UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMN

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGA ESCUELA UNIVERSITARIA DE POSGRADO

ESTUDIO FITOQUMICO Y BIOLGICO DE DICTYOLOMA PERUVIANA Y ERECHTITES VALERIANIFOLIA

Perfil de tesis presentado para optar al ttulo de Mster en Ciencia y Tecnologa de Productos Naturales

Postulante: Israel Terrazas Maldonado Tutores: Dr. Walter de Groot Lic. Gloria Saavedra

COCHABAMBA BOLIVIA Agosto, 2012 1.- GENERALIDADES DEL ESTUDIO

1.1.- Antecedentes Bolivia, al contar con una amplia zona geogrfica, que va desde la zona andina hasta la selva amaznica posee una gran biodiversidad en la que podran existir especies vegetales potencialmente interesantes para la industria alimenticia y farmacutica. (Arduz, C., 1998). 1.2.- Planteamiento del problema El inters de estudiar las 2 especies vegetales, Dictyoloma peruviana y Erechtites valerianifolia radica en la posible actividad biolgica que pueda presentar y que contribuira a paliar algunas de las enfermedades catalogadas como del tercer mundo que afectan, principalmente, a poblaciones rurales. 1.3- Objetivos 1.3.1.- Objetivo General Estudiar qumica y biologicamente dos especies vegetales seleccionadas del Departamento de Cochabamba: Erechtites valerianifolia y Dictyoloma peruviana. 1.3.2.- Objetivos Especficos Obtener y caracterizar extractos y aceites esenciales de las dos especies. Realizar un screening fitoqumico. Realizar pruebas de aplicacin biolgica de los extractos y aceites. Identificar fracciones y/o componentes puros, responsables de alguna actividad biolgica.

2.- MARCO TERICO 2.1.- Obtencin de aceites esenciales Existen varias tcnicas de obtencin de aceites esenciales, la ms utilizada es la destilacin por arrastre con vapor de agua, donde una cantidad determinada del material vegetal fresco y trozado (hojas y ramas jvenes) se somete al proceso de extraccin por hidrodifusin hasta agotamiento de la planta, generalmente de 1,5 a 5 h, segn la naturaleza del material portador. 2.2.- Caracterizacin de los aceites esenciales Los aceites esenciales de las especies aromticas se caracterizan fisicoqumicamente por picnometra, refractometra y polarimetra. As mismo se someten, en algunos casos, a anlisis por GC y en otros a GC MS; siendo la ltima tcnica la ms utilizada para separar, identificar y cuantificar los componentes de mezclas complejas. (Bandoni, A., 2003) 2.4.- Obtencin de extractos crudos

Para la preparacin de extractos por maceracin, el material vegetal fresco es sometido a un tratamiento de secado a temperatura ambiente y con aeracin durante varios das, proceso que se realiza en secadores horizontales. El material vegetal deshidratado es cortado en trozos y molido hasta consistencia de polvo. La extraccin se realiza durante 48 a 72 horas a temperatura ambiente, con agitacin manual espordica, utilizndose solvente en una determinada proporcin respecto al material vegetal. La mezcla obtenida es separada por filtracin simple y los slidos son descartados; la solucin resultante es concentrada hasta sequedad a presin reducida en un evaporador rotativo con una temperatura del bao de agua, obtenindose los extractos crudos, los que finalmente son pesados y almacenados. 2.5.- Tamizaje fitoqumico El screening fitoqumico permite determinar cualitativamente los principales grupos qumicos presentes en una planta y a partir de all, orientar la extraccin y/o fraccionamiento de los extractos para el aislamiento de los grupos de mayor inters. Este procedimiento consiste bsicamente en la extraccin de la planta con solventes apropiados y la aplicacin de reacciones de color y precipitacin (Bruneton, J. 2001). 2.6.- Cromatografa en capa fina La tcnica de cromatografa en capa fina (TLC) es una de las tcnicas de separacin ms comunes utilizadas en laboratorio, permite determinar el grado de pureza de un compuesto, comparar muestras, realizar el seguimiento de una reaccin y controlar el contenido de las fracciones obtenidas en cromatografa en columna. 2.7.- Cromatografa de gases La cromatografa de gases (GC) es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se volatiliza al inyectarse en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportarlo a travs de la columna para que sus componentes puedan ser separados. 2.8.- Acoplamiento cromatografa de gases espectrometra de masas La espectrometra de masas (MS) puede identificar de manera casi inequvoca cualquier sustancia pura, pero no es capaz de identificar los componentes individuales de una mezcla sin separarlos previamente. La asociacin de esta tcnica con cromatografa gaseosa da lugar a una tcnica combinada GS MS, la que permite la separacin e identificacin de los componentes que tienen las especies vegetales. 2.7.- Pruebas biolgicas Las pruebas biolgicas o bioensayos son pruebas que se realizan en organismos vivos, rganos seleccionados o clulas con compuestos de inters metablico, para evaluar la actividad farmacolgica potencial de una droga.

