UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Per, DECANA DE AMERICA) FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL

DE MEDICINA HUMANA DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS DINMICAS SECCIN BIOQUMICA CURSO: BIOQUMICA
INFORME DE PRCTICA N 9: DETERMINACIN DE CIDO RICO EN SUERO Y ORINA GRUPO: MESA: B2 6

ALUMNOS:

34 76 160 202

CASTILLO RAMOS, DIEGO ALEXIS GARIBAY YALAN RAUL EDUARDO QUISPE SOLIS, JUDITH SHERLY TAMARIZ DIAZ, GILDA CLAVELINA

SAN FERNANDO, 2013

INTRODUCCIN El cido rico es un metabolito de las purinas, cidos nucleicos y nucleoprotenas. Habitualmente la concentracin del cido rico en suero varia de un individuo a otro de acuerdo a diversos factores tales como la edad, sexo, dieta, origen tnico, constitucin gentica, embarazo. Niveles anormales de cido rico en suero son ndice de desorden en el metabolismo de las sustancias que lo originan o de defectos de eliminacin. La hiperuricemia es tpica, aunque no exclusiva, en la enfermedad de la gota; estudios epidemiolgicos indican un alto porcentaje (alrededor del 83%) de pacientes con niveles de cido rico mayores de 90 mg/1 desarrollan artritis gotosa. En tales pacientes, se observan cristalizaciones del cido rico y sus sales en las membranas sinoviales de las articulaciones y en los tendones, causantes de las manifestaciones reumatolgicas caractersticas. En menor proporcin (10 a 25% de los casos) es posible encontrar depsitos de uratos en los tbulos o en el tejido intersticial del parnquima renal, con el consecuente riesgo de una insuficiencia renal irreversible en caso de persistir la hiperuricemia. Tambin existen otros desrdenes que transcurren acompaados de hiperuricemia, tales como leucemia, policitemia, mi el orna mltiple, intoxicacin plmbica, incluyendo alteraciones medicamentosas en los tratamientos con citostticos o con tiazidas. Mientras que otros medicamentos (drogas uricosricas tales como salicilatos y la fenilbutazona) aumentan la excrecin del cido rico, disminuyendo los niveles sricos del mismo.

OBJETIVO Al finalizar esta prctica, el alumno ser capaz de: Determinar experimentalmente la concentracin de cido rico en suero y orina

MATERIALES REACTIVOS 4-amino antipirina 0.5 mM, 3-5-dicloro-2hidroxibenceno Sulfnico 1.75 mM, Uricasa > 32 U/L, Peroxidasa > 1300 U/L, Azida de sodio 0.05 %. Buffer fosfato 0.05 M pH 7.4 Estndar de cido rico 1 mg% MUESTRA SUERO: Hacer una dilucin al 1/10 (0.1 ml de suero y agua csp 1 ml) ORINA DE 24 HORAS: Diluir la orina 1 /20 (0.5 ml orina y agua csp 10 ml)

DESARROLLO DE LA PRCTICA

PARTE EXPERIMENTAL Se recolect la orina de un participante de la mesa durante 24 horas desechando la primera orina de la maana inicial. Asimismo se extrajo una muestra de sangre, la cual fue sometida a centrifugacin para sedimentar los elementos formes y separarlos del suero mientras que se procur evitar la hemlisis en la muestra. A partir de aqu se obtuvieron las muestras de sangre para ambos procedimientos. Luego se prepar una batera de tubos para la determinacin de cido rico en suero y orina. a. Determinacin de cido rico en suero y orina:

Al suero se le aplic una dilucin de 1 en 10 (0.1 ml de suero y agua csp 1ml). Asimismo, se diluy la orina de 24 horas 20 veces con agua destilada (0.5 ml de orina y agua csp 10 ml) El mtodo se bas en lo siguiente: La enzima Uricasa catalizara la oxidacin del cido rico para producir el perxido de hidrgeno y alantona. El perxido de hidrgeno con el 4-amino antipirina y 3-5-dicloro-2-hidroxibenceno Sulfnico formara el complejo Quinoneimina en presencia de la enzima peroxidasa y el complejo se podra leer a 505 nm Se prepar una batera de cuatro tubos: Blanco, estndar, muestra problema suero y muestra problema orina. Blanco: 0.5 ml de agua destilada, 1 ml de reactivo enzimtico. Estndar: 0.1 ml de solucin estndar de cido rico cuya concentracin era de 1 mg%, 0.4 ml de agua destilada y 1 ml de reactivo enzimtico. Muestra problema suero: 0.1 ml del suero diluido inicialmente, 0.4 ml de agua destilada y 1 ml de reactivo enzimtico. Muestra problema orina: 0.1 ml de orina diluida, 0.4 ml de agua destilada y 1 ml de reactivo enzimtico

Se mezclaron e incubaron durante 5 minutos a 37C. Posteriormente se leyeron las absorbancias a 505 nm en el espectrofotmetro.

i.

Luego de realizar los pipeteos respectivos, lo llevamos al espectofotometro para la medicin de las absorbancias. Este resultado sale adecuado ya que en general la muestra problema de la orina debe ser mayor que el del suero.

