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MINISTRIO DA EDUCAO UNIVERSIDADE FEDERAL DOS VALES DO JEQUITINHONHA E MUCURI INSTITUTO DE CINCIA E TECNOLOGIA - ICT BACHARELADO EM CINCIA E TECNOLOGIA

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ENZIMAS: ESPECIFICIDADE, TERMOLABILIDADE E CINTICA

Discentes: Marcelo Henrique Costa Santos Marco Tlio P. Silveira Docente: Prof. Dr. Ernani Amaral Disciplina: CTD131 - Bioqumica

DIAMANTINA MINAS GERAIS

INTRODUO:

OBJETIVOS: Observar a especificidade enzimtica pelo substrato, a termolabilidade das enzimas e verificar o comportamento cintico da ao da amilase salivar na catlise da hidrlise do amido. REAGENTES E MATERIAIS: - Soluo de sacarose a 3 g% - Soluo de sacarase a 3 g% - Reagente de Benedict - Soluo de amido a 1 g% - Saliva - Lugol PARTE EXPERIMENTAL: 1 - Especificidade enzimtica: a) Lavar bem a boca com gua e coletar cerca de 8 mL de saliva (-amilase salivar).

b) Colocar em 4 tubos de ensaio numerados os seguintes volumes de enzima e reagente: Tubo 1: 2,0 mL de sacarase 3% + 2,0 mL de sacarose 3% Tubo 2: 2,0 mL de sacarase 3% + 2,0 mL de amido 1% Tubo 3: 2,0 mL de saliva + 2,0 mL de sacarose 3% Tubo 4: 2,0 mL de saliva + 2,0 mL de amido 1% Deixar temperatura ambiente por 20 minutos. c) Adicionar, em seguida, a cada um dos tubos 2,0 mL do Reagente de Benedict. Aquec-los em banho-maria at a ebulio. d)Observar em quais tubos houve atividade enzimtica. 2 -Termolabilidade:

Sacarose

Glicose

Frutose

a) Colocar em 2 tubos de ensaio numerados os seguintes volumes de enzima e reagentes: Tubo 1: 2,0 mL de sacarase 3% + 2,0 mL de gua destilada; ferver diretamente na chama e resfriar sob gua corrente. Tubo 2: 2,0 mL de sacarase 3% + 2,0 mL de gua destilada. b) Adicionar aos tubos 2,0 mL de sacarose 3%. c) Incubar os dois tubos em banho-maria a 37C, por 10 minutos. d) Adicionar aos dois tubos 2 mL do Reagente de Benedict. Aquec-los at ebulio (banho-maria). e) Observar em quais tubos houve atividade enzimtica.

3 - Atividade enzimtica: a) Enumere duas baterias de oito tubos de ensaio (de 0 a 7). b) Adicione 40 mL de soluo de amido a 1 % a um erlenmeyer de 125 mL. Leve-o ao banho-maria a 37 C. c) Aps cinco minutos, acrescente 1,0 mL de saliva filtrada em gaze, ao frasco erlenmeyer. Homogeneze. Anote o tempo e retire duas amostras de 2,0 mL (tempo zero), uma para cada tubo 0, e adicione duas gotas de lugol ao tubo zero da primeira e 2 mL do reativo de Benedict ao tubo zero da segunda bateria. NO RETIRE O FRASCO DO BANHO!! d) A cada trs minutos, retire amostras de 2,0 mL do erlenmeyer, transferindo-as aos tubos seqencialmente numerados e proceda com a adio dos reativos conforme realizado para o tubo zero (0). Observe os resultados e explique o que aconteceu.

RESULTADOS E DISCUSSES: Com a realizao do procedimento 1 observou-se resultados distintos nos tubos de ensaios, como esperado. O Reagente de Benedict usado para detectar a presena de acares redutores e sua presena proporcionou a observao de atividade enzimtica nos tubos 1 e 4. No tubo 1, composto por sacarase e sacarose, notou-se uma mudana de colorao. Sacarase quebrou sacarose, sendo liberada glicose que reagiu com o reagente de Benedict, fazendo com que a soluo azul ficasse alaranjada. No tubo 2 no foi notado alteraes e isso aconteceu porque sacarase no quebra amido, logo no h atividade enzimtica. Como no tubo 2, no tubo 3 tambm no houve liberao de acar redutor. No tubo 4 houve atividade enzimtica, pois amilase quebra amido, liberando glicose, um acar redutor, que reage com o Reagente de Benedict. No procedimento 2 foi colocado inicialmente sacarase e gua destilada em dois tubos de ensaio, porm o primeiro foi fervido diretamente na chama e resfriado sob gua corrente, fazendo com que fosse observado diferentes resultados no fim do teste. Aps a adio de sacarose e Reagente de Benedict notou-se atividade enzimtica apenas no tubo 2, que mudou de cor, pois houve liberao de glicose com a quebra de sacarose pela sacarase.

No tubo 1 no foi obtido os mesmos resultados devido desnaturao trmica sofrida pela enzima. No procedimento 3 foram separadas duas baterias de tubos de ensaio, onde cada bateria possua quatros tubos numerados de 1 a 4. Em intervalos iguais acrescentava-se uma determinada quantidade de amostra de saliva filtrada em gaze e amido em cada tubo de mesmo nmero, e duas gotas de lugol no tubo da primeira baterias e 2 mL do reativo de Benedict no tubo da segunda bateria. Aps a realizao do experimento notou-se que os tubos que tinham o reagente de Benedict foram ficando cada vez mais alaranjados com o tempo e os tubos que tinham lugol foram ficando cada vez mais claros. O tom cada vez mais alaranjado das solues com reagente de Benedict consequncia do aumento da quantidade de acar redutor, caudado pela quebra de amido pela amilase. O tom cada vez mais claro das solues com lugol consequncia da diminuio da quantidade de amilose com o tempo.

CONSIDERAES FINAIS: