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Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DA AST

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AST-PP
FUNDAMENTO A AST catalisa a transferncia do grupo amina do aspartato para o cetoglutarato com formao de glutamato e oxalacetato. O oxalacetato reduzido a malato por ao da malato desidrogenase (MDH), enquanto que a coenzima NADH oxidada a NAD +. A atividade enzimtica da AST na amostra calculada com base na reduo da absorbncia em 340, quando o NADH se transforma em NAD +. Aspartato + Cetoglutarato Oxaloacetato + NADH + H
+

AST MDH

Oxaloacetato + Glutamato Malato + NAD +

APLICAO CLNICA A dosagem da Aspartato Aminotransferase (AST ou GPT) no soro empregada principalmente para avaliar as hepatopatias. Valores altos de AST so encontrados em: hepatite infecciosa e txica, cirrose, pancreatite, infarto do miocrdio, alcoolismo, mononucleose, poliomiosites, gangrena. AMOSTRA Preparo do Paciente Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas. Amostras utilizadas Soro ou Plasma (EDTA ou heparina). Estabilidade e armazenamento da amostra O analito estvel por 7 dias entre 2 e 8 C. Volume ideal utilizado para anlise (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise). Volume mnimo utilizado para anlise (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise). Critrios para rejeio da amostra No utilizar amostras hemolisadas. Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material. REAGENTE UTILIZADO AST PP CAT. 421 MS 80022230083

GOLD ANALISA DIAGNSTICA LTDA CNPJ 03.142.794/0001-16 Av. Nossa Senhora de Ftima, 2363 Belo Horizonte MG Brasil Farmacutica Responsvel: Ludmilla Parreiras Campos CRF-MG 5463 Componentes do kit Conservar entre 2-8C 1- Tampo - Contm tampo Tris 121 mmol/L, L-aspartato 362 mmol/L, MDH 460 U/L, LDH 660 U/L e azida sdica 14,6 mmol/L. 2- Coenzima - Contm 2-cetoglutarato 75 mmol/L, NADH 1,3 mmol/L e azida sdica 14,6 mmol/L. Estabilidade Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados na temperatura recomendada, bem vedados e se evite a contaminao durante o uso. Sinais de Deteriorao dos Reagentes 1- Presena de partculas e turbidez indicam deteriorao dos reagentes. 2- A absorbncia do Reagente de Trabalho lida contra gua em 340 nm dever ser superior a 1,0 durante toda a sua utilizao ou at a expirao da data de validade do mesmo. Precaues e Cuidados Especiais 1- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra biolgica. 2- Os reagentes contm azida sdica como conservante. Evitar contato com os olhos, pele e mucosa. No aspirar ou ingerir. 3- Recomendamos o uso das Boas Prticas de Laboratrios Clnicos para a execuo do teste.

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4- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes. 5- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio ambiente. EQUIPAMENTOS Procedimento Tcnico manual Espectrofotmetro UV com cubeta termostatizada; Tubos e Pipetas; Cronmetro. Procedimento Tcnico Automatizado Citar nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento Tcnico Alternativo Citar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Indicar as possveis diferenas quando os procedimentos manuais substiturem os procedimentos automatizados. Procedimento em Analisadores Automticos Mencionar o manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Influncias Pr-Analticas A atividade enzimtica da AST est aumentada no alcoolismo crnico. O uso de esterides anabolizantes, clorotiazida, clorofenicol, uso prolongado de aspirina, gentamicina e algumas outras drogas podem elevar a atividade da AST. Interferncias A bilirrubina at 19 mg/dL, a lipemia (triglicrides at 650 mg/dL), e hemlise (hemoglobina at 45 mg/dL) no produzem interferncias significativas. Amostra hemolisada com hemoglobina acima de 45 mg/dL produz interferncia positiva significativa. Amostras fortemente lipmicas e ictricas apresentam absorbncia elevada em 340 nm. Quando a atividade enzimtica nessas amostras estiver muito aumentada pode ocorrer consumo muito rpido do substrato sem ocorrer uma diminuio significativa da absorbncia. Portanto, quando for obtido valores baixos de AST nessas amostras, repetir a dosagem diluindo o soro com soluo de NaCL 150 mmol/L (0,85%). PREPARO DO REAGENTE DE TRABALHO De acordo com o nmero de testes, misturar suavemente os reagentes 1 e2 na seguinte proporo: 4 volumes de Tampo (1) mais 1 volume de Coenzima (2). O Reagente de Trabalho estvel por 10 dias entre 2-8C. PROCEDIMENTO Procedimento Manual A - Condies de Reao Leitura: Comprimento de onda 340 nm Temperatura: 37 C Tipo de Reao: Cintica contnua decrescente. B-Tcnica de Anlise sem Calibrador 1 Pipetar na cubeta ou tubo: Reagente de Trabalho Amostra 1000 L 100 L

2 - Homogeneizar e inserir a cubeta no porta-cubetas termostatizado 37C e acionar o cronmetro. 3 - Aps 1 minuto, fazer a leitura da absorbncia inicial (A 0). 4 - Fazer novas leituras de absorbncia, aps exatamente 1, 2 e 3 minutos.

