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Laboratorio de Androloga
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Gestin del banco de donantes de semen Seminograma para el estudio de infertilidad del varn Congelacin/Descongelacin Capacitacin de muestras de semen Tcnicas especiales:
Fragmentacin del DNA espermtico Lavado de semen para VIH/VHC FISH espermatozoides Microdelecciones del cromosoma Y
Entrevista personal 1 prueba: seminograma 2 prueba: congelacin, descongelacin y capacitacin 3 prueba: Entrevista con un psiclogo Analtica
Hemograma, grupo y Rh Coagulacin Serologa: Hepatitis B y C, VIH, RPR, CMV Cultivo de semen y orina Cariotipo Fibrosis Qustica
Si OK
5-10% ACEPTADOS
Donacin 25 muestras
A+B=
VxCxB 100
REM IA FIV >3x106 spz totales >200-500 x10/ml Spz mviles aislados
>80
>4.5
ICSI
1999
2010
Limitaciones:
-No se defini una poblacin de referencia -Colaboracin de laboratorios sin control de su metodologa
Espermatozoide normal. Criterios estrictos de Tygerberg Kruger et 1986/OMS 1992/99: 25% - Cabeza ovalada - Acrosoma 40-70% de la cabeza - Sin >20% de vacuolas 14% - Pieza media axial sin extensiones 75% - Citoplasma > 1/3 de cabeza. <1milln/ml - Cola extendida, aprox. 10 veces la cabeza
UNSCR: hombres con fertilidad desconocida. Representan a la poblacin general. 965 muestras SCR: hombres normozoosprmicos segn OMS 1999. Historial de fertilidad desconocido. 934 muestras No TTP: hombres frtiles con tiempo para concebir desconocido 817 muestras
Progresivo (a+b) Movilidad total: PR+NP 40% No progresivos (c) Movilidad progresiva: PR 32% stos sonInmviles los valores de referencia de la OMS2010 y no diagnostican
la infertilidad sino que indican que el parmetro seminal est por debajo de la gran mayora (95%) de varones frtiles
Libertad de utilizacin del eyaculado Semen del donante Posibilidad de paternidad tras quimio o radioterapia Vasectomias Conservacin de muestras valiosas Dificultad de recogida de la muestra Mejora el aprovechamiento de un nico eyaculado Disminucin de la calidad espermtica DESVENTAJAS Excepcionalmente supervivencia nula
Licuefaccin Recuento y concentracin opcional Dilucin con el crioprotector Equilibrado y refrigeracin Congelacin: vapores de nitrgeno hielo seco descenso programado de temperatura Penetrantes No penetrantes Prueba de descongelacin
ENVASES criotubo pldoras ampolla pajuela
Muy hidrosolubles Baja toxicidad Isoosmticos e isotnicos con el plasma seminal pH neutro Compuestos nutritivos Antibiticos Sustancias crioprotectoras
Adicin crioprotector
Rampa de Nitrgeno
Alicuotar
Nevera 4, 20
Guardar en N2 -196 C
Adicin crioprotector
Nevera 4, 20
Guardar en N2 -196C
Pldoras en CO2
Protocolo de congelacin lenta. Utiliza un congelador biolgico. Equipo programable que permite un estricto control de las condiciones para bajar la temperatura fracciones de grado centgrado por minuto. El recipiente de congelacin donde colocamos la muestra se conecta a un tanque de nitrgeno lquido. Mediante un programa especfico y sensores especiales, el ordenador registra la temperatura en el interior del recipiente, y segn las indicaciones programadas, inyectar vapores de N2 para bajar la temperatura.
Banco de semen
Capacitacin espermtica
Fase final del desarrollo del espermatozoide donde adquiere la habilidad de fecundar al ovocito. In vivo, ocurre cuando los espermatozoides entran en contacto con los diferentes fluidos del tracto genital femenino. Mientras estn en el sistema reproductor masculino est inhibida por sustancias presentes en el plasma seminal. Durante la capacitacin, el espermatozoide sufre cambios: Adquiere la capacidad de unirse a la zona pelcida del ovocito y de llevar a cabo la reaccin acrosmica. Su movimiento deja de ser rectilneo para desplazarse con un movimiento oscilante. In vitro, por tanto tiene dos objetivos: Fusin de la membrana citoplasmtica con la membrana Eliminar elacrosomal plasma seminal externa en la zona apical de la cabeza del spz Separar los espermatozoides dede mejor calidad del resto en el originando la liberacin la enzimas almacenadas acrosoma y la de exposicin de la membrana acrosomal (REM: Recuperacin espermatozoides mviles)
interna.
Capacitacin espermtica
Mtodos:
Lavado centrifugado Mtodos de migracin: Swim-up Mtodos de centrifugacin: Gradiente de densidad Mtodos de filtracin
1234-
Caractersticas de la tcnica:
Basados en la capacidad de desplazamiento del espermatozoide. Procedimiento ms fisiolgico Tiempo de duracin: entre 60-75 minutos Adecuado para muestras de semen con buenos parmetros seminales
Eliminar sobrenadante
Colocar en 45
37C,45 en 45
Recuperar de la superficie
Caractersticas de la tcnica:
Basados en la capacidad de separacin por la densidad celular Tiempo de duracin: 45-60 minutos Procedimiento menos fisiolgico Adecuado para muestras de semen con bajos parmetros seminales
Eliminar sobrenadante
Recuperar pellet
Capacitacin espermtica
Ventajas:
Mtodo de migracin: Swim-up
Proceso ms fisiolgico La muestra capacitada suele quedar ms limpia Es ms independiente del volumen del eyaculado Se dispone de ms tiempo libre Presenta mayor capacidad de recuperacin Buenos resultados para muestras pobres o congeladas Requiere menos tiempo de realizacin
Aproximadamente, un 15% de los varones estriles tienen un seminograma normal. Es posible los parmetros clsicos no sean del todo indicativos de la calidad del semen. Otros parmetros: integridad del acrosoma, vitalidad, evaluacion de actividad enzimticas, integridad funcional de la membrana Ningn parmetro tiene valor diagnstico de la infertilidad. Integridad del DNA espermtico es vital para el inicio del mantenimiento de un embarazo a trmino. En tcnicas de reproduccin asistida, la calidad de los espermatozoides requiere un control mucho ms delicado.
Utilidad clnica:
Infertilidad de causa desconocida Fallos repetidos en tcnicas de reproduccin asistida Mala calidad embrionaria Abortos de repeticin Varicocele Varones infrtiles con edades superiores a 40 aos Episodio febril en los ltimos 3 meses
1)
2)
GRACIAS