TUBO Blanco Estndar

ABSORBANCIA 0.026 0.108 0.082 0.136

ii.

Ahora mediante la frmula corta, vamos a calcular la muestra problema de la orina y el suero. [ ] [ ]

iii.

De los datos podemos inferir que los volmenes de los tubos St y MP son iguales, por tanto este factor se excluye. = 1; por ello este factor se excluye en los clculos.

iv.

Para la muestra problema SUERO: [ ] [ [ ] ] ( 6,82 mg/dl )

v.

Para la muestra problema ORINA: [ ] [ ] ( )

6,82 mg/dl

vi.

Posteriormente calculamos la excrecin de urea en orina de 24 horas: 26,8 mg --------- > 100 ml X mg ---------- > 2 195 ml

X = 588,26 mg/ 24h

CONCLUSIONES

Como se pudo observar algunos de los grupos presentes en la prctica hallaron valores de cido rico en orina elevados, al igual que los valores de excrecin, lo que podra traducirse en una infeccin o hasta en una leucemia, como tambin error al momento de tomar la muestra por no haber homogenizado la orina, debido a que supera por muchsimo los valores normales de 250 750 mg / 24 h, el valor obtenido en prctica fue de 1800 mg/ 24 h. El principal mtodo para encontrar la concentracin de cido rico es el mtodo enzimtico, donde intervienen diversas enzimas como la uricasa y la perxidasa, para formar el compuesto coloreado rosado llamado QUINONAIMINA, el cual es proporcional a la concentracin del producto del metabolismo purnico. Se podra descartar alguna alteracin o patologa a nivel renal, debido a que los valores de cido rico en suero se encuentran dentro del rango normal, por lo tanto no padece de hiperuricemia.

COMENTARIOS Los valores de concentracin de cido rico en la mayora de las mesas fueron normales pero los valores anormales se pudieron dar por los siguientes motivos: Errores en cuanto a la medicin, debido a que la pipeta tiene un elevado margen de error, esto podra disminuir si se hace uso de una micropipeta. Tambin puede ser debido a una mala dilucin hecha por los alumnos. Otro motivo puede ser porque no se agit la muestra de orina antes de comenzar a hacer las diluciones ya que el cido rico tiende a sedimentar, lo cual puede llevar a obtener una elevada concentracin de cido rico.

CUESTIONARIO

1.

Porqu se le conoce como cido rico, si no tiene la funcin acida COOH?

Acidez 5.6 pKa Alcalinidad 8.4 pKb Es decir, si bien no es un compuesto que tenga grupos funcionales cidos como los carboxlicos, su misma propiedad de pKa o sea de tener una constante de acidez 5.6, hace que pueda donar protones muy fcilmente y AQUELLAS SUSTANCIA CAPAZ DE DONAR PROTONES SE LES CONSIDERA CIDOS. 2. Expresar los valores de referencia en trminos de mmol/L Los valores normales estn entre 3.5 y 7.2 mg/dL; pasando a moles se divide entre el P.M. (Peso molecular) del compuesto que corresponde a 168 g/mol y para pasar a litros multiplicamos por 10; por lo cual tendramos: (3.5 mg/dL)(10)/168 = 0.208 mmol/L (7.2 mg/dL)(10)/168 = 0429 mmol/L Obteniendo el rango entre: (0.208-0.429) mmol/L En el caso de los valores para una mujer seran: (2.6 mg/dL)(10)/168 = 0.155 mmol/L (6.0 mg/dL)(10)/168 = 0.357 mmol/L Obteniendo el rango entre: (0.155-0.357) mmol/L 3. Describa brevemente la enfermedad de la gota. La gota es una enfermedad producida por una acumulacin de cristales de sales de urato (cido rico) en distintas partes del cuerpo, sobre todo en las articulaciones, tejidos blandos y riones. El ataque agudo de gota tpico consiste en una artritis que causa intenso dolor y enrojecimiento de inicio nocturno en la articulacin metatarso falngica del dedo gordo del pie. La gota es uno de los tipos de artritis por micro cristales. El factor fundamental que causa la gota es la hiperuricemia (elevacin de los niveles de cido rico en sangre). Los dos motivos principales por los que son demasiado altos los niveles de cido rico en sangre son el aumento de su produccin por el organismo y la disminucin de su eliminacin por el rin. Los estilos de vida poco saludables, la obesidad, la ingesta excesiva de alcohol o alimentos ricos en purinas, como las carnes rojas, vsceras, pescado azul o mariscos, actan como desencadenante de las crisis gotosa, pero no son la causa de la enfermedad que est condicionada por factores de origen gentico en la mayor parte de los casos.

