KESSEL, 1966 THE ASSOCIATION BETWEEN MICROTUBULES AND NUCLEOUS DURING THE SPERMIOGENESIS IN DRAGONFLY

RESULTADOS

Microtbulos no desenvolvimento de espermtides da liblula demonstrar uma estreita associao com a superfcie do ncleo ao longo espermiognese. Essa associao mais favorvelmente demonstrado em seces transversais do ncleo de espermtides, onde pode ser observado que os microtbulos esto orientados paralelamente ao eixo longo da espermtide. No incio de espermiognese o ncleo da espermtide caracterizada pela presena de uma srie de depresses pouco profundas (Figs. 3 e 4). Assim, a superfcie do ncleo parece consistir em sulcos e cristas alternadas (colocar nas minhas espermtides). Pequenas, elementos tubulares esto localizados em cada um desses sulcos ou depresses em seces transversais das espermtides (Fig. 3). O nmero de tbulos em cada uma das depresses do ncleo pode variar de 4 a 13, mas geralmente existem entre 5 e 9. O nmero de microtbulos aplicados contra o ncleo de uma espermtide nica nesta fase parece ser da ordem de 50-75. Cada microtbulo de aproximadamente 250 A de dimetro e constituda por uma parede densa 50-70 A espessura e um interior de baixa densidade medindo 100-150 A de dimetro (fig. 4). Os microtbulos so separados a partir da superfcie do ncleo com uma distncia de 80-100 A. No incio de espermiognese o ncleo da espermtide caracterizada pela presena de uma srie de depresses pouco profundas (Figs. 3 e 4). Assim, a superfcie do ncleo parece consistir em sulcos e cristas alternadas (colocar nas minhas espermtides). Durante espermiognese, o ncleo se alonga e diminui o seu dimetro. Eletromicrografias de espermtides durante este processo tambm demonstram que as depresses na superfcie do ncleo j observado tornam-se progressivamente mais fundo (Figs. 5 e 7), e as salincias formadas entre os sulcos tornam-se mais proeminente bem (colocar isso nos meus resultados). Os microtbulos permanecer associado com esses sulcos ao longo espermiognese. Durante este processo, tambm, a cromatina no ncleo torna-se condensado e, eventualmente, todo o ncleo torna-se uniformemente denso e um pequeno detalhe na sua estrutura podem ser vistos (Figs. 5-9). A cromatina que podem estar localizada nas alas formadas pelo envelope nuclear (menbrana nuclear) no incio da espermiognese, torna-se restrito a partir destas regies em fases posteriores (Figs. 5 e 7). As voltas (as alas loops) do envelope nuclear parecem separar ou tornar-se descartadas (desprendidas ou separadas), uma vez que eles no so aparentes em mais espermtides maduras (Fig. 6). Os microtbulos, geralmente em nmero de 30-40, continuam a estar associados com o ncleo, o qual agora mais esfrico no esboo (Fig. 7). Estes microtbulos, no entanto, eventualmente desaparecem ou sofrem degenerao assim porque, nas fases finais de maturao, os ncleos do esperma parecem estar rodeados por somente membranas plasmticas (Figs. 8 e 9). As etapas que foram descritas so esquematicamente ilustrado na fig. 17. O envelope nuclear das espermatides em desenvolvimento extremamente denso na base de cada depresso nas regies de microtbulos adjacentes (Fig. 4). Esta condio parece persistir ao longo de uma parte considervel da