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5 - As diferenas entre as absorbncias ( A/minuto mdio) devem ser praticamente iguais, indicando a linearidade do mtodo. 6 - Calcular o decrscimo de absorbncia mdio por minuto (A/minuto mdio). Ateno Uma absorbncia inicial inferior a 0,800 indica que a amostra tem uma atividade enzimtica de AST alta. Neste caso, diluir a amostra e repetir o ensaio. CLCULOS Ver Linearidade. Considerando que o coeficiente de absoro milimolar do NADH em 340 nm 6, 3, deduz-se a seguinte frmula para calcular a atividade enzimtica: U/L de AST (GOT) em 340 nm = A/minuto mdio x 1746 onde: A /min mdio = Variao mdia da absorbncia por minuto O fator 1746 calculado com base nas condies da reao cintica contnua. Esse fator deve ser recalculado sempre que se fizer qualquer modificao nos parmetros da reao. Ver mtodo para clculo do fator. Exemplo: A/minuto do teste = 0,0285 Atividade AST em U/L= A teste X 1746 Atividade AST = 0,0285 X 1746 = 50 U/L Clculo do Fator: Fator = VT x 1000 x VA x d Exemplo: Vt = volume total do ensaio (1100 L) Va = volume da amostra (100 L) 1000 = converso de U/mL para U/L d = espessura da soluo (1 cm) = Absortividade milimolar do NADH em 340nm = 6,3 Fator = 1100 x 1000 = 1746 6,3 x 100 x 1 C-Tcnica de Anlise com Calibrador Cat. 410 da Gold Analisa 1 Pipetar na cubeta ou no tubo: Reagente de Trabalho 1000 L Amostra 100 L 2 - Homogeneizar e inserir a cubeta no porta-cubetas termostatizado a 37C e acionar o cronmetro. 3 - Aps 1 minuto, fazer a leitura da absorbncia inicial (A 0). 4 - Fazer novas leituras de absorbncia, aps exatamente 1, 2 e 3 minutos. 5 - As diferenas entre as absorbncias devem ser praticamente iguais, indicando a linearidade do mtodo. 6 - Calcular o decrscimo mdio de absorbncia mdio por minuto do Calibrador e do Teste (A/ minuto mdio). Notas 1- Utilizar o Calibrador Cat. 410 da Gold Analisa. Ver instrues de Uso e valor tabelado para AST. 2- O desempenho do Calibrador pode ser afetado por vrios fatores como: erros de reconstituio, de homogeneizao, armazenamento incorreto, contaminao da gua ou vidraria. 3- Uma absorbncia inicial inferior a 0,800 indica que a amostra tem uma atividade enzimtica de AST alta. Neste caso, diluir a amostra e repetir o ensaio. Clculos Ver a linearidade. Como a metodologia obedece a lei de Lambert-Beer, pode-se efetuar os clculos atravs do Fator de Calibrao (FC). A/ minuto mdio = Variao mdia da absorbncia por minuto. AC = Atividade de AST do Calibrador = U/L (Ver valor de AST na tabela do Calibrador).

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AT = Atividade de AST do teste em U/L = A/ minuto do teste FC FC = Fator de Calibrao = AC A/ minuto mdio do Calibrador Exemplo Se A/ minuto mdio do Calibrador = 0,064 Se A/ minuto mdio do Teste = 0,022 Se AC = 112 U/L (valor indicado na tabela do Calibrador) FC = AC A/ minuto mdio do Calibrador= 112 0,064 = 1750 AT = Atividade de AST do Teste em U/L = 0,022 FC = 0,022 1750 = 38 U/L Ateno As tcnicas apresentadas so adequadas para fotmetros cujo volume mnimo de soluo para leitura igual ou menor que 1000 L. O analista sempre deve fazer uma verificao da necessidade de ajuste do volume para fotmetro empregado no seu laboratrio. Os volumes de amostra e de reagente podem ser modificados porporcionalmente, sem alterar o desempenho do teste e os clculos. Em caso de reduo dos volumes necessrio observar o volume mnimo de leitura fotomtrica. Volumes da amostra menores do que 10 L so crticos em aplicaes manuais e devem ser usados com cautela porque aumentam a impreciso da medio. RESULTADOS Unidade convencional (U/L) 16,7 = Unidades SI (nKat/L). CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits. Citar a utilizao de soros controles (nvel normal cdigo --------- e patolgico cdigo -------) nas anlises realizadas juntamente com a freqncia da utilizao dos mesmos. Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e reagentes. Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade: PNCQ-SBAC e/ou PELM-SBPC Gerenciamento dos Dados Obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. VALORES DE REFERNCIA (37C) Homens: 11 39 U/L. Mulheres: 10 37 U/L. Estes valores devem ser usados como uma orientao. recomendado que cada laboratrio estabelea seus prprios valores de referncia.

