Desarrollo e mtodo analtico apara Cuantificar indometacina y metoprolol en Orina Procedimiento Justificacin Inicialmente se considera que se ingIrior una

dosis de Para tener en cuenta la cantidad que se ingiero y saber 50mg de indometaciona y 50 mg de metoprolol en que proporcin estar en la orina en este caso 50mg - De 100ml de orinase tomo una alcuota de 20ml cada una, y como se tomara la quinta parte de la (tericamente contendra 10mg de cada muestra total de orina excretada equivaldra a 10mgde componente) cada analto. - Se acidifico la orina hasta un pH 7 con una - La adicin del buffer de pH 7.2 es para ionizar a la solucin de fosfatos (buffer de fosfatos de Ph 7.2) indometacina ya que es insoluble en agua, de esta manera hay un pH intermedia ya que indometacina tiene Pka de 4.5y metoprolol de 9.68, el metoprolol no es afectado ya que a este pH conserva sus propiedades as como su solubilidad. - Se paso por una membrana de poro de 0.2m - Se pasa por una membrana ya que l<s protenas son afectadas precipitando, as la mayor cantidad de sustancias no deseadas para la cuantificacin, la membrana es muy fina pro lo que solo dejara pasar a los analtos - Se centrifugo a 40000rpm por 10 minutos - La centrifugacin se realiza para separar aun mas las protenas quedando estas precipitadas - Se paso el sobrenadante a un tubo de ensaye - El sobrenadante contiene los dos analtos pro eso es separado - Se evaporo a sequedad con nitrgeno gas - Se utiliza el nitrgeno gas para evaporar el disolvente, aunque este paso se puede evitar ya que al final y acabo se vuelve a poner el mismo buffer favoreciendo la solubilidad de ambos frmacos - El residuo o analto se les adiciona metanol y agua en - El residuo seco se le agrego metanol y agua a proporcin 70:30 para preparar la fase mvil, la proporcin 70:30 adicionndole 1ml de buffer de adicin del buffer de fosfatos como se repiti fosfatos pH 7.2 anteriormente es para ionizar la indometacina y - Se prepararon las muestras estndar de hacerla soluble. indometacina y de metoprolol con las - Los estndares se preparan de la misma manera con concentraciones indicadas los mismos disolventes, en este caso no se filtra ni se centrifuga ya que solo son sustancias estndares sin sustancia que interfieran - En este caso el metoprolol al ser el analto mas polar - Equipar la columna de 4mm x30mm rellena con debido a sus grupos funcionales, y a que es soluble material. Inyectar en el cromatografo volmenes en agua se detectara en el espectro UV antes que la iguales de la preparacin estndar primero y despus indometacina, sus picos de absorcin en UV van de de la preparacin de la muestra registrando para 223, 274 y 282, mientras que para indometacina al cada uno los cromatogramas . poseer grupos cloro esta mas retenido y es mas hidrofibico y menos polar, pro lo que saldra despus pero por poseer cloro sus picos serian mas intensos, estos se reportan que van desde 230, 260 y 319, al usar un dispositivos detector de iodos se puede variar y modificar la longitud de onda a al cual saldrn estas sustancia pudiendo ser as una de rango similar es decir a 2225nm - Se puede variar el sistema de la fase mvil por uns sistema de acetonitrilo metanol o acetonitrilo con agua

Otra opcin de medicin es separa los analtos de la orina en dos fases mviles partiendo de la orina se lleva a cabo: - Acidificacin de la orina a pH 4 con acido actico - Adicionar 10ml etanol y centrifugar a 4000rpm 10 minutos *

Se encontrara insoluble la indoemtacina y se podr separa utilizando un solvente orgnico fuerte quedando en la fase orgnica (etanol) la indometacina y en la acuosa quedara metoprolol* Se pretende ionizar a metoprolol para ser soluble Esta mezcla extraer el metoprolol de la fase acuosa y de los posibles componentes que hayan quedado de la orina La centrifugacin permitir obtener dos fases quedando en el sobrenadante nuestra sustancia estudiada ya que es mas soluble en esta Se lleva a sequedad para concentrar, utilizando gas nitrgeno ya que es un gas inerte y no afectara al analto El secado se prepara en fase mvil, en este caso el buffer de fosfatos aumenta la solubilidad de la indometacina * se concentra nicamente la indomtacina para preparar su fase mvil, no reaccionara con el gas inerte (nitrgeno) Se usa este sistema ya que es soluble en buffer de fosfatos pero no as en agua, por lo que se detectara despus de salir el metoprolol que si lo es este en agua y en metanol El cromatograma ser igual al anterior nicamente que aqu se le adicionan por separado las fase mviles dcada una de las sustancias estudiadas. Una longitud a la cual se podrn obtener los espectros es la longitud intermedia de los dos sustancias pro ejemplo de 220 230 nm y de 250-270nmseparando primero al metoprplol por su solubilidad en agua y metanol y posteriormente a indometacina sin embargo esta obtendr un pico de mayor tamao

Separa el sobrenadante este contendr metoprolol al cual se le adiciona NaOH 1m hasta llegar a pH 9 Se le adiciona una mezcla de dietileter y acetato de etilo (2:1) para extraer el metoprolol del resto de la orina Centrifugar a 4000rpm 10minutos

Tomar el sobrenadante y llevar a sequedad con gas nitrgeno El secado se disuelve en una mezcla de metanol: agua 70: 30 de 10ml adicionando buffer de fosfatos de pH 7.2 * la parte con etanol tendr a la indometacina disuelta en este, para ello se seca con gas nitrgeno El residuo seco se prepara con metanol y agua 70:30 5ml adicionando buffer de fosfatos de pH 7.2. Se prepara la columna y se procede a medir primero los estndares y despus las soluciones muestra detectando los picos cromatograficos.