La actividad antiparasitaria evala la capacidad de inhibicin, de una planta o sus derivados, contra algn parsito determinado. Por ejemplo, la Leishmaniasis es una enfermedad causada por parsitos, ampliamente transmitida por insectos. 2.8.- Descripcin de las especies estudiadas 2.8.1.- Erechtites valerianifolia Perteneciente a la familia de las Asterceas. Hierba anual con tallos erectos, simples o ramificados superiormente, de 50 100 cm de altura. Hojas alternas, las inferiores ovado lanceoladas, enteras, aserradas o dentadas. Ubicacin geogrfica.- Esta especie vegetal se encuentra en la regin de Corani Pampa, ubicada a 63 Km de la ciudad de Cochabamba. Partes usadas de la planta.- Se utilizan principalmente las hojas, tallos y las sumidades floridas, de las cuales se obtiene su aceite esencial y su extracto. Propiedades.- Son tnicas, astringentes, alternativas y antidisentricas. Composicin.- La planta contiene aceite esencial, alcaloides pirrolizidnicos, flavonoides, cumarinas y cidos fenoles. Usos tradicionales.- Se utiliza para tratar problemas de hgado, mordeduras de serpientes y araas; del tallo y hojas se obtiene un extracto, el cual es consumido en ayunas para problemas hepticos.

2.8.3.- Dictyoloma peruviana Esta especie es un rbol pequeo perteneciente a la familia de las Rutceas. Ubicacin geogrfica.- La especie vegetal descrita se encuentra en el Valle de Sacta Chapare, ubicada aproximadamente en el Km 254 de la ruta troncal Cochabamba Santa Cruz. Partes usadas de la planta.- Se utilizan principalmente las hojas, de las cuales se obtiene su extracto. Propiedades.- Utilizada en el tratamiento de la leishmaniasis. Composicin.- Contiene alcaloides 4quinolinona, dictyolomida A y B. Usos tradicionales.- La masticacin de sus hojas origina aumento en la salivacin en personas con sequedad bucal.

3.- DESARROLLO EXPERIMENTAL En el desarrollo experimental del presente proyecto, se realizarn las siguientes actividades: 3.1.- Colecta del material vegetal

