preparada e dividindo-se essa pelo volume da alquota retirada da amostra inicial para o preparo da soluo analisada no espectrofotmetro, 4,0 mL:

Para o clculo da massa de do analito presente na amostra inicial, basta relacionar a massa molar da substncia com a concentrao encontrada, como mostrado abaixo:

Sabendo-se o valor da concentrao obtida pelo clculo e que foi preparado 1 litro da soluo, pode-se afirmar que a massa dessa substncia no medicamento pelo mtodo de calibrao por padro externo de 90 mg. Considerando o valor para massa indicado no rtulo do produto como verdadeira, 100 mg, pode-se calcular o erro relativo:

A absorbncia de uma substncia relatada pela Lei de Beer como sendo uma funo de sua concentrao, caminho tico do meio absorvente e da constante de proporcionalidade , denominada absorbncia molar (SKOOG et al, 2006). Sendo assim, para o clculo de basta isolar-se essa constante, gerando a equao:

onde A representa absorbncia, w o caminho tico em cm e x a concentrao molar da substncia. A absortividade molar pode ser estimada com base no ajuste linear j mostrado, substituindo-se na frmula acima a absorbncia A por bx, visto que a corresponde apenas ao deslocamento da origem na curva . Considerando que o caminho tico w possui 1,0 cm, a absortividade molar para o permanganato de potssio pelo mtodo de calibrao pela adio de padro :

A Tabela 3, contendo dados relativos ANOVA (Analysis of variance) til na avaliao da significncia da regresso linear, julgada pelo valor de F; esse um indicador para probabilidade da varincia total ser atribuvel ao erro da resposta (MONTGOMERY & RUNGER, 2002). Tal conjunto de valores calculados tambm foi obtido computacionalmente ao se fazer o ajuste linear.

Tabela 2- Tabela ANOVA do ajuste linear para calibrao pelo mtodo da adio de padro.

Item Modelo Erro Total

g.l. 1 3 4

SQ 0,03084 3,01055E-5 0,03087

QM 0,03084 1,00352E-5

F 3073,26501

Dado que F obtido na regresso tem valor muito maior que o encontrado em uma tabela de distribuio F com =0,01 com os graus de liberdade adequados (f0.01,1,2 = 34,12), pode-se concluir que a regresso linear realizada significativa, segundo o que afirma a literatura (SKOOG et al, 2006).

Parte 2 Padro Interno A curva analtica da tcnica do padro interno foi obtida atravs dos dados da Tabela 3 exceto os dados amostrais. A soluo adicionada a cada soluo padro do analito tem o objetivo de acrescentar ao meio, o dicromato de potssio a fim de que tal espcie seja o padro interno (SKOOG et al, 2006). Tal escolha se baseia no fato de ser parecido com o permanganato no sentido de que sob as mesmas condies tm comportamentos anlogos (VOGEL, 1979). Alm de o dicromato de potssio ser relativamente barato, acessvel comercialmente, sua soluo ser estvel indefinidamente e no reagir com o cido clordrico (SKOOG et al, 2006).

Tabela 3 Absorbncias fornecidas para as solues permanganato e para as de cromato.

Absorbncia para = 525 nm Soluo (x 10 mol L ) 1,2 2,4 4,8


-5 -1

Absorbncia para = 400 nm Absorbncias cromato 0,089 0,094 0,107 Razo das absorbncias 1,011235955 1,223404255 1,588785047

Absorbncias permangabato 0,09 0,115 0,17

7,2 12,0 Amostra

0,2 0,306 0,172

0,112 0,131 0,114

1,785714286 2,335877863 1,50877193

Figura 2: Ajuste linear dos dados para calibrao pelo mtodo de padronizao interna.