espermiognese. A natureza da dupla camada do envelope nuclear apenas aparente em cada uma das arestas ou voltas entre as depresses (Figs. 5 e 7). Os estgios iniciais da espermtides esto ilustrados nas Figs. 1 e 2. Esses ncleos tm um aparncia granular e o flagelo est ligado a um centrolo, que est localizado ao lado do envelope nuclear (Fig. 1). Um material granular envolve a centrolos, bem como uma poro do flagelo. O nebenkern mitocondrial grande em torno do flagelo ilustrado nas Figs. 1 e 2, bem como a natureza das mitocndrias em meados da pea ilustrada na fig. 10. Os poucos microtbulos esto localizados em espermtides jovens, onde eles aparecem para estender o comprimento da espermtide adjacente ao ncleo, nebenkern e flagelo (Fig. 2). Estes microtbulos medem aproximadamente 200-225 A de dimetro em cortes longitudinais. Eles so semelhantes em tamanho e aparncia de pores das fibras do fuso mittico em espermatognias (Figs. 14-16). Microtbulos tambm esto localizados em ambos os meados pea e cauda do espermtides em desenvolvimento onde eles rodeiam as mitocndrias (Figs. 11 e 12). Para interesse adicional o facto de que os microtbulos exibem uma orientao especfica em relao aos pares de filamentos perifricos no flagelo (Figs. 11 e 12). Estes microtbulos parecem ser ligeiramente maiores do que os filamentos centrais do flagelo (Fig. 12). O dimetro dos microtbulos nos intervalos pea intermdia e flagelo 230-270 A. Em certas regies do mid-parte, os microtbulos so intercaladas com estruturas de densidade semelhante, mas que exibem uma configurao ondulada ou em espiral (Fig. 13) . O significado destas estruturas desconhecida, mas concebvel que possam surgir por uma ruptura na parede do microtbulo, como se observa em casos raros em microtbulos associados com o ncleo (ver fig. 4). DISCUSSO Studies on the pseudopodial processes or axopods of the heliozoan Actinosphaerium by Tilney (17) have shown that each axopod contains up to 500 microtubules arranged in an interlocking double coil extending the length of the axopod. Because of the morphological similarity between microtubules in the axoneme and those in the mitotic spindle, the effects of various antimitotic agents on microtubule structure in the axoneme of the axopod were investigated. The results of these experiments permitted Tilney (17) to conclude that the presence of an integrated organization of microtubules appears essential for axopod formation and maintenance. During recovery after removal of the living specimens from the various antimitotic agents, a birefringent axonema reappears concomitantly with the reformation of the axopods. In fixed preparations, the birefringence is referable to organized arrays of microtubules. Tilney (17) thus concluded that axopod extension depends upon reformation and reassembly of the microtubules into parallel arrays. A presena de microtbulos em espermtides liblula que sofrem um acentuado alongamento durante a sua transformao em espermatozides maduros, sugestivo de que os microtbulos podem desempenhar um papel neste processo. Alm disso, a evidncia adicional proporcionada pelo facto de os grupos de microtbulos tm uma orientao precisa com respeito ao ncleo durante o processo e que, aps o alongamento do ncleo completado, os microtbulos desaparecem. O alongamento do ncleo est associado com a presena de, geralmente oito stios especficos na superfcie onde a compresso do ncleo parece ser iniciada. Estas depresses ou sulcos tornam-se progressivamente mais profundas conforme o alonga ncleo. As alas resultantes do envelope nuclear esto livres de materiais cromatina. Ao que parece, a presena de grupos de microtbulos localizados apenas nas regies

da superfcie nuclear onde os sulcos so formados e aprofundam de especial importncia no presente processo. Enquanto as relaes morfolgicas apresentadas indicam que os microtbulos podem funcionar no alongamento do ncleo durante a espermiognese, os mecanismos exactos envolvidos so desconhecidos. As ligaes filamentosos entre alguns dos microtbulos adjacentes e entre a superfcie dos microtbulos e nuclear pode ser importante neste processo. A presena de microtbulos em meados da pea e cauda do espermatozide liblula e sua associao especfica com os filamentos perifricos do flagelo so de significado desconhecido. concebvel que eles desempenham um papel de apoio na pea intermediria e cauda ou ajudam de alguma maneira com o movimento flagelar neste organismo.