TRATAMIENTO Frmacos antiinflamatorios no esteroideos. Son los medicamentos ms empleados para el tratamiento de la crisis aguda de gota y su eficacia ha quedado demostrado en diferentes ensayos clnicos, pueden administrarse por va oral y son tambin tiles para el alivio del dolor. No se aconseja sin embargo la utilizacin de aspirina Colchicina. Es un medicamento muy utilizado para el tratamiento de la crisis aguda y es especialmente til si se administra precozmente. Tiene sin embargo el inconveniente de una vida media muy corta y debe evitarse si existe diarrea, insuficiencia heptica o insuficiencia renal. Tambin se emplea a bajas dosis, de entre 0.5 y 1 mg diarios, como medicacin preventiva. Frmacos hipouricemiantes. Tienen la propiedad de reducir los niveles de cido rico en sangre, por lo que facilitan la desaturacin y la disolucin de los depsitos de esta sustancia que se forman en los tejidos. El medicamento ms empleado de este grupo teraputico es el alopurinol que acta mediante la inhibicin de la enzima xantina oxidasa y se administra a una dosis comprendida entre 100 y 300 mg diarios. Uricosricos. Son medicamentos que aumentan la expulsin de cido rico por la orina. Glucocorticoides. Se ha demostrado que los glucocorticoides son tan efectivos como los AINE y se pueden usar si existen contraindicaciones para los AINE. Tambin provocan mejora cuando se inyectan en la articulacin; sin embargo, se debe excluir una artritis infecciosa ya que los esteroides empeoran esta enfermedad.

4. Mencione los frmacos que vara los niveles de uricemia. Medicamentos o tratamientos que el mdico puede recetar para tratar la hiperuricemia: Si tiene niveles altos de cido rico en sangre, su mdico podr recetarle ciertos medicamentos, entre ellos: Agentes antiinflamatorios no esteroides (AINE) y Tylenol como naproxeno de sodio e ibuprofeno, brindan alivio al dolor relacionado con la gota. La gota puede ser el resultado de un nivel alto de cido rico. Si debe evitar los medicamentos AINE debido a su tipo de cncer o a la quimioterapia que est recibiendo, el acetaminofn (Tylenol) de 400 mg, dos tabletas cada 6 horas, puede ayudar. Es importante que no exceda la dosis diaria recomendada de Tylenol, ya que puede daar al hgado. Consulte a su mdico.

Frmacos uricosricos: estos frmacos bloquean la absorcin de urato, que puede prevenir que los cristales de cido rico en los tejidos. Ejemplos de frmacos uricosricos incluyen probenecid y sulfinpirazona. Los inhibidores de la xantina-oxidasa, como el alopurinol, previenen la gota. Sin embargo, los sntomas de gota podrn empeorar si se lo toma durante un episodio de inflamacin dolorosa de las articulaciones. Existen dos tipos de frmacos que se pueden utilizar en este caso: uricosricos e inhibidores de la xantino-oxidasa (Alopurinol). Ambos deben emplearse pasadas dos semanas del ataque agudo de gota. Los frmacos uricosricos aumentan la excrecin urinaria de urato. Son criterios de exclusin los siguientes: edad mayor de 60 aos, Acl-Cr < 50 ml/m, flujo de orina < 1ml/min y antecedentes de nefrolitiasis. El principal riesgo de este grupo de frmacos es la formacin de cristales de urato y su depsito en los tbulos renales, pelvis y urter, produciendo clicos renales y deterioro de la funcin renal. Los frmacos ms usados son el Probenecid (1-2g/da) y Sulfinpirazona (100-200 mg /12h). Por otra parte, los inhibidores de la xantio-oxidasa disminuyen la produccin de cido rico bloqueando el paso final en la sntesis de urato mientras que se elevan las oxypurinas (xantina e hipoxantina). El Alopurinol es una pyrazolopyrimidina, anlogo de la hipoxantina, y es el nico inhibidor de la xantino-oxidasa utilizado en la clnica. Aunque su vida media es corta se metaboliza a oxypurinol de vida media larga y similar accin teraputica. Est indicado en pacientes con gota intercrtica o gota crnica por sobreproduccin de uratos y en pacientes con criterios de exclusin para tratamiento uricosrico. La dosis habitual es de 100-300 mg/da segn respuesta clnica y funcin renal. -Tratamiento de la Nefrolitiasis: El tratamiento de la crisis renoureteral aguda no difiere del tratamiento general de este tipo de cuadros salvo por la asociacin de soluciones alcalinizantes (bicarbonato/citrato) que ayudan a la disolucin del clculo si es de urato puro. El tratamiento profilctico de la recurrencia de la litiasis renal tanto de urato como de oxalato clcico incluye las medidas generales de la hiperuricemia y el tratamiento farmacolgico con inhbidores de la XO, estando contraindicados los uricosricos. -Nefropata tubular aguda por cido rico: Su tratamiento incluye hidratacin, alcalinizacin, acetazolamida y alopurinol en dosis nicas que pueden ser repetidas segn evolucin y grado de insuficiencia renal. Tambin, ante ciertas formas de leucemia o linfoma, le podrn recetar alopurinol para prevenir complicaciones de la quimioterapia y del sndrome de lisis tumoral, y no necesariamente para prevenir la gota. Con niveles altos de

cido rico en la sangre, como resultado de su enfermedad, el cido rico se acumular y formar cristales en los riones. Esto puede causar que los riones dejen de funcionar.