A Figura 2 apresenta o grfico que mostra a razo das absorbncias do permanganato pela do cromato versus a concentrao de KMnO 4. O ajuste linear foi feito pela equao y = a + bx usando o software Origin 6.1. Sendo os valores fornecidos de a e b, 0,92963 0,04948 e 0,11945 0,00736 respectivamente; o erro associado a b o erro da inclinao e o erro associado a a o do intercepto. O software tambm forneceu o coeficiente de correlao, R, e o desvio padro, 0,99436 e 0,06318 respectivamente. possvel ento calcular a concentrao da amostra substituindo o valor da razo das absorbncias da amostra na equao em y e calculando o valor de x. A razo 1,50877193 est na Tabela 3 e a concentrao calculada 4,848405 x 10-5 mol L-1. Levando em considerao que a soluo foi diluda de 8 mL para 100 mL, o clculo dado por:

Para se obter uma quantidade em relao a massa possvel usar a massa molar do KMnO4 como a seguir:

Calcula-se o erro considerando-se a soluo de 1 L:

A absortividade pode ser obtida pela relao da absorbncia:

Considerando o caminho tico w como 1 cm e A como bx do ajuste linear possvel obter a absortividade .

A Tabela 4, ANOVA de anlise de varincia necessria para anlise da significncia do ajuste linear que usa como indicador o valor de F.

Tabela 4- Tabela ANOVA do ajuste linear para calibrao pela tcnica da padronizao interna.

Item Modelo Erro Total

g.l. 1 3 4

SQ 1,05202 0,01198 1,06399

QM 1,05202 0,00399

F 263,55184

Sendo que o valor de F encontrado da regresso consideravelmente maior que o valor da distribuio F para =0,01 com graus de liberdade 1 e 3 (f0.01,1,3 = 34,12) pode-se afirmar que o ajuste linear significativo (SKOOG et al, 2006). Parte 3 Adio de Padro A absorbncia definida pela equao

onde P0 potncia radiante do feixe de luz aps ter passado pelo branco e P a potncia do mesmo aps ter passado pela amostra (SKOOG et al, 2006).Uma justificativa possvel para a concentrao negativa de KMnO4 lida por um dos experimentadores para situao em que no inseriu a cubeta com amostra no espectrofotmetro reside no fato de que sem essa, a potncia P se torna maior que P0, fazendo com que a transmitncia (P/P0) seja menor que 1. A absorbncia, por consequncia, passa a ter valor negativo e, por avaliao da lei de Beer-Lambert, tambm a concentrao informada pelo instrumento. Para o preparo da curva analtica pelo mtodo da adio de padro, foram obtidos os dados mostrados na Tabela 1. O clculo da concentrao molar de analito adicionado para cada um dos sistemas analisados feito de maneira convencional, calculando-se a quantidade de matria de permanganato presente no volume adicionado amostra e depois dividindo-se tal valor pelo volume do balo empregado para preparo. Vlido relatar que para ltima amostra, quando foi requisitado no roteiro da prtica o volume de 7,5 mL de soluo do padro, a adio

adotada pelos experimentadores foi de 3,7 mL, visto que o balo em que foi preparada tinha metade do volume recomendado tambm no roteiro.

Tabela 1 Valores de concentrao molar de KMnO4 adicionado e absorbncia relacionada para o mtodo de calibrao por adio de padro.

Concentrao molar de KMnO4 adicionado (x 10-5 mol L-1) 0 1,5 3,0 4,4

Absorbncia para = 525 nm 0,170 0,198 0,233 0,263

A plotagem dos dados mostrados na Tabela 1 e o ajuste linear dos mesmos podem ser visualizados na Figura 1. O ajuste da reta foi feito computacionalmente com a utilizao do programa Origin 6.1, que tambm forneceu sua equao juntamente com os valores para desvio padro e coeficiente de correlao, R; Na equao de formato y= a+ bx, os valores para a e b so, respectivamente, 0,1682 e 0,02136; o erro associado ao coeficiente a o erro do intercepto e o associado a b, inclinao da reta de ajuste. O coeficiente de correlao do ajuste possui valor 0,99907 e o desvio padro calculado para o ajuste de 0,00214.

Figura 1: Ajuste linear dos dados para calibrao pelo mtodo da adio de padro.