ARTIGO 2 KESSEL, 1967

An Electron Microscope Study of Spermiogenesis in the Grasshopper with Particular Reference to the Development of Microtubular Systems during Differentiation
No incio da espermiognese do gafanhoto, microtbulos numerosos (Manchette) se desenvolvem em associao com um agregado granular perinuclear e pericentriolar. Eventualmente, os microtbulos, numa configurao helicoidal, formam um camada investidora no ncleo da espermtide. Como (ou conforme) o ncleo alonga e a cromatina condensa-se, a camada de microtbulos aparece para endireitar e formam geralmente trs camadas concntricas em torno do ncleo da espermtide tardia. O microtbulos parecem degenerar aps o processo de alongamento nuclear de modo que eles no esto mais presentes na regio da cabea do espermatozide completamente maduro. Microtbulos desenvolvem-se na pea intermediria e cauda durante a espermiognese e persistem em espermatozides maduros. Nestas regies, eles so associados com os filamentos nebenkern e flagelar. Esses microtbulos associados com os filamentos flagelares perifricos bem como dois filamentos centrais do flagelo, geralmente contm um corpo denso interno com cerca de 75 A de dimetro. Uma srie de estudos recentes sobre uma variedade de esperma de animais indicam que os microtbulos representam um componente importante no desenvolvimento de clulas germinativas masculinas (2, 7, 8, 10, 21, 25, 28, 36, 40, 42, 43, 52). Alm disso, uma quantidade crescente de evidncias que est sendo fornecida apoia fortemente um papel importante para microtbulos em processos de migrao celular e de movimentos intracelulares especialmente importantes em alteraes morfogenticos durante aspectos iniciais da gametognese e embriognese (3, 9, 16, 2I). Em adio ao seu papel no desenvolvimento de assimetrias celulares, as evidncias tambm esto disponvel para sugerir um papel de suporte para microtbulos especialmente em clulas diferenciadas. De especial interesse a este respeito o envolvimento de microtbulos no paliada de clulas que ocorre na lente placode da induo pintainho seguinte (9), no alongamento de clulas no desenvolvimento de lente lula (3), a associao entre o microtbulo e ncleos durante o alongamento, que ocorre durante a espermiognese nas Odonata (21), o papel dos microtbulos nos movimentos morfogenticos associadas com a actividade das clulas mesenquimais primrias de embries de ourio do mar (16), e o

desenvolvimento de um sistema cortical de microtbulos em clulas migratrias ou em alongamento (ou alongadas) nas fases iniciais da embriognese do gafanhoto (22). RESULTADOS Espermatcitos Embora para a maior parte as descries sero limitadas aos eventos que ocorrem na transio da espermtide para espermatozides maduros, algumas observaes de mudanas ocorrentes dentro dos espermatcitos ser descrito. Os espermatcitos so caracterizados pela presena de numerosos grupos polissomos cada um normalmente consistem de 6-12 ribossomas (Fig. 1). Eles tambm esto presentes nas regies de cabea e pea intermediria de espermtides, mas no esto presentes em espermatozides maduros (Figs. 5 e 6). Pilhas de retculo endoplasmtico granular esto tambm presentes em cada espermatcito (Fig. 1). O nmero de pilhas varia geralmente de 1 a 3 em cada espermatcitos, e pores destas pilhas so muitas vezes observadas na regio da pea intermediria em espermtides em desenvolvimento. Cisternas do retculo endoplasmtico contm uma homognea matriz de densidade moderada. Alm disso, as extremidades das lamelas em cada pilha so muitas vezes contnuas com elementos do retculo endoplasmtico agranular, que tambm est localizado na pea intermediria de espermtides (Fig. 1). As mitocndrias em espermatcitos so numerosas e amplamente distribudos por todo o citoplasma, mas inicialmente elas se agregam numa regio perinuclear e passam por um processo de fuso resultando em um clssico corpo nebenkern clssico descrito por numerosos investigadores (Figs. 2-4). O nebenkern parece separar-se em dois e comea a alongar, assim como as espermtide tambm iniciam este processo (figs. 5 e 7). Ncleo Uma das alteraes estruturais mais bvias no ncleo durante espermiognese procede, com exceo do alongamento tremendo o qual sofre, a condensao progressiva da cromatina. Os ncleos de espermatcitos so enchidos com grnulos de diferentes concentraes, bem como nuclolos (Fig. 1). No entanto, no ncleo de espermtides iniciais comea uma mudana no contedo do ncleo. Isto observado pela primeira vez como um aumento da concentrao de grnulos ou filamentos no interior do ncleo numa regio imediatamente adjacente ao envelope nuclear (Fig. 5). medida que a espermiognese procede, grossos filamentos densos fazem o seu aparecimento, de modo que duas regies distintas de densidade se tornam aparentes (Figs. 11 e 12). Em ainda mais tardias espermtides, o ncleo caracterizado por linhas densas que se entrelaam entre filiais e profusamente (Fig. 12). Esses segmentos de, aproximadamente, 100 A. No momento em que alongamento do ncleo concludo, os ncleos parecem homogeneamente densos e nenhum detalhe estrutural interno aparente (Figs. 14-16). Semelhantes as alteraes estruturais nos ncleos de espermtides de vrios insetos fora referido anteriormente. Gibbons e Bradfield (18) observaram que no espermatozide em amadurecimento de gafanhotos, a cromatina torna-se disposta de uma maneira altamente regular, de modo a produzir vrias linhas paralelas de cerca de 60 A de espessura em corte longitudinal e polgonos contguos em corte transversal. Eles interpretaram que isso significa que, durante a maturao do esperma, a cromatina tornam-se formadas dentro de folhas (sheets) e, em seguida, para dentro de tubos que correm em paralelo com o longo eixo. Yasuzumi e Ishida (51) tambm descreveram alteraes nucleares semelhantes do gafanhoto. Fibrillar Coat casaco fibrilar