SIGNIFICADO CLNICO A aspartato aminotransferase (AST) ou transaminase glutmico-oxalactica (GOT ou TGO) uma enzima encontrada em concentrao muito alta no msculo cardaco, no fgado, msculos esquelticos e em menor concentrao nos rins e pncreas. Nas clulas hepticas, a AST localiza-se no citoplasma (40%) e na mitocndria (60%). Qualquer leso tissular ou doena afetando o parnquima heptico liberar uma maior quantidade da enzima para a corrente sangunea, elevando os nveis sricos da

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AST. Sempre que ocorrer uma leso hepatocelular de qualquer etiologia haver uma grande liberao da enzima AST para a corrente sangunea, elevando seus nveis sricos. Na hepatite virtica aguda, os nveis de AST encontram-se quase sempre elevados em mais de 10 vezes o limite superior da faixa de referncia e em alguns casos ultrapassam a 20 vezes esse limite superior de normalidade. Entretanto, dentro de uma a duas semanas, os valores de AST diminuem bastante podendo cair para a faixa normal ou apresentar ligeiro aumento. Nos casos de obstruo extra-heptica, as elevaes de AST no so comuns, mas podem ocorrer quando h leso parenquimatosa secundria aguda. Na cirrose, as alteraes da AST e seus respectivos nveis vo depender da ocorrncia e do grau de leso hepatocelular ativa presente. Geralmente, na cirrose inativa os valores de AST no se alteram. Na cirrose alcolica ativa, os valores de AST se elevam moderadamente. Na hepatite virtica crnica ativa, os nveis de AST tambm encontram-se elevados moderadamente. Vrias doenas comuns apresentam elevao pequena ou moderada de AST, e entre elas podemos citar: mononucleose infecciosa, hepatite aguda na fase de remisso ou recuperao, hepatite crnica, disfuno heptica induzida por drogas, tumor heptico metasttico, congesto heptica passiva, cirrose ativa ou hepatopatia alcolica, obstruo extra-heptica prolongada do ducto biliar, fgado gorduroso e citomegalovirus. Na maioria das vezes, a dosagem de AST realizada juntamente com a ALT e a relao AST/ALT pode ser determinada para auxiliar no diagnstico diferencial das doenas. Assim, a relao AST/ALT sempre maior do que 1 em pacientes com cirrose alcolica, hepatites crnicas, congesto heptica e tumor metasttico do fgado. Geralmente, essa relao menor do que 1 nos casos de hepatite virtica aguda e mononucleose infecciosa. Nos casos de leso do miocrdio, a AST juntamente com a dosagem da creatina quinase (CK) e da desidrogenase lctica (LDH) muito til para o diagnstico e acompanhamento do infarto do miocrdio (IM). Os nveis de AST aumentam dentro de 6 a 10 horas aps o infarto, atingindo um valor mximo em 12 a 48 horas, voltando aos nveis normais em 3 a 4 dias, se no ocorrer novo infarto. Portanto, as determinaes em srie da AST como da CK, so muito teis para a avaliao do infarto do miocrdio. A AST muito menos especfica do que a CK-MB para o diagnstico do infarto do miocrdio. Nos casos de pericardite, angina e cardite reumtica no h aumento dos nveis de AST. Valores elevados: Os valores elevados de AST so mais comumente encontrados nas seguintes patologias: hepatites, cirrose heptica, necrose heptica, metstase heptica, drogas hepatotxicas, processo infiltrativo heptico (tumor), infarto do miocrdio, operaes cardacas, angioplastia e cateterizao cardaca, pancreatite aguda, trauma muscular esqueltico, queimaduras graves, anemia hemoltica aguda, distrofia muscular progressiva, mononucleose infecciosa com hepatite, doenas musculares primrias (miopatia, miosite), doena renal aguda e convulses recentes. LINEARIDADE A reao linear at 400 U/L. Para valores maiores, diluir a amostra com soluo de NaCL 150 mmol/L (0,85%) e realizar uma nova determinao. Multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio empregado. LIMITAES DO MTODO Os resultados devero ser usados em conjunto com informaes disponveis da avaliao clnica e outros procedimentos diagnsticos. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1- Bergmeyer HU, Scheibe P, Wahlefeld AW. Clin Chem 1978;24:58. 2- Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fundamento de Qumica Clnica, 4a Ed - Guanabara Koogan; 1998. 3- Gella FJ et al. Clin Chim Acta 1985; 153-241-247. 4- IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. J Clin Chem Clin Biochem 1986; 24:497-510. 5- Karmen A. J Clin Invest 1955;34:131. 6- Lopes HJJ. Enzimas no Laboratrio Clnico-Aplicaes Diagnsticas. BH, Analisa Diagnstica, 1998. 7- Sociedad Espaola de Qum. Cln, Comit Cientfico, Com. de Enzimas. Quim Clin 1987; 6:241244. 8- AST-PP, Instrues de Uso, Gold Analisa Diagnstica. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___

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Nmero Cpias

Destino