Para o clculo da concentrao de permanganato de potssio na amostra fazse necessrio igualar y a zero na equao de reta obtida no ajuste, visto que a calibrao por adio de padro desloca a curva que conteria a origem para esquerda; o sinal de absorbncia lido quando no h padro adicionado referente concentrao desconhecida do analito na soluo preparada da amostra. Para y = 0, x = -7,7 x 10-5 mol L-1, o que obviamente no tem sentido para uma concentrao. Entretanto, ao deslocar-se esse ponto para origem do sistema cartesiano, encontrarse- uma concentrao de mesmo mdulo e sinal inverso ao mencionado, atribuda a concentrao do analito na soluo preparada da amostra, o que possibilita o clculo da concentrao e massa desse na amostra original. Dada concentrao na soluo preparada da amostra, 7,7 x 10-5 mol L-1, encontra-se a concentrao da soluo inicial determinando-se a quantidade de matria presente nos 100,00 mL da soluo preparada e dividindo-se essa pelo volume da alquota retirada da amostra inicial para o preparo da soluo analisada no espectrofotmetro, 8,0 mL:

Para o clculo da massa de permanganato de potssio presente na amostra inicial, basta relacionar a massa molar da substncia com a concentrao encontrada, como mostrado abaixo:

O erro padro da estimativa ou desvio padro da regresso, 0,00214, quando somado ou subtrado da concentrao de KMnO4 obtida para soluo preparada de amostra no implica em alterao dos valores mostrados nos dois clculos acima, visto que a preciso de ambos limitada pela vidraria, mais especificamente pela pipeta graduada, utilizada; para concentrao molar na amostra original, o desvio padro alteraria a stima casa depois da vrgula (3 x 10-7) e para massa, a terceira (4 x 10-2). , portanto, inadequado expressar tais erros nos resultados acima. Tomada concentrao de permanganato calculada e sabendo-se do fato de que foi preparado um litro de soluo, pode-se afirmar que a massa dessa substncia no medicamento pelo mtodo de calibrao por adio de padro de 1,5 x 102 mg. Considerando o valor para massa indicado no rtulo do produto como verdadeira, 100 mg, pode-se calcular o erro relativo:

A absorbncia de uma substncia relatada pela Lei de Beer como sendo uma funo de sua concentrao, caminho tico do meio absorvente e da constante de proporcionalidade , denominada absorbncia molar (SKOOG et al, 2006). Sendo assim, para o clculo de basta isolar-se essa constante, gerando a equao:

onde A representa absorbncia, w o caminho tico em cm e x a concentrao molar da substncia. A absortividade molar pode ser estimada com base no ajuste linear j mostrado, substituindo-se na frmula acima a absorbncia A por bx, visto que a corresponde apenas ao deslocamento da origem na curva. Considerando que o

caminho tico w possui 1,0 cm, a absortividade molar para o permanganato de potssio pelo mtodo de calibrao pela adio de padro :

A Tabela 2, contendo dados relativos ANOVA (Analysis of variance) til na avaliao da significncia da regresso linear, julgada pelo valor de F; esse um indicador para probabilidade da varincia total ser atribuvel ao erro da resposta (MONTGOMERY & RUNGER, 2002). Tal conjunto de valores calculados tambm foi obtido computacionalmente ao se fazer o ajuste linear.

Tabela 2- Tabela ANOVA do ajuste linear para calibrao pelo mtodo da adio de padro.

Item Modelo Erro Total

g.l. 1 2 3

SQ 0,00493 9,14134E-6 0,00494

QM 0,00493 4,57067E-6

F 1078,36712

Dado que F obtido na regresso tem valor muito maior que o encontrado em uma tabela de distribuio F com =0,01 com os graus de liberdade adequados (f0.01,1,2 = 98.50), pode-se concluir que a regresso linear realizada significativa, segundo o que afirma a literatura (SKOOG et al, 2006).

5- CONCLUSO

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de Qumica Analtica. 8ed. So Paulo: Thomson Learning, 2006. 1124 p. MONTGOMERY, D. C; RUNGER, G. C. Applied Statistics and Probability for Engineers. 3ed. New York: John Wiley & Sons, 2002. 822 p. HOLLER, F. James; SKOOG, Douglas A.; CROUCH, Stanley R. Princpios de anlise instrumental. 6ed. Porto Alegre: Bookman, 2009. 1055 p.