Another event occurring during spermiogenesis is the development of an external, fibrillar coat associated with the plasma membrane. Spermatocytes are usually separated by a narrow intercellular space which contains a granular or fibrillar matrix of moderate density (Fig. 1). At this early stage no orientation of this material is apparent. However, each early spermatid possesses a coating of short fibrils extending radially from the plasma membrane (Figs. 6 and 11). As spermiogenesis proceeds, this specialized coating becomes better developed, and it is associated with all regions of the plasma membrane of the mature sperm (Figs. 14-19). The radially oriented fibrils are of uniform length and measure 300-350 A in mature sperm. The fibrils are sparated by a distance of approximately 130 A. As a result, oblique sections of this coat showing an en face view appear as a honeycomb with the repetitive elements aligned in two orthogonal directions and the less dense areas measuring about 130 A on each side (Fig. 13). Roth (37) noticed such a covering in grasshopper spermatids in 1957 and described this regular geometrical pattern as a rectangular solid, 18 m# on each side and 25-35 m# high. Roth (37) suggested that the pattern results from preferential adsorption of material onto a particular component of the double-membrane. Although this fibrillar coating represents an interesting specialization of the plasma membrane in these cells, little is known of its functional significance. A limited number of cytochemical tests indicate the presence of a mucopolysaccharide. Microtbulos Microtbulos so escassamente distribudos em espermatcitos do gafanhoto, mas so estruturalmente idnticas s fibras do fuso observadas nas clulas envolvidas em mitose. Microtbulos se tornam mais abundante nas espermtides iniciais. Cada espermtide inicial caracteristicamente desenvolve uma concentrao de grnulos densos que encostam contra o envelope nuclear em uma configurao hemisfrica (Figs. 5 e 7). A poro proximal do flagelo passa atravs desta agregao granular e termina como um centrolo proximal que parece estar ligado ao envelope nuclear (Fig. 7). Ele , em associao com esta massa perinuclear e pericentriolar granular que um aumento na concentrao de microtbulos observado pela primeira vez na espermtide. Numerosos microtbulos so observadas a estender-se radialmente a partir desta regio (Figs. 6 e 8). Os microtbulos logo se tornam intimamente associados ao ncleo de espermtides iniciais e, eventualmente, parecem envolver completamente o ncleo (Figs. 9, 11 e 12). A partir do aparecimento sobreposto dos microtbulos em seces oblquas de ncleos de espermtides iniciais (Figs. 9 e 12), e a aparncia das camadas de microtbulos em seces transversais aproximadas de ncleos de espermtides (Fig. 12), verifica-se que os microtbulos no prolongam-se numa linha reta ao longo da superfcie dos ncleos em alongamento, mas sim estendem-se em torno dos ncleos em uma configurao helicoidal. Durante o curso da elongao nuclear, a partir de uma a 3 camadas concntricas de microtbulos envolvem cada ncleo (Fig. 9). Como observado em seces transversais do ncleo dos espermas quase maduros, os microtbulos aparecem para ordenar a partir de sua configurao espiral posterior (ou tardia) em espermiognese (Fig. 14). Na Fig. 14, 3 anis concntricos de microtbulos esto localizados ao redor do ncleo no esperma proximamente maduro. Existem 114 microtbulos nessa seco, e pode ser observado que os microtbulos enfileirados mais prximos ao ncleo so mais numerosos que em qualquer outro. Ocasionalmente, finos filamentos de cerca de 25 A em dimetro so observados conectando os microtbulos adjacentes. Os microtbulos que esto muito proximamente associados ao ncleo de espermtides, no parecem persistir no espermatozoide completamente maduro. Conforme a maturao do esperma procede, as camadas microtubulares ao redor do ncleo tornam-se desorganizadas e eventualmente desaparecem todas juntas (Figs. 15 e 16). Como resultado, as cabeas dos espermatozoides maduros, contm apenas