Se colectar especies vegetales de dos zonas especficas, la especie Erechtites Valerianifola en Corani Pampa y la especie Dictyoloma Peruviana en el Valle de Sacta. 3.2.- Obtencin de aceites esenciales Aproximadamente 1000 gramos de material vegetal fresco y picado se someter al proceso de destilacin por arrastre con vapor de agua para obtener los aceites esenciales de las especies mencionadas y determinar las propiedades fisicoqumicas de las mismas (densidad, ndice de refraccin y rotacin ptica). 3.2.1.- Anlisis e identificacin de los componentes del aceite esencial Los aceites esenciales obtenidos se analizarn por cromatografa gaseosa, determinndose el ndice de Kovats (I IK) para cada uno de los componentes. As mismo, la identificacin de los componentes, se realizar mediante la tcnica analtica GC MS. 3.2.2.- Obtencin de extractos crudos Para la obtencin de extractos, las muestras en polvo se macerarn en etanol por 48 hr, se filtrar la mezcla y posteriormente se realizar la concentracin en un rotaevaporador al vacio. 3.2.3.- Anlisis fitoqumico de extractos vegetales Se realizarn un test de reconocimiento de los siguientes grupos fitoqumicos (Dominguez, X, 1973): Alcaloides (Reaccin de Dragendorf, Mayer y Wagner) Triterpenos y/o esteroles (Reaccin de Liebermann y Burchard) Cumarinas (Reaccin de Feigl, Frehden y Anger) Flavonoles y flavoninas (Reaccin de Shinoda) Agliconas antrasensidos (Reaccin de Bortrager)

3.2.4.- Elucidacin estructural de los componentes de las especies vegetales Este procedimiento se realizar mediante tcnicas espectroscpicas como UV, IR, MS, GC- MS entre otros 3.2.5.- Fraccionamiento en columna Antes de realizar el fraccionamiento en columna se corrern las muestras en placas TLC, de modo que se pueda seleccionar el sistema de solventes ms adecuado para llevar a cabo la separacin de la muestra. Una vez realizada la preparacin de la columna, se realizar el fraccionamiento utilizando el solvente menos polar y se continuar con mezclas de solventes de modo que se vaya incrementando la polaridad. En algunos casos, la separacin de grupos se podr definir de acuerdo a los colores que presenten cada uno de estos, lo que podra evidenciarse en las placas TLC.

3.3.- Pruebas biolgicas Los ensayos biolgicos se realizarn con los aceites esenciales, extractos crudos y/o fracciones obtenidas. 3.3.1.- Prueba ovicida con Triatoma infestan (Vinchucas) En esta prueba se prepararn dos soluciones ( y ), una solucin testigo y un blanco, las mismas que se colocarn en las cajas petri junto con los huevos de vinchuca (10 por compartimiento); controlndose diariamente la eclosin de stos. 3.3.2.- Test de Artemia salina Se preparar el medio de incubacin de las artemias, las cuales tendrn aproximadamente 48 horas hasta su eclosin, para luego realizar el conteo inicial de artemias y pasadas las 24 h realizar un conteo final para calcular la DL50. 3.3.3.- Actividad Antiparasitaria Los extractos crudos y fracciones respectivas de las especies sern evaluadas mediante pruebas in vitro contra parsitos de leishmania: Leishmania amazonensis clon 1: Lma y Leishmania braziliensis. 4.- RESULTADOS ESPERADOS Al finalizar el proyecto de investigacin, mediante el tamizaje fitoqumico de las especies Erechtites valerianifolia y Dictyoloma peruviana, se pretende conocer los componentes que contienen las mencionadas especies. As mismo, a travs de la realizacin de pruebas biolgicas, determinar si los aceites y extractos obtenidos, as como sus fracciones presentan algn tipo de actividad biolgica. 5.- BIBLIOGRAFA Arduz, C., (1998). Aislamiento y Elucidacin Estructural de Compuestos Antifngicos y/o Antibacterianos de la Especie Vegetal Baccharis Leptophylla DC. Tesis de Qumica Farmacutica, UMSA, La Paz, Bolivia. Bandoni, A., (2003). Los Recursos Vegetales Aromticos en Latinoamrica. Su aprovechamiento Industrial para la Produccin de Aromas y Sabores. 2da. Edicin. Proyecto IV.6.CYTED. Dominguez, X., (1973) Mtodos de Investigacin Fitoqumica. Editorial Limusa. Mxico. Bruneton J. (2001). Plantas Medicinales. Fitoqumica y Farmacognosia. Editorial Acribia. Zaragoza, Espaa.