material nuclear envolvido por membrana plasmtica com sua capa ou casaco fibrilar (Fig. 16). Portanto, enquanto a espermiognese acompanhada por um decrscimo progressivo em nmero de microtbulos na regio da cabea, esse no o caso na regio intermediria e cauda. Para essas reas, os nmeros de microtbulos aumentam conforme a maturao espermtica procede. Em espermtides iniciais, apenas alguns microtbulos se estendem a partir da massa granular pericentriolar para o interior da extremidade do futuro alongamento posterior da clula (Fig. 7). Na regio de uma pea intermediria de tais espermtides iniciais, apenas alguns poucos microtbulos distribudos aleatoriamente so observados (Fig. 10). Na pea intermediria de esperma maduro, no entanto, os microtbulos so numerosas, mas altamente varivel em nmero. Eles tornam-se tipicamente associada em uma ou duas linhas com as mitocndrias, bem como com os flagelos (Figs. 17 e 18). Tanto na pea intermediria quanto na cauda do esperma maduro, um microtbulo associado com cada um dos pares de filamentos perifricos no flagelo. Como resultado nove microtbulos esto associados a cada flagelo com os microtbulos colocados perifericamente e espaadas entre cada par de filamentos perifricos (Fig. 19). A somewhat unique structural feature of these microtubules is the fact that in transection each appears to contain a dense granule approximately 75 A in diameter (Fig. 19). Longitudinal sections of the sperm tails indicate, however, that this structure is actually a dense rod extending the entire length of the microtubules. The microtubules in the head, midpiece, and tail measure 200-220 A in diameter. Of interest also is the fact that the two central filaments in each flagellum also appear to contain a dense granule in their interior (Fig. 17). These structures, however, are noted only in the central filaments of mature sperm tails and are not visible in spermatid flagella (Fig. 10). Flagelo O flagelo do esperma comea como um centrolo proximal que se encosta contra o envelope nuclear e envolvido por um agregado granular perinuclear (Fig. 7). Este estende todo o comprimento da regio intermediria e da cauda, terminando a uma curta distncia a partir da ponta da cauda (fig. 17). O flagelo do espermatozide comea como um centrolo proximal que se encosta contra a envelope nuclear e est rodeado por um agregado granular perinuclear (Figura 7). Ela estende-se a todo o comprimento da pea intermediria e cauda, terminando a uma curta distncia a partir da ponta da cauda (Fig. 17). Os componentes do flagelo so geralmente organizadas em dois filamentos centrais e nove pares de filamentos perifricos. Todos alcanam 150-200 A de dimetro. O flagelo da espermtide contm um componente em gancho de cerca de 200 A longa se estende em direco ao sentido horrio a partir subfibra A de cada par de filamentos perifricos e tambm associada com o par central de filamentos (Fig. 10). O aparecimento de um grnulo denso dentro do par central de filamentos em flagelos esperma maduro j foi descrita.

DISCUSSO As variaes morfolgicas descritas para microtbulos durante a espermiognese no gafanhoto sugerem fortemente que estas estruturas desempenham um papel na assimetria produzidos durante este processo. Assim, as alteraes do ncleo de uma estrutura esfrica a uma poro altamente alongada, na poro da cabea similar a um fio (thread-like head portion). Vrias peas de evidncia apontam para os microtbulos como apresentando um papel casusative no alongamento do ncleo. Em primeiro lugar, os microtbulos desenvolvem-se cedo no

tempo e chegam a envolver completamente o ncleo da espermtide inicial. O fato de que os microtbulos esto to estreitamente aplicados a todo o comprimento do ncleo sugere uma associao funcional importante. Em segundo lugar, o facto de que os microtbulos primeiro tendem a assumir uma configurao helicoidal, com respeito superfcie do ncleo e depois endireitar-se enquanto o alongamento nuclear est quase completo, sugere que esta mudana configuracional, bem como os ncleos esto associados. Finalmente, o fato de que todos os microtbulos desaparecem na regio da cabea do espermatozide maduro sugere que seu papel funcional durante a espermiognese terminou. A persistncia de microtbulos na pea intermediria e cauda de esperma maduro sugere um papel funcional importante para estas estruturas na clula madura e activa. concebvel, que estes microtbulos poderiam desempenhar um papel na sustentao de uma estrutura deste tipo altamente atenuada como este esperma. Embora a natureza das hastes densas que ocorrem dentro de alguns dos microtbulos na pea intermediria e cauda no seja conhecida, uma alterao como esta pode refletir um dispositivo para conseguir uma maior estabilidade e suporte. Com base nas investigaes mencionadas na introduo, bem como em outros trabalhos (4, 34), vrias funes tm sido postuladas para microtbulos. Estes incluem (a) a manuteno da citoarquitetura das clulas (ou suporte), (b) a migrao intracelular de componentes citoplasmticos (ou movimentos citoplasmticos), em alguns casos produzem diferentes assimetrias celulares, e (c) a motilidade celular. Alguns dos estudos que fundamentam esses papis funcionais dos microtbulos so brevemente descritos abaixo. Vrios estudos sugerem que os microtbulos, especialmente na pea intermediria e na cauda, fornecem suporte ou um citoesqueleto de base (suporte para algo intracelular ser construdo) para tanto clulas atenuadas como esperma maduro (21, 25, 28, 32, 40, 43), e na haste de certos ocitos de moluscos (5). A banda marginal de eritrcitos muitos suposto por muitos trabalhos a desempenhar um papel na manuteno da forma da clula. Estudos realizados por Fawcett e Witebsky (13) mostraram que esta banda marginal , de facto, constitudo por um sistema de microtbulos. Parece provvel que os microtbulos constituam um mecanismo para dar direto movimento a uma clula e o seu contedo. Ledbetter e Porter (23) fornecido evidncias para isso. Quando eles observaram que, em clulas de plantas no citoplasma cortical contm numerosos microtbulos orientados em coincidncia provvel com a direco do fluxo citoplasmticos. In another case, subsequent to lens induction in the chick eye, the cells of the lens placode undergo an elongation, or palisading, with no increase in cell volume. Byers and Porter (9) concluded from their studies that the cortical system of microtubules, which develops in these cells just after induction, is responsible for these shape changes not only in the lens placode,but in the posterior lens epithelium as well. In both cases the microtubules subsequently disappear after cellular elongation is completed. In still another case, experimental studies on the axopod arms of the heliozoan Actinosphaerium (33, 45, 47, 48) indicate that an oriented system of microtubules is necessary for the formation and maintenance of the axopod arms in this protozoan. Moreover studies by Taylor (44) on cultured cells have demonstrated that whenever a cultured cell forms an extension of itself, as in the formation of microvilli or microspikes, microtubules develop in this area. Estudos recentes realizados por Kessel (21) fornecem evidncias de que os microtbulos desempenham um papel causal no alongamento acentuado dos ncleos de espermtides durante a espermiognese na liblula. Uma nica fila de microtbulos se torna intimamente aplicada superfcie do ncleo na de espermtides inicial. Posteriormente, um certo nmero de sulcos superficiais desenvolvem na superfcie do ncleo, como visto em seco transversal. Os microtbulos que variam em nmero de

4 a 13 encontram-se localizados apenas nesses sulcos. Durante o alongamento da cabea do esperma, os microtbulos associados aos sulcos tornam-se progressivamente mais profundo. Como primeiro resultado, cumes e eventualmente voltas do envelope nuclear desenvolver entre cada par de sulcos. Os microtbulos podem ser interligados uns com os outros, bem como com a superfcie do ncleo por filamentos curtos de cerca de 25 A de espessura. O envelope nuclear adjacente s fileiras de microtbulos extremamente denso, e sem poros do envelope nuclear da espermtide pode ser discernido. As voltas do envelope nuclear, eventualmente, destacar e parece degenerar deixando um ncleo altamente alongadas agora cercado por uma nica linha de microtbulos. Nas fases finais da espermiognese os microtbulos associados com o ncleo tambm desaparecem deixando apenas as cabeas de esperma rodeado por membranas de plasma. Microtbulos permanecer associado, no entanto, com os elementos na pea intermediria e cauda, mesmo no espermatozide maduro. Gibbins e Tilney (16) estudaram a atividade de clulas mesenquimticas primrias durante a gastrulao em embries de ourio do mar. When the primary mesenchyme cells elongate and bulge into the blastocoel, microtubules appear from origins in the apical pole and run lateral to the nucleus and on into the bulge. Concomitantly, these cells lose their cilia. Following their migration into the blastocoel they adopt a spherical form around a cytocentrum from which microtubules project in all directions. Later these cells develop slender, bristle-like pseudopodia containing microtubules associated in pairs. On the basis of these observations Gibbins and Tileny (16) suggest that the microtubules are a morphological expression of a framework which operates to shape cells and redistribute their contents. Since it has been postulated that the pseudopods of mesenchymal cells are essential in sea urchin gastrulation as they are responsible for the migration and orientation of primary mesenchyme and the translocation of the archenteron by the secondary mesenchyme, Tilney and Gibbins (46) investigated the effects of colchicine, hydrostatic pressure, and heavy water on the structure and function of the microtubules of the pseudopods. The aforementioned agents are known to influence the structure and function of microtubules in the mitotic spindle. Os resultados indicam que todos estes agentes bloqueados da gastrulao, os microtbulos desapareceram completamente aps o tratamento com colchicina. A gua pesada, por outro lado, foi encontrada para causar uma estabilizao dos microtbulos, como o faz tambm no fuso mittico. A importncia dos microtbulos em processos de diferenciao tambm proporcionada em um estudo sobre o desenvolvimento de clulas de insectos em escala (29). Os principais elementos citoplasmticos que parecem ser importantes na morfognese escala, com base na frequncia, orientao e agrupamento so fibrilas de 60 A e microtbulos. A evidncia de que os microtbulos podem produzir ou fornecer um mecanismo para a motilidade tambm no registro. Christensen (10) descreve um espermatozide de platelmintos mveis sem um flagelo. Este esperma , no entanto, dotado de um sistema de proeminente cortical microtbulos paralelos seu eixo longitudinal. Alm disso, estudos mais recentes de Robison (36) no sinccio de esperma de um inseto escala blindado tambm apoiar este ponto de vista. In this insect, motile sperm bundles consisting of 10-20 closely packed, filamentous spermatozoa are produced. The individual spermatozoan is not surrounded by a plasma membrane, but is delimited by a scroll-like sheath composed of 45-50 microtubules which run parallel to the long axis of the

spermatozoan and are arranged in a spiral pattern as seen in transection. Envelope nuclear, membranas acrossomais, mitocondria, flagelo, e centrolos no esto presentes. A partir deste estudo concludo que desde que a bainha de microtbulos a nica estrutura que estende todo o comprimento do espermatozoide, a mesma provavelmente exerce um papel significante na motilidade do espermatozoide. Zonas de diferentes densidades so vistos nos acrossomas dos espermatozides do porquinho da ndia (14), lemming (16), e as estrelas do mar (10). Acrossomas de aneldeos marinhos so complexos contendo um grande e denso grnulo acrossomal dentro de uma cavidade, que revestida por vrias camadas de diferentes materiais (7, 8). No grilo, o acrossoma uma estrutura bipartida composta por concntricos cones